Orientador: Claudio Lucio Rossi / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-07-22T01:18:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Partel_ClaudiaDambroski_M.pdf: 1594290 bytes, checksum: e86f411daa6a16b26e173461e10bb358 (MD5) Previous issue date: 1996 / Resumo: A Doença de Chagas, infecção causada pelo parasita Trypanosoma cruzi, em pessoas imunocompetentes é, geralmente, assintomática ou se apresenta associada com manifestações clínicas leves e não específicas. Os pacientes com infecção crônica podem apresentar anormalidades cardíacas e/ou digestivas severas, mas estas manifestações clínicas são, usualmente, precedidas por muitos anos de infecção assintomática. Deste modo, a suspeita clínica da infecção, além de levar em consideração aspectos epidemiológicos, deve ser confirmada por dados laboratoriais. O diagnóstico da fase crônica da infecção chagásica é, geralmente, baseado na presença de níveis significativos de anticorpos específicos, desde que a detecção de parasitas circulantes é, frequentemente, dificil, em consequência dos baixos níveis de parasitemia. O presente estudo teve como objetivo o desenvolvimento de uma técnica imunoenzimática (ELISA) rápida e quantitativa para o imunodiagnóstico da Doença de Chagas. Considerando que o desempenho de uma técnica imunológica depende, em grande parte, da preparação antigênica utilizada, o extrato bruto de T.cruzi foi fracionado por cromatografias de afinidade (Sepharose 4B-Ientil-Iectina) e de troca iônica (DEAESephacel), na tentativa de se encontrar frações com alta atividade antigênica específica e baixa reatividade cruzada. Uma fração do parasita obtida por cromatografia em DEAESephacel foi selecionada com base na reatividade apresentada com soros de pacientes com Doença de Chagas e leishmaniose. A técnica ELISA foi padronizada utilizando um sistema comercial para reações imunoenzimáticas - "falcon assay screening test" (FAST -ELISA). Este sistema é constituído por placas apropriadas para todos os pàssos da reação, incluindo uma placa que possui uma tampa de plástico onde estão fixadas 96 esferas de poliestireno que se encaixam nos orificios de placas de microtitulação. Na realização do teste, a tampa com esferas revestidas com a preparação antigênica de T.cruzi foi transferi da., sucessivamente, após as lavagens necessárias, para as placas contendo as amostras de soros sendo testadas, o conjugado (anti-IgG humana marcada' com peroxidase) e o sistema substrato (tetrametilbenzidina/peróxido de hidrogênio). Nas incubações com os soros, conjugado e substrato (5 minutos cada, à temperatura ambiente) as placas foram colocadas sobre um aparelho com movimentos orbitais e agitadas continuamente. As absorbâncias das reações foram medidas a 630 nm na placa contendo o substrato. Em todos os ensaios, foram inclui dos soros padrões contendo concentrações conhecidas de anticorpos anti-T.crozi, em termos de unidades de atividade por ml (V/ml). Cada soro foi testado em triplicata e a absorbância média foi transformada em U/ml utilizando a curva padrão. Em um estudo comparativo, anticorpos IgG anti-T.crozi foram pesquisados com as técnicas de ELISA e IFI em 50 pacientes chagásicos crônicos, 58 pacientes com infecções heterólogas e em 20 pessoas sadias. A técnica ELISA apresentou sensibilidade de 98% e especificidade de 99%, enquanto que a sensibilidade e a especificidade obtidas com a reação de IFI foram, respectivamente, 92% e 96%. O bom desempenho, em termos de sensibilidade e especificidade, mais a simplicidade e rapidez, evidenciam que a técnica de ELISA, por nós desenvolvida, pode ser de grande utilidade para o imunodiagnóstico da Doença de Chagas / Abstract: Chagas' disease, an infection caused by the parasite Trypanosoma crnzi, is generally asymptomatic or is associated with mild, non-specific clinical manifestations in immunocompetent subjects. Severe cardiac and/or digestive system abnorrnalities may develop in chronically infected patients, but these clinical manifestations are usually preceded by many years of asymptomatic infection. For this reason, the clinical diagnosis should always be considered in an epidemiological context and confirrned by laboratory data. The diagnosis of chronic Chagas' disease is generally based on detecting specific antibodies, since the detection of circulating parasites is often difficult in view of the low levels of parasitemia. The purpose of this study was to develop a rapid and quantitative enzymelinked immunosorbent assay (ELISA) for the immunodiagnosis of Chagas' disease. Considering that the perforrnance of an immunological technique is highly dependent on the antigen used, a T.crnzi crude extract was fractionated by affinity chromatography (Sepharose 4B-lentil lectin) and ionic exchange chromatography (DEAE-Sephacel) in an attempt to identify fractions with both a high specific antigenic activity and a low cross reactivity. One fraction of the parasite extract obtained by chromatography on DEAE Sephacel was selected for further study based.on its reactivity with sera from patients with Chagas' disease and leishmaniasis. The ELISA procedure was standardized using the Falcon assay screening test (FAST-ELISA / Mestrado / Clinica Medica / Mestre em Clinica Medica

Orientador: Claudio Lucio Rossi / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-02T13:41:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Arruda_GiseleCristina_M.pdf: 3746706 bytes, checksum: 35cd836fe35ad43c826295dce5e69174 (MD5) Previous issue date: 2002 / Resumo: A neurocisticercose é uma importante causa de doença neurológica em muitos países em desenvolvimento. O diagnóstico clínico da neurocisticercose é dificultado pelo polimorfismo e pela não especificidade dos sintomas. Os procedimentos de neuroimagem, como a tomografia computadorizada (TC) e a ressonância magnética nuclear (RMN), têm contribuído para um diagnóstico mais preciso e uma melhor compreensão dos processos patofisiológicos da neurocisticercose. Entretanto, o alto custo desses procedimentos tem limitado a sua utilização em países em desenvolvimento apresentando altas taxas de infecção. Nestas circunstâncias, a detecção de anticorpos específicos pode ser grande utilidade para o diagnóstico da neurocisticercose. A detecção de anticorpos anti-cisticercos em amostras de LCR é considerada um critério importante para o diagnóstico da neurocisticercose. Entretanto, a pesquisa de anticorpos específicos em amostras de soros apresenta algumas vantagens: o soro é obtido de uma maneira menos invasiva do que o LCR, estudos soroepidemiológicos podem mapear áreas endêmicas e a pesquisa de anticorpos em amostras de soros pode ser útil em estudos de reatividade cruzada. No presente estudo, a eficácia de sete preparações antigênicas, quatro de cisticercos de T. solium (extratos brutos total-TsoW, de membrana-TsoMe, de líquido vesicularTsoLVe de escólex-TsoEsc) e três de cisticercos de T. crassiceps (extratos brutos totalTcraW, de membrana-TcraMe e de líquido vesicular-TcraLV), foi avaliada para o diagnóstico sorológico da neurocisticercose usando uma técnica imunoenzimática (ELISA) quantitativa. Anticorpos IgG anti-cisticercos foram pesquisados em amostras de soros de 30 pacientes com neurocisticercose, 32 pacientes com outras infecções e 48 pessoas sadias. A técnica TsoW-ELISA apresentou 83% de sensibilidade e 89% de especificidade, enquanto que a sensibilidade e a especificidade da técnica TcraW-ELISA foram 67% e 86%, respectivamente. As especificidades das técnicas TsoMe-ELISA, TsoEsc-ELISA e TcraMeELISA foram, respectivamente, 91%, 89% e 78%, enquanto que a sensibilidade encontrada para os três ensaios foi 70%. O desempenho da técnica TsoL V -ELISA (80% de sensibilidade; 93% de especificidade) foi similar ao desempenho da técnica TsoW-ELISA, enquanto que o desempenho da técnica TcraLV-ELISA (77% de sensibilidade; 94% de especificidade) foi superior ao desempenho da técnica TcraW-ELISA Nenhuma das _preparações antigênicas utilizadas no presente estudo apresentou uma performance excepcional. Entretanto, considerando os resultados obtidos com todas as preparações antigênicas, o líquido vesicular de cisticercos de T. solium e T. crassiceps pode ser útil em reações imunológicas para a detecção de anticorpos específicos em soros de pacientes com neurocisticercose / Abstract: Evaluation of Taenia solium and Taenia crassiceps cysticercal antigens for the serodiagnosis of neurocysticercosis. Neurocysticercosis is an important cause of neurological disease in many developing countries. The clinical diagnosis of neurocysticercosis is impaired by the polymorphism and nonspecificity of the symptoms. Neuroimaging techniques such as computed tomography and magnetic resonance imaging have contributed to a more accurate diagnosis and a better understanding of the pathophysiology of neurocysticercosis. However, because of their high cost and restricted availability, these procedures may be of limited use in developing countries with high rates of infection. In these circumstances, the detection of cysticercus-specific antibodies is of considerable value for the diagnosis of neurocysticercosis. A positive immunological test for T. solium cysticercal antigens in CSF samples has been considered an important criterion for the diagnosis of neurocysticercosis. However, the use of serum samples for the immunodiagnosis of neurocysticercosis has some advantages: serum can be obtained in a less invasive manner than CSF, serum epidemiological studies can map areas of endemicity, and serum analysis can be very usefiil for cross-reactivity studies. In the present study, the usefulness of seven cysticercal antigen extracts, four from T. solium cysticerci (whole parasite-TsoW, membrane-TsoMe, vesicular fluid-TsoVF and scolex-TsoSc) and three from T. crassiceps cysticerci (whole parasite-TcraW, membrane-TcraMe and vesicular fluid-TcraVF), for serodiagnosis of neurocysticercosis was evaluated using an enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Cysticercus-specific IgG were screened in serum samples from 30 patients with neurocysticercosis, 32 patients with other infections and 48 healthy persons. The TsoW-ELISA showed 83% sensitivity and 89% specificity, whereas the sensitivity and specificity of the TcraW-ELISA were 67% and 86%, respectively. The specificities for the TsoMe-ELISA, TsoSc-ELISA and TcraMe-ELISA were, respectively, 91%, 89% and 78%, whereas the sensitivity for all three assays was 70%. The performance of the TsoW-ELISA (80% sensitivity; 93% specificity) was similar to that of the TsoW-ELISA, whereas the performance of the TcraVF-ELISA (77% sensitivity; 94% specificity) was superior to that of the TcraW-ELISA. None of the antigen preparations from T. solium and T. crassiceps cysticerci used in this study showed outstanding performance for the serodiagnosis of neurocysticercosis. However, considering the results obtained with the seven antigen preparations, ¿ vesicular fluid from T. solium and T. crassiceps cysticerci may be useful for detecting specific antibodies in sera from patients with neurocysticercosis. / Mestrado / Ciencias Biomedicas / Mestre em Ciências Médicas

Orientador: Marlene Tiduko Ueta / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-04T00:24:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 MercadoPedraza_RubenAngel_D.pdf: 277205 bytes, checksum: 50eae8f1c0d734a4a5b2f303a19c02a2 (MD5) Previous issue date: 2004 / Resumo: Entre os anos 2000 e 2003 foram coletadas no Chile 2.390 amostras de sangue humano para obtencão de soros e 600 amostras de fezes de cães de 13 diferentes cidades para estudo soroepidemiológico de infecções causadas por Strongyloides stercoralis e avaliar a importância dos cães na transmissão da infecção ao homem. As amostras de soros humanos corresponderam a: a) 10 indivíduos infectados por S. stercoralis com confirmação parasitológica; b) 66 pacientes com outras helmintíases (24 toxocaríase, 15 triquinose , 11 hidatidose , 12 fasciolíase e 4 cisticercose); c) 13 com outras enfermidades autoimunes; d) 49 indivíduos aparentemente sadios, com contagem de eosinófilos nos limites normais; e) 206 alunos de escola básica; f) 674 pacientes internos em dois hospitais psiquiátricos; g) 172 servidores da área de saúde de dois hospitais psiquiátricos e h) 1.200 doadores de sangue. Foi padronizado, pela primeira vez no Chile, o método de ELISA, utilizando antígeno preparado a partir de larvas filarióides de S. venezuelensis. Pelo ELISA pôde-se determinar a presença de anticorpos anti S. stercoralis em: a) 90%, e) 0,5%, f) 12,2%, h) 0,25%. Nos grupos b, c, d, g não foram detectados anticorpos específicos. Entre os doadores de sangue de 5 cidades (Arica e Antofagasta na Região Norte; Valparaiso e Santiago na Região Central; e La Unión na Região Sul), foram detectados anticorpos somente naqueles de Arica e La Union, o que sugere que a estrongiloidíase no país pode estar restrita a determinadas áreas. Em pacientes internos nos dois hospitais psiquiátricos do Chile foram observadas frequências de infecção 48,8 vezes maiores que em doadores de sangue, sugerindo a fácil transmissão nestes recintos. Os funcionários da área de saúde destes hospitais apresentaram ELISA negativo para S. stercoralis. Não foram constatadas presença de S. stercoralis na totalidade das amostras de fezes de cães. Estes resultados, obtidos de coletas em 13 cidades, número que abrangeu quase todo o território chileno, indicam que os cães não estariam interferindo na transmissão da parasitose. O resultado da soroepidemiologia, obtido no presente trabalho, sugere que no Chile as infecções por S. stercoralis são endêmicas, de baixa. frequência, localizadas em determinadas áreas geográficas, afetando, com maior frequência, grupos de risco, como os internos em hospitais psiquiátricos / Abstract: From 2000 to 2003, human serum samples of 2390 individuals and 600 dog fecal samples recovered in 13 squares and public parks in Chile were studied to determine the seroepidemiology of the Strongyloides stercoralis infection and the role of dogs on the transmission of this parasitose. Human serum samples were as follows: a) 10 S. stercoralis infected patients with parasitologically confirmed infection; b) 66 patients with other helmintiasis (24 toxocariasis, 15 trichinellosis, 11 hydatidosis, 12 fascioliasis, 4 cysticercosis); c) 13 patients with other immunological disorders; 49 apparently healthy individuals with normal eosinophil count; e) 206 school children; f) 674 patients hospitalized in two psychiatric institutions, g) 172 health personnel working in two psychiatric institutions and h) 1200 blood donors. For the first time in Chile it was standardized an ELISA test by using an antigen of S. venezuelensis filariform larvae. By means of ELISA antibodies against S. stercoralis were detected in: a) 90%, e) 0.5%, f) 12.2% and h) 0.25%. In groups b, c, d and g no specific antibodies were present. In blood donors from five cities (Northern region: Arica and Antofagasta, Central region: Valparaiso and Santiago, and Southern region: La Union) only in Arica and La Union antibodies against S. stercoralis were detected. This result suggests that strongyloidiasis in Chile could be localized in determinate areas of the country. The frequency of antibodies detected in interned patients in two psychiatric institutions was 48.8 greater than the frequency observed in blood donors, suggesting the transmission of S. stercoralis was facilitated in these institutions. ELISA for strongyloidiasis was negative in all the health personnel studied. S. stercoralis larvae were not detected in 600 fecal samples of dogs collected in public parks and squares of 13 cities of Chile. Dogs probably do not participate in the transmission of strongyloidiasis in Chile. The seroepidemiology of the S. stercoralis infections in Chile showed this parasitose is endemic, with low transmission rates and localized in determinate geographical areas, affecting with a high frequency some risk groups such as the psychiatric interned patients / Doutorado / Parasitologia / Doutor em Parasitologia

Orientadores: Maria Helena Andrade Santana, Ricardo de Lima Zollner / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia Quimica / Made available in DSpace on 2018-07-26T19:05:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Pinho_SamanthaCristinade_M.pdf: 3067197 bytes, checksum: 2fb8cfde2b754187ee86b2e937d591a0 (MD5) Previous issue date: 2000 / Resumo: O encapsulamento de ferrofluidos no núcleo de lipossomas origina vesículas denominadas magnetolipossomas, que podem ser eficientemente separadas da solução quando sob a ação de um campo magnético de alto gradiente. Essa propriedade possibilita a aplicação dos magnetolipossomas como adsorventes específicos em processos de separação de estruturas como células e biomoléculas. A maior vantagem desta abordagem é a simplicidade e eficiência. Anticorpos antifosfolípides constituem uma importante classe de biomoléculas, para a qual fosfolipídios específicos podem ser usados como ligantes de afinidade. A incorporação desses fosfolipídios na matriz estrutural dos lipossomas produz suportes coloidais de elevada área específica, com sítios de afinidade sobre a superficie, que são úteis para aplicação em processos de separação e detecção dessa classe de anticorpos. Os autoanticorpos estão presentes no soro de pacientes portadores de doenças autoimunes e a sua detecção apresenta dificuldades no que diz respeito à reprodutibilidade e à variabilidade dos suportes usados em kits comercialmente disponíveis. A adsorção específica de autoanticorpos na superficie dos magnetolipossomas e o desenvolvimento de sinal magnético resultante da ligação constitui técnica alternativa promissora para o diagnóstico de autoanticorpos. As vantagens do novo método seriam a reprodutibilidade, versatilidade do suporte e a condução do ensaio em etapa única. O objetivo deste trabalho foi o estudo da preparação e caracterização de magnetolipossomas de afinidade, além da avaliação do desempenho desses suportes na ligação dos autoanticorpos. Na preparação dos magnetolipossomas, foi usada magnetita coloidal como ferrofluido, cardiolipina, fosfatidiletanolamina e fosfatidilserina como lipídios de afinidade e fosfatidilcolina como lipídio estrutural. A adsorção dos anticorpos na superficie dos magnetolipossomas foi estudada em mistura e de modo frontal em coluna capilar. Como resultado da preparação das partículas obteve-se associação adequada entre a magnetita e os fosfolipídios, reprodutibilidade e boa estabilidade. Em relação à adsorção dos anticorpos observou-se que há especificidade, demonstrando a potencialidade de utilização dos magnetolipossomas no desenvolvimento de uma nova técnica de detecção de autoanticorpos antifosfolípides / Abstract: The entrapment of ferrofluids into the core of liposomes provides vesic1es called magnetoliposomes, which can be efficient1y captured ITom a solution under the action of a high gradient magnetic field. Due to this property, it is possible the aplication of magnetoliposomes as specific adsorbents in separation processes of structures like cells and biomolecules. The main advantage of this approach is its simplicity and efficiency. Antiphospholipid antibodies are an important c1ass of biomolecules, to whom specific phospholipids can be used as affinity ligands. The aggregation of these phospholipids in the structural matrix of the liposomes produces co1110idal supports with high specific surface area, with affinity sites on the surface, which are useful for applications in separation processes and detection of this antibody c1ass. They are present in the sera of patients with autoimmune diseases, and their detection presents difficulties in respect to the reprodutibilty of results, due to the heterogeneity of the molecules in this group. In addition, there is the multi-step characteristic of the ELISA assay, the most commonly used, and the variability of the supports in the available commercial kits. The specific antibody adsorption on the surface of magnetoliposomes and the development of a magnetic signal due to the linking is an alternative technique for the autoantibody diagnostico The advantages of the new method would be the reprodutibility, versatility of the supports and a single-step assay. The aim of this work was the preparation and characterization of affinity magnetoliposomes, and the evaluation of their performance in the interaction with autoantibodies. In their preparation colloidal magnetite was used as ferrofluid, cardiolipin, serine and ethanolamine as affinity lipids and choline as the structural one. The antibody adsorption was studied in batch and plug-flow mode in capilar column. As a result of the preparation, we obtained reprodutibility, and as for the adsorption, we observed that there is a good potentiality to use magnetoliposomes in the development of a detection technique of antiphospholipid antibodies / Mestrado / Desenvolvimento de Processos Biotecnologicos / Mestre em Engenharia Química

Orientadores: Jorge Rizzato Paschoal, Albina M. Altemani / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-07-31T16:18:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Bianchini_WalterAdriano_M.pdf: 5535625 bytes, checksum: 54d2ccee014d2e36e194de8a7afac444 (MD5) Previous issue date: 2002 / Resumo: As neoplasias indiferenciadas em cabeça e pescoço e base do crânio não são raras: ocorrem tanto em mucosas como em glândulas salivares, em partes moles e em linfonodos. O diagnóstico histopatológico preciso é fundamental na conduta terapêutica ideal e na caracterização do prognóstico de cada caso. o objetivo deste estudo foi avaliar a ocorrência destas neoplasias em nosso serviço, sua distribuição conforme o padrão celular, a idade do paciente e a localização do tumor, avaliando-se a freqüência dos casos em que o exame imuno-histoquímico foi decisivo para o diagnóstico diferencial conclusivo das mesmas. Foram estudadas 43 biopsias de neoplasias indiferenciadas diagnosticadas no ambulatório da Disciplina de Otorrinolaringologia da UNICAMP, no período de 1990 a 1997. Aplicou-se um painel imuno-histoquímico conforme o método complexo avidinabiotina-peroxidase (ABC), dependendo da idade dos pacientes, da localização do tumor e do padrão citoarquitetural das células neoplásicas. O laudo final foi emitido após nova análise conjunta com as lâminas coradas pela técnica da hematoxilina e eosina. Os locais de ocorrência mais comuns foram os linfonodos, 20,93%; faringe e pescoço, 16,28%; seios paranasais, 13,95% e cavidade nasal, 11,63%. Estas neoplasias foram mais prevalentes na sétima década de vida (34,88%), sendo duas vezes mais prevalentes em homens do que em mulheres. O exame imuno-histoquímico permitiu o diagnóstico conclusivo em 60,47% dos tumores e o sugeriu em 20,93%. Os padrões citoarquiteturais mais comuns foram: célula redondas, 51,16%; células epitelióides, 20,93%; células fusiformes, 16,28%; mixóides, 9,30% e células pleomórficas, 2,33% / Abstract: Head and neck and skull base undifferentiated tumors are not unusual. They can arise in mucosa such as in salivary glands, soft tissues or in lymph nodes. Suitable therapy and prognosis of every case depends upon precise histopathological diagnosis. In this paper we evaluated the ocurrence of these tumors in our service and the way in wich they are distributed according to cellular pattem, patient' s age and tumors localization. Besides, we studied the role of immunohistochemical techniques conceming conc1usive diagnosis. We reviewed 43 biopsies performed in our service from january 1990 to december 1997, diagnosticated as undifferentiated tumors. We applied an immunohistochemical panel according to the method avidin-biotin-peroxidase complexo The final diagnostic was achieved after comparation to the biopsies stained with hematoxylin and eosin technique. The most frequent localization of undifferentiated tumors was lymph nodes, 20,93%; pharynx and neck, 16,28%; paranasal sinus, 13,95% and nasal cavity, 11,63%. They were more prevalent on seventh decade of life (34,88%), and twice more prevalent in men than women. The immunohistochemical technique allowed conc1usive diagnosis in 60,47% of tumors and was suggestive in 20,93% of the biopsies. The most prevalent cellular pattem was round cell (51,16%), followed by epithelioid cell (20,93%), spindle cell (16,28%), myxoid pattem (9,30%) and pleomorfic cell (2,33%). The results of this work demonstrate the role of immunohistochemical technique on conc1usive diagnostic of undifferentiated tumors / Mestrado / Otorrinolaringologia / Mestre em Ciências Médicas

Orientador: Julieta Rodini Engrácia de Moraes / Banca: Laura Satiko Okada Nakaghi / Banca: Rogério Salvador / Resumo: Aeromonas hydrophila é patógeno oportunista com potencial de infecção para mamíferos, peixes e humanos, cosmopolita e emergente em infecções hospitalares de humanos. O complexo Aeromonas hydrophila formado por várias subespécies apresenta variedade antigênica que dificulta o diagnóstico da infecção pelo uso de anticorpos monoclonais. Pelo exposto, o objetivo deste trabalho foi o de produzir uma imunoglobulina Y policlonal purificada em gema de galinhas poedeiras, imunizadas com proteínas de membrana bacteriana e testar sua eficácia nos ensaios de imuno-histoquímica para identificação de bactérias no fígado e rim de Piaractus mesopotamicus infectados experimentalmente. Os resultados mostraram que a técnica foi eficaz uma vez que as aves produziram anticorpos específicos anti-A. hydrophila no soro e na gema, com aumento significativo (p<0,05) e progressivo dos títulos até 60 dias, que se mantiveram detectáveis no teste ELISA até 90 dias após a terceira imunização. As análises de imuno-histoquímica foram efetivas para detecção de colônias de A. hydrophila no coração, fígado, rim, encéfalo e baço de P. mesopotamicus com anticorpos IgY específico. Os resultados permitiram concluir que a imunoglobulina Y produzida em ovos de galinha foi eficaz no diagnóstico de aeromonose na espécie de peixe testada / Abstract: Among the aeromonas complex, Aeromonas hydrophila has the potential to infect mammals, fish, and humans. It is a cosmopolitan, opportunistic and emerging pathogen in nosocomial infections in humans. This bacteria complex formed by several subspecies also presents antigenic variety, which makes diagnosis difficult to be done with the use of monoclonal antibodies. The aim of this work was to produce polyclonal immunoglobulin Y purified from yolk of laying hens, immunized with bacterial membrane proteins, and to test its effectiveness in immunohistochemistry of A. hydrophila cells in the liver and kidney of experimentally infected Piaractus mesopotamicus. The results showed that the laying hens produced specific anti-A. hydrophila antibodies in serum and yolk, with a significant (p<0,05) and progressive increase of titles at 60 days, which were maintained until 90 days after the third detectable immunization in the ELISA test. The immunohistochemistry was positive for detection of colonies of A. hydrophila in liver and P. mesopotamicus in heart, liver, kidney, brain and spleen with the use of specific IgY antibodies. Therefore, the immunoglobulin produced in chicken eggs was effective in diagnosing aeromonas in P. mesopotamicus / Mestre

Made available in DSpace on 2016-08-12T18:48:49Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-10-26. Added 1 bitstream(s) on 2016-08-12T18:51:02Z : No. of bitstreams: 1 000864605.pdf: 2445831 bytes, checksum: f8ee2a0f84a4919d291bdec3518b4187 (MD5) / Aeromonas hydrophila é patógeno oportunista com potencial de infecção para mamíferos, peixes e humanos, cosmopolita e emergente em infecções hospitalares de humanos. O complexo Aeromonas hydrophila formado por várias subespécies apresenta variedade antigênica que dificulta o diagnóstico da infecção pelo uso de anticorpos monoclonais. Pelo exposto, o objetivo deste trabalho foi o de produzir uma imunoglobulina Y policlonal purificada em gema de galinhas poedeiras, imunizadas com proteínas de membrana bacteriana e testar sua eficácia nos ensaios de imuno-histoquímica para identificação de bactérias no fígado e rim de Piaractus mesopotamicus infectados experimentalmente. Os resultados mostraram que a técnica foi eficaz uma vez que as aves produziram anticorpos específicos anti-A. hydrophila no soro e na gema, com aumento significativo (p<0,05) e progressivo dos títulos até 60 dias, que se mantiveram detectáveis no teste ELISA até 90 dias após a terceira imunização. As análises de imuno-histoquímica foram efetivas para detecção de colônias de A. hydrophila no coração, fígado, rim, encéfalo e baço de P. mesopotamicus com anticorpos IgY específico. Os resultados permitiram concluir que a imunoglobulina Y produzida em ovos de galinha foi eficaz no diagnóstico de aeromonose na espécie de peixe testada / Among the aeromonas complex, Aeromonas hydrophila has the potential to infect mammals, fish, and humans. It is a cosmopolitan, opportunistic and emerging pathogen in nosocomial infections in humans. This bacteria complex formed by several subspecies also presents antigenic variety, which makes diagnosis difficult to be done with the use of monoclonal antibodies. The aim of this work was to produce polyclonal immunoglobulin Y purified from yolk of laying hens, immunized with bacterial membrane proteins, and to test its effectiveness in immunohistochemistry of A. hydrophila cells in the liver and kidney of experimentally infected Piaractus mesopotamicus. The results showed that the laying hens produced specific anti-A. hydrophila antibodies in serum and yolk, with a significant (p<0,05) and progressive increase of titles at 60 days, which were maintained until 90 days after the third detectable immunization in the ELISA test. The immunohistochemistry was positive for detection of colonies of A. hydrophila in liver and P. mesopotamicus in heart, liver, kidney, brain and spleen with the use of specific IgY antibodies. Therefore, the immunoglobulin produced in chicken eggs was effective in diagnosing aeromonas in P. mesopotamicus

Orientador : Dagmar Ruth Stach-Machado / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-02T17:58:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dias_LeticiaChavesFerreira_M.pdf: 5578812 bytes, checksum: 7e4d14ddd6394f6091ef77195ec9d6c2 (MD5) Previous issue date: 2002 / Mestrado

Orientador: Rinaldo Poncio Mendes / Coorientador: James Venturini / Coorientador: Ana Pardini Vicentini / Coorientador: Daniela Vanessa Moris de Oliveira / Banca: Mário León Silva-Vergara / Banca: Anamaria Mello Miranda Peniago / Resumo: O reaparecimento de manifestações clínicas após tratamento eficaz, neste texto identificado como recaída, tem sido pouco avaliado. Assim, foram estudados os casos de recaída observados em 400 pacientes, 93 com a forma aguda/subaguda (FA) e 307 com a crônica (FC), que já tinham apresentado cura aparente, isto é, com cura clínica, normalização da velocidade de hemossedimentação e cura sorológica - caracterizada pela presença de teste negativo à imunodifusão dupla em gel de agar por dois anos. Vinte e um (5,2%) desses pacientes apresentaram recaídas da doença. Três (14,3%) eram do sexo feminino e 18 (85,7%) do masculino, com razão de masculinidade de 6:1. Dos 21 pacientes com recaída, 15 (4,8%) apresentavam a FC e 6 (6,4%) a FA (p>0,05). As reativações ocorreram de 46 a 296 meses após introdução do tratamento (Md=96) e de 4 a 267 meses (Md= 60) após sua suspensão. As formas clínicas não diferiram quanto aos tempos decorridos até a reativação. O diagnóstico sorológico de recaída pela IDD foi feito em apenas 45% dos casos, o que levou à avaliação de outros testes para esse fim. Assim, foi realizado o enzimaimunoensaio (ELISA) e o immunoblotting (IB). A sensibilidade da IDD e do ELISA / 0,710 foi 76,1% em amostras de soro obtidos no pré-tratamento (p=0,25). No diagnóstico de recaída, a sensibilidade da IDD foi menor que no pré-tratamento (80% vs 45%; p=0,017), enquanto o ELISA / 0,710 foi igual (80% vs 65%;p=0,125). A sensibilidade do IB para diagnóstico de recaída foi de 12,5% na identificação da gp70 e 43,8% na da gp43 (p<0,05). A avaliação da acurácia do teste ELISA revelou sensibilidade de 96%, especificidade de 95%, valor preditivo positivo de 95%, valor preditivo negativo de 96% e acurácia de 95,5% quando o cut-off utilizado foi a densidade óptica de 0,710, obtido em função da construção da receiver operator characteristc - ROC, para um intervalo de confiança ... / Abstract: The reappearance of clinical manifestations after efficacious treatment, here identified as relapse, has been rarely evaluated. Thus, the cases of relapse observed in a cohort of 400 patients, 93 with acute/subacute form (AF) and 307 with chronic form (CF) were studied. They had already reached apparent cure, characterized as clinical cure, normalization of the erythrocyte sedimentation rate and serological cure, with a negative double agar gel immunodiffusion test (DID) for two years after antifungal discontinuation. Twenty-one (5.2%) of these patients had relapses. Three (14.3%) were female and 18 (85.7%) were male, with a male:female ratio of 6:1. Of the 21 relapsed patients, 15 (4.8%) presented the CF and 6 (6.4%) the AF (p>0.05). The relapse occurred 46-296 months after introduction of the treatment (Md=8 yrs) and from 4 to 267 months (Md=5 yrs) after withdrawal. Clinical forms did not differ regarding to the time elapsed until relapse. DID was positive in only 45% of the relapsed cases, which led to the evaluation of other tests to diagnose this condition. Thus, the enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) was standardized and the cut off was determined using the curve receiver operator characteristic - ROC and confidence intervals of 95% and 99%, showing optical densities of 0.710 and 0.850, respectively. Then, serological evaluation was performed using ELISA/0.710 and ELISA/0.850, and immunoblotting identifying gp43 (IBgp43) and gp70 (IBgp70). ELISA 0.710 and DID showed the same sensitivity, 76.1%, in serum samples obtained before treatment (p=0.25). DID sensitivity was lower at relapse than before the initial treatment (45% vs 80%; p=0.017), whereas ELISA/0,710 was the same (65% vs 80%; p=0.125). IBgp70 showed a 12.5% and IBgp43 a 43.8% sensitivity for diagnosing relapse (p<0.05). ELISA/0.710 showed a 96% sensitivity, 95% specificity, 95% positive predictive value, 96% negative ... / Mestre

Orientador: Hélio José Montassier / Banca: Manoel Victor Franco Lemos / Banca: Ricardo Luiz Moro de Souza / Resumo: A nucleoproteína (NP) do Vírus da Influenza Aviária (VIA) é um importante alvo antigênico no imunodiagnóstico desta doença, devido à sua baixa variabilidade entre as diferentes estirpes do VIA, resultando em uma elevada reatividade cruzada, e por ser também uma proteína altamente imunogênica para hospedeiros vertebrados. Neste estudo, o gene codificador da NP do VIA foi parcialmente clonado e expresso em Escherichia coli como uma proteína recombinante fusionada ao polipeptídeo SUMO e uma etiqueta de poli-histidina para seu uso no desenvolvimento de um ensaio de ELISA indireto para a detecção de anticorpos específicos contra o VIA. A NP recombinante foi expressada na fração solúvel e foi mais facilmente purificada. Após análise em relação aos seus principais sítios de antigenicidade e caracterização por meio de Western blotting, a NP recombinante foi utilizada como uma preparação antigênica no ELISA indireto para detecção de anticorpos contra o VIA presentes em amostras de soro de galinha. A análise comparativa do teste desenvolvido no presente estudo com um ELISA comercial apresentou valores de 95%, 97% e 96,7% de sensibilidade, especificidade e acurácia, respectivamente e um índice κappa de 0,88. Os resultados permitem concluir que a NP recombinante do VIA desenvolvida neste estudo possui características favoráveis para ser aplicada como antígeno no ELISA indireto, constituindo-se em um método sensível e específico para o imunodiagnóstico da Influenza Aviária em galinhas / Abstract: The nucleoprotein (NP) of Avian Influenza Virus (AIV) is an important antigenic target for immunodiagnosis of this disease, due to its low variability among different AIV strains, resulting in high cross-reactivity, and the also highly immunogenic for vertebrate hosts. In this study, the gene enconding NP of AIV was cloned and expressed in Escherichia coli as a recombinant protein fused to SUMO polypeptide with a polyhistidine tag and used to develop an indirect ELISA for the detection of AIV-specific antibodies. The recombinant NP was expressed in the soluble fraction and easily purified. After Analysis of the main sites of antigenicity and characterization in Western-Blotting, the recombinant NP was optimized as an antigen preparation for indirect ELISA to detect anti-AIV antibodies in chicken serum samples. The comparative analysis of this ELISA with a commercial ELISA showed values of 95%, 97%, 96.7% of sensitivity, specificity and accuracy, respectively, and an agreement of k=0.88. In conclusion, the results indicated that the recombinant NP of AIV produced in this study is a good source of antigen for indirect ELISA and provides a sensitive and specific method for the immunodiagnosis of Avian Influenza in chickens / Mestre