ROCHA, F. R. Análise molecular da prevalência dos genes beta-lactamases blaCTX-M, blaSHV e blaTEM em Klebsiella pneumoniae isoladas de pacientes com diagnóstico de infecção hospitalar na Santa Casa de Misericórdia de Sobral, Ceará. Dissertação (Mestrado em Biotecnologia) - Campus de Sobral, Universidade Federal do Ceará, Sobral, 2015. / Submitted by Djeanne Costa (djeannecosta@gmail.com) on 2016-06-29T12:47:17Z No. of bitstreams: 1 2015_dis_frrocha.pdf: 1459850 bytes, checksum: 6a734a21f99b3793158529da7ea38c47 (MD5) / Approved for entry into archive by Djeanne Costa (djeannecosta@gmail.com) on 2016-06-29T12:49:15Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2015_dis_frrocha.pdf: 1459850 bytes, checksum: 6a734a21f99b3793158529da7ea38c47 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-29T12:49:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015_dis_frrocha.pdf: 1459850 bytes, checksum: 6a734a21f99b3793158529da7ea38c47 (MD5) Previous issue date: 2015 / Klebsiella pneumoniae is a Gram-negative bacillus responsible for a significant portion of urinary tract infections, respiratory, and bloodstream of adults in hospitals, besides infections in neonates in intensive care units. Its importance has increased due the emergence of extended-spectrum beta-lactamase-producing strains (ESBLs). These enzymes mediate resistance to oxyimino-β-lactams. In K. pneumoniae, most of the identified ESBLs are of the TEM, SHV, and CTX-M types. In addition, carbapenem-hydrolyzing beta-lactamases of KPC and GES types has been detected in these isolates. Outbreaks of nosocomial infections caused by multidrug-resistant K. pneumoniae clones have been described in various regions of the country. However, this is the first report of the genetic characterization of ESBL-producing K. pneumoniae in the state of Ceará, Brazil. This study aimed firstly to detect the main genes responsible for ESBL production in K. pneumoniae strains obtained from patients who developed nosocomial infections in a tertiary support hospital in the northern region of the Ceará state, from November 2013 to August 2014 and, secondly, to analyze the genetic similarity of these isolates. Thirty-six clinical isolates of ESBL-producing K. pneumoniae were evaluated. The detection of blaCTX-M groups 1 and 2, blaSHV-like, blaTEM-like, blaKPC-like, and blaGES-like genes was performed by PCR. Molecular typing of isolates was performed by pulsed-field gel electrophoresis PFGE. Groups 1 or 2 blaCTX-M and blaSHV-like genes were detected in 100% of the isolates and blaTEM-like genes in 55.6%. In addition, 55.6% of CTX-M-producers also produced SHV and TEM. No blaKPC-like and blaGES-like genes were detected. Molecular typing by PFGE showed great diversity between the isolates, although two isolates collected in different wards showed the same banding profile and had the same bla genes and so were considered to belong to a single strain. Detection of blaCTX-M genes in 100% of the isolates suggests that CTX-M enzymes are the major ESBLs responsible for the beta-lactam resistance phenotypes of the studied isolates. Data presented in this study call attention to an endemic resistance problem caused by multiclonal strains of multidrug-resistant K. pneumoniae whose control passes essentially the improvement of antimicrobial prescription policies and the implementation of prevention and control programs the spread of these pathogens in the studied hospital. / Klebsiella pneumoniae é um bacilo gram-negativo responsável por uma parcela significativa de infecções do trato urinário, respiratório e corrente sanguínea de adultos em hospitais, além de infecções em recém-nascidos em unidades de terapia intensiva. Sua importância tem aumentado devido ao surgimento de cepas produtoras de beta-lactamases de espectro estendido (ESBL). Estas enzimas medeiam resistência aos oxyimino-β-lactâmicos. Em K. pneumoniae, a maioria das ESBL identificadas são dos tipos TEM, SHV e CTX-M. Em adição, β-lactamases que hidrolisam carbapenêmicos dos tipos KPC e GES tem sido detectadas nestes isolados. Surtos de infecção hospitalar causados por clones de K. pneumoniae multiressistentes tem sido descritos em várias regiões do país. No entanto, este é o primeiro relato de caracterização genética de isolados de K. pneumoniae produtores de ESBL no estado do Ceará, Brasil. Este estudo teve como objetivo, em primeiro lugar, detectar os principais genes responsáveis pela produção de ESBL em cepas de K. pneumoniae obtidas a partir de pacientes que desenvolveram infecções hospitalares em um hospital de cuidados terciários na região norte do estado do Ceará, de novembro de 2013 a agosto de 2014 e, em segundo lugar, analisar a similaridade genética destes isolados. Trinta e seis isolados clínicos de K. pneumoniae produtores de ESBL foram avaliados. A detecção dos genes blaCTX-M dos grupos 1 e 2, blaSHV-like, blaTEM-like, blaKPC-like e blaGES-like foi realizada por PCR. A tipagem molecular dos isolados foi realizada por Pulsed-Field Gel Electrophoresis (PFGE). Os genes blaCTX-M dos grupos 1 ou 2 e blaSHV-like foram detectados em 100% dos isolados e os genes blaTEM-like em 55,6%. Em adição, 55,6% dos produtores de CTX-M também produziram SHV e TEM. Nenhum gene blaKPC-like e blaGES-like foi detectado. A tipagem molecular por PFGE mostrou grande diversidade entre os isolados, contudo dois isolados coletados em diferentes clínicas mostraram o mesmo perfil de bandas e tinham os mesmos genes bla e, então, foram considerados como pertencentes a uma única cepa. A detecção dos genes blaCTX-M em 100% dos isolados sugere que as enzimas CTX-M são as principais ESBL responsáveis pelo fenótipo de resistência aos beta-lactâmicos nos isolados estudados. Dados apresentados neste estudo chamam atenção para um problema de resistência endêmico causado por cepas multiclonais de K. pneumoniae multirresistentes cujo controle passa essencialmente pelo aprimoramento das políticas de prescrição de antimicrobianos e pela implantação de programas de prevenção e controle da disseminação destes patógenos no hospital pesquisado.

Introdução: Cerca de metade dos pacientes transplantados de pulmão morrem dentro de cinco anos após o procedimento. As perdas estão com a complexidade pós-operatória inicial (falência precoce do órgão), com infecções, (bacterianas ou fúngicas) e, muito raramente, a episódios de rejeição de difícil controle. Em momento posterior, a rejeição crônica, manifesta sob a forma de bronquiolite obliterante, surge como outra causa adicional. Objetivos: O objetivo do presente estudo é o de analisar a associação ente infecção por CMV, rejeição e o desenvolvimento de Bronquiolite Obliterante, em pacientes transplantados de pulmão, submetidos à profilaxia universal com ganciclovir endovenoso. Material e Métodos: Estudo de coorte histórica, realizado no Complexo Hospitalar Santa Casa de Porto Alegre, hospital terciário de 1200 leitos, e Centro de Referência na América Latina de Transplante de Órgãos Sólidos. Os pacientes foram submetidos a transplante pulmonar entre Março de 1999 e Fevereiro de 2004. Todos os pacientes incluídos no estudo receberam esquema de imunossupressores, constando de prednisona, azatioprina e ciclosporina (ou esquema alternativo determinado pela impossibilidade de utilização destas drogas). Nos mesmos, após o transplante, foi implementado o protocolo de profilaxia universal com ganciclovir endovenoso, na dose de 10 mg/kg/dia por 3 semanas, seguindose a administração de 5 mg/kg/dia por 3 a 12 semanas, independentemente da sorologia prévia do receptor para o CMV Infecção por CMV foi definida como detecção de CMV pp65 em granulócitos pelo método de anticorpos monoclonais (Clonab-Biotest, Germany), e os resultados de antigenemia positivos eram reportados como o número de células positivas por granulócitos circulantes no soro. Os pacientes eram monitorizados semanalmente para antigenemia pp65 durante as primeiras 3 a 12 semanas após o transplante pulmonar (período de risco aumentado para infecção por CMV) e, posteriormente, a cada 15 dias, durante 12 meses. Testes adicionais foram realizados baseados em suspeita clínica de infecção. O diagnóstico de bronquiolite obliterante (BO) foi estabelecido de acordo com a classificação clínica da síndrome de bronquiolite obliterante (SOB) da Sociedade Internacional de Pulmão e Coração (1993), e/ou por exame anátomo-patológico de material de biópsia transbrônquica ou de pulmão a céu aberto. Resultados: Durante o período de entre março/1999 e fevereiro/2004 foram realizados na instituição 106 transplantes pulmonares. Vinte e quatro pacientes (22,6%) foram excluídos em decorrência de óbito no primeiro mês pós-transplante pulmonar, e os outros 10 foram excluídos por se tratarem de casos de transplante pulmonar intervivos, resultando o número total de 72 pacientes submetidos à análise definitiva. A idade média dos pacientes era de 51.2 anos (7-72 anos), e a maioria deles (65.9%) eram do sexo masculino. A influência do número de infecções por CMV não foi significativa para o desenvolvimento de Bronquiolite Obliterante, estando presente em 38,4% dos pacientes infectados. Por outro lado, mostrou-se significativa a associação entre o número de episódios de Rejeição Aguda e o desenvolvimento de BO (55,9% dos casos), e a relação com o sexo feminino, tanto do doador quanto do receptor, mostrando-se este sexo atuar como fator protetor contra o desenvolvimento d BO (34,2%). Conclusões: O presente estudo mostrou que o desenvolvimento de rejeição crônica, sob a forma de bronquiolite obliterante, encontrou-se diretamente associado com o número de episódios de rejeição aguda apresentado pelos pacientes transplantados, com a natureza da doença de base, em especial enfisema, com o tempo de sobrevida após o transplante, e com o tempo em lista de espera. Não se observou, por outro lado, que o número de infecções por CMV tivesse aumentado a incidência de BO. Como observado em outros centros, o sexo feminino, tanto do doador como receptor, parece proteger contra o desenvolvimento da bronquiolite obliterante. / Introduction: About half of patients with lung transplantation die up to five years after the procedure. The falls are related to the immediate postoperative complexities, bacterial or fugal infections, and rarely to rejection episodes of difficult control. Later, chronic rejection under of bronchiolitis obliterans emerges as additional cause. Aim: The present study objectives perform an analysis of the association between infection by CMV, chronic rejection and the development of bronchiolitis obliterans in patients with lung transplantation, submitted to universal prophylaxis with intravenous ganciclovir for five years. Methodology: Study of historical cohort, carried out in Complexo Hospitalar Santa Casa de Porto Alegre, a tertiary hospital with 1200 beds, Reference Center in Latin America for Solid Organs Transplantation. The patients were submitted to lung transplant between March 1999 and February 2004, all receiving a triple program of immunossupressive drugs (prednisone, azathioprine and cyclosporine), or an alternative program determined by the impossibility of use of that drugs. After the transplant, a prophylactic universal protocol was implemented with intravenous ganciclovir (10 mg/kg/day) for 3 weeks, following the administration of 5 mg/kg/day for 3-5 weeks, independently of prior CMV receptor serology. CMV infection was defined as pp65 CMV detection in granulocytes through the monoclonal-antibody method (Clonab-Biotest, Germany), and the positive results were reported as number of positive cells per serum circulating granulocytes. The patients were weekly monitored for pp65 blood antigen by the first 3-12 weeks post transplantation, and after at each 15 days for 12 months. Other tests were performed on clinical evidence of infection. The diagnosis of bronchiolitis obliterans (BO) was settled according to the clinical classification of the bronchiolitis obliterans syndrome (BOS) of the International Lung-Heart Transplantation Society (1993), and/or by pathologic examination of material obtained through transbronchial or open lung biopsy. Results: During the study period (1999 – Feb 2004) 106 lung transplants were performed in the Institution. Of them, 24 (22.5%) were excluded for first month mortality, and another 10 that were cases of inter-vivo transplants. Most of the remaining 72 patients submitted to the final analysis were male (65.9%); the mean age that whole group was 51.2 years (7-72 years). Only 38,5% of the patients with CMV infection developed BO – a non significant number. However, cases of BO significantly associated to acute rejection episodes (in 59,9%). The female sex (either of receptor or donor) was correlated to a lower BO occurrence (34.2%). Conclusions: The number of CMV infections did not was associated to the emergence of bronchiolitis obliterans in patients submitted to lung transplantation. The development of chronic rejection, in form of bronchiolitis obliterans, however, was directly associated to the number of acute rejection episodes, to the basic lung disease, particularly enfisema, to the post transplantation survival time, and to a longer time in wait list. In was observed that female sex may be a protection factor against BO development.

Introdução: Infecções Relacionadas à Assistência à Saúde (IRAS) são consideradas um dos maiores problemas de saúde pública em todo o mundo. Estima se que entre 5% e 15% dos pacientes hospitalizados adquirem infecção durante a internação e aproximadamente 25% a 40% recebem antibiótico para tratamento ou profilaxia de infecções. (1) Essas IRAS são especialmente mais graves em UTI, aonde os pacientes são mais suscetíveis e os organismos mais resistentes quando comparados a outros ambientes do hospital. Sabe se que esses pacientes críticos apresentam 5 a 10 vezes mais probabilidade de adquirir IRAS do que em outras unidades de menor complexidade.(2) Por isso, a World Health Organization (WHO) identificou a resistência antimicrobiana como uma das três maiores ameaças para a saúde humana. Objetivos: Este estudo tem por objetivo avaliar os fatores de risco para a multirresistência bacteriana (1) e fatores de risco para mortalidade (2) para pacientes internados em Unidade de Terapia Intensiva (UTI) do Hospital de Clínicas de Porto Alegre (HCPA) que tenham diagnóstico de infecção hospitalar no período de janeiro de 2008 a dezembro de 2009. Delineamento: Estudo restrospectivo de coorte Métodos: Foram avaliados neste estudo exames microbiológicos de pacientes internados na UTI do HCPA, no período de janeiro de 2008 e dezembro de 2009, com diagnóstico de infecção hospitalar. Foi criada uma ficha de coleta para obtenção dos dados necessários para o estudo. Seu preenchimento era possível a partir de informações, do paciente, obtidas através do sistema informatizado do hospital. Os dados foram transportados para o software EpInfo versão 3.3.2, para posterior análise estatística, a qual foi realizada através do programa estatístico SPSS 14.0. As infecções adquiridas no hospital foram classificadas de acordo com critérios da Comissão de Controle de Infecção Hospitalar (CCIH) (3), os quais são baseados nos critérios do Centers for Diseases Control and Prevention (CDC).(4) A multirresistência bacteriana foi classificada de acordo com recomendações do CDC e critérios da CCIH do HCPA, e foram incluídas as seguintes bactérias: Klebsiella spp e Escherichia coli produtoras de β-lactamase de espectro estendido (ESBL); Pseudomonas spp resistente a ceftazidima e/ou resistentes a carbapenêmicos; Acinetobacter spp resistente a ampicilina/sulbactam e/ou resistentes a carbapenêmicos; Enterobacter spp - Citrobacter spp - Serratia spp e Proteus spp resistente a todos os antibióticos exceto carbapenêmicos; Stenotrophomonas maltophilia resistente a sulfametoxazol/trimetropim, Enterococcus spp resistente a vancomicina (VRE) e Staphylococcus aureus meticilina resistente (MRSA). Os isolados com suscetibilidade intermediária foram considerados como resistentes. Resultados: Germes multirresistentes (GMR) foram identificados em 32,5% dos isolados microbiológicos. Em geral, os GMR mais comumente encontrados foram ESBL (32.3%; N= 72); MRSA (29.2%; N= 65), Acinetobacter baumanii (21.5%; N= 48), Pseudomonas aeruginosa (8.1%; N= 18). Em Infecções do trato respiratório (ITR), Infecções do trato urinário (ITU) e hemoculturas os GMR mais prevalentes foram, respectivamente, MRSA (40,8%; N= 51), Escherichia coli (21,6%; N= 8), MRSA e Escherichia coli (15,8%; N= 3). Os fatores de risco identificados para a emergência de GMR foram o uso de antimicrobianos em enfermarias (P<0.001), especialmente sulfonamidas (P=0.005), cefalosporinas de terceira geração (P=0.05), cefalosporinas de quarta geração (P<0.01), vancomicina (P<0.01), carbapenêmicos (P<0.01), quinolonas (P<0.01), penicilinas (P=0.03) e penicilinas associadas a inibidores de β-lactamase (P<0.01). O uso de antimicrobianos em UTI também foi considerado um fator de risco para antibióticorresistência (P<0.01), em especial para os seguintes antimicrobianos: cefalosporinas de segunda geração (P=0.05), cefalosporinas de quarta geração (P=0.004), vancomicina (P<0.01), aminoglicosídeos (P=0.02), macrolídeos (P=0.03), carbapenêmicos (P<0.01), quinolonas (P<0.01) e penicilinas (P<0.01). A soma do uso de algumas classes de antimicrobianos, nas enfermarias e UTI, também foram fatores de risco para multirresistência bacteriana (P<0.01), sendo significativo o uso de sulfonamidas (P<0.01), cefalosporinas de terceira geração (P=0.021), vancomicina (P<0.01), macrolídeo (P=0.03), carbapenêmicos (P<0.01), quinolona (P<0.01), penicilina (P<0.01) e penicilinas associadas à inibidores de β-lactamase (P=0.04). Na análise multivariada, os dias de internação prévia a internação atual (considerando os últimos seis meses) e uso de antimicrobianos, somando enfermarias e UTI, foram fatores de risco para GMR, (P<0.01 e P<0.01), respectivamente. O uso de quinolonas em UTI (P=0.02), aminoglicosídeos em UTI (P<0.01), carbapenêmicos somado o uso nas enfermarias e UTI (P<0.01), uso de quinolonas nas enfermarias (P=0.05) e AIDS (P=0.02) também foram considerados fatores de risco para multirresistência bacteriana. Na análise multivariada, os fatores de risco associados à mortalidade hospitalar foram identificação de pacientes portadores de GMR (P<0.01), uso prévio de antimicrobianos nas enfermarias (P<0.01), dias de uso de SVD (P<0.01) e CVC (P<0.01), APACHE II score (P<0.01), idade (P<0.01), dias de internação prévia a internação atual (P<0.01), dias de internação no HCPA (P<0.01), doenças hematológicas (P<0.01) e transplante de medula óssea (P=0.05) Conclusão: Houve correlação entre dias de internação prévia a internação atual; uso de antimicrobianos quando utilizados nas enfermarias, e logo depois, na UTI; uso de quinolonas na UTI, uso de quinolonas nas enfermarias, uso de aminoglicosídeos na UTI, carbapenêmicos somando as enfermarias e UTI e AIDS com a emergência de GMR. Considerando os fatores de risco para a mortalidade hospitalar foi possível observar que o surgimento de GMR, consumo prévio de antimicrobianos nas enfermarias, dias de uso de SVD e CVC, grau de gravidade do paciente, idade, dias prévios de internação, dias de internação no HCPA, doenças hematológicas e transplante de medula óssea foram independentemente associados à mortalidade em pacientes internados na UTI com diagnóstico de infecção hospitalar. / Introduction: Hospital-acquired infections (HAI) are considered one of the major public health problems worldwide. It is estimated that between 5% and 15% of hospitalised patients acquire an infection during hospitalisation and approximately between 25% and 40% receive antibiotics for treatment or prophylaxis of infections (1). These HAI are especially serious in ICUs, where patients are more susceptible and micro-organisms are more resistant, when compared to those in other hospital areas. It is known that these critical care patients present between 5 and 10 times greater probability of acquiring a HARI than in other lower complexity hospital units (2). For this reason, the World Health Organization (WHO) has identified antimicrobial resistance as one of the three major threats for human health. Objectives: The aim of this study is to evaluate the risk factors for multi-bacterial resistance (1) and mortality risk factors (2) for patients hospitalised in the Intensive Care Unit (ICUs) of the Hospital de Clinicas de Porto Alegre (HCPA) who had a hospital acquired infection diagnosis during the period between January 2008 and December 2009. Design: Retrospective cohort study Methods: For this study, the microbiological analyses of the patients with a diagnosis of hospital acquired infection, attended to in the ICU of the HCPA, during the period from January 2008 until December 2009, were evaluated. A collection form was created in order to obtain the necessary data for the study. Its completion was possible from the information supplied by the patient, obtained through the hospital’s computarised system. The data was transferred to the Epinfo 3.3.2 software version for subsequent statistical analysis, which was performed using the SPSS 14.0 statistics programme. Hospital acquired infections were classified according to the criteria of the Hospital Infection Control Committee (HICC) (3), which are based upon the criteria of the Centers for Diseases Control and Prevention (CDC).(4) Multi-bacterial resistance was classified according to the recommendations of the CDC, as well as, criteria from the HICC of the HCPA, and the following bacteria were included: Klebsiella spp and Escherichia coli, producers of extended-spectrum β-lactamase (ESBL); Pseudomonas spp, resistant to ceftazidime and/or resistant to carbapenems; Acinetobacter spp, resistant to ampicillin/sulbactam and/or carbapenems resistant; Enterobacter spp - Citrobacter spp - Serratia spp and Proteus spp, resistant to all antibiotics except carbapenems; sulfametoxazol/trimetropim resistant Stenotrophomones maltophilia, vancomycin resistant (VRE) Enterococcus spp and meticilin resistant Staphylococcus aureus (MRSA). The isolates with intermediate susceptibility were considered resistant. Results: Multi-resistant germs (MRG) were identified in 32,5% of the microbiological isolates. In general, the most commonly found MRG were: ESBL (32.3%; N= 72); MRSA (29.2%; N= 65), Acinetobacter baumanii (21.5%; N= 48) and Pseudomonas aeruginosa (8.1%; N= 18). In respiratory tract infections (RTI), urinary tract infections (UTI) and hemocultures, the most prevalent MRGs were, respectively, MRSA (40,8%; N= 51), Escherichia coli (21,6%; N= 8), MRSA and Escherichia coli (15,8%; N= 3). The risk factors identified for the emergence of MRGs were: the use of antimicrobials in wards (P<0.001), especially sulphonamides (P=0.005), third generation cephalosporins (P=0.05), fourth generation cephalosporins (P<0.01), vancomycin (P<0.01), carbapenems (P<0.01), quinolones (P<0.01), penicillins (P=0.03) and penicillins associated with β-lactamase inhibitors (P<0.01). The use of antimicrobials in the ICU was also considered a risk factor for antibiotic resistance (P<0.01), especially for the following antimicrobials: second generation cephalosporins (P=0.05), fourth generation cephalosporins (P=0.004), vancomycin (P<0.01), amino glycosides (P=0.02), macrolides (P=0.03), carbapenems (P<0.01), quinolones (P<0.01) and penicillins (P<0.01). The sum of the use of some antimicrobial classes, in the wards and in the ICU, were also risk factors for bacterial multiresistance (P<0.01), being significant the use of sulphonamides (P<0.01), third generation cephalosporins (P=0.21), vancomycin (P<0.01), macrolides (P=0.03), carbapenems (P<0.01), quinolones (P<0.01), penicillin (P<0.01) and penicillin associated with β-lactamase inhibitors (P=0.04). In the multivariate analysis, the amount of days in hospital, previous to the current hospitalisation (taking into account the past six months) and the use of antimicrobials, adding-up wards plus ICU, were risk factors for MRG, (P<0.01 and (P<0.01), respectively. The use of quinolones in the ICU (P=0.02), amino glycosides in the ICU (P<0.01), carbapenems, adding the use in the wards to the use in the ICU (P<0.01), use of quinolones in wards (P=0.05) and AIDS (P=0.02) were also considered risk factors for multi-bacterial resistance. In the multivariate analysis, the risk factors associated with hospital mortality were identified in patients bearing MRG (P<0.01), previous use of antimicrobials in wards (P<0.01), days of use of urinary catheter (UC) (P<0.01) and central venous catheter (CVC) (P<0.01), APACHE II score (P<0.01), age, previous days of hospitalisation before the current event (P<0.01), number of days hospitalised in the HCPA (P<0.01), haematological disease (P<0.01) and bone marrow transplant (P=0.05). Conclusion: There was a correlation between a previous hospitalisation and the current one, use of antimicrobials, when used in wards and soon after in the ICU; use of quinolones in the ICU, use of quinolones in the ward, use of amino glycosides in the ICU, carbapenems, adding use in wards and in the ICU and AIDS, with the emergence of MRGs. Taking into account the risk factors for hospital mortality, it was possible to observe that the emergence of MRGs, previous use of antimicrobials in the wards, days on UC and CVC, degree of severity of the patient’s health condition, age, previous amount of days hospitalised before the current occurrence, number of days hospitalised in the HCPA, hematological disease and bone marrow transplantation were independently associated with patient mortality, for individuals hospitalised in the ICU with a diagnosis of hospital infection.

Made available in DSpace on 2015-12-06T23:46:01Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013 / Fundação de Apoio à Universidade Federal de São Paulo (FapUNIFESP) / Objetivos: Determinar a incidencia de infeccao recente por B. pertussis em profissionais de Saúde que atuam em setores pediatricos e avaliar o conhecimento destes profissionais acerca da epidemiologia e imunizacao para coqueluche. Metodologia: Estudo transversal realizado em setores pediatricos de hospital universitario com medicos, enfermeiros e auxiliares ou tecnicos de enfermagem, de outubro a dezembro de 2011. Todos participantes preencheram questionario informando dados pessoais, formacao e atuacao profissional, historia de contato com caso suspeito ou confirmado de coqueluche, e questoes sobre coqueluche para avaliar o conhecimento sobre epidemiologia e imunizacao. Foi feita a dosagem quantitativa de anticorpos anti-toxina pertussis (IgG anti-PT) atraves do ELISA e foram considerados indicativos de infeccao nos ultimos 12 meses, titulos de anticorpos IgG anti-PT maiores que 62,5 UI/Ml, desde que nao tivesse recebido vacina nos ultimos 12 meses. Resultados: 391 profissionais participaram do estudo. Dos 388 profissionais de Saúde incluidos na analise sorologica, 6,4% apresentaram resultado sugestivo de infeccao recente por Bordetella pertussis. A analise de regressao logistica multivariada demonstrou que o residente da pediatria apresentou risco aumentado de infeccao (OR=4,15; IC 95%: 1,42-12,14; p=0,009) e profissionais com carga horaria semanal maior que 40 horas (OR=3,29; IC 95%: 1,27-9,26; p=0,024). Apenas 45,3% dos profissionais acertaram todas as questoes que avaliaram conhecimento sobre coqueluche. Medicos residentes (97,7%) apresentaram a maior taxa de acertos destas questoes (p< 0,001). Conclusao: A incidencia de infeccao recente por Bordetella pertussis foi alta em profissionais de Saúde de pediatria. Estes profissionais deveriam ser considerados um grupo prioritario para receber vacina para coqueluche / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Made available in DSpace on 2015-12-06T23:46:55Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Introdução: Os cateteres venosos centrais sao dispositivos de grande importancia na assistencia a Saúde. As vantagens proporcionadas pela utilizacao dos cateteres contrapoem-se as complicacoes que podem advir de seu uso. Dentre essas ressaltamos a infeccao da corrente sanguinea. Esta complicacao e uma das principais causas de infeccao relacionada a assistencia a Saúde em unidades de terapia intensiva, e esta associada a significante morbidade, mortalidade, prolongamento do tempo de internacao e aumento nos custos da assistencia ao paciente. Poucos estudos nacionais tem abordado este problema. Objetivos: Determinar a incidencia de infeccao de corrente sanguinea nos pacientes internados em unidades de terapia intensiva com cateter venoso central, bem como as variaveis associadas a esta complicacao. Casuistica e Metodo: Estudo multicentrico do tipo coorte, realizado em seis unidades de terapia intensiva de tres hospitais do Complexo da Universidade Federal de São Paulo. A vigilancia das infeccoes da corrente sanguinea foi realizada por enfermeiros de Controle de Infeccao Hospitalar que foram capacitados por um treinamento teorico-pratico, com o objetivo de padronizar o preenchimento de um instrumento especifico para avaliacao das variaveis associadas e o diagnostico de infeccao. Este instrumento foi preenchido para todos os pacientes de ambos os sexos, maiores de 18 anos, hospitalizados no periodo de 01 de novembro de 2005 a 31 de outubro de 2006 em unidades de terapia intensiva e que possuiam cateter venoso central de curta permanencia. Resultados: Foram incluidos 555 pacientes e 928 cateteres venosos centrais. Observou-se 118 casos de infeccoes da corrente sanguinea em 11.546 cateteres-dia: 10,22 infeccoes da corrente sanguinea por 1000 cateteres-dia. A media de idade dos pacientes com infeccao da corrente sanguinea foi de 56,53 anos e dos pacientes sem infeccao foi de 53,36 anos. Em relacao ao genero...(au) / Introduction: Central venous catheters are devices of great importance in health care. The advantages gained from the use of catheters outweigh the complications that might result from their use, among which bloodstream infections. This complication is one of the main causes of health care related infections in intensive care units, and is associated with significant morbidity, mortality, prolongation of hospitalization time and increase of costs in the assistance to the patient. In spite of its importance, few national studies have addressed this issue. Objectives: To determine the incidence of bloodstream infection in patients with central venous catheters, hospitalized in intensive care units, as well as the variables associated with this complication. Study design and methodology: Multicentric cohort study carried out at intensive care units of three hospitals of the Complex of the Universidade Federal de São Paulo. The observation of the bloodstream infections was performed by nurses of the Hospital Infection Control. They had had a theoretical-practical training that aimed at the standardization in filling an instrument specific to the evaluation of the associated variables and the diagnosis of infection. This instrument was filled in for all the patients of both genders, over 18 years old, who were hospitalized between November 1st, 2005 and October 31st, 2006, and had a short-term central venous catheter. Results: 555 patients and 928 central venous catheters were included in the study. We observed 118 cases of bloodstream infection in 11.546 catheters day: 10.22 bloodstream infections per 1000 catheters day. The mean age of the patients with bloodstream infection was 56.53 years, and that of the patients without infection was 53.36 years. As regards gender, ...(Au) / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Made available in DSpace on 2015-07-22T20:49:37Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-10-29. Added 1 bitstream(s) on 2015-08-11T03:25:55Z : No. of bitstreams: 1 Publico-11781a.pdf: 831055 bytes, checksum: 29ec4e7ec726c3ff1cded5fed0a081d8 (MD5). Added 1 bitstream(s) on 2015-08-11T03:25:55Z : No. of bitstreams: 2 Publico-11781a.pdf: 831055 bytes, checksum: 29ec4e7ec726c3ff1cded5fed0a081d8 (MD5) Publico-11781b.pdf: 1660175 bytes, checksum: f02d461feb6dfe7f7b8e03a8902b1941 (MD5) / A candidíase hematogênica é uma infecção grave que tem alta prevalência em centros médicos de todo o mundo. Para poder avançar de forma mais consistente no conhecimento da epidemiologia e no desenvolvimento de estratégias de controle das infecções da corrente sangüínea causadas por Candida spp., esta infecção tem sido estudada em populações específicas, a exemplo de pacientes em unidades de terapia intensiva, hematológicos e neonatos. Poucas informações são disponíveis a cerca da epidemiologia destas infecções em pacientes idosos. Tendo em vista o aumento da sobrevida da população e a grande ocorrência de candidemia em pacientes com idade igual ou superior a 60 anos de idade e a limitada disponibilidade de estudos na literatura, este estudo teve como objetivo analisar o perfil epidemiológico, clínico e microbiológico em pacientes idosos, comparando-o com a população adulta jovem; verificar as tendências em relação à distribuição de espécies e resistência a antifúngicos ao longo do período de estudo e analisar a mortalidade e os fatores prognósticos de candidemia na população idosa. Analisamos um banco de dados constituído a partir de três estudos de coorte transversal, com coleta prospectiva de dados, para determinação das características epidemiológicas, clínicas e microbiológicas de episódios de candidemia documentados em 14 hospitais, durante o período de junho de 1994 a dezembro de 2004. As informações clínicas e epidemiológicas foram obtidas através de revisão dos prontuários e preenchimento de ficha clínica padrão. Candidemia foi definida como pelo menos uma hemocultura positiva para espécies de Candida spp., depois de adequada antissepsia, sendo somente o primeiro episódio de candidemia considerado para caracterização clínica dos casos. Os indivíduos foram categorizados em faixas etárias sendo considerados adultos jovens os indivíduos com idade entre 14 e 59 anos e idosos, os indivíduos com idade igual ou superior a 60 anos. Todos os pacientes pediátricos (idade < 14 anos) foram excluídos da análise. A caracterização microbiológica das cepas foi realizada em um único laboratório (LEMI-UNIFESP) através de métodos convencionais. A sensibilidade dos isolados do estudo aos agentes antifúngicos foi realizada pelo método da microdiluição em caldo, de acordo com as normas do Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI). Todas as informações referentes aos pacientes foram armazenadas em banco de dados e os cálculos estatísticos foram realizados através xvi do SPSS versão 15.0 e EPI-INFO versão 6.0. Analisamos um total de 1.037 casos, sendo que a prevalência dos idosos na população estudada foi de 45,2% (469/1037) com 59,3 % pertencentes ao gênero masculino. A candidemia nos idosos ocorre mais freqüentemente em pacientes graves, internados em unidades de terapia intensiva, portadores de neoplasias, diabetes mellitus, doenças cardiológicas e pulmonares e submetidos à cateterização venosa central e cirurgias abdominais. C. albicans responde pela maioria dos casos de candidemia nos idosos, sendo a C. tropicalis a espécie não-albicans significativamente mais prevalente nesta faixa etária. Não houve diferença entre a distribuição de resistência aos azólicos nas faixas etárias estudadas e a ocorrência desta mostrou-se estável no decorrer do período de estudo, porém, resistência cruzada foi observada. A mortalidade da população idosa foi maior que a dos adultos jovens (69,7% x 44,5%; p < 0,001) independente da terapia antifúngica inicial e da espécie isolada. Os fatores que contribuíram de forma independente para o óbito nos idosos foram escore APACHE II > 20, presença de doença cardíaca, pulmonar, diálise, cirurgia abdominal e uso de corticóide. Pacientes idosos respondem por substancial casuística entre os casos de candidemia documentados em hospitais terciários, apresentando peculiaridades de história natural e alta taxa de mortalidade. Portanto, é fundamental considerar maior agressividade nas medidas de profilaxia e terapêutica antifúngica dirigida a esta população. / Hematogenous candidiasis is a serious infection that is highly prevalent in medical centers worldwide. In order to better understand the epidemiology and optimize strategies to control bloodstream infections caused by Candida spp., this infection has been studied in specific populations, such as patients at intensive care units, hematologic and neonates. Few information is available about the epidemiology of these infections in elderly patients. Due to the increase of human life expectancy, high incidence of candidemia in elderly patients and the limited number of studies available in the literature, this study aimed to analyze the epidemiological, clinical and microbiological features in elderly patients, compared to young adult population, in terms of Candida species distribution, resistance to antifungal agents, mortality rate and prognostic factors. We analyzed a database included data from three cohort cross-sectional studies collected prospectively in order to determine the epidemiological, clinical and microbiological characteristics of episodes of candidemia documented in 14 hospitals during the period of June 1994 to December 2004. The clinical and epidemiological information were obtained by reviewing medical records and were recorded in standard case report form. Candidemia was defined as at least one positive blood culture for Candida spp., after proper antisepsis, being only the first episode of candidemia considered for characterization of clinical cases. Individuals were categorized as young adults when aged between 14 and 59 years and older persons when aged ≥ 60 years. All pediatric patients (age <14 years) were excluded from the analysis. The characterization of microbial strains was performed in a single laboratory (LEMI-UNIFESP) by conventional methods. Antifungal susceptibility tests were performed using the broth micro dilution assay according to the methodology by the Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI). All data were stored in database and statistical analysis was performed by SPSS version 15.0 and EPI-INFO version 6.0. We analyzed a total of 1.037 cases and the prevalence of elderly in the population studied was 45.2% (469/1037) and 59.3% were male. The candidemia in the elderly occurs more frequently in severe patients, hospitalized at intensive care units, in patients with cancer, diabetes mellitus, cardiac and lung diseases and in patients submitted to central venous catheterization and abdominal surgeries. C. albicans was responsible for most cases of candidemia in the elderly and C. tropicalis was the non-albicans species significantly more prevalent in this age group. There was no difference between the distribution of azole resistance in the age groups evaluated and this occurrence demonstrated to remain stable along the study period. However, cross-resistance was observed. The mortality rate of elderly population was greater than that observed with young adults (69.7% vs. 44.5%, p <0.001) regardless of initial antifungal therapy and the isolated species. The prognostic factors independently associated with death in the elderly population were APACHE II score > 20, presence of heart disease, pulmonary disease, dialysis, abdominal surgery and use of corticosteroids. Elderly patients account for substantial casuistic of candidemia in tertiary hospitals, presenting peculiar features of natural history and high mortality rate. Therefore, is essential to consider more aggressive approach in prophylaxis and antifungal therapy for this population. / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Made available in DSpace on 2015-07-22T20:49:40Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-10-27 / Entre as infecções invasivas causadas pelo gênero Candida, vale salientar a relevância clínica dos casos de infecção de corrente sangüínea, complicação esta conhecida como candidemia ou candidíase hematogênica. A candidíase hematogênica é uma infecção grave que tem alta prevalência em centros médicos de todo o mundo. Este estudo teve como objetivo analisar a evolução das taxas de incidência de candidemia ao longo do período de 11 anos e avaliar as possíveis mudanças no perfil epidemiológico de pacientes com candidemia internados no Hospital São Paulo ao longo de 2 períodos: 1994-1999 versus 2000-2004.Trata-se de estudo retrospectivo de coorte transversal, com coleta prospectiva de dados, para determinação das características epidemiológicas e microbiológicas de episódios de candidemia em indivíduos internados no Hospital São Paulo, durante o período de junho de 1994 a dezembro de 2004. As informações clínicas e epidemiológicas foram obtidas a partir de 3 bancos de dados constituídos com informações obtidas através de revisão dos prontuários e preenchimento de ficha clínica padrão. Episódio de candidemia foi considerado todo paciente com ao menos uma hemocultura positiva para espécies de Candida spp., sendo somente o primeiro episódio de candidemia considerado para caracterização clínica de casos. A caracterização microbiológica das cepas de diferentes serviços foi realizada em um único laboratório (LEMI-UNIFESP) através de métodos convencionais. A sensibilidade dos isolados do estudo aos agentes antifúngicos foi realizada pelo método da microdiluição em caldo, de acordo com as normas do Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI). Todas as informações referentes aos pacientes foram armazenadas em banco de dados e os cálculos estatísticos foram realizados através do SPSS versão 15.0 e EPI-INFO versão 6.0. Analisamos um total de 388 episódios de infecções de corrente sanguínea causada por Candida spp, sendo que a prevalência da população adulto jovem, acima de 14 anos, foi de 61,1% (237/388), com 60,3% (234) o gênero masculino. As espécies de Candida não-albicans corresponderam a 57,6 % (223/388) da casuística. Dentre as espécies de Candida não albicans, C. tropicalis e isolados do complexo C. parapsilosis foram as espécies prevalentes nos 2 períodos analisados. No segundo período pudemos observar maior prevalência de indivíduos de maior faixa etária, doença cardiológica, doença pulmonar, doença hepática e insuficiência renal. Por outro lado, no primeiro período houve maior frequência de pacientes com doença neurológica e síndrome infecciosa não fúngica. A maior prevalência de doenças degenerativas nos indivíduos do período 2 é compatível com a presença de maior número de idosos no segundo período. Observamos que número substancial de pacientes cerca de 30% não teve oportunidade de tratamento com drogas antifúngicas. A mortalidade geral documentada foi de ordem de 55,4%, sem mudanças ao longo do período. Concluindo, podemos afirmar que ao longo de 11 anos não houve mudança significativa na incidência de candidemia no Hospital São Paulo, nem mesmo no padrão de distribuição de espécies. Por outro lado, verificamos uma clara tendência de maior prevalência de indivíduos adultos jovens e idosos ao longo do segundo período, com conseqüente maior documentação desta complicação infecciosa em indivíduos com maior número de comorbidades. / Among the invasive infections caused by the genus Candida, it is worthwhile to emphasize the clinical relevance of bloodstream infections (BSIs), namely hematogenous candidiasis or candidemia. The hematogenous candidíases is a severe infection which has a high prevalence in medical centers worldwide. The aim of this study is to analyze the evolution of incidence rates of candidemia during the period of 11 years and to evaluate the possible changes in the epidemiological profile of patients with candidemia admitted at the São Paulo Hospital along the 2 periods: 1994-1999 versus 2000-2004. This is a retrospective study developed from a transversal cohort, with data collected prospectively for determination of epidemiological and microbiological features from episodes of candidemia in patients admitted at the São Paulo Hospital during the period of June 1994 to December 2004. The clinical and epidemiological informations by reviewing medical records and were recorded in standard case report form. Candidemia was defined as at least one positive blood culture for Candida sp. after proper antisepsis, being only the first episode of candidemia considered for characterization of clinical cases. The characterization of microbial strains was performed in a single laboratory (LEMI – UNIFESP) by conventional methods. Antifungal susceptibility tests were performed using the broth micro dilution assay according to the methodology by the Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI). All data were stored in database and statistical analysis was performed by SPSS version 15.0 and EPI-INFO version 6.0. We analyzed a total of 388 episodes of BSIs caused by Candida spp, and the prevalence of infection was mainly observed in young adults population (> 14 years-old), which accounted for 61.1% (237/388) from all cases, and 60.3% (234) were male. Candida non-albicans species corresponded to 57.6% (223/388) of the casuistic, being C. tropicalis and isolates of the C. parapsilosis complex the most prevalent species observed along the period studied. In the second study period candidemia was more frequently observed in the elderly population, heart disease, lung disease, liver disease and kidney failure. On the other hand, there was a higher prevalence of neurologic disease and non-fungal infectious syndrome in the second study period. At this time, the major occurrence of degenerative diseases in the individuals indicates more prevalence of these diseases in the elderly. We observed a substantial number of patients about 30% which did not have opportunity to treat with antifungal drugs. The overall mortality documented was 55.4%, with no changes along the period studied. We could demonstrate during the 11 years that there were no significant changes in the incidence of candidemia at the São Paulo Hospital, neither in the pattern of Candida species distribution. In the contrast, we observed a clear tendency of high prevalence of candidemia in young adults and in the elderly populations along the second period, with more records of this infectious disease in individuals with more comorbities. / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações

LIMA, Lucimá Alves Pereira. Avaliação do programa de controle de infecção hospitalar em hospitais no município de Teresina-PI. 2011. 101 f. Dissertação (Mestrado em Farmacologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2011. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2013-07-16T16:29:11Z No. of bitstreams: 1 2011_dis_laplima.pdf: 487713 bytes, checksum: 6d0a209b8dc9f2c8b21a25f7a1554855 (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Fernandes(erikaleitefernandes@gmail.com) on 2013-07-16T16:37:19Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2011_dis_laplima.pdf: 487713 bytes, checksum: 6d0a209b8dc9f2c8b21a25f7a1554855 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-07-16T16:37:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2011_dis_laplima.pdf: 487713 bytes, checksum: 6d0a209b8dc9f2c8b21a25f7a1554855 (MD5) Previous issue date: 2011 / The control of hospital infection (HI) was, over the years, evolving and showing like a phenomenon that is not restricted to the hospital, but also to all health care establishments, which develop actions considered risk for the onset of infection. For the control of hospital infection to be carried out systematically by all who participate directly or indirectly in the process, and to meet the needs of each service, the existence of a Control Program of HI (CPHI) has the role of organizing this systematic and can act as an important tool of quality, because it allows the planning and execution of control actions in terms of HI. To evaluate the performance of the Program for Infection Control in hospitals in the city of Teresina, based on indicators validated nationally. It’s about a multiple case, descriptive, evaluative epidemiological study, conducted in 10 hospitals agreed formally to participate in this study. The variables studied relate to the structure and process. With regard to the structure were evaluated physical space, material, human resources and regulations. On the process, were evaluated operational practices that involve the activities of epidemiological surveillance as well as teaching and research. Data collection was performed with form closed questions, documents evaluation and interviews. The study population consisted of nurse members of HICCs of each hospital. In assessing the operation adequacy degree of the HICCs in the studied hospitals, was established scoring system, classifying them into very adequate, adequate, inadequate and very inadequate. The results showed that two hospitals stood out, where one presented a very adequate final score and the other, very inadequate. The latter has no active HICC. It was observed that in relation to the physical structure and material, six HICCs had very appropriate feature, two inadequate and one, very inadequate. As for human resources two HICCs scored very adequate for meeting the legal requirements in full, six inadequate and one adequate. With regard to operational practices, the type II, only one hospital had very adequate score (100%), while five had percentages between 69 - 84%, being considered as adequate in this regard. As for the operational practices III, that correspond to teaching and research, we note that only two scored very adequate, also two had appropriate scores and the others were considered inadequate and very inadequate. Therefore, the data obtained indicate the need for interest and support from managers, the organization of health professionals involved in changing the direction in reference to professional competence, making investments in scientific knowledge, development of technical skills, being it representing the organization or team. / O controle de infecção hospitalar (IH) ao longo dos anos evoluiu e evidenciou-se como um fenômeno que não se restringe apenas ao meio hospitalar, mas, também, a todos os estabelecimentos da área de saúde, nos quais se desenvolvem ações consideradas de risco para o aparecimento das infecções. Para que o controle de IH seja realizado de forma sistemática, por todos os que participam direta ou indiretamente do processo, e atenda às necessidades de cada serviço, a existência de um Programa de Controle de IH (PCIH) tem o papel de organização desta sistemática, e pode funcionar como importante ferramenta da qualidade, pois permite o planejamento e a execução das ações de controle de IH. Avaliar o desempenho do Programa de Controle de Infecção Hospitalar nos hospitais no município de Teresina, com base nos indicadores validados nacionalmente.Trata-se de um estudo epidemiológico descritivo, avaliativo do tipo estudo de caso múltiplo, realizado em 10 hospitais que aceitaram participar formalmente deste estudo. As varáveis estudadas dizem respeito à Estrutura e Processo de trabalho. Com relação à estrutura foram avaliados o espaço físico, os recursos materiais, humanos e regulamentação. Quanto ao processo foram avaliadas as práticas operacionais que envolvem as atividades de vigilância epidemiológica, além de ensino e pesquisa. A coleta de dados foi realizada com formulário com questões fechadas, avaliação documental e entrevistas. A população do estudo foi constituída por enfermeiros membros das CCIHs de cada hospital. Na avaliação no grau de adequação de funcionamento das CCIHs dos hospitais estudados, foi estabelecido sistema de escores, classificando-os em muito adequado, adequado, inadequado e muito inadequado. Os resultados mostraram que dois hospitais se destacaram, onde um apresentou pontuação final muito adequado e o outro muito inadequado, sendo que este último não tem CCIH atuante. Observou-se que em relação à estrutura física e material seis CCIHs apresentaram aspectos muito adequados, duas inadequadas e um muito inadequado. Quanto aos recursos humanos, duas CCIHs com pontuação muito adequada por atender na íntegra a portaria, seis inadequadas e uma adequada. No tocante às práticas operacionais, o tipo II, apenas um hospital apresentou pontuação muito adequada (100%), enquanto três apresentaram percentuais entre 74 – 86,9%, sendo considerado nesse quesito como adequados. Quanto às práticas operacionais III que correspondem ao ensino e pesquisa, observa-se que apenas dois obtiveram pontuação muito adequados, dois também apresentaram pontuação adequado e os outros foram considerados como inadequados e muito inadequados. Portanto, os dados obtidos apontam a necessidade do interesse e apoio por parte dos gestores, da organização dos profissionais de saúde envolvidos em mudar o referencial em direção à competência profissional, fazendo investimentos em conhecimento cientifico, no desenvolvimento em habilidades técnicas, esteja ele representando a organização ou a equipe.

Submitted by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2013-01-07T15:58:08Z No. of bitstreams: 1 Dissertação Alessandra Orfanó.pdf: 10376056 bytes, checksum: 69183dcae9646089fc702958e90fc51d (MD5) / Made available in DSpace on 2013-01-07T15:58:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação Alessandra Orfanó.pdf: 10376056 bytes, checksum: 69183dcae9646089fc702958e90fc51d (MD5) / A malária é responsável por cerca de 350 a 500 milhões de casos clínicos anuais, permanecendo como um dos maiores problemas de saúde mundial. Estudos sobre a influência da microbiota intestinal do vetor no desenvolvimento do ciclo de vida dos parasitos vêm sendo desenvolvidos. Em mosquitos, as pesquisas vêm mostrando que infecções por bactérias do intestino podem inibir o desenvolvimento esporogônico dos parasitas da malária. No presente trabalho, o papel da microbiota intestinal do Aedes aegytpi infectado com Plasmodium gallinaceum foi avaliado. Os insetos foram submetidos a cinco diferentes antibióticos (canamicina, carbenicilina, espectinomicina, gentamicina e tetraciclina). Somente canamicina e carbenicilina tiveram efeito sob a infecção com o parasito. Para esses dois antibióticos e o controle, técnicas de cultivo bacteriano de isolamento e sequenciamento do DNA ribossomal 16S foram feitas. Asaia bogorensis, Asaia Krungthepensis, Asaia siamensis, Bacillus licheniformis e Chryseobacterium meningosepticum foram identificadas para o grupo controle. No grupo tratado com carbenicilina foram identificadas Chryseobacterium meningosepticum e uma bactéria da família Microbacteriaceae, e para o grupo com canamicina Microbacterium lacticum. Este trabalho sugere que a interação entre espécies de Asaia e C. meningosepticum são relevantes na resistência/suscetibilidade do A. aegypti ao P. gallinaceum. Para observar o efeito do tratamento com os dois antibióticos que mostraram efeito na infecção na expressão de peptídeos antimicrobianos, os níveis de gambicina e defensina foram medidos utilizando-se a técnica de Real-time PCR. Os níveis de defensina se mostraram super-expressos quando os mosquitos foram submetidos aos tratamentos com canamicina e carbenicilina, enquanto gambicina se mostrou super-expressa nos mosquitos tratados com canamicina e sub-expressa naqueles com carbenicilina. A expressão desses dois AMPs também foi medida quando esses grupos de insetos se alimentaram com sangue e com sangue infectado. Nossos resultados mostraram que a expressão de defensina e gambicina no grupo tratado com carbenicilina alimentado com sangue apresentou um aumento de 24h para 36h, e uma queda no grupo controle alimentado com sangue. Insetos tratados com canamicina infectados aumentaram a expressão de defensina 24h e 36h após a alimentação, diminuídas nos tratados com carbenicilina. É observada uma inibição do mRNA de gambicina no grupo carbenicilina infectado sugerindo assim que a ativação desse peptídeo não ocorre somente pelo parasita e necessita da ação da microbiota. Estes resultados indicam que as bactérias associadas ao intestino do A. aegypti tem um papel importante na infecção e resposta imune ao parasito. / Malaria is responsible for about 350 to 500 million clinical cases annually, remaining as one of the largest health problems worldwide. Studies on the influence of the vector gut microbiota in the life cycle of the parasites are being performed. In mosquitoes, studies have shown that infection with midgut microbiota may inhibit the sporogonic development of malaria parasites. Here, the role of intestinal microbiota of Aedes aegytpi infected with Plasmodium gallinaceum was assessed. The insects were subjected to five different antibiotics (kanamycin, carbenicillin, spectinomycin, gentamicin and tetracycline). Only kanamycin and carbenicillin had effect over the infection process. The response of treated groups and control was analyzed by: bacterial culture techniques of isolation and sequencing of 16S ribosomal DNA. Asaia bogorensis, Asaia krungthepensis, Asaia siamensis, Bacillus licheniformis and Chryseobacterium meningosepticum were identified for the control group. In the carbenicillin treated group Chryseobacterium meningosepticum and Microbacteriaceae family bacterium were identified. In the kanamycin treated group Lacticum microbacterium was found. This work suggests that the interaction between C. meningosepticum and Asaia species is relevant in the resistance/susceptibility balance in the A. aegypti/P. gallinaceum model. To observe the effect of treatment over the expression of antimicrobial peptides, gambicin and defensin levels were measured by Real-time PCR. Levels of defensin proved to be up-regulated when the mosquitoes were subjected to treatment with kanamycin and carbenicillin. Gambicin levels were be up-regulated in mosquitoes treated with kanamycin and down-regulated in those treated with carbenicillin. The expression of these two AMPs was also measured when these groups of insects were fed with blood and infected blood. Our results showed that the expression of defensin and gambicin in carbenicillin treated blood fed group increased between 24 to 36 hours, and decreased in the blood fed control group. Infected insects treated with kanamycin increased the expression of defensin between 24 to 36 hours after feeding, while it decreased in those treated with carbenicillin. An inhibition in the expression of gambicin in the infected group treated with carbenicillin was observed, suggesting that activation of these peptides does not occur only by the parasite, or microbial action, but by both. These results indicate that the microbiota associated with A. aegypti has an important role in infection and immune response to the parasite.

Made available in DSpace on 2014-09-09T12:30:34Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) 63.pdf: 4449689 bytes, checksum: 310b00c4ad34ad5d748ccf5005586e50 (MD5) Previous issue date: 2011 / Além dos quadros de difteria clássica, Corynebacterium diphtheriae tem sido isolado de diversos processos infecciosos invasivos. Escassos são os trabalhos que procuram investigar in vivo os fatores que influenciam o estabelecimento e/ou a disseminação de amostras potencialmente invasoras de C. diphtheriae. Além disso, na literatura encontramos a descrição de inúmeros casos de um patógeno otencialmente perigoso para a população o Corynebacterium ulcerans, que se apresenta como um desafio para os órgãos de Saúde Pública brasileiros que somente recentemente o incluíram na rotina dos esquemas de isolamento e identificação. O presente estudo teve como objetivos gerais investigar processos invasivos desencadeados por amostras de C. diphtheriae e C. ulcerans potencialmente invasivas utilizando modelos experimentais em animais. Além de realizar a pesquisa de C. ulcerans em populações de caninos mantidos em instituição destinada ao abrigo de animais domésticos localizada na região metropolitana do Rio de Janeiro. Neste sentido foram desenvolvidos os seguintes objetivos específicos: (i) Avaliação do potencial artritogênico de cepas de origens diversas de C. diphtheriae e C. ulcerans através do modelo de artrite em murinos; (ii) Monitoramento em diferentes intervalos de tempo de microrganismos viáveis no sangue, pulmões, rins, fígado, baço, cérebro coração e articulações; (iii) Determinação dos níveis séricos de citocinas IL-6 e TNF-α decorrentes do processo infeccioso. Os resultados indicaram o modelo experimental de artrite em camundongos convencionais Swiss Webster infectados por via i.v. como mais adequado para a análise do potencial invasor das amostras. As 13 amostras de C. diphtheriae e C. ulcerans estudadas apresentaram potencial artritogênico em intensidades variadas, independente da capacidade de produção de DNAse, toxina diftérica e fosfolipase D (PLD). Dentre as amostras testadas, as de C... / Corynebacterium diphtheriae has been isolated from several invasive infectious diseases besides diphtheria disease. Few reports attempt to explain in vivo the factors influencing the establishment and / or the spread of potentially invasive strains of C. diphtheriae. Moreover, a large number of cases of a potentially infectious pathogen, Corynebacterium ulcerans, have been described worldwide, which can be seen as a challenge for Brazilian public health agencies which only recently included the isolation and identification of this pathogen in routine microbiological analysis. Therefore, this study aims to investigate general processes caused by invasive strains of C. diphtheriae and C. ulcerans using experimental models in animals. An additional objective is to conduct a research on C. ulcerans in populations of dogs kept in domestic animal shelter located in the metropolitan region of Rio de Janeiro. Thus, we have proposed the following specific objectives: (i) assess the arthritogenic potential of various C. diphtheriae and C. ulcerans strains by arthritis model in mice, (ii) monitor, at different time intervals, the presence of viable microorganisms in the blood, lungs, kidneys, liver, spleen, brain, heart and joints, (iii) determine serum levels of IL-6 and TNF-α under infectious process. The results indicated that the model of experimental infection in conventional Swiss Webster mice infected by IV route is suitable for the analysis of potential invasive strains. The 13 strains of C. diphtheriae and C. ulcerans showed arthritogenic potential on different levels, regardless of ability to produce DNase, diphtheria toxin and phospholipase D (PLD). Among the samples tested, C. diphtheriae isolated from cases of endocarditis and C. ulcerans isolated from infectious processes in humans and animals showed the greatest arthritogenic potential (> 50%) compared with the samples of C. diphtheriae isolated from classic diphtheria cases and C. ulcerans isolated from asymptomatic dogs. Histopathologic analysis showed the presence of subcutaneous edema, inflammatory reaction, damage to bone and synovial hypertrophy, consistent with a condition of severe arthritis for the samples considered more arthritogenic. Viable bacteria were recovered from the blood, kidneys, liver, spleen and joints. Both species caused polyarthritis, with wrists and ankles more often affected. The samples of C. ulcerans CDC-KC279 and 809 beside polyarthritis, preduced ulcerated lesions at the affected joints and nodose in the tail with extensive necrosis at the inoculation site (tail vein). The correlation between the arthritis and systemic levels of IL-6 and TNF-α was observed for the strains of C. ulcerans, with the exception of strain BR-AD22 that was unable to produce arthritis. In conclusion, our study showed a potential arthritogenic strain-dependent in C. diphtheriae and C. ulcerans indicating differences in virulence and invasive potential of these species independent of the production ability of diphtheria toxin and PLD.