Made available in DSpace on 2014-06-11T19:28:25Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-12-18Bitstream added on 2014-06-13T18:48:18Z : No. of bitstreams: 1 sanchesjunior_cp_me_botfmvz.pdf: 521404 bytes, checksum: c19df2c844afe1ed0e76070de6937621 (MD5) / Objetivou-se com este estudo avaliar a utilização de dois dispositivos intravaginais de P4 (CIDR®, Zoetis) em vacas Holandesas em lactação sem CL e com P4 ≤1,0 ng/mL no início de um protocolo de sincronização da ovulação à base de E2/P4 para IATF (exp 1) ou TETF (exp 2) no sucesso da prenhez. Estes experimentos foram realizados em 9 fazendas, sendo 4 destinadas a IATF (n = 341) e 5, a TETF (n = 356). O protocolo utilizado nos experimentos foi: d-10 2mg IM BE (2,0mL de Estrogin, Farmavet, SP, Brasil) + CIDR (1,9g de P4, CIDR®, Zoetis, SP, Brasil); d-3 25mg IM Dinoprost Trometamina (5,0mL de Lutalyse®, Zoetis, SP, Brasil); d-2 remoção do CIDR + 1mg IM de Cipionato de Estradiol (0,5mL ECP®, Zoetis, SP, Brasil); d 0 IATF (exp1) ou d 7 TETF (exp 2). No d-10, os animais sem corpo lúteo à ultrassonografia (US) foram distribuídos aleatoriamente para receberem 1 CIDR (1CIDR) ou 2 CIDR (2CIDR). O diâmetro do folículo ovulatório [d0 (exp 1)] e presença de CL [d7 (exp 1 e 2)] foram avaliados por US. Amostras de sangue foram colhidas para dosagem de P4 nos dias -10, -3 e 7. Foram consideradas sincronizadas vacas com CL 7 dias após a IA (d7) ou com CL no momento da TE, consistente com a ovulação do folículo ovulatório; no exp 2, apenas vacas com CL (d7) que receberam embrião foram utilizadas. Diagnósticos de gestação foram realizados por US aos 32 e 60 d. Para avaliar as variáveis binomiais, foi utilizado o PROC GLIMMIX, e as contínuas, o PROC MIXED. Efeitos foram considerados significantes quando P ≤0,05 e tendência quando P >0,05 e P ≤0,10. Não houve efeito do tratamento na taxa de sincronização [1CIDR = 74,1% (329/451) vs. 2CIDR = 71,1% (298/423)]. A concentração de P4 no d-10 não diferiu entre os tratamentos (1CIDR = 0,59 ± 0,12 ng/mL vs. 2CIDR = 0,68 ± 0,12 ng/mL)... / The aim of this study was to evaluate the use of two progesterone (P4) intravaginal devices (CIDR ®, Zoetis) in lactating Holstein cows without CL with P4 ≤ 1.0 ng / mL at the start of a E2/P4 ovulation synchronization protocol for TAI (exp 1) or TET (exp 2) on pregnancy success. These experiments were conduced in 9 farms, 4 destined to TAI (n = 341) and 5 TET (n = 356). The protocol used in the experiments was: d-10 2 mg IM EB (2.0 mL Estrogin, Farmavet, SP, Brazil) + CIDR (1.9 g of P4, CIDR ®, Zoetis, SP, Brazil); d-3 25 mg dinoprost tromethamine IM (5.0 mL Lutalyse ®, Zoetis, SP, Brazil), d-2 CIDR removal + 1 mg estradiol cypionate IM (0.5 mL, ECP ®, Zoetis, SP, Brazil); TAI d0 (exp 1) or TET d7(exp 2). On d-10, animals without a corpus luteum detected by ultrasonography (US) were randomly divided into groups to receive 1 CIDR (1CIDR) or 2 CIDR (2CIDR). The ovulatory follicle diameter [d0 (exp 1)] and presence of CL [d7 (exp 1 and 2)] were evaluated by US. Blood samples were collected for P4 measurement on days -10, -3 and 7. Were considered synchronized cows when they had CL 7 days after AI (d7) or CL at the time of ET, consistent with ovulation of detected ovulatory follicle; In exp 2 only cows CL (d7) receiving embryo were used. Pregnancy diagnosis were performed using US on days 32 and 60. Was used to evaluate binomial variables PROC GLIMMIX and PROC MIXED for continuous. Effects were considered significant when P ≤ 0.05 and tendency when P> 0.05 and P ≤ 0.10. There was no effect of treatment on synchronization rate [1CIDR = 74.1% (329/451) vs. 2CIDR = 71.1% (298/423). P4 concentration on d-10 did not differ between treatments (1CIDR = 0.59 ± 0.12 ng/mL vs. 2CIDR = 0.68 ± 0.12 ng/mL). P4 concentration was higher for 2CIDR treatment (2.14 ± 0.31 ng / mL) compared to 1CIDR (1.71 ± 0.28 ng / mL) at d-3 (PGF moment)... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:47:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 142651 bytes, checksum: 3f0b67aa44d733223926c3e7c4aa8f20 (MD5) Previous issue date: 2007-04-27 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / This research was carried out into a commercial sows farm, located on Zona da Mata of state Minas Gerais, in order to evaluate the decreasing effect of the volume and the spermatic content between the traditional (ICAI) and the intrauterine insemination (IUAI) procedure, assess the introduction of the intrauterine insemination catheter, estimate the seminal backflow and the bleeding occurrence in the inseminated females by the both techniques. In a completely design, 300 females randomly distributed into 60 females in each one of the 5 treatments: T1 (control) intracervical with 3x109 spermatozoa/100 mL; T2 intrauterine with 1x109 spermatozoa/100 mL; T3 intrauterine with 1x109 spermatozoa/50 mL; T4 intrauterine with 5x108 spermatozoa/100 mL and T5 intrauterine with 5x108 spermatozoa/50 mL. The females inseminated by the IUAI technique showed the pregnancy general media rate of 95,0%, 90,8% farrowing rate and 9,2% return to the estrus. This results revealed none significant difference in comparison to the ICAI technique (91,7%, 90,0% and 10,0% respectively). The total litter size did not differ (p>0,05) between the IUAI and ICAI, and the average rates were 11,5, 11,7, 11,4, 11,9 and 11, 4 piglets in the treatments 1, 2, 3, 4 and 5 respectively. Although 4,6% of the achieved IUAI presented a subtle difficulty in the passage by cervix, the catheter was successfully inserted in 100% of females. There was no difference in the sperm backflow occurrence between the both methods. However, the ICAI demonstrated semen backflow rate of 85,8% of the injected volume, containing about 26% of the inseminated sperm content while in the IUAI the backflow diverge from 83,0% to 90,6% of the volume presenting 11,1% - 16,4% of the spermatozoa content. The percentual of the backflow volume did not show difference (p>0,05) between the treatments, on the other hand the spermatozoa content in the ICAI backflow collected was higher than in the IUAI. There was no difference (p>0,05) about the presence of blood in the both insemination procedure. Thus, these results indicate that the two treatments, applying a reduced volume and spermatozoa content, by the IUAI technique would be adopted in the commercial farm daily routine without compromising the female swine reproductive performance. / Este trabalho foi realizado em uma granja comercial localizada na Zona da Mata do Estado de Minas Gerais, com os objetivos de avaliar o efeito da diminuição do volume e concentração espermática inseminante na comparação do desempenho reprodutivo de matrizes suínas inseminadas pela técnica intra-uterina (IAIU) versus inseminação intracervical (IAIC); avaliar a possibilidade de passagem do cateter de inseminação intra-uterina; e, por fim, analisar o refluxo vulvar e a ocorrência de sangramento nos animais inseminados por essas técnicas. Foram utilizadas 300 fêmeas, 60 por tratamento, distribuídas aleatoriamente em cinco tratamentos: T1 (controle), em que os animais foram inseminados com três bilhões de espermatozóides por dose, em um volume de diluente q.s.p. para 100 mL; T2, inseminados com um bilhão de espermatozóides por dose, em um volume de diluente q.s.p. para 100 mL; T3, inseminados com um bilhão de espermatozóides por dose, em um volume de diluente q.s.p. para 50 mL; T4, inseminados com 500 milhões de espermatozóides por dose, em um volume de diluente q.s.p. para 100 mL; e T5, em que as matrizes foram inseminadas com 500 milhões de espermatozóides por dose, em um volume q.s.p. para 50 mL. As matrizes do tratamento 1 foram inseminadas pela técnica de IAIC, enquanto as dos tratamentos 2, 3, 4 e 5, pela técnica de IAIU. As fêmeas inseminadas pela técnica intra- uterina apresentaram taxa média geral de concepção de 95,0%, de parto de 90,8% e de repetição de estro de 9,2%, não apresentando diferença significativa em comparação com a IAIC, que obteve valores de 91,7%, 90,0% e 10,0%, nas taxas de concepção, parição e repetição de estro, respectivamente. Com relação ao resultado do total de leitões nascidos por parto, foram obtidas médias de 11,5; 11,7; 11,4; 11,9; e 11,4 leitões, nos tratamentos 1, 2, 3, 4 e 5, respectivamente. O total de leitões nascidos não foi diferente (p>0,05) entre os animais inseminados pela técnica IAIU, em comparação com a IAIC. Neste trabalho, a inseminação intra-uterina foi possível de ser realizada em 100% dos animais testados. Porém, 4,6% das inseminações realizadas por essa técnica apresentaram pequeno grau de dificuldade na passagem do cateter interno pela cérvix do animal. A avaliação da ocorrência de refluxo de sêmen nos animais inseminados pelas duas técnicas constituiu outro objetivo deste experimento e indicou não haver diferença significativa entre a inseminação intra-uterina e a tradicional. Com o emprego da inseminação artificial tradicional, as fêmeas inseminadas obtiveram um porcentual de refluxo de 85,8% do volume da dose infundida, contendo em torno de 26% do número de espermatozóides inseminados. Nos animais inseminados pela técnica intra-uterina, os resultados variaram de 83% a 90,6% do volume e de 11,1% a 16,4% dos espermatozóides infundidos. O porcentual de volume coletado no refluxo não apresentou diferença (p>0,05) entre os tratamentos estudados, no entanto o total de espermatozóides refluídos foi maior nas fêmeas submetidas à IAIC do que à IAIU. Por fim, na análise de ocorrência de sangramento não houve diferença significativa entre ambas as técnicas. Pelos resultados deste trabalho, é possível concluir que qualquer um dos tratamentos testados com a inseminação intra-uterina pode substituir a inseminação intracervical na rotina de uma granja comercial, sem comprometimento do desempenho reprodutivo dos animais.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:54:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 996495 bytes, checksum: d0704166d94adb1ce9c77dd01311d0e5 (MD5) Previous issue date: 2009-02-17 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The objective of this study was evaluate the effectiveness of the Mangalarga Marchador stallions semen diluted with glycine-yolk egg based extender or milk-based extender and cooled at 5 °C for 24 hours, assessed by in vitro tests and of fertility in vivo. In Experiment 1, were used 5 ejaculated of 3 stallions. Following semen collection, the experimental group was divided into two treatments: 1 - cooling and dilution of semen with the milk-based extender, 2 - cooling and dilution of semen with extender glycine-egg yolk based extender. Semen was packaged in samples containing 12 mL of diluted semen with 30 x 106 viable sperm / mL concentration and then stored in Equitainer® for 24 hours. The sperm quality was evaluated after its dilution and after its cooling. The following seminal characteristics were evaluated: progressive motility, spermatic vigor, sperm morphology, integrity of the plasma membrane integrity by supravital test and epifluorescent using the dyes carboxyfluorescein diacetate (CFDA) and propidium iodide (PI); plasma membrane functionality by hypoosmotic test and progressive motility and spermatic vigor during the spermatic thermo-resistance test (TTR) for 90 minutes. The vigor of semen diluted with Kenney was higher (p <0.05) than T2 in the assessment of fresh diluted semen. No statistical difference was observed in other seminal characteristics from the fresh diluted semen. In the cooled semen, the Kenney extender had a better motility and spermatic vigor after the 24 hours storage, but Foote extender had higher average values for reactive spermatozoa percentage to the hypoosmotic test and the viabity to the epifluorescent test (p<0,05). In Experiment 2, the objective was to evaluate the fertility of cooled semen with both extenders previously described. Seventeen semen samples of stallion 1 and twenty three samples of stallion 2 were collected. Following semen collection, the semen was diluted with two extenders used in Experiment 1, and adjusted to an insemination dose of 500 million viable sperm in a final volume of 15 mL per dose. Semen was packaged in Equitainer® and cooled down to 5° C and storage for at least 24 hours. The following seminal characteristics were evaluated: progressive motility and vigor of the diluted and cooled semen; the sperm morphology of fresh semen and cooled with both extenders. Thirty one estrous cycles of 26 mares were used in the first period and 43 cycles of 28 mares in the second period. After detection 30 mm follicle size, the mares were randomly assigned into two groups: group A (mares inseminated with semen cooled with Kenney extender) and group B (mares inseminated with semen cooled with dilutive Foote). The stallions semen were used randomly among mares. The inseminations were done after a period of at least 24 hours of storage at 5° C. Semen was deposited in the body uterus, after the detection of a 30-40 mm follicle detection throughout ovulation. The inseminations were performed only on fixed days (Tuesday, Thursday and Saturday). The pregnancy diagnosis was performed by transrectal ultrasonography. As results, Kenney extender had higher progressive motility and spermatic vigor maintance after cooling compared to T2 extender. The pregnancy rate was higher from treatment A than treatment B (p<0,05), 55,26% (21/38) and 30,56% (11/36), respectively. With this data, it is possible to conclude that: the integrity and functionality of sperm cell plasma membrane evaluation tests are considered ancillary assessments in predicting the reproductive potential of stallions, but are not yet conclusive. The glycine-egg yolk based extender was not effective in preserving the seminal characteristics, and its fertility rate was not acceptable. The milk based extender proposed by Kenney et al. (1975) is still an excellent option for use in programs of AI with cooled semen from Mangalarga Marchador breed. / Objetivou-se neste estudo avaliar a eficácia de dois diluidores um à base de licina-gema de ovo e outro à base de leite em pó resfriado a 5 °C por 24 horas na preservação do sêmen de garanhões da raça Mangalarga Marchador, determinada por meio de testes in vitro e avaliação da fertilidade in vivo. No experimento 1, foram utilizados cinco ejaculados de três garanhões da raça Mangalarga Marchador, que foram divididos em dois tratamentos: Kenney - diluição e resfriamento do sêmen com diluidor à base de leite (Kenney et al., 1975); Foote - diluição e resfriamento do sêmen com diluidor de glicina-gema de ovo (Foote, 2002). Amostras de 12 mL de sêmen foram diluídas numa concentração de 30 x 106 espermatozoides viáveis/mL e, depois, armazenadas em Equitainer® por 24 horas. A qualidade seminal foi avaliada após diluição e resfriamento do sêmen. Foram avaliadas as seguintes características seminais: motilidade progressiva; vigor espermático; morfologia espermática; integridade da membrana plasmática pelo teste supravital e da epifluorescência utilizando os corantes diacetato de carboxifluoresceína e iodeto de propídeo; funcionalidade da membrana plasmática pelo teste hiposmótico; e motilidade progressiva e vigor espermáticos durante o teste de termorresistência por 90 minutos. O vigor espermático do sêmen diluído com Kenney foi superior (P<0,05) ao do Foote na avaliação do sêmen fresco diluído. Não houve diferença estatística entre as demais características seminais avaliadas no sêmen fresco diluído. No sêmen resfriado, o Kenney propiciou a manutenção da motilidade e do vigor espermático após as 24 horas de armazenamento, porém o Foote apresentou maiores valores médios (P<0,05) para porcentagem de espermatozoides reativos ao teste hiposmótico e viáveis pelo teste de epifluorescência. Os valores médios da motilidade progressiva e do vigor espermático durante os testes de termorresistência do sêmen resfriado foram inferiores ao preconizado pelo CBRA (1998) aos 30 minutos com o diluidor de Foote e aos 60 minutos com o dilluidor Kenney. No experimento 2, avaliou-se a fertilidade do sêmen resfriado com ambos os diluidores. Foram realizadas 17 coletas do sêmen do garanhão 1 e 23 coletas do garanhão 2. Após as coletas, o sêmen foi diluído com os diluidores utilizados no experimento 1 e ajustado para uma dose inseminante de 500 milhões de espermatozoides viáveis num volume final de 15 mL por dose. O sêmen foi acondicionado no Equitainer®, resfriado até 5 oC e armazenado por no mínimo 24 horas. Foram avaliadas as seguintes características seminais: motilidade progressiva e vigor espermático do sêmen diluído e resfriado; e morfologia espermática do sêmen fresco e resfriado com ambos os diluidores. Foram utilizados 31 ciclos estrais de 26 éguas no primeiro período experimental e 43 ciclos de 28 éguas no segundo período experimental. Após a detecção de folículo de 30 mm, as éguas foram distribuídas ao acaso em dois grupos: grupo A (éguas inseminadas com sêmen resfriado com diluidor Kenney) e grupo B (éguas inseminadas com sêmen resfriado com diluidor Foote). O sêmen dos garanhões foi utilizado aleatoriamente entre as éguas. As inseminações foram realizadas depois de no mínimo 24 horas de armazenamento do sêmen. O sêmen foi depositado no corpo do útero, a partir da detecção de um folículo de 30-40 mm até a observação da ovulação. As inseminações foram feitas somente em dias predeterminados (terça-feira, quinta-feira e sábado) e o diagnóstico de gestação foi realizado por meio de ultrassonografia transretal. O diluidor de Kenney se mostrou superior ao Foote na manutenção da motilidade progressiva e do vigor espermático após o período de resfriamento. A taxa de gestação do grupo A, 55,26% (21/38), foi maior (P<0,05) que a do grupo B, 30,56% (11/36). Os testes de avaliação da integridade e funcionalidade da membrana plasmática da célula espermática auxiliam na predição do potencial fecundante do garanhão, porém ainda não são conclusivos. O diluidor seminal à base de glicina-gema de ovo (Foote, 2002) não é eficaz em preservar as características seminais e não possibilita obter índice de fertilidade aceitável. O diluidor proposto por Kenney et al. (1975) ainda é uma ótima opção para inseminação artificial com sêmen resfriado de garanhões da raça Mangalarga Marchador.

Made available in DSpace on 2016-07-01T13:10:25Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-06-22. Added 1 bitstream(s) on 2016-07-01T13:14:08Z : No. of bitstreams: 1 000866261.pdf: 2011639 bytes, checksum: de26a1680120fdc75d49c236f0f98bb9 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Com o objetivo de investigar os efeitos da administração de 2,5 mg de benzoato de estradiol (BE) seguido de 1500 mg de progesterona de longa ação (P4 LA) sobre a dinâmica molecular endometrial, características morfológicas do útero e concentrações plasmáticas de estrógeno e progesterona em éguas receptoras acíclicas, foram avaliados: a expressão proteica e as alterações na abundância relativa dos transcritos para os receptores de estrógeno (ER) e progesterona (PR) no endométrio por meio da RT-qPCR e imunohistoquímica; as características morfológicas do útero por ultrassonografia e palpação retal; e as concentrações plasmáticas do estrógeno e progesterona por meio de radioimunoensaio. A aplicação de 2,5 mg, 5 mg ou 10 mg de BE foram eficazes em causar edema uterino máximo 24 h após a administração. A dose de 2,5 mg de BE provocou picos de concentração de estradiol similares aos de éguas tratadas com 5 mg, 10 mg e aos de éguas cíclicas, sem elevar a concentração de estrógeno conjugado como observado com as outras doses de BE. Ainda, a concentração de P4 foi reduzida após a aplicação da P4 LA quando 10 mg de BE foram utilizados. A administração dos tratamentos hormonais alterou a abundância relativa dos transcritos para ERα, ERβ e PR de forma similar às alterações encontradas em éguas cíclicas quando o final do estro e início do diestro foram comparados. Em conclusão, o uso de 2,5 mg de BE seguido de 1500 mg de P4 LA provoca alterações similares na morfologia uterina, abundância relativa dos transcritos para ERα, ERβ e PR no endométrio, e de concentrações circulantes de estrógeno e progesterona às encontradas em éguas cíclicas / To investigate the effects of the administration of 2.5 mg of estradiol benzoate (EB) followed by 1500 mg of long acting progesterone (LA P4) on endometrial molecular dynamics, uterine morphological characteristics, as well as estrogen and progesterone plasma concentrations in non-cyclic recipient mares, we evaluated: protein expression and changes in relative abundance of transcripts for estrogen (ER) and progesterone receptors (PR) in the endometrium by RT-qPCR and immunohistochemistry; uterine morphological characteristics by ultrasonography and rectal palpation; and estrogen and progesterone plasma concentrations by radioimmunoassay. The administration of 2.5 mg, 5 mg or 10 mg of EB were effective at promoting maximum uterine edema 24 h after their injection. The dose of 2.5 mg of EB caused similar estradiol concentration peaks to those observed in mares treated with 5 mg or10 mg of EB and to those observed in cyclic mares, which was not followed by increased concentrations of estrogen conjugate as observed for the other doses. Moreover, P4 concentration was reduced 24 h after LA P4 administration when the dose of 10 mg of EB was injected. The administration of the hormonal protocols altered the relative abundance of transcripts for ERα, ERβ and PR in non-cyclic mares as observed in cyclic ones when late estrus and early diestrus were compared. In conclusion, the use of 2.5 mg of EB followed by 1500 mg of LA P4 causes similar uterine morphology changes, relative abundance of transcripts for ERα, ERβ and PR, and estrogen and progesterone circulating concentrations to those found in cyclic mares

Made available in DSpace on 2016-09-27T13:39:59Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-12-09. Added 1 bitstream(s) on 2016-09-27T13:45:08Z : No. of bitstreams: 1 000870620.pdf: 854848 bytes, checksum: 8c79744870f5da8cb69ae19583f3ce62 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / The process of embryonic and placental development is under high epigenetic control, with different epigenetic processes regulating the differentiation of pluripotent cells into specialized cells. An abnormal placental development is observed frequently in pregnancies produced by nuclear transfer, and is associated with incomplete epigenetic reprogramming of the donor cell and formed embryo. The objective of this study was to evaluate the expression of the imprinted genes TSSC4 e PHLDA2 in cotiledonary and intercotiledonary tissues, after 60 days of pregnancy, in placentas produced by Embryo Transfer (ET) In Vitro Fertilization (IVF) and Nuclear Transfer (NT) in cattle, and also to investigate the epigenetic control of this gene in the bovine placenta evaluating the epigenetic profile of cotiledonary tissues of the experimental groups (ET, IVF and NT). The TSSC4 gene expression was reduced by 30% in the cotyledons in the NT group, however PHLDA2 expression of the gene was elevated by 11-fold in NT compared to ET. ChIP analysis for histone H3 at the proximal promoter region of TSSC4 and PHLDA2 genes showed an increase to the permissive mark H3K4me2 and a reduction for the inhibitory mark H3K9me2 in the cotyledons of cloned placentae, in relation to placentae produced by ET, for both genes. Interestingly, the inhibitory mark H3K9me2 for TSSC4 gene was also significantly reduced in placentae produced by IVF, compared to ET control group. These results show that expression of the imprinted genes TSSC4 and PHLDA2 is affected in placenta of pregnancies produced by nuclear transfer. Further, changes in expression of gene PHLDA2 and histone modifications in TSSC4 gene cotyledons produced by IVF indicate that the in vitro culture can contribute to the observed changes in NT group.

Made available in DSpace on 2016-12-08T16:24:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 PGCA09MA035.pdf: 598667 bytes, checksum: ca72444a18cb4ea0606dce41b5264fb9 (MD5) Previous issue date: 2009-01-19 / O uso de sêmen congelado é um pré-requisito para maximizar o ganho genético oriundo da IA em ovinos. Muito embora a IA com sêmen fresco ou resfriado esteja consolidada, com sêmen congelado os resultados são inconsistentes. O uso de plasma seminal (PS) já foi demonstrado como eficaz na proteção e reversão de parte dos danos celulares causados pela criopreservação. Entretanto, o pequeno volume do ejaculado e o risco de transmissão de doenças espécie-específicas são limitações importantes nos ovinos. Uma alternativa a ser considerada é o uso de PS heterólogo, que pela escassez de informações disponíveis, justificam a execução deste estudo, cujos objetivos foram: (a) determinar a capacidade do PS eqüino (PSE) e bovino (PSB) em preservar a viabilidade do sêmen ovino descongelado, comparando-os com o PS ovino (PSO); (b) avaliar o perfil eletroforético das proteínas presentes no PSO, PSE e PSB, e adicionalmente; c) quantificar e comparar o nível de fragmentação do DNA de espermatozóides incubados ou não com PSO, PSE ou PSB. Para tanto, três experimentos foram conduzidos, sendo: Experimento 1: Sêmen descongelado diluído em meio sem PS (SPS) ou contendo 25% de PSO, PSE ou PSB, com exposição por um período de 5 min ou 6 h. Avaliou-se a motilidade, integridade de membrana plasmática e proporção de espermatozóides vivos. No Experimento 2 avaliou-se a concentração protéica total encontrada no PSO, PSE e PSB, bem como o perfil eletroforético das proteínas presentes, mediante SDS-PAGE. No Experimento 3 foi validada uma técnica para a avaliação da integridade do DNA espermático (Neutral Comet Assay - NCA), procedendo-se a avaliação de todos os tratamentos testados nos experimentos anteriores, além dos tratamentos: sêmen descongelado (SD), sêmen fresco (SF) e um controle positivo (CP). Adicionalmente foi avaliado o efeito da técnica de seleção espermática swim up sobre os achados de fragmentação de DNA pelo NCA. A análise estatística foi realizada com o pacote do SAS ou do Minitab, com nível de significância de 5%. Como resultados, observou-se que a exposição por 5 min. em PSO, PSE ou PSB teve efeito benéfico sobre os parâmetros de viabilidade avaliados. A incubação por 6 h reduziu (P<0,05) a motilidade espermática nos tratamentos PSE e PSO, em relação ao SPS e PSB. A integridade de membrana plasmática não foi afetada pelo tratamento. A concentração protéica total no PSO, PSE e PSB foi 16,8, 3,0 e 25,0 &#956;g/&#956;L, respectivamente. O PSO e PSB demonstraram padrões eletroforéticos semelhantes, enquanto o PSE apresentou um perfil distinto. A menor viii fragmentação de DNA com 1 h de incubação foi obtida com o grupo SF, não havendo diferença entre os demais grupos. Com 6 h de incubação, os grupos SPS (63%) e SD (70%) demonstraram maior fragmentação que o tratamento SF (50%), não havendo diferenças entre os tratamentos PSO (60%), PSE (52%) e PSB (55%). Não foi observado efeito da técnica de seleção swim up na fragmentação do DNA, avaliada pelo NCA. Conclui-se que o PS heterólogo pode ser utilizado em substituição ao PSO, mesmo apresentando perfil protéico distinto. Entretanto, a viabilidade espermática foi influenciada pelo tempo de incubação. Em adição, as modificações adotadas no método Neutral Comet Assay possibilitaram sua validação para o sêmen ovino. Por final, o sêmen ovino apresenta uma elevada taxa de fragmentação de DNA, que não difere entre os espermatozóides selecionados ou não pelo método swim up

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:14Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-04-27Bitstream added on 2014-06-13T18:39:02Z : No. of bitstreams: 1 pegorer_mf_dr_botfmvz.pdf: 296741 bytes, checksum: d776b68ccb17f14c0ec5cbc0dce7853d (MD5) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / Alguns estudos indicam que altos níveis de progesterona (P4) plasmática diminuem a pulsatilidade de LH e, conseqüentemente, o crescimento folicular. Isto pode diminuir a eficiência de protocolos para inseminação artificial em tempo fixo (IATF) que se baseiam na utilização de dispositivos intravaginais contendo P4. Objetiva-se com o presente trabalho avaliar a influência de diferentes concentrações de P4, associadas ou não à aplicação de eCG, nas taxas de ovulação e prenhez de novilhas da raça Nelore submetidas a protocolos para IATF. No experimento (exp.) 1, novilhas Nelore (n=15), cíclicas e pré-sincronizadas com tratamento hormonal, foram distribuídas aleatoriamente em quatro grupos experimentais. No dia da inserção do dispositivo intravaginal (D0) todos os animais receberam 2 mg de benzoato de estradiol (BE) e um dispositivo intravaginal contendo 0,558g de P4 (Triu B®, grupo 0,5G, n = 4) ou 1g de P4 (Cronipress®, grupo 1G, n = 4), ou 0,558g de P4 e PGF2α (150 μg d-cloprostenol, grupo 0,5G/PGF , n = 4) ou 1 g de P4 e PGF2α (grupo 1G/PGF, n = 3). Oito dias mais tarde (D8) administrou-se PGF2α em todos os animais e o dispositivo foi removido. Vinte e quatro horas após a remoção do dispositivo intravaginal, as novilhas foram tratadas com BE (1 mg, IM). Entre os dias D0 e D12 foram realizados, diariamente, exames ultrassonográficos dos ovários e mensurado o diâmetro folicular. Foram colhidas amostras de sangue para dosagem da P4 nos dias 0,1,2,4,8 e 10. No exp. 2, novilhas cíclicas da raça Nelore (n=292) foram tratadas com os mesmos protocolos do primeiro experimento. Entretanto, 30 a 36h após a aplicação do BE todos animais foram submetidos a IATF (D10). Em uma amostragem de novilhas de cada grupo os ovários foram examinados, por meio de ultrassonografia, nos dias 9 e 12, para determinar a taxa de ovulação após cada tratamento. No exp. 3, novilhas... / Previous reports indicate that high concentration of plasmatic progesterone (P4) decreases LH pulse frequency, and consequently follicular growth. This may reduce the efficiency of fixed-time artificial insemination (FTAI) protocols that utilize P4 in Bos indicus heifers. The objective of the present work was to evaluate the influence of different P4 concentrations associated or not with eCG in the ovulation and pregnancy rates of Nellore heifers submitted to hormonal protocols for FTAI. In experiment (exp.) 1, heifers (n=15) pre-synchronized with a hormonal treatment were randomly allocated in four experimental groups. At the time of intravaginal device insertion (D0) all animals received 2 mg of estradiol benzoate (EB) and an intravaginal progesterone-releasing device containing 0.558g of P4 (TRIU®, group 0.5G, n=4) or 1g of P4 (Cronipress®, group 1G, n = 4), or 0.558g of P4 and PGF2α (150 μg d-cloprostenol, group TRIU/PGF, n = 4), or 1g of P4 and PGF2α (group 1G/PGF, n = 3). Eight days later (D8), PGF2α (150 μg d-cloprostenol) was administered to all heifers, the P4 source was removed. Twenty four hours after removing the intravaginal device, the heifers were treated with EB (1 mg, i.m.). Ovarian ultrasonographic examinations were performed daily, from the day D0 to D12 to measure follicles diameter. Blood samples were collected during the days 0, 1, 2, 4, 8 and 10 to evaluate plasma P4 concentration. In exp. 2, cyclic Nellore heifers (n=292) were treated with the same protocols as in the exp. 1. However, 30 to 36 h later all animals were fixed-time inseminated on D10. In exp. 3, heifers (n=459) received the treatments described to groups 0.5G/PGF and 1G/PGF associated with 300 IU of eCG (i.m., groups 0.5G/PGF/eCG and 1G/PGF/eCG) at the time of intravaginal device removal (D8). In a subset of heifers from each group blood samples were collected on D8 and ovarian ultrasonography... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:14Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-07-22Bitstream added on 2014-06-13T20:59:31Z : No. of bitstreams: 1 000755551.pdf: 414659 bytes, checksum: da80b05f755988e6a99a65d40c8a90bb (MD5) / A inseminação artificial com sêmen refrigerado é uma biotecnia imprescindível para os programas reprodutivos de equinos. Entretanto, durante a refrigeração o espermatozoide pode sofrer danos irreversíveis que irão prejudicar os índices de fertilidade. A incorporação de colesterol ligado a ciclodextrina (CLC) é uma estratégia de aumentar a resistência espermática em baixas temperaturas. No entanto, estudos anteriores tem sugerido que o colesterol presente em altos níveis na membrana plasmática pode interferir no processo de capacitação e consequentemente de fertilização. Para isso, foi realizado um trabalho dividido em cinco experimentos. No experimento 1 o objetivo foi determinar a concentração mais adequada de CLC para a utilização na refrigeração de espermatozoides equinos. No experimento 2 o objetivo foi comparar as temperaturas de 15º C e 5º C para refrigeração de espermatozoides equinos tratados com CLC. No experimento 3 o objetivo foi verificar a influência da adição de CLC sobre a qualidade do sêmen refrigerado de garanhões bad cooler e good cooler. No experimento 4 o objetivo foi avaliar a influência da adição de CLC sobre a ocorrência de reação acrossomal. O objetivo do experimento 5 foi avaliar a fertilidade de espermatozoides refrigerados de garanhões bad cooler (BC) e good cooler (GC) tratados com CLC. No experimento 1 foram utilizados dois ejaculados de 24 garanhões. Após a diluição com Botu-Sêmen® na concentração de 50 x 106 espermatozoides/mL, cada ejaculado foi dividido em quatro grupos: controle (C) e tratado com 1 mg (CLC-1), 1,5 mg (CLC-1,5) e 2 mg (CLC-2) de CLC/120 x 106 de espermatozoides e refrigerado por 48 horas a 5º C. Para o experimento 2 foram utilizados dois ejaculados de 12 garanhões. Cada ejaculado foi diluído conforme o experimento 1, dividido em quatro grupos: C e CLC-1,5 refrigerados a 15º C e a 5 º C por 24 horas. Para o experimento 3 foram utilizados... / Artificial insemination with cooled semen is an invaluable biotechnique for equine reproductive programs. However, the cooling process may cause irreversible damage to spermatozoa, thus reducing fertility rates. The incorporation of cholesterol-loaded cyclodextrin (CLC) to the plasmatic membrane is an strategy to increase sperm resistance to low temperatures. However, previous studies have suggested that high levels of cholesterol may interfere with capacitation process and, consequently, with fertilization. To this end, a study was performed in five experiments. In experiment 1, the aim was to determine the best CLC concentration for the purpose of cooling equine spermatozoa. In experiment 2, the aim was to compare the temperatures of 15 ºC and 5 ºC for cooling equine semen treated with CLC. In experiment 3, the aim was to assess the influence of CLC addition for cooled semen quality of bad cooler (BC) and good cooler (GC) stallions. In experiment 4, the aim was to evaluate the influence of CLC addition for the occurrence of acrosome reaction. The aim of experiment 5 was to evaluate the fertility of cooled CCL-treated semen from BC and GC stallions. In experiment 1, two ejaculates from 24 stallions were used. After dilution with Botu-Sêmen® to a concentration of 50 x 106 cells/mL, each ejaculate was divided into four groups: control (C) and treated with 1 mg (CLC-1), 1.5 mg (CLC-1.5) and 2 mg (CLC-2) and 2 mg (CLC-2) of CLC/120 x 106 cells, and cooled for 48 hours at 5 ºC. For experiment 2, two ejaculates from 12 stallions were used. Each ejaculated, after dilution according to experiment 1, was divided into 4 groups: C and CLC-1.5 cooled at 15 ºC and 5 ºC for 24 hours. For experiment 3, two ejaculates from nine GC and nine BC stallions were used. The ejaculates were diluted according to the previous experiments and divided into two groups: C and CLC-1.5 cooled at 5 ºC for 48 hours. In experiments 1, 2 and 3, sperm ...

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:15Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-07-13Bitstream added on 2014-06-13T20:38:41Z : No. of bitstreams: 1 ranieri_al_me_jabo.pdf: 416692 bytes, checksum: 8c5b1d1a825427d9d4b8b9ab52602486 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito do meloxicam sobre a taxa de concepção inicial (TCi), final (TCf) e perda gestacional (PG) de vacas Holandesas de alta produção submetidas à Transferência de Embrião (TE) Inseminação Artificial (IA) e Inseminação Artificial em Tempo Fixo (IATF). Na TE foram utilizadas, como receptoras de embrião, 492 vacas em lactação repetidoras de serviço. Na IA (n=312) e IATF (n=336) foram incluidas no estudo somente fêmeas recém paridas (com pelo menos 60 dias em lactação). Todas as fêmeas foram avaliadas e alocadas em um de dois grupos experimentais: Grupo Controle (GC) e Grupo Tratado (GT). O tratamento consistiu na administração i.m. de meloxicam injetável 2% (0,5mg/kg de peso) nos dias 7, 8 e 9 após a inovulação das receptoras de embrião, e nos dias 14, 15 e 16 da possível gestação das fêmeas submetidas a IA e IATF. Amostras de sangue foram colhidas nos D14 e D21 para posterior dosagem de progesterona (P4). O diagnóstico de gestação ocorreu aos 25-38 e 39-52 dias. O tratamento com o antiinflamatório não incrementou as TCi, TCf e tampouco diminuiu a PG em nenhuma das três biotecnologias. Contudo, observou-se que receptoras de embrião inovuladas com embriões congelados/descongelados do GT tiveram TCi e TCf menores que as do GC (GT= 25,8% v. GC=37,8%) .Não houve diferença na concentração sérica de progesterona de vacas do GC e do GT no D21. Contudo, houve efeito da estação do ano sobre as concentrações de P4 no D14 e D21 tanto na TE como na IA e IATF. Ainda, vacas gestantes apresentaram maiores concentrações de P4 que vacas não gestantes no D21. Conclui-se que o tratamento com meloxicam não incrementou as TCi, TCf, tampouco reduziu a PG de vacas Holandesas de alta produção / The aim of this study was to evaluate the effect of meloxicam on initial conception rate, final conception rate and pregnancy loss of high-producing Holstein cows submitted to embryo transfer (ET), artificial insemination (AI) and timed artificial insemination (TAI). On ET, 492 repeat breeders in milk were used as recipients. On AI (n=312) and TAI (n=336) only freshly calved cows (with at least 60 days in milk) were included in the study. The animals were evaluated and allocated in one of two experimental groups: Control Group (CG) and Treated Group (TG). The treatment consisted on administration of meloxicam 2% i.m. (0.5mg/kg of weight) on days 7, 8 and 9 after inovulation of embryo recipients, and on days 14, 15 and 16 of the possible pregnancy of females submmited to AI and TAI. Blood samples were collected on D14 and D21 for progesterone assay. The diagnosis of pregnancy was done on days 25-38 and 39-52. The treatment with the antiinflamatory did not increase initial conception rates and final conception rates, nor decreased pregnancy loss of animals in all three biotechnologies. However, recipients of TG inovulated with frozen/thawed embryos had lesser initial and final conception rates than CG (TG= 25.8% v. CG=37.8%) There was no difference on progesterone serum concentration of cows from TG and CG on D21. However, there was a season effect on P4 concentrations on D14 and 21 for ET, AI and TAI. Pregnant cows had higher P4 concentrations than non-pregnant cows. In conclusion, the treatment with meloxicam did not increase initial and final conception rates, neither decreased pregnancy loss of high producing Holstein cows

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:15Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-01-24Bitstream added on 2014-06-13T20:59:33Z : No. of bitstreams: 1 reghini_mfs_me_botfmvz.pdf: 448724 bytes, checksum: aab02e07ff9da14fae416999c62b6198 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A endometrite persistente pós-cobertura (EPPC) é uma das principais causas da redução de fertilidade em éguas. Recentes estudos têm demonstrado a importância da imunomodulação da inflamação após a cobertura. O objetivo deste trabalho foi verificar o estímulo do sêmen na resposta inflamatória uterina de éguas resistentes e susceptíveis à endometrite após a inseminação artificial (IA) e propor um novo tratamento a fim de debelar a resposta inflamatória uterina exacerbada, com o uso do plasma rico em plaquetas (PRP), que vem sendo muito utilizado devido à sua ação anti-inflamatória. Foram selecionadas 15 éguas resistentes e 8 susceptíveis à EPPC com base nos seus índices reprodutivos e exames ultrassonográficos e citológicos. A concentração de neutrófilos e de óxido nítrico (ON) no fluido uterino, a citologia exfoliativa uterina e o acúmulo de fluido uterino verificado no exame ultrassonográfico foram analisados nos dois grupos de animais (1) 24 horas antes da IA e (2) 24 horas após a IA com sêmen fresco. No primeiro experimento não houve intervenção medicamentosa, e no segundo as éguas foram tratadas com 20 mL de PRP infundido no útero 4 horas após a IA. As dosagens de ON foram realizadas por reação colorimétrica de Griess em espectrofotômetro, os neutrófilos na secreção uterina foram quantificados com o uso da câmara de Neubauer e a leitura das amostras de citologia foi feita por microscopia óptica utilizando imersão, considerando a porcentagem de neutrófilos/100 células de forma aleatória. Os resultados demonstraram que o sêmen estimula uma resposta inflamatória exacerbada no ambiente uterino das éguas susceptíveis, e que o tratamento local com PRP foi clinicamente efetivo na redução da inflamação uterina nas éguas susceptíveis à endometrite após a IA, observado por meio da redução... / Post breeding endometritis (PBE) is one of the major causes of fertility reduction in mares. Recent reports have been demonstrating the importance of immunomodulation of inflammation after mating. The aim of this study was to verify semen’s stimulus on inflammatory response in mares resistant and susceptible to PBE, and to propose a new treatment to quell the exacerbated uterine inflammatory response against semen, using platelet rich plasma (PRP), which has been widely used due to its anti-inflammatory properties. 15 mares susceptible to PBE and 8 mares resistant to PBE were selected based on their reproductive index, ultrasonographic and cytological examination. The concentration of neutrophils and nitric oxide (NO) in the uterine fluid, exfoliative cytology of the uterus and uterine fluid accumulation observed by ultrasonography were analyzed in both group of animals (1) 24 hours before artificial insemination (AI) and (2) 24 hours after AI with fresh semen. In the first cycle, there was no drug intervention, and in the second cycle mares were treated with 20 mL of platelet rich plasma, infused in uterus 4 hours after AI. NO dosage were performed by colorimetric reaction of Griess with spectrophotometer, neutrophils in uterine fluid were quantified by the use of Neubauer chamber and the lecture of endometrial cytology samples were analyzed by optical microscopy using immersion, considering the percentage of neutrophils/100 cells in an alleatory form. The results showed that semen can stimulate a major inflammatory response inside the uterine environment in susceptible mares, and that the local treatment with PRP was clinically effective in reduction of inflammation on mares susceptible to PBE, by the reduction of uterine fluid examined by ultrasonography, decrease in percentual of... (Complete abstract click electronic access below)