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Impact of body condition on plasma leptin and insulin-like growth factor-I concentrations in stallions and geldingsChancellor, Tommy Neal 15 May 2009 (has links)
The objective of this study was to more clearly define the relationship between
body condition, plasma leptin and insulin-like growth factor-I (IGF-I) in stallions and
geldings in moderate (5.0-5.5) versus fleshy (7.0-7.5) body condition. Data analyses of
physical measurements showed that there was a difference for BCS (P<0.001) even
though the fat group only achieved a mean BCS of 6.3 + 0.2 as compared with a mean
BCS of 5.3 + 0.1 for the moderate group. Differences also existed for rump fat (P<0.05)
and percent body fat (P<0.05) between BCS groups. Analysis of physical measurements
revealed that there was no sex effect as geldings and stallions within each group were not
significantly different. Analysis of plasma leptin concurred with previous reports as a
difference (P<0.001) existed between the BCS groups. Mean leptin concentrations were
2.13 + 0.1 ng/ml for the fat group and 1.44 + 0.1 ng/ml for the moderate group. After
normalization of the data, changes in leptin concentrations still revealed a significant
difference (P<0.05) between BCS groups, yet no difference in leptin concentrations
between stallions and geldings was seen. Dexamethasone (DEX) treatment on d 0 caused
a subsequent 24 h rise in plasma leptin in both groups. Analysis of plasma IGF-I
revealed no difference in IGF-I concentrations between BCS groups. Mean plasma IGF-I
was 347.2 + 11.4 ng/ml for the fat group and 344.3 + 10.0 ng/ml for the moderate group. There was however a difference (P<0.05) between geldings and stallions. Geldings
exhibited an overall mean plasma IGF-I concentration of 360.6 + 9.1 ng/ml with stallions
exhibiting a mean IGF-I concentration of 329.1 + 12.1 ng/ml. The post DEX challenge
rise seen with leptin was not evident when analyzing the change in plasma IGF-I
concentrations. In conclusion, the data presented herein have provided a more accurate
profile of circulating concentrations of leptin and IGF-I in stallions and geldings of
moderate and fleshy body condition.
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Efeitos da melatonina nos níveis de IGF-I e esteroides sexuais e no sistema reprodutor (ovários e útero) de ratas adultas / Effects of melatonin on the IGF-I and sexual steroids levels and reproductive system (ovaries and uterus) of adult ratsDair, Elisabete Lilian [UNIFESP] January 2007 (has links) (PDF)
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Previous issue date: 2007 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A pineal é aceita como reguladora da reprodução em mamíferos, por sua
capacidade de interagir com as gonadotrofinas e influenciar as gônadas e promover
a ciclicidade estral em algumas espécies. Contudo, sua função em espécies não
foto-periódicas (camundongo, rato, macaco e ser humano) ainda não está
totalmente esclarecida. Por este motivo, propusemo-nos a avaliar a histomorfologia
e a histomorfometria do sistema reprodutor (ovários e útero), bem como os níveis
plasmáticos de IGF-I e dos esteróides sexuais em ratas pinealectomizadas ou
mantidas sob estímulo luminoso contínuo e após o tratamento com melatonina.
Foram utilizadas ratas albinas, adultas, virgens, pesando aproximadamente
250g, da linhagem EPM - 1 Wistar. As ratas foram divididas, aleatoriamente, em seis
grupos, a saber: GI – controle, tratado com veículo (n=20); GII – falsamente
pinealectomizado, sham, tratado com veículo (n=20); GIII – pinealectomizado e
tratado com veículo (n=20); GIV - pinealectomizado e tratado com melatonina
(n=20); GV - submetido à luz contínua e tratado com veículo (n= 20); GVI –
submetido à luz contínua e tratado com melatonina (n=20). O tratamento com
melatonina (GIV e GVI) foi realizado por 90 dias consecutivos. Na noite anterior ao
término do estudo, os animais foram colocados em gaiolas metabólicas, coletandose
a urina noturna. Posteriormente, o sangue foi retirado pelo plexo ocular nos
animais para determinação hormonal. Em seguida, as ratas foram sacrificadas e os
ovários e o útero foram removidos para análise histomorfológica e histomorfométrica.
Observou-se que a redução dos níveis séricos da melatonina (pela
pinealectomia ou luz contínua, grupos III e V, respectivamente) determinou elevação
sérica de estrogênio e redução significante de progesterona e IGF-I. Já a reposição
com melatonina, reverteu este estado nos animais pinealectomizados, mas não nos
animais sob luz contínua (grupo VI). Houve diminuição dos níveis androgênicos nos animais que receberam melatonina (grupos IV e VI) em relação os animais com
baixos níveis de melatonina (grupos III e V).
A diminuição sérica de melatonina (grupos III e V) determinou a proliferação
do endométrio. Este efeito não foi totalmente bloqueado nos animais submetidos à
luz contínua ou à pinealectomia e que foram tratados com melatonina. A diminuição
dos níveis de melatonina determina alterações histomorfológicas e
histomorfométricas nos ovários, sendo que a reposição de melatonina restaura
essas modificações nos folículos ovarianos, bem como no epitélio e no estroma
(células intersticiais). Contudo, o efeito desse hormônio tem menor impacto no
epitélio superficial do ovário dos animais sob luz contínua.
Nossos dados sugerem que a melatonina interfere com a produção hormonal e
o sistema reprodutor, mas não é efetiva em animais sob luz contínua; possivelmente
outros mecanismos que possam estar envolvidos sejam independentes da pineal. / The pineal gland is accepted as the reproduction modulator in mammals but
its function in non-photoperiodic species (mouse, rat and primate) is still not
thoroughly clear considering the endocrine interactions are fairly complex. For this
reason, we have proposed to evaluate the histomorphology of the reproductive
system (ovary and uterus) as well as the plasmatic levels of IGF-I and the sexual
steroids in pinealectomized female rats or kept under continuous luminous stimulus
and after the treatment using melatonin.
The albino virgo female rats weighed approximately 250g from the EPM
lineage – 1 Wistar were randomly divided into six groups: GI – control treated with
vehicle (n=20); GII – falsely pinealectomized, sham, and treated with vehicle (n=20);
GIII – pinealectomized and treated with vehicle (n=20); GIV – pinealectomized and
treated with melatonin (n=20); GV – submitted to continuous light and treated with
vehicle (n=20); GVI – submitted to continuous light and treated with melatonin
(n=20). The treatment using melatonin for these groups lasted 90 consecutive days.
The night before the end of the study, the animals were put in metabolic cages to
collect urine. Later, the blood was taken through the ocular plexus for the hormonal
determination. Then, both the ovary and the uterus of the female rats were removed
for a histomorphological and histomorphometric analyses.
The reduction of the serum levels of melatonin (pinealectomy or continuous
light) as followed by an increase in estrogen levels and a significant reduction in
progesterone and IGF-I blood levels. Differently, the replacement with melatonin
reverted this condition in the pinealectomized animals but this did not happen with
the animals exposed to continuous light. There was a reduction in the androgenic
levels when compared to animals with low levels of melatonin. The reduction in serum melatonin is related to the endometrial proliferation.
This effect is not totally blocked in animals submitted to continuous light or
pinealectomy, which were treated with melatonin. Also, the decrase in the melatonin
levels determined histomorphologic changes in the ovaries and the melatonin
replacement restored these alterations in the ovarian follicle as well as in the
epithelium and in the ovarian stroma (interstitial cells). Nevertheless, the effect of this
hormone has a smaller impact in the ovarian superficial epithelium in animals under
continuous light.
Our data suggest that melatonin interferes with the hormone production and
the reproductive system, but this is not the case in animals under continuous light; it
is possible that other mechanisms, which may be involved are regardless of the
pineal. / BV UNIFESP: Teses e dissertações
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Modelos experimentais para a análise da proteína AKT/PKB em tecidos de hiperplasia prostática benigna tratados e não tratados com insulina e IGF-IMartiny, Patrícia Borba January 2012 (has links)
Introdução. A Hiperplasia Prostática Benigna (HPB) é uma condição prevalente na senescência masculina, caracterizada pelo aumento não maligno das células do tecido epitelial e principalmente estromal da próstata. Já foi demonstrado que a ligação dos androgênios ao seu receptor (AR) tem papel vital para o desenvolvimento prostático, mantendo não só a função tecidual, mas também sua possível contribuição para a patogênese de doenças prostáticas. Alguns estudos têm sugerido que o aumento dos hormônios IGF e Insulina circulantes podem afetar direta ou indiretamente a sinalização molecular promovendo o crescimento prostático. Uma proteína importante, componente da via de sinalização dos receptores de Insulina e IGF, é a Akt/PKB. Esta proteína está relacionada com a regulação do metabolismo, apoptose e a proliferação celular. Entretanto, os eventos moleculares que levam a interação dos receptores Insulina e IGF com o Receptor de Androgênios (AR) ainda foram bem estabelecidos. Objetivos. O objetivo deste trabalho foi estabelecer uma técnica de estimulação pela insulina e IGF-I em tecido prostático e em células provenientes de pacientes com HPB, avaliar a fosforilação da Akt/PKB, e a fosforilação do AR. Materiais e Métodos. Participaram deste estudo 15 pacientes com HPB oriundos do Hospital de Clínicas de Porto Alegre para análise das proteínas Akt/PKB e AR. A análise proteica foi realizada a partir da técnica de western blot. Os protocolos de estudo e os termos de consentimentos foram aprovados pelo comitê de ética local e nacional. Resultados. Foram realizadas duas técnicas de estimulação, uma com insulina em fatias de tecido de HPB e outra com insulina e IGF-I em suspensão celular de HPB. Ocorreu um aumento na fosforilação da proteína Akt/PKB nas células de HPB estimuladas com insulina (P=0,0113) quando comparadas com a condição controle pelo tempo de 10 minutos. Foi visto um aumento na porcentagem da fosforilação do AR quando as células foram estimuladas com insulina. Conclusão. É possível avaliar a via de ativação da Akt/PKB em um modelo de células prostáticas derivadas de Hiperplasia Prostática Benigna sob estímulo da Insulina por 10 minutos. Neste modelo, também é possível avaliar a fosforilação do Receptor de Androgênios. A padronização da técnica de estimulação in vitro poderá ser útil para novas pesquisas. Estes achados podem vir a elucidar um possível mecanismo intracelular de interação entre a transdução do sinal de Insulina e IGF-I e a fosforilação do Receptor de Androgênios, e assim, possivelmente contribuir para o entendimento da proliferação celular na HPB. / Benign prostatic hyperplasia (BPH) is a prevalent disease characterized by high levels of prostate cell proliferation. The interaction of androgen hormone with its receptor (AR) has a central role in the development of prostate growth, maintaining the tissue function as the pathogenesis of the prostate disease. Increased levels of circulating insulin and IGF can directly and/or indirectly affect different signaling pathways and promote prostatic growth. The protein AKT/PKB, member of the insulin/IGF pathway, participates in metabolism, apoptosis and cell proliferation regulation. The molecular events related to the interaction of IGF-I and insulin receptor in BPH have not been defined yet. The aim of this study were to establish an in vitro protocol with insulin or IGF-I stimulation in prostatic tissue from BPH and to evaluate both Akt and AR phosphorylation. Samples were obtained from 15 BPH patients and the Akt and AR proteins were analyzed by western blot. Slices of prostatic tissues from BPH patients were stimulated with insulin. Fragmented and dissociated prostatic tissues were stimulated with insulin or IGF-I.BPH cells stimulated with insulin for 10 minutes showed higher percentage of AR and Akt phosphorylation in relation to control (P= 0.0113). These findings may suggest that insulin and IGF-I signaling pathways may contribute to distinct signals to common downstream components in response to both insulin and IGF-I for BPH development. Our study has established insulin or IGF-I stimulation of BPH cells and can contribute to elucidate a possible intracellular interaction mechanism of AR phosphorylation.
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Ações da insulina e do IGF-I sobre marcadores de ação hormonal em células de Sertoli de ratos em diferentes estágios de desenvolvimentoEscott, Gustavo Monteiro January 2012 (has links)
A insulina e o IGF-I são hormônios que possuem alta homologia, isto é, apresentam grande semelhança estrutural no que se refere a sequencia de aminoácidos. Assim como os hormônios, seus receptores de membrana também são semelhantes, e a similaridade de suas sequencias de aminoácidos é em torno de 50%. Essas semelhanças permitem que ambos os hormônios se liguem aos seus receptores com alta afinidade e ao receptor do outro hormônio com menor afinidade. Tanto insulina como IGF-I desencadeiam uma série de efeitos sobre as células de Sertoli, como transporte de glicose e produção de lactato. Dessa forma, este estudo tem por objetivo investigar a ação do IGF-I e da insulina sobre a captação de cálcio, o transporte de aminoácido e glicose, além de suas ações eletrofisiológicas em células de Sertoli de ratos de 12 a 15 dias e de 30 dias de idade. Para o registro do potencial de membrana foram utilizados túbulos seminíferos isolados de testículos de ratos Wistar machos de 12 a 15 dias de idade e de 30 dias de idade. O registro intracelular da célula de Sertoli foi realizado utilizando microcapilares de borossilicato preenchidos com KCl 3 M acoplados a um eletrômetro. Foi realizada a aplicação tópica de IGF-I (100 ng/ml) e insulina (100 μM) isoladamente e também após a perfusão com a verapamil (100 μM) e JB1 (1 μg/ml). A captação de 45Ca2+ foi investigada se utilizando testículos inteiros. Os tecidos foram pré-incubados em KRb com 45Ca2+ por 60 minutos para equilibrar o meio intra e extracelular de 45Ca2+. Em seguida, as gônadas foram incubadas por 2 minutos em KRb com 45Ca2+ com ou sem IGF-I ou insulina. O transporte de [14C]MeAIB e [14C]2-DG também foram investigados se utilizando de testículos inteiros. Com pré-incubação de 30 minutos em KRb sem [14C]MeAIB ou [14C]2-DG, e posterior incubação de 45 minutos com [14C]MeAIB ou de 120 minutos com [14C]2-DG, com ou sem o respectivo hormônio a ser investigado. Os resultados foram dados como média ± SEM. Os dados foram analisados pelo teste T student para comparação entre dois grupos ou ANOVA para medidas repetidas com o pós-teste de Bonferroni. IGF-I e insulina produziram um efeito despolarizante sobre o potencial de membrana das células de Sertoli de ratos imaturos. Este efeito é dependente do influxo de cálcio, uma vez que a perfusão com verapamil bloqueou a ação dos dois hormônios. A reposta despolarizante do IGF-I foi bloqueada pelo JB1, enquanto que a resposta à insulina foi parcialmente bloqueada. Em ratos de 30 dias, apenas a insulina apresentou uma despolarização significativa. IGF-I e insulina também estimularam a captação de cálcio, aminoácido e glicose. A ação da insulina sobre o transporte de cálcio foi totalmente bloqueada pelo JB1 enquanto que do IGF-I foi apenas parcialmente bloqueado. Já sobre o transporte de aminoácido, o JB1 não exerceu qualquer efeito sobre a ação da insulina, enquanto que o efeito do IGF-I foi parcialmente bloqueado. E a estimulação do transporte de glicose pelo IGF-I não foi bloqueada pelo JB1, e a da insulina parcialmente bloqueada. Esses dados mostram que IGF-I e insulina, em diferentes parâmetros, se utilizam não apenas de seus receptores cognatos, mas também de outros receptores de membrana. Dessa forma, ficou claro que a sinalização gerada por esses hormônios nas células de Sertoli depende da presença dos receptores de ambos os hormônios na membrana celular para que eles sejam capazes de interferir nos processos metabólicos e funcionais dessas células. / Insulin and IGF-I are hormones which have high homology. In other words, they have high structural similarity with regard to the sequence of amino acids. As well as the hormones, their membrane receptors are also similar, and the similarity of their amino acid sequences is around 50%. These similarities allow both hormones bind to their receptors with high affinity and to each other's receptor with lower affinity. Both insulin and IGF-I trigger a number of effects on the Sertoli cells, such as transporting glucose and lactate production. Thus, this study aims to investigate the action of IGF-I and insulin on calcium uptake, transport of amino acids and glucose, as well as their electrophysiological actions in Sertoli cells from 12- to 15- and 30-days-old rats. To record the membrane potential were used isolated seminiferous tubules from 12- to 15- and 30-days-old rats. The intracellular recording of Sertoli cells was performed using microcapillaries filled with 3 M KCl coupled to an electrometer. Was performed topical application of IGF-I (100 ng/ml) and insulin (100 mM) alone and also after infusion with verapamil (100 mM) and JB1 (1 μg/ml). The uptake of 45Ca2+ was investigated using whole testes. Tissues were pre-incubated in KRb with 45Ca2+ for 60 minutes to equilibrate intra and extracellular medium. Then, the gonads were incubated for 2 minutes in KRb with 45Ca2+ and with or without IGF-I or insulin. The transport of [14C]MeAIB and [14C]2-DG were also investigated using whole testes. Which was pre-incubated for 30 minutes in KRb without [14C]MeAIB or [14C]2-DG, and further was incubated for 45 minute in KRb with [14C]MeAIB or 120 minutes with [14C]2-DG, with or without the respective hormone to be investigated. The results are given as mean ± SEM. Data were analyzed by Student's t test for comparison between two groups or ANOVA for repeated measures with Bonferroni post-test. IGF-I and insulin produced a depolarizing effect on the membrane potential of Sertoli cells from immature rats. This effect is calcium influx dependent, since the verapamil infusion blocked the action of the two hormones. The depolarizing response of IGF-I was blocked by JB1, whereas the depolarizing response of insulin was partially blocked. In 30-day-old rats, only insulin showed a significant depolarization. Insulin and IGF-I also stimulated the uptake of calcium, amino acids and glucose. The action of insulin on calcium uptake was completely blocked by JB1 while IGF-I was only partially blocked. On amino acid transport, JB1 had no effect on the insulin action, while IGF-I effect was partially blocked. And stimulation of glucose transport by IGF-I was blocked by JB1 and partially blocked the insulin effect. These data show that IGF-I and insulin on different parameters, use not only their cognate receptors, but also other membrane receptors. Thus, it became clear that the signal generated by these hormones in Sertoli cells depends on the presence of receptors for both hormones in the cell membrane to they are able to interfere on the functional and metabolic processes of these cells.
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O impacto do exercício físico resistido na função cognitiva dos idosos / The impact of resistance exercise on the cognitive function of the elderlyCassilhas, Ricardo Cardoso [UNIFESP] January 2007 (has links) (PDF)
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Previous issue date: 2007 / Associação fundo de Incentivo à Psicofarmacologia (AFIP) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Objetivo: Este estudo teve como objetivo investigar, durante vinte e quatro semanas, o impacto do exercício físico resistido realizado com duas intensidades (moderada e alta) na função cognitiva dos idosos. Material e Métodos: sessenta e dois idosos sedentários entre 65 e 75 anos foram distribuídos aleatoriamente em
três grupos (controle)/ N=23, experimental moderada (emoderada)/ N=19 e
experimental alta (ealta)/ N=20. Antes e após o treinamento, os voluntários foram
submetidos a avaliações físicas, sangüíneas, neuropsicológicas e ao perfil de
humor. Resultados: Os grupos experimentais melhoraram a sua força muscular
avaliada pelos testes de 1RM em relação ao grupo controle para todos os aparelhos,
porém não mostraram diferença entre si. Além disso, o grupo ealta, em relação ao
controle, aumentou a massa muscular e melhorou o desempenho nos testes
números ordem direta, blocos de Corsi ordem inversa, semelhanças, recordação
imediata do teste da figura complexa de Rey, item omissão do teste Toulouse, SF-36
(estado de saúde geral), POMS (tensão-ansiedade)/ (depressão) e (distúrbio total de
humor). Este grupo também mostrou aumento na concentração sérica do IGF-1 em
relação ao grupo controle. O grupo emoderada apresentou médias maiores em
comparação com o controle, nos números ordem direta, blocos de Corsi ordem
inversa, semelhanças, recordação imediata do teste da figura complexa de Rey, SF-
36 (estado de saúde geral)/ (vitalidade), POMS (tensão-ansiedade)/ (depressão)/
(raiva-hostilidade)/ (fadiga)/ (confusão mental) e (distúrbio total de humor). Também
se observou para este grupo, aumento sérico do IGF-1 em comparação ao grupo
controle. Conclusões: Após a intervenção, concluiu-se que o treinamento com
exercício físico resistido promoveu uma melhora na função cognitiva dos idosos,
mas, independente da intensidade do exercício físico resistido ter sido tipicamente
moderada ou alta, a influência na função cognitiva foi igualmente benéfica. / Objective: This study aimed at investigating, for twenty-four weeks, the impact of resistance physical exercise performed at two intensities (moderate and high) on the cognitive function of the elderly. Material and Methods: sixty-two elderly individuals between 65 and 75 years old were randomly assigned to three groups: control
(N=23), experimental moderate (emoderate, N=19) and experimental high (ehigh,
N=20). The volunteers underwent blood tests, physical, neuropsychological and
mood profile evaluations before and after the training. Results: The experimental
groups showed greater improvement than the control group regarding muscular
strength as evaluated by the 1RM tests in all the devices. They did not, however,
show differences between each other. Moreover, when compared with the control
group, the volunteers in the ehigh group increased their muscle mass and improved
their performance in the tests of digit span forward, Corsi’s blocks backward,
similarities, Rey’s complex figure immediate recall, omission item in the Toulouse’s
test , SF-36 (general health state), POMS (tension-anxiety, depression and total
mood disorder). That group also showed a higher increase in the seric concentration
of IGF-1 when compared with the control group. The emoderate group presented
higher means than the control group in the tests of digit span forward, Corsi’s blocks
backward, similarities, Rey’s complex figure immediate recall, SF-36 (general health
state, vitality), POMS (tension-anxiety, depression, anger-hostility, fatigue, mental
confusion and total mood disorder). That group also showed a higher increase in the
seric levels of IGF-1 when compared with the control group. Conclusions: After
intervention, we concluded that the training with resistance exercise promoted
improvement in the cognitive function of the elderly. Independently of the intensity of
exercise having been moderate or high, its influence on the cognitive function of the
elderly was equally beneficial. / BV UNIFESP: Teses e dissertações
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Estudo do papel do Fator de Crescimento Semelhante à Insulina-I (IGF-I) na modulação funcional de macrófagos infectados pelo Mycobacterium lepraeSilva, Leonardo Ribeiro Batista January 2014 (has links)
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Previous issue date: 2015-04-14 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Fagócitos mononucleares são as células-alvo para micobactérias patogênicas que geralmente requerem um ambiente intracelular adequado para sua sobrevivência e replicação. Mycobacterium leprae, o agente etiológico da Hanseníase, é capaz de subverter mecanismos microbicidas de macrófagos e sobreviver e replicar no interior dessas células. Contudo o mecanismo molecular envolvido na modulação da célula hospedeira, não étotalmente compreendido. O presente estudo mostrou o potencial papel exercido pelo IGF-I na patogênese causada pelo M. leprae. Foi demonstrado que o M. leprae induz a expressão do fator de crescimento semelhante a insulina (IGF-I), em macrófagos RAW 264.7. Curiosamente, apenas quando as células foram tratadas com anticorpo neutralizante para o receptor do tipo I de IGF-I (IGF-1R) o M. leprae foi capaz de regular positivamente a expressão da enzima óxido nítrico sintase induzível (iNOS) em macrófagos RAW 264.7 ou ativar o promotor de iNOS em células transfectadas com a construção contendo gene repórter da luciferase sob o controle do promotor de iNOS
O bloqueio da sinalização de IGF-I reduziu a viabilidade intracelular do M. leprae determinada por qPCR. As células RAW 264.7 pré-tratadas com IGF-I apresentaram uma redução significativa da atividade do promotor iNOS em resposta ao Mycobacterium bovis BCG, Mycobacterium smegmatis e consequentemente um aumento na viabilidade intracelular monitorada através de contagem de Unidades Formadoras de Colônia (CFU). Outro fato é que IGF-I foi capaz de atenuar a ativação de macrófagos mediada por IFN-\F067 medida através da expressão de iNOS e da quantificação da fosforilação de Ativador de transcrição e de transdução de sinal (pSTAT1). Além disso, o IGF-I foi capaz de induzir aumento de PGE2 em macrófagos, um eicosanoide previamente implicado na persistência micobacteriana no hospedeiro. Finalmente, a análise imuno-histoquímica de lesões cutâneas de pacientes lepromatosos (LL) revelou uma expressão abundante de IGF-I por macrófagos espumosos altamente infectados
Além disso, uma alta expressão da proteína Supressora de sinalização de viii citocinas 3 (SOCS3) e diminuição a ativação STAT1 foi observada em lesões LL, em comparação com lesões tuberculóide BT. Esses resultados sugerem que o IGF-I pode contribuir para a persistência micobacteriana no hospedeiro, modulando negativamente s mecanismos microbicidas do hospedeiro durante a infecção / Mononuclear phagocytes
are target
ed
cells for pathogenic mycobacteria that
gener
al
ly require a
favorable
intracellular environment in wi
c
h they survive and
replicate.
Mycobacterium leprae,
the
etiologic agent of leprosy
,
is able to subvert
macrophage microbicid
al
mechanisms and survive and replicate within these cells.
However, the molecular mechanism involved in
pathogen driven
host cell
modulation
is not fully understood.
The present study
investigated the potenti
al
role
of
insulin
-
like growth factor
-
I (IGF
-
I)
i
n
M. leprae
pathogenesis. We
showed that
M.
leprae
induces IGF
-
I expression
in
RAW 264.7
macrophages
in a dose
-
dependent
manner
.
Notably,
only when cells were treated with
a neutr
al
izing antibody to IGF
type 1 receptor (IGF
-
1R)
,
M.
leprae
infection
was able to
upregulate
inducible nitric
oxide sintase (
iNOS
)
expression in RAW cells or
to activate the iNOS promoter in
cells transfected with the iNOS
-
luciferase reporter construct
.
.
The blockage of
IGF
-
I sign
al
ing
al
so decreased the intracellular
M. le
prae
viability
as measured by
qPCR
.
Mo
reover, RAW
cells
p
re
-
treated
with IGF
-
I
showed a significant reduction
in
iNOS
promoter activity
in response to
Mycobacterium bovis
BCG
and
Mycobacterium smegmatis
with subsequent increase in bacteri
al
intracellular
surviv
al
as accessed by colony
-
forming unit
counts
(CFU)
.
Of note, IGF
-
I was able
to attenuate interferon gamma (IFN
-
) activating effects on macrophages as
acessed by iNOS expression and
quantification of phosphorylate
d
Sign
al
Transducers a
nd Activators of Transcription
1
(p
-
STAT1). Addition
al
ly,
IGF
-
I was
able to induce PGE
2
secretion in murine macrophages, an eicosanoid previously
implicated in mycobacteri
al
persistence in the host.
Fin
al
ly, i
mmunohistochemic
al
an
al
ysis of skin
lesions
of lepromatous
leprosy (LL)
patients reve
al
ed an abundant
expression of IGF
-
I by highly infected foamy macrophages.
Moreover, LL lesions
reve
al
ed higher expression of
Suppressor of cytokine sign
al
ing 3
(SOCS3), as well
as decreased levels of p
-
STAT1 when
compared to borderline tuberculoid (BT)
lesions.
Al
together,
our data suggest that IGF
-
I produced by macrophages in
response to
M. leprae
infection
constitutes
a
critic
al
regulator in subverting the
immune response in leprosy
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Modelos experimentais para a análise da proteína AKT/PKB em tecidos de hiperplasia prostática benigna tratados e não tratados com insulina e IGF-IMartiny, Patrícia Borba January 2012 (has links)
Introdução. A Hiperplasia Prostática Benigna (HPB) é uma condição prevalente na senescência masculina, caracterizada pelo aumento não maligno das células do tecido epitelial e principalmente estromal da próstata. Já foi demonstrado que a ligação dos androgênios ao seu receptor (AR) tem papel vital para o desenvolvimento prostático, mantendo não só a função tecidual, mas também sua possível contribuição para a patogênese de doenças prostáticas. Alguns estudos têm sugerido que o aumento dos hormônios IGF e Insulina circulantes podem afetar direta ou indiretamente a sinalização molecular promovendo o crescimento prostático. Uma proteína importante, componente da via de sinalização dos receptores de Insulina e IGF, é a Akt/PKB. Esta proteína está relacionada com a regulação do metabolismo, apoptose e a proliferação celular. Entretanto, os eventos moleculares que levam a interação dos receptores Insulina e IGF com o Receptor de Androgênios (AR) ainda foram bem estabelecidos. Objetivos. O objetivo deste trabalho foi estabelecer uma técnica de estimulação pela insulina e IGF-I em tecido prostático e em células provenientes de pacientes com HPB, avaliar a fosforilação da Akt/PKB, e a fosforilação do AR. Materiais e Métodos. Participaram deste estudo 15 pacientes com HPB oriundos do Hospital de Clínicas de Porto Alegre para análise das proteínas Akt/PKB e AR. A análise proteica foi realizada a partir da técnica de western blot. Os protocolos de estudo e os termos de consentimentos foram aprovados pelo comitê de ética local e nacional. Resultados. Foram realizadas duas técnicas de estimulação, uma com insulina em fatias de tecido de HPB e outra com insulina e IGF-I em suspensão celular de HPB. Ocorreu um aumento na fosforilação da proteína Akt/PKB nas células de HPB estimuladas com insulina (P=0,0113) quando comparadas com a condição controle pelo tempo de 10 minutos. Foi visto um aumento na porcentagem da fosforilação do AR quando as células foram estimuladas com insulina. Conclusão. É possível avaliar a via de ativação da Akt/PKB em um modelo de células prostáticas derivadas de Hiperplasia Prostática Benigna sob estímulo da Insulina por 10 minutos. Neste modelo, também é possível avaliar a fosforilação do Receptor de Androgênios. A padronização da técnica de estimulação in vitro poderá ser útil para novas pesquisas. Estes achados podem vir a elucidar um possível mecanismo intracelular de interação entre a transdução do sinal de Insulina e IGF-I e a fosforilação do Receptor de Androgênios, e assim, possivelmente contribuir para o entendimento da proliferação celular na HPB. / Benign prostatic hyperplasia (BPH) is a prevalent disease characterized by high levels of prostate cell proliferation. The interaction of androgen hormone with its receptor (AR) has a central role in the development of prostate growth, maintaining the tissue function as the pathogenesis of the prostate disease. Increased levels of circulating insulin and IGF can directly and/or indirectly affect different signaling pathways and promote prostatic growth. The protein AKT/PKB, member of the insulin/IGF pathway, participates in metabolism, apoptosis and cell proliferation regulation. The molecular events related to the interaction of IGF-I and insulin receptor in BPH have not been defined yet. The aim of this study were to establish an in vitro protocol with insulin or IGF-I stimulation in prostatic tissue from BPH and to evaluate both Akt and AR phosphorylation. Samples were obtained from 15 BPH patients and the Akt and AR proteins were analyzed by western blot. Slices of prostatic tissues from BPH patients were stimulated with insulin. Fragmented and dissociated prostatic tissues were stimulated with insulin or IGF-I.BPH cells stimulated with insulin for 10 minutes showed higher percentage of AR and Akt phosphorylation in relation to control (P= 0.0113). These findings may suggest that insulin and IGF-I signaling pathways may contribute to distinct signals to common downstream components in response to both insulin and IGF-I for BPH development. Our study has established insulin or IGF-I stimulation of BPH cells and can contribute to elucidate a possible intracellular interaction mechanism of AR phosphorylation.
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Níveis sérico de IGF-I e IGFBP-3 em pacientes admitidos por complicações da cirrose hepáticaRonsoni, Marcelo Fernando January 2012 (has links)
Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde. Mestrado Profissional Associado à Residência Médica em Cuidados Intensivos e Paliativos / Made available in DSpace on 2012-10-26T11:37:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1
310452.pdf: 738905 bytes, checksum: 0bcc62fdd79111a6eb1b838c5fca307b (MD5) / Introdução: IGF-I e IGFBP-3 fazem parte do sistema IGF e, por terem síntese predominantemente hepática, parecem se correlacionar com a intensidade da disfunção hepática.
Objetivos: Estudar o significado dos níveis séricos de IGF-I e IGFBP-3 em pacientes admitidos por complicações da cirrose hepática.
Material e Métodos: Estudo transversal que incluiu pacientes cirróticos admitidos por complicação da doença. Os níveis séricos de IGF-I e IGFBP-3 foram determinados por quimioluminescência. A correlação entre as variáveis numéricas foi avaliada pelo coeficiente de correlação de Spearman e as demais comparações foram feitas pelo teste Mann-Whitney ou Kruskal-Wallis.
Resultados: Foram incluídos 74 pacientes com média de idade de 53,1 ± 11,6 anos, 73% homens. Os níveis de IGF-I se correlacionaram positivamente com IGFBP-3 e albumina e negativamente com a pontuação total do escore de Child-Pugh, escore de MELD, creatinina, RNI e razão-TTPA. Os níveis de IGFBP-3 se correlacionaram positivamente com IGF-I e albumina e negativamente com a pontuação total do escore Child-Pugh, escore de MELD, creatinina, RNI, bilirrubina total e razão-TTPA. Níveis significativamente mais baixos de IGF-I e IGFBP-3 foram observados em pacientes com maiores valores de MELD e estádios mais elevados da classificação de Child-Pugh (P< 0,05).
Conclusões: Em pacientes cirróticos admitidos por complicações da doença, níveis séricos de IGF-I e IGFBP-3 se associaram a variáveis relacionadas à disfunção hepática e doença hepática mais avançada. Os níveis destes marcadores parecem sofrer pouca interferência de outras variáveis clínicas e laboratoriais, refletindo, portanto majoritariamente a capacidade de síntese hepática
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Modelos experimentais para a análise da proteína AKT/PKB em tecidos de hiperplasia prostática benigna tratados e não tratados com insulina e IGF-IMartiny, Patrícia Borba January 2012 (has links)
Introdução. A Hiperplasia Prostática Benigna (HPB) é uma condição prevalente na senescência masculina, caracterizada pelo aumento não maligno das células do tecido epitelial e principalmente estromal da próstata. Já foi demonstrado que a ligação dos androgênios ao seu receptor (AR) tem papel vital para o desenvolvimento prostático, mantendo não só a função tecidual, mas também sua possível contribuição para a patogênese de doenças prostáticas. Alguns estudos têm sugerido que o aumento dos hormônios IGF e Insulina circulantes podem afetar direta ou indiretamente a sinalização molecular promovendo o crescimento prostático. Uma proteína importante, componente da via de sinalização dos receptores de Insulina e IGF, é a Akt/PKB. Esta proteína está relacionada com a regulação do metabolismo, apoptose e a proliferação celular. Entretanto, os eventos moleculares que levam a interação dos receptores Insulina e IGF com o Receptor de Androgênios (AR) ainda foram bem estabelecidos. Objetivos. O objetivo deste trabalho foi estabelecer uma técnica de estimulação pela insulina e IGF-I em tecido prostático e em células provenientes de pacientes com HPB, avaliar a fosforilação da Akt/PKB, e a fosforilação do AR. Materiais e Métodos. Participaram deste estudo 15 pacientes com HPB oriundos do Hospital de Clínicas de Porto Alegre para análise das proteínas Akt/PKB e AR. A análise proteica foi realizada a partir da técnica de western blot. Os protocolos de estudo e os termos de consentimentos foram aprovados pelo comitê de ética local e nacional. Resultados. Foram realizadas duas técnicas de estimulação, uma com insulina em fatias de tecido de HPB e outra com insulina e IGF-I em suspensão celular de HPB. Ocorreu um aumento na fosforilação da proteína Akt/PKB nas células de HPB estimuladas com insulina (P=0,0113) quando comparadas com a condição controle pelo tempo de 10 minutos. Foi visto um aumento na porcentagem da fosforilação do AR quando as células foram estimuladas com insulina. Conclusão. É possível avaliar a via de ativação da Akt/PKB em um modelo de células prostáticas derivadas de Hiperplasia Prostática Benigna sob estímulo da Insulina por 10 minutos. Neste modelo, também é possível avaliar a fosforilação do Receptor de Androgênios. A padronização da técnica de estimulação in vitro poderá ser útil para novas pesquisas. Estes achados podem vir a elucidar um possível mecanismo intracelular de interação entre a transdução do sinal de Insulina e IGF-I e a fosforilação do Receptor de Androgênios, e assim, possivelmente contribuir para o entendimento da proliferação celular na HPB. / Benign prostatic hyperplasia (BPH) is a prevalent disease characterized by high levels of prostate cell proliferation. The interaction of androgen hormone with its receptor (AR) has a central role in the development of prostate growth, maintaining the tissue function as the pathogenesis of the prostate disease. Increased levels of circulating insulin and IGF can directly and/or indirectly affect different signaling pathways and promote prostatic growth. The protein AKT/PKB, member of the insulin/IGF pathway, participates in metabolism, apoptosis and cell proliferation regulation. The molecular events related to the interaction of IGF-I and insulin receptor in BPH have not been defined yet. The aim of this study were to establish an in vitro protocol with insulin or IGF-I stimulation in prostatic tissue from BPH and to evaluate both Akt and AR phosphorylation. Samples were obtained from 15 BPH patients and the Akt and AR proteins were analyzed by western blot. Slices of prostatic tissues from BPH patients were stimulated with insulin. Fragmented and dissociated prostatic tissues were stimulated with insulin or IGF-I.BPH cells stimulated with insulin for 10 minutes showed higher percentage of AR and Akt phosphorylation in relation to control (P= 0.0113). These findings may suggest that insulin and IGF-I signaling pathways may contribute to distinct signals to common downstream components in response to both insulin and IGF-I for BPH development. Our study has established insulin or IGF-I stimulation of BPH cells and can contribute to elucidate a possible intracellular interaction mechanism of AR phosphorylation.
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Ações da insulina e do IGF-I sobre marcadores de ação hormonal em células de Sertoli de ratos em diferentes estágios de desenvolvimentoEscott, Gustavo Monteiro January 2012 (has links)
A insulina e o IGF-I são hormônios que possuem alta homologia, isto é, apresentam grande semelhança estrutural no que se refere a sequencia de aminoácidos. Assim como os hormônios, seus receptores de membrana também são semelhantes, e a similaridade de suas sequencias de aminoácidos é em torno de 50%. Essas semelhanças permitem que ambos os hormônios se liguem aos seus receptores com alta afinidade e ao receptor do outro hormônio com menor afinidade. Tanto insulina como IGF-I desencadeiam uma série de efeitos sobre as células de Sertoli, como transporte de glicose e produção de lactato. Dessa forma, este estudo tem por objetivo investigar a ação do IGF-I e da insulina sobre a captação de cálcio, o transporte de aminoácido e glicose, além de suas ações eletrofisiológicas em células de Sertoli de ratos de 12 a 15 dias e de 30 dias de idade. Para o registro do potencial de membrana foram utilizados túbulos seminíferos isolados de testículos de ratos Wistar machos de 12 a 15 dias de idade e de 30 dias de idade. O registro intracelular da célula de Sertoli foi realizado utilizando microcapilares de borossilicato preenchidos com KCl 3 M acoplados a um eletrômetro. Foi realizada a aplicação tópica de IGF-I (100 ng/ml) e insulina (100 μM) isoladamente e também após a perfusão com a verapamil (100 μM) e JB1 (1 μg/ml). A captação de 45Ca2+ foi investigada se utilizando testículos inteiros. Os tecidos foram pré-incubados em KRb com 45Ca2+ por 60 minutos para equilibrar o meio intra e extracelular de 45Ca2+. Em seguida, as gônadas foram incubadas por 2 minutos em KRb com 45Ca2+ com ou sem IGF-I ou insulina. O transporte de [14C]MeAIB e [14C]2-DG também foram investigados se utilizando de testículos inteiros. Com pré-incubação de 30 minutos em KRb sem [14C]MeAIB ou [14C]2-DG, e posterior incubação de 45 minutos com [14C]MeAIB ou de 120 minutos com [14C]2-DG, com ou sem o respectivo hormônio a ser investigado. Os resultados foram dados como média ± SEM. Os dados foram analisados pelo teste T student para comparação entre dois grupos ou ANOVA para medidas repetidas com o pós-teste de Bonferroni. IGF-I e insulina produziram um efeito despolarizante sobre o potencial de membrana das células de Sertoli de ratos imaturos. Este efeito é dependente do influxo de cálcio, uma vez que a perfusão com verapamil bloqueou a ação dos dois hormônios. A reposta despolarizante do IGF-I foi bloqueada pelo JB1, enquanto que a resposta à insulina foi parcialmente bloqueada. Em ratos de 30 dias, apenas a insulina apresentou uma despolarização significativa. IGF-I e insulina também estimularam a captação de cálcio, aminoácido e glicose. A ação da insulina sobre o transporte de cálcio foi totalmente bloqueada pelo JB1 enquanto que do IGF-I foi apenas parcialmente bloqueado. Já sobre o transporte de aminoácido, o JB1 não exerceu qualquer efeito sobre a ação da insulina, enquanto que o efeito do IGF-I foi parcialmente bloqueado. E a estimulação do transporte de glicose pelo IGF-I não foi bloqueada pelo JB1, e a da insulina parcialmente bloqueada. Esses dados mostram que IGF-I e insulina, em diferentes parâmetros, se utilizam não apenas de seus receptores cognatos, mas também de outros receptores de membrana. Dessa forma, ficou claro que a sinalização gerada por esses hormônios nas células de Sertoli depende da presença dos receptores de ambos os hormônios na membrana celular para que eles sejam capazes de interferir nos processos metabólicos e funcionais dessas células. / Insulin and IGF-I are hormones which have high homology. In other words, they have high structural similarity with regard to the sequence of amino acids. As well as the hormones, their membrane receptors are also similar, and the similarity of their amino acid sequences is around 50%. These similarities allow both hormones bind to their receptors with high affinity and to each other's receptor with lower affinity. Both insulin and IGF-I trigger a number of effects on the Sertoli cells, such as transporting glucose and lactate production. Thus, this study aims to investigate the action of IGF-I and insulin on calcium uptake, transport of amino acids and glucose, as well as their electrophysiological actions in Sertoli cells from 12- to 15- and 30-days-old rats. To record the membrane potential were used isolated seminiferous tubules from 12- to 15- and 30-days-old rats. The intracellular recording of Sertoli cells was performed using microcapillaries filled with 3 M KCl coupled to an electrometer. Was performed topical application of IGF-I (100 ng/ml) and insulin (100 mM) alone and also after infusion with verapamil (100 mM) and JB1 (1 μg/ml). The uptake of 45Ca2+ was investigated using whole testes. Tissues were pre-incubated in KRb with 45Ca2+ for 60 minutes to equilibrate intra and extracellular medium. Then, the gonads were incubated for 2 minutes in KRb with 45Ca2+ and with or without IGF-I or insulin. The transport of [14C]MeAIB and [14C]2-DG were also investigated using whole testes. Which was pre-incubated for 30 minutes in KRb without [14C]MeAIB or [14C]2-DG, and further was incubated for 45 minute in KRb with [14C]MeAIB or 120 minutes with [14C]2-DG, with or without the respective hormone to be investigated. The results are given as mean ± SEM. Data were analyzed by Student's t test for comparison between two groups or ANOVA for repeated measures with Bonferroni post-test. IGF-I and insulin produced a depolarizing effect on the membrane potential of Sertoli cells from immature rats. This effect is calcium influx dependent, since the verapamil infusion blocked the action of the two hormones. The depolarizing response of IGF-I was blocked by JB1, whereas the depolarizing response of insulin was partially blocked. In 30-day-old rats, only insulin showed a significant depolarization. Insulin and IGF-I also stimulated the uptake of calcium, amino acids and glucose. The action of insulin on calcium uptake was completely blocked by JB1 while IGF-I was only partially blocked. On amino acid transport, JB1 had no effect on the insulin action, while IGF-I effect was partially blocked. And stimulation of glucose transport by IGF-I was blocked by JB1 and partially blocked the insulin effect. These data show that IGF-I and insulin on different parameters, use not only their cognate receptors, but also other membrane receptors. Thus, it became clear that the signal generated by these hormones in Sertoli cells depends on the presence of receptors for both hormones in the cell membrane to they are able to interfere on the functional and metabolic processes of these cells.
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