Submitted by Pós graduação Farmácia (ppgfar@ufba.br) on 2017-05-25T21:14:29Z No. of bitstreams: 1 JONATAS.pdf: 3036944 bytes, checksum: 53597feb372d2d4e4ad40f7c3d90119a (MD5) / Approved for entry into archive by Patricia Barroso (pbarroso@ufba.br) on 2017-05-29T17:25:17Z (GMT) No. of bitstreams: 1 JONATAS.pdf: 3036944 bytes, checksum: 53597feb372d2d4e4ad40f7c3d90119a (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-29T17:25:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 JONATAS.pdf: 3036944 bytes, checksum: 53597feb372d2d4e4ad40f7c3d90119a (MD5) / FAPESB / CAPES / O vírus da hepatite C (HCV) é a principal causa de hepatite crônica, insuficiência hepática terminal, cirrose, carcinoma hepatocelular e transplante hepático nos países industrializados. A infecção crônica pelo HCV promove, também, uma complexa disfunção nos linfócitos B que leva à produção de autoanticorpos não órgãos específicos (NOSA) e crioglobulinas (CG). Os mecanismos envolvidos nessa disfunção não estão completamente elucidados e os significados desses marcadores na imunopatologia da doença e no resultado da terapia antiviral são contraditórios assim como o efeito da terapia na expressão de tais marcadores durante tratamento. Objetivos: Avaliar o efeito da terapia antiviral sobre a expressão de marcadores laboratoriais de autoimunidade na hepatite C crônica e os significados de tais marcadores no prognóstico da doença e no resultado do tratamento. Pacientes, Materiais e Métodos: Foram incluídos 29 pacientes, sem tratamento prévio para a hepatite C, 15 homens e 14 mulheres, que foram investigados para autoanticorpos e crioglobulinas antes e nas semanas 12 e 24 após início do tratamento com interferon-α (IFN-α) peguilado mais ribavirina. Anticorpos séricos antimúsculo liso (SMA) e antinúcleo (ANA) foram pesquisados por imunofluorescência indireta; os autoanticorpos tireoidianos, antitireoperoxidase (anti- TPO) e antitireoglobulina (anti-TG), por ensaio imunoenzimático (ELISA). As crioglobulinas foram investigadas por crioprecipitação em tubo e por difusão em gel, enquanto o fator reumatóide (FR) foi quantificado por nefelometria. Resultados: Dos 29 pacientes incluídos, 24 (82,8%) eram portadores do genótipo 1, cinco (17,2%) estavam infectados pelo genótipo 3 e 17/29 (58,6%) tinham carga viral (CV) alta (>600.000 cópias). Na histopatologia hepática, segundo a classificação METAVIR, 72,4% (21/29) possuíam atividade necroinflamatória leve a moderada (A1 ou A2) e 51,7% (15/29) estavam com fibrose avançada e cirrose (F3 ou F4). FR, SMA e CG foram os mais prevalentes biomarcadores autoimunes nos pacientes pré-tratamento, com taxas de 62,1% (18/29), 51,7% (15/29) e 46,4% (13/28), respectivamente. A terapia antiviral diminuiu a positividade de CG após a 12ª e na 24ª semana de tratamento, P = 0,026 e P = 0,013, respectivamente. Ambas, CG e SMA foram associadas com fibrose avançada, P = 0,003, P = 0,017, respectivamente. No entanto, nenhuma positividade de ANA ou FR foi associada com histopatologia hepática (atividade necroinflamatória ou fibrose), e nem tiveram influência na resposta ao tratamento. Conclusões: Nossos resultados sugerem que a terapia antiviral diminui a produção de crioglobulinas devido à eliminação do HCV. Adicionalmente, a presença de alguns marcadores autoimunes em portadores do HCV, está associado com gravidade da doença sem qualquer influência no resultado do tratamento. / The hepatitis C virus (HCV) is the main cause of chronic hepatitis, terminal hepatic failure, cirrhosis, hepatocellular carcinoma and hepatic transplantation in the industrialized countries. HCV chronic infection also promotes a complex dysfunction in B-lymphocytes that leads to the production of non-organspecific- autoantibodies (NOSA) and cryoglobulins (CG). The mechanisms involved in this dysfunction are not fully elucidated and the meanings of these markers in the immunopathology of the disease and in the antiviral therapy outcomes are controversial as well as the effect of therapy in the expression of these markers during treatment. Objectives: The aims of this work were evaluate the effect of antiviral therapy on the expression of these autoimmune biomarkers in chronic hepatitis C and their meaning in disease prognosis and treatment outcome. Patients, Material and Methods: Twenty-nine hepatitis C untreated patients were enrolled in this study, 15 men and 14 women, and investigated for autoantibodies and cryoglobulins before and at 12 and 24 week treatment with pegylated interferon-α (IFN-α) plus ribavirin. Serum smooth muscle (SMA) and antinuclear (ANA) antibodies were tested by indirect immunofluorescence and enzyme-linked immunosorbent assay was used to determine serum anti-thyroid peroxidase (anti-TPO) and antithyroglobulin (anti-TG) antibody levels. Cryoglobulins were investigated by cryoprecipitation using tube and gel-diffusion techniques and rheumatoid factor (RF) was determined by nephelometry. Results: Twenty-four out of 29 patients (82.8%) were infected with HCV genotype, whereas five (17.2%) were infected with HCV genotype 3. High HCV load above 600,000 copies was found in 17 out of 29 patients before treatment. Twenty-one individuals had mild or moderate liver necroinflammatory activity (A1 or A2) and 15 patients and advanced fibrosis (F3) or cirrhosis (F4). RF, SMA and CG were the most prevalent autoimmune biomarkers in untreated patients with prevalence of 62.1% (18/29), 51.7% (15/29) and 46.4% (13/28), respectively. Antiviral therapy decreased cryoglobulin positivity after 12 and 24 weeks of treatment (P = 0.026 and P = 0.013, respectively). Both cryoglobulin and smooth muscle antibodies were associated with advanced fibrosis (P = 0.003 and P = 0.017, respectively). Neither ANA nor RF positivity was associated with liver histopathology (necroinflammatory activity or fibrosis), and they did not have influence on treatment outcome. Conclusions: Our results suggest that antiviral therapy decreases cryoglobulin production due to HCV eradication. In addition, the presence of some autoimmune biomarkers in HCV patients is associated with disease severity without any influence on treatment outcome.

Submitted by Marcelo Andrade Silva (marcelo.andradesilva@ufpe.br) on 2015-03-09T14:28:37Z No. of bitstreams: 2 DISSERTAÇÃO Joelma Carvalho Santos.pdf: 2064030 bytes, checksum: 9d9c233bec668a94294f6d19471cb844 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-09T14:28:37Z (GMT). No. of bitstreams: 2 DISSERTAÇÃO Joelma Carvalho Santos.pdf: 2064030 bytes, checksum: 9d9c233bec668a94294f6d19471cb844 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Previous issue date: 2014 / A presença de polimorfismos de único nucleotídeo (SNPs) e a expressão variante dos genes das citocinas IFN-α1, IFN-γ e do receptor IFN-α r1 em pacientes com infecção crônica pelo vírus da hepatite B (HBV), podem ser considerados fatores etiopatogênicos relacionados aos níveis séricos do HBV, resultando em complicações da doença. Desta forma, o presente estudo teve como objetivo verificar a associação entre as frequências genotípicas e proporções alélicas dos genes IFNG, IFNA1, IFNAR1 em relação aos níveis de expressão desses genes e à carga viral do HBV, em pacientes com infecção crônica pelo HBV sem tratamento antiviral. Foi realizado um estudo de caso-controle com amostras de sangue total de 208 indivíduos (94 pacientes com infecção crônica e 114 indivíduos imunes ao HBV) no período de outubro de 2012 a agosto de 2013, no ambulatório de hepatologia do Hospital das Clínicas da Universidade Federal de Pernambuco (HC/UFPE) e no Hospital Escola Dr. Helvio Auto da Universidade Estadual de Ciências da Saúde de Alagoas (HEHA/UNCISAL). Para a identificação dos polimorfismos foi utilizada a PCR em tempo real (qPCR) de acordo com técnica de alta resolução de melting (HRM). A quantificação da carga viral e a expressão absoluta dos genes IFNG (-5 A>G), IFNA1 (-2 C>T), IFNAR1 (-97 T>C) foram realizadas por qPCR. Em todos os pacientes com infecção crônica pelo HBV os níveis de expressão foram menores para o gene IFNA1 (mediana=2,56x10-1ηg/μL), em relação aos genes IFNG (mediana=4,54x105ηg/μL) e IFNAR1 (mediana=6,92x109ηg/μL), e a média de carga viral foi de 3,2 log10. Pacientes com genótipo heterozigoto IFNA1(-2) CT e alelo polimórfico IFNA1 (-2) T apresentaram maiores chances de desenvolver proteção pelo HBV quando comparados a indivíduos imunes com genótipo IFNA1(-2) CC e alelo tipo selvagem C, respectivamente (IFNA1 CT/CC: OR=0,45; p=0,01 e IFNA T/C: OR=0,54; p<0,01). Em pacientes com infecção crônica e genótipo tipo selvagem TT do IFNAR1, os baixos níveis de expressão do gene desse receptor, quando comparado aos outros genótipos, explicam em 40% os altos níveis de carga viral desses pacientes (r2=0,40 | p=0,04) conferindo um risco para o desenvolvimento da cronicidade. Para o genes IFNG(-5) não foi observada diferença estatisticamente significante entre os níveis de expressão e os genótipos. Assim, a presença da variante polimórfica do gene IFNA1 (-2) em pacientes com infecção crônica, pode estar associada à proteção da cronicidade quando comparada ao grupo controle. Os altos níveis de expressão do gene IFNAR1 e baixos níveis de IFNA1 podem contribuir para a cronicidade nestes indivíduos. Os pacientes que com genótipo polimórfico IFNA1 (-2) CT e alelo T apresentaram maior proteção para a cronicidade pelo HBV.

A presente investigação teve por objetivo estudar o papel do eixo GH-IGF-IGFBP no tecido hepático e nos linfócitos T e B de pacientes portadores do vírus da hepatite C, em terapia com INF-alfa e ribavirina nos períodos pré e pós-tratamento. Dados da literatura têm evidenciado o envolvimento do IGF-I na modulação da resposta imune, bem como sua atuação como fator de crescimento para células imunológicas, além de apresentar valor preditivo na avaliação da reserva hepática desses pacientes. O número final de pacientes abordados perfez o total de 80. Destes, 39 iniciaram tratamento conforme protocolo estabelecido pela equipe clínica. Quatro pacientes foram excluídos durante o curso do tratamento, sendo 2 por óbito e 2 por transtorno depressivo grave com ideação suicida. Dos 35 pacientes que concluíram o tratamento, 18 apresentaram resposta virológica ao final do tratamento. Destes, 15 pacientes (43%) obtiveram resposta virológica sustentada (RVS). As médias das U.A. (unidades arbitrárias) das enzimas AST e ALT foram estatisticamente diferentes entre os períodos pré e pós-tratamento, tanto para os pacientes que apresentaram RVS quanto para aqueles que não apresentaram tal resposta. No grupo de pacientes com RVS, observou-se que a média dos níveis basais de AST foi menor quando comparada à do grupo de pacientes sem RVS. A média das concentrações plasmáticas basais de IGF-I livre no grupo de pacientes com RVS foi estatisticamente maior quando comparada à do grupo de pacientes não respondedores. As médias das concentrações de IGFBP3 circulante no período pós-tratamento foram estatisticamente diferentes entre os grupos com e sem RVS. Um aumento do conteúdo de mRNA do gene do IGF-IR foi observado em tecido hepático de todos os pacientes com HCC quando comparado com o tecido hepático normal. Este resultado foi confirmado por análise imuno-histoquímica para o IGF-IR. Nos pacientes que apresentaram RVS a magnitude de expressão de mRNA do IGF-IR em amostras de tecido hepático após o tratamento foram estatisticamente menores em relação ao basal. Tal fato não foi observado no grupo de pacientes não respondedores. Não houve diferença estatisticamente significativa entre a média do conteúdo de mRNA do IGF-I em tecido hepático dos grupos de pacientes com e sem RVS, pré ou pós-tratamento. A média do conteúdo de mRNA do IGF-I em linfócitos T no grupo de pacientes com RVS foi estatisticamente maior em relação à do grupo de pacientes não respondedores quando se consideram os períodos pré e pós-tratamento conjuntamente. Não se observou diferença estatisticamente significativa entre as médias do conteúdo de mRNA do IGF-IR nos grupos com e sem RVS, pré ou pós-tratamento. Não houve diferença estatisticamente significativa entre as médias do conteúdo de mRNA de IGF-I e IGF-IR em linfócitos B de pacientes portadores do VHC, com e sem RVS e nos períodos pré e pós-tratamento. A diminuição de expressão de mRNA do IGF-IR em tecido hepático, observada no grupo de pacientes com RVS, sugere uma melhora da doença hepática. A hipótese de que um efeito do INF-? sobre os componentes do sistema IGF possa contribuir para este achado não pode ser descartada, porém, é provável que este efeito não seja tão importante, pois não se observou diferença nos níveis de expressão do IGF-IR hepático no grupo de pacientes não respondedores. Embora a supra-regulação (\"up-regulation\") do IGF-IR possa participar da regeneração hepática, é preciso elucidar se o aumento da expressão do IGF-IR na HCC resulta da ativação direta do gene pelo VHC ou se é uma conseqüência da agressão ao parênquima. As concentrações plasmáticas de IGF-I livre >1,35 ng/mL puderam ser consideradas preditivas da resposta ao tratamento da hepatite C com uma razão de probabilidade (\"odds ratio\") de 17,33±1,02 (Limite de confiança: 2,26-127,34) / The current investigation aimed to study the role of the GH-IGF-IGFBP axis in liver tissue and in T and B lymphocytes in patients with hepatitis C virus (HCV) before and after therapeutic regimen based on interferon alfa-2a or alfa-2b (3 million U SC 3x/wk) and ribavirin (1000-1200 mg qid). It has been shown that IGF-I plays an important role in the modulation of the immune response, besides its role as a growth factor for the immunologic cells. It also presents a predictive value in the evaluation of the hepatic reserve of these patients. Among 80 patients enrolled for this investigation, 39 began treatment with interferon-? and ribavirin, according to an established protocol. Two patients were excluded during treatment due to severe depressive disorders accompanied by suicidal thoughts and 2 patients died. Of the 35 patients who concluded the treatment, 18 eventually presented virological response. Of these, 15 (43%) maintained sustained virological response (SVR). The levels of AST and ALT enzymes in both pre and post-treatment periods were statistically different for both patients with SVR and those who did not present such response. In the group with SVR, aminotransferases basal levels were statistically lower when compared to the group of patients without SVR. In the group of non-responsive patients, the average of the scores of parenchyma activity was statistically lower in post-treatment period when compared to pre-treatment period. Furthermore, comparing post-treatment periods in both groups with and without SVR, the average of the scores of parenchyma activity was statistically lower in the group without SVR when compared to the group with SVR. Mean plasma concentrations of free IGF-I before treatment in patients who eventually achieved SVR was statistically higher in comparison to the group of non-responsive patients. Mean plasma concentrations of IGFBP3 were statistically higher in the group with RVS when compared to the group of patients without SVR. An increase of IGF-IR mRNA content was observed in hepatic tissue from all patients with CHC in comparison to normal liver. These results were confirmed by immunohistochemical analysis for the IGF-IR. IGF-IR mRNA content in liver tissue samples from patients who achieved SVR after treatment was statistically lower than that observed before treatment There was not statistical difference between IGF-I mRNA content in hepatic tissues from both groups of patients with and without SVR, in pre and post-treatment periods. IGF-I mRNA expression in T lymphocytes from patients with SVR was statistically higher in comparison to the non-responsive group of patients, considering both pre and post-treatment periods altogether. No statistical difference was observed in IGF-IR mRNA expression in both groups of patients with and without SVR, in pre and post-treatment periods. The statistical analysis did not disclose any statistically significant differences in IGF-I or IGF-IR mRNA expressions in B lymphocytes from patients with or without SVR, in pre and post-treatment periods. A decrease in hepatic IGF-IR mRNA content observed in patients who achieved SVR after therapy, suggested an improvement in hepatic damage. The hypothesis that the INF-? affects components of the IGF system contributing to these findings could not be discarded. However, it is unlike that these effects would play relevant role because any differences were observed in the hepatic IGF-IR mRNA expression in non-responsive patients. It remains to be elucidated whether IGF-IR up-regulation would be involved in hepatocyte regeneration or CHC would result from direct activation of IGF-IR gene by HCV and/or as a consequence of chronic aggression to hepatic parenchyma. Plasma concentration of free IGF-I >1.35 ng/ml was considered to be a predictive response to the treatment of hepatitis C with a probability ratio (odds ratio) of 17.33±1.02 (confidence interval: 2.26 -127.34)

Submitted by Priscila Nascimento (pnascimento@icict.fiocruz.br) on 2012-11-21T16:17:01Z No. of bitstreams: 1 carla-franca-wolanski-de-almeida.pdf: 1099876 bytes, checksum: e454fb4f1e8e4f2a5e837e602abcf47e (MD5) / Made available in DSpace on 2012-11-21T16:17:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 carla-franca-wolanski-de-almeida.pdf: 1099876 bytes, checksum: e454fb4f1e8e4f2a5e837e602abcf47e (MD5) Previous issue date: 2009 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto de Tecnologia em Imunobiológicos. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil. / Controle em processo é parte das ações para garantia da qualidade dos produtos a fim de que eles atendam aos requisitos mínimos estabelecidos para seu uso. Os resultados obtidos nos ensaios orientam na tomada de decisões, bem como em ajustes ao processo de produção. Muitas vezes tais resultados são condições imperativas para as etapas subsequentes. O monitoramento do processo produtivo se dá a partir do estabelecimento dos pontos críticos de controle, que precisam ser verificados a cada lote, pois interferem diretamente na qualidade e rendimentos da produção. Portanto, a confiabilidade e agilidade deresposta são fundamentais para correta tomada de decisão e/ou ajuste. O objetivo deste trabalho é propor um modelo de laboratório de controle em processo nos aspectos gerenciais e principalmente nos aspectos técnicos aplicados ao processo de produção do biofármaco Interferon alfa 2b humano recombinante. Este produto, oferecido no portfólio de Bio-Manguinhos encontra-se em processode transferência de tecnologia com o Instituto cubano CIGB. Com base nos dados da literatura foram estabelecidas as principais etapas do processo produtivo a para expressão de proteínas heterólogas, em sistema recombinante utilizando-se a bactéria Escherichia coli. Os pontos críticos de controle foram estabelecidos utilizando-se a metodologia de análise de riscos HACCP (Hazard Analisys Critical Control Point). Para as análises de controle foram propostas metodologias analíticas que proporcionem a consistência de resultados e que possam garantir a qualidade final do processo de manufatura do produto. O modelo proposto também enfatiza a conduta de ações rotineiras de forma que qualquer desvio possa ser imediatamente identificado e suas causas apuradas além de executar as análises com segurança. Os critérios gerenciais e técnicos abordados foram avaliados criticamente, utilizando-se os procedimentos do sistema de garantia da qualidade vigentes no Instituto, bem como na estrutura do laboratório de controle em processodestinado à vacina contra Hib, que foi adotado como premissa básica, fruto da transferência de tecnologia bem sucedida em Bio-Manguinhos. A proposta elaborada poderá ser utilizada em outros laboratórios destinados ao controle em processo de novos produtos em Bio-Manguinhos e enfatiza os critérios técnicos como condicionais para confiabilidade de medição. / In-process control is a part of the actions to guarantee the quality for final products in order to attend the minimum requirements established for their using. The results obtained from analytical assays guide on decision-making as well as production process adjustments. Often, these results are conditioned to the follow the subsequent stages. The process monitoring occurs from the establishment of critical control points to verify in each batch because theydeterminate product quality and process yield. Therefore, the reliability and speedof response are critical for correct decision-making and adjustment. The objective of this work is to propose a model in process control laboratory in management aspects and especially the technical aspects applied to the production of human recombinant interferon alpha 2b biopharmaceutical, object of this study. Bio-Manguinhos supplies this product in its portfolio, which production technology is being transferred from the CIGB, a Cuban Institution. Based on literature data the main steps were established for a production process of heterologous proteins expressed using a recombinant system with the Escherichia colibacteria. The critical control points were established using the risk assessment methodology HACCP, Hazard analysis Critical Control, HACCP. Analytical methodologies were proposed to improve results consistency and assure the final quality of production process. The proposed model emphasizes the routine actions, so that, any deviation could be immediately identified, their causes verified and activities performed reliably. The management and technical criteria described have been critically evaluated using the Bio-Manguinhos institute quality assurance procedures as well as compared to the structure of the in-process control laboratory for Hib vaccine. This laboratory, adopted as basic premise, resulted from a successful technology transfer in Bio-Manguinhos. The proposal drawn up can be used in other laboratories for in- process control in new products in Bio-Manguinhos and emphasizes the technical criteria for conditional measurement reliability.

A presente investigação teve por objetivo estudar o papel do eixo GH-IGF-IGFBP no tecido hepático e nos linfócitos T e B de pacientes portadores do vírus da hepatite C, em terapia com INF-alfa e ribavirina nos períodos pré e pós-tratamento. Dados da literatura têm evidenciado o envolvimento do IGF-I na modulação da resposta imune, bem como sua atuação como fator de crescimento para células imunológicas, além de apresentar valor preditivo na avaliação da reserva hepática desses pacientes. O número final de pacientes abordados perfez o total de 80. Destes, 39 iniciaram tratamento conforme protocolo estabelecido pela equipe clínica. Quatro pacientes foram excluídos durante o curso do tratamento, sendo 2 por óbito e 2 por transtorno depressivo grave com ideação suicida. Dos 35 pacientes que concluíram o tratamento, 18 apresentaram resposta virológica ao final do tratamento. Destes, 15 pacientes (43%) obtiveram resposta virológica sustentada (RVS). As médias das U.A. (unidades arbitrárias) das enzimas AST e ALT foram estatisticamente diferentes entre os períodos pré e pós-tratamento, tanto para os pacientes que apresentaram RVS quanto para aqueles que não apresentaram tal resposta. No grupo de pacientes com RVS, observou-se que a média dos níveis basais de AST foi menor quando comparada à do grupo de pacientes sem RVS. A média das concentrações plasmáticas basais de IGF-I livre no grupo de pacientes com RVS foi estatisticamente maior quando comparada à do grupo de pacientes não respondedores. As médias das concentrações de IGFBP3 circulante no período pós-tratamento foram estatisticamente diferentes entre os grupos com e sem RVS. Um aumento do conteúdo de mRNA do gene do IGF-IR foi observado em tecido hepático de todos os pacientes com HCC quando comparado com o tecido hepático normal. Este resultado foi confirmado por análise imuno-histoquímica para o IGF-IR. Nos pacientes que apresentaram RVS a magnitude de expressão de mRNA do IGF-IR em amostras de tecido hepático após o tratamento foram estatisticamente menores em relação ao basal. Tal fato não foi observado no grupo de pacientes não respondedores. Não houve diferença estatisticamente significativa entre a média do conteúdo de mRNA do IGF-I em tecido hepático dos grupos de pacientes com e sem RVS, pré ou pós-tratamento. A média do conteúdo de mRNA do IGF-I em linfócitos T no grupo de pacientes com RVS foi estatisticamente maior em relação à do grupo de pacientes não respondedores quando se consideram os períodos pré e pós-tratamento conjuntamente. Não se observou diferença estatisticamente significativa entre as médias do conteúdo de mRNA do IGF-IR nos grupos com e sem RVS, pré ou pós-tratamento. Não houve diferença estatisticamente significativa entre as médias do conteúdo de mRNA de IGF-I e IGF-IR em linfócitos B de pacientes portadores do VHC, com e sem RVS e nos períodos pré e pós-tratamento. A diminuição de expressão de mRNA do IGF-IR em tecido hepático, observada no grupo de pacientes com RVS, sugere uma melhora da doença hepática. A hipótese de que um efeito do INF-? sobre os componentes do sistema IGF possa contribuir para este achado não pode ser descartada, porém, é provável que este efeito não seja tão importante, pois não se observou diferença nos níveis de expressão do IGF-IR hepático no grupo de pacientes não respondedores. Embora a supra-regulação (\"up-regulation\") do IGF-IR possa participar da regeneração hepática, é preciso elucidar se o aumento da expressão do IGF-IR na HCC resulta da ativação direta do gene pelo VHC ou se é uma conseqüência da agressão ao parênquima. As concentrações plasmáticas de IGF-I livre >1,35 ng/mL puderam ser consideradas preditivas da resposta ao tratamento da hepatite C com uma razão de probabilidade (\"odds ratio\") de 17,33±1,02 (Limite de confiança: 2,26-127,34) / The current investigation aimed to study the role of the GH-IGF-IGFBP axis in liver tissue and in T and B lymphocytes in patients with hepatitis C virus (HCV) before and after therapeutic regimen based on interferon alfa-2a or alfa-2b (3 million U SC 3x/wk) and ribavirin (1000-1200 mg qid). It has been shown that IGF-I plays an important role in the modulation of the immune response, besides its role as a growth factor for the immunologic cells. It also presents a predictive value in the evaluation of the hepatic reserve of these patients. Among 80 patients enrolled for this investigation, 39 began treatment with interferon-? and ribavirin, according to an established protocol. Two patients were excluded during treatment due to severe depressive disorders accompanied by suicidal thoughts and 2 patients died. Of the 35 patients who concluded the treatment, 18 eventually presented virological response. Of these, 15 (43%) maintained sustained virological response (SVR). The levels of AST and ALT enzymes in both pre and post-treatment periods were statistically different for both patients with SVR and those who did not present such response. In the group with SVR, aminotransferases basal levels were statistically lower when compared to the group of patients without SVR. In the group of non-responsive patients, the average of the scores of parenchyma activity was statistically lower in post-treatment period when compared to pre-treatment period. Furthermore, comparing post-treatment periods in both groups with and without SVR, the average of the scores of parenchyma activity was statistically lower in the group without SVR when compared to the group with SVR. Mean plasma concentrations of free IGF-I before treatment in patients who eventually achieved SVR was statistically higher in comparison to the group of non-responsive patients. Mean plasma concentrations of IGFBP3 were statistically higher in the group with RVS when compared to the group of patients without SVR. An increase of IGF-IR mRNA content was observed in hepatic tissue from all patients with CHC in comparison to normal liver. These results were confirmed by immunohistochemical analysis for the IGF-IR. IGF-IR mRNA content in liver tissue samples from patients who achieved SVR after treatment was statistically lower than that observed before treatment There was not statistical difference between IGF-I mRNA content in hepatic tissues from both groups of patients with and without SVR, in pre and post-treatment periods. IGF-I mRNA expression in T lymphocytes from patients with SVR was statistically higher in comparison to the non-responsive group of patients, considering both pre and post-treatment periods altogether. No statistical difference was observed in IGF-IR mRNA expression in both groups of patients with and without SVR, in pre and post-treatment periods. The statistical analysis did not disclose any statistically significant differences in IGF-I or IGF-IR mRNA expressions in B lymphocytes from patients with or without SVR, in pre and post-treatment periods. A decrease in hepatic IGF-IR mRNA content observed in patients who achieved SVR after therapy, suggested an improvement in hepatic damage. The hypothesis that the INF-? affects components of the IGF system contributing to these findings could not be discarded. However, it is unlike that these effects would play relevant role because any differences were observed in the hepatic IGF-IR mRNA expression in non-responsive patients. It remains to be elucidated whether IGF-IR up-regulation would be involved in hepatocyte regeneration or CHC would result from direct activation of IGF-IR gene by HCV and/or as a consequence of chronic aggression to hepatic parenchyma. Plasma concentration of free IGF-I >1.35 ng/ml was considered to be a predictive response to the treatment of hepatitis C with a probability ratio (odds ratio) of 17.33±1.02 (confidence interval: 2.26 -127.34)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:35Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-03-12Bitstream added on 2014-06-13T18:09:52Z : No. of bitstreams: 1 tanaka_mh_me_arafo.pdf: 647421 bytes, checksum: 7aca1036f8801f2b3143929ea57d6d5c (MD5) / A doença periodontal (DP) em indivíduos com Síndrome de Down (SD) se desenvolve com alta prevalência, precocemente, de modo rápido e generalizado em comparação com indivíduos não-sindrômicos. Foi demonstrado que portadores da SD apresentam resposta imune diminuída em relação aos cromossomicamente normais. O objetivo desta pesquisa foi investigar diferenças nos parâmetros clínicos periodontais e níveis de expressão dos genes Interferon-gama (IFNG), Interferon-gama receptor 1 (IFNGR1), Interferon-gama receptor 2 (IFNGR2), Interferon-alfa (IFNA), Interferon-alfa receptor 1 (IFNAR1), Interferon-alfa receptor 2 (IFNAR2), Janus-quinase 1 (JAK1), Transdutor de sinal e ativador da transcrição 1 (STAT1) e Fator de regulação de interferon 1 (IRF1) em indivíduos com SD que apresentam ou não DP e em indivíduos cromossomicamente normais. Fizeram parte deste estudo 80 indivíduos entre 7 e 57 anos de idade subdivididos em 4 grupos: SD com DP (A); indivíduos com SD sem DP (B); indivíduos não-sindrômicos (Controle) com DP (C) e indivíduos Controle sem DP (D). A expressão gênica foi investigada por meio de quantificação relativa utilizando a técnica da Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) em Tempo Real. Para o índice sangramento à sondagem (SS) não houve diferença entre os grupos A e 21 C. A periodontite crônica localizada foi o tipo prevalente tanto entre indivíduos com SD como Controle. Considerando os parâmetros clínicos, não foram encontradas diferenças na periodontite crônica localizada entre os indivíduos com SD e Controle, assim como para a periodontite crônica generalizada. Com relação à análise genética, observou-se que indivíduos dos grupos com SD em relação aos grupos cromossomicamente normais (A+B-C+D) tiveram uma expressão de IFNG semelhante ao observado entre indivíduos do grupo... / Periodontal disease (PD) in individuals with Down Syndrome (DS) has an early, quickly and widespread onset and high prevalence when compared with individuals without the Syndrome. Only poor oral hygiene does not explain the severe periodontal destruction seen in DS patients. It has been shown that DS patients have a weaker immune response than people with normal number of chromosomes. The aim of this study was to investigate differences in periodontal clinical parameters and the expression levels of the genes Interferon-gamma (IFNG), Interferon-gamma receptor 1 (IFNGR1), Interferon-gamma receptor 2 (IFNGR2), interferon-alpha (IFNA), interferon-alpha receptor 1 (IFNAR1), Interferon-alpha receptor 2 (IFNAR2), Janus-kinase 1 (JAK1), Signal transducers and activators of transcription 1 (STAT1) and Interferon regulatory factor 1 (IRF1) in DS patients with and without periodontal disease in comparison with chromossomically normal individuals. A total of 80 individuals aged 7 to 57 years participated in this study and were divided into 4 groups: DS with PD (A); DS without PD (B); individuals without DS (control) with PD (C) and individuals without DS (control) and without PD (D). A quantitative RT-qPCR was used to investigate gene expression. There was no difference between groups A and C regarding the bleeding on probing 25 (BOP) index. The most prevalent type of periodontitis seen in this study was the localized chronic periodontitis, both in individuals with and without DS. Considering the clinical parameters, localized and generalized chronic periodontitis did not differ between individuals with and without DS. Regarding genetic analysis, individuals of the groups with DS in relation to the groups without DS (A+B-C+D) showed an IFNG expression similar to that seen among the individuals of groups control with PD (C-D). However, individuals... (Complete abstract click electronic access below)

INTRODUÇÃO: A urticária crônica é caracterizada pelo aparecimento de placas eritêmato-edematosas, pruriginosas que perduram por mais de seis semanas. A investigação da imunidade inata é de grande importância para a compreensão da imunopatologia de doenças dermatológicas crônicas como a Urticária Crônica Idiopática (UCI). Entre os componentes da resposta inata, a avaliação das células dendríticas plasmocitóides (pDCs) e sua capacidade de ativação por agonistas de Toll Like receptor 9 (TLR9) pode contribuir para avaliar o desequilíbrio imunológico encontrado na UCI. OBJETIVOS: Investigar a imunidade inata em pacientes com UCI e os mecanismos envolvidos na modulação da produção de IFN- por pDCs induzida pela ativação do TLR9. MÉTODOS: A secreção de IFN- e IL-10 por leucócitos de pacientes UCI (n=26) e indivíduos normais (Co, n=50) induzida pelo agonista de TLR9, CpGA (1.0 e 2.0M), ou IL12p40 induzida pelo ODN inibitório (ODN S) foi realizado por ensaio imunoenzimático. Quantificação de pDCs em sangue periférico, expressão de moléculas coestimulatórias, expressão intracelular de IFN- por pDCs e fosforilação de STAT (1 e 4) foram analisados por citometria de fluxo. Expressão do mRNA de TLR9 e fator regulador de interferon-7 foi realizado por real time PCR. A presença da pDC (CD123+) em lesões de pele de pacientes UCI foi avaliada por imunoistoquímica. RESULTADOS: Os resultados mostraram uma diminuição na produção de IFN- e IL-10 por leucócitos de pacientes UCI após estímulo com CpGA. O estímulo com ODN S induziu a produção de IL12p40 e suprimiu ainda mais a produção de IL-10 e IFN- induzida pelo CpGA, até 98% de inibição. O número de pDCs no sangue periférico e a capacidade de ativação da pDC nos pacientes, avaliada pela expressão de moléculas co-estimuladoras foi semelhante aos indivíduos normais. Além disto, foram detectadas raras pDCs nas lesões de pele dos pacientes. Um aumento constitutivo da fosforilação de STAT1 foi detectado em linfócitos não estimulados de pacientes UCI associado a uma diminuição da expressão de mRNA de TLR9 após estímulo com CpGA e alterada expressão de mRNA de IRF-7, que podem contribuir para a baixa produção de IFN-. CONCLUSÃO: Os achados mostram uma inibição na produção de IFN- via TLR9, tendo como alvo a pDC e sua participação na resposta inata na Urticária Crônica / INTRODUCTION: Chronic urticaria is a skin disorder characterized by recurrent and transitory itchy weals occurring regularly more than 6 weeks. The investigation of the innate immunity is an important parameter to understand the immunopathology of chronic dermatological diseases, such as Chronic Idiopathic Urticaria (CIU). Among the innate immune components, such as plasmacytoid dendritic cells (pDC) and their functional study activation thorough TLR-9 ligand could contribute to evaluate the immunologic disequilibrium founded in the CIU. OBJECTIVES: We decided to investigate innate immunity in CIU and the mechanisms implicated in the modulation of IFN- production by pDCs upon TLR9 activation. METHODS: The secretion of IFN- and IL-10 secretion by leucocytes of patients with CIU (n=26) and healthy control (HC, n=50) induced by TLR9 ligand, CpG type A (1.0 and 2.0M), or IL12p40 secretion induced by inhibitory ODN (ODN S) was assessed by enzyme-linked immunosorbent assay. Enumeration of pDC, coestimulatory molecules expression, intracellular IFN- expression, and STAT (1 and 4) phosphorylation were assessed by flow cytometry. TLR9 and interferon regulatory factor-7 mRNA transcripts were evaluated by real-time PCR. The presence of pDCs (CD123+) in the skin lesion of patients with CIU were assessed by means of immunohistochemistry staining. RESULTS: The findings showed a decreased IFN- and IL-10 secretion by leucocytes of CIU patients induced by CpGA. Inhibitory ODN was able to induce IL12p40 and further inhibited the IFN- secretion in both HC and patients achieving up 98% inhibition. A normal pDC percentage and degree of activation by costimulatory molecules expression was observed in CIU in patients was similar to control group. Moreover, rare presence of pDCs was detected in the skin lesion of patients. An increased constitutive STAT1 phosphorylation on non-stimulated lymphocytes and CpGA activation induced a down-regulation of TLR9 mRNA transcripts associated with altered IRF-7 along the time of CpG activation which may contribute to the decreased IFN- secretion. CONCLUSIONS: Altogether, the findings showed an impaired IFN- secretion via TLR-9, implicating innate immunity through pDCs as target in Chronic Urticaria

INTRODUÇÃO: A urticária crônica é caracterizada pelo aparecimento de placas eritêmato-edematosas, pruriginosas que perduram por mais de seis semanas. A investigação da imunidade inata é de grande importância para a compreensão da imunopatologia de doenças dermatológicas crônicas como a Urticária Crônica Idiopática (UCI). Entre os componentes da resposta inata, a avaliação das células dendríticas plasmocitóides (pDCs) e sua capacidade de ativação por agonistas de Toll Like receptor 9 (TLR9) pode contribuir para avaliar o desequilíbrio imunológico encontrado na UCI. OBJETIVOS: Investigar a imunidade inata em pacientes com UCI e os mecanismos envolvidos na modulação da produção de IFN- por pDCs induzida pela ativação do TLR9. MÉTODOS: A secreção de IFN- e IL-10 por leucócitos de pacientes UCI (n=26) e indivíduos normais (Co, n=50) induzida pelo agonista de TLR9, CpGA (1.0 e 2.0M), ou IL12p40 induzida pelo ODN inibitório (ODN S) foi realizado por ensaio imunoenzimático. Quantificação de pDCs em sangue periférico, expressão de moléculas coestimulatórias, expressão intracelular de IFN- por pDCs e fosforilação de STAT (1 e 4) foram analisados por citometria de fluxo. Expressão do mRNA de TLR9 e fator regulador de interferon-7 foi realizado por real time PCR. A presença da pDC (CD123+) em lesões de pele de pacientes UCI foi avaliada por imunoistoquímica. RESULTADOS: Os resultados mostraram uma diminuição na produção de IFN- e IL-10 por leucócitos de pacientes UCI após estímulo com CpGA. O estímulo com ODN S induziu a produção de IL12p40 e suprimiu ainda mais a produção de IL-10 e IFN- induzida pelo CpGA, até 98% de inibição. O número de pDCs no sangue periférico e a capacidade de ativação da pDC nos pacientes, avaliada pela expressão de moléculas co-estimuladoras foi semelhante aos indivíduos normais. Além disto, foram detectadas raras pDCs nas lesões de pele dos pacientes. Um aumento constitutivo da fosforilação de STAT1 foi detectado em linfócitos não estimulados de pacientes UCI associado a uma diminuição da expressão de mRNA de TLR9 após estímulo com CpGA e alterada expressão de mRNA de IRF-7, que podem contribuir para a baixa produção de IFN-. CONCLUSÃO: Os achados mostram uma inibição na produção de IFN- via TLR9, tendo como alvo a pDC e sua participação na resposta inata na Urticária Crônica / INTRODUCTION: Chronic urticaria is a skin disorder characterized by recurrent and transitory itchy weals occurring regularly more than 6 weeks. The investigation of the innate immunity is an important parameter to understand the immunopathology of chronic dermatological diseases, such as Chronic Idiopathic Urticaria (CIU). Among the innate immune components, such as plasmacytoid dendritic cells (pDC) and their functional study activation thorough TLR-9 ligand could contribute to evaluate the immunologic disequilibrium founded in the CIU. OBJECTIVES: We decided to investigate innate immunity in CIU and the mechanisms implicated in the modulation of IFN- production by pDCs upon TLR9 activation. METHODS: The secretion of IFN- and IL-10 secretion by leucocytes of patients with CIU (n=26) and healthy control (HC, n=50) induced by TLR9 ligand, CpG type A (1.0 and 2.0M), or IL12p40 secretion induced by inhibitory ODN (ODN S) was assessed by enzyme-linked immunosorbent assay. Enumeration of pDC, coestimulatory molecules expression, intracellular IFN- expression, and STAT (1 and 4) phosphorylation were assessed by flow cytometry. TLR9 and interferon regulatory factor-7 mRNA transcripts were evaluated by real-time PCR. The presence of pDCs (CD123+) in the skin lesion of patients with CIU were assessed by means of immunohistochemistry staining. RESULTS: The findings showed a decreased IFN- and IL-10 secretion by leucocytes of CIU patients induced by CpGA. Inhibitory ODN was able to induce IL12p40 and further inhibited the IFN- secretion in both HC and patients achieving up 98% inhibition. A normal pDC percentage and degree of activation by costimulatory molecules expression was observed in CIU in patients was similar to control group. Moreover, rare presence of pDCs was detected in the skin lesion of patients. An increased constitutive STAT1 phosphorylation on non-stimulated lymphocytes and CpGA activation induced a down-regulation of TLR9 mRNA transcripts associated with altered IRF-7 along the time of CpG activation which may contribute to the decreased IFN- secretion. CONCLUSIONS: Altogether, the findings showed an impaired IFN- secretion via TLR-9, implicating innate immunity through pDCs as target in Chronic Urticaria

A eletroforese é uma técnica de separação que se baseia na migração diferencial de compostos iônicos em tubo capilar semicondutor, preenchido com solução eletrolítica, sob a influência de campo elétrico. Na introdução desta tese, princípios, métodos e diferentes tipos de técnicas de eletromigração em capilar foram discutidos. No primeiro capítulo são mostrados os resultados de otimização e validação de um método eletroforético para a determinação das glicoformas da ?1-Glicoproteína Ácida, um biomarcador. A otimização das condições eletroforéticas usando eletrólito de corrida constituído por tricina (10 mmol L-1), cloreto de sódio (10 mmol L-1), acetato de sódio (10 mmol L-1), ureia (7 mol L-1) e putrescina (3,9 mmol L-1), pH de 4,5, tensão de 30 kV, e temperatura de análise de 35 °C levou à resolução mínima de aproximadamente 1,5 entre as oito glicoformas encontradas. Todas as análises foram realizadas em um capilar de sílica fundida não revestido internamente, diâmetro interno de 50 µm e comprimento efetivo de 50,0 centímetros. Após a otimização, o método foi validado, em que a linearidade foi obtida no intervalo de 0,125 a 2,5 mg mL-1 (r >= 0,993). O coeficiente de variação (%) e erros relativos (%) obtidos nos estudos de precisão e exatidão, respectivamente, intra e inter-dias foram inferiores a 15 %. Após a validação o método foi aplicado para a análise da ?1-AGP em amostras de plasma de pacientes com sepse, o qual demonstrou uma variabilidade na concentração da glicoformas. No segundo capítulo, um método simples, rápido e econômico por eletroforese capilar, foi desenvolvido e validado para a determinação de Interferon alfa-2a, um biofármaco, em formulação farmacêutica. Após otimização, os melhores resultados foram obtidos utilizando solução tampão tetraborato de sódio 30 mmol L-1, e pH 8,50, com 50 mmol L-1 de dodecil sulfato de sódio. A tensão aplicada foi de 25 kV e a injeção da amostra foi realizada no modo hidrodinâmico. Todas as análises foram realizadas em capilar de sílica fundida não revestido internamente, diâmetro interno de 75 µm e comprimento efetivo de 50,0 centímetros. Sob estas condições, a análise foi realizada em menos de 10 min. A linearidade foi obtida no intervalo de 0,41-1,54 MUI mL-1 (r >= 0,997). O coeficiente de variação (%) e erros relativos (%) obtidos nos estudos de precisão e exatidão, respectivamente, intra e inter-dias foram inferiores a 5 %. Após a validação o método foi aplicado no controle de qualidade de formulações farmacêuticas contendo o Interferon alfa-2a. No terceiro capítulo, um método enantiosseletivo simples por eletroforese capilar usando ciclodrextrina como seletor quiral foi desenvolvido e validado para a determinação dos enantiômeros da isradipina, um bloqueador de canal de cálcio, em formulação farmacêutica. Além disso, foi realizado estudo de estabilidade dos enantiômeros da isradipina submetidos à oxidação, hidrólise (ácida e alcalina) e fotólise. A resolução completa dos enantiômeros da isradipina foi obtida em menos de 7 minutos utilizando solução tampão borato de sódio 15 mmol L-1 e pH 9,3 e sulfobutil éter-?-ciclodextrina (2,5 %, m/v) como seletor quiral. A tensão aplicada foi de 30 kV, e a injeção da amostra foi realizada no modo hidrodinâmico. Todas as análises foram efetuadas em capilar de sílica fundida não revestido internamente e diâmetro interno de 50 µm e comprimento efetivo de 50 centímetros. A linearidade foi obtida no intervalo de 25 - 150 µg mL-1 para ambos enantiômeros (r >= 0,998). O coeficiente de variação (%) e erros relativos (%) obtidos nos estudos de precisão e exatidão, respectivamente, intra e inter-dias foram inferiores a 5 %. Após o método ter sido validado, este foi aplicado na análise de formulações farmacêuticas contendo os enantiômeros da isradipina. Nos estudos de estabilidade foi observada degradação dos enantiômeros em todas as condições avaliadas. Assim, de acordo com os resultados obtidos após o desenvolvimento dos três métodos, pode ser concluido que a eletroforese capilar é uma poderosa técnica de separação com aplicações na investigação, desenvolvimento, controle de qualidade e estudos de estabilidade de produtos farmacêuticos. Além disso, a eletroforese capilar é uma técnica complementar à cromatografia líquida de alta eficiência, que oferece vantagens como simplicidade, rapidez, baixo custo e consumo de solventes e reagentes e diferentes mecanismos de seletividade, podendo ser aplicada em diferentes tipos de amostras. / Electrophoresis is a separation technique that is based on the differential migration of charged compounds in a semi-conductive medium under the influence of an electric field. In the introduction of this thesis, principles, methods, and different types of electromigrations techniques in capillary were discussed. In the first chapter shows the results of optimization and validation of a electrophoretic method for determining the glycoforms of ?1-AGP. The running buffer after optimization consisted of Tricine (10 mmol L-1), sodium chloride (10 mmol L-1), sodium acetate (10 mmol L-1), urea (7 mol L-1) and putrescine (3.9 mmol L-1), pH 4.5, voltage (30 kV), temperature and analysis (35 ° C) led to resolution of at least of 1.5 among the eight glycoforms found. All analyses were carried out in a fused-silica uncoated capillary with an id of 50 ?m and effective length of 50.0 cm. After optimization method was validated in which the linearity was obtained in the range to 0.125 to 2.5 mg mL-1 (r >= 0.993). The coefficient of variation (%) and relative errors (%) obtained in the studies of precision and accuracy, respectively (intra-day and inter-day) were less than 15 %. After method validation, the analysis of ?1-AGP in plasma of septic patients was performed, which showed variability in the concentration of glycoforms. In the second chapter a simple CE based method was developed and validated for the determination of Interferon alpha-2a in a pharmaceutical formulation. After optimization, the best results were obtained using 30 mmol L-1 tetraborate buffer at pH 8.50 with 50 mmol L-1 of sodium dodecyl sulfate. The applied voltage was 25 kV, and the sample injection was performed in the hydrodynamic mode. All analyses were carried out in a fused-silica uncoated capillary with an id of 75 ?m and effective length of 50.0 cm. Under these conditions, the analysis was achieved in less than 10 min. Linearity was obtained in the range 0.41-1.54 MIU mL-1 (r >= 0.997). The RSD (%) and relative errors (%) obtained in precision and accuracy studies (intra-day and inter-day) were lower than 5 %. Therefore, this method was found to be appropriate for controlling pharmaceutical formulations containing Interferon alpha-2a. In the third chapter a simple enantioselective method based on CE using CD as chiral selector was developed and validated for the determination of isradipine (IRD) enantiomers in a pharmaceutical formulation and for the determination of IRD enantiomers in degradation studies. After optimization, the best results were obtained using 15 mmol L-1 borate buffer at pH 9.3 and sulfobutyl ether-?-cyclodextrin (SBE-?-CD) (2.5 %, w/v) as chiral selector. The applied voltage was 30 kV, and the sample injection was performed in the hydrodynamic mode. All analyses were carried out in a fused-silica uncoated capillary with an internal diameter of 50 ?m and effective length of 50 cm. Under these conditions, a complete separation between IRD enantiomers was achieved in less than 7 min. Linearity was obtained in the range 25 - 150 ?g mL-1 for both enantiomers (r >= 0.998). The RSD (%) and relative errors (%) obtained in precision and accuracy studies (intra-day and inter-day) were lower than 5 %. Therefore, this method was found to be appropriate for controlling pharmaceutical formulations containing IRD enantiomers and the assay was considered stability indicating. The drug was subjected to oxidation, hydrolysis and photolysis. In all stress conditions the drug presented considerable degradation. According to such results, the capillary electrophoresis showed is a powerful separation technique to research and development, quality control, and stability studies of pharmaceuticals. CE offers several advantages over high-performance liquid chromatography (HPLC), a technique commonly used in pharmaceutical analysis. These include simplicity, rapid analysis, automation, different mechanisms for selectivity, and low cost.

INTRODUÇÃO: Manifestações auto-imunes são frequentes na infecção pelo vírus da hepatite C (VHC). Apesar da associação com doenças auto-imunes de tireóide (DAIT) ser controversa, sabe-se que distúrbios tireoidianos podem surgir ou piorar com tratamento com IFN e ribavirina. Os objetivos deste estudo foram avaliar a função tireoidiana em pacientes infectados pelo VHC, caracterizar distúrbios tireoidianos antes, durante e após tratamento com IFN e estudar as frequências dos genótipos dos polimorfismos do gene CTLA4, correlacionando-os com características clínicas e laboratoriais, presença de disfunção tireoidiana e evolução durante tratamento com IFN. MÉTODOS: Avaliação prospectiva de 112 indivíduos com infecção crônica pelo VHC, 30 tratados com IFN, e 183 controles. Realizaram-se avaliações clínica, hormonal e de auto-imunidade tireoidiana e ultra-sonografia de tireóide no início e durante tratamento. Avaliações de globulina transportadora de hormônios tireoidianos (TBG), de CXCL10 e de biópsia hepática foram feitas pré-tratamento. Análises dos polimorfismos do gene CTLA4 -318C>T, A49G e CT60 foram realizadas por PCR-RFLP e de AT(n) por análise de fragmento através de eletroforese capilar. RESULTADOS: A frequência de DAIT entre infectados por VHC não diferiu dos controles (10,7 vs 13,5%, p=0,585). Os limites de distribuição dos níveis de T3 (T3T) e T4 (T4T) totais foram superiores aos de referência (T3T 112-246 ng/dL; T4T 7,8-15,2 g/dL), assim como de TBG (17-47 mg/L). TBG correlacionou-se com T3T (r=0,654, p<0,001) e T4T (r=0,741, p<0,001). Heterogeneidade (p=0,027) e hipoecogenicidade de parênquima (p=0,002) foram mais frequentes nos pacientes com DAIT. Aumento de vascularização esteve presente em 49,2% dos infectados sem distúrbio tireoidiano. CXCL10 esteve aumentada nos infectados (p=0,006), mas não se relacionou com disfunção tireoidiana. Sua elevação correspondeu ao grau de atividade necro-inflamatória na biópsia hepática (p=0,006) e correlacionou-se com T3T (r=0,388, p=0,003), T4T (r=0,444, p=0,001) e TBG (r=0,551, p<0,001). Dezenove por cento dos pacientes desenvolveram tireoidites auto-imunes por IFN e 16% não auto-imunes. Em 14 pacientes sem alteração tireoidiana durante o uso de IFN, T3T diminuiu ao longo de 12 meses (p=0,038) concomitante à queda de ALT (p=0,055). T4T diminuiu com 3 (p=0,039) e 12 meses (p=0,008), T4 livre e TSH permaneceram estáveis. Encontrou-se maior frequência de oito repetições AT na região 3UTR do gene CTLA4 nos infectados por VHC (p=0,019). O alelo C do polimorfismo -318C>T esteve relacionado com infecção pelos genótipos 1 (p=0,020, OR 0,19) e 3 (p=0,008, OR 9,13), assim como o alelo G do polimorfismo A49G (p=0,002, OR 0,38 e p=0,004, OR 2,49, respectivamente). Não se identificou relação dos polimorfismos do gene CTLA4 com distúrbios tireoidianos, antes ou após tratamento com IFN. CONCLUSÕES: Não foi encontrada associação entre infecção por VHC e doenças tireoidianas. Indivíduos infectados por VHC têm maiores níveis de T3T e T4T, correlacionados com TBG. Aumento de CXCL10 não se associou com disfunção tireoidiana, mas se correlacionou com TBG, T3T e T4T. IFN provocou tireoidites auto-imunes e não auto-imunes, além de reduzir T3T e T4T coincidente com melhora de lesão hepática. Não se encontrou relação dos polimorfismos do gene CTLA4 com características clínicas e laboratoriais ou presença de disfunção tireoidiana prévia ou induzida por IFN / INTRODUCTION: Autoimmune disorders are frequent in patients infected by the hepatitis C virus (HCV). Although the association with autoimmune thyroid diseases (AITD) is controversial, thyroid disturbance could occur or worsen with IFN and ribavirin treatment. The aims of the study were evaluate thyroid function in HCV-infected patients, characterize thyroid disturbance prior and after IFN treatment and analyze the frequency of the genotypes of the polymorphisms of CTLA4 gene, and their relation to clinical and laboratorial features, presence of thyroid dysfunction and disturbance along IFN treatment. METHODS: Prospective evaluation of 112 chronically HCV-infected subjects, 30 treated with IFN, and 183 controls. Clinical, hormonal, thyroid autoimmunity and ultrasound exams were performed before and during treatment. Thyroxine-binding globulin (TBG), CXCL10 and hepatic biopsies were also evaluated before treatment. Analysis of polymorphisms of CTLA4 gene -318C>T, A49G and CT60 were made by PCR-RFLP and AT(n) polymorphism analysis by capillary electrophoresis in automatic sequencer. RESULTS: The frequency of AITD among HCV-infected subjects was similar to the rate among controls (10.7 vs 13.5%, p=0.585). Total T3 (T3T) and T4 (T4T) distributions were right shifted (T3T 112-246 ng/dL; T4T 7.8-15.2 g/dL), as was TBG (17-47 mg/L). TBG correlated to both T3T (r=0.654, p<0.001) and T4T (r=0.741, p<0.001). Thyroid heterogeneity (p=0.027) and hipoechogenicity (p=0.002) were associated with AITD and, most notably, increased vascularization was present in 49.2% of HCV-infected patients without thyroid disturbance. CXCL10 was higher in HCV-infected group (p=0.006) but was not related to thyroid dysfunction. Increase in CXCL10 levels were consistent with hepatic necroinflammatory activity (p=0.006) and correlated to T3T (r=0.388, p=0.003), T4T (r=0.444, p=0.001) and TBG (r=0.551, p<0.001). Nineteen percent of subjects treated with IFN presented autoimmune thyroiditis and 16% had non-autoimmune thyroiditis. In 14 subjects without IFN-induced thyroid dysfunction, T3T decreased along 12 months of follow-up (p=0.038) concomitant to ALT decrease (p=0.055). T4T decreased within 3 (p=0.039) and 12 months (p=0.008), while both free T4 and TSH remained stable. Eight AT repetitions in 3UTR site of the CTLA4 gene were more frequent among HCV-infected subjects. The C allele of -318C>T polymorphism was associated with genotype 1 (p=0.020, OR 0.19) and 3 infections (p=0.008, OR 9.13), similar to allele G of A49G polymorphism (p=0.002, OR 0.38 and p=0.004, OR 2.49, respectively). No association of the polymorphisms of CTLA4 gene and thyroid disorders, prior or induced by IFN treatment, was found. CONCLUSIONS: No association between HCV-infection and thyroid diseases was found. HCV-infected subjects had higher T3T and T4T which were correlated to TBG. Increased CXCL10 was not associated to thyroid dysfunction, but correlated to TBG, T3T and T4T. IFN induced autoimmune and non-autoimmune thyroiditis. IFN also reduced T3T and T4T levels commensurately with liver improvement. The polymorphisms of CTLA4 gene were not associated with clinical and laboratorial features or presence of thyroid dysfunction, prior or induced by IFN