Este trabalho visa avançar o conhecimento sobre a interferência da nicotina no protocolo de treino forçado em gerbilos isquêmicos. Utilizamos 110 Gerbilos, distribuídos em 11 grupos. Grupo controle com animais ingênuos (C), falso operado (S) e isquêmicos (I). Grupos nicotina (CN, SN, SNE, IN e INE) e salina (CS, SS, IS) com ou sem treinamento. Os animais receberam uma injeção de 2mg/kg de nicotina ou salina durante 9 dias. Utilizamos uma esteira motorizada (treino contínuo, 5 dias, 5m/min por 15 minutos), um monitor de atividades e o Rota Rod. Os resultados foram analisados por uma ANOVA e pós teste de Holm-Sidak, p<0,05. Observamos aumento de apresentação de todos comportamentos no monitor de atividades, o CN maior do que os C, S, SS, SNE e INE, o SN maior do que o SNE, o I maior do que os C, S, SS, SNE, IS, INE e ainda, o IN maior do que os C, S, SS, SNE, IS e INE (cruzamento, F10,93 = 2,97), (distância, F10,93 = 2,79), (velocidade, F10,93 = 2,79) e (atividade, F10,93 = 2,81). No Rota Rod o CN apresentou maior tempo de permanência com relação aos outros grupos exceto SNE, já o SNE, em relação aos CS, S, SN, I, IN e o I menor tempo de permanência do que o C e INE (F10,93 = 3,35). Nos grupos I e IS observamos menor densidade de neurônios no hipocampo (F6,42 = 31,02), córtex motor M1 (F6,42 = 4,01) e estriado (F6,42 = 23,33). A nicotina não interferiu com a melhora do comportamento dos animais isquêmicos. / This work aims to advance the knowledge about the interference of nicotine in the forced training protocol in ischemic gerbils. We use 110 gerbils, distributed in 11 groups. Control (C), false operated (S) and ischemic (I). Nicotine groups (CN, SN, SNE, IN INE) and sham (CS, SS, SI) with or without training. The animals received an injection of 2mg/kg of nicotine or saline for 9 days. We use a treadmill (continuous training 5 days, 5m / min for 15 minutes), an activity monitor and the Rota Rod (RR). The results were analyzed by an ANOVA and post Holm-Sidak test, p <0.05. We observed increased in all behaviors in the activity monitor, increase of CN than C, S, SS and NSS INE, SN increase compared to NES, the I increase than C, S, SS, ENS, S, NSI and also the IN showed an increase compared to C, S, SS, SNE, SI and NSI (crossing, F10,93 = 2,97), (distance, F10,93 = 2,79), (speed, F10,93 = 2,79) and (activity, F10,93 = 2,81). In RR, CN showed an increase of time spent with the other groups except SNE, and an increase in the SNE, compared to the CS, S, SN, I, IN and I showed an decrease of time compared to C and INE (F10,93 = 3,35). In groups I and and IS we observed an decrease of neurons density in the hippocampus (F6,42 = 31,02), motor cortex M1 (F6,42 = 4,01) and striatum (F6,42 = 23,33). Nicotine did not interfere with the improvement of motor behavior in ischemic animals.

Introdução: A isquemia-reperfusão hepática é um fenômeno inerente aos procedimentos cirúrgicos sobre o fígado. Descrita pela primeira vez em 1975, apresenta efeitos maléficos tanto locais quanto sistêmicos que aumentam a morbidade e mortalidade dos pacientes. Dentre as formas de se atenuar o processo, a utilização de drogas anti-inflamatórias como a solução salina hipertônica a 7,5% (SSH) e a pentoxifilina vêm sendo testadas com este propósito. As duas substâncias foram utilizadas conjuntamente (HPTX) em modelos experimentais em choque hemorrágico. Contudo, na isquemia-reperfusão de origem hepática, estas foram administradas apenas isoladamente, o que torna o presente estudo pioneiro nesta avaliação. Objetivo: Avaliar os efeitos da solução salina hipertônica a 7,5% associada a pentoxifilina na isquemia-reperfusão hepática. Métodos: Foram utilizados 138 ratos Wistar divididos em quatro grupos de acordo com o tratamento empregado: GC - grupo controle (sem tratamento), SSF - solução salina fisiológica, SSH - solução salina hipertônica a 7,5% e HPTX solução salina hipertônica a 7,5% associada a pentoxifilina. A isquemia hepática foi realizada seletivamente sobre o pedículo comum do lobo mediano e ântero-lateral esquerdo pelo período de 60 minutos. As soluções foram administradas 15 minutos antes da reperfusão hepática. No sangue, foram analisadas as dosagens de transaminases hepáticas nos períodos de quatro e 12 horas e, interleucina-6 e interleucina-10 no período de 12 horas. No tecido pulmonar foram avaliadas as dosagens de azul de Evans e mieloperoxidase pulmonar nos períodos de quatro e 12 horas e, no tecido hepático do lobo isquêmico e não-isquêmico foram analisadas as dosagens de malondialdeído e a avaliação da respiração mitocondrial no período de quatro horas e a histologia nos períodos de quatro, 12 e 24 horas. Resultados: Os grupos tratados com SSH isolada ou em conjunto com a pentoxifilina apresentaram níveis significantemente menores (p<0,05) nas dosagens de transaminases e interleucina-6 em comparação aos outros dois grupos (GC e SSF). Resultados semelhantes entre os grupos foram observados no tecido pulmonar através da análise do azul de Evans e mieloperoxidase pulmonar em quatro e 12 horas e no tecido hepático com relação à respiração mitocondrial. No grupo no qual se adicionou pentoxifilina, houve diminuição estatisticamente significante da peroxidação lipídica e da permeabilidade pulmonar tardia quando comparado ao grupo SSH. Conclusões: A utilização em conjunto das duas soluções reduziu: a resposta inflamatória sistêmica; as lesões histológicas e funcionais do fígado; o estresse oxidativo e a permeabilidade pulmonar / Introduction: The liver ischemia/reperfusion (I/R) injury caused by prolonged ischemia time triggers frequently a systemic inflammatory syndrome leading to remote organ damage. Previous studies have shown that resuscitation with hypertonic saline and pentoxifylline (HPTX) attenuates hemorrhagic shock-induced injury when compared with Ringers lactate. However, it remains unclear if the HPTX protective effect occurs on liver I/R-induced injury, and if this effect overcomes the benefits of HTS used alone. Objective: Evaluated the effects of the combination of hypertonic saline solution (HTS) and pentoxifylline (PTX) on liver I/R injury in rats. Method: One hundred thirty eigth male Wistar rats underwent to one hour of partial liver ischemia performed by clamping the pedicle from the medium and left lateral lobes. Rats were divided into 4 groups: ischemia control group (C), normal saline (0.9% NaCl, 34ml/Kg) treated group (NS), hypertonic saline (7.5%NaCl, 0.4ml/Kg) treated group (HTS), and 7.5% NaCl (0.4ml/Kg) + PTX (25mg/Kg) treated group (HPTX). Samples were collected 4, 12 and 24 hours after reperfusion for determinations of serum AST, ALT, IL-6, and IL-10 levels, liver histology, liver mitochondrial oxidation and phosphorylation, and lipid peroxidation and pulmonary vascular permeability and myeloperoxidase (MPO). Results: The results showed a significant decrease in AST and ALT serum levels in HTS and HPTX groups compared to C and NS groups. Also a significant decrease in mitochondrial dysfunction was observed in HTS and HPTX groups compared to C and NS groups. The oxidative stress was significant decreased in HPTX group compared to C, NS and HTS groups in both ischemic and non-ischemic liver lobes. Elevation in serum IL-6 was significantly lower in HTS and HPTX groups compared to C and NS groups, but there was no difference in IL-10 levels. Pulmonary vascular permeability was significantly lower in groups HTS and HPTX compared with NS group, and even lower in HPTX group compared to HTS group (P < .05). Conclusion: These data suggest that addition of pentoxifylline to hypertonic saline solution decreases the inflammatory response of the liver ischemia/reperfusion injury, decreasing the liver damage as well the pulmonary injury

A encefalopatia hipóxico-isquêmica neonatal é uma causa importante de dano cerebral que ocorre durante o desenvolvimento cerebral podendo levar a seqüelas neurológicas de grande impacto na vida do indivíduo. Outra condição que afeta o desenvolvimento neurológico é o estado nutricional. A desnutrição durante o período perinatal afeta vários aspectos do desenvolvimento neural, incluindo alterações morfológicas, bioquímicas e comportamentais. Além disso, a desnutrição pode influenciar diferentes etapas da cascata de eventos fisiopatológicos responsáveis pelo dano cerebral hipóxico-isquêmico. Este trabalho teve por objetivo estudar os efeitos da desnutrição protéica gestacional e lactacional sobre parâmetros bioquímicos, comportamentais e morfológicos em ratos submetidos à hipóxia-isquemia neonatal. Ratas Wistar foram submetidas à restrição protéica durante a gestação e a lactação (grupo controle: 25% de proteína de soja e grupo desnutrido: 7% de proteína). Aos sete dias de vida pósnatal, seus filhotes foram submetidos ao procedimento de hipóxia-isquemia cerebral unilateral. Esses animais foram quanto a parâmetros bioquímicos aos 7 dias de vida, comprtamentais, aos 7 e 60 dias de vida e morfológicos aos 60 dias. Os animais apresentaram marcada redução de peso corporal durante o período lactacional. Aos 60 dias, quando sacrificados, os animais desnutridos apresentavam peso encefálico significativamente menor. O estado oxidativo celular foi avaliado 4 horas após o final da hipóxia, não tendo sido encontradas alterações na formação de radicais livres, lipoperoxidação, danos a proteínas e sistemas de defesa antioxidante. Não foram observados atrasos no desenvolvimento motor, quanto ao fator dieta, nem quanto ao fator hipóxiaisquemia nos animais de 7 e 60 dias de vida, observados pelos testes de geotaxia negativa, reflexo de endireitamento, preensão palmar, Rota-rod e campo aberto. Foi encontrado um prejuízo ao sitema olfatório dos animais, medido pela capacidade dos animais em encontrar seus ninhos, sendo esse prejuízo significativamente maior nos animais hipóxico-isquêmicos desnutridos, o que indica uma interação entre a dieta e a hipóxia-isquemia neonatal. Quanto ao dano morfológico ocasionado pelo evento hipóxico-isquêmico, foi verificada uma diminuição do dano hemisférico gerado pela HI nos animais desnutridos. Com base nestes resultados, podemos sugerir que ocorreu uma adaptação relativa à adversidade metabólica aguda (privação de oxigênio e glicose da hipóxiaisquemia) nos animais submetidos à dieta hipoprotéica, parecendo haver, ao menos com relação a alguns dos parâmetros avaliados, um caráter protetor gerado pela desnutrição protéica.

Os gangliosídios são glicoesfingolipídios caracterizados pela presença de ácido siálico em sua estrutura química e por suas altas concentrações nas membranas das células do sistema nervoso, além de desempenharem importantes funções celulares, como diferenciação, comunicação, maturação, plasticidade neuronal, entre outras. A isquemia cerebral está entre as principais causas de mortalidade e morbidade em todo o mundo, o que torna essa patologia alvo de muitos estudos para o entendimento dos mecanismos desencadeados que levam à morte neuronal, e ao mesmo tempo, com o objetivo de descobrir novos tratamentos farmacológicos. Neste estudo investigamos a ação neuroprotetora dos polifenóis resveratrol e daidzeína associando-a ao efeito destas substâncias sobre o perfil cromatográfico dos gangliosídios. Para isso, foi utilizado um modelo in vitro de privação de oxigênio-glicose (POG) em culturas organotípicas de hipocampo de rato. Nossos resultados demonstraram que o tratamento com ambos polifenóis diminuiu significativamente a morte celular induzida pela POG. Através da análise do perfil cromatográfico dos gangliosídios, podemos observar uma diminuição de expressão para o gangliosídio GM1 no grupo POG, o que não aconteceu nos grupos POG tratados com os polifenóis. Além disso, os resultados de imuno-histoquímica analisados por microscopia confocal, permitiram visualizar uma maior fluorescência de GM1 localizada na região dos neurônios hipocampais, marcados pela proteína NeuN. Portanto, esses resultados sugerem que a ação neuroprotetora dos polifenóis possa ocorrer através da expressão do gangliosídio GM1 em neurônios hipocampais, prevenindo desta forma, a morte celular. / The gangliosides are glycosphingolipids characterized by the presence of sialic acid in their chemical structure and by their high concentrations in the nervous system cell membranes. Besides this, they have important cellular functions such as differentiation, communication, maturation, neuronal plasticity among others. Cerebral ischemia is one of the main causes of morbidity and mortality worldwide, making this disease the subject of many studies to understand the mechanisms that trigger the neuronal death. At the same time, the discovery of drugs that target these mechamisms could lead to new pharmacological treatments. We investigated the neuroprotective action of the polyphenols resveratrol and daidzein associating it to their effect on the chromatographic profile of gangliosides. For this, we used an in vitro model of oxygen-glucose deprivation (OGD) in organotypic cultures of rat hippocampus. Our results demonstrated that treatment with both polyphenols significantly decreased cell death induced by OGD. Through analysis of the chromatographic gangliosides profile, a decrease of GM1 ganglioside expression in OGD group was observed, which did not happen in the OGD groups treated with polyphenols. Furthermore, immunohistochemistry analysis by confocal microscopy, showed a greater GM1 fluorescence located in the region of hippocampal neurons, marked by NeuN protein. These results suggest that the polyphenols neuroprotective action may occur at the level of GM1 ganglioside expression in hippocampal neurons and may prevent cellular death.

Orientador: Maria Aparecida Coelho de Arruda Henry / Coorientador: Arthur Oscar Schelp / Coorientador: Roberta Gonçalves da Silva / Banca: Célia Maria Giacheti / Banca: Luiz Roberto Lopes / Resumo: Estudos têm proposto a utilização da Escala Internacional de Acidente Vascular Cerebral do Instituto Nacional de Saúde (NIHSS) como um instrumento de triagem, como preditor clínico da presença de disfagia orofaríngea e indicador de via de alimentação nos indivíduos pós-AVC, mesmo este não pontuando o distúrbio de deglutição. No entanto, a maioria deles preconizou o uso de parâmetros clínicos na avaliação da deglutição, o que dificulta a identificação de alterações específicas que podem direcionar a conduta sobre a via e consistência de alimentação. Sendo assim, este estudo teve como objetivo verificar a correlação entre a pontuação obtida no NIHSS e a presença de penetração laríngea e aspiração laringotraqueal nos indivíduos pós-AVC isquêmico, utilizando o exame de videofluoroscopia da deglutição. Participaram deste estudo 74 indivíduos pós-AVC isquêmico submetidos à avaliação neurológica e aplicação do NIHSS. Os indivíduos foram divididos em quatro grupos conforme a gravidade do AVC na pontuação do NIHSS, sendo G1 (0-4 pontos), G2 (5-10), G3 (11-20) e G4 (≥ 20). Destes indivíduos, dois foram excluídos da avaliação fonoaudiológica da deglutição por apresentarem comprometimento neurológico grave mensurado pelo NIHSS. 72 indivíduos foram submetidos à avaliação fonoaudiológica clinica e ao exame videofluoroscópico da deglutição, realizados no mesmo dia, com o pastoso fino e líquido ralo, observando a presença de penetração laríngea e aspiração laringotraqueal. Foi verificada a ausência de correlação estatisticamente significante entre a pontuação no NIHSS e a presença de penetração laríngea com pastoso fino ... / Abstract: The use of the National Institutes of Health Stroke Scale (NIHSS) have been proposed as a screening tool, as clinical predictors of the presence of oropharyngeal dysphagia and an indicator of the safe way of feeding in individuals after stroke, even these not scoring the swallowing disorder. However, most studies recommend the use of clinical parameters in evaluating of swallowing, which hinder identification of specific alterations that could help to decide the way of feeding and the safe consistency. Therefore, this study aimed to determine the correlation between the NIHSS score and the presence of laryngeal penetration and tracheal aspiration in individuals after ischemic stroke, using videofluoroscopic evaluation of swallowing. Seventy-four after ischemic stroke individuals were evaluated; they had been submitted to neurological and NIHSS evaluation. They were divided into four groups according to the severity of stroke in NIHSS score, G1 (0-4 points), G2 (5-10 points), G3 (11-20 points) and G4 (≥ 20 points). Two of these individuals were excluded from the swallowing clinical assessment because they have severe neurological impairment measured by NIHSS. Seventy two subjects were submitted to swallowing clinical evaluation and videofluoroscopy of swallowing, performed on the same day, using thin pasty e liquid consistencies , observing the presence of laryngeal penetration and tracheal aspiration. The absence of a statistically significant correlation between the NIHSS score and the presence of laryngeal penetration with thin pasty (P = 0.3270) and liquid (P= 0.8138) was verified. Likewise, there was no correction between the NIHSS and the presence of tracheal aspiration with thin pastoso (P = 0.3714) and liquid (P=0.6292). The laryngeal penetration occurred in only 06 (8.33%) individuals with thin pasty, distributed in G1 (66.6%) and G2 (33.3%) of the NIHSS. With liquid, laryngeal penetration ... / Mestre

Orientador: Renée Laufer Amorim / Coorientador: José Luiz Laus / Banca: Juliany Quitzan Gomes / Banca: Alvio Isao Shiguematsu / Resumo: Não disponível / Abstract: Purpose: The aims of this study were to better understand the mechanism of cell death by apoptosis in a glaucoma model (ischemia / reperfusion) and evaluate the role of apoptosis in this model and if treatment with Sildenafil helps prevent apoptosis. Methods: 36 rats, from 4 to 6 months, males, Lewis and weighing ± 350g were divided in 5 groups: control group (6 animals) and for groups with ischemia / reperfusion (7 and 21 days), two groups consisting of ten animals treated with sildenafil and two groups of Five animals treated with placebo. Paracentesis of the anterior chamber with needle 30G coupled to saline (0.9%) was made and maintained for 60 minutes. Intraocular pressure was measured by rebound tonometer (Tonovet®). There was histological, morphometric by hematoxylin and eosin and, immunohistochemical staining and qRT-PCR analysis by Caspase-7, Caspase-6, Caspase-9, Tnf-r2, Fas-l, Bcl-2 and Bax. For statistic analysis we used ANOVA and t-test for morphometric analysis and, for immunohistochemistry and qRT-PCR, Fisher exact test was employed with a statistical significance level of p <0.05 Results: Histology and morphometric analysis, proved more changes in the untreated group compared to the treatment and control group. Analysis of immunohistochemistry and qRT-PCR observed the more significant expression in untreated eyes. Conclusion: Sildenafil apperead to be protective to ganglion cell apoptosis. Cell survival was evident in histology and morphometry. For immunohistochemistry and RT-PCR was observed protective effect in the apoptosis pathways with similar or below expression compared to the control / Mestre

Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / Investigar os efeitos da ornitina &#945;-cetoglutarato (OKG) no sangue e mÃsculo gastrocnÃmio de ratos submetidos à isquemia-reperfusÃo do membro pÃlvico. MÃtodo - Quarenta e dois ratos foram distribuÃdos aleatoriamente em trÃs grupos: Sham (S), Isquemia (I) e Isquemia-reperfusÃo (R). Estes grupos foram distribuÃdos em subgrupos de acordo com o tempo e com o composto utilizado na gavagem. Todos os animais receberam gavagem de caseinato de cÃlcio ou OKG em dose Ãnica, noventa minutos antes da primeira laparotomia exploradora (LE). Os subgrupos S receberam apenas caseinato, os subgrupos I e R receberam caseinato ou OKG na mesma dose, de 5g/kg de peso. As amostras foram colhidas em trÃs momentos: imediatamente apÃs a LE; apÃs 6h da LE com isquemia (6h de isquemia) e sem isquemia e apÃs 6,5h da LE com isquemia-reperfusÃo (0,5h de reperfusÃo) e sem isquemia-reperfusÃo. Para anÃlise dos resultados foram utilizados: mÃdia, desvio padrÃo e teste de normalidade de Korogorov-Smirnov. Caso os resultados fossem normalizÃveis, aplicou-se o teste ANOVA para avaliaÃÃo de diferenÃa significante, no caso dos resultados nÃo serem normalizÃveis utilizou-se o teste de Kurskal-Wallis com o mesmo fim. Em todos os testes fixou-se em 0,05 ou 5%, a significÃncia estatÃstica. Resultados - No grupo S, nos metabÃlitos plasmÃticos, apÃs 6h e 6,5h da LE, quando comparados ao momento da LE (0h), houve aumento de: CPK 6h [141,83  47,88 versus 67,17  21,58 â p<0,004], CPK 6,5h [180,67  70,19 versus 67,17  21,58 â p<0,001]; LDH 6h [248,96  80,62 versus 74,40  33,84 â p<0,001]. Nos metabÃlitos musculares houve aumento de: lactato 6,5h [ 3,52  1,27 versus 1,57  0,76 â p<0,008]. Houve reduÃÃo de: piruvato 6h [0,035  0,024 versus 0,087  0,041 â p<0,004]. No grupo I foram observadas, para o subgrupo submetido à isquemia + caseinato em relaÃÃo ao sham, no plasma, elevaÃÃes em: CPK [635,17  231,71 versus 141,83  47,88 â p<0,001], LDH [551,16  142,63 versus 248,96  80,62 â p<0,002], piruvato [0,390  0,069 versus 0,061  0,045 â p<0,001]. No mÃsculo houve elevaÃÃo de: piruvato [0,127  0,044 versus 0,035  0,024 â p<0,002], lactato [8,158  0,717 versus 2,737  0,499 â p<0,001] e TBARS [0,012  0,004 versus 0,002  0,001 â p<0,001. Neste mesmo grupo comparando-se o subgrupo isquemia + OKG ao subgrupo sham encontrou-se, no plasma, elevaÃÃo em: CPK [868,17  308,30 versus 141,83  47,88 â p<0,001], glutationa [19,545  2,088 versus 6,432  1,062 â p<0,001] e no mÃsculo elevaÃÃo da glutationa [101,85  16,45 versus 14,73  0,87 p<0,001]. Ainda no grupo I, foi observado, para o subgrupo isquemia + OKG versus isquemia + caseinato, no plasma, queda em: LDH [296,26  93,62 versus 551,16  142,62 â p<0,004], glicose [104,16  20,81 versus 160,33  27,47 â p<0,001], piruvato [0,046  0,012 versus 0,390  0,069 â p<0,001], e elevaÃÃo de glutationa [19,54  2,08 versus 5,52  0,92 â p<0,001]. No mÃsculo foi evidenciada diminuiÃÃo do piruvato [0,047  0,031 versus 0,127  0,045 â p<0,004], lactato [2,47  0,74 versus 8,15  0,71 â p<0,001], TBARS [0,004  0,004 versus 0,012  0,004 â p<0,013] e elevaÃÃo glutationa [101,85  16,45 versus 14,44  2,09 â p<0,001]. No grupo R. foi observada, quando comparado o subgrupo reperfusÃo + caseinato ao Sham, no plasma, elevaÃÃo de: CPK [606,33  79,84 versus 180,66  70,19 â p<0,001], No mÃsculo elevaÃÃo do piruvato [0,065  0,027 versus 0,030  0,033 â p<0,047] e lactato [7,16  2,33 versus 3,52  1,27 â p<0,013] alÃm de queda na G6PDH [0,462Â0,22 versus 0,207Â0,22 p<0,04] . No grupo R quando comparado o subgrupo reperfusÃo + OKG ao subgrupo Sham, no plasma, foi evidenciado aumento em: CPK [558,00  102,83 versus 180,66  70,19 â p<0,001] e glicose [232,16  59,76 versus 118,16  24,22 â p<0,001]. No mÃsculo houve diminuiÃÃo de G6PDH [0,182Â0,22 versus 0,462Â0,22]. Ainda no grupo R quando comparado o subgrupo reperfusÃo + OKG ao reperfusÃo + caseinato, no plasma, houve elevaÃÃo da glicose [232,16  59,76 versus 158,00  24,20 â p<0,013]. No mÃsculo foi notada queda no lactato [3,63  1,16 versus 7,16  2,33 â p<0,008] e elevaÃÃo da glutationa [63,18  18,98 versus 16,17  1,96 â p<0,001]. ConclusÃes - O trauma cirÃrgico desencadeou alteraÃÃes significativas em alguns metabÃlitos estudados. O modelo de isquemia-reperfusÃo demonstrou efetividade. A OKG, em dose Ãnica por gavagem, demonstrou aÃÃes prÃ-glicolÃticas aerÃbica a nÃvel muscular e sistÃmico; proteÃÃo contra lesÃo da cÃlula muscular, e efeito antioxidante muscular e sistÃmico durante a lesÃo de isquemia quanto apÃs lesÃo de isquemia/reperfusÃo. / To investigate the effects of the ornitine &#945;-ketoglutarate (OKG) upon metabolites in vivo concentrations in whole blood and gastrocnemic muscle tissue of rats submitted to ischemia-reperfusion of the pelvic limb. Methods - Forty two rats were randomly distributed into three groups: Sham (S), Ischemia (I) and Ischemia-reperfusion (R). These groups were redistributed into subgroups, according to time and to the substance used in the gavage. All animals received via gavage calcium caseinate or OKG as a single dose, ninety minutes before the first laparotomy (L). The subgroup S received only caseinate, whereas subgroups I and R received caseinate or OKG, at the same dose of 5g/kg body weight. Samples were collected at three moments: immediately after L; after 6h with ischemia (ischemia of 6h) or without ischemia; and after 6,5h of L with ischemia-reperfusion (reperfusion of 0,5h) or without ischemia-reperfusion. Data expressed as: mean  standard deviation, normality test of Korogorov-Smirnov. In case of the results went normalized, the test ANOVA was applied for evaluation significant difference, in case of the results was not normalized, the test of Kurskal-Wallis was used. Significant variations were considered when p <0,05.Results - In S group, at the plasmatic samples, after six hours (6h) or six hours and thirty minutes (6,5h) of L, when compared versus at the moment of L (0h), there was increase of: CPK 6h [141,83  47,88 versus 67,17  21,58 - p <0,004], CPK 6,5h [180,67  70,19 versus 67,17  21,58 - p <0,001]; LDH 6h [248,96  80,62 versus 74,40  33,84 - p <0,001]. In muscular samples there was increase of: lactate 6,5h [3,52  1,27 versus 1,57  0,76 - p <0,008]; there were reductions of: pyruvate 6h [0,035  0,024 versus 0,087  0,041 - p <0,004]. In group I it was observed, for the subgroup submitted to ischemia + caseinate in relation to sham, in plasma, elevations of: CPK [635,17  231,71 versus 141,83  47,88 - p <0,001], DHL [551,16  142,63 versus 248,96  80,62 - p <0,002], pyruvate [0,390  0,069 versus 0,061  0,045 - p <0,001]. In muscle there were elevations of: pyruvate [0,127  0,044 versus 0,035  0,024 - p <0,002], lactate [8,15  0,71 versus 2,73  0,49 - p <0,001] and TBARS [0,012  0,004 versus 0,002  0,001 - p <0,001]. In this same group when comparing subgroup ischemia + OKG versus subgroup sham there were, in the plasma, elevations of: CPK [868,17  308,30 versus 141,83  47,88 - p <0,001], glutathione [19,54  2,08 versus 6,43  1,06 - p <0,001]. In muscle there was elevation of glutathione [101,851  16,457 versus 14,737  0,874 p <0,001]. Still in the I group, it was observed, when subgroup ischemia + OKG was compared to ischemia + caseinate, in the plasma, a decrease of: LDH [296,26  93,62 versus 551,16  142,62 - p <0,004], glucose [104,16  20,81 versus 160,33  27,47 - p <0,001], pyruvate [0,046  0,012 versus 0,390  0,069 - p <0,001] and an elevation of glutathione [19,54  2,08 versus 5,52  0,92 - p <0,001]. In muscle there were decreases of pyruvate [0,047  0,031 versus 0,127  0,045 - p <0,004], lactate [2,47  0,74 versus 8,15  0,71 - p <0,001], TBARS [0,004  0,004 versus 0,012  0,004 - p <0,013]. It was observed elevation of glutathione [101,85  16,45 versus 14,44  2,09 - p <0,001]. In R group, it was observed, when comparing subgroup reperfusion + caseinate versus sham at the plasma, elevations of: CPK [606,33  79,84 versus 180,66  70,19 - p <0,001]. In muscle it was observed elevations of lactate [7,16  2,33 versus 3,52  1,27 - p <0,013] and decrease of G6PDH [0,462Â0,22 versus 0,207Â0,22 p<0,04]. In R group, when comparing subgroup reperfusion + OKG to subgroup sham, at the plasma, it was evidenced increase of: CPK [558,00  102,83 versus 180,66  70,19 - p <0,001], glucose [232,16  59,76 versus 118,16  24,22 - p <0,001]. In muscle there was observed decrease of G6PDH [0,182Â0,22 versus 0,462Â0,22]. Still in the group R when comparing the subgroup reperfusion + OKG versus the subgroup reperfusion + caseinate, at the plasma, there were elevations of glucose [232,16  59,76 versus 158,00  24,20 - p <0,013]. In muscle it was noticed a decrease of lactate [3,63  1,16 versus 7,16  2,33 - p <0,008] and elevation of glutathione [63,18  18,98 versus 16,17  1,96 - p <0,001]. Conclusions - Surgical trauma promoted significant alterations in some studied samples. The ischemia-reperfusion model demonstrated to be effective. OKG, as a single dose for gavage demonstrated pro glycolytic aerobic effect. Muscular and systemic protection against muscle cell lesion was also observed as well as an antioxidant effect at the end of ischemia and after ischemia-reperfusion injury

Objetivo: Analisar e descrever o perfil de expressão das proteínas relacionadas ao mecanismo de apoptose (PARP e AIF), e o perfil de expressão gênica sérica do microRNA-9 relacionado ao mecanismo de apoptose, em ratos submetidos à isquemia cerebral focal por oclusão da ACM por 90 minutos, seguida de reperfusão de 48horas, associado ou não com modelo de alcoolismo crônico. Métodos: Foram utilizados 20 ratos Wistar adultos, subdivididos em 4 grupos experimentais: grupo controle (C): animais submetidos apenas à anestesia; grupo isquêmico (I): animais submetidos à isquemia cerebral focal por 90 minutos seguido por reperfusão de 48 horas; grupo alcoolizado (A): animais que receberam diariamente álcool etílico absoluto diluído a 20% em água durante quatro semanas; e, grupo isquêmico e alcoolizado (IA): animais submetidos ao mesmo tratamento do grupo A e que, após quatro semanas foram submetidos à isquemia cerebral focal durante 90 minutos, seguido por reperfusão de 48 horas. As amostras do encéfalo coletadas foram processadas para a análise imunohistoquímica (para a expressão protéica de PARP-1 e AIF); e o sangue da artéria ventral da cauda foi coletado para a análise da expressão gênica do miRNA-9, relacionada ao mecanismo de apoptose, pela técnica de PCR em tempo real. Resultados: A comparação entre os grupos identificou uma redução da expressão proteica de PARP-1 nos animais do grupo AI quando comparado com os demais. Foi observada marcação positiva nuclear para a proteína AIF somente no grupo IA. Não houve diferença estatisticamente significante da expressão sérica do miRNA-9 entre os grupos. Conclusão: O modelo proposto, pode não ter sido suficiente para promover a ativação de AIF nos grupos C, A e I e desta forma, a apoptose celular por essa via analisada. A expressão proteica de PARP-1 no grupo A, associado com a expressão nula de AIF, indica um efeito neuroprotetor do etanol neste grupo. A redução da expressão proteica de PARP-1 não afetou sua atividade enzimática, proporcionando, mesmo em baixas concentrações, ativação de AIF no grupo IA. A expressão de PARP- 1 no grupo I, associada a expressão nula de AIF indica que o modelo de isquemia possivelmente gerou leves danos no DNA o que estimulou a ativação de PARP-1 somente em níveis suficientes para promover a reparação do DNA e não a ativação do processo de apoptose pela translocação de AIF. A expressão gênica sérica do miRNA- 9 observada indicou que a mesma foi suprimida quando exposta a mecanismos de estresse (alcoolismo, isquemia e a associação dos mesmos). A correlação do miRNA-9 com a expressão proteica de PARP-1 e AIF, indicou um aspecto protetor da baixa regulação do miRNA-9 tanto em animais alcoolizados como em animais isquêmicos. O grupo IA apresentou uma tendência a baixa expressão do miRNA-9, baixa expressão de PARP-1 e alta expressão de AIF, indicando que a associação álcool e isquemia tenha interferido no efeito protetor do miRNA-9 visto nos demais grupos / Aim: To analyze and describe the expression profile of proteins related to apoptosis mechanism (PARP and AIF), and profile of gene expression of miRNA-9 related to apoptosis mechanism in rats submitted to focal cerebral ischemia by occlusion of the CMA for 90 minutes, followed by 48 hours of reperfusion, associated or without associated to chronic alcoholism model. Methods: 20 adult Wistar rats were used, divided into 4 groups: control group (C): animals submitted only to anesthesia; Ischemic group (I): animals subjected to focal cerebral ischemia for 90 minutes followed by 48 hours of reperfusion; alcoholic group (A): animals that received daily solution of 20% of absolute ethyl alcohol diluted in water during four weeks; and ischemic group and alcoholized (IA): Animals subjected to the same treatment group A and after four weeks were subjected to focal cerebral ischemia for 90 minutes followed by 48 hours of reperfusion. The brain samples were collected and processed for immunohistochemical analysis (for protein expression - PARP-1 and AIF); and the blood from ventral artery of tail was collected for the analysis, by PCR in real time, of gene expression of miRNA-9 related to the mechanism of apoptosis. Results: The comparison between the groups identified a decrease in protein expression (PARP-1) in animals from IA group compared to others groups. Nuclear positive staining was observed for the AIF protein only in the IA group. There was no significant difference in serum expression of miRNA-9 between the groups. Conclusion: The proposed model may not have been sufficient to promote the activation of AIF in groups C, A and I, and thus the apoptosis analyzed in this way. Protein expression of PARP-1 in group A associated with a null expression of AIF, indicate a neuroprotective effect of ethanol in this group. The reduction of protein expression PARP-1 did not affect its enzymatic activity, providing even at low concentrations, activation AIF in IA group. The expression of PARP-1 in group I associated with null expression of AIF showed that model of ischemia, possibly, promoted light damage in DNA which stimulated PARP-1 activation just in sufficient levels to promote DNA repair, and without activation of apoptosis by translocation of AIF. The gene expression of miRNA-9 indicated that it was suppressed when exposed to mechanical stress (alcoholism, ischemia and combination thereof). The correlation of miRNA-9 with the protein expression (PARP-1 and AIF), indicated a protective aspect of downregulation of the miRNA-9 in both animals drunk as ischemic animals. IA group showed a trend to low expression of miRNA-9 and PARP- 1, in other hand an overexpression of AIF, indicating that the association between alcohol and ischemia interfered in protective effect of miRNA-9 seen in the other groups

Tesi realitzada al Centre d' Investigació Cardiovascular (CSIC-ICCC), de l' Hospital de la Santa Creu i Sant Pau de Barcelona / Las alteraciones del metabolismo lipídico causadas por la isquemia miocárdica tienen profundos efectos en el estado fisiológico del corazón. En el corazón isquémico, la hipoxia incrementa la formación de vacuolas lipídicas en zonas periféricas al área de riesgo al aumentar la síntesis endógena de triglicéridos y reducir la beta-oxidación de ácidos grasos. A su vez, durante la hipoxia, las células musculares lisas de la pared vascular (VSMC) tienen una captación incrementada de lipoproteínas de baja densidad (LDL). Se ha descrito un efecto sinérgico entre la hipoxia y la acumulación de lipoproteínas en la inducción de genes inflamatorios y genes involucrados en el metabolismo lipídico. Los estudios realizados in vitro e in vivo demuestran que el receptor de LDL (LDLR) no es el responsable de la captación incrementada de colesterol en células vasculares sometidas a hipoxia pues está regulado positivamente por los SREBP de tal forma que la acumulación de colesterol inhibe su expresión. Sin embargo el receptor LRP1 está regulado negativamente por los SREBP por lo que, independientemente de los niveles de colesterol intracelular, es capaz de captar el colesterol de las lipoproteínas y sobreacumularlo en la célula. Además el LRP1 está sobreexpresado por la hipoxia en las VSMC de las arterias coronarias y puede explicar mecanísticamente los efectos sinérgicos entre hipoxia e hipercolesterolemia en la acumulación lipídica intracelular. Actualmente se desconoce el papel del LRP1 en el cardiomiocito y las consecuencias de las alteraciones en su expresión sobre el metabolismo lipídico. Se ha descrito que la lipoprotein lipasa presente en la superficie de los cardiomiocitos media la captación de lipoproteinas utilizando un receptor no identificado hasta el momento para la captación selectiva de colesterol. Por otro lado, se sabe que el LRP1 media la captación selectiva de colesterol por células vasculares. Todos estos resultados sugieren que el LRP1 podría participar en la captación de lípido por el cardiomiocito, y dejan entrever la importancia de los mecanismos moleculares involucrados en su modulación. En primera instancia los objetivos fueron analizar el efecto de la hipoxia en la expresión del receptor LRP1 en cardiomiocitos neonatales de rata y HL-1, así como los mecanismos involucrados en este efecto. También determinar el papel del LRP1 en la captación de VLDL en condiciones de hipoxia por los cardiomiocitos. Nuestros resultados, publicados en el artículo “Low-density lipoprotein receptor-related protein 1 mediates hypoxia-induced very low density lipoprotein-cholesteryl ester uptake and accumulation in cardiomyocytes”, demostraron que la hipoxia incrementa la expresión del LRP1 a través del factor inducible por hipoxia HIF-1α, y ésta sobreexpresión induce la captación y acumulación de colesterol esterificado procedente de VLDL en cardiomiocitos. A continuación estudiamos el efecto de dosis hipercolesterolémicas de LDL e hipertrigliceridémicas de VLDL en la expresión del LRP1 en cardiomiocitos, así como la correlación entre la expresión del LRP1 y la acumulación lipídica en el ventrículo izquierdo de pacientes con cardiomiopatía isquémica. Publicados en el artículo “Low-density lipoprotein receptor-related protein 1 expression correlates with cholesteryl ester accumulation in the myocardium of ischemic cardiomyopathy patients” nuestros resultados sugieren que la regulación al alza del LRP1 juega un papel primordial en la acumulación de ésteres de colesterol en el miocardio de corazones isquémicos y esto puede suponer un “target” con el fin de prevenir efectos deletéreos de esta acumulación en la cardiomiopatía isquémica. Por último, en el tercer artículo, “Low-density lipoproteins promote unstable calcium handling linked to reduced SERCA2 and connexin-40 expression in cardiomyocytes”, observamos que el colesterol procedente de LDL desestabiliza el manejo del calcio por parte de cardiomiocitos HL-1 al reducir la expresión de SERCA2 y la velocidad de conducción del calcio por la Conexina40. / "Role of the low density lipoprotein receptor-related protein-1 (LRP1) in ischemia and cardiovascular pathophysiology" Currently, it is unknown the role of LRP1 in the cardiomyocyte and the consequences of its changes in expression on lipid metabolism. It has been reported that lipoprotein lipase, present on the surface of cardiomyocytes, mediates the uptake of lipoproteins using an unidentified receptor so far for the selective uptake of cholesterol. Furthermore, it is known that the LRP1 mediates the selective uptake of cholesterol by vascular cells. All these results suggest that LRP1 may be involved in lipid uptake and accumulation by the cardiomyocyte and show the importance of understanding the molecular mechanisms involved in the modulation of LRP1 by hypoxia. In the first instance the objectives were to analyze the effect of hypoxia on LRP1 receptor expression in neonatal rat cardiomyocytes and HL-1, and the mechanisms involved in this effect. Also determine the role of LRP1 in VLDL uptake under hypoxia by cardiomyocytes. Our findings, published in the article "Low-density lipoprotein receptor-related protein 1 mediates hypoxia-induced very low density lipoprotein-cholesteryl ester uptake and accumulation in cardiomyocytes", showed that hypoxia increases LRP1 expression through transcription factor HIF-1α, and this overexpression induces the uptake and accumulation of cholesteryl esters from VLDL in cardiomyocytes. Then, we estudied the effect of LDL and VLDL in the LRP1 expression, and the correlation between LRP1 expression and lipid accumulation in the left ventricle of patients with ischemic cardiomyopathy. Published in the article "Low-density lipoprotein receptor-related protein 1 Expression Correlates with cholesteryl ester accumulation in the myocardium of ischemic cardiomyopathy patients" our results suggested that the LRP1 upregulation plays a role in cholesterol accumulation in the ischemic myocardium and this could be a "target" in order to prevent deleterious effects of this accumulation. Finally we analyzed the effects of LDL on calcium handling by cardiomyocytes HL-1. In the third article, "Low-Density Lipoproteins Promote unstable linked to calcium handling Reduced SERCA2 and connexin-40 expression in cardiomyocytes", we observed that colesterol from LDL destabilizes calcium handling by cardiomyocytes HL-1 reducing SERCA2 expression and calcium conduction velocity by Connexin40.

Introduction: Severe ischemia-reperfusion injury (IRI) after liver transplantation are correlated with lower early and late graft and patient survival, higher infection rates, appearance of acute and chronic rejections and other complications. In this field, it has been demonstrated that the prostaglandin E1 (PGE1) presents cytoprotective, anti-inflammatory and vasodilator effects. Therefore, the PGE1 assembles most of the requirements necessary to prevent the development of the ischemia-reperfusion injury, especially if it is administered through via portal vein at full doses in the moment of graft reperfusion.Materials and methods: Female Largewhite-Landrace pigs (body weight between 30-35 kg) were used. The orthotopic liver transplantation were performed in 18 pairs of pigs. The study was divided into three groups as follows: Control group, 4 experiments of orthotopic liver transplantation with a cold preservation time of 3 hours in Wisconsin solution; Groups A and B, 7 experiments with 24 hours of cold preservation time in each group. Concerning intraportal infusion of medication, the Group B was infused with prostaglandin E1 at a dose of 0.15 ug/kg/min (Alprostadil 500ug) for 90 minutes in the portal reperfusion of the graft; and Group A was infused with saline solution for 90 minutes in the same time period. In the recipient surgery, biochemical (GOT, GPT, LDH, B-Galactosidase, Hialuronic Acid), hemodynamic and histological studies were carried out to evaluate the ischemia-reperfusion injury (IRI).Results: Survival rate in control group was 100 % and it presented a lower level of sinusoidal-hepatocellular injury and leukocyte activation than the groups A and B. From the beginning of the surgery until the moment of the PGE1 administration, both the group A and the group B were similar in relation to the histology, hepatocellular, endothelial and inflammatory damage markers. After the infusion of the medication (PGE1), the group B developed an increase of the total hepatic flow and a lower alteration of all the parameters of hepatocyte-sinusoidal injury and hepatic function, with an statistical significance in the great majority of them. The portal PGE1 infusion at full doses did not generate hemodynamic instability. Conclusions: The liver transplantation in pigs with 24 hours of cold ischemia of the graft produced a severe IRI that caused the death of all the animals in the groups A and B due to primary graft nonfunction. Nevertheless, with the intraportal PGE1infusion, the group B presented an increase of the total hepatic flow and a lower alteration of all the parameters of hepatocellular injury, sinusoidal damage and hepatic function. The portal PGE1 perfusion at full doses was well tolerated at hemodynamic level.