Made available in DSpace on 2014-06-12T15:52:45Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo4557_1.pdf: 827863 bytes, checksum: d2a8ca3017b898c1d5c8989791f98ed7 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2007 / Sementes de Moringa oleifera têm sido freqüentemente usadas como coagulante para o tratamento de água no Nordeste do Brasil, local com alta incidência de dengue. Lectinas constituem um grupo de proteínas heterogêneas capazes de reconhecer e ligar reversivelmente carboidratos e glicoproteínas. Inibidores de protease impedem a atividade enzimática pela formação de complexos estáveis com tripsina e/ou quimotripsina. Lectinas e inibidores de tripsina com atividade inseticida têm sido descritos. O objetivo deste trabalho foi avaliar na água tratada com sementes de M. oleifera, a partir das atividades hemaglutinante (AH), inibidora de tripsina e larvicida. Água destilada foi tratada com 1, 3, 6 ou 15 sementes de M. oleifera (MoW). Ensaio para lectina usou eritrócitos de coelho. MoW foi avaliada para atividade inibidora de tripsina usando N-&#945;-benzoil-DL-arginil-&#961;-nitroanilida (BAPNA). Bioensaio larvicida foi feito usando larvas do vetor da dengue, Aedes aegypti. Desenvolvimento, mortalidade e aspectos morfológicos das larvas foram analisados. MoW contém AH e não foi capaz de inibir tripsina. Redução significante do desenvolvimento larval foi observado após 24, 48 e 72 h de incubação com MoW. Larvas no 4º estádio (L4) foram detectadas somente no controle, MoW1 e MoW3. Significante (p<0. 0001) taxa de mortalidade foi detectada na preparação lectínica mais ativa, MoW15 (45%). Diferenças morfológicas nas larvas em L4 incubadas com MoW1 foram observadas quando comparadas ao controle por microscopia ótica invertida. Os resultados obtidos sugerem a avaliação das sementes de M. oleifera para o controle do vetor da dengue. A presença de AH na preparação ativa sobre as larvas do A. aegypti pode indicar o envolvimento de lectina no efeito larvicida de MoW

Submitted by Ricardo Cedraz Duque Moliterno (ricardo.moliterno@uefs.br) on 2015-09-15T01:16:18Z No. of bitstreams: 1 Disserta??o+de+Juliana+Andrade_PPGBiotec.pdf: 1768229 bytes, checksum: bb090cd36fb6e87ace64aecf5e4d3280 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-09-15T01:16:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Disserta??o+de+Juliana+Andrade_PPGBiotec.pdf: 1768229 bytes, checksum: bb090cd36fb6e87ace64aecf5e4d3280 (MD5) Previous issue date: 2013-09-30 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior - CAPES / Dengue is an endemic disease caused by Aedes aegypti Linnaeus that besides have caused major epidemics in recent years in Brazil, does not have an effective vaccine. The larvae of these mosquitoes demonstrates high resistance to chemical larvicides commonly used in vector control activities and therefore some plants ictiot?xicas studies are targets for discovery of promising substances present in plant extracts that can be leveraged or even transformed into natural insecticides. This work began with an ethnobiological study conducted in the municipality of Maragogipe by using open and semi-structured interviews with local residents in order to collect information in different sociocultural levels, focusing on which plant is commonly used as ichthyotoxic, and then with possible larvicidal effect. Outo of the ichthyotoxic plants recorded, the species most cited was Phyllanthus acuminatus Vahl. The crude extract of the leaf and stem of this plant, as well as their different concentrations were tested in larvae of the mosquito A. aegypti checking the mortality rate at 24 and 48 hours at laboratory conditions to 25?C in a growth chamber to assess its action as biopesticide agent. Although not standardized a suitable dosage of a larvicide from natural plant extracts tested, it was found that in higher concentrations it is possible to achieve the desired effect contributing to breaking the cycle of development of dengue vector and contributing to the reduction the indiscriminate use of synthetic larvicides that have high power toxicity. / A dengue ? uma endemia disseminada pelo Aedes aegypti Linnaeus que al?m de ter provocado grandes epidemias nos ?ltimos anos no Brasil, ainda n?o possui uma vacina efetiva. A larva deste mosquito demonstra grande resist?ncia aos larvicidas qu?micos comumente usados nas a??es de controle do vetor e, portanto, algumas plantas ictiot?xicas s?o alvos de estudos para descoberta de subst?ncias promissoras presentes em extratos vegetais que possam ser aproveitados ou at? transformados em inseticidas naturais. Este trabalho iniciou-se com o estudo etnobiol?gico conduzido no munic?pio de Maragogipe, utilizando entrevistas abertas e semi-estruturadas com os moradores locais com o objetivo de coletar informa??es em n?veis socioculturais distintos, enfocando qual planta ? comumente utilizada como ictiot?xica e com poss?vel efeito larvicida. Das plantas identificadas como ictiot?xicas, a mais citada pela comunidade visitada foi a esp?cie Phyllanthus acuminatus Vahl. O extrato bruto do caule e da folha desta planta, assim como suas diferentes concentra??es, foram testados em larvas do mosquito A. aegypti verificando a taxa de mortalidade em 24 e 48 horas em condi??es de laborat?rio com temperatura de 25?C em c?mara B.O.D. a fim de avaliar a sua a??o como agente bioinseticida. Embora n?o tenha sido padronizada uma dosagem adequada de um larvicida natural a partir de extratos da planta testada, verificou-se que em maiores concentra??es ? poss?vel obter o efeito desejado contribuindo para o rompimento no ciclo de desenvolvimento do vetor da dengue e colaborando para a diminui??o no uso indiscriminado de larvicidas sint?ticos que apresentam alto poder de toxidade.

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Gastrointestinal parasites are a major sanitary problems faced in the sheep, considerably limiting their profitability, due both to spending on the control measures, well as decrease in their productivity. Among these we can emphasize the helminth Haemonchus contortus, due to their pathogenicity and resistance to existing drugs in the market. With the advancement of parasite resistance, the search for alternative methods and effective anthelmintic products, has been widely studied. In this context, the objective of this study is to evaluate the influence of in vitro administration, the essential oil of Melaleuca (Melaleuca alternifolia) (TTO), a solid lipid nanocarrier made from this oil (nanoTTO), and Terpinen-4-ol (terp-4-ol), major component of the oil on the nematode Haemonchus contortus. To assess the in vitro efficacy of five different concentrations of TTO, and the nanoTTO Terp-4-ol were tested in eggs and infective larvae of H. contortus by means of Larval Hatching Test (LHT), that evaluates the power ovicidal and the Larval Migration Inhibition Test (LMIT), to evaluate the power larvicide of the solutions tested. All groups were tested in sextuplicate in TEL and in quadruplicate in TIML, along with a positive and negative control for the validation of tests. After reading the tests it was observed In LHT, the percentage of inhibition of hatching was 100 % for TTO and terp-4-ol in the concentration of 3.5 mg/mL, with LC50 of 0.43 and 0.63 mg/mL; LC90 of 1.75 mg/mL and 3.12 mg/mL, respectively. NanoTTO obtained less activity, with 82.6 % inhibition at the same concentration. As for LMIT, TTO and nanoTTO had a similar activity with 88.0 % e 84.8 % inhibition, respectively, at a concentration of 56 mg/mL. Terp-4-ol had a greater effect on larvae and, therefore, maintained 85.7 % inhibition at a concentration of 56 mg/mL and 82.4 % at 3.5 mg/mL, demonstrating a high activity in the lower concentration tested. Therefore, the results indicate that all substances that were tested showed ovicidal and larvicidal activity on H. contortus. The terpinen-4-ol being the major component and the results may be presented as one of the components responsible for the anthelmintic action of the oil. TTO, terp-4-ol and nanoTTO may be targets for in vivo studies, besides being a promising line of research in the control and treatment of endoparasitism. / As parasitoses gastrointestinais são um dos maiores problemas sanitários enfrentados na criação de ovinos, limitando consideravelmente sua rentabilidade, devido tanto aos gastos com as medidas de controle, bem como pela queda na sua produtividade. Dentre estas parasitoses podemos destacar o helminto Haemonchus contortus, devido principalmente a sua patogenicidade e a resistência aos fármacos existentes no mercado. Com o avanço da resistência parasitária, a procura por métodos alternativos de tratamento e por produtos anti-helmínticos mais eficazes, vem sendo amplamente estudados. Neste contexto, o presente estudo teve por objetivo avaliar a influência da administração in vitro do óleo essencial de Melaleuca (Melaleuca alternifolia) (OEM), de um nanocarreador lipídico feito a partir deste óleo (nanoOEM), e do Terpinen-4-ol (terp-4-ol), componente majoritário do óleo, sobre o nematoide Haemonchus contortus. Para avaliação da eficácia in vitro, cinco concentrações diferentes do OEM, da nanoOEM e do terp-4-ol foram testados em ovos e larvas infectantes de H. contortus por meio do Teste de Eclodibilidade Larval (TEL), que avalia o poder ovicida e do Teste de Inibição da Migração Larval (TIML), para avaliar o poder larvicida das soluções testadas. Todos os grupos foram testados em sextuplicata no TEL e em quadruplicata no TIML, juntamente com um controle positivo e negativo para a validação dos testes. Após a leitura dos testes observou-se que no TEL, a porcentagem de inibição da eclodibilidade foi de 100 % para o OEM e o terp-4-ol na concentração de 3,5 mg/mL, com uma CL50 de 0,43 e 0,63 mg/ml e de CL90 de 1.75 mg/mL e 3.12 mg/mL, respectivamente. A nanoOEM obteve uma menor atividade, com 82,63 % de inibição na mesma concentração de 3,5 mg/mL. No TIML, foi necessário utilizar concentrações das soluções um pouco mais elevadas, mas mesmo assim foi observada atividade larvicida. O OEM e a nanoOEM obtiveram uma atividade semelhante com 88,04 % e 84,80 % de inibição, respectivamente, na concentração de 56 mg/mL. O terp-4-ol apresentou um efeito maior sob as larvas, pois manteve uma inibição de 85,74 % na concentração de 56 mg/mL e de 82,40 % na de 3,5 mg/mL, demonstrando uma elevada atividade na menor concentração testada. Portanto, os resultados indicam que todas as substâncias testadas apresentaram atividade ovicida e larvicida sobre o H. contortus. O terpinen-4-ol, por ser o componente majoritário e pelos resultados apresentados pode ser considerado um dos componentes responsáveis pela ação anti-helmíntica do óleo. O OEM, o terp-4-ol e a nanoOEM, podem ser alvos para estudos in vivo, além de serem uma linha de pesquisa promissora no controle e tratamento das endoparasitoses gastrointestinais de ovinos.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / A dengue à considerada, hoje, a arbovirose mais importante do mundo, tendo distribuiÃÃo e ressurgÃncia em todos os continentes e aumento das Ãreas de incidÃncia devido Ãs mudanÃas climÃticas. Um dos motivos que a torna tÃo importante à ausÃncia de uma vacina eficaz para os quatro sorotipos do vÃrus. Assim, para o controle dessa doenÃa à necessÃrio que haja o combate ao vetor, o mosquito Aedes aegypti. Os atuais programas de combate ao mosquito dispÃem de inseticidas sintÃticos, contudo o surgimento de populaÃÃes resistentes a esses inseticidas representa um entrave ao combate deste mosquito. Desta forma, torna-se necessÃria a busca por novas molÃculas inseticidas ou capazes de potencializar o efeito tÃxico dos inseticidas atuais. Assim, o presente trabalho teve por objetivo a obtenÃÃo de inibidores de tripsina de sementes de Leucaena leucocephala e avaliaÃÃo do potencial inseticida dessas molÃculas sobre as larvas do mosquito Ae. aegypti. Para isso, as proteÃnas presentes nas sementes de L. leucocephala foram extraÃdas, fracionadas e submetidas à cromatografia de afinidade a anidrotripsina acoplada a sepharose 4B, para a obtenÃÃo de uma fraÃÃo rica em inibidores de tripsina denominada sLlTi, a qual foi caracterizada bioquimicamente e utilizada em concentraÃÃo de 0,3 mg/mL nos ensaios de desenvolvimento das larvas do mosquito. A caracterizaÃÃo bioquÃmica do sLlTi permitiu concluir que os inibidores sÃo termorresistentes (a atividade foi mantida apÃs aquecimento por 30 min. a 100 ÂC), apresentam considerÃvel resistÃncia ao agente redutor (DTT), tendo decaimento da sua atividade inibitÃria frente a tripsina apenas quando incubado com 100 mM de DTT por 120 min, o mesmo, tambÃm, à resistente Ãs variaÃÃes de pH na faixa de 2 a 10. Os zimogramas reversos revelaram a presenÃa de bandas proteicas com massa molecular aparente de 20 kDa. Testes biolÃgicos in vitro mostraram que o sLlTi apresenta atividade inibitÃria superior a 90% frente a tripsina e 70% frente ao homogenato intestinal de larvas de Ae. aegypti. ApÃs a realizaÃÃo de eletroforese bidimensional, foi possÃvel a visualizaÃÃo de isoformas com pI entre 4 e 7, aproximadamente. Esses inibidores sÃo capazes de inibir as proteases de larvas de Ae. aegypti in vivo em 56%, causando retardo no desenvolvimento e cerca de 70% de mortalidade. Assim, o sLlTi possui potencial aÃÃo inseticida contra o mosquito vetor da dengue. / Dengue fever is currently the most important arboviral disease in the world, being widely distributed among the continents and having increased incidence areas due to climate change. One of the reasons that makes it so important is the absence of an effective vaccine against the four virus serotypes. So, to control this disease is necessary to fight the disease vector, the mosquito Aedes aegypti. Nowadays, health programs use synthetic insecticides to control the mosquito populations. However, the emergence of resistant populations to these insecticides is an obstacle to combating this mosquito. Thus, it is necessary to search for new insecticides or molecules capable of enhancing the toxic effect of current insecticides. The present study aimed to obtain trypsin inhibitors from Leucaena leucocephala seeds and evaluate the insecticidal potential of these molecules against Ae. aegypti larvae survival and development. For this, the proteins of L. leucocephala seeds were extracted, fractionated and subjected to anhydrotrypsin affinity chromatography to obtain a trypsin-enriched fraction (called sLlTi), which was biochemically characterized and used at a concentration of 0.3 mg/mL in assays of larvae development. Biochemical characterization of sLlTi concluded that the inhibitors are heat resistant (the activity was retained after heating for 30 min at 100  C), showed considerable resistance to the reducing agent DTT and reduction of their inhibitory activity against trypsin was demonstrated only when incubated with 100 mM DTT for 120 min. The inhibitor is also resistant to pH changes in a range from 2 to 10. The reverse zymograms revealed the presence of protein bands with apparent mass near 20 kDa. Biological testing in vitro showed that the sLlTi showed trypsin inhibitory activity greater than 90% and that sLlTi is also capable to inhibit Ae. aegypti digestive enzymes by 70%. After two-dimensional electrophoresis isoforms with pI ranging from 4 to 7, approximately, were observed. These inhibitors were able to inhibit proteases of Ae. aegypti in vivo by 56%, and was capable to delay the larval development after incubation for 10 days. Thus, sLlTi contains proteins with promising insecticidal action against dengue vector.

Submitted by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2016-04-06T15:26:21Z No. of bitstreams: 2 Tese - Heloisa Helena Garcia da Silva - 2004.pdf: 1077687 bytes, checksum: a8199d694949b3c777b3b578a89c2f28 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2016-04-06T15:29:32Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Tese - Heloisa Helena Garcia da Silva - 2004.pdf: 1077687 bytes, checksum: a8199d694949b3c777b3b578a89c2f28 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-06T15:29:32Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Tese - Heloisa Helena Garcia da Silva - 2004.pdf: 1077687 bytes, checksum: a8199d694949b3c777b3b578a89c2f28 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2004-12-02 / Fundação de Apoio à Pesquisa - FUNAPE / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / Dengue is an acute viral disease of great importance to the public health, and its high incidence in the tropical countries is intimately related to the presence of the main vector, the mosquito Aedes aegypti. Throughout the years, attempts to control the vector have been based on the application of synthetic chemical insecticides, which have already began to produce undesirable effects. The modification of the susceptibility and the emergence of generations resistant mosquitoes besides fast proliferation stimulated studies about the activity of natural products on the larvae of A. aegypti, as an alternative measure for control. In this work, phytochemicals studies were accomplished by larvicidal activity of the plants Magonia pubescens St. Hil. (Sapindaceae) and Copaifera reticulata Ducke (Leguminosae), with the purpose of isolating fractions and/or pure substances with insecticide potential. After collection of peels of the M. pubescens stem and C. reticulata oil-resin in natura, extracts obtained were submitted to bioassays, guided-purification and structural identification. For the larvicidal activity assays, 3rd instar larvae of A. aegypti were used. They were obtained from cyclic colony maintained by ten years, at 28±1°C, 80±5% of relative humidity and 12 h photoperiod. Twenty larvae were used for each concentration and the bioassays were carried out in 5 replicate, in an acclimatized ambient similar to colony growth. Control assays were conducted using the same number of larvae in a dimethylsulphoxide and distilled water solution. The mortality of larvae was measured after 24 and 48 h. Fractions, subfractions and pure substances with larvicidal activity, obtained from those procedures, were monitored chemically through thin layer chromatography and analyzed by 1H nuclear magnetic resonance and 13C, and gas chromatography coupled to mass spectrometry. The identified active substance in the M. pubescens was a tannin (C45H36O18 and molecular mass of 864.77 Da) which presented LC50 of 3.1 ppm; from the C. reticulata the acid 3-acetoxi-labda-8(17),13-dien-15-oic was isolated (C22H34O4, and molecular mass of 362 Da) with LC50 of 0.8 ppm. These two active substances presented lethal concentrations with potential use in the actions to control of the A. aegypti. / O dengue é uma doença viral aguda de grande importância na saúde pública, e sua alta incidência nos países tropicais está intimamente relacionada à presença do principal vetor, o mosquito Aedes aegypti. Ao longo dos anos, as tentativas de controlar esse vetor têm sido baseadas na aplicação de inseticidas químicos sintéticos, os quais já começam a produzir efeitos indesejáveis. A modificação da suscetibilidade e o aparecimento de gerações de mosquitos resistentes aos produtos utilizados, além de sua rápida proliferação, estimularam estudos sobre a atividade de produtos naturais sobre as larvas de A. aegypti, como uma medida alternativa para o seu controle. Neste trabalho foram realizados estudos fitoquímicos e de atividade larvicida das plantas Magonia pubescens St. Hil. (Sapindaceae) e Copaifera reticulata Ducke (Leguminosae), com o objetivo de se isolarem frações e/ou substâncias puras com potencial fitoinseticida. Após coleta de cascas do caule de M. pubescens e óleo in natura de C. reticulata, obtiveram-se os extratos, que foram submetidos a procedimentos cromatográficos guiados por bioensaios, purificação e identificação estrutural. Para detecção da atividade larvicida foram utilizadas larvas de 3° estádio de A. aegypti, obtidas de colônia cíclica mantida por dez anos, a 28±1°C, 80±5% de umidade relativa e fotofase de 12h. Foram utilizadas 20 larvas para cada concentração e os bioensaios foram realizados com 5 réplicas, em câmara climatizada similarmente à da criação. Para o controle utilizou-se o mesmo número de larvas em solução de dimetilsulfóxido e água destilada. As leituras de mortalidade foram feitas 24 e 48h após o início dos bioensaios. As frações, subfrações e substâncias puras com atividade larvicida, obtidas desses procedimentos, com as duas plantas, foram monitoradas quimicamente através de cromatografia em camada delgada e analisadas por ressonância magnética nuclear de hidrogênio e carbono-13, e cromatografia a gás acoplada à espectrometria de massas. O princípio ativo identificado na M. pubescens foi um tanino catéquico (C45H36O18 e massa molecular de 864.77 Da) que apresentou CL50 de 3,1 ppm; da C. reticulata foi isolado o ácido 3-acetoxi-labda-8(17),13-dien-15-oico (C22H34O4, e massa molecular de 362 Da) com CL50 de 0,8 ppm. Esses dois princípios ativos apresentaram concentrações letais com potencial de uso nas ações de controle do A. aegypti.

Submitted by Geandra Rodrigues (geandrar@gmail.com) on 2018-06-12T14:03:58Z No. of bitstreams: 1 jenifercarvalhogorssi.pdf: 6998133 bytes, checksum: f49277dca971587203cbebb23396270d (MD5) / Rejected by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br), reason: on 2018-06-12T14:07:12Z (GMT) / Submitted by Geandra Rodrigues (geandrar@gmail.com) on 2018-06-12T14:09:43Z No. of bitstreams: 1 jenifercarvalhogorssi.pdf: 6998133 bytes, checksum: f49277dca971587203cbebb23396270d (MD5) / Rejected by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br), reason: on 2018-06-12T14:27:20Z (GMT) / Submitted by Geandra Rodrigues (geandrar@gmail.com) on 2018-06-12T14:30:28Z No. of bitstreams: 1 jenifercarvalhogorssi.pdf: 6998133 bytes, checksum: f49277dca971587203cbebb23396270d (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2018-06-14T11:34:53Z (GMT) No. of bitstreams: 1 jenifercarvalhogorssi.pdf: 6998133 bytes, checksum: f49277dca971587203cbebb23396270d (MD5) / Made available in DSpace on 2018-06-14T11:34:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 jenifercarvalhogorssi.pdf: 6998133 bytes, checksum: f49277dca971587203cbebb23396270d (MD5) Previous issue date: 2018-03-26 / As tiossemicarbazonas são uma classe de compostos químicos com amplo perfil farmacológico, contudo há poucos estudos sobre sua toxicidade em insetos. O Aedes aegypti (Linnaeus, 1762) é na atualidade um dos mosquitos que mais tem causado problemas de saúde pública, devido ao seu potencial de disseminar doenças, como dengue, febre amarela, chikungunya e zika. Entre as estratégias mais eficientes no controle dessas doenças está o combate ao vetor. No entanto, o número limitado de agentes larvicidas e o surgimento de mosquitos resistentes podem comprometer esse combate, o que tem motivado a busca por novas moléculas que podem atuar como larvicidas. Neste trabalho foi avaliada a toxicidade de uma série de quatorze tiossemicarbazonas derivadas de benzaldeído, acetofenona e benzofenona contra larvas do Aedes aegypti. Os compostos foram preparados e caracterizados a partir de seus espectros de infravermelho e ressonância magnética nuclear, bem como, por sua estabilidade coloidal em solução aquosa com dimetilsulfóxido 1%. A toxicidade dos compostos em concentrações na faixa de 0,1 a 100 μM foi avaliada frente a larvas no estádio L4, sendo demonstrado que as tiossemicarbazonas derivadas de benzofenona apresentam atividade larvicida. O comportamento de nado e a morfologia externa e das células do intestino médio foram avaliados para os compostos que apresentaram atividade larvicida, sendo observado a redução da mobilidade, deformidade de algumas larvas e alterações nas células após a exposição com tiossemicarbazonas. Ensaios de imunofluorescência utilizando os anticorpos anti-fosfohistona H3, anti-proteína de cadeia leve 3 associada a microtúbulos (anti-LC3A/B), anti-caspase-3 e anti-peroxidase foram realizados nas células do intestino médio das larvas. Esses resultados ressaltaram o efeito citotóxico das tiossemicarbazonas, contudo sem a participação dos processos de apoptose, autofagia e de enzimas peroxidase. Os resultados obtidos corroboram a potencial atividade larvicida das tiossemicarbazonas, mas a origem da sua citotoxicidade deve ser melhor investigada. / The thiosemicarbazones are a class of chemical compounds with broad pharmacological profile, however, there is few studies on its toxicity in insects. Currently, Aedes aegypti mosquitoes (Linnaeus, 1762) has caused public health problems due to its potential for disease dissemination, such as dengue fever, yellow fever, chikungunya and zika. The fight against the vector is one of most efficient strategies used in the control of these diseases. However, the limited number of larvicidal agents and the emergence of resistant mosquitoes can compromise this fight, which has motivated the research for new molecules that can act as larvicides. In this work, a series of fourteen thiosemicarbazones derived from benzaldehyde, acetophenone and benzophenone against Aedes aegypti larvae were evaluated. The compounds were prepared and characterized by their infrared and nuclear magnetic resonance spectra as well as its colloidal stability in 1% DMSO aqueous solution. The larvicidal activity of the compounds, at concentration range from 0.1 to 100 μM, was evaluated against larvae in the L4 stage, being that benzophenone-derived thiosemicarbazones demonstrated larvicidal activity. The swimming behavior and external and midgut cells morphology were evaluated for the active compounds. In these experiments were observed a reduction of mobility, deformity of some larvae and alterations in cells upon exposition to thiosemicarbazones. Immunofluorescence assays involving anti-phospho-histone H3, microtubule-associated protein light chain 3 antibody (anti-LC3A/B), anti-caspase 3, and anti-peroxidase antibodies were performed on midgut cells from larvae. These results highlight the cytotoxic effect of thiosemicarbazones, but without the participation of apoptotic and autophagic processes and peroxidase enzymes. The results obtained corroborate a potential larvicidal activity of thiosemicarbazones, however, the origin of its cytotoxicity should be better investigated.

Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / Atualmente, a dengue à considerada a arbovirose mais importante do mundo, emergindo em paÃses onde a doenÃa parecia erradicada e ressurgindo em paÃses onde antes estava sob controle. Apesar de todos os esforÃos de pesquisa empreendidos na produÃÃo e desenvolvimento de uma vacina contra a doenÃa, ainda nÃo se dispÃe de uma terapia preventiva eficaz; a Ãnica alternativa de manejo nos dias atuais se dà atravÃs do combate ao Ãnico elo vulnerÃvel, o mosquito vetor Aedes aegypti. Apesar dos programas de manejo das populaÃÃes de vetores disporem de vÃrias opÃÃes de inseticidas sintÃticos, o surgimento de populaÃÃes resistentes apresenta-se como um entrave no controle desse mosquito vetor. AlÃm do monitoramento dessas populaÃÃes resistentes, tornou-se evidente que estudos moleculares podem ser a chave para o manejo sustentÃvel desses vetores. Assim, o presente trabalho teve por objetivo avaliar as alteraÃÃes na expressÃo proteica de larvas de Ae. aegypti tratadas com o larvicida orgÃnico m-pentadecadienil-fenol, um lipÃdeo fenÃlico isolado de sementes de Myracrodruon urundeuva a fim de elucidar os possÃveis mecanismos de detoxificaÃÃo e resposta molecular a esse composto. Para isso foi realizada eletroforese bidimensional (focalizaÃÃo isoelÃtrica seguida de eletroforese em gel de poliacrilamida em condiÃÃes desnaturantes - SDS-PAGE) de larvas de terceiro estÃdio tratadas com m-pentadecadienil-fenol, em concentraÃÃes subletais (CL50 10,16 Âg.mL-1), em comparaÃÃo com um grupo controle nÃo tratado. Treze spots foram identificados como diferencialmente expressos, e doze foram identificados consistentemente em bancos de dados apÃs anÃlise dos espectros obtidos por espectrometria de massas (ESI-Q-ToF). ApÃs a anÃlise das vias nas quais essas proteÃnas estÃo envolvidas, foi proposto que o larvicida m-pentadecadienil-fenol elicita a superexpressÃo de proteÃnas que promovem a formaÃÃo de barreiras mais eficientes, e que uma vez dentro das cÃlulas promove um estresse oxidativo que leva ao aumento do metabolismo de degradaÃÃo lipÃdica, desestabilizaÃÃo da membrana lisossomal, aumento do metabolismo em resposta ao estresse tÃxico e possivelmente resulta em morte celular programada (apoptose). / Currently, dengue fever is considered the most important arboviral disease in the world, emerging in countries where the disease seemed eradicated and reappearing in countries where before was under control. Despite all the efforts to produce and develop a vaccine against the disease, there is not a preventive therapy. Nowadays, the disease management is through the eradication of the mosquito vector Aedes aegypti. Despite the several options of synthetic insecticides available for management programs of vector populations, the emergence of resistant populations is presented as an obstacle in mosquito control vector. In addition to monitoring these resistant populations, it became evident that molecular studies may be the key to the sustainable management of these vectors. Thus, the present study aimed to evaluate the changes in protein expression of Ae. aegypti larvae treated with the organic larvicide m-pentadecadienil-phenol, a phenolic lipid isolated from Myracrodruon urundeuva seeds to elucidate the putative mechanisms of detoxification and molecular response to this compound. For this, two-dimensional electrophoresis (isoelectric focusing followed by electrophoresis in polyacrylamide gel under denaturing conditions - SDS-PAGE) of third-instar larvae treated with m-pentadecadienil-phenol, at sublethal concentrations (LC50 10.16 microg.mL-1) was performed. The results were compared to a non-treated group. Thirteen spots were identified as differentially expressed, and twelve were consistently identified in databases analysis of the spectra obtained by mass spectrometry (ESI-Q-ToF). After analysis of the pathways in which these proteins are involved, it was proposed that the larvicide m-pentadecadienil-phenol elicits the overexpression of proteins that promote the formation of more efficient barriers and that once inside the cells, it promotes oxidative stress which leads to increased lipid degradation metabolism, destabilization of lysosomal membrane, increased metabolism in response to stress due to the moleculeâs toxicity and possibly results in programmed cell death (apoptosis).

Researches involving plant derived products aiming to discover extractives useful for different purposes have been growing, and among them, essential oils (EO) are noteworthy. One of the main sources of EO is the Lamiaceae family. Belonging to this family, Hesperozygis ringens (Benth.) Epling is a native species from the Pampa biome, popularly known as espanta-pulga . This study aimed to evaluate the biological potential of EO from its leaves as allelopathic and larvicidal, as well as to check the seasonal and individual variability of yield and chemical composition of this oil. EO of four specimens were obtained from leaves collected in different seasons of a year and had their yield (% m/m) and chemical compositions determined. EO were extracted by hidrodestillation in Clevenger apparatus and analyzed by gas chromatography coupled to mass spectrometry (GC-MS) and gas chromatography with flame ionization detector (GC-FID). The allelopathic potential of the EO was tested against seeds of Dicots and Monocots classified as bioindicators [Avena strigosa Schreb. and Lactuca sativa L.], weeds [Lolium multiflorum Lam and Bidens pilosa L.] and crops [Oryza sativa L. and Glycine max (L.) Merr.] by observing the following variables: germination, emergence velocity index, root length, shoot lenght and total length of seedlings. The tested concentrations were 0.25, 0.50, 1.00, 2.50 and 5.00%.The EO of H. ringens had also its larvicidal activity tested against larvae of Odonata in order to determine its 50% lethal concentration (LC50). Regarding the allelopathic tests on Dicotyledons, EO with 82.02% of pulegone inhibited completely the germination of B. pilosa at 5.00%, without affecting significantly L. sativa, but slowing the emergence and damaging root lengths and seedlings of G. max. Regarding the monocots, the same concentration strongly impaired L. multiflorum, without affecting the germination of O. sativa, but it influenced negatively the other evaluated parameters. In addition, the development of the seeds of A. strigosa was completely inhibited at the concentration of 2.50%. The yield of EO proved to be influenced by seasonality, being higher in spring, summer, and autumn. The yield also showed individual variability (1.15 a 4.38%), proving to be higher in specimen 4. The chemical composition of EO obtained from leaves collected in autumn, spring, and summer showed similar results. The production of the major constituent (pulegone) and the predominant class (oxygenated monoterpenoids) were favored in spring, summer, and autumn. These seasons proved to be more indicated for the EO extraction, since they enabled concomitantly higher yields and higher contents of oxygenated monoterpenoids and pulegone. Regarding the larvicidal activity, EO containing 95.18% of pulegone showed a LC50 of 69.05 µL L-1 against the Odonata larvae. / Pesquisas sobre produtos derivados de plantas visando à descoberta de extrativos úteis para diferentes fins são crescentes e, dentre estes, destacam-se os óleos essenciais (OE), tendo como uma de suas principais fontes a família Lamiaceae. Pertencente a ela, Hesperozygis ringens (Benth.) Epling é uma espécie nativa do bioma Pampa, conhecida popularmente por espanta-pulga. O presente trabalho teve como objetivos avaliar o potencial biológico do OE de suas folhas como alelopático e larvicida, bem como verificar as variabilidades sazonal e individual do rendimento e composição química desse óleo. O OE de quatro indivíduos foi obtido de folhas coletadas nas diferentes estações de um ano, determinando-se o rendimento do OE (% m/m) e as composições químicas das amostras. O OE foi extraído por hidrodestilação, em aparelho Clevenger e teve sua composição química analisada por cromatografia gasosa acoplada à espectrometria de massas (CG-EM) e cromatografia gasosa com detector de ionização em chama (CG-DIC). O potencial alelopático do OE foi testado em sementes de Dicotiledôneas e Monocotiledôneas, classificadas como bioindicadoras [Avena strigosa Schreb. e Lactuca sativa L.], plantas daninhas [Lolium multiflorum Lam. e Bidens pilosa L.] e culturas [Oryza sativa L. e Glycine max (L.) Merr.], através da avaliação das seguintes variáveis: germinação, índice de velocidade de emergência e comprimentos das raízes, partes aéreas e total das plântulas. As concentrações testadas foram: 0,25; 0,50; 1,00; 2,50; 5,00%. O OE de H. ringens também teve sua atividade larvicida testada em larvas de Odonata, a fim de determinar sua concentração letal 50% (CL50). Em relação aos testes alelopáticos sobre Dicotiledôneas, o OE com 82,02% de pulegona inibiu completamente a germinação de B. pilosa na concentração de 5,00%, sem afetar significativamente L. sativa, porém retardando a emergência e prejudicando os comprimentos de raiz e plântula de G. max. Em relação às monocotiledôneas, a mesma concentração prejudicou fortemente L. multiflorum, sem afetar a germinação de O. sativa, porém influenciando negativamente os demais parâmetros. Já o desenvolvimento das sementes de A. strigosa foi completamente inibido na concentração de 2,50%. O rendimento do OE demonstrou ser influenciado pela sazonalidade, sendo maior na primavera, verão e outono. O rendimento também apresentou variabilidade individual (1,15 a 4,38%), demonstrando ser mais elevado no indivíduo 4. Em relação à composição química, os OE obtidos de folhas coletadas no outono, primavera e verão apresentaram resultados semelhantes. A produção do constituinte majoritário (pulegona) e da classe predominante (monoterpenoides oxigenados) foram favorecidos naprimavera, verão e outono. Estas estações demonstraram ser as mais favoráveis para extração de OE por apresentar concomitantemente maiores rendimentos e teores mais elevados de monoterpenoides oxigenados e de pulegona. Quanto à atividade larvicida, o OE contendo 95,18% de pulegona apresentou uma CL50 de 69,05 µL L-1 frente a larvas de Odonata.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Considered viral diseases of major re-emerging in the world, the dengue, chikungunya and Zika have as the main vector Aedes aegypti (L.) (Diptera: Culicidae). Larvicidal vector control is an important measure to prevent the transmission of such infections. A major challenge in the control of this arthropod is the low sensitivity of its population through the use of conventional larvicides. Thus, the insect acquires resistance, reducing the effectiveness of these pesticides. Consequently, it will lead to an increase in the risks of toxicity in nontarget organisms and a change in the environment. An alternative to avoid problems caused by the use of these products is the search for new compounds with less environmental impact and better benefits to human health. The indole molecule ring represents one of the subunits of great importance in the discovery of new pesticide products for the pharmaceutical market. By Friedel-Crafts acylation reaction, the C-3 of this ring makes it susceptible to chemically react. Thus, 12 indole analogues were synthesized as potential larvicidal agents against Ae. aegypti in its 3rd larval stage followed by the evaluation of the toxicity in nauplii of Artemia sp. The compounds were identified by analytical thin-layer chromatography, purified on a silica gel 60 chromatographic column (using the Hexane: Ethyl acetate (90:10, v / v) binary system as the mobile phase) and characterized by melting point, 13C and 1H NMR (using a residual solvent peak or TMS as reference for 1 H NMR spectra), mass spectrum and infrared. Bioassays were performed using 20 larvae per test, disposable cups containing 20mL of the test solution in triplicate. Branched aliphatic side chain derivatives were more potent than the others were, and the linear ones exhibited potency oscillation as the addition of the methylene chains. Toxicity tests indicated that (3-chlorophenyl)1-(1H-indol-3-yl)methanone, with moderate larvicidal potency (LC50 = 50.59 ppm), showed the highest selectivity index (SI >19.7), being less toxic to Artemia sp. than Ae. aegypti. The relationships between structural changes in indole derivatives and their LC50 results provide information that may contribute to the understanding of the influence of physicochemical properties on the larvicidal action of this class of compounds, without damage to the ecosystem. / Consideradas doenças virais de grande reemergência no mundo, a dengue, chikungunya e zika têm como principal vetor o Aedes aegypti (L.) (Diptera:Culicidae). O controle vetorial baseado em larvicidas é uma medida importante de prevenir a transmissão de tais infecções. Um grande desafio nas formas de controle desse artrópode está na baixa sensibilidade de sua população através do uso de larvicidas convencionais. Assim, o inseto adquire resistência, reduzindo a eficácia desses pesticidas. Consequentemente, levará a um aumento nos riscos de toxicidade em organismos não-alvo e uma alteração ao meio ambiente. Uma alternativa para evitar problemas ocasionados pela utilização desses produtos é a pesquisa por novos compostos com menos impacto ambiental e melhores benefícios à saúde humana. O anel da molécula do indol representa uma das subunidades com grande importância na descoberta de novos produtos pesticidas para o mercado farmacêutico. Por reação de acilação de Friedel-Crafts, o C-3 deste anel torna suscetível a reagir quimicamente. Assim, foram sintetizados 12 análogos do indol como potenciais agentes larvicidas contra o Ae. aegypti no seu 3º estágio larvar, seguido pela avaliação da toxicidade em náuplios de Artemia sp. Os compostos sintetizados foram identificados por cromatografia em camada delgada analítica, purificados em coluna cromatográfica de sílica gel 60 (utilizando o sistema binário Hexano: Acetato de etila (90:10, v/v) como fase móvel), e caracterizados por ponto de fusão, RMN de 13C e 1H (utilizando um pico de solvente residual ou TMS como referência para os espectros de RMN 1H), espectro de massas e infravermelho. Os bioensaios foram realizados utilizando 20 larvas por teste, copos descartáveis contendo 20 mL da solução teste em triplicata. Derivados de cadeias laterais alifáticas ramificadas foram mais potentes que os demais, e os lineares exibiram oscilação de potência conforme acréscimo das cadeias de metileno. Ensaios de toxicidade apontaram que a (3-clorofenila)1-(1H-indol-3- ila)metanona, com potência larvicida moderada (CL50 = 50,59 ppm), exibiu o maior índice de seletividade (IS >19,7), sendo menos tóxico para Artemia sp do que para o Ae. aegypti. As relações entre mudanças estruturais dos derivados do indol e seus resultados de CL50 fornecem informações que podem contribuir para a compreensão da influência de propriedades físico-químicas na ação larvicida desta classe de compostos, sem prejuízos ao ecossistema. / São Cristóvão, SE

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