Made available in DSpace on 2016-03-28T12:47:36Z (GMT). No. of bitstreams: 2 nadia_bello_ioc_mest_2014.pdf: 2601818 bytes, checksum: 133b9a781ea207c7d3a928901d70b72e (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2016-01-13 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / A Leishmaniose Tegumentar Americana (LTA) é uma dermatozoonose de notificação compulsória considerada endêmica em grande parte da Bolívia. Este estudo teve como objetivos descrever aspectos clínicos e epidemiológicos da doença em uma região da fronteira Bolívia-Brasil e propor hipóteses sobre a existência de determinantes socioeconômicos e ambientais que contribuam para a endemicidade da LTA no Departamento de Pando, Bolívia entre os anos de 2008 a 2012. Para tanto, foram aplicados dois desenhos de estudo: i) um estudo de série de casos para o qual foi feita a coleta de informação dos registros médicos de pacientes com LTA entre os anos 2008 a 2012 (n=525) dos centros de saúde dos municípios de Cobija e Filadelfia; estas informações foram adicionadas à base de dados existentes sobre os casos positivos de LTA em todos os municípios do departamento de Pando (n=1.560) segundo dados do SEDES (Serviço Departamental de Saúde) Pando e ii) um estudo transversal realizado em três locais: na comunidade Empresiña do município de Filadelfia, no centro de Cobija e no bairro Villa Busch, pertencente ao município de Cobija. No estudo de série de casos com os dados do SEDES, observou-se que dos 1.560 casos de LTA registrados entre 2008 e 2012, a maior parte era do sexo masculino (73,8%), 16,2% ocorreram em crianças com idade até 12 anos, 74% em jovens de 13 a 43 anos e 26% em pessoas com mais de 30 anos, sendo a média de idade 24,2 ± 13,4 anos A lesão única cutânea ulcerada foi a forma clínica mais comum, localizada principalmente em áreas expostas. A proporção de pacientes com a forma mucosa da doença foi 5,6%. A média de idade dos pacientes acometidos da forma mucosa (26,9± 14,4 anos) foi ligeiramente superior àquela observada nos pacientes com a forma cutânea (24 ± 13,4 anos) (p=0,047). As profissões mais frequentemente identificadas entre os pacientes foram agricultor (13%) e estudante (30%). De 100% dos casos (n=1.560), observou-se que 45% (n=706) pacientes atingiram a cura completa da lesão e 3% dos pacientes (n=49) abandonaram o tratamento. No estudo transversal, comparando-se os três locais de estudo, foi possível observar que a comunidade Empresiña possuía habitações mais precárias do que no centro de Cobija e na Villa Busch, estas moradias por serem mais próximas à mata e pelo material utilizado na estrutura da vivenda (madeira em 78%) tinham maior facilidade de ingresso do vetor, 50% das famílias desta comunidade ia para a mata diariamente e, destes moradores, somente o 44% tinham conhecimento básico da doença Em conclusão, a LTA continua sendo uma doença endêmica e negligenciada na região, relacionada às atividades profissionais, com ênfase para a agricultura, sendo alta a proporção de pacientes que não conclui o tratamento, possivelmente por dificuldade de acesso ao serviço de saúde. A proporção de casos com comprometimento mucoso é alta e relacionada às dificuldades na chegada do fármaco para realizar o tratamento / American C utaneous L eishmaniasis (ACL) is a notifiable dermatozoonosis considered endemic in a great part of Bolivia. This study aimed to describe the clinical and epidemiological aspects of the d isease in a Bolivia - Brazil border region and propose hypotheses about socioeconomic and environmental determinants contributing to the endemicity of ACL in the Department of Pando, Bolivia, from 2008 to 2012. To do so, t wo study designs were performed: i) a case series through information from medical records of patients with ACL from 2008 to 2012 (n = 525) obtained in health centers of Cobija and Philadelphia municipalities; this information was added to the existing database of the positive cases of ACL in all municipalities of the Department of Pando (n = 1 . 560) according to the SEDES (Serviço Departamental de Saúde) of Pando and ii) a cross - sectional survey in three localities: Empresiña community of Philadelphia municipality, the center of Cobija and Villa Busch neighborhood of Cobija municipality . In the case series, it was observed that, from the 1.560 ACL cases registered from 2008 to 2012, most of them were male (73,8%), 16, 2% occurred in c hildren aged 12 years, 74 % in young people of 13 to 43 year s old and 26.2% in people over 30 years old, with an average age of 24,2 ± 13,4 years. The unique ulcerated cutaneous lesion was the most common clinical form, located mainly in exposed areas. The proportion of patients with a mucosal form of the disease w as 5.6%, the average age of the patients with mucosal lesions (26,9 ± 14, 4 years) was slightly higher than observed in patients with the cutaneous form (24 ± 13 , 4 years) (p = 0, 047). The most frequently occupations identified a mong patients were farmers (13%) and students (30 %). Among 100% of the cases (n= 1.560 ) , it was observed that 45% of patients (n= 706 ) achieved complete healing of lesions and 3% of the patients (n= 49 ) abandoned the treatment. In the cross - sectional study it was observed that Empresiñ a community was poorer than the center of Cobija and Villa Busch. Empresiña was closer to the forest and the material used in the structure of the houses (wood in 78%) made then more vulnerable to vectors, 50% of families in this community went to the fore st every day, and, among them, only 44% had basic knowledge of the disease. In conclusion, ACL remains an endemic, neglected and poverty related disease in the region, associated to professional activities, with emphasis on agriculture, with a high proport ion of patients that do not complete treatment, possibly due to poor access to health services. The proportion of cases with mucosal involvement is high and is possibly related to difficulties in access to the treatment.

Made available in DSpace on 2016-03-28T12:53:43Z (GMT). No. of bitstreams: 2 luzinei_couto_ioc_mest_2014.pdf: 3229136 bytes, checksum: e00df22ea1070f548fd298cf2fe9a40c (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2016-01-13 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Resultados anteriores demonstraram que a administração oral e intranasal de antígenos brutos de Leishmania (Leishmania) amazonensis (LaAg) protege parcialmente camundongos contra a infecção por L. amazonensis. No entanto, estudos de vacinação contra as espécies do subgênero Viannia, as principais espécies causadora da leishmaniose cutânea e mucosa nas Américas, têm sido dificultados pela falta de modelos experimentais de fácil manuseio que reproduzam a doença humana. Recentemente, foi demonstrado que o hamster dourado é um modelo adequado para o estudo da imunopatogênese da leishmaniose cutânea causada por L. (Viannia) braziliensis. Usando o modelo hamster, investigamos se o efeito protetor da imunização intranasal com LaAg pode ser estendido a infecção por L. braziliensis. Hamsters foram vacinados com duas doses de LaAg (10 \03BCg) intranasal (IN) ou duas doses de LaAg (20 \03BCg) por via intramuscular (IM) e duas semanas após a vacinação foram desafiados com L. braziliensis Os resultados demonstraram que a imunização com LaAg reduziu significativamente o crescimento da lesão e da carga parasitária, bem como os níveis de IgG e IgG2 no plasma. No final do experimento, 114 dias após a infecção, os hamsters que foram considerados protegidos expressaram na pele níveis semelhantes de mRNA para IFN-\03B3 e IL-10 comparados aos níveis na pele de animais não infectados, diferentemente do observado nos animais não protegidos. Comparando com a via nasal, a imunização pela via intramuscular (IM) não induziu proteção. Estes resultados demonstram pela primeira vez que a imunização pela via nasal pode induzir proteção cruzada contra a infecção por L. braziliensis / Previous results have shown that oral and intranasa l administration of crude Leishmania (Leishmania) amazonensis antigens (LaAg) partially protects mice against L. amazonensis infection. However, vaccination studies on species of the subgenus Viannia , the main causative species of cutaneous and mucos al leishmaniasis in the Americas, have been hampered b y the lack of easy-to-handle bio-models that accurately mimic the human disease. Recently, we demonstrated that the golden hamster is an appropriate model for studying the immunopathogenesis of cutaneous leishmaniasis cause d by L. (Viannia) braziliensis. Using the golden hamster model, we investigated whe ther the protective effect of intranasal immunisation with LaAg can be extended t o L. braziliensis infection. Golden hamsters vaccinated with either two intranas al (IN) doses of LaAg (10 μ g) or two intramuscular doses of LaAg (20 μ g) were challenged 2 weeks post-vaccination with L. braziliensis. The results showed that IN immunisation with LaAg s ignificantly reduced lesion growth and parasitic load as well as serum IgG and IgG2 levels. At the experimental endpoint on day 114 post-infection , IN-immunised hamsters that were considered protected expressed IFN- γ and IL10 mRNA at similar levels as uninfected skin. Unlike what was observed in animal s not protected. In contrast to the nasal route, intramuscular (IM) immunisation failed to provide protection. These results demonstrate for the first time that the nas al route of immunisation can induce cross protection against L. braziliensis infection.

OLIVEIRA, Rodrigo Alves de. Disfunção renal em pacientes com leishmaniose tegumentar americana antes e após o uso do antimoniato de meglumina. 2011. 89 f. Tese (Doutorado em Ciências Médicas) – Faculdade de Medicina, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2011. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2015-05-19T11:09:03Z No. of bitstreams: 1 2011_tese_raoliveira.pdf: 1579868 bytes, checksum: 1ae477458daeaba94db4a9a7fba1384c (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2015-05-19T11:13:46Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2011_tese_raoliveira.pdf: 1579868 bytes, checksum: 1ae477458daeaba94db4a9a7fba1384c (MD5) / Made available in DSpace on 2015-05-19T11:13:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2011_tese_raoliveira.pdf: 1579868 bytes, checksum: 1ae477458daeaba94db4a9a7fba1384c (MD5) Previous issue date: 2011 / Leishmaniasis is an infectious, non-contagious zoonotic disease for which humans are incidental hosts. Various types of kidney injury have been reported in cases of visceral leishmaniasis. The renal dysfunction seen in ACL has been attributed to the use of antimonials. Objectives. To determine whether ACL itself and its specific treatment can cause renal dysfunction, we evaluated ACL patients before and after to the initiation of treatment. Patients and methods. This was a controlled, observational prospective study, conducted in the city of Barbalha, state of Ceara, Brazil, between July 2008 and August 2009. The study group comprised 37 patients diagnosed with ACL based on clinical, epidemiological, serological and histopathological criteria, as well as on Montenegro skin test results. Before and after specific treatment, glomerular and renal tubular function were tested, and the results were compared with those obtained from 10 control subjects. Urine and plasma osmolality (Uosm and Posm) were tested before and after administration of DDAVP (intranasal, after a 12-h fast), before and after specific treatment. Plasma bicarbonate (Pbic), urinary pH (UpH) and plasma pH (PpH) were evaluated before and after oral administration of CaCl2 (acidification test), before and after specific treatment. The following urinary exosomes were quantified before specific treatment: AQP2; NHE3; NKCC2 H-ATPase and pendrin. Results. Mean age was 35.6 12 years in the study group and 32.2 ± 11.7 years in the control group. The study group comprised 19 men and 26 non-whites. All patients had cutaneous ACL (mean disease duration, 28.5 ± 20.6 days). Of the 37 patients, 27 had a single skin lesion, 7 had 2-4 lesions, and 3 had >4 lesions. Significant glomerular dysfunction wasn´t shown neither before, nor after specific treatment (plasma creatinine, 0.81 0.16 mg/dl; ClCr, 109 31 ml/min). Urinary concentrating defect was identified based on the post-test U/Posm ratio (<2.8) in 27 patients before treatment and in 31 patients after treatment (77% vs 88%, p=NS) and post-test Uosm (<700 mOsm/kg) in 22 (63%). Significant difference in U/Posm ratio in T4 wasn´t shown between before and after treatment (2.19 ± 0.73 vs 1.95 ± 0.73, p=NS. There was no statistical difference between the pre-and post-test osmolality values (539 43 vs. 618 34 mOsm/kg). Urinary expression of AQP2 was significantly lower in patients than in controls (99.5 0.5 vs. 38.5 12%, p=0.006), whereas that of NKCC2 was significantly higher (102 2.5 vs. 147 12%, p=0.02). Urinary acidification defect (post-test UpH >5.5) was detected in 15 patients before specific treatment and in 6 patients after treatment (40% vs 16%, p=0.012). Pre-test Pbic was <21 mEq/L in 12 patients (32.5%), and pre-test PpH was <7.35 in 14 (38%). Expression of NHE3 was significantly higher in the patients than in the controls (100 0.6 vs. 176 15%, p=0.015), as was that of H-ATPase (98 0.2 vs. 190 8%, p=0.04) and pendrin (176 ± 15 vs. 100 ± 0.6%, P = 0.015). Conclusion. ACL can cause assimptomatic tubular dysfunction. It is likely that the urinary concentrating defect observed in patients with ACL is caused by downregulation of AQP2 expression, and that the increased NKCC2 expression represents a compensatory mechanism. The greater expression of NHE3 and H-ATPase might represent another compensatory mechanism to pendrin expression increase, since ACL patients also presented urinary acidification defect. / A leishmaniose é uma doença infecciosa, não contagiosa, zoonótica em que os seres humanos são hospedeiros incidentais. Vários tipos de lesão renal têm sido relatados em pacientes com leishmaniose visceral. A disfunção renal encontrada na leishmaniose tegumentar americana (LTA) tem sido atribuída aos antimoniais pentavalentes. Objetivos. Para determinar se a LTA e seu tratamento específico podem causar disfunção renal, os pacientes com LTA foram avaliados antes e após o início do tratamento. Pacientes e Métodos. Este foi um estudo controlado, prospectivo e observacional, realizado na cidade de Barbalha, Estado do Ceará, Brasil, entre julho de 2008 e agosto de 2009. O grupo de estudo foi de 37 pacientes com diagnóstico de LTA, baseado em critérios clínicos, epidemiológicos, sorológicos e histopatológicos, bem como na intradermoreação de Montenegro. Antes de iniciar o tratamento específico e ao final da terapia, a função glomerular e tubular foi avaliada e os resultados foram comparados com 10 controles sadios. Osmolalidade urinária foi dosada antes e depois (pré e pós-teste) da administração de DDAVP (intranasal, depois de um jejum de 12h noturno). Bicarbonato plasmático (Pbic), pH urinário (UpH) and plasmático (PpH) foram dosados antes e após (pré e pós-teste) a administração de CaCl2 (teste de acidificação). Os seguintes exossomas urinários foram quantificados antes do início do tratamento: AQP2; NHE3; NKCC2; H-ATPase e pendrina. Resultados. Idade média foi 35,6 12 anos no grupo de estudo e 32,2 ± 11,7 anos no grupo-controle. O grupo de estudo foi composto de 19 homens, sendo 26 não-brancos. Todos os pacientes tinham LTA na forma cutânea (duração média da doença, 28,5 ± 20,6 dias). Dos 37 pacientes 27 tinham apenas uma lesão, sete tinham de duas a quatro lesões e três deles tinham mais que quatro lesões. Não se evidenciou disfunção glomerular importante, nem antes nem depois do tratamento (creatinina plasmática, 0,81 0,16 mg/dl; ClCr, 109 31 ml/min). Defeito na concentração urinária baseado na taxa U/Posm pós-teste (<2,8) esteve presente em 27 pacientes antes do tratamento e em 31 pacientes depois do tratamento (77% x 88%, p=NS) e Uosm pós-teste (<700 mOsm/kg) em 22 pacientes (63%). Não houve diferença estatística entre os valores de osmolalidade urinária entre pré e pós-teste (539 43 vs. 618 34 mOsm/kg), assim como quando se comparou a taxa U/Posm em T4 entre pré e pós-tratamento (2,19 ± 0,73 x 1,95 ± 0,73, p=NS). Expressão urinária de AQP2 foi significativamente mais baixa no grupo de estudo do que nos controles (99,5 0,5 x 38,5 12%, p=0,006), enquanto o NKCC2 foi significativamente mais alto (102 2,5 x 147 12%, p=0.02). Defeito de acidificação urinária (pós-teste UpH >5.5) foi identificado em 15 pacientes pré-tratamento e em seis pacientes pós-tratamento (40% x 16%, p=0,012). Bicarbonato plasmático pré-teste foi <21 mEq/L in 12 pacientes (32,5%), e pH plasmático pré-teste foi <7,35 em 14 pacientes (38%). Expressão de NHE3 foi significativamente mais alta nos pacientes do que no grupo-controle (100 0,6 x 176 15%, p=0,015), assim como na H-ATPase (98 0,2 x 190 8%, p=0.04) e pendrina (176 ± 15 x 100 ± 0,6%, P = 0,015). Conclusão. A LTA pode causar disfunção tubular renal assintomática. É provável que o defeito na concentração urinária observado em pacientes com LTA seja causado por uma menor expressão de AQP2 e um aumento na expressão de NKCC2, o que pode representar um mecanismo compensatório. A maior expressão de NHE3 e H-ATPase parecem representar outro mecanismo compensatório ao aumento na expressão da pendrina, uma vez que estes pacientes apresentaram também um defeito na acidificação urinária

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, 2014 / Submitted by Ana Cristina Barbosa da Silva (annabds@hotmail.com) on 2014-10-22T18:32:03Z No. of bitstreams: 1 2014_CiroMartinsGomes.pdf: 46964675 bytes, checksum: a34a4081b873bf4c7326f0b1f1ae37b1 (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2014-11-12T13:12:55Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_CiroMartinsGomes.pdf: 46964675 bytes, checksum: a34a4081b873bf4c7326f0b1f1ae37b1 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-11-12T13:12:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_CiroMartinsGomes.pdf: 46964675 bytes, checksum: a34a4081b873bf4c7326f0b1f1ae37b1 (MD5) / Introdução: A técnica da reação em cadeia da polimerase (PCR) aumenta a sensibilidade do diagnóstico da leishmaniose tegumentar americana (LTA), especialmente na forma mucosa (LM). Teve-se por objetivo avaliar a acurácia dos resultados de PCR em amostras da mucosa nasal, oral e de saliva no diagnóstico da LM e da leishmaniose cutânea (LC). Métodos: Pacientes atendidos no Hospital Universitário de Brasília foram inclusos de forma consecutiva em amostra de conveniência. Intradermorreação de Montenegro (IDRM), imunofluorescência indireta (IFI), imprint em lâmina, cultura, exame histopatológico e PCR em papel filtro da lesão foram utilizados em paralelo para alocação dos casos nos grupos de LM, LC e controles. As amostras mucosas avaliadas por PCR foram coletadas por swab nasal (SN), microtubo de 1,5mls (saliva) e esfregaço oral na forma de imprint em papel de filtro (PFO). Para a PCR, utilizou-se par de iniciadores que amplificam sequência de 120pb do DNA mitocondrial de Leishmania spp. Para a identificação do subgênero, empregou-se digestão pelas enzimas de restrição HaeIII e Bsr1. Realizou-se ainda revisão sistemática da literatura com o objetivo de agregação com os dados encontrados na pesquisa clínica. Resultados: Foram incluídos 69 pacientes, sendo 17 (25%) com LM, 19 (28%) com LC e 33 (48%) controles. Para o diagnóstico da LM, em comparação aos controles, a melhor acurácia foi alcançada pela PCR do SN 86% (IC-95%=73,81-93,05), seguido da saliva 74% (IC-95%=60,45-84,13) e PFO 68% (IC-95%=54,19-79,24). As especificidades do SN e PFO foram completas, negativas em todos os controles sem LTA. Dois casos de LC tiveram SN e PFO simultaneamente positivos. A revisão sistemática da literatura resultou na inclusão de 14 referências. Análise dos dados por meta-análise, possível apenas para amostras de PCR de fragmento da lesão em 2 dos artigos selecionados, demonstrou uma sensibilidade de 70% (IC-95%=0,57-0,81), especificidade de 97% (IC-95%=0,89-1), e razão de chances de 40,34 (IC-95%=11,06-147,08) no diagnóstico da LM. Identificou-se Leishmania do subgênero Viannia em 12 casos de LM e 11 casos da LC. Em apenas um caso de LC foi identificado o subgênero Leishmania. Conclusões: O SN demonstrou a melhor acurácia entre os exames de PCR na mucosa. Os resultados da PCR nas três formas de coleta nasal, oral e de saliva apresentaram maior especificidade que a IDRM e IFI. Estes mostraram ainda sensibilidade comparável aos exames de cultura e imprint em lâmina, com a vantagem da coleta menos invasiva. _____________________________________________________________________________ ABSTRACT / Introduction: The technique of polymerase chain reaction (PCR) increases the sensitivity ofthe etiological diagnosis of american cutaneous leishmaniasis (ACL), especially in themucocutaneous form (MCL). The aim of the study was to evaluate the accuracy of PCR in thenasal cavity, oral mucosa and saliva in the diagnosis of MCL and cutaneous leishmaniasis(CL). Methods: Patients attending the University Hospital of Brasilia were consecutivelyincluded in a convenience sample. Montenegro skin test (MST), indirect immunofluorescence(IIF), smear, culture, histopathology and PCR from filter paper imprints of lesion biopsy(FPIL) were used in parallel for allocation in groups of MCL, CL and controls. Mucosalsamples evaluated by PCR were collected by nasal swab (NS), 1.5mls microtubes (saliva) andoral filter paper imprints (OFPI). The primers used resulted on a 120-bp sequence present inthe mitocondrial DNA of Leishmania spp. Digestion with the restriction enzymes HaeIII andBSR1 were used for subgenus identification. A systematic review of the literature wasconducted with the goal of aggregation with data found in the present clinical research.Results: 69 patients were included, 17 (25%) with MCL, 19 (28%) with CL and 33 (48%)controls . For the diagnosis of MCL, compared to controls, the best accuracy was achieved byNS 86% (95%CI=73.81-93.05), followed by saliva 74% (95%CI=60.45-84.13) and OFPI68% (95%CI=54.19-79.24). The specificity of the NS and OFPI were complete, negative inall controls without ACL. Two cases of isolated CL showed positivity for both NS and OFPI.The systematic review of the literature resulted in the inclusion of 14 previous references.Analysis of aggregated data by meta-analysis, possible only for tissue samples in 2 of thepreviously selected articles showed a sensitivity of 70% (IC-95%=0.57-0.81), a specificity of97% (IC-95%=0.89-1) and an odds-ratio of 40.34 (IC-95%=11.06-147.08) in the diagnosis ofMCL. We identified the Leishmania subgenus Viannia in 12 cases of MCL and in 11 cases ofCL. In only one case of CL the subgenus Leishmania was identified. Conclusions: NSshowed the best accuracy among the PCR tests in the mucosa. PCR results in all three formsof nasal, oral and saliva samples showed higher specificity than the MST and IIF. Themethods also show a sensitivity comparable to culture and smears, with the advantage of aless invasive collection.

Submitted by Daniella Sodre (daniella.sodre@ufpe.br) on 2015-04-15T14:03:55Z No. of bitstreams: 2 Dissertaçao Aline Caroline da Silva.pdf: 3359231 bytes, checksum: 7470981050e12f219e445b217bcdf190 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-04-15T14:03:55Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertaçao Aline Caroline da Silva.pdf: 3359231 bytes, checksum: 7470981050e12f219e445b217bcdf190 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Previous issue date: 2013-07-30 / A leishmaniose é uma infecção causada por diferentes espécies de protozoários do gênero Leishmania. Atualmente não existe vacina disponível para infecções por Leishmania e os tratamentos convencionais são tóxicos para os pacientes. Por esse motivo, o desenvolvimento de novas drogas leishmanicidas é uma necessidade urgente. No presente trabalho foi avaliada a citotoxicidade, atividade leishmanicida, a produção de óxido nítrico (NO), a secreção das citocinas IL-12, IL-10 e TNF e a indução da morte celular sob a influência de 22 novos compostos sintéticos derivados da estrutura das Ftalil-Hidrazona-Tiazóis e Tiossemicarbazonas. A citotoxicidade dos compostos foi avaliada em macrófagos peritoniais através do método do MTT e o índice de seletividade foi determinado. Foi avaliado o efeito dos compostos sobre o crescimento de formas promastigotas de L. amazonensis. Os compostos mais promissores foram avaliados sobre as formas amastigotas intracelulares. A produção de NO, bem como de citocinas por macrófagos infectados ou não e tratados ou não com os compostos foi avaliada pelo reagente de Griess e ELISA de captura, respectivamente. Foi avaliado o mecanismo de morte celular induzido pelos compostos em promastigotas tratadas e controle marcadas com anexina –FITC e iodeto de propídio, com posterior análise por citometria de fluxo. Os dados mostram que todos os compostos inibiram o crescimento de formas promastigotas e amastigotas além de apresentarem baixa citotoxidade em macrófagos. A presença de TS02, PM01, PM04 e PM10 na cultura de parasitas causou morte celular por apoptose. A TS02 também causou necrose. Quanto à produção de NO, esta foi detectada em macrófagos não infectados incubados com os compostos por 24 e 48h. Também foi dosada a produção de NO em macrófagos infectados, onde foi observada uma redução significativa dessa produção na presença do parasita. O tratamento com a TS11 das culturas infectadas restabeleceu a produção do NO pelos macrófagos. A presença da TS01 no tratamento das culturas infectadas causou aumento da produção de TNF. Na cultura não infectada, TS01, TS09, TS10, TS11 e PM01 causaram aumento significativo de TNF. Houve aumento significativo da produção de IL-12, nas culturas infectadas e tratadas com TS09, TS11, TS15 e PM01, e nas culturas não infectadas e tratadas com TS01, TS02, TS10, TS12, TS15, PM01 e PM04. O tratamento das culturas infectadas não interferiu com a produção de IL-10. Em culturas não infectadas houve aumento na produção de IL-10 após incubação com TS01, TS02, TS09, TS15 e PM01. A baixa toxicidade aos macrófagos, a atividade leishmanicida e a presença de citocinas de perfil Th1 apresentadas apontam para a utilização dos compostos TS01, TS11 e PM01 como agentes promissores para o tratamento da leishmaniose cutânea.

Submitted by Hiolanda Rêgo (hiolandarego@gmail.com) on 2017-05-05T16:28:47Z No. of bitstreams: 1 Dissertação_Med_ Fernanda Ventin de Oliveira Prates.pdf: 4623431 bytes, checksum: 429fe54a0879690aab4c7df414262e0d (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-05T16:28:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação_Med_ Fernanda Ventin de Oliveira Prates.pdf: 4623431 bytes, checksum: 429fe54a0879690aab4c7df414262e0d (MD5) / CNPq;FAPESB / ENSAIO CLÍNICO RANDOMIZADO E CONTROLADO DO USO DE FLUCONAZOL NO TRATAMENTO DA LEISHMANIOSE CUTÂNEA CAUSADA POR LEISHMANIA (VIANNIA) BRAZILIENSIS. Objetivo: Avaliar a resposta terapêutica e a segurança do Fluconazol no tratamento de pacientes com leishmaniose cutânea (LC) causada por L. braziliensis em Corte de Pedra-BA. Métodos: Ensaio clínico randomizado de fase III, comparando Fluconazol com Glucantime ® no tratamento da LC. Resultados: Da amostra calculada de 70 pacientes com LC, foram incluídos 53 indivíduos. Destes, 26 foram tratados com Glucantime®, na dose de 20mg/kg/dia por 20 dias, e 27 tratados com Fluconazol, por via oral, por 28 dias, com dose diária de 6,5-8,0mg/Kg. A análise por intenção de tratar, mostrou uma taxa de cura inicial (2 meses após o tratamento) de 22,2% (6/27) no grupo Fluconazol, e de 53,8% (14/26) no grupo Glucantime ® (P=0,037). Na avaliação 6 meses após o tratamento, as taxas de cura foram mantidas; 22,2% (6/27) no grupo Fluconazol e 53,8% (14/26) no grupo Glucantime ® (P=0,037), o que indicou a interrupção na inclusão de novos pacientes. O tempo médio de cicatrização das lesões ulceradas foi de 157,6 dias no grupo Fluconazol e de 117,2 dias no grupo Glucantime ® (P=0,014). A ocorrência de efeitos colaterais no grupo Glucantime ® foi de 34,6% (9/26), e os mais comuns foram mialgia (23%) e artralgia (11,5%). No grupo Fluconazol, essa taxa foi de 37,0% (10/27), e os mais comuns foram: tontura (22,2%) e náuseas (11,1%). Conclusão: Fluconazol utilizado na dose de 6,5- 8mg/kg/dia por 28 dias não pode ser considerado como um tratamento eficaz para LC por L. braziliensis em Corte de Pedra-BA.

Submitted by Hiolanda Rêgo (hiolandarego@gmail.com) on 2017-05-24T18:47:40Z No. of bitstreams: 1 Tese_Med_Taís Menezes Cerqueira Campos de Brito.pdf: 1736787 bytes, checksum: 003a13a8467c51581b7ceeef54973d9e (MD5) / Approved for entry into archive by Delba Rosa (delba@ufba.br) on 2017-07-03T14:43:37Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese_Med_Taís Menezes Cerqueira Campos de Brito.pdf: 1736787 bytes, checksum: 003a13a8467c51581b7ceeef54973d9e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-07-03T14:43:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese_Med_Taís Menezes Cerqueira Campos de Brito.pdf: 1736787 bytes, checksum: 003a13a8467c51581b7ceeef54973d9e (MD5) / CNPq;NIH;INCT-DT / Introdução: Leishmaniose cutânea (LC) devido à infecção por L. braziliensis é caracterizada pelo desenvolvimento de lesões cutâneas ulcerativas. Recentemente, atenção tem sido dada à participação das células T CD8+ para a resposta inflamatória deletéria observada em pacientes com LC. Foi demonstrado que estas células contribuem para a imunopatologia através da produção de citocinas pró-inflamatórias, granzima e perforina. Em adição às células T CD8+, células NK e NKT são também importantes fontes de citocinas pró-inflamatórias, granzima e perforina, e o papel destas células na infecção por L. braziliensis ainda não foi investigado. Objetivo: Avaliar o papel das células NK na infecção por L. braziliensis. Métodos: As células mononucleares de sangue periférico foram obtidas a partir de indivíduos saudáveis e de pacientes com LC para a marcação ex-vivo com CD56, CD8, CD3, e marcação intracelular para granzima e perforina. As células derivadas de biópsias foram obtidas para imunofenotipagem por citometria de fluxo e imunohistoqímica. Resultados: Identificamos quatro sub-populações de células citotóxicas: células NK (CD8-CD3-), células NK (CD8dimCD3-), células NKT-like (CD8brigthCD3+) e células T CD8+. Observamos que as frequências de sub-populações de células NK (CD8- e CD8+) estavam aumentadas no sangue periférico de pacientes com LC quando comparadas com IS, e estas duas populações expressam mais granzima e perforina do que as células T CD8+ em pacientes com LC. Observamos ainda que as células NK derivadas de lesões de pacientes com LC expressam mais CD107a, marcador de degranulação, do que as células T CD8+. E que as células NK contribuem para destruição de parasitos na infecção por L. braziliensis Conclusão: Os nossos dados sugerem uma dicotomia funcional das células NK na leishmaniose cutânea, participando tanto na patogênese da doença quanto na destruição de parasitos.

Submitted by Hiolanda Rêgo (hiolandar@gmail.com) on 2013-07-15T17:38:36Z No. of bitstreams: 1 Dissertação_ICS_ Diego Mota Lopes.pdf: 1953608 bytes, checksum: 35777944b1eff36bc60b886626dfbbb0 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-07-15T17:38:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação_ICS_ Diego Mota Lopes.pdf: 1953608 bytes, checksum: 35777944b1eff36bc60b886626dfbbb0 (MD5) / A resposta imune do tipo Th1 na leishmaniose cutânea (LC) ao tempo em que é responsável pelo controle da infecção, está associada com a lesão tecidual e patogênese da doença. Por outro lado, estudos tem mostrado que a resposta imune induzida por alguns antígenos do Schistosoma mansoni é capaz de modular a resposta inflamatória em doenças imuno-mediadas. O objetivo deste estudo foi avaliar o potencial do antígeno de S. mansoni Sm29 em alterar o perfil das células dendríticas derivadas de monócitos (MoDCs) em indivíduos com LC estimuladas in vitro com o antígeno solúvel de L. braziliensis (SLA). Células mononucleares do sangue periférico (PBMC) foram obtidas utilizando gradiente de Ficoll-Hypaque. Foram avaliados doze pacientes com leishmaniose cutânea. Os monócitos foram cultivados na presença de GM-CSF e IL-4 para a diferenciação em células dendríticas (DC), e em seguida estimulados com antígeno Sm29 na presença ou ausência do antígeno SLA. A expressão de moléculas de superfície associadas a ativação celular e de citocinas pro e anti-inflamatórias foram avaliadas nas MoDCs pela técnica de citometria de fluxo. A frequência dos marcadores de ativação HLA-DR, CD80, CD83 e CD86 e das moléculas regulatórias IL-10 e seu receptor (IL-10R) foram maiores em culturas de MoDCs estimuladas com Sm29 e SLA em comparação com as culturas de células não estimuladas. Nossos resultados indicam que o antígeno Sm29 é capaz de aumentar a expressão in vitro de mediadores anti-inflamatórios (citocina e receptor de IL-10) sobre MoDCs de leishmaniose cutânea e marcadores de ativação. / Salvador

Submitted by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2013-06-14T12:31:47Z No. of bitstreams: 1 Dissertação Raquel Gontijo.pdf: 2958488 bytes, checksum: 8dbc875d07ab2eefcee30117ac6d2fbf (MD5) / Made available in DSpace on 2013-06-14T12:31:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação Raquel Gontijo.pdf: 2958488 bytes, checksum: 8dbc875d07ab2eefcee30117ac6d2fbf (MD5) Previous issue date: 2013 / Infecções causadas por Leishmania (Viannia) braziliensisapresentam manifestações clínicas diversas e a leishmaniose cutânea localizada (LCL) é a forma clínica mais comum. Na Terra Indígena Xakriabá, localizada no norte de Minas Gerais, 212 casos autóctones de LCL foram registrados no período de 2001 a 2007. O grande número de casos e as particularidades da área reforçam o interesse de investigar aspectos da resposta imune do hospedeiro em relação à infecção.O óxido nítrico (NO) é um potente agente citotóxico presente na resposta imune anti-Leishmania. Na LCL, um dos mecanismos de produção de NO envolve a ligação de IgE ao receptor CD23 de macrófagos num microambiente de citocinas IFN-γou IL-4. Apesar do papel crucial do NO no curso da infecção, tem sido relatada a existência de isolados de L. (V.) braziliensis resistentes à ação dessa molécula. Assim, os objetivos do presente trabalho foram avaliar por citometria de fluxo, o perfil de expressão do marcador de ativação CD23 e de produção de NO intracelular por monócitose o perfil de expressão das citocinas IFN-γe IL-4 por linfócitos T do sangue periférico de indivíduos não infectados (NI, n=10), Teste de Montenegro positivosem lesão (TM +, n=13) e portadores de leishmaniose cutânea localizada (LCL,n=17), considerando o tempo de evolução da lesão (LCL<60 dias, n=7; LCL>60 dias, n=10). Foi feita também a dosagem dos níveis séricos de IgE dos indivíduos participantes. Além disso, investigou-se a possível presença de L. (V.) braziliensis resistentes/susceptíveis ao NO em isolados de pacientes responsivos (C, n=5) e refratários ao tratamento (FT, n=5) com Glucantime®. Para o estudo imunológico foram realizadas culturas de leucócitos do sangue periférico na ausência (CC) ou presença de formas promastigotas vivas de L. (V.) braziliensis (LEISH) ou na presença de antígeno solúvel de L. (V.) braziliensis. A dosagem dos níveis séricos de IgE foi feita utilizando-se kit específico baseado na técnica ELISA sanduíche. Para identificação do perfil de resistência dos isolados foram feitos ensaios de viabilidade utilizando-se a técnica do MTT. Os resultados obtidos com o estudo imunológico mostram que o grupo LCL apresentou maior expressão de CD23 e maior produção de NO por monócitos em relação aosgrupos TM + e NI, além de menor expressão de IFN-γe IL-4 por linfócitos T CD4+ em relação ao grupo TM +. Por outro lado, o grupo TM + apresentou aumento relevante no percentual de altoprodutores das citocinas avaliadas, NO e CD23 quando comparadoao grupo NI. Ao dividirmos o grupo LCL por tempo de lesão, observamos no grupo LCL<60 grande frequência de alto produtores de IL-4, NO e CD23, indicando um perfil misto de ativação/modulação da imunidade inata. Os níveis séricos de IgE total foram menores no grupo LCL quando comparado aos grupos NI e TM + , havendo redução do grupo TM + em relação ao grupo NI. Além disso, dos 10 isolados testados, 8 foram resistentes à ação do NO, sendo que, os 2 sensíveis foram provenientes de indivíduos responsivos ao tratamento com Glucantime®. Diante disso, foi possível inferir queo utras fontes celulares, além dos linfócitos T, podem estar envolvidas na produção de citocinas no grupo LCL e que no grupo TM + há forte indício da participação do mecanismo de ativação de monócitos e indução de NO investigado neste estudo, favorecendoo controle da infecção, impedindo assim, o aparecimento de lesões. Além disso, a existência de isolados de L. (V.) braziliensis resistentes à ação do NO corrobora com achados de outros autores e pode estar diretamente relacionada com a resistência à ação do Glucantime®. / Infections caused by Leishmania (Viannia) braziliensis presents many clinical manifestations and localized cutaneous leishmaniasis (LCL) is the most common clinical form. At the Xakriabá Indigenous Land, located in the northern Minas Gerais, 212 autochtone cases of LCL was reported during theperiod of 2001 to 2007. The elevated number of cases and particularities of thearea reinforces the interest to investigate aspects of the host immune response in relation with infection. Nitric oxide (NO) it’s a potent cytotoxical agent present in theanti-Leishmania immune response. In LCL, one of many mechanisms of NO production involves the IgE bind to the macrophages CD23 receptor in a cytokines IFN-γor IL-4 microenvironment. Despite the crucial role of NO in the infection course, hasbeen related the existence of Leishmania (Viannia) braziliensis isolates resistant to NO action. Thus, the aims of this study was evaluate, by flow cytometry, the expression profile of CD23 activation marker and NO production by monocytes, and the expression profile of cytokines IFN-γ and IL-4 by T lymphocytes subpopulations of peripheral blood of noninfected individuals (NI, n=10), Positive Montenegro Skin Test without lesion (TM+, n=13) and patients with Localized Cutaneous Leishmaniasis (LCL, n=17), considering the evolution time of the lesion (LCL<60 days, n=7; LCL>60 days, n=10). Was made too, the seric IgE levels dosage in the participants. Besides this, was investigated the possible presence of the resistant/susceptible L. (V.) braziliensis isolates from responsive (C, n=5) and refractory (FT, n=5) patients to treatment with Glucantime®. For the immunological study, was realized leucocytes cultures of peripheral blood in the absence (CC) or presence of live L. (V.) braziliensis promastigotes/L. (V.) braziliensis soluble antigen (LEISH). The dosage of seric IgE levels was made using a specific kit based on sandwich ELISA technique. For the resistant/susceptible profile investigation, viability assays was made using the MTT technique. The obtained results with immunological study show that the LCL group present higher CD23 expression and higher NO production by monocytes in relation with TM + e NI groups, besides lower expression of IFN-γe IL-4 by CD4+ T lymphocytes when compared to TM + group. On the other side, TM + group presents relevant increase in the percentage of higher producers of evaluated cytokines, NO and CD23 when compared with NI group. Dividing LCL group for lesion evolution time, was observed in LCL<60 increase frequency of higher producers of IL-4, NO and CD23,indicating a mixed profile of activation/modulation of the innate immunity. The total IgE seric levels was lower in the LCL group when compared to the NI and TM + groups, with a reduction of TM + in relation with NI group. Besides this, of 10 isolates tested, 8 was resistant to NO action and the 2 sensible was obtained from individuals that was responsible to the treatment with Glucantime®. In front this, was possible to infer that other cellular sources, besides T lymphocytes, could be involved in the cytokine production in LCL group and in the TM + group there is a strong possibility for the participation of monocytes activation and induction mechanism and NO induction investigated in this study, favoring the infection control, preventing the occurrence of skin lesions.Besides this, the existence of NO resistant L. (V.) braziliensis isolates, corroborates with other authors findings and could be directly related with Glucantime® treatment resistance.

COELHO, Zirlane Castelo Branco Coelho. Efeito da via de sinalização slam sobre células T na resposta in vitro à leishmania braziliensis. 2011. 139 f. Tese (Doutorado) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina. Programa de Pós-Graduação em Ciências Médicas, Fortaleza, 2011. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2011-10-06T16:31:31Z No. of bitstreams: 1 2011_tese_coelho.pdf: 25504477 bytes, checksum: a82cdf50308ae9157f67686e4e70241e (MD5) / Approved for entry into archive by Eliene Nascimento(elienegvn@hotmail.com) on 2011-10-07T16:41:43Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2011_tese_coelho.pdf: 25504477 bytes, checksum: a82cdf50308ae9157f67686e4e70241e (MD5) / Made available in DSpace on 2011-10-07T16:41:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2011_tese_coelho.pdf: 25504477 bytes, checksum: a82cdf50308ae9157f67686e4e70241e (MD5) Previous issue date: 2011 / Immune cells activation is modulated by balancing the signals triggered by a variety of cell surface receptors, including receptor activators, co-stimulating receptors and inhibitory receptors. Receptor-related signaling molecule in lymphocyte activation (SLAM) influences the immune cell activation. In this study we investigated the role of SLAM in immune response of cutaneous leishmaniasis caused by L. braziliensis, as well as if the response of individuals high (HP) or low (LP) IFN-γ producers is modulated by SLAM signaling pathway. Peripheral blood monocuclear cells (PBMC) isolated from 43 health individuals were cultured in vitro with anti-SLAM, rIFN-γ, rIL-12 and phytohemagglutinin in the presence or in the absence of L. braziliensis. It was found that L. braziliensis promoted a significantly reduced SLAM expression in T cells, after 120 h of cultured, possibly indicating activation of this pathway in the initial immune response. SLAM expression behaved differently in HP and LP groups. In LP group, L. braziliensis did not modify SLAM expression in T cells in early immune response. The effect of anti-SLAM on SLAM pathway reduced the expression of this protein in the early stages of the immune response of PBMC stimulated with L. braziliensis. After 120 h the effect of anti-SLAM did not alter CD3+SLAM+ expression in both groups. The proinflammatory cytokines, rIFN-γ and rIL-12, present in the microenvironment with L. braziliensis, reduced SLAM expression only in HP group after 6 h of culture and did not change this response after 120 h. Anti-SLAM at a concentration of 10 μg/ml presented no effect on production of cytokines IFN-γ and IL-13 in both groups, but significantly increased IL-10 production in the HP group. Furthermore anti-SLAM associated with L. braziliensis and rIFN-γ simultaneously did not modify IFN-γ, IL-13 and IL-10 productions. Anti-SLAM associated with L. braziliensis and rIL-12 simultaneously induced an increase of IFN-γ in LP group, and increased IL-13 in HP group. These results suggest that in vitro immune response of PBMC exposed to L. braziliensis, the SLAM signaling pathway acts in modulating Th1 response in HP group and induces a condition of temporary immunosuppression in LP group, not previously described in literature. / A ativação das células do sistema imunológico é modulada através dos sinais acionados por uma diversidade de receptores de superfície celular, incluindo os receptores ativadores, receptores coestimuladores e receptores inibidores. Receptores relacionados à molécula sinalizadora na ativação do linfócito (SLAM) têm influência na ativação imunológica celular. Neste trabalho, investigou-se a função de SLAM na resposta imunológica à Leishmania braziliensis, e se a resposta de indivíduos alto (AP) ou baixo (BP) produtores de IFN-γ seria modulada pela via de sinalização SLAM. Células monocucleadas do sangue periférico (CMSP) de 43 indivíduos foram bloqueadas com α-SLAM, rIFN-γ, rIL-12 e fitohemaglutinina, após estimulação com L. brazilensis. Verificou-se que L. braziliensis promoveu uma significante redução da expressão de SLAM nas células T, com 120h de cultivo, possivelmente indicando ativação desta via na resposta imunológica inicial. A expressão de SLAM se comportou de modo diferenciado nos indivíduos AP e BP. Nos indivíduos BP, L. braziliensis não alterou a expressão de SLAM nas células T, na fase inicial da resposta imunológica. O bloqueio da via de SLAM com α-SLAM reduziu significativamente a expressão desta proteína nos primeiros momentos da resposta imunológica das CMSP estimuladas com L. braziliensis. O bloqueio com α-SLAM, avaliado com 120 horas, não alterou a expressão de CD3+SLAM+, em ambos os grupos. As citocinas proinflamatórias, rIFN-γ e rIL-12, presentes no microambiente com L. braziliensis, reduziram a expressão de SLAM apenas em indivíduos AP com 6h de sensibilização e não modificaram esta resposta com 120h de cultivo, na presença do antígeno. O bloqueio com α-SLAM, na concentração de 10μg/ml, não interferiu na produção das citocinas IFN-γ e IL-13, em ambos os grupos, entretanto aumentou de forma significativa a produção de IL-10 em indivíduos AP. O bloqueio da via de SLAM associado à L. braziliensis e rIFN-γ não modificou a produção de IFN-γ, IL-13 e IL-10. O bloqueio da via de SLAM associado à L. braziliensis e rIL-12 induziu aumento de IFN-γ, nos indivíduos BP, e aumento de IL-13, nos indivíduos AP. Os resultados deste trabalho sugerem que, na resposta in vitro de CMSP, sensibilizadas com L. braziliensis, a via de sinalização SLAM atua na modulação da resposta Th1 em indivíduos AP e induz uma condição de imunossupressão temporária nos indivíduos BP, não descrita anteriormente na literatura.