Orientador: Antonio Carlos Boschero / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-25T05:18:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Bosqueiro_JoseRoberto_D.pdf: 3058404 bytes, checksum: 8c3a8b84e90f4ed4b5bce3915db95301 (MD5) Previous issue date: 1999 / Resumo: Foi realizado estudo do efeito da tetracaína sobre o efluxo de 45Ca, a concentração de Ca2+ citoplasmático, [Ca2+]i, e a secreção de insulina em ilhotas pancreáticas e células B isoladas. Na ausência de Ca2+ externo, tetracaína (0,12,0 mM) aumentou, de maneira dose-dependente, o efluxo de 45Ca de ilhotas isoladas. Tetracaína não afetou o aumento do efluxo de 45.ca causado por 50 mM de K+ ou pela associação de carbacol (Cch - 0,2 mM) e 50 mM de K+. Tetracaína aumentou permanentemente a [Ca2+]i em células B isoladas em meio livre de Ca2+ e acrescido de 2,8 mM de glicose e 25 µM D-600 (metoxiveparamil). Este efeito também foi observado na presença de 10 mM de cafeína ou 1 µM de tapsigargina. Em presença de 16,7 mM de glicose, tetracaína aumentou de maneira transitória a secreção de insulina das ilhotas perfundidas, tanto na ausência quanto na presença de Ca2+ externo. Estes dados indicam que tetracaína mobiliza Ca2+ de um estoque insensível à tapsigargina e estimula a secreção de insulina na ausência de Ca2+ extracelular. O aumento do efluxo de 45Ca causado pelas altas concentrações de K+ e pelo Cch indica que tetracaína não interfere nos estoques sensíveis a cátions ou ao IP3 / Abstract: The effect of tetracaine on 45Ca efflux, cytoplasmic Ca2+ concentration [Ca2+]i and insulin secretion in isolated pancreatic islets and B-cells was studied. In the absence of external Ca2+, tetracaine (0.1-2.0 mM) dose-dependently increased the 45Ca efflux from isolated islets. Tetracaine did not affect the increase in 45Ca efflux caused by 50 mM K+ or by the association of carbachol (Cch - 0.2 mM) and 50 mM K+. Tetracaine permanently increased the [Ca2+]i in isolated B-cells in Ca2+ -free medium enriched with 2.8 mM glucose and 25 µM D-600 (methoxiverapamil). This effect was also observed in the presence of 10 mM caffeine or 1 µM thapsigargin. In the presence of 16.7 mM glucose, tetracaine transiently increased the insulin secretion from islets perifused in the absence and presence of external Ca2+. These data indicate that tetracaine mobilises Ca2+ from a thapsigargin-insensitive store and stimulates insulin secretion in the absence of extracellular Ca2+. The increase in 45Ca efflux caused by high concentrations of K+ and by Cch indicates that tetracaine did not interfere with a cation or IP3-sensitive Ca2+ pool in B-cells / Doutorado / Fisiologia / Doutor em Ciências

Orientador: Antonio Carlos Boschero / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-23T09:57:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Mendonca_AnaCristinadosSantos_M.pdf: 2984469 bytes, checksum: 05ad25856a10ccc3e82024835a6de424 (MD5) Previous issue date: 1997 / Resumo: Este trabalho objetivou avaliar a maturação do sistema secretor de insulina em ratos, através de um estudo, temporal da resposta secretória frente a diferentes estímulos. Para isso, fragmentos de pâncreas - (0,5 à 1 mm3) de fetos e neonatos e ilhotas adultas, foram incubados por 1 hora à ¿37 GRAUS C¿ em atmosfera de 95% 'O IND. 2¿ /5% 'C¿O IND. 2¿. As incubações foram realizadas em. solução de Krebs-Ringer contendo diferentes concentrações de glicose,potássio, teofilina e carbamilcolina. Após o período de incubação, a insulina secretada no meio, bem como, a extraída dos fragmentos de pâncreas ou de ilhotas isoladas, foram medidas por radioimunoensaio, sendo a secreção expressa como percentagem do conteúdo total de insulina ... Observação: O resumo, na íntegra, poderá ser visualizado no texto completo da tese digital / Abstract: The aim of this work was to study, in rats, the maturation process of the secretory response of insulin following several stimuli. For that, pieces of pancreas (0,5-1 mm3) from rat fetuses and newborns or isolated adults islets, were incubated for 1 .hour at ¿37 GRAUS C¿ in 95% 'O IND. 2¿ /5% 'C¿O IND. 2¿ atmosphere with differents concentrations of glucose, potassium;. theophylline and carbamylcholine. Following the incubation,. the insulin secreted into the medium and extracted from the tissues, were measured hy radioimmunoassay,and were expressed as percentage of total insulin content ... Note: The complete abstract is available with the full electronic digital thesis or dissertations / Mestrado / Fisiologia / Mestre em Ciências Biológicas

Memoria para optar al título profesional de Bioquímico / La migración de los linfocitos a los órganos linfoides secundarios es un paso crucial en la iniciación de la respuesta inmune adquirida. Este fenómeno es caracterizado por múltiples eventos que requieren de interacciones entre el endotelio y el linfocito, e involucra la participación de diversas moléculas que favorecen la migración de los linfocitos a través de las células endoteliales columnares (HEC). La transmigración es un proceso activo que depende del estado de activación y diferenciación de los linfocitos y de señales específicas de las células endoteliales. Diversos estudios han demostrado que los linfocitos T de memoria migran selectivamente a través de células endoteliales a sitios de inflamación y/o infección. Además, ciertas evidencias sugieren que la expresión de moléculas MHC-II por células endoteliales facilitan el reclutamiento de linfocitos T antígeno específicos, hacia un tejido. Por otra parte, en nuestro laboratorio hemos demostrado que la adhesión de linfocitos B a células endoteliales columnares derivadas de amígdalas humanas (HUTEC) induce la activación endotelial, conduciendo a la producción de diversas citoquinas y quimioquinas. En esta tesis determinamos que la adhesión de linfocitos B a HUTEC permite la presencia de moléculas MHC-II en la superficie endotelial, además de la producción de un patrón de expresión diferencial de quimioquinas, las cuales podrían estar involucradas en la transmigración de los linfocitos. Los resultados muestran que la presencia de moléculas MHC-II en la superficie de las células endoteliales depende de la adhesión de los linfocitos B, pero no de linfocitos T. Sin embargo, MHC-II no se induce a nivel transcripcional, sugiriendo que las HUTEC adquieren moléculas MHC-II de los linfocitos B humanos durante el proceso de adhesión celular. Además, el contacto de los linfocitos B a HUTEC induce la expresión del mRNA de las quimioquinas CCL2, CCL3, CCL5, CCL7, CXCL8, entre otras. Demostramos que el efecto de la adhesión de linfocitos B a HUTEC induce la transmigración de linfocitos T de memoria central. Por otra parte, investigamos el efecto de factores soluble secretados por HUTEC y/o linfocitos B, después del contacto, en la migración transendotelial. Nuestros resultados muestran que no son necesarios los factores solubles para un incremento en la transmigración, aunque estos factores permiten una migración más eficiente de los linfocitos T. En conclusión, estos resultados sugieren que la interacción de linfocitos B con células endoteliales modula la respuesta inmune, favoreciendo la transmigración preferencial de linfocitos T CD4+ de memoria central / Lymphocytes migration to secondary lymphoid organs is a crucial step in the initiation of the acquired immune response. This phenomenon is characterized by multiple events that require interactions between the endothelium and lymphocytes, and involves diverse molecules that favor the migration of T lymphocytes across the high endothelial cells (HEC). Transmigration is an active process that depends on the state of activation and differentiation of T lymphocytes and specific signals of endothelial cells. Diverse studies have demonstrated that memory T lymphocytes selectively migrate across endothelial cells to sites of inflammation and/or infection. In addition, certain evidences suggest that expression of MHC-II molecules by endothelial cells facilitate the recruitment of antigen specific T lymphocytes towards a tissue. On the other hand, in our laboratory we have demonstrated that the adhesion of B lymphocytes to high endothelial cells derived from human tonsils (HUTEC) induces endothelial activation, leading to the production of several cytokines and chemokines. In this thesis we determined that the adhesion of B lymphocytes to HUTEC cells allows the presence of MHC-II molecules on the endothelial surface, in addition to the production of a differential expression pattern of chemokines, which could be involved in the lymphocytes’ transmigration. These results show that the presence of MHC-II molecules on the surface of endothelial cells depends on the adhesion of B lymphocytes, but not T lymphocytes. However, MHC-II is not induced at transcriptional level, suggesting that HUTEC cells acquire MHC-II molecules from human B lymphocytes during the process of cellular adhesion. In addition, the contact of B lymphocytes to HUTEC cells induces the mRNA expression of chemokines such as CCL2, CCL3, CCL5, CCL7, CXCL8, among others. We demonstrated that the effect of the adhesion of B lymphocytes to HUTEC cells induces the memory central T lymphocytes transmigration. In the other hand, we investigated the effect of soluble factors secreted by HUTEC cells and/or B lymphocytes, after the contact between them, in the transendotelial migration. Our results show that although soluble factors are not necessary to increase the transmigration, these factors allow a more efficient migration of T lymphocytes. In conclusion, these results suggest that the interaction of B lymphocytes with endothelial cells modulates the immune response, favoring the preferential transmigration of central memory CD4+ T lymphocytes

Orientadores: Paulo Maria Ferreira de Araujo, Beatriz Maria Machado de Medeiros / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-20T22:20:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Costa_AdrianadeMoraes_M.pdf: 4942510 bytes, checksum: 8395cb0fcb940ba72f00fcaa6e68c3d7 (MD5) Previous issue date: 1995 / Resumo: A infecção por Yersinia enterocolitica O:3 é uma dentre várias patologias humanas causadas por bactérias gram-negativas, que pode resultar em um quadro de doenças autoimunes, entre elas a artrite reativa. A ativação policIonal de células B tem sido um dos mecanismos propostos que levaria a um aumento de produção de imunoglobulinas autoreativas e por conseguinte estaria associada à indução de uma doença auto-imune. Esta ativação de linfócitos B associada à infecção pela Yersinia enterocolitica O:3, foi pela primeira vez demonstrada em estudos realizados por MEDEIROS, em 1994, a partir de um modelo experimental desenvolvido em camundongos SWISS convencionais. Neste presente trabalho utilizando camundongos Swiss originariamente livres de patógenos específicos (SPF) foi quantificada células esplênicas secretoras de imunoglobulinas (Igs totais e isotipos) após infecção com a Yersinia enterocolitica O:3 e estimulações com seus derivados: Extrato bruto, "Released Proteins' (RP) e Lipopolissacárides, através da técnica de PFC-Reverso-Proteína A, foi utilizado animais normais como grupo controle. Nos soros desses mesmos animais foram detectados níveis de anticorpos (IgG, IgMe IgA) anti-Yersinia.e pesquisados auto-anticorpos frente a um painel de constituíntes autólogos, representados por: miosina , mielina, actina, colágeno, tireoglobulina, laminina e cardiolipina através da técnica de ELISA. Os resultados demonstraram uma elevação no número de células esplênicas secretoras de anticorpos em todas as determinações realizadas (PFC-Ig totais e PFC-isotipos) com animais infectados com Yersinia enterocolitica O:3 ou inoculados com os seus derivados a partir do terceiro dia de inoculação.Estes dados representam uma redução quantitativa do número total de PFC em cerca de 12 vezes em relação àquela observada nos animais convencionais. Anticorpos IgG e IgM específicos anti-Yersinia foram detectados em níveis elevados nos soros dos animais infectados ou estimulados com os diferentes derivados, porém não foram detectados níveis significativos de IgA. Na pesquisa de auto-anticorpos realizada nos soros de animais infectados pela Yersinia foi demonstrada reatividade apenas com a miosina, enquanto que os soros dos animais estimulados com LPS foram reativos com mielina, actina e laminina e os inoculados com RP reagiram com mielina, tiroglobulina e cardiolipina. Em conclusão os camundongos Swiss de origem SPF infectados com Yersinia enterocolitica O:3 ou estimulados com os seus derivados. apresentaram uma ativação policlonal do repertório de linfócitos B. À semelhança do que ocorre com camundongos Swiss convencionais o resultado de tal ativação policlonal é provavelmente não apenas da estimulação de LPS mas de outros componentes envolvidos na infecção. A diferença no perfil de um animal convencional e um de origem SPF reflete a influência do microambiente do hospedeiro na resposta imune. Embora não tenha sido observado sinais de artrite nos animais submetidos às diferentes estimulações, a detecção de anticorpos nos seus soros para constituíntes autólogos é sugestiva para uma possível associação entre o fenômeno de ativação policlonal e a regulação do sistema imunológico / Mestrado / Imunologia / Mestre em Ciências Biológicas

Orientador: Maria Marluce dos Santos Vilela / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas. Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-15T09:35:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ramalho_VanessaDomingues_M.pdf: 1157730 bytes, checksum: 0cd719050713e1b2340be47d4d5f5b38 (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: A agamaglobulinemia ligada ao X (XLA; OMIM#300755) é uma imunodeficiência primária humoral caracterizada por um bloqueio na diferenciação dos linfócitos B na medula óssea, levando à profunda hipogamaglobulinemia e reduzido número ou ausência de células B periféricas. Os pacientes com XLA são susceptíveis a infecções recorrentes por bactérias encapsuladas e enterovírus devido à deficiência de anticorpos. Mutações no gene codificante da tirosina quinase de Bruton (Btk) são responsáveis pela doença. Btk é uma tirosina quinase citoplasmática da família Tec importante no desenvolvimento, na diferenciação e na sinalização dos linfócitos B. A detecção de mutações no gene btk possibilita o diagnóstico definitivo de XLA. O objetivo deste estudo foi identificar e caracterizar mutações em btk. Foram incluídos 6 pacientes conforme os critérios do PAGID e ESID: indivíduos do sexo masculino com menos de 2% de linfócitos B periféricos, hipogamaglobulinemia e história de infecções bacterianas de repetição. A triagem de mutações foi realizada com a técnica de SSCP e possíveis mutações foram confirmadas por seqüenciamento. A expressão de Btk nos pacientes e mães foi avaliada em monócitos por citometria de fluxo. Dentre os pacientes analisados as principais manifestações clínicas foram as infecções do trato respiratório. Todos tiveram início dos sintomas durante o primeiro ano de vida, linfócitos B periféricos abaixo de 2% e hipogamaglobulinemia anterior ao início da terapia de reposição de imunoglobulinas. Foram identificadas cinco mutações em btk, três novas (p.Ala347fsX55, p.I355T e p.Thr324fsX24) e duas já descritas na literatura (p.Q196X e p.E441X). A detecção das mutações nos pacientes permitiu a análise mutacional de mães, avós e tias maternas. Três mães e uma avó foram confirmadas portadoras de XLA. Em adição, os valores de expressão de Btk obtidos mostraram deficiência da proteína (4,5% a 65,2%) nos pacientes e um padrão bimodal de expressão de Btk foi observado nas mães, indicando o estado de portadora de XLA. Em um dos pacientes não foi identificada mutação, entretanto a expressão de Btk mostrou-se reduzida. O uso combinado da análise genética e da avaliação da expressão de Btk por citometria de fluxo possibilitou o diagnóstico definitivo de XLA e a identificação de portadoras da doença. / Abstract: X-linked agammaglobulinemia (XLA; OMIM# 300755) is a primary humoral immunodeficiency characterized by a block in early B cell differentiation, leading to profound hypogammaglobulinemia and few or no circulating B cells. Patients with XLA are susceptible to recurrent infections by encapsulated bacteria and enteroviruses due to antibody deficiency. Mutations in the Bruton tyrosine kinase (Btk) gene have been identified as responsible for XLA. Btk is a cytoplasmic tyrosine kinase of the Tec family important in B-lymphocyte development, differentiation, and signaling. Detection of a btk mutation allows definitive diagnosis of XLA. The aim of this study was to identify and characterize mutations in btk. Six patients were included according to the criteria of PAGID and ESID: males with less than 2% of circulating B cells, hypogammaglobulinemia and a history of recurrent bacterial infections. Mutation screening was performed with SSCP technique and possible mutations were confirmed by sequencing. Expression of Btk protein in patients and mothers was assessed in monocytes by flow cytometry. The major clinical manifestations among patients were respiratory tract infections. All had onset of symptoms during the first year of life, circulating B cells below 2% and hypogammaglobulinemia before the start of immunoglobulin replacement therapy. We identified five mutations in btk, three novel (p.Ala347fsX55, p.I355T and p.Thr324fsX24) and two recurrent mutations (p.Q196X and p.E441X). The btk mutations detection in patients enabled the screening of mothers, grandmothers and maternal aunts. Three mothers and one grandmother were confirmed XLA carriers. In addition, flow cytometric evaluation of Btk expression in monocytes revealed that Btk deficiency (4,5% a 65,2%) was present in patients and a bimodal pattern of Btk expression was observed in mothers, indicating that they were XLA carriers. In one patient no mutation was identified, but his Btk expression was reduced. The combined use of genetic analysis and flow cytometric assay of Btk protein expression allowed the definitive diagnosis of XLA and its carriers detection. / Mestrado / Saude da Criança e do Adolescente / Mestre em Saude da Criança e do Adolescente

Orientador: Laura Sterian Ward, José Vassallo / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-26T19:34:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Cunha_LucasLeite_D.pdf: 3273726 bytes, checksum: 85653bdcc1b0fa91465a6ac9ed73359a (MD5) Previous issue date: 2015 / Resumo: O câncer de tiroide é a neoplasia maligna endócrina mais frequente. Muito embora a maioria destes pacientes apresente boa evolução clínica com as ferramentas terapêuticas atuais, 10-30% evoluirão com doença recorrente e contribuirão para as 1.890 mortes que são estimadas para 2014 nos Estados Unidos . As ciclooxigenases (COX) são um grupo de enzimas que catalisam a formação de prostaglandinas a partir do ácido aracdônico e a atividade de COX2 tem sido implicada na carcinogênese. Nosso grupo demonstrou anteriormente que diferentes células do sistema imunológico infiltram tecidos de cânceres de tiroide. O presente trabalho investigou a presença de marcadores de células do sistema imunológico, bem como marcadores tumorais de perfil inflamatório, procurando marcadores de prognóstico em pacientes com carcinoma diferenciado de tiroide. Foram investigados retrospectivamente 437 pacientes com carcinoma diferenciado da tiroide, cujas amostras de tecido previamente fixadas em formalina e incluidas em blocos de parafina eram mantidas no Banco de Tecidos do A.C.Camargo Cancer Center. Câncer bem diferenciado de tiroide foi diagnosticado em 305 pacientes: 252 com carcinoma papilífero e 53 com carcinoma folicular. Informações clínicas foram obtidas dos prontuários. Obtivemos tecidos de metástases linfonodais ao diagnóstico de 25 pacientes. Para estes casos, fizemos análise pareada entre tecido metastático e tumor primário. Foram investigados marcadores de células imunológicas em áreas intratumorais, incluindo macrófagos associados a tumores (CD68) e subpopulações de linfócitos infiltrantes de tumor, como CD3, CD4, CD8, CD16, CD20, CD45RO, GRANZIMA B, CD69 e CD25. Também foi investigada a expressão de COX2, IL-17A, IL-1'beta', IL-10, IL-6, CD134 e IL-23 nas células tumorais. Entre todos os parâmetros imunológicos avaliados, apenas o enriquecimento de linfócitos CD8+ e expressão de COX2 foram associados à recorrência. A análise multivariada, utilizando o modelo de riscos proporcionais de Cox ajustado para a presença de tiroidite crônica concomitante, identificou CD8+/COX2 como marcador independente de recidiva. Outros marcadores imunoistoquímicos não conseguiram prever o prognóstico dos pacientes. Notamos um aumento da densidade de linfócitos GRANZIMA B+ nas metástases linfonodais se comparado com os respectivos tumores primários. Metástases linfonodais apresentam menor expressão de COX2 e de IL-10. Isto sugere que mecanismos de evasão tumoral estejam diminuídos nos tecidos metastáticos, explicando, pelo menos em parte, por que a presença de metástases linfonodais não seria um excelente marcador de prognóstico nos pacientes com câncer diferenciado de tiroide. Nosso estudo mostrou que o câncer diferenciado de tiroide é infiltrado por múltiplas células do sistema imunológico e que o padrão de infiltração celular parece se associar a características clínicas e anatomopatológicas distintas. Este misto celular infiltrativo, juntamente com a produção de citocinas inflamatórias, cria um perfil de microambiente que é importante na determinação da agressividade tumoral. De fato, a presença de linfócitos T citotóxicos e a expressão de COX2 puderam prever o pior prognóstico dos pacientes estudados. Ainda, observamos que a metástase linfonodal é o sítio onde ocorreria uma resposta imunológica mais efetora e menos evasiva, de forma a determinar de forma mais assertiva um ataque imunológico efetivo coerente com a pouca força da metástase linfonodal como um preditor de prognóstico / Abstract: Thyroid cancer is the most common endocrine malignancy. Although most of these patients experience clinical improvement with current therapeutic tools, 10-30% will develop recurrent disease and contribute to the 1,890 deaths that are estimated for 2014 in the United States. The cyclooxygenase (COX) are a group of enzymes that catalyze the formation of prostaglandins from arachidonic acid and COX2 activity has been implicated in carcinogenesis. Our group previously demonstrated that mixture of immune cells infiltrates tissue of thyroid cancers. The present study investigated the presence of immune cells markers and tumor markers of inflammatory profile, looking for prognostic markers in patients with differentiated thyroid carcinoma. We retrospectively investigated 437 patients with differentiated thyroid carcinoma, whose tissue samples previously fixed in formalin and included in paraffin blocks were kept in the Tissue Bank of the AC Camargo Cancer Center. Well-differentiated thyroid cancer was diagnosed in 305 patients: 252 with papillary carcinoma and 53 with follicular carcinoma. Clinical information was obtained from medical records. We obtained tissue of lymph node metastases at diagnosis of 25 patients. For these cases, we performed a paired analysis of metastatic tissue and primary tumor. Immunological cell markers were investigated in intratumoral areas, including tumor-associated macrophages (CD68) and subpopulations of tumor infiltrating lymphocytes, such as CD3, CD4, CD8, CD16, CD20, CD45RO, GRANZYME B, CD69 and CD25. We also investigated the expression of COX2, IL-17A, IL-1'beta', IL-10, IL-6, IL-23 and CD134 in the tumor cells. Among all the immunological parameters evaluated, only the enrichment of CD8+ lymphocytes and expression of COX2 were associated with recurrence. Multivariate analysis using the Cox model of proportional hazards adjusted for the presence of concurrent chronic lymphocytic thyroiditis, identified CD8+/COX2 as an independent marker for recurrence. Other immunohistochemical markers failed to predict the prognosis of patients. We notice an increase in the density of GRANZYME B + lymphocytes in lymph node metastases when compared with their primary tumors. Lymph node metastases have lower expression of COX2 and IL-10. This suggests that tumor evasion mechanisms are impaired in metastatic tissues, explaining, at least in part, why the presence of lymph node metastases would not be an excellent prognostic marker in patients with differentiated thyroid cancer. Our study showed that the differentiated thyroid cancer is infiltrated by multiple immune cells and that the pattern of cellular infiltration appears to be associated with distinct clinical and pathological characteristics. This infiltrative mixed cell along with the production of inflammatory cytokines, creates a microenvironment profile that is important in determining the tumor aggressiveness. In fact, the presence of cytotoxic T lymphocytes and COX2 expression could predict the worst prognosis of the patients. Still, we found that lymph node metastasis is the place where there would be a more productive immune response and less evasive, favoring and effective immune response. It is fairly coherent with the little strength of lymph node metastasis as a prognostic predictor / Doutorado / Clinica Medica / Doutor em Ciências