L'iléus postopératoire (IPO) représente la complication la plus fréquente après chirurgie colorectale (20-30%). ses conséquences sont importantes tant à l'échelle médico-économique qu'à l'échelle individuelle, puisqu'elle impacte sur le confort du patient et peut également être liée à des complications sévères. Bien que les programmes de réhabilitation améliorée (RA) aient permis de réduire l'incidence de l’IPO, ils pourraient être optimisés en améliorant nos connaissances dans les mécanismes physiopathologiques menant à l'IPO, notamment dans le colon. Ce travail s'inscrit dans cet objectif général et vise 1) à mieux comprendre le rôle des médiateurs d'origine lipidique dans l'IPO et 2) à tester de nouvelles voies thérapeutiques ou préventives. D'une part, nous avons montré que la RA diminuait l'expression des enzymes de la chaîne de dégradation de l'acide arachidonique (AA). Néanmoins, l'ARNm de HPGDS et mPGES1 restaient associés à la durée de reprise du transit. D'autre part, nous avons montré que la stimulation tibiale postérieure percutanée diminuait l'incidence de l'IPO et que ses effets étaient liés notamment à une diminution de rARNm mPGES1. Nos travaux identifient donc la voie de l’AA comme acteur de l'IPO colique. De plus, ces voies représentent une cible prometteuse par approche nutritionnelle ou instrumentale. / Postoperative ileus (POI) is the most importantcomplication after colorectal surgery (20-30%).consequences are important as much as a medico-economiclevel as at an individual level because itimpacts on the comfort of palients in postoperativecourse and because it can also be linked to severemorbidity. While enhanced recovery programs (ERPs)allowed a reduction of POI, it could be optimized,improving our knowledge on the pattlophysiologicmechanisms leading to POI, especially in the colon.This work nas this general objectives and aims 1) tobetter understand the role of lipid mediators in POI and2) to test new preventive or therapeutic pathways.ln one hand, we showed that ERPs reduced theexpression of enzymes of the aradlidonic acid (AA)metabolism. However. HPGDS and mPGES1 mRNAremained associated to the delay for gastrointestinalfunction recovery. ln the other hand, we showed thatpercutaneous tibial posterior nerve stimulation reducedthe incidence of POI and that its effects are especiallydue to a reduction of mPGES1 mRNA.Our wolks identify the AA pathway as the actor ofcolonic POI. Furthermore, these pathways are apromising target by nutritional or instrumental approach.

Les cellules gonadotropes jouent un rôle clé dans la fonction de reproduction en sécrétant les hormones LH et FSH. Nous avons positionné les protéine-phosphatases 2A (PP2A) dans la voie de signalisation de la GnRH. 5% de la PP2A est localisée dans les membranes des cellules des lignées gonadotropes murines et des cellules hypophysaires ovines. Une PP2A dimérique active est co-localisée avec le récepteur de la GnRH dans les rafts de ces cellules. Son activité augmente de 40% après stimulation avec la GnRH. Nos résultats suggèrent que les PP2A pourraient réguler la signalisation induite par la GnRH, en contrôlant les MAPK. La désorganisation des rafts provoque une libération de LH en absence de GnRH, dépendante de la voie de signalisation de la GnRH. Ainsi la libération de LH serait liée à la déstructuration des rafts. Sans ligand, la voie de signalisation de la GnRH serait inhibée, et la désorganisation des rafts induirait une levée d’inhibition responsable de son activation et de la libération d’hormones. / Pituitary gonadotroph cells play a key role in the function of reproduction by secreting LH and FSH. The first aim was the positioning of PP2A in GnRH signaling pathway of. 5% of PP2A is located in the membranes of murine gonadotroph cell lines and ovine pituitary cells. An active dimeric PP2A is co-localized with the GnRH receptor in the lipid rafts of the cells membrane. PP2A activity increases by 40% after stimulation with GnRH. Our results suggest that PP2A could play a regulatory role in signaling induced by GnRH, via the control of the MAPK pathway. To better understand the underlying mechanisms of exocytosis of LH, I studied the functional relationship between lipid rafts and the release of LH. The disorganization of lipid rafts causes, in the absence of GnRH, a rapid LH release, dependant of GnRH signaling pathway. In the absence of ligand, the GnRH signaling pathway is spontaneously inhibited, and the disruption of lipid rafts would suppress this inhibition inducing the signaling activation and hormone release.

De nos jours, la voie inhalée constitue le mode d’administration optimal dans le traitement de nombreuses affections respiratoires, et suscite beaucoup d’intérêt pour la délivrance systémique de médicaments. Cependant, le poumon est un organe complexe doté de mécanismes de défense efficients qui limitent la déposition des particules inhalées et les éliminent très rapidement. Cette voie d’administration fait donc l’objet de programmes de recherche intensifs visant à améliorer l’efficacité de la délivrance et la compliance du patient. Il faut néanmoins signaler que le nombre d’excipients dont l’innocuité a été démontrée en inhalation (sous forme de poudre sèche) reste extrêmement limité à l’heure actuelle. A cet égard, l’utilisation de microparticules lipidiques solides (mPLS), constituées d’un mélange de cholestérol et de phospholipides biodégradables et caractérisés par une température de transition de phase élevée, a été envisagée. Le procédé retenu pour la préparation de ces mPLS est la technique d’atomisation à température modérée (spray-drying). Dans un premier temps, le travail a consisté à mettre au point les conditions opératoires de fabrication (température et débit de l’air d’entrée et de sortie, débit de pulvérisation, pression et température de l’air de pulvérisation, etc.) ainsi que les paramètres de formulation (proportions de cholestérol / phospholipides / principe actif (PA)) afin d’obtenir de manière reproductible des microparticules présentant les caractéristiques appropriées pour une délivrance pulmonaire. Deux types de formes ont été développés : Une forme à poudre sèche dite conventionnelle (mélange physique PA-excipient). Les particules cohésives de PA sont mélangées au transporteur lipidique en vue d’améliorer leurs propriétés d’écoulement et de favoriser leur redispersion lors de l’inhalation. Une forme matricielle permettant également d’améliorer les propriétés d’écoulement et de dispersion, mais qui à la différence de la forme précédente ne nécessite pas d’étape de mélange. Elle consiste à incorporer le PA dans la masse lipidique. Dans ce cas-ci, l’utilisation de tels excipients a pour effet de modifier les propriétés de dissolution du PA et donc de contrôler sa vitesse de libération. Ensuite, les caractéristiques physico-chimiques des mPLS ont été évaluées. Celles-ci comprenaient aussi bien la taille et la distribution de taille (analyse granulométrique par diffraction laser) que la forme (analyse par microscopie électronique à balayage) et la densité des particules produites (analyse par tassement). Ont suivi les évaluations de l’état physique (polymorphisme) et des propriétés thermiques par calorimétrie à balayage différentiel et par diffraction aux rayons X. Le procédé de micronisation par atomisation a permis d’obtenir des microparticules sphériques de structure homogène dont la surface apparaît comme parfaitement lisse et régulière. Les mPLS, et plus particulièrement les formulations matricielles, se caractérisent par des densités relativement faibles et de bonnes propriétés d'écoulement. Les performances d’aérosolisation ont été étudiées au moyen de l’impacteur en verre et de l’impacteur liquide multi-étages. Les mPLS présentent un comportement aérodynamique remarquable ; les fractions pulmonaires (FP) sont significativement supérieures à celles des produits de référence (Pulmicortâ Turbohalerâ 200 µg et Flixotide® Diskusâ 250 µg) ainsi qu’à celles d’autres formulations conventionnelles délivrées via le même dispositif d’inhalation (Aeroliserâ). Puis, une étude de stabilité a été réalisée sur les formulations dont les propriétés satisfaisaient à nos exigences. Il en ressort que les mPLS conservent leurs caractéristiques initiales pour autant que les conditions de stockage ne dépassent pas les 30°C/65% HR. Dans le cadre de l’optimisation du processus de mélange de poudres à PA cohésif et faiblement dosé (destinées à une inhalation sous forme de poudre sèche), une étude a porté sur l’influence vis à vis de l’homogénéité du mode d’action et des caractéristiques de trois types de mélangeurs fréquemment employés pour effectuer des mélanges solides pulvérulents : un mélangeur à cuve mobile de type Turbula®, un mélangeur planétaire (Colette MP-20®) et un mélangeur-granulateur à haute vitesse (Mi-Pro®). Il a été démontré, par après, que les mélanges physiques PA-excipients lipidiques s’effectuent de façon efficace dans les conditions opératoires fixées. Finalement, une étude pharmaco-scintigraphique a été menée à l’Hôpital Erasme sur six volontaires sains. Les résultats de déposition pulmonaire sont en parfaite corrélation avec les valeurs de FP observées in vitro. En revanche, les résultats de l’analyse pharmacocinétique ne sont pas assez concluants pour mettre en évidence la régulation de la cinétique de libération du PA à partir des formes matricielles.

LRP1 est un récepteur d’endocytose multifonctionnel capable non seulement d’interagir avec de nombreux ligands et de réguler leur endocytose, mais également de moduler certaines voies de signalisation intracellulaire. Ce récepteur se révèle implique dans de nombreux mécanismes physiologiques et pathologiques, comme l’athérosclérose, la maladie d’Alzheimer ou encore le cancer. La multiplicité de ses partenaires fait émerger le concept selon lequel LRP1 est capable de réguler le protéome membranaire et ainsi d’influencer le comportement migratoire de nombreuses cellules. De plus, les résultats récents obtenus au sein de notre laboratoire indiquent que ce récepteur d’endocytose est capable de contrôler la dynamique d’adhérence des cellules tumorales. Nous avons donc cherche à identifier un nouveau partenaire membranaire de LRP1, capable de participer à la régulation de l’adhérence tumorale. Notre étude s’est portée sur le récepteur d’adhérence CD44. L’utilisation de RAP, un antagoniste de LRP1 révèle que ce récepteur d’endocytose module la présence de CD44 à la membrane plasmique. Nous avons également découvert que ces deux récepteurs colocalisent fortement dans la cellule tumorale, que ce soit à la surface cellulaire ou au niveau intracellulaire. De plus LRP1 et CD44 co-immunoprécipitent à partir d’extraits totaux et membranaires, indiquant que ces deux récepteurs sont fortement associés au sein d’un même complexe moléculaire. L’étude de la répartition membranaire du complexe LRP1/CD44 a montré qu’il était en grande partie situé dans les radeaux lipidiques et particulièrement les cavéoles. Toutefois ces structures n’apparaissent pas nécessaires à l’établissement du complexe et ne sont pas impliquées dans les processus d’endocytose relatifs à ces récepteurs. En effet, des expérimentations visant à quantifier l’endocytose de CD44 couplées à différents traitements (β-MCD, conditions hyperosmotiques) révèlent que l’endocytose de ce complexe implique principalement la voie des vésicules tapissées de clathrine. Nous avons également démontré que ce mécanisme dynamique permettait de réguler l’adhérence tumorale. Enfin, des travaux sur le shedding de CD44 ont permis d’identifier les protéases impliquées (MT1MMP, ADAMs 10 et 17) et mettent en évidence un effet protecteur de LRP1 sur le clivage de l’ectodomaine de CD44. / The low-density lipoprotein receptor-related protein-1(LRP-1) is a large endocytic recept or mediating the clearance of various molecules from the extracellular matrix. In the field of cancer, LRP1-metiated endocytosis was first associated to anti-properties. However, recent results suggested that LRP-1 may coordinate the adhesion-deadhesion balance in malignant cells to support tumor progression. Here, we observed that LRP-1-silencing or RAP (receptor-associated protein) treatment led to tumor cell surface accumulation of CD44. Moreover, we evidenced a tight interaction between CD44 and LRP-1, not exclusively localized in lipid rafts. Overexpression of LRP-1-derived mini-receptors indicated that the fourth ligand-binding cluster of LRP-1 is required to bind CD44. CD44 labeling with EEA1 and LAMP-1 showed that internalized CD44 was highly reduced under hyperosmotic conditions but poorly affected by membrane cholesterol depletion, revealing that it proceeds mostly via clathrin-coated pits. Finally, we demonstrated that CD44-silencing abolishes RAP-induced tumor cell attachment, revealing that cell-surface accumulation of CD44 under LRP-1 blockade is mainly responsible for the stimulation for tumor cell adhesion. Altogether, our data shed light on the LRP-1 mediated internalization of CD44 that appeared critical to define the adhesive properties of tumor cells.

La stéatose hépatocytaire, définie par l’accumulation de triglycérides dans les hépatocytes, est fréquente au cours de l’hépatite chronique C. La stéatose peut être induite par le VHC de génotype 3 et constitue alors une lésion cytopathique virale au cours de l’hépatite chronique C. Cette observation clinique suggère que la stéatose viro-induite est liée à la fonction d’une ou de plusieurs protéine(s) virale(s) du génotype 3 rarement portée par les protéines correspondantes de génotype non-3. L’objectif de ce travail a été d’identifier des déterminants viraux de la stéatose hépatocytaire viro-induite au cours de l’hépatite chronique C et entrevoir les mécanismes impliqués dans cette pathologie. Des analyses menées sur des séquences de VHC strictement sélectionnés pour leur génotype et leur capacité à induire une stéatose chez les patients atteints d’hépatite chronique C, ont permis de mettre en évidence des déterminants putatifs de la stéatose viro-induite. Des résidus associés au caractère stéatogène ou non stéatogène des séquences de VHC étudiées ont été identifiés dans les régions codant E1, E2 et NS3. Le caractère partiel de la compartimentation de ces mutations nécessite toutefois une étude fonctionnelle de ces séquences pour valider leur pertinence. Le motif FATG164-167 de la protéine de capside, qui a été impliqué dans l’accumulation spécifique de triglycérides par la protéine de capside, se révèle caractéristique du génotype 3 et non associé à un pouvoir stéatogène in vivo. Nous avons examiné, in vitro, selon le génotype de la protéine virale et son association avec une stéatose in vivo, d’une part les interactions entre les gouttelettes lipidiques et les protéines de capside, et d’autre part les changements morphologiques des gouttelettes lipidiques liés à l’expression de la protéine de Capside. Ces travaux montrent que les protéines de Capside de génotypes 1b et 3a sont localisées de manière similaire à la surface des gouttelettes lipidiques indépendamment du caractère stéatogènes de VHC dont elles sont issues. Néanmoins, l’expression de la protéine de capside de génotype 3 est associée à la formation de gouttelettes lipidiques plus grosses et plus nombreuses par rapport à celles de génotype 1b. Ces résultats suggèrent que l’interaction de la protéine de Capside avec les gouttelettes lipidiques pourrait jouer un rôle dans l’induction d’une stéatose par le VHC de génotype 3. L’absence de différences génétique ou fonctionnelle entre les protéines de Capside de génotype 3 issues de VHC stéatogène ou non stéatogène in vivo suggèrent cependant que d’autres protéines virales et/ou facteurs cellulaires doivent certainement être impliqués dans le développement d’une stéatose hépatocytaire chez les patients infectés par un VHC de génotype 3a / Hepatocellular steatosis is common in patients with chronic hepatitis C. Steatosis can be considered as a true cytopathic lesion induced by hepatitis C virus genotype 3, suggesting that one or more viral proteins produced during genotype 3 infection are involved in the steatogenic process, while the same proteins produced during infection by other genotypes are not. Our objective was to identify the viral determinants of HCV-induced steatosis and to understand the underlying mechanisms. Extensive analysis performed on HCV sequences selected on their genotype and their association with in vivo steatosis are revealed putative viral determinants of viral-induced steatosis in E1-E2 and NS3 proteins coding regions. However, we can not rule out the potential role of these positions in HCV-induced steatosis and experimental study should be drawn to explore this issue. In addition, the FATG164-167 motif, which has been implicated in HCV core protein induced steatosis, was constantly present on genotype 3a sequences independently of the original presence or absence of liver steatosis. We examined in vitro interactions between lipid droplets and full-length core protein isolated from patients with HCV genotype 3a infection, with and without steatosis, and from steatosis-free patients infected by hepatitis C HCV 1b. We also examined morphological changes in the lipid droplets according to the HCV genotype and the presence of steatosis in vivo. We showed that the core protein of both HCV genotypes 1b and 3a binds tightly to the surface of intracellular lipid droplets. However, cells transfected with genotype 3a contain more neutral lipids in lipid droplets, and more large lipid droplets, than cells transfected with genotype 1b sequences. This suggests that hepatitis C virus core protein-lipid droplet interaction could play a role in virus-induced steatosis. Importantly, we found no genetic or functional differences between genotype 3a core proteins from patients with and without hepatitis C virus-induced steatosis. This suggests that other viral proteins and/or host factors are involved in the development of hepatocellular steatosis in patients infected by hepatitis C virus genotype 3a

Mémoire numérisé par la Direction des bibliothèques de l'Université de Montréal.

Thèse de doctorat : Chimie Informatique et Théorique : Nancy 1 : 2009. / Titre provenant de l'écran-titre.

Th. Doct.-Ing.--Sc. agronomiques--Paris-Grignon--Institut national agronomique, 1984. / 1985 d'après la déclaration de dépôt légal. Bibliogr. p. 84-88.

L'intérêt porté à l'étude des peptides antimicrobiens est motivé par la résistance croissante des bactéries face aux antibiotiques traditionnels, un problème particulièrement présent en milieu hospitalier. Ayant en vue d’approfondir ce domaine d’expertise, notre attention s’est arrêtée sur la thanatine. Ce peptide naturel présent chez la punaise soldat (Podisus maculiventris) se démarque par sa structure secondaire en forme d’épingle à cheveux et par sa capacité à entraîner l’agglomération des bactéries. L’objectif du projet est d’étudier l’interaction de la thanatine avec des membranes lipidiques modélisant les cellules eucaryotes et procaryotes afin d’en déduire son mécanisme d’action. En spectroscopie IRTF et RMN en phase solide, la structure et l’organisation des systèmes modèles ont été étudiées. L’agrégation de vésicules modèles a quant à elle été étudiée par diffusion dynamique de la lumière et spectroscopie UV-vis. Des avancées ont été faites concernant la formulation des membranes modèles.

Le vieillissement s'accompagne d'un déclin de l'immunité, c'est l'immunosénéscence. Les lymphocytes sont des cibles du vieillissement et lors de la stimulation de leur récepteur (TCR) la production d'interleukine-2 est déficiente. Pour expliquer la perte de fonctionnalité des lymphocytes T avec le vieillissement humain, plusieurs hypothèses sont mises en avant dont celle suggérant un défaut de transmission du signal intracellulaire à partir du TCR. Plusieurs études ont démontré que des défauts de signalisation sont effectivement présents dans les voies de signalisation du TCR. La plupart des voies de signalisation sont affectées et il est possible qu'une défaillance en amont puisse toutes les expliquer. Cependant, aucune explication ne pouvait être apportée jusqu'à la découverte de l'existence des radeaux lipidiques membranaires. Ces radeaux lipidiques enrichis en cholestérol et molécules facilitent la signalisation intracellulaire en permettant la formation du signalosome. Ces structures sont initiatrices de la signalisation du TCR. Nous avons émis l'hypothèse que ce sont des défaillances dans les fonctions des radeaux lipidiques qui expliqueraient les altérations en aval de la membrane. Nous avons démontré que les cellules T quiescentes de la personne âgée (+ 65 ans) ont une quantité de cholestérol deux fois plus importante dans les radeaux lipidiques. Ceci s'accompagne d'une diminution de la fluidité. La modulation du contenu en cholestérol par la cyclodextrine permet de contrôler la fluidité membranaire. Cependant, la cyclodextrine a d'autres effets et n'est pas préconisée pour moduler les fonctions des lymphocytes T. De plus, LAT est dans un état de phosphorylation significativement supérieur avec le vieillissement. En ce qui concerne Lck, la molécule est hyper-phosphorylée dans les radeaux lipidiques. Cet état d'activation est relié au phénomène d'Inflamm-Aging. Lors de la stimulation du TCR, le recrutement des molécules de signalisation est diminué par rapport aux sujets jeunes (18-25 ans). La phosphorylation de LAT et Lck est significativement diminuée dans les radeaux lipidiques des lymphocytes CD4[indice supérieur +] activés de personnes âgées. La signalisation issue du CD28 est altérée dans ces cellules (Akt). La mesure de la quantité de CD28 dans les radeaux lipidiques est significativement supérieure dans les cellules CD8 [indice supérieur +] comparativement aux cellules CD4[indice supérieur +]. Les cellules CD8[indice supérieur +] ont un signalosome pré-formé alors que les lymphocytes CD4[indice supérieur +] sont dépendants de la polarisation des radeaux lipidiques. La perte d'expression du CD28 chez les cellules CD8[indice supérieur +] n'a pas de répercussion sur sa signalisation alors que les cellules CD4[indice supérieur +] ont un défaut dans la phosphorylation de Akt malgré l'expression du CD28 inchangée. L'immunosénéscence s'explique en partie par la perte de fonction des radeaux lipidiques dans les cellules CD4[indice supérieur +]. Ces résultats suggèrent que les fonctions des radeaux lipidiques dans les sous-populations lymphocytaires définissent la capacité des cellules à répondre et à s'adapter au milieu environnant.