INTRODUÇÃO: O câncer gástrico precoce que invade a submucosa pode apresentar acometimento linfonodal em torno de 20% dos casos. O tratamento cirúrgico clássico com gastrectomia e linfadenectomia D2 é um procedimento não isento de mortalidade e morbidade. Determinar quais pacientes têm maior risco de acometimento linfonodal permitiria tratamentos com menores complicações. Recentemente diversos autores relatam maior expressão imuno-histoquímica de p53 e p21ras em tumores avançados e com pior prognóstico. Tem sido relatada também perda da expressão de p21waf1, p27kip1 e p16ink4a nos tumores avançados e algumas publicações relatam também relação entre a expressão dos marcadores e acometimento linfonodal. MÉTODOS: Foram estudados retrospectivamente 81 pacientes submetidos à gastrectomia com linfadenectomia D2 no período de 1971 a 2004 no Serviço de Cirurgia do Estômago e Intestino Delgado do Departamento de Gastroenterologia do HC-FM/USP. Os blocos de parafina contendo fragmentos dos tumores foram recuperados e novo exame histopatológico confirmou o diagnóstico. Selecionaram-se áreas representativas de mucosa normal, mucosa metaplásica e tumor para confecção de novos blocos de tissue microarrays. Foi avaliada a expressão imuno-histoquímica de p21ras, p53, p21waf1/cip1, p27kip1 e p16ink4a nos tecidos. Foram investigadas as correlações entre a expressão dos marcadores e as características clínico-patológicas dos pacientes. A análise da associação entre os dados clínicos e a positividade dos marcadores foi realizada pelo teste Qui-quadrado. RESULTADOS: Na mucosa normal, metaplásica e tumoral p53 apresentou positividade em 53%, 87,3% e 87,1% dos casos respectivamente. Nos mesmos tecidos p21ras apresentou positividade de 85,3%, 86% e 96,8%. Para p16ink4a a positividade foi de 46,3%, 91,1% e 86%. Para p27kip1 a positividade foi de 60%, 94,7% e 95,3%. Para p21waf1/cip1 a positividade foi 32,4%, 72,7% e 71,4%. Todos os tumores tiveram alguma positividade para p53. Os tumores com acometimento linfonodal apresentaram hiper-expressão(+4) de p53 em 47% dos casos contra 17% nos pacientes que não tinham acometimento. Nenhum tumor com positividade para p53 baixa(0 e +1) teve linfonodos acometidos. Nenhum tumor com p21ras negativo apresentou linfonodos acometidos. Nos pacientes com acometimento linfonodal p21ras teve positividade intensa(+2 e +3) em 88% dos casos contra 50% dos casos sem acometimento linfonodal. Houve positividade intensa(+2,+3 e +4) de p21waf1/cip1 em 71% dos tumores com acometimento linfonodal contra 28% nos pacientes sem acometimento. Não observamos perda de expressão de p21waf1, p27kip1 e p16ink4a nos tumores com acometimento linfonodal. Na mucosa normal p16ink4a foi hiper-expresso (+4) em 20% dos casos com infiltração perineural contra 0% nos casos sem acometimento. O mesmo marcador foi hiperexpresso em 50% dos casos com infiltração vascular contra 0% dos casos sem infiltração. Os tumores com padrão de infiltração Sm2 tiveram pouca positividade(0 e +1) de p27kip1 na mucosa normal em 89% dos casos contra 55% dos casos Sm1. CONCLUSÕES: Maior expressão de p53, p21ras e p21waf1/cip1 no tumor teve relação estatística significante com acometimento linfonodal. Ocorre aumento da expressão imuno-histoquímica de todos os marcadores da mucosa normal para o tumor. A maior hiper-expressão de p16ink4a na mucosa normal de pacientes tem relação com infiltração perineural e vascular nos tumores. A expressão dos marcadores é diferente nas raças estudadas. As pacientes do sexo feminino apresentam maior positividade de p21waf1 na mucosa normal. Pacientes com história familiar de câncer gástrico apresentam maior positividade de p16ink4a na mucosa normal, menor positividade de p21waf1/cip1 e p21ras na mucosa metaplásica. Maior positividade na mucosa normal de p21waf1/cip1 relaciona-se a sexo feminino e infiltração tipo Sm1 / INTRODUCTION: Early gastric cancer that invades the submucosa might have a lymphonodal involvement in about 20% of the cases. Gastrectomy and D2 linfadenectomy is a procedure that has presented mortality and morbidity. Determining which patients would have a greater risk of lymphonodal involvement would allow treatments with fewer complications. Recently, several authors reported a greater immunohistochemical expression of p53 and p21ras in advanced tumors with worst prognosis. It has also been reported the expression loss of p21wafl, p27kip1, and p16ink4a in advanced tumors, and, some studies also observed the relationship between the markers expression and lymphonodal involvement. METHODS: Eightyone patients who had undergone gastrectomy with D2 linfadenectomy from 1971 to 2004 were retrospectively studied. A new histopathological exam confirmed the diagnosis. Representative areas of both normal and metaplastic mucosa and of the tumor were selected for obtaining new blocks of tissue microarrays. The immunohistochemical expression of p21ras, p53, p21waf1/cip1, p27kip1 and p16ink4a in the tissues was evaluated. RESULTS: In normal, metaplastic and tumoral mucosa, p53 showed positivity in 53%, 87.3%, and 87.1% of the cases, respectively. In the same tissues, p21ras showed positivity in 85.3%, 86%, and 96.8%, respectively. The positivity of p16ink4a was 46.3%, 91.1%, and 86%, respectively. p27kip1 showed a positivity of 60%, 94.7%, and 95.3%, respectively. p21wafl/cip1 presented a positivity of 32.4%, 72.7%, and 71.4%, respectively. All tumors showed positivity for p53. Tumors with lymphonodal involvement presented hyperexpression (+4) of p53 in 47% of the cases versus 17% in patients who had not showed any involvement. No tumor with low positivity (0 and +1) of p53 showed lymphonodal involvement. No tumor with negative p21ras showed lymphonodal involvement. In patients with lymphonodal involvement, p21ras presented strong positivity (+2 and +3) in 88% of the cases versus 50% of the cases without lymphonodal involvement. There was a strong positivity (+2,+3, and +4) of p21wafl/cip1 in 71% of the tumors with lymphonodal involvement versus 28% in patients without involvement. It was not observed an expression loss of p21waf1, p27kip1 e p16ink4a in tumors with lymphonodal involvement. In normal mucosa, p16ink4a showed a hyper-expression (+4) in 20% of the cases with perineural invasion versus 0% of the cases without invasion. This same marker showed a hyper-expression in 50% of the cases with vascular invasion versus 0% of the cases without invasion. Tumors with Sm2 invasion pattern showed low positivity (0 and +1) of p27kip1 in normal mucosa in 89% of the cases versus 55% of the cases of Sm1 tumors. CONCLUSIONS: Higher expression of p53, p21ras, and p21wafl/cip1 in tumor showed a significant statistical relationship with lymphonodal involvement. A higher hyper-expression of p16ink4a in patients normal mucosa was related to perineural and vascular invasion of tumors

The most important prognostic factor in breast cancer is the presence or absence of metastases in axillary lymph nodes. Frozen section and touch imprint cytology are conventional intra-operative methods used in the detection of metastatic breast cancer with varying sensitivities and specificities. The limitation of these methods led to the development of alternative molecular diagnostic tests, such as GeneSearch, a commercial real-time quantitative Polymerase Chain Reaction (RT-qPCR) assay that allows for an intra-operative diagnosis of metastatic breast cancer. When the GeneSearch assay was discontinued, Metasin was developed as an in-house RT-qPCR replacement assay. Metasin targets the epithelial cell marker cytokeratin 19 (CK19) and the breast marker mammaglobin (MGB) mRNA to confirm the presence or absence of metastatic disease, whilst the reference gene porphobilinogen deaminase (PBGD) acts as a positive control for the performance of the assay. The optimised assay can produce a result within 32 minutes allowing it to be used in the intra-operative setting to detect metastatic breast cancer in sentinel lymph nodes. 154 archived lymph node homogenates that were previously analysed by both GeneSearch and histology in parallel were used to validate Metasin. Out of 154 cases, 148 showed concordance with both GeneSearch and Metasin with 111 cases being negative and 37 cases being positive. There were six discordant cases, four in which only Metasin detected metastases and two in which only GeneSearch picked up metastases. Out of the four Metasin-only positive cases, three were found to be positive on histology after deeper levels were cut in the slices sent for histological assessment. Therefore, one case could not be shown histologically to be positive for metastases. There were two cases that were missed by Metasin but picked up by GeneSearch. One case was positive on histology and the second case negative for histology. The error rate for Metasin was 3.89%. The sensitivity and specificity of the Metasin assay were found to be 95% and 98% respectively, and the positive and negative predictive values were 90% and 98% respectively. These results are comparable to those of GeneSearch. Metasin had an assay time of less than 45 minutes and was operated by biomedical scientists. The results of the validation process were deemed acceptable for the assay to be run live and used in the clinical setting. Metasin continues to provide breast cancer patients at Princess Alexandra Hospital with all the advantages that a molecular intra-operative diagnostic service provides.

Mastocitomas são neoplasias muito prevalentes em cães, e podem ser classificados em graus 1, 2 ou 3 de acordo com características morfológicas. O objetivo deste projeto foi investigar a presença de metástases de mastocitomas caninos de graus 1, 2 ou 3 em linfonodos regionais, procurando correlaciona-las ao intervalo livre de doença e à sobrevida dos animais. Para isto, avaliamos os parâmetros clínicos dos animais e das neoplasias em 57 cães portadores de mastocitoma cutâneo, registrando-se a porcentagem dos casos que apresentaram metástases, o grau histológico da neoplasia e a sobrevida dos animais. Realizou-se análise citológica dos linfonodos regionais previamente ao procedimento cirúrgico e posteriormente estes linfonodos foram excisados junto com a neoplasia primária, independentemente do resultado da citologia. Os tumores foram graduados por histopatologia e submetidos à análise imunoistoquímica com c-kit e Ki-67. Os linfonodos foram avaliados por histopatologia, por análise histoquímica e por imunoistoquímica com c-kit. Foi realizada comparação entre o diagnóstico citológico e histopatológico dos linfonodos quanto à presença de metástases e entre fatores prognósticos associados à neoplasia e a presença de metástase em linfonodo. A citologia demonstrou ser um bom exame na detecção de metástase em linfonodo de cães portadores de mastocitoma cutâneo, e foram observadas células metastáticas em 36 casos (36/46). Na análise histológica dos linfonodos, observamos um maior índice de metástase nos animais diagnosticados com mastocitomas de grau 3, segundo a graduação de Patnaik, e com mastocitomas de alto grau, segundo a graduação de Kiupel. No entanto, não encontramos uma associação significativa entre a presença de metástase em linfonodo e o grau histológico da neoplasia. O grau histológico associou-se à sobrevida independentemente da presença de metástase em linfonodo. Não houve associação entre o padrão de expressão da proteína KIT na neoplasia com a presença de metástase em linfonodo, nem a sobrevida. A utilização da imunoistoquímica em linfonodos metastáticos com c-kit foi um método eficaz, com predomínio do mesmo padrão de marcação da proteína KIT na neoplasia primária e no linfonodo. A expressão de Ki-67 na neoplasia correlacionou-se à presença de metástase em linfonodo e à uma menor sobrevida e intervalo livre de doença nos animais que apresentavam mastocitomas com índice de Ki-67 acima de 23. Na análise da sobrevida, não observamos diferença na sobrevida, nem no intervalo livre de doença, comparando-se os animais que apresentavam metástase em linfonodo e aqueles que não apresentavam, entretanto o índice de óbito e de progressão da doença neste estudo foram baixos. O intervalo livre de doença e sobrevida média não foram alcançados ao final do estudo. Os resultados sugerem que a presença de metástase em linfonodo não deve ser considerada como um fator prognóstico independente em cães diagnosticados com mastocitoma cutâneo, uma vez que outros fatores prognósticos, bem como a utilização de tratamentos adjuvantes, podem interferir de forma significativa na evolução destes pacientes. / Mast cell tumors are very prevalent in dogs, and can be classified in grades 1, 2 or 3 according to morphological characteristics.The aim of this study was to investigate the presence of metastases in regional lymph nodes of grade 1, 2 or 3 canine mast cell tumors, and correlate its presence to the disease-free interval and survival of the animals. For this, we evaluated the clinical parameters of animals and tumors in 57 dogs with cutaneous mast cell tumor, registering the percentage of cases with metastasis, histological grade of the tumor and survival of the animals. Cytological analysis of regional lymph nodes were performed prior to surgery and then these lymph nodes were excised along with the primary tumor, regardless of the result of cytology. The tumors were graded by histopathology and submitted to immunohistochemical analysis with c-kit and Ki-67. The lymph nodes were evaluated by histopathology, histochemistry and immunohistochemistry with c-kit. We compared the cytological and histopathological diagnosis of lymph nodes for the presence of metastases and compared prognostic factors associated with the primary tumor and the presence of metastasis in lymph node. Cytology proved to be a good method in detecting lymph node metastasis in dogs with cutaneous mast cell tumors and metastatic cells were observed in 36 cases (36/46). In the histological analysis of the lymph nodes, we observed a higher rate of metastasis in animals diagnosed with grade 3 mast cell tumors, according to the Patnaik grading system, and with high-grade mast cell tumors, according to the Kiupel grading system. However, we have not found a significant association between the presence of metastasis in lymph nodes and the histological grade of the tumors. Histological grade associated with survival independent of the presence of lymph node metastasis. In addition, there was no association between the pattern of KIT protein expression in the primary tumor and lymph node metastasies or survival. The use of immunohistochemistry in metastatic lymph nodes with c-kit is an effective method, with prevalence of the same KIT pattern in primary tumor and lymph node. The expression of Ki-67 in the primary tumor correlated with lymph node metastasis, survival and disease-free-time, and it was observed in animals in which mast cell tumors had a Ki-67 index higher than 23. In survival analysis, we observed no difference in survival or in disease-free interval, comparing the animals with lymph node metastasis and those who did not had, though the death rate and disease progression in this study were low. The disease-free interval and median survival were not reached at the end of the study. The results suggest that the presence of lymph node metastasis should not be considered as an independent prognostic factor in dogs diagnosed with cutaneous mast cell tumors, since other prognostic factors, as well as the establishment of adjuvant treatment, can interfere significantly with the progression of these patients.

O linfonodo é um órgão linfoide secundário que apresenta uma arquitetura altamente organizada com diferentes compartimentos para tipos celulares específicos. Dentre as células estruturais que compõem este órgão, as células estromais como células fibroblásticas reticulares (FRCs) e células duplo negativas (DNCs) parecem ter papel importante na modulação da resposta imunológica e na tolerância periférica. As FRCs são caracterizadas pela expressão de podoplanina (gp38, PDPN) e localizam-se principalmente na zona de células T, enquanto as DNCs (gp38-) apresentam fenótipo, localização e função pouco descritos. Embora estas células tenham sido muito estudadas em modelos murinos os estudos sobre FRCs e DNCs humanas são escassos e, portanto nosso estudo deve contribuir para a compreensão da biologia e a função dessas células, podendo favorecer o conhecimento sobre a eficiência e as disfunções da resposta imune no linfonodo. Com esse intuito, isolamos e caracterizamos fenotípica e funcionalmente as FRCs e DNCs de linfonodos de pacientes com câncer, diverticulite e doadores de fígado. Nossos resultados mostraram a integridade e a distribuição celular no linfonodo. As células aderentes derivadas dos linfonodos estudados preecheram todos os critérios internacionais de caracterização de estroma, e, portanto, foram consideradas células estromais. Através da expressão de gp38 identificamos duas subpopulações de celulas estromais: FRCs (gp38+ e CD31-) e DNCs (gp38- e CD31-) e verificamos que as frequências destas células variam entre as amostras, sugerindo que a doença pode interferir na composição celular estromal dos linfonodos. As duas populações celulares foram estimuladas com citocinas inflamatórias como IFN-y ou TNF-alfa + IL-1beta por 24 e 48 horas e avaliadas quanto à expressão gênica e proteica. Em condições homeostáticas, genes relacionados com a indução e controle da proliferação foram diferencialmente expressos nas FRCs e DNCs, este dado foi confirmado in vitro, uma vez que as FRCs apresentaram maior potencial proliferativo em relação às DNCs. O estímulo com IFN-y induziu aumento de expressão nas DNCs e FRCs para citocinas, quimiocinas, moléculas de histocompatibilidade e moléculas envolvidas na regulação da resposta imunológica. Em resposta ao estímulo com TNF-alfa +IL-1beta, observamos aumento na expressão de moléculas comuns ao estímulo com IFN-?, entretanto, também observamos expressão de moléculas de citocinas, quimiocinas inflamatórias e moléculas de histocmpatibilidade especificamente relacionados a este sinal em ambas as populações. Em conjunto, nossos dados sugerem que DNCs e FRCs apresentam diferenças no perfil de resposta segundo os estímulos inflamatórios aos quais estão expostas, aumentando a expressão diferencial de moléculas envolvidas na regulação positiva e negativa da resposta imune / The lymph node is a secondary lymphoid organ that has a highly organized architecture with different compartments for specific cell types. Among the structural cells that comprise this organ, stromal fibroblastic reticular cells (FRCs) and double negative cells (DNCs) seems to play an important role in modulating the immune response and peripheral tolerance. FRCs are characterized by podoplanin (gp38, PDPN) expression and are located mainly in the T cell zone, while DNCs (gp38-) present phenotype, location and function not well described. Although these cells have been studied in murine models, studies on human FRCs and DNCs are limited and therefore our study should contribute to the understanding of biology and function of these cells and should promote knowledge of efficiency and disorders in the lymph node immune response. For this purpose, we have isolated and characterized phenotypic and functionally lymph nodes derived FRCs and DNCs from patients with cancer, diverticulitis and liver donors. Our results showed lymph node integrity and its cellular distribution. Adherent cells lymph nodes-derived fullfill the international criteria for stroma characterization, and therefore, they have been considered stromal cells. Using gp38 expression we were able to identify two stromal cells subpopulations: FRCs (gp38 + and CD31-) and DNCs (gp38- and CD31-) and found that this cells frequency varies among samples, suggesting that the disease may interfere with lymph nodes stromal cell composition. These two cells populations were stimulated with inflammatory cytokines such as IFN-y or TNF-alfa + IL-1beta for 24 and 48 hours and evaluated for gene and protein expression. In homeostatic conditions, genes involved in the induction and control of proliferation were differentially expressed by FRCs and DNCs, this data has been confirmed in vitro, since the FRCs showed higher proliferative potential compared to DNCs. IFN-y stimulation induced increase DNCs and FRCs expression for cytokines, chemokines, histocompatibility molecules and molecules involved in regulating the immune response.In response to TNF-alfa + IL-1beta stimulation, we observed common molecules expressed by the IFN-? stimulation, however, we also observed expression of cytokines, chemokines and histocompatibility molecules specifically related to this signal in both cells populations. Together, our data suggest that DNCs and FRCs differ in the response profile according to inflammatory stimuli to which they are exposed, increasing the differential expression of molecules involved in the positive and negative regulation of immune response

Os linfonodos podem ser compreendidos como estruturas integrantes de dois sistemas orgânicos, o circulatório e o imunológico, apresentando estrutura mutável decorrente do tipo, da intensidade e do tempo da estimulação antigênica. As doenças nodais são complexas devido ao grande número de agentes que atingem os linfonodos via linfa e por causa da complexidade inerente do sistema imunológico e suas doenças próprias. A linfadenopatia é um achado clínico muito comum em cães, e o seu significado não deve ser desprezado. Inúmeros processos patológicos são observados no linfonodo canino, particularmente as hiperplasias reacionais benignas, linfadenites e os linfomas, e a sua total compreenção requer o conhecimento de histofisiologia, noções de imunologia, e biologia molecular. O conhecimento dos métodos diagnósticos disponíveis tem fundamental importância para o manejo do paciente, permitindo um tratamento acurado e eficiente / The lymph nodes may be known as integrants of two organic systems, circulatory and immunological, demonstrating mutable structure depending on the type, intensity, and time of antigenic stimulation. Nodal diseases are complex, because of the large number of diseases reaching nodes via lymph and because of the inherent complexity of the immune system and its own diseases. Lymphadenopathy is a common clinical finding, Many pathological processes has been found in canine lymph nodes, primarily benign reative hiperplasia, lymphadenitis and lymphomas, and your complete comprehension requires knowledge in histophysiology, immunology notions, and molecular biology. An understanding of the available diagnostic methods has fundamental importance for patient management, allowing an accurate and efficient treatment

Objetivos: Avaliar a eficácia da injeção intraoperatória para identificação do linfonodo sentinela (LS) em câncer de mama com o uso do Dextran 500-99m-Tecnécio (Tc) e azul patente. Analisar se as doses do radiofármaco, o IMC (índice de massa corporal) e o volume da mama influenciam no tempo para migração ao LS. Metodologia: Estudo prospectivo, realizado entre abril de 2008 e junho de 2009, que incluiu 74 biópsias de LS em pacientes com câncer de mama em estádios T1N0 e T2N0. Injetou-se, após indução anestésica, de 0,5 a 1,5 mCi de Dextran 500-99m-Tc filtrado 0,22 μm na região subareolar num volume de 5 ml e 2 ml de azul patente. Resultados: Identificou-se o LS em 100% dos casos. Um LS (1,35%) estava marcado apenas com o azul patente. A taxa de identificação com o “probe” foi de 98% (73/74 casos). A dose média de radiofármaco aplicada foi 0,97 mCi + 0,22. O tempo médio para marcação do LS foi de 10,7 minutos (+ 5,7min). Identificamos em média 1,66 LS com o radioisótopo. A dose aplicada não apresentou relação com o tempo para captação (p=0,73). Quanto maior o volume da mama e IMC, maior o tempo para captação na região axilar (Pearson Correlation r=0,393 p<0,01; r=0,469 p<0,01 - respectivamente). Conclusão: A injeção intraoperatória do radiofármaco é eficaz para identificação do LS em câncer de mama. O tempo para marcação do LS é maior em pacientes com IMC elevado e mamas volumosas. Doses maiores de radiofármaco não diminuem o tempo de migração. / Objectives: To determine the identification of sentinel lymph node (SLN) in breast cancer after intraoperative injection of Dextran 500‐99mTechnetium (Tc) and blue dye. To analyze if the doses of the radioisotope, body mass index (BMI) and breast volume influence the migration time of the SLN. Methodology: Prospective study between april 2008 and june 2009, which included 74 biopsies of SLN in patients with breast cancer in stages T1N0 and T2N0. Intraoperative injection after induction of general anesthesia, 0.5 to 1.5 mCi of dextran 500‐99m‐Tc filtered 0.22 μm in the subareolar region in a volume of 5 ml and 2 ml of blue dye. Results: We identified the SLN in 100% of cases. In one case (1.35%) the SLN was marked only with the blue dye. The SLN identification rate with the probe was 98% (73/74 cases). The mean dose of radioisotope injected was 0.97 + 0.22 mCi. The average time to mark the SLN was 10.7 minutes (+ 5.7 min). We identified an average 1.66 SLN with the radioisotope. The dose had no effect on the time to capture (p = 0.73). The larger breast volume and BMI, the greater the capture time in the axillary region (Pearson Correlation r=0.393 p <0.01, r=0.469 p <0.01 - respectively). Conclusion: Intraoperative injection of the radioisotope is effective for the identification the SLN in breast cancer. Time to mark the SLN is higher in patients with high BMI and large breasts. Higher doses of radioisotope do not decrease the migration time.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / Objetivos. Desenvolver um modelo experimental para identificaÃÃo de linfonodo sentinela (LS) da mama da cadela com uso de corante azul de metileno e comparÃ-lo com o azul patente, controlados por tecnÃcio. MÃtodos. O trabalho foi realizado em 23 cadelas, tendo-se observado a marcaÃÃo dos LS do primeiro par superior de mamas ao se injetarem 0,2 ml de TecnÃcio 99m ligado ao fitato (Tc 99m) e 0,5 ml de azul patente Guerbet V 2,5 % nos espaÃos subpapilares das mamas direitas e 0,2 ml de Tc-99m e 0,5 ml do azul de metileno 1 % nos mesmos espaÃos das mamas esquerdas. Resultados. Na mama direita, as tÃcnicas de biopsia de LS quando utilizados o Tc-99m e azul patente foram concordantes. Dos 23 LS estudados, somente um nÃo corou nem foi captante. O azul patente foi eficaz em 100 % quando comparado com os dois mÃtodos associados. Na mama esquerda, dos 23 LS estudados, somente dois nÃo coraram e um nÃo foi captante, sendo esta diferenÃa estatisticamente nÃo significante. A tÃcnica de biopsia do LS utilizando-se o azul de metileno apresentou-se com eficÃcia de 91,3 % quando utilizado isoladamente e de 100 % quando associado ao Tc-99m. ConclusÃo. O uso do azul de metileno associado ao radiofÃrmaco pode ser considerado como tÃcnica potencial na pesquisa transoperatÃria do LS das mamas, sendo uma opÃÃo menos onerosa e com menores efeitos alergÃnicos do que o azul patente / Objetivos. Desenvolver um modelo experimental para identificaÃÃo de linfonodo sentinela (LS) da mama da cadela com uso de corante azul de metileno e comparÃ-lo com o azul patente, controlados por tecnÃcio. MÃtodos. O trabalho foi realizado em 23 cadelas, tendo-se observado a marcaÃÃo dos LS do primeiro par superior de mamas ao se injetarem 0,2 ml de TecnÃcio 99m ligado ao fitato (Tc 99m) e 0,5 ml de azul patente Guerbet V 2,5 % nos espaÃos subpapilares das mamas direitas e 0,2 ml de Tc-99m e 0,5 ml do azul de metileno 1 % nos mesmos espaÃos das mamas esquerdas. Resultados. Na mama direita, as tÃcnicas de biopsia de LS quando utilizados o Tc-99m e azul patente foram concordantes. Dos 23 LS estudados, somente um nÃo corou nem foi captante. O azul patente foi eficaz em 100 % quando comparado com os dois mÃtodos associados. Na mama esquerda, dos 23 LS estudados, somente dois nÃo coraram e um nÃo foi captante, sendo esta diferenÃa estatisticamente nÃo significante. A tÃcnica de biopsia do LS utilizando-se o azul de metileno apresentou-se com eficÃcia de 91,3 % quando utilizado isoladamente e de 100 % quando associado ao Tc-99m. ConclusÃo. O uso do azul de metileno associado ao radiofÃrmaco pode ser considerado como tÃcnica potencial na pesquisa transoperatÃria do LS das mamas, sendo uma opÃÃo menos onerosa e com menores efeitos alergÃnicos do que o azul patente / Objectives. To develop an experimental model for identification of sentinel lymph node (SLN) of breast bitch with the use of methylene blue and compares it with the patent blue, both associated with technetium. Methods. 23 dogs, there was the marking of the SLN of the first upper pair of breasts to inject 0.2 ml of Tc-99m phytate bound to (99m) and 0.5 ml of patent blue Guerbet V 2,5 % in subpapilar spaces right breast and 0.2 ml of 99mTc and 0.5 ml of 1% methylene blue in the same spaces left breast. Results. In the right breast biopsy techniques using 99mTc SLN and blue dye are in agreement. Of the 23 SLN studied, only one was not flushed nor uptake. The patent blue was effective in 100% when compared with the two methods together. The left breast of 23 SLN studied, only two non-stained and one was not uptake, this difference was not statistically significant. The SLN biopsy technique using methylene blue appeared with a 91.3% effectiveness when used alone and 100% when associated with 99mTc. Conclusion: The use of methylene blue associated with the radiotracer technique can be considered as potential research intraoperative SLN of breast, suggesting a less costly and less allergenic effects that blue patent. / Objectives. To develop an experimental model for identification of sentinel lymph node (SLN) of breast bitch with the use of methylene blue and compares it with the patent blue, both associated with technetium. Methods. 23 dogs, there was the marking of the SLN of the first upper pair of breasts to inject 0.2 ml of Tc-99m phytate bound to (99m) and 0.5 ml of patent blue Guerbet V 2,5 % in subpapilar spaces right breast and 0.2 ml of 99mTc and 0.5 ml of 1% methylene blue in the same spaces left breast. Results. In the right breast biopsy techniques using 99mTc SLN and blue dye are in agreement. Of the 23 SLN studied, only one was not flushed nor uptake. The patent blue was effective in 100% when compared with the two methods together. The left breast of 23 SLN studied, only two non-stained and one was not uptake, this difference was not statistically significant. The SLN biopsy technique using methylene blue appeared with a 91.3% effectiveness when used alone and 100% when associated with 99mTc. Conclusion: The use of methylene blue associated with the radiotracer technique can be considered as potential research intraoperative SLN of breast, suggesting a less costly and less allergenic effects that blue patent.

Os linfonodos podem ser compreendidos como estruturas integrantes de dois sistemas orgânicos, o circulatório e o imunológico, apresentando estrutura mutável decorrente do tipo, da intensidade e do tempo da estimulação antigênica. As doenças nodais são complexas devido ao grande número de agentes que atingem os linfonodos via linfa e por causa da complexidade inerente do sistema imunológico e suas doenças próprias. A linfadenopatia é um achado clínico muito comum em cães, e o seu significado não deve ser desprezado. Inúmeros processos patológicos são observados no linfonodo canino, particularmente as hiperplasias reacionais benignas, linfadenites e os linfomas, e a sua total compreenção requer o conhecimento de histofisiologia, noções de imunologia, e biologia molecular. O conhecimento dos métodos diagnósticos disponíveis tem fundamental importância para o manejo do paciente, permitindo um tratamento acurado e eficiente / The lymph nodes may be known as integrants of two organic systems, circulatory and immunological, demonstrating mutable structure depending on the type, intensity, and time of antigenic stimulation. Nodal diseases are complex, because of the large number of diseases reaching nodes via lymph and because of the inherent complexity of the immune system and its own diseases. Lymphadenopathy is a common clinical finding, Many pathological processes has been found in canine lymph nodes, primarily benign reative hiperplasia, lymphadenitis and lymphomas, and your complete comprehension requires knowledge in histophysiology, immunology notions, and molecular biology. An understanding of the available diagnostic methods has fundamental importance for patient management, allowing an accurate and efficient treatment

Mastocitomas são neoplasias muito prevalentes em cães, e podem ser classificados em graus 1, 2 ou 3 de acordo com características morfológicas. O objetivo deste projeto foi investigar a presença de metástases de mastocitomas caninos de graus 1, 2 ou 3 em linfonodos regionais, procurando correlaciona-las ao intervalo livre de doença e à sobrevida dos animais. Para isto, avaliamos os parâmetros clínicos dos animais e das neoplasias em 57 cães portadores de mastocitoma cutâneo, registrando-se a porcentagem dos casos que apresentaram metástases, o grau histológico da neoplasia e a sobrevida dos animais. Realizou-se análise citológica dos linfonodos regionais previamente ao procedimento cirúrgico e posteriormente estes linfonodos foram excisados junto com a neoplasia primária, independentemente do resultado da citologia. Os tumores foram graduados por histopatologia e submetidos à análise imunoistoquímica com c-kit e Ki-67. Os linfonodos foram avaliados por histopatologia, por análise histoquímica e por imunoistoquímica com c-kit. Foi realizada comparação entre o diagnóstico citológico e histopatológico dos linfonodos quanto à presença de metástases e entre fatores prognósticos associados à neoplasia e a presença de metástase em linfonodo. A citologia demonstrou ser um bom exame na detecção de metástase em linfonodo de cães portadores de mastocitoma cutâneo, e foram observadas células metastáticas em 36 casos (36/46). Na análise histológica dos linfonodos, observamos um maior índice de metástase nos animais diagnosticados com mastocitomas de grau 3, segundo a graduação de Patnaik, e com mastocitomas de alto grau, segundo a graduação de Kiupel. No entanto, não encontramos uma associação significativa entre a presença de metástase em linfonodo e o grau histológico da neoplasia. O grau histológico associou-se à sobrevida independentemente da presença de metástase em linfonodo. Não houve associação entre o padrão de expressão da proteína KIT na neoplasia com a presença de metástase em linfonodo, nem a sobrevida. A utilização da imunoistoquímica em linfonodos metastáticos com c-kit foi um método eficaz, com predomínio do mesmo padrão de marcação da proteína KIT na neoplasia primária e no linfonodo. A expressão de Ki-67 na neoplasia correlacionou-se à presença de metástase em linfonodo e à uma menor sobrevida e intervalo livre de doença nos animais que apresentavam mastocitomas com índice de Ki-67 acima de 23. Na análise da sobrevida, não observamos diferença na sobrevida, nem no intervalo livre de doença, comparando-se os animais que apresentavam metástase em linfonodo e aqueles que não apresentavam, entretanto o índice de óbito e de progressão da doença neste estudo foram baixos. O intervalo livre de doença e sobrevida média não foram alcançados ao final do estudo. Os resultados sugerem que a presença de metástase em linfonodo não deve ser considerada como um fator prognóstico independente em cães diagnosticados com mastocitoma cutâneo, uma vez que outros fatores prognósticos, bem como a utilização de tratamentos adjuvantes, podem interferir de forma significativa na evolução destes pacientes. / Mast cell tumors are very prevalent in dogs, and can be classified in grades 1, 2 or 3 according to morphological characteristics.The aim of this study was to investigate the presence of metastases in regional lymph nodes of grade 1, 2 or 3 canine mast cell tumors, and correlate its presence to the disease-free interval and survival of the animals. For this, we evaluated the clinical parameters of animals and tumors in 57 dogs with cutaneous mast cell tumor, registering the percentage of cases with metastasis, histological grade of the tumor and survival of the animals. Cytological analysis of regional lymph nodes were performed prior to surgery and then these lymph nodes were excised along with the primary tumor, regardless of the result of cytology. The tumors were graded by histopathology and submitted to immunohistochemical analysis with c-kit and Ki-67. The lymph nodes were evaluated by histopathology, histochemistry and immunohistochemistry with c-kit. We compared the cytological and histopathological diagnosis of lymph nodes for the presence of metastases and compared prognostic factors associated with the primary tumor and the presence of metastasis in lymph node. Cytology proved to be a good method in detecting lymph node metastasis in dogs with cutaneous mast cell tumors and metastatic cells were observed in 36 cases (36/46). In the histological analysis of the lymph nodes, we observed a higher rate of metastasis in animals diagnosed with grade 3 mast cell tumors, according to the Patnaik grading system, and with high-grade mast cell tumors, according to the Kiupel grading system. However, we have not found a significant association between the presence of metastasis in lymph nodes and the histological grade of the tumors. Histological grade associated with survival independent of the presence of lymph node metastasis. In addition, there was no association between the pattern of KIT protein expression in the primary tumor and lymph node metastasies or survival. The use of immunohistochemistry in metastatic lymph nodes with c-kit is an effective method, with prevalence of the same KIT pattern in primary tumor and lymph node. The expression of Ki-67 in the primary tumor correlated with lymph node metastasis, survival and disease-free-time, and it was observed in animals in which mast cell tumors had a Ki-67 index higher than 23. In survival analysis, we observed no difference in survival or in disease-free interval, comparing the animals with lymph node metastasis and those who did not had, though the death rate and disease progression in this study were low. The disease-free interval and median survival were not reached at the end of the study. The results suggest that the presence of lymph node metastasis should not be considered as an independent prognostic factor in dogs diagnosed with cutaneous mast cell tumors, since other prognostic factors, as well as the establishment of adjuvant treatment, can interfere significantly with the progression of these patients.

Abstract not available