Submitted by Fabio Sobreira Campos da Costa (fabio.sobreira@ufpe.br) on 2017-08-09T14:09:09Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) Dissertaçao_Carina_Paiva_PPG_MESTRADO_PATOLOGIA_TURMA2014-2016.pdf: 7682349 bytes, checksum: 18a47d04a840b2356f9461b6b6d72f96 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-08-09T14:09:09Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) Dissertaçao_Carina_Paiva_PPG_MESTRADO_PATOLOGIA_TURMA2014-2016.pdf: 7682349 bytes, checksum: 18a47d04a840b2356f9461b6b6d72f96 (MD5) Previous issue date: 2016-02-23 / Marcadores biológicos são requeridos para estimar o risco de recorrência da doença em mulheres com câncer de mama. O Ki67 é um marcador de proliferação celular e seu valor preditivo e prognóstico tem sido estudado como um importante biomarcador de rotina na prática clínica. Nosso estudo teve como objetivo avaliar a relação entre a intensidade da expressão do Ki-67 e o envolvimento de linfonodos axilares com metástases com a sobrevida livre de doença em mulheres com câncer de mama. Esse estudo foi retrospectivo e 134 pacientes foram elegíveis para o estudo. A associação entre os escores do Ki67 e outros fatores prognósticos, tais como tamanho do tumor, grau, status dos linfonodos axilares, invasão perineural e linfovascular, biomarcadores RE, RPg e HER-2 foram avaliados, além da análise de sobrevivência. Dos 134 pacientes, 53 tiveram recorrência da doença. O valor da mediana dos escores do Ki67 foi de 30% de todos os pacientes. Um total de 78 (58,25) dos pacientes tiverm escores alto do Ki67. A associação estatisticamente significante foi entre os escores altos do Ki67 com o grau histológico (p<0.001), subtipos moleculares (p<0.001), receptores de estrógeno (p=0.023) e receptores de progesterona (p=0.001). A sobrevida livre de doença em indivíduos com Ki67 alto e axila clinicamente negativa apresentou um menor tempo em meses em comparação com os indivíduos com escores do Ki67 baixo (p=0.049). / Biological markers are required to estimate the risk of disease recurrence in women with breast cancer. The Ki 67 is a cell proliferation marker and its predictive and prognostic value has been studied as an important marker in routine clinical practice. Our study aimed to evaluate the relationship between the intensity of Ki67 expression and involvement of axillary lymph nodes with metastases to the disease-free survival in women with breast cancer. This was a retrospective study and 134 patients were eligible for the study. The association between the scores of Ki67 and other prognostic factors such as tumor size, grade, status of axillary lymph nodes, perineural invasion and lymphovascular, in addition to biomarkers ER, PgR, and HER2 were evaluated, as well as survival analysis. Of the 134 patients, 53 have had recurrence of disease. The median value of Ki scores 67 was 30% of all patients. A total of 78 (58.25) of the patients had high scores Ki 67. A statistically significant association was between high scores of Ki67 with the histological grade, molecular subtypes of progesterone receptors estrogen receptors. A statistically significant association was between high scores of Ki67 with the histological grade (p <0.001), molecular subtypes (p <0.001), estrogen receptor (p = 0.023) and progesterone receptors (p = 0.001). The disease-free survival in patients with high Ki67 and clinically negative axilla had a shorter time in months compared to individuals with low Ki67 scores (p = 0.049).

Células reticulares fibroblásticas (FRCs, gp38+ e CD31-) e células duplo negativas (DNCs, gp38- e CD31-) são células estromais encontradas em órgãos linfoides secundários, como linfonodos. Enquanto as FRCs têm sido amplamente estudadas, pouco se sabe ainda sobre DNCs. Apesar da função estrutural das FRCs nos linfonodos já estar bem estabelecida, estudos recentes indicam que as FRCs também desempenham um papel fundamental em processos imunológicos, por exemplo, migração celular, ativação e qualidade da resposta imune, além da participação na tolerância periférica. Outra célula estromal em constante estudo são as células-tronco mesenquimais (CTMs), principalmente encontradas na medula óssea. Estas células compartilham similaridades, como por exemplo; são células estromais encontradas em órgãos linfoides, apresentam morfologia e características semelhantes quando cultivadas in vitro e estão envolvidas na resposta imune por mecanismos semelhantes. As CTMs são provenientes de um órgão linfoide primário, cuja função principal não está relacionada à resposta imunológica, entretanto, de acordo com inúmeros trabalhos, estas células possuem capacidade de interferir na ativação de várias células do sistema imunológico. Portanto, nossa hipótese é de que as FRCs e DNCs, que se encontram em um órgão linfoide secundário, cuja função principal remete a resposta imunológica, apresentem também um papel regulador, descrito na literatura como tolerância periférica e contração de uma resposta imunológica já estabelecida. Em nosso estudo mostramos que FRCs e DNCs foram isoladas a partir de linfonodos humanos e devidamente caraterizadas. Evidenciamos que FRCs e DNCs atendem todos os critérios mínimos propostos pela sociedade internacional de terapia celular para serem consideradas células-tronco estromais. Além disso, mostramos que FRCs e DNCs influênciam a proliferação e a expressão de moléculas de homing em linfócitos alogênicos in vitro. Portanto, contribuimos de forma inédita para o entendimento funcional das FRCs e DNCs, visto que estudos em humanos envolvendo estas células são escassos / Fibroblastic reticular cells (FRCs, gp38+ e CD31-) and double-negative cells (DNCs, gp38- e CD31-) are stromal cells found in secondary lymphoid organs, such as lymph nodes. While the FRCs has been widely studied, little is known about DNCs. Despite the structural function of FRCs on lymph nodes is well established, recent studies indicate that FRCs also play a key role in immunological processes, for example, cell migration, immune response activation and quality, beyond their involvement in peripheral tolerance. Another stromal cell type in constant study are mesenchymal stem cells (MSCs), mainly found in bone marrow. These cells share similarities with FRCs and DNCs, for example; they are estromal cells found in lymphoid organs, they present similar morphology and characteristics when cultured in vitro and they are involved in the immune response by similar mechanisms. MSCs are derived from a primary lymphoid organ which the major function is not related to immune response, but according to numerous studies these cells have the capacity of the interfere on activation of various immune cells. Consequently, our hypothesis is that FRCs and DNCs, usually found in secondary lymphoid organ, display immune regulatory roles, which were described in the literature as peripheral tolerance and immune response contraction. In our study we showed that FRCs and DNCs were isolated from human lymph nodes and adequately characterized. We evidenced that FRCs and DNCs meet all minimum criteria proposed by the International Society of Cell Therapy to be considerate a stromal stem cell. Therefore, we contributed in an unpublished manner to the functional understanding of FRCs and DNCs, since human studies involving these cells are scarce

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / To identify the lymph node positioned along the internal mammary vessels in isolated sternum of human cadaver, to distinguish the number of lymph nodes at the second, third and forth intercostals spaces and to standardize the surgical approach to those nodes, in order to establish anatomical landmarks to be used with the current techniques of mammary gland sentinel lymph node detection. Ten sternum plates removed from unclaimed cadavers were used in this study. Sternal plates were removed using bilateral incisions of the ribs at the midclavicular lines. The characterization of the internal mammary vessels and the anatomical integrity of the parietal pleura were indispensable requirements during the procedure. The study was descriptive experimental. A total of 56 lymph nodes were removed from the second, third and forth intercostals spaces, being 30 at the right side and 26 ones at the left side. The second intercostal space was the one that shows the greatest number of lymph nodes in both sides. The lymph nodes of the chain of internal mammary vessels were dissected by a safe and practical technique, different from the one practiced by the Italian surgeons, pioneers at the dissection of the lymph nodes of the internal mammary vessels. The first stage of the dissection consisted of detaching the pectorals major muscle from its attachments to the manubrium and sternal body, exposing the sternocostal joints. Upon identification and detachment of the intercostals muscles approximately five cm from the ribs, special attention is paid to the neurovascular structures located at the superior border of the intercostal space, forming a window in a format of âUâ, exposing the internal mammary vessels and the lymph nodes to them related. The approach used is a reliable surgical technique for removing lymph node from sterna plates. The model is therefore valuable for breast surgeons training in sentinel node biopsy, an important procedure for breast cancer patients / Identificar os linfonodos localizados ao longo dos vasos mamÃrios internos em esternos isolados de cadÃveres, discriminar o nÃmero de linfonodos nos 2Â, 3Â e 4Â espaÃos intercostais e padronizar a abordagem cirÃrgica desses linfonodos, registrando os pontos de reparo a serem utilizados nas tÃcnicas atuais de pesquisa do linfonodo sentinela da mama. Estudaram-se dez esternos isolados de cadÃveres humanos. Os esternos foram obtidos atravÃs de secÃÃo bilateral do gradil costal ao nÃvel das linhas hemiclaviculares. A individualizaÃÃo e a integridade anatÃmica da pleura parietal e dos vasos mamÃrios internos foram requisitos imprescindÃveis durante a dissecÃÃo das peÃas. O estudo foi experimental descritivo. Um total de 56 linfonodos foram removidos dos 2Â, 3Â e 4Â espaÃos intercostais, sendo 30 Ã direita e 26 Ã esquerda. O 2Â espaÃo intercostal foi o que apresentou maior nÃmero de linfonodos nos lados direito e esquerdo. Os linfonodos da cadeia mamÃria interna foram abordados por uma tÃcnica segura, prÃtica e diferente da praticada pelos italianos, pioneiros na dissecÃÃo de linfonodos da cadeia mamÃria interna. Ocorre a divulsÃo do mÃsculo peitoral maior da sua inserÃÃo do manÃbrio e corpo do esterno, expondo as cartilagens esternocostais. Desinsere-se um segmento do mÃsculo intercostal de aproximadamente cinco cm a partir do bordo esternal de sua inserÃÃo no bordo superior da costela inferior do espaÃo intercostal, formando uma janela em âUâ, expondo assim os vasos mamÃrios internos e os linfonodos a eles relacionados. A abordagem cirÃrgica usada neste estudo demonstrou ser uma tÃcnica adequada para a exÃrese de linfonodos esternais. Conclui-se assim que o modelo utilizado se presta ao treinamento para o procedimento de biÃpsia de linfonodo sentinela, de grande valor na abordagem das pacientes portadoras de cÃncer de mama

Submitted by isabela.moljf@hotmail.com (isabela.moljf@hotmail.com) on 2017-08-16T11:58:32Z No. of bitstreams: 1 gabrielacoelimenezesevangelista.pdf: 2720259 bytes, checksum: e0fbd85772c3ba4fa8fdd3c1ee5c09b0 (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2017-08-16T11:59:14Z (GMT) No. of bitstreams: 1 gabrielacoelimenezesevangelista.pdf: 2720259 bytes, checksum: e0fbd85772c3ba4fa8fdd3c1ee5c09b0 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-08-16T11:59:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 gabrielacoelimenezesevangelista.pdf: 2720259 bytes, checksum: e0fbd85772c3ba4fa8fdd3c1ee5c09b0 (MD5) Previous issue date: 2018-02-15 / CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / FAPEMIG - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais / Atualmente a obesidade é um problema de saúde pública, que afetar todas as idades, classes sociais e regiões do planeta. Segundo dados da OMS de 2016, 13% da população adulta é considerada obesa. No Brasil 12,4% dos homens e 16,9% das mulheres acima de 18 anos foram considerados obesos, em 2011, pelo Ministério da Saúde. O câncer de mama é o único câncer diagnosticado em todas as regiões do planeta e, segundo a Sociedade Americana de Câncer, em 2012, o câncer de mama foi responsável por 25% dos novos casos e matou mais de meio milhão de mulheres. As brasileiras também sofrem com o tumor de mama que é o mais diagnosticado no Brasil, segundo dados de 2016 do INCA. A obesidade duplica a chance de desenvolver câncer de mama e isso está relacionado à inflamação crônica de baixo grau instaurada pelo acúmulo de gordura que recruta células inflamatórias secretoras de citocinas, quimiocinas e fatores de crescimento, aumentando a inflamação. Nesse contexto as células mamárias malignas se apropriam dessa inflamação e seus mediadores para promover sua sobrevivência, proliferação, disseminação e metástase. Para identificarmos o papel da obesidade no tumor mamário, utilizamos o modelo experimental de câncer de mama murino 4T1 em animais Balb/c fêmeas alimentadas por 16 semanas com dieta padrão ou dieta hiperlipídica (60% das quilocalorias são lipídeos). Cada animal foi pesado semanalmente e o consumo médio diario de ração foi calculado. Ao final das 16 semanas mais os 21 dias de injeção do tumor, os animais foram eutanasiados para a quantificação do peso das gorduras perigonadais e retroperitoniais e remoção dos linfonodos inguinais drenantes do tumor para realização da citometria de fluxo. Os resultados indicaram que os animais alimentados com HFD, ganharam mais peso mesmo consumindo menos ração em relação, aos animais alimentados com dieta padrão. Esse ganho de peso refletiu em uma maior adiposidade nos obesos, devido ao maior peso das gorduras perigonadais e retroperitoniais. Além disso, os animais obesos apresentaram um maior Índide de Lee em relação aos controles. Nosso trabalho indicou uma queda generalizada da resposta imune contra tumor, pois observamos uma diminuição no número de células totais dos linfonodos drenantes do tumor, refletindo num menor número de células dendríticas e macrófagos, que apresentaram menor ativação com baixas expressões dos co-estimuladores CD80 e CD86; e numa redução da resposta adaptativa, tanto no número de células efetoras como linfócitos auxiliares e citotóxicos quanto no número de células reguladoras como os linfócitos Breg e Treg. Além disso, também observamos um desbalanço entre a citocina inflamatória IFN-γ e a citocina anti-inflamatória IL-10, produzidas por linfócitos CD4+ e CD8+. Em conjunto, nossos dados nos permitem concluir que a obesidade afeta diretamente o sistema imune através da diminuição da resposta celular contra o tumor como um todo, essa regulação pode ser devido a modulação da hematopoiese e indução de células MDSC. / Nowadays the obesity is a public health issue capable to affect all ages, social classes, and regions of the globe. According to data from Word Health Organization in 2014, 13% of the adult population is considered obese. In Brazil the number are also startling: in the adult population 12.4% of the men and 16.9% of women already was considered obese in 2011 by Ministry of Healthy. Breast cancer is the only one diagnosed in all regions of the planet and, according to American Society of Cancer, in 2012 this type of cancer was responsible for 25% of the new cases and killed more than half millions of women. The Brazilian women undergo by breast cancer, which is the most commonly diagnosed among Brazilian women, according data from Nacional Institute of Cancer in 2015. Is certain that the obesity duplicates the chances to develop breast cancer and it is correlated to the low grade chronic inflammation established by the fat accumulation which recruit inflammatory cells that secrete cytokine, chemokines, and growth factors, increasing the inflammation. In this context the malignant mammalian cells get hold of this inflammation and its mediators to promote its own survival, proliferation, dissemination, and metastasis. To identify the role of the obesity in malignant breast tumor, we utilized in this project the experimental murine model of breast cancer 4T1 in animals Balb/c females feed for 16 weeks with the pattern diet or high-fat diet which 60% of kilocalories coming from lipids. Each animal was weekly weighed and the individual average intake was calculated. At the end of the 16 weeks more 21 tumor days after injection, the animals were euthanized for removal of the perigonadal and retroperitoneal fat-pad and also for the removal of the draining inguinal lymph nodes of the tumor to flow cytometry analysis. The results indicate that the animals feed with HFD, had weight gain even eating less than the animals feed by control diet. This gain reflected in a major adiposity in obese animals due to higher weight of the perigonadal and retroperitoneal fat-pad. Moreover, the obese animals had a higher Lee Index on comparison of the controls animals. Our work indicated a general decrease in the immune response against the tumor because was observed a decay of the number of the total cells of the tumor lymph nodes drainage, which reflected a low number of macrophages and dendritic cells, which also presents a lower activation with low expression of co-stimulators CD80 and CD86; and a decrease in the number of cells from adaptive response effector and in regulator cells like lymphocytes Breg and Treg. In addition, was also observed an unbalancing between the inflammatory cytokine IFNv and the anti-inflammatory cytokine IL-10, produced by lymphocytes CD4+ and CD8+. Together, this data allowed us to conclude that the obesity directly affect the immune system through the reduction of the cellular response against the tumor, this setting can be due to modulation of hematopoiesis and induction of MDSC.

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Prostate cancer (PCa) is the most common non-skin malignancy of men in developed countries. In spite of treatment with curative intent up to 30-40% of patients have disease recurrence after treatment, resulting from any combination of lymphatic, hematogenous, or contiguous local spread. The concept of early detection of PCa offer benefits in terms of reduced mortality, but at the cost of over-diagnosis and overtreatment of indolent disease. This is largely due to the random nature of conventional biopsies, with a risk of missing significant cancer and randomly hitting indolent disease. In the present thesis, diagnostic performance of MRI DWI and 11C Acetate PET/CT lymph node staging of intermediate and high risk PCa, was investigated, and additionally, predictive factors of regional lymph node metastases were evaluated. Further, additional value of targeted biopsies to conventional biopsies, for detection of clinically significant PCa, was investigated. In paper one and two, 53 and 40 patients with predominantly high risk PCa underwent 11C Acetate PET/CT and 3T MRI DWI, respectively, for lymph node staging, before extended pelvic lymph node dissection (ePLND). The sensitivity and specificity for PET/CT was 38% and 96% respectively. The sensitivity and specificity for MRI DWI was 55% and 90% respectively. In paper three, 53 patients with newly diagnosed PCa were included. All patients underwent multi-parametric MRI, followed by two cognitive targeted biopsies. Five more clinically significant cancers were detected by adding targeted biopsies to conventional biopsies. In paper four the value of quantitative and qualitative MRI DWI and 11C Acetate PET/CT parameters, alone and in combination, in predicting regional lymph node metastases were examined. ADCmean in lymph nodes and T-stage on MRI were independent predictors of lymph node metastases in multiple logistic regression analysis. In conclusion the specificity of diffusion weighted MRI and 11C Acetate PET/CT for lymph node staging was high, although the sensitivity was low. Predictive factors of regional lymph node metastases could be retrieved from diffusion weighted MRI and 11C Acetate PET/CT. By combining targeted biopsies with conventional biopsies the detection rate of clinically significant PCa could be increased.

Tanto a invasão local como o comprometimento de linfonodos cervicais tem grande impacto na sobrevida de pacientes portadores de carcinomas epidermóides de cabeça e pescoço. Em nosso trabalho nós primeiramente determinamos a expressão dos receptores de quimiocinas de CXCR1 a CXCR5, além de CCR7 e CX3CR1 pelo método do ensaio de proteção à ribonuclease (RPA) em 98 fragmentos de tumores primários, 91 fragmentos de mucosas adjacentes e 26 linfonodos comprometidos e correlacionamos estes dados com parâmetros anátomo-patológicos e sobrevida. CXCL12 ligante do receptor CXCR4 e CCL19 e CCL21 ambos ligantes de CCR7 foram determinados em 38 fragmentos de tumores, 33 mucosas adjacentes e 25 linfonodos comprometidos pela técnica de real-time PCR. Os tumores primários apresentam expressão aumentada do mRNA de CXCR1 (P=0.013), CXCR3 (P=0.008) e CXCR4 (P=0.025). Não observamos correlações entre status linfonodal ou tamanho de tumor. Os linfonodos comprometidos expressam mais mRNA dos receptores de quimiocinas CXCR4, CXCR5, CCR7 e CX3CR1 (todos com P<0.0001) em comparação aos tumores comprometidos. Observamos um aumento de sobrevida (P=0.048) e uma tendência a aumento de sobrevida livre de doença (P=0.074) nos pacientes negativos para a expressão de CX3CR1 (n=17) em comparação aos pacientes positivos (n=21) somente no subgrupo de pacientes portadores de carcinomas da cavidade oral. O mesmo foi observado com os pacientes CCR7 negativos também no subgrupo de pacientes portadores de carcinomas da cavidade oral, tanto em sobrevida global (P=0.024) como para sobrevida livre de doença (P=0.049). Em relação aos ligantes de quimiocinas observamos um aumento do mRNA de CCL21 em linfonodos comprometidos em relação aos tumores primários (P=0.059). Concluímos que a interação quimiotática entre CCR7 e de seu ligante CCL21, poderia ser um mecanismo de atração de células tumorais para os linfonodos em tumores de cavidade oral, além disso a negatividade da expressão do mRNA de CCR7 e CX3CR1 são candidatos marcadores de uma melhor sobrevida em carcinomas epidermóides de cavidade oral. / Local invasion and lymph nodal spread impact in the outcome of Head and Neck squamous cell carcinoma (HNSCC) patients (pts). We determined CXCR1-5, CCR7 and CX3CR1 mRNA expression by means of RNAse protection assay in 98 HNSCC primary tumors and 91 adjacent mucosa and 26 metastatic lymph nodes, correlating this data with outcome. CXCL12 and CCL19/CCL21, ligands for CXCR4 and CCR7, were determined in 38 tumor fragments, 33 adjacent mucosas and 25 de metastatic lymph nodes, by means of Quantitative Real-Time PCR. Tumors presented higher CXCR1 (P=0.013), CXCR3 (P=0.008) and CXCR4 mRNA (P=0.025) expression as compared to mucosa. No correlations are observed neither lymph nodal status nor tumor size impacted on chemokine receptor expression. Metastatic lymph nodes expressed more CXCR4, CXCR5, CCR7 and CX3CR1 (P<0.0001) as compared to matched tumors. We found a longer overall survival (OS) (P=0.048) and a trend toward longer disease free survival (DFS) (P=0.074) in CX3CR1 negative (n=17) as compared to positive pts (n=21) only in oral subgroup. The same occurred for CCR7 negative oral SCC, in terms of OS (P=0.024) and DFS (P=0.049). We conclude that, of the chemokine receptors here studied, CCR7 and CX3CR1 mRNA expression seems to better reflect outcome in oral subsite only. In addition, CCL21, a CCR7 ligand mRNAs is more expressed in metastatic lymph nodes than tumors (P=0.059). Further studies are warranted to confirm these results.

O presente estudo teve como objetivo caracterizar as alterações histológicas de pele, linfonodo e baço, determinar a densidade de parasitas e de células iNOS+, assim como correlacionar o parasitismo com a expressão de iNOS em pele, baço e linfonodo de cães naturalmente acometidos por leishmaniose visceral. Foram selecionados aleatoriamente, 28 cães infectados com Leishmania (Leishmania) infantum chagasi, oriundos do Centro de Controle de Zoonoses do município de Araçatuba, os quais foram distribuídos em dois grupos, de acordo com sinais clínicos e exames laboratoriais, em sintomáticos (n=18) e assintomáticos (n=10). Um grupo de 6 animais oriundos de área não endêmica para leishmaniose visceral foram empregados como controle negativo. As alterações histológicas de pele foram similares em ambos os grupos clínicos, sintomáticos e assintomáticos, e se caracterizaram por um infiltrado inflamatório na derme, formado por células mononucleares (macrófagos, linfócitos e plasmócitos), que variou de discreto a intenso. No linfonodo, as alterações histológicas foram também semelhantes entre os grupos clínicos, e se caracterizaram por hiperplasia e hipertrofia da área cortical e para-cortical, que variou de discreta a intensa; e por hiperplasia e hipertrofia de macrófagos na região medular, caracterizando em muitos casos uma linfadenite granulomatosa. No baço, alterações histológicas da polpa branca e polpa vermelha foram similares entre os grupos sintomáticos e assintomáticos, com hipoplasia e atrofia de polpa branca e, hipertorfia e hiperplasia de macrófagos na polpa vermelha, variando de moderado a intenso. Quanto ao número de formas amastigotas/mm2 tanto na pele, como no linfonodo e baço, não houve diferença estatisticamente significativa entre os grupos clínicos (p=0,2104), (p=0,2401) e (p=0,8869), respectivamente. Em relação à densidade de células iNOS+(células/mm2), observamos que a infecção por Leishmania levou ao aumento do número destas células na pele, no baço e no linfonodo em relação ao controle (p < 0,05). Porém, quando analisamos a densidade de células iNOS+ entre os grupos clínicos, sintomáticos e assintomáticos, não observamos diferença significativa tanto na pele (p=0,3026), como em linfonodo (p=0,3257) e baço (p=0,5940). Observou-se correlação fraca e não significativa entre a densidade de parasitas e a densidade de células expressando iNOS+ no tegumento; porém no linfonodo, verificou-se correlação negativa moderada e significante (p=0,0034) entre o parasitismo e a expressão de células iNOS+, assim como no baço (p=0,0329), sugerindo que o óxido nítrico deve exercer um papel importante no controle do parasitismo em vísceras / The present study aimed the characterization the histological features in skin, lymph nodes and spleen; determination of the parasitism density and the cells expressing iNOS; and correlation between the parasitism and the expression of iNOS in the skin, lymph nodes and spleen of dogs naturally committed by visceral leishmaniasis. Twenty-eight naturally infected dogs by Leishmania (Leishmania) infantum chagasi were selected randomly from the Zoonosis Control Center of Araçatuba municipality and distributed in two groups according to the clinical signs and laboratory exams, symptomatic (n=18) and asymptomatic (n=10) animals. A group of six animals from non-endemic region for visceral leishmaniais was used as negative control. Histological changes in skin were similar in both clinical groups, symptomatic and asymptomatic, and were characterized by a focal and diffuse inflammatory infiltrate in the dermis of mononuclear cells (macrophages, lymphocytes, plasmocytes), that varied from discrete to intense. In lymph nodes, the histological changes were also similar in both clinical groups, and were characterized by hyperplasia and hypertrophy of the cortical and para-cortical area, that varied from discrete to intense; and hyperplasia and hypertrophy of macrophages in the medullar region characterizing in many cases a granulomatous lymphadenitis. In spleen, the histological alterations in the white pulp and red pulp were similar in both clinical groups, with hypoplasia and hypotrophy of the white pulp and hypertrophy and hyperplasia of macrophages in red pulp varying from moderate to intense. Regarding the results of parasitism density (amastigotes/mm2), we did not observe any significant difference between the clinical groups in skin (p=0.2104), lymph nodes (p=0.2401) and spleen (p=0.8869). Concerning to the density of iNOS+ cells, we observed that the infection by Leishmania caused an increase in the number of these cells in the skin, in spleen and lymph nodes in relation to the control group (p < 0.05). However, when we analyzed the density (cells /mm2) of iNOS+ expressing cells in clinical groups, symptomatic and asymptomatic, we did not observe any significant difference in the skin (p=0.3026), in lymph nodes (p=0.3257) and spleen (p=0.5940). A weak and non-significant correlation was observed between the parasite density and the density of iNOS+ cells in the skin. However, in the lymph node a significant and moderate correlation (p=0.0034) was observed between the parasitism and iNOS+ cells, as well as in the spleen (p=0.0329), suggesting that nitric oxide plays an important role in the control of the parasitism in the viscera

INTRODUÇÃO: O status axilar é o fator prognóstico mais importante em câncer de mama. A biópsia de linfonodo sentinela (BLS) tornou-se o procedimento padrão no estadiamento axilar em pacientes com axila clinicamente negativa. O procedimento recomendado para pacientes com metástase em linfonodo sentinela (LS) inclui a linfadenectomia axilar completa (LAC). Porém questiona-se a necessidade da LAC em todos os pacientes com metástase em LS (MLS), particularmente naqueles com baixo risco de metástase em linfonodos axilares adicionais (Não-LS). Estimar de forma precisa a probabilidade de MLS e metástase em Não-LS (MNão-LS) pode auxiliar em muito o processo de decisão terapêutica. Os dados publicados referentes aos fatores preditivos de MLS e MNão-LS são de certa forma escassos. A forma de como esses dados são apresentados – geralmente expressos como razão de chance (odds-ratio) – dificulta o cálculo de probabilidade de MLS ou MNão-LS para um paciente em específico. Nesta tese, dois modelos de previsão computadorizados de fácil utilização foram desenvolvidos, utilizando-se um grande número de casos, para facilitar o cálculo de probabilidade de MLS e MNão-LS. MÉTODOS: Todos os dados clínico-patológicos foram coletados do banco de dados prospectivo de LS do Memorial Sloan-Kettering Cancer Center (MSKCC), Nova York, EUA. Os projetos de desenvolvimento de ambos os modelos foram aprovados pelo Institutional Review Board do MSKCC. Dois modelos foram desenvolvidos: Modelo de MLS (Modelo LS) e Modelo de metástase em Não-LS (Modelo Não-LS). No Modelo LS, os achados clínico-patológicos de 4.115 procedimentos subseqüentes de BLS (amostra de modelagem) foram submetidos à análise de regressão logística multivariada para se criar um modelo de previsão de MLS. Um software baseado nesse modelo foi desenvolvido utilizando-se as variáveis: idade, tamanho do tumor, tipo histológico, invasão vásculo-linfática (IVL), localização do tumor e multifocalidade. Esse modelo foi validado em uma amostra distinta (amostra de validação) com 1.792 BLSs subseqüentes. No Modelo Não-LS, os achados patológicos do tumor primário e das MLS, obtidas de 702 procedimentos de BLS (amostra de modelagem) em pacientes submetidos à LAC, foram submetidos à análise de regressão logística multivariada para se criar um modelo de previsão de MNão-LS. Um nomograma e um software baseados nesse modelo foram desenvolvidos utilizando-se as variáveis: tamanho do tumor, tipo histológico, grau nuclear, IVL, multifocalidade, receptor de estrógeno, método de detecção da MLS, número de LS positivos, número de LS negativos. Esse modelo foi validado em uma amostra distinta (amostra de validação) com 373 casos subseqüentes. RESULTADOS: O software do Modelo LS na amostra de modelagem mostrou-se adequado, com a área sob a curva de características operacionais (ROC) de 0,76. Quando aplicado na amostra de validação, o Modelo LS também previu de forma acurada as probabilidades de MLS (ROC = 0,76). O software e o nomograma do Modelo Não-LS na amostra de modelagem apresentaram uma área ob a curva ROC de 0,76 e, na amostra de validação, 0,77. CONCLUSÕES: Dois softwares de fácil utilização foram desenvolvidos, utilizando-se informações comumente disponíveis pelo cirurgião para calcular para o paciente a probabilidade de MLS e MNão-LS de forma precisa, fácil e individualizada. O software do Modelo LS não deve ser utilizado, porém, para se evitar a BLS. Para download dos softawares clique em: <A HREF="http://www.mastologia.com" TARGET="_BLANK">www.mastologia.com . / INTRODUCTION: Axillary lymph node status is the most significant prognostic factor in breast cancer. Sentinel lymph node biopsy (SLNB) has become the standard of care as the axillary staging procedure in clinically node negative patients. The standard procedure for patients with sentinel lymph node (SLN) metastasis includes complete axillary lymph node dissection (ALND). However, many experts question the need for complete ALND in every patient with detectable SLN metastases, particularly those perceived to have a low risk of additional lymph node (Non-SLN) metastasis. Accurate estimates of the likelihood of SLN metastases and additional disease in the axilla could greatly assist in decision-making treatment. The published data on predictive factors for SLN and Non-SLN metastases is somewhat scarce. It is also difficult to apply these data – usually expressed as odds ratio – to calculate the probability of SLN or Non-SLN metastases for a specific patient. In this thesis, two user-friendly computerized prediction models based on large datasets were developed, to assist the prediction of the presence of SLN and Non-SLN metastases. METHODS: All clinical and pathological data were collected from the prospective SLN database of Memorial Sloan-Kettering Cancer Center (MSKCC), New York, USA. The development projects of both models were approved by the Institutional Review Board of MSKCC. Two models were developed: Model for predicting SLN metastases (SLN Model) and Model for predicting Non-SLN metastases (Non-SLN Model). In the SLN Model, clinical and pathological features of 4,115 sequential SLNB procedures (modeling sample) were assessed with multivariable logistic regression to predict the presence SLN metastases. A software based on the logistic regression model was created using age, tumor size, tumor type, lymphovascular invasion, tumor location and multifocality. This model was subsequently applied to another set of 1,792 sequential SLNBs (validation sample). In the Non-SLN Model, pathological features of the primary tumor and SLN metastases, identified in 702 SLNBs (modeling sample) on patients who underwent complete ALND, were assessed with multivariable logistic regression to predict the presence of additional disease in the Non-SLNs of these patients. A nomogram and a software were created using tumor size, tumor type and nuclear grade, lymphovascular invasion, multifocality, and estrogen-receptor status of the primary tumor; method of detection of SLN metastases; number of positive SLNs; and number of negative SLNs. This model was subsequently applied to another set of sequential 373 procedures (validation sample). RESULTS: The software of the SLN Model for the modeling sample was accurate and discriminating, with an area under the receiver operating characteristic (ROC) curve of 0.76. When applied to the validation sample, the SLN-Model accurately predicted likelihood of SLN metastases (ROC = 0.76). The software and nomogram of the Non-SLN Model was also accurately predicted likelihood of Non-SLN metastases, with an area under ROC curve of 0.76 for the modeling sample, and 0.77 for the validation sample. CONCLUSION: Two user-friendly softwares were developed, using information commonly available to the surgeon to easily and accurately calculate the likelihood of having SLN metastases or additional, Non-SLN metastases for individual patients. However, the software of the SLN Model should not be used to avoid SLNB. Click on <A HREF="http://www.mastologia.com" TARGET="_BLANK">www.mastologia.com to download these softwares.

O presente estudo teve como objetivo caracterizar as alterações histológicas de pele, linfonodo e baço, determinar a densidade de parasitas e de células iNOS+, assim como correlacionar o parasitismo com a expressão de iNOS em pele, baço e linfonodo de cães naturalmente acometidos por leishmaniose visceral. Foram selecionados aleatoriamente, 28 cães infectados com Leishmania (Leishmania) infantum chagasi, oriundos do Centro de Controle de Zoonoses do município de Araçatuba, os quais foram distribuídos em dois grupos, de acordo com sinais clínicos e exames laboratoriais, em sintomáticos (n=18) e assintomáticos (n=10). Um grupo de 6 animais oriundos de área não endêmica para leishmaniose visceral foram empregados como controle negativo. As alterações histológicas de pele foram similares em ambos os grupos clínicos, sintomáticos e assintomáticos, e se caracterizaram por um infiltrado inflamatório na derme, formado por células mononucleares (macrófagos, linfócitos e plasmócitos), que variou de discreto a intenso. No linfonodo, as alterações histológicas foram também semelhantes entre os grupos clínicos, e se caracterizaram por hiperplasia e hipertrofia da área cortical e para-cortical, que variou de discreta a intensa; e por hiperplasia e hipertrofia de macrófagos na região medular, caracterizando em muitos casos uma linfadenite granulomatosa. No baço, alterações histológicas da polpa branca e polpa vermelha foram similares entre os grupos sintomáticos e assintomáticos, com hipoplasia e atrofia de polpa branca e, hipertorfia e hiperplasia de macrófagos na polpa vermelha, variando de moderado a intenso. Quanto ao número de formas amastigotas/mm2 tanto na pele, como no linfonodo e baço, não houve diferença estatisticamente significativa entre os grupos clínicos (p=0,2104), (p=0,2401) e (p=0,8869), respectivamente. Em relação à densidade de células iNOS+(células/mm2), observamos que a infecção por Leishmania levou ao aumento do número destas células na pele, no baço e no linfonodo em relação ao controle (p < 0,05). Porém, quando analisamos a densidade de células iNOS+ entre os grupos clínicos, sintomáticos e assintomáticos, não observamos diferença significativa tanto na pele (p=0,3026), como em linfonodo (p=0,3257) e baço (p=0,5940). Observou-se correlação fraca e não significativa entre a densidade de parasitas e a densidade de células expressando iNOS+ no tegumento; porém no linfonodo, verificou-se correlação negativa moderada e significante (p=0,0034) entre o parasitismo e a expressão de células iNOS+, assim como no baço (p=0,0329), sugerindo que o óxido nítrico deve exercer um papel importante no controle do parasitismo em vísceras / The present study aimed the characterization the histological features in skin, lymph nodes and spleen; determination of the parasitism density and the cells expressing iNOS; and correlation between the parasitism and the expression of iNOS in the skin, lymph nodes and spleen of dogs naturally committed by visceral leishmaniasis. Twenty-eight naturally infected dogs by Leishmania (Leishmania) infantum chagasi were selected randomly from the Zoonosis Control Center of Araçatuba municipality and distributed in two groups according to the clinical signs and laboratory exams, symptomatic (n=18) and asymptomatic (n=10) animals. A group of six animals from non-endemic region for visceral leishmaniais was used as negative control. Histological changes in skin were similar in both clinical groups, symptomatic and asymptomatic, and were characterized by a focal and diffuse inflammatory infiltrate in the dermis of mononuclear cells (macrophages, lymphocytes, plasmocytes), that varied from discrete to intense. In lymph nodes, the histological changes were also similar in both clinical groups, and were characterized by hyperplasia and hypertrophy of the cortical and para-cortical area, that varied from discrete to intense; and hyperplasia and hypertrophy of macrophages in the medullar region characterizing in many cases a granulomatous lymphadenitis. In spleen, the histological alterations in the white pulp and red pulp were similar in both clinical groups, with hypoplasia and hypotrophy of the white pulp and hypertrophy and hyperplasia of macrophages in red pulp varying from moderate to intense. Regarding the results of parasitism density (amastigotes/mm2), we did not observe any significant difference between the clinical groups in skin (p=0.2104), lymph nodes (p=0.2401) and spleen (p=0.8869). Concerning to the density of iNOS+ cells, we observed that the infection by Leishmania caused an increase in the number of these cells in the skin, in spleen and lymph nodes in relation to the control group (p < 0.05). However, when we analyzed the density (cells /mm2) of iNOS+ expressing cells in clinical groups, symptomatic and asymptomatic, we did not observe any significant difference in the skin (p=0.3026), in lymph nodes (p=0.3257) and spleen (p=0.5940). A weak and non-significant correlation was observed between the parasite density and the density of iNOS+ cells in the skin. However, in the lymph node a significant and moderate correlation (p=0.0034) was observed between the parasitism and iNOS+ cells, as well as in the spleen (p=0.0329), suggesting that nitric oxide plays an important role in the control of the parasitism in the viscera