Made available in DSpace on 2014-06-11T19:31:08Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-05-14Bitstream added on 2014-06-13T19:01:28Z : No. of bitstreams: 1 godoy_av_dr_jabo.pdf: 494650 bytes, checksum: d27d9898dce60f32a0eece2e8cdaf032 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O presente estudo teve como objetivos avaliar seqüencial e temporalmente o quadro leucocitário de dez cães portadores de linfoma em remissão, submetidos à alta dose de ciclofosfamida, durante o uso do estimulador de colônia de granulócitos (GCSF, filgrastine) seguido ou não do transplante autólogo de medula óssea (TMO), bem como quantificar células CD34+ no sangue periférico dos referidos cães. Para tal avaliação foram utilizados três grupos experimentais, sendo o grupo 1 (G1) formado por cinco animais em remissão de linfoma que passaram por alta dose de ciclofosfamida e TMO seguido do uso de G-CSF; o grupo 2 (G2) formado por cinco animais em remissão de linfoma que sofreram alta dose de ciclofosfamida seguida do uso de G-CSF e o grupo 3 (G3) formado por dez animais saudáveis que receberam apenas o G-CSF. O transplante consistiu na colheita de medula óssea, preparo e congelamento da bolsa que continha células medulares em suspensão, condicionamento do paciente com 500mg/m2 de ciclofosfamida, infusão das células hematopoéticas e aplicação do G-CSF. Para avaliar a recuperação hematopoética pós-transplante foi realizado leucograma e análise citométrica do sangue nos dias 7, 8, 9, 10 e 11 após condicionamento. O nadir médio dos neutrófilos segmentados (NS) no grupo com transplante de medula óssea (G1) foi 425 NS/mL, e no grupo sem TMO (G2) foi 637,4 NS/μL e ocorreu sete dias após alta-dose de quimioterápico em ambos os grupos. A duração média da neutropenia foi de três dias. Nenhum animal apresentou febre ou sepse após a alta dose de ciclofosfamida. A dose de 5μg/kg/dia durante quatro dias de filgrastine foi insuficiente na mobilização adequada de células CD34+ nos três grupos estudados, sendo necessários novos estudos para este propósito. Desta maneira, pode-se comprovar o fato de que o uso do G-CSF leva a reduções significativas na incidência... / The aims of this research were to provide an analysis of several counts of leucocytes values in dogs with lymphoma in remission phase, undergone to high-dose chemotherapy with cyclophosphamide, during treatment with granulocyte colonystimulating factor (G-CSF, filgrastine), followed or not by autologous bone marrow transplantation (BMT), as well to quantify CD34+ cells of peripheral blood from that dogs. For this purpose, three experimental groups were considered. Five dogs in clinical remission undergone to high-dose chemotherapy with cyclophosphamide and BMT, followed by G-CSF use were included in group 1 (G1), while group 2 (G2) was consisted by five dogs undergone to high-dose chemotherapy with cyclophosphamide, followed by G-CSF. Group 3 (G3) was composed of ten healthy dogs undergone to GCSF only. Transplantation consisted of bone marrow harvest, managing and freezing bags containing lifted marrow cells, cyclophosphamide conditioning (500mg/m2), hematopoietic cells infusion and treatment with G-CSF. After transplantation, hematopoietic recovery was evaluated by means of leukograms and flow cytofluorimetrical analysis on days 7, 8, 9, 10 and 11 after conditioning. Mean nadir neutrophil (NS) counts in group undergone transplantation (G1) was 425 NS/mL versus 637,4 NS/μL in group without BMT (G2). Nadir was observed on the seventh day after high-dose chemotherapy in both groups and neutropenia mean time was three days. Fever or sepsis was not observed in any dog after high-dose cyclophosphamide. Four days of filgrastine treatment in dose of 5μg/Kg, daily, was not enough to mobilize CD34+ cells appropriately in three groups analyzed, requiring new studies for this purpose. Considering these results, it is possible to conclude that G-CSF significantly reduces the incidence, severity and duration of neutropenia

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:31:10Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-02-01Bitstream added on 2014-06-13T18:41:54Z : No. of bitstreams: 1 munhoz_td_dr_jabo.pdf: 1806915 bytes, checksum: 10b016880b9017b3102afefa3e695dde (MD5) / O linfoma é a neoplasia hematopoiética mais comum nos cães e uma das mais frequentes, dentre todas as neoplasias, nesta espécie. Apresenta-se em diversas localizações anatômicas e pode apresentar classificações histológicas e imunofenotipos distintos. Dependendo da resposta imune do paciente frente à instalação de um tumor, algumas informações sobre o prognóstico podem ser obtidas. Atualmente, as células T reguladoras (Tregs) vêm sendo estudadas em algumas neoplasias caninas, por seu comprovado potencial imunossupressor, principalmente por inibir a resposta antitumoral. Neste contexto, o presente trabalho teve como objetivos quantificar, por citometria de fluxo, as células Tregs em sangue periférico de cães com linfoma multicêntrico de imunofenótipos B e T, respectivamente 14 e 8 cães, no momento do diagnóstico e após o primeiro ciclo de quimioterapia antineoplásica com o protocolo Madison-Wisconsin (MW) de 19 semanas adaptado, e comparar com cães saudáveis (n=10), buscando quantificá-las em cães com linfoma de diferentes imunofenótipos antes e após a 5ª semana do protocolo MW. Os resultados mostraram que cães com linfoma apresentaram uma porcentagem significativamente maior de Tregs (18,84±2,56) quando comparada aos cães sem neoplasia (4,70±0,50) (p<0,01). Além disso, após a 5ª semana de tratamento houve uma significante redução da população de Tregs (7,54±1,08), atingindo valores semelhantes a dos cães controle (4,70±0,50) (p>0,05). Não houve diferença nas Tregs em relação aos imunofenotipos B (17,45±2,77) e T (21,27±5,27) (p>0,05). Concluiu-se que o linfoma em cães leva a um aumento de células Tregs e que o tratamento com o protocolo quimioterápico MW reduz significativamente as células Tregs em sangue periférico, atingindo valores próximos aos dos cães saudáveis / Lymphoma is the most common hematopoietic malignancy in dogs and one of the most frequent among all neoplastic diseases in this species. It can occur in several anatomical locations with distinct histological and immunophenotypes. Depending on the host immune response towards the tumor, prognosis information could be collected. Because its well established immunosuppressant, antitumor activity, the function of regulatory T cells (Tregs) in canine neoplasias has been investigated. In this study, we sought to quantify, using flow cytometry, the Tregs subpopulation in peripheral blood of healthy dogs (10) and in those diagnosed with type-B (14) and type-T (8) multicentric lymphoma before (at diagnosis) and after the first cycle (5-week) of 19-week Madison- Wisconsin (MW) protocol of chemotherapy. Our results indicated that dogs with lymphoma showed higher percentage of Tregs (18,84±2,56) when compared to healthy dogs (4,70±0,50) (p<0,01). In addition, 5-week chemotherapy treatment reduced the Tregs subpopulation (7,54±1,08) to levels similar to control (4,70±0,50) (p>0,05). There was no difference in Tregs percentage between B-type (17,45±2,77) and T-type (21,27±5,27) lymphoma (p>0,05). With this, we conclude that canine lymphoma increases Tregs in the peripheral blood and the MW protocol of chemotherapy reduces this cell subpopulation to control values

Um dos principais desafios no tratamento quimioterápico em seres humanos e animais é a resistência que as células neoplásicas apresentam, sendo esse mecanismo responsável por falhas no tratamento e recidivas da doença. A resistência pode ser intrínseca ou adquirida e ocorre em função da expressão de transportadores de membrana ABC, como a glicoproteína P (ABCB1/MDR), proteínas de resistência a múltiplas drogas (ABCC1/MRP) e proteína de resistência do câncer de mama (ABCG2/BCRP). O linfoma é a neoplasia hematopoiética mais comum em cães, altamente responsiva à quimioterapia, mas que recidiva durante o tratamento antineoplásico, sendo a resistência das células neoplásicas aos quimioterápicos um fator responsável pela alta taxa de recidiva e óbito dos animais. Neste estudo avaliou-se a expressão de genes relacionados à resistência a múltiplas drogas em cães com linfoma, no diagnóstico e na recidiva da doença, em três diferentes protocolos quimioterápicos utilizados na rotina clínica. A expressão dos genes ABCB1, ABCC1, ACBG2 foi determinada por RT-PCR (PCR em tempo real) em 25 animais naturalmente acometidos pela doença, divididos aleatoriamente em 3 grupos tratados com os protocolos quimioterápicos COP, VCM e Short-Madison, além de um &quot;pool&quot; controle constituído por linfonodos normais de oito animais. A expressão dos genes foi detectada em todas as amostras, tanto de linfonodos normais quanto de animais com linfoma. No diagnóstico da doença, a expressão do gene ABCC1 foi relacionada negativamente com idade (p=0,008) e positivamente com duração da remissão (p=0,027) e sobrevida (p=0,007), entretanto para os genes ABCB1 e ABCG2 não houve diferença estatística significante. Na recidiva, a expressão dos genes não sofreu variação estatística significante em função do tipo e duração da remissão e sobrevida. Não houve variação na expressão dos genes ABCB1, ACBC1 e ABCG2 no momento da recidiva quando comparado ao protocolo quimioterápico utilizado. / One of the main challenges of the chemotherapy treatment in human and animals is the resistance of the neoplasic cells, being this mechanism responsible for failures in the treatment and relapse of the disease. The resistance could be intrinsic or acquired and it occurs due to the expression of ABC membrane transporters, such as p-glycoprotein (ABCB1/MDR), resistance protein to multiple drugs (ABCC1/MRP) and resistance protein of breast cancer (ABCG2/BCRP). Lymphoma is the most common hematopoietic cancer disease in dogs, highly responsive to chemotherapy, but relapse during chemotherapy treatment, being the resistance of neoplastic cells to chemotherapy drugs the responsible factor for the high rate of relapse and death of animals. In this study, genes expression related to multiples drugs resistance it was evaluated in dogs with lymphoma, in the diagnosis and in the relapse of the disease in three different chemotherapy protocols used in the clinical routine. The genes expression ABCB1, ABCC1, ACBG2 was determined by RT-PCR (real time PCR) in 25 animals naturally undertaken by the illness, randomly divided into 3 groups treated with the chemotherapy protocols COP, VCM and Short-Madison, besides a &quot;pool&quot; control constituted by normal lymph node of eight animals. The genes expression was detected in all the samples, both in the normal lymph node and in the animals with lymphoma. In the diagnosis of the disease, the gene expression ABCC1 was negatively related with age (p=0,008) and positively with the duration of remission (p=0,027) and survival (p=0,007); however, for ABCB1 and ABCG2 there was no statiscally significant difference. In the relapse, the genes expression had no statiscally significant difference due to the type and duration of remission and survival. There was no variation in the genes expression ABCB1, ACBC1 and ABCG2 in the moment of relapse when compared to the chemotherapy protocol used.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:57Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-08-21Bitstream added on 2014-06-13T18:56:52Z : No. of bitstreams: 1 gaiolla_rd_me_botfm.pdf: 867698 bytes, checksum: ec290cbafd254a98351e5ef8cea0e6de (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O Linfoma de Hodgkin (LH) é uma neoplasia linfóide histologicamente caracterizada pela presença de escassas células neoplásicas peculiares, denominadas células de Hodgkin/Reed-Sternberg (H-RS), em meio a infiltrado inflamatório não-neoplásico. Seu curso clínico está diretamente relacionado ao estadiamento, subtipo histológico e presença de alguns fatores prognósticos adversos já estabelecidos. Sintomas constitucionais como febre, perda de peso e sudoreses noturna, associados a um aparente desbalanço da resposta imune celular, são características comuns ao diagnóstico e denotam anormalidade da resposta imunológica desses pacientes, provavelmente causada pela produção de diferentes citocinas, tanto pelas células H-RS como pelo infiltrado inflamatório de permeio. Na maior parte dos casos de LH, há produção aumentada de citocinas de padrão Th2. No presente estudo, foram determinadas, por ELISA, as concentrações séricas de IL-6, IL-10 e IL-13 de 28 pacientes com LH clássico, antes e depois do tratamento anti-neoplásico, e de 26 voluntários saudáveis que compuseram grupo-controle. Dosagens de IL-6 e IL-10 pré-tratamento foram significativamente maiores nos pacientes em relação ao grupo-controle. Todos os pacientes apresentaram redução do nível sérico de IL-6 e IL-10 após o tratamento antineoplásico. Ao diagnóstico, níveis elevados de IL-6 foram associados à presença de linfonodomegalia abdominal, hepatomegalia, sintomas B e anemia. O estudo da regressão linear múltipla mostrou que sintomas B e linfocitopenia são bons preditores de níveis séricos pré-tratamento de IL-6. Níveis elevados de IL-10 foram relacionados à hipoalbuminemia e hepatomegalia. Nenhum paciente apresentou dosagem Resumo 52 sérica detectável de IL-13. Os resultados demonstram que níveis séricos elevados de IL-6 e IL-10 ao diagnóstico estão... / Hodgkin’s lymphoma (HL) is a malignant lymphoid neoplasia characterized by abnormal immune response. Part of this disturbance is attributable to the activity of cytokines produced by the malignant Hodgkin/Reed-Sternbergh cells and reactive inflammatory cells. IL-6, IL-10 and IL-13 seem to play an important role in the pathogenesis of HL. Although some features of the disease have been associated with the production of these interleukins, there is insufficient data about changes in its serum levels at diagnosis and after the treatment, as well as its potencial use as biomarkers of HL course. Design and Methods. Serum levels pre and post treatment of IL-6, IL-10 and IL-13 in 28 patients with HL were determined by ELISA. Results were evaluated against clinical and laboratory parameters, as well as response to treatment and presence of infection by the Epstein-Barr virus (EBV), assessed by in situ hybridization with biotinylated probe directed to the viral transcript EBER-1. Serum samples from 26 healthy blood-donors volunteers were evaluated as a control group. Results. IL-6 and IL-10 serum levels before treatment of HL were significantly higher in patients compared to healthy individuals (p<0,001), and a significant reduction after treatment of the disease was observed (p<0,001). Serum levels of IL-13 were indetectable both in patients (before and after treatment) and controls. Serum levels of IL-6 before treatment were higher in patients with abdominal involvement by HL (p=0,03), hepatomegaly (p=0,04), B-symptoms (p=0,01), and anemia (p=0,02). On the other hand, IL-10 pre-treatment levels were higher in patients with hypoalbuminemia (p=0,04) and hepatomegaly (p=0,01). Multivariate analysis Abstract 54 revealed that lymphocytopenia and B-symptoms were good predictors of IL-6 levels in serum before treatment of patients... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:43Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-02-18Bitstream added on 2014-06-13T20:50:57Z : No. of bitstreams: 1 anai_la_me_jabo.pdf: 941558 bytes, checksum: 3e8d781b74dbdeaa063ccb760a761d87 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O linfoma é o tumor de tecido hematopoético mais comum nos cães e um dos tumores malignos de maior ocorrência nesta espécie. É um ótimo modelo experimental para estudo devido a sua semelhança com o linfoma não-Hodgkin em humanos. Considerando a importância das alterações decorrentes da evolução desta neoplasia e aquelas ocorridas com o emprego da poliquimioterapia, avaliou-se a fórmula leucocitária absoluta e a contagem de células CD45+, no sangue de 25 cães linfomatosos, contrastando-as a partir do diagnóstico, uma vez por semana, durante as primeiras oito sessões quimioterápicas do protocolo de Madison-Wisconsin, e também foi comparada as contagens totais dos granulócitos, linfócitos e monócitos, obtidas em contador automático convencional e por intermédio da citometria de fluxo. Observou-se um maior número de animais com linfoma multicêntrico em estadio Vb. No leucograma, as principais alterações foram observadas no momento do diagnóstico e quando analisado o tratamento poliquimioterápico, ao longo do tempo, a maior mielosupressão foi imposta pela vincristina e suas associações. Cães linfomatosos podem ser avaliados tanto por intermédio de contadores eletrônicos como por meio da citometria de fluxo / Lymphoma is the most common hematopoietic tumor in dogs and one of the malignant tumors with highest occurrence in that species. It is a great experimental model to study since it has a great resemblance with the non-Hodgkin lymphoma in humans. Considering the importance of the alterations due to the evolution of this malignancy and the ones due to the use of polichemothearpy this work aimed to evaluate the absolute leucocyte count and the counts of CD45+ type cells in the blood of 25 lymphomatic dogs counterpointing them since diagnose, once a week, during the first eight chemotherapic sessions with the Madison-Wisconsin protocol. Furthermore the total counts of granulocytes, lymphocytes and monocytes obtained by conventional automatic counter and by flow cytometry were compared. It was observed a greater number of animals with multicentric lymphoma in stage Vb. The main alterations in the leukon were the ones observed at the moment of diagnose. When analyzing the polichemotherapy treatment the highest myelosupression was caused by vincristine and its associations. It is concluded that dogs with lymphoma can be evaluated by electronic counters as well as by flow cytometry

Les lymphomes sont des cancers parmi les plus fréquents chez l’Homme et le chien. Ils présentent de fortes homologies du point de vue clinique, histologique et de la réponse aux traitements. Dans le contexte actuel, les méthodes de séquençage de nouvelles générations (NGS) permettent l’identification de nombreuses altérations génétiques nécessaires pour le diagnostic, le pronostic et le développement de thérapies ciblées. Pourtant, le développement de nouvelles molécules rencontre une forte proportion d’échec lors des études cliniques. Ce constat est en partie dû à l’utilisation de modèles non représentatifs de la maladie telle qu’elle se présente chez l’Homme. Chez le chien, la sélection artificielle imposée par l’homme fait qu’aujourd’hui, de nombreuses races présentent des prédispositions aux lymphomes et même à certains sous-types. Cette caractéristique fait du chien un modèle spontané pertinent aussi bien pour l’étude des bases génétiques des lymphomes que pour le développement de nouvelles molécules pour l’Homme via des essais cliniques vétérinaires. Mon travail de thèse a consisté à caractériser génétiquement les lymphomes canins pour proposer des modèles prédictifs des lymphomes homologues humains. Suite à une étape de collecte d’un grand nombre de prélèvements de chiens atteints de lymphomes, j’ai travaillé sur l’amélioration d’un test de diagnostic des sous-types B ou T de lymphomes basé sur la technique d’amplification appelé PARR. J’ai également montré une transmission familiale de lymphomes chez le Bouvier bernois, ce qui m’a permis d’effectuer une étude d’association génétique (GWAS) comportant 63 chiens atteints et 167 indemnes. J’ai pu ainsi identifier plusieurs loci sur les chromosomes 9, 15 et 23, ce dernier incluant le gène MYD88 connu pour être impliqué dans les lymphomes humains. J’ai également découvert par différentes approches NGS (RNA-Seq et Capture ciblée) des altérations génétiques récurrentes partagées entre l’Homme et le chien. Parmi celles-ci, j’ai identifié des fusions de gènes entre des immunoglobulines et les cyclines D : 3 cas pour CCND3 et 1 cas pour CCND1. J’ai également retrouvé la forte récurrence d’altérations impliquant les oncogènes KDR, MYC ou UBR5 ainsi que les gènes suppresseurs de tumeur POT1, PTEN ou TP53. Ces évènements étant associés chez l’Homme à des lymphomes agressifs ou résistants aux traitements, les lymphomes canins présentent donc un intérêt majeur en tant que modèle spontané. Enfin, j’ai mis en place des essais de molécules in vitro, réalisables à partir de la lignée CLBL-1 ou de cultures primaires caractérisées par NGS. Cette étape préliminaire permet d’envisager des essais cliniques vétérinaires avec des chiens de propriétaire, atteints de lymphomes. Cette démarche s’intègre dans le concept « One health » dont l’objectif est de faire bénéficier ces recherches à la médecine humaine et vétérinaire. / Lymphomas are among the most common cancers in humans and dogs. They show strong clinical, histological and response homologies to treatments. In the current context, new generation sequencing (NGS) methods allow identification of many genetic alterations needed for the diagnosis, prognosis and development of targeted therapies. However, the development of new molecules encounters a high proportion of failure in clinical studies. This finding is due in part to the use of models that are not reflect all aspects of the disease occurring in humans. In dogs, artificial selection done by humans means that today, many breeds have predispositions to lymphomas and even to certain subtypes. This characteristic makes the dog a relevant spontaneous model both for the study of the genetic basis of lymphomas and for the development of new molecules for humans with veterinary clinical trials. My thesis work consisted in the genetic characterization of canine lymphomas to propose predictive models of human homologous lymphomas. Following a collection step of a large number of lymphomas cases, I worked on the improvement of a diagnostic test to subtype B or T lymphomas based on amplification called PARR. I also showed a familial transmission of lymphomas in the Bernese Mountain Dog, which allows me to perform a genome-wide association study (GWAS) comprising 63 affected dogs and 167 healthy dogs. I identified several loci on chromosomes 9, 15 and 23, the last one including the MYD88 gene known to be involved in human lymphomas. I have also discovered by different NGS approaches (RNA-Seq and Capture targeted) recurrent genetic alterations shared between the Man and the dog. Among these, I have identified gene fusions between immunoglobulins and cyclins D: 3 cases for CCND3 and 1 case for CCND1. I also found strong recurrences of alterations involving the oncogenes KDR, MYC or UBR5 as well as the tumor suppressor genes POT1, PTEN or TP53. Since these events are associated with aggressive or resistant lymphomas in humans, canine lymphomas are thus of major interest as a spontaneous model. Finally, I have carried out in vitro tests of molecules, which can be carried out from the CLBL-1 cell line or from primary cell cultures characterized by NGS. This preliminary step allows us to consider veterinary clinical trials with owners dogs with lymphomas. This approach is part of the "One Health" concept, which aims to bring this research to human and veterinary medicine.

Apoptosis serves as a natural barrier to cancer development, and the resistance to apoptosis represents one of the key capabilities acquired during tumor development or progression. Impairment of the intrinsic apoptotic pathway exemplifies one of the established mechanisms of constitutive or acquired drug resistance. As most of the currently used cytotoxic drugs initiate tumor cell death by direct or indirect triggering of the intrinsic apoptotic pathway, impairment of the intrinsic pathway is associated with therapy failure. Targeting of the death receptors, however, enables induction of apoptosis even in the chemotherapy resistant cancer cells. TRAIL is a death ligand belonging to the TNFα superfamily that specifically kills tumor cells while sparing healthy tissues. Much enthusiasm has been generated for TRAIL as a highly promising targeted anti-cancer agent. However, many primary tumors have been shown to be TRAIL resistant. In attempt to overcome such an intrinsic TRAIL resistance a wide array of agents have been shown to sensitize tumor cells to TRAIL. Previous studies reported that roscovitine, a cyclin-dependent kinase inhibitor, sensitized various solid cancer cells to TRAIL. In this study we analyzed the sensitivity of diverse hematologic malignancies to TRAIL-induced apoptosis and measured the...

Os linfomas constituem um grupo de neoplasias que têm origem nas células linforreticulares e acomete tecidos linfóides primários, secundários como o baço e linfonodos e demais tecidos onde há presença de linfócitos circulantes, comumente descritos em cães, gatos e humanos. As síndromes paraneoplásicas são definidas como alterações sistêmicas não relacionadas com lesões metastáticas de forma direta ou indireta no hospedeiro. Dentre as alterações descritas como síndrome paraneoplásica, as alterações hematológicas constituem as mais freqüentes, apresentando destaque para os processos anêmicos. A anemia presente pode ser decorrente de alterações do metabolismo do ferro, perda sanguínea, distúrbios hemolíticos, infiltrado medular e hiperesplenismo. Atualmente tem se associado a redução da vida média das hemácias frente a presença do estresse oxidativo, que gera um desequilíbrio entre a excessiva produção de espécies reativas ao oxigênio e/ou a diminuição dos mecanismos de defesa antioxidante das hemácias. Esse processo pode ocasionar a peroxidação de lipídios da membrana eritrocitária, gerando hemólise e assim resultando em anemia e/ou exacerbando a mesma. Com o objetivo de avaliar a existência do estresse oxidativo e a presença de anemia assim como, a sua correlação com o estado redox, foram avaliadas as concentrações eritrocitárias de glutationa reduzida, glutationa redutase, glutationa peroxidase e superóxido redutase em 23 gatos sadios e 17 felinos com linfoma. Também foram determinadas as concentrações plasmáticas de malonaldeído como indicador da presença de peroxidação lipídica em ambos os grupos. Para avaliar o estado redox foi mensurada a concentração plasmática do estado antioxidante total para o grupo experimental e grupo controle. Não foram observadas diferenças significantes para as enzimas eritrocitárias glutationa redutase, glutationa peroxidade e superóxido dismutase, assim como para a mensuração plasmática de malonaldeído. Entretanto, foram observados valores significativamente menores (p=0,018) de glutationa reduzida nos felinos com linfoma quando comparados ao grupo controle. O mesmo pôde ser observado em relação à mensuração do estado antioxidante total (p=0,003). Os resultados obtidos indicam a presença de estresse oxidativo em felinos com linfoma, porém, não houve evidencias da relação entre a presença de estresse oxidativo e a presença de anemia. / Lymphomas are a group of cancers that originate in cells and lymphoreticular affects lymphoid tissues in primary, secondary as the spleen and lymph nodes and other tissues where there is presence of circulating lymphocytes, commonly described in dogs, cats and humans. Paraneoplastic syndromes are defined as systemic changes unrelated metastatic lesions either directly or indirectly in the host. Among the changes described as a paraneoplastic syndrome, hematological changes are the most frequent, with emphasis on the processes anemic. This anemia may be due to changes in iron metabolism, blood loss, hemolytic disorders, bone marrow infiltration and hypersplenism. Today has been associated with reduced average life span of red cells before the presence of oxidative stress, which creates an imbalance between excessive production of reactive oxygen species and / or decreased antioxidant defense mechanisms of red blood cells. This process can lead to lipid peroxidation of the membrane, causing hemolysis and thus resulting in anemia and / or exacerbating it. Aiming to evaluate the existence of oxidative stress and anemia as well as its correlation with redox state, were evaluated erythrocyte concentrations of reduced glutathione, glutathione reductase, glutathione peroxidase and superoxide reductase in 23 healthy cats and 17 cats with lymphoma. We also determined plasma concentrations of malondialdehyde as an indicator of the presence of lipid peroxidation in both groups. To assess the redox state was measured plasma concentration of total antioxidant status for the experimental group and control group. No significant differences were observed for enzymes erythrocyte glutathione reductase, glutathione peroxidase and superoxide dismutase, as well as for measurement of plasma malondialdehyde. However, observed values were significantly lower (p = 0.018) reduced glutathione in cats with lymphoma when compared to the control group. The same could be observed in relation to the measurement of total antioxidant status (p=0,003). The results indicate the presence of oxidative stress in cats with lymphoma, however, no evidence of the relationship between oxidative stress and anemia.

O linfoma alimentar é a forma anatômica mais frequente nos felinos e é o tipo de neoplasia que mais acomete o intestino delgado nessa espécie. É caracterizado pela infiltração de células linfóides neoplásicas em órgãos do trato gastrointestinal, com ou sem comprometimento de linfonodos mesentéricos. Seu diagnóstico pode ser considerado desafiador em muitos casos, devido às manifestações clínicas muitas vezes inespecíficas e às limitações da citologia e histopatologia. A imunoistoquímica, embora ainda pouco difundida, pode ser utilizada para confirmar o diagnóstico de linfoma alimentar, bem como determinar o tipo celular predominante. Objetivando-se caracterizar o linfoma alimentar felino, foi realizado estudo utilizando-se 40 casos de gatos com diagnóstico de linfoma alimentar (grupo 1), confirmados por meio da imunoistoquímica, no qual se avaliou os aspectos epidemiológicos, clínicos, citológicos, histológicos e imunoistoquímicos. Também foram avaliados 20 casos de felinos com doença inflamatória intestinal (grupo 2), confirmados segundo exame imunoistoquímico, quanto aos aspectos epidemiológicos e clínicos. E com o intuito de verificar a acurácia diagnóstica relativa dos exames de citologia, histologia e imunoistoquímica, foram utilizados os resultados dessas análises de ambos os grupos. Foi observado entre os felinos com linfoma alimentar estudados uma média de idade de 10,8 anos e as manifestações clínicas de maior ocorrência foram emagrecimento (55%), êmese (40%) e alterações nas fezes (40%). Entre as alterações ultrassonográficas observadas, as mais prevalentes foram linfonodomegalia mesentérica (86,11%) e espessamento de alças intestinais (80,55%). A maioria dos felinos estudados apresentou sorologia negativa tanto para FIV quanto para FeLV e apenas 14,28% e 8,57% foram positivos para FIV e FeLV, respectivamente. A correlação entre citologia e imunoistoquímica apontou sensibilidade, especificidade, valor preditivo positivo e negativo e razão de verossimilhança positiva e negativa de 93,3%, 65%, 66,6%, 92,85%, 2,65 e 0,10, respectivamente. O coeficiente de concordância Kappa de Cohen e a acurácia diagnóstica relativa foram de 0,55 e 77,14%, respectivamente. A correlação entre histopatologia e imunoistoquímica revelou sensibilidade, especificidade, valor preditivo positivo e negativo e razão de verossimilhança positiva e negativa de 89,74%, 60%, 81,39%, 75%, 2,22 e 0,18, respectivamente. O coeficiente de concordância Kappa de Cohen e a acurácia diagnóstica relativa foram de 0,52 e 79,66%, respectivamente. A associação entre sorologia para FIV e FeLV e tipo celular do linfoma alimentar não pode ser observada. O presente estudo permitiu concluir que a combinação de citologia, histopatologia e imunoistoquímica é necessária para o correto diagnóstico de linfoma alimentar, e o tipo celular de maior ocorrência foi o de células T. / Alimentary lymphoma is the most common anatomical form of feline lymphoma and is the neoplasm which more affects small intestine of this specie. It is characterized by infiltration of the gastrointestinal tract with neoplastic lymphocytes, with or without mesenteric lymph nodes involvement. The diagnosis of this illness can be challenger in several cases because of unspecific clinical signs and cytological and histopathological limitations. Immunohistochemistry is required where these evaluations were not definitive in addition to establish the cell phenotype T or B lymphocyte. The aim of this study was to characterize feline alimentary lymphoma. For these purpose, 40 cats with a diagnosis of alimentary lymphoma (Group 1) by immunohistochemistry were evaluated clinical, epidemiological, cytological and histologically, in addition to immunophenotype of the neoplasm tissues. Relative accuracy was performed using the results of cytology, histopathology and immunohistochemistry evaluation of 20 cats with inflammatory bowel disease diagnosis. The average age of the cats with alimentary lymphoma was 10.8 years and weight loss (55%), vomiting (40%) and fecal alteration (40%) were the most common clinical signs. The most prevalent ultrasonography abnormalities were mesenteric lymph nodes enlargement (86.11%) and intestinal wall thickening (80.55%). The majority of alimentary lymphoma cats were FIV and FeLV negative and 14.28% and 8.57% were FIV and FeLV positives, respectively. The cytology and immunohistochemistry correlation presents sensitivity, specificity, positive and negative predictive values, positive and negative likelihood ratio tests of 93.3%, 65%, 66.6%, 92.85%, 2.65 and 0.10, respectively. The Cohen´s kappa test and the relative accuracy were 0.55 and 77.14%, respectively. The histopathology and immunohistochemistry correlation presents sensitivity, specificity, positive and negative predictive values, positive and negative likelihood ratio tests of 89.74%, 60%, 81.39%, 75%, 2.22 and 0.18, respectively. The Cohen´s kappa test and the relative accuracy were 0.52 and 79.66%, respectively. Association of FIV and FeLV result tests and alimentary lymphoma phenotype was not observed. In conclusion, the results of the present study suggest that cytology, histology and immunohistochemistry combination is necessary for a correct diagnosis, and T cell alimentary lymphoma is the most common phenotype.

FundaÃÃo Cearense de Apoio ao Desenvolvimento Cientifico e TecnolÃgico / FundaÃÃo de Amparo à Pesquisa do Estado do Cearà / O Linfoma de Hodgkin à uma hemopatia linfÃide pode ocorrer em qualquer faixa etÃria; no entanto, à mais comum na idade adulta jovem, dos 15 aos 40 anos. O TP53 à um gene de 20kb de comprimento que possui 11 Ãxons situado no cromossomo 17 e codifica a proteÃna p53, uma proteÃna cuja principal funÃÃo està relacionada à preservaÃÃo da integridade do cÃdigo genÃtico, e, durante o ciclo celular faz verificaÃÃo quanto à eventual ocorrÃncia de uma mutaÃÃo na seqÃÃncia do cÃdigo genÃtico. Na presenÃa dessas mutaÃÃes, impede que esta cÃlula entre em processo de mitose e complete a divisÃo celular. A maioria dos cÃnceres apresenta mutaÃÃes pontuais na seqÃÃncia do TP53. A anÃlise dos padrÃes dessas mutaÃÃes à de grande valia uma vez que o conhecimento dessas mutaÃÃes leva a um melhor entendimento das funÃÃes dos vÃrios domÃnios da proteÃna p53 e seu envolvimento com o mecanismo de supressÃo tumoral, alÃm de permitir que essas mutaÃÃes sejam utilizadas como biomarcadores para desvendar a oncogÃnese humana. Na literatura vigente, poucos trabalhos abordam a identificaÃÃo dessas mutaÃÃes em relaÃÃo ao linfoma de Hodgkin â forma clÃssica. Dessa forma, este trabalho se propÃe a investigar quantitativa e qualitativamente os padrÃes de polimorfismos existentes nesta forma do linfoma de Hodgkin. A primeira etapa do nosso experimento constou da seleÃÃo de 42 casos de linfonodos diagnosticados como linfoma de Hodgkin entre os anos de 2000 e 2006, arquivados em blocos de parafina. Os casos foram selecionados de pacientes com diagnÃstico de linfoma de Hodgkin, sem predileÃÃo por idade, sexo ou raÃa. Em seguida, o DNA foi extraÃdo das amostras selecionadas para reaÃÃo de PCR, realizada para isolar e amplificar, o fragmento de 137pb correspondente ao Ãxon 8 do gene TP53, atravÃs de primers exclusivos desenhados para o experimento: PFw8 e PRv8. ApÃs a reaÃÃo, os produtos de PCR foram purificados para reaÃÃo de SeqÃenciamento de DNA, utilizando o seqÃenciador automÃtico de DNA da marca ABI Prism 3100 de 16 capilares (Applied Biosystems). A Ãltima etapa aconteceu em laboratÃrio de bioinformÃtica â dry lab, onde as seqÃÃncias de DNA obtidas foram analisadas qualitativa- e quantitativamente. Os processos de extraÃÃo do DNA genÃmico, amplificaÃÃo do Ãxon 8, purificaÃÃo do produto de PCR foram realizadas com sucesso em todas as amostras obtidas de material parafinizado. No seqÃenciamento do DNA parafinizado foi possÃvel determinar, com seguranÃa e confiabilidades previstas em parÃmetros convencionais, a seqÃÃncia de pelo menos 32 amostras; contudo, nÃo se obteve distinÃÃo suficiente dos picos de eletroferogramas para a determinaÃÃo de eventuais polimorfismos na regiÃo analisada. NÃo foi possÃvel portanto, verificar com margem de seguranÃa razoÃvel, a presenÃa ou ausÃncia de SNPs nas amostras seqÃenciadas. Houve, contudo, uma qualificaÃÃo e competÃncia laboratorial instalada localmente (em Fortaleza), a partir da experiÃncia desenvolvida com o esforÃo deste trabalho, para continuar a investigaÃÃo molecular em prol da determinaÃÃo, em futuro breve, da ocorrÃncia ou nÃo de SNPs no exon 8 do TP53 em linfoma de Hodgkin. / Hodgkin lymphoma is a hematololgic B neoplasm occurring at patients within any age, however more likely to affect those from 15 to 40 years-old. The TP53 gene is 20kb length gene with 11 exons that encodes the p53 protein, which main function is related to the conservation and integrity of the genetic code. Most cancers show point mutations in the TP53 sequence. The analysis of these mutations allows a better understanding of the function of the diverse domains of the protein and its relationship to tumor suppression. There is only a few data about TP53 polymorphisms and Hodgkin lymphoma. In this manner, in our study we try to detect polymorphisms within the codons 272, 273, 278, 282, 306 of the exon 8 of the TP53 gene in Hodgkin lymphoma. In our survey we analyzed 42 paraffin-embedded tissues from 2000 to 2006. These samples were prepared for DNA extraction and PCR isolation and amplification of the 137bp fragment of the exon 8 of the TP53 gene, using exclusive primers specially designed to our experiment: PFw8 e PRv8. After PCR amplification, the products of the reaction were purified to the Sequencing reaction. The last part of the experiment encoded the bioinformatics analysis of sequences. DNA extraction and PCR amplification were successfully obtained in our study in all the samples. However, the DNA sequencing was only obtained in 32 samples, but there was no characteristic electropherogram of the analyzed region of the gene. Therefore, it was not possible to determine the presence or absence of SNPs in the TP53 exon 8.