Os linfomas constituem um grupo de neoplasias que têm origem nas células linforreticulares e acomete tecidos linfóides primários, secundários como o baço e linfonodos e demais tecidos onde há presença de linfócitos circulantes, comumente descritos em cães, gatos e humanos. As síndromes paraneoplásicas são definidas como alterações sistêmicas não relacionadas com lesões metastáticas de forma direta ou indireta no hospedeiro. Dentre as alterações descritas como síndrome paraneoplásica, as alterações hematológicas constituem as mais freqüentes, apresentando destaque para os processos anêmicos. A anemia presente pode ser decorrente de alterações do metabolismo do ferro, perda sanguínea, distúrbios hemolíticos, infiltrado medular e hiperesplenismo. Atualmente tem se associado a redução da vida média das hemácias frente a presença do estresse oxidativo, que gera um desequilíbrio entre a excessiva produção de espécies reativas ao oxigênio e/ou a diminuição dos mecanismos de defesa antioxidante das hemácias. Esse processo pode ocasionar a peroxidação de lipídios da membrana eritrocitária, gerando hemólise e assim resultando em anemia e/ou exacerbando a mesma. Com o objetivo de avaliar a existência do estresse oxidativo e a presença de anemia assim como, a sua correlação com o estado redox, foram avaliadas as concentrações eritrocitárias de glutationa reduzida, glutationa redutase, glutationa peroxidase e superóxido redutase em 23 gatos sadios e 17 felinos com linfoma. Também foram determinadas as concentrações plasmáticas de malonaldeído como indicador da presença de peroxidação lipídica em ambos os grupos. Para avaliar o estado redox foi mensurada a concentração plasmática do estado antioxidante total para o grupo experimental e grupo controle. Não foram observadas diferenças significantes para as enzimas eritrocitárias glutationa redutase, glutationa peroxidade e superóxido dismutase, assim como para a mensuração plasmática de malonaldeído. Entretanto, foram observados valores significativamente menores (p=0,018) de glutationa reduzida nos felinos com linfoma quando comparados ao grupo controle. O mesmo pôde ser observado em relação à mensuração do estado antioxidante total (p=0,003). Os resultados obtidos indicam a presença de estresse oxidativo em felinos com linfoma, porém, não houve evidencias da relação entre a presença de estresse oxidativo e a presença de anemia. / Lymphomas are a group of cancers that originate in cells and lymphoreticular affects lymphoid tissues in primary, secondary as the spleen and lymph nodes and other tissues where there is presence of circulating lymphocytes, commonly described in dogs, cats and humans. Paraneoplastic syndromes are defined as systemic changes unrelated metastatic lesions either directly or indirectly in the host. Among the changes described as a paraneoplastic syndrome, hematological changes are the most frequent, with emphasis on the processes anemic. This anemia may be due to changes in iron metabolism, blood loss, hemolytic disorders, bone marrow infiltration and hypersplenism. Today has been associated with reduced average life span of red cells before the presence of oxidative stress, which creates an imbalance between excessive production of reactive oxygen species and / or decreased antioxidant defense mechanisms of red blood cells. This process can lead to lipid peroxidation of the membrane, causing hemolysis and thus resulting in anemia and / or exacerbating it. Aiming to evaluate the existence of oxidative stress and anemia as well as its correlation with redox state, were evaluated erythrocyte concentrations of reduced glutathione, glutathione reductase, glutathione peroxidase and superoxide reductase in 23 healthy cats and 17 cats with lymphoma. We also determined plasma concentrations of malondialdehyde as an indicator of the presence of lipid peroxidation in both groups. To assess the redox state was measured plasma concentration of total antioxidant status for the experimental group and control group. No significant differences were observed for enzymes erythrocyte glutathione reductase, glutathione peroxidase and superoxide dismutase, as well as for measurement of plasma malondialdehyde. However, observed values were significantly lower (p = 0.018) reduced glutathione in cats with lymphoma when compared to the control group. The same could be observed in relation to the measurement of total antioxidant status (p=0,003). The results indicate the presence of oxidative stress in cats with lymphoma, however, no evidence of the relationship between oxidative stress and anemia.

Submitted by Hiolanda Rêgo (hiolandarego@gmail.com) on 2014-10-22T17:58:53Z No. of bitstreams: 1 Dissertação_ICS_ Luiz Eduardo Lacerda de Oliveira.pdf: 2604227 bytes, checksum: 7c9c502a0ab174d9ab61202c3b062504 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-10-22T17:58:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação_ICS_ Luiz Eduardo Lacerda de Oliveira.pdf: 2604227 bytes, checksum: 7c9c502a0ab174d9ab61202c3b062504 (MD5) / CAPES / Acidithiobacillus ferrooxidans é uma das bactérias catalizadoras da reação de oxidação que leva à formação drenagem ácida mineira (DAM). Devido à capacidade oxidativa e lixiviante deste micro-organismo, a indústria passou a usá-lo na extração de minerais, por biolixiviação, com vantagens em relação aos métodos convencionais em alguns casos. A Bahia tem uma expressiva produção mineral, no entanto poucos são os relatos sobre a investigação sistemática de aspectos microbiológicos envolvidos na DAM neste estado. Com foco nisto, o objetivo desta pesquisa foi identificar bactérias envolvidas na formação de DAM na região de Jacobina – BA, e isolar a bactéria A. ferrooxidans, proveniente de locais que sofrem com este problema, para utilização em ensaio de biolixiviação a fim de avaliar a capacidade oxidativa deste isolado na recuperação de cobre. Para isto, uma amostra de sedimento foi coletada em uma barragem de rejeitos e caracterizada a nível molecular por Microarray, sendo encontrados 5 taxa, todos do domínio Bacteria, entre eles a espécie A. ferrooxidans, a qual foi isolada após enriquecimento em meio T&K e posterior purificação em meio sólido seletivo T&K-agarose. O crescimento bacteriano no enriquecimento foi acompanhado pela titulação de Fe2+ residual do meio com dicromato de potássio, por inspeção visual (mudança cor de verde claro para marrom avermelhado) e aumento do potencial redox. Durante o enriquecimento, a cultura chegou à fase estacionária em 2 dias após o inóculo. Em meio sólido, as colônias isoladas foram obtidas do 10º ao 15º dia de incubação. Análise molecular por qPCR confirmou que A. ferrooxidans foi a espécie isolada. O isolado foi empregado no ensaio de biolixiviação com minérios sulfetados de cobre, no qual predomina calcopirita. O ensaio foi realizado com 20% de sólidos, com pH inicial de 2, agitação constante (130 RPM), temperatura de 30ºC e duração de 60 dias, em três condições: o frasco sem inóculo e esterilizado pela adição de formaldeído; o frasco inoculado com A. ferrooxidans; e o frasco sem inóculo e não esterilizado. O processo de biolixiviação ficou evidenciado quando utilizada esta cepa bacteriana, uma vez que os frascos que a continham apresentaram melhor recuperação de cobre, 58 e 60%, em relação aos frascos sem inóculo, cuja recuperação foi de 31 e 35% para os esterilizados com formaldeído, e de 37 e 44% para o não esterilizado. O minério estudado, apesar da refratariedade da calcopirita, mostrou boa potencialidade na utilização de bactérias para recuperação de cobre por biolixiviação. A manutenção e ajuste do pH durante a lixiviação bacteriana foi essencial para a eficiente recuperação deste metal.

Os linfomas constituem um grupo de neoplasias que têm origem nas células linforreticulares e acomete tecidos linfóides primários, secundários como o baço e linfonodos e demais tecidos onde há presença de linfócitos circulantes, comumente descritos em cães, gatos e humanos. As síndromes paraneoplásicas são definidas como alterações sistêmicas não relacionadas com lesões metastáticas de forma direta ou indireta no hospedeiro. Dentre as alterações descritas como síndrome paraneoplásica, as alterações hematológicas constituem as mais freqüentes, apresentando destaque para os processos anêmicos. A anemia presente pode ser decorrente de alterações do metabolismo do ferro, perda sanguínea, distúrbios hemolíticos, infiltrado medular e hiperesplenismo. Atualmente tem se associado a redução da vida média das hemácias frente a presença do estresse oxidativo, que gera um desequilíbrio entre a excessiva produção de espécies reativas ao oxigênio e/ou a diminuição dos mecanismos de defesa antioxidante das hemácias. Esse processo pode ocasionar a peroxidação de lipídios da membrana eritrocitária, gerando hemólise e assim resultando em anemia e/ou exacerbando a mesma. Com o objetivo de avaliar a existência do estresse oxidativo e a presença de anemia assim como, a sua correlação com o estado redox, foram avaliadas as concentrações eritrocitárias de glutationa reduzida, glutationa redutase, glutationa peroxidase e superóxido redutase em 23 gatos sadios e 17 felinos com linfoma. Também foram determinadas as concentrações plasmáticas de malonaldeído como indicador da presença de peroxidação lipídica em ambos os grupos. Para avaliar o estado redox foi mensurada a concentração plasmática do estado antioxidante total para o grupo experimental e grupo controle. Não foram observadas diferenças significantes para as enzimas eritrocitárias glutationa redutase, glutationa peroxidade e superóxido dismutase, assim como para a mensuração plasmática de malonaldeído. Entretanto, foram observados valores significativamente menores (p=0,018) de glutationa reduzida nos felinos com linfoma quando comparados ao grupo controle. O mesmo pôde ser observado em relação à mensuração do estado antioxidante total (p=0,003). Os resultados obtidos indicam a presença de estresse oxidativo em felinos com linfoma, porém, não houve evidencias da relação entre a presença de estresse oxidativo e a presença de anemia. / Lymphomas are a group of cancers that originate in cells and lymphoreticular affects lymphoid tissues in primary, secondary as the spleen and lymph nodes and other tissues where there is presence of circulating lymphocytes, commonly described in dogs, cats and humans. Paraneoplastic syndromes are defined as systemic changes unrelated metastatic lesions either directly or indirectly in the host. Among the changes described as a paraneoplastic syndrome, hematological changes are the most frequent, with emphasis on the processes anemic. This anemia may be due to changes in iron metabolism, blood loss, hemolytic disorders, bone marrow infiltration and hypersplenism. Today has been associated with reduced average life span of red cells before the presence of oxidative stress, which creates an imbalance between excessive production of reactive oxygen species and / or decreased antioxidant defense mechanisms of red blood cells. This process can lead to lipid peroxidation of the membrane, causing hemolysis and thus resulting in anemia and / or exacerbating it. Aiming to evaluate the existence of oxidative stress and anemia as well as its correlation with redox state, were evaluated erythrocyte concentrations of reduced glutathione, glutathione reductase, glutathione peroxidase and superoxide reductase in 23 healthy cats and 17 cats with lymphoma. We also determined plasma concentrations of malondialdehyde as an indicator of the presence of lipid peroxidation in both groups. To assess the redox state was measured plasma concentration of total antioxidant status for the experimental group and control group. No significant differences were observed for enzymes erythrocyte glutathione reductase, glutathione peroxidase and superoxide dismutase, as well as for measurement of plasma malondialdehyde. However, observed values were significantly lower (p = 0.018) reduced glutathione in cats with lymphoma when compared to the control group. The same could be observed in relation to the measurement of total antioxidant status (p=0,003). The results indicate the presence of oxidative stress in cats with lymphoma, however, no evidence of the relationship between oxidative stress and anemia.

O presente trabalho teve como objetivo o aproveitamento do hidrolisado de cascas de mandioca para produção de pigmentos carotenoides. Para isso, foi realizado o isolamento de leveduras provenientes da Região Amazônica, caracterização das cascas de mandioca e obtenção dos hidrolisados por via ácida (HA) e enzimática (HE). Por fim, foram avaliados o efeito da relação C:N e da luminosidade sobre a produção de carotenoides pelas leveduras previamente selecionadas nos hidrolisados. Os extratos carotenogênicos foram caracterizados quanto ao potencial anti-oxidante e antimicrobiano, sendo ainda avaliado o uso da biomassa seca como agente pigmentante em um material polimérico. Foram isoladas sete colônias pigmentadas (4 do solo, 2 de água e 1 de fruto), as quais foram identificadas como pertencentes ao gênero Rhodotorula. Com relação as cascas de mandioca, o principal componente em % m/m foi o amido (71,0), seguido da lignina (13,0), glucana (4,6), xilana (2,4), cinzas (2,6) e extrativos (4,6). Na melhor condição de hidrólise ácida (1% H2SO4, 10% sólidos, 120 min), foi obtido 48 g/L de glicose, o que correspondeu a uma eficiência de 67%. Já para a hidrólise enzimática (3000 U Termamyl 2X, 240 U AMG XXL, 14% sólidos, 65 min) obtevese 80,8 g/L de glicose, correspondendo a uma eficiência de 79,5%. Nas condições de cultivo empregando HA ou HE contendo cerca de 50,0 g/L de glicose sem qualquer suplementação (pH inicial 6,0, temperatura de 30ºC, agitação de 200rpm e na presença de luminosidade) foi possível selecionar a cepa Rh S2 no HA e a Rh RNA no HE, as quais apresentaram, respectivamente (12,7 g/L e 7,6 mg/L) e (22,8 g/L e 11,2 mg/L) de biomassa e carotenoides totais. O maior potencial antioxidante foi obtido com a cepa Rh S2 que apresentou cerca de 30% de redução do radical DPPH sendo que ambos extratos apresentaram ação anti-microbiana frente à Escherichia coli e Aspergillus fumigatus. Quanto as propriedades mecânicas do compósito formulado com a biomassa seca da cepa Rh S2, ficou demonstrada a possibilidade do uso desta biomassa como agente pigmentante em resinas poliméricas. Estes resultados revelam o grande potencial das leveduras selecionadas para a produção de carotenoides a partir de um subproduto da agroindústria, ressaltando ainda suas importantes propriedades biológicas e de pigmentação, as quais poderão ser exploradas em diferentes aplicações. / The present work had as objective the utilization of the hydrolyzate of cassava peels for the production of carotenoid pigments. For this, the yeast from the Amazon region was isolated, characterizing the cassava peels and acid hydrolysates (HA) and enzymatic (HE). Finally, the effect of the C: N ratio and the luminosity on carotenoid production by the selected yeasts in the hydrolysates were evaluated. Carotenogens extracts are characterized as antioxidant and antimicrobial potential, and the use of dry biomass as a pigment agent in a polymeric material is also evaluated. Seven pigmented colonies (4 soil, 2 water and 1 fruit) were isolated, as were the communities as individuals belonging to the genus Rhodotorula. Compared with cassava peels, the main component in% by weight of starch (71.0), followed by lignin (13.0), glucan (4.6), xylan (2.4), ashes (26) and extractives (4.6). The acid hydrolysis condition (1% H2 SO4, 10% solids, 120 min) was 48 g/L glucose, corresponding to an efficiency of 67%. Already for an enzymatic hydration (3000 U Termamyl 2X, 240 U AMG XXL, 14% solids, 65 min), 80.8 g/L of glucose was obtained, corresponding to an efficiency of 79.5%. In the ingestion conditions using HA or HE of about 50.0 g/L of glucose without any supplement (initial pH 6.0, temperature of 30 ° C, agitation of the presence light) it was possible to select the strain Rh S2 in HA and Rh RNA is not HE, as it is today (12.7 g/L and 7.6 mg/L) and (22.8 g/L and 11.2 mg/L) biomass and total carotenoids. The highest antioxidante potential was obtained with the Rh S2 protein which had about 30% reduction of the DPPH radical, with both extracts being moved against the microbiota against Escherichia coli and Aspergillus fumigatus. Regarding the mechanical properties of the compound formulated with a dry biomass of the strain Rh S2, the possibility of the use of this biomass as pigment agent in polymer resins has been demonstrated. This research was useful to increase the potential of selected yeasts for the production of carotenoids from a by-product of agroindustry, highlighting their historical and pigmentation characteristics, such as the ports explored in different applications.

O manganês (Mn) é um elemento químico abundante na natureza, principalmente em minérios e presente também em alimentos e na água. É o cofator de enzimas importantes, como a superóxido dismutase mitocondrial. Entretanto, mineradores e outras pessoas expostas a produtos manufaturados de Mn podem apresentar uma concentração excessiva desse metal no cérebro, adquirindo uma desordem neurológica similar ao mal de Parkinson conhecida por manganismo. Basicamente a neurotoxicidade do Mn pode estar associada com os vários estados de oxidação que ele pode alcançar, gerando espécies reativas de oxigênio durante a interconversão dessas espécies. Dessa forma, neste trabalho sintetizamos e avaliamos as propriedades pró-oxidantes e neurotóxicas de complexos de Mn(III) com desferrioxamina, [Mn(dfb)]; acetohidroxamato, [Mn(aha)3]; citrato, [Mn(cit)]; cloro-salen, EUK 8; e aceto-salen, EUK 108. Tais compostos são propostos como miméticos da SOD e/ou catalase, entretanto podem apresentar atividade pró-oxidante. Estes complexos foram caracterizados espectrofotometricamente (UV/Vis e IV) e por voltametria cíclica. Foram determinadas as absortividades molares dos complexos [Mn(aha)3], EUK 8 e EUK 108. Os EUK\'s apresentaram dois processos redutivos, sendo apenas um reversível, enquanto o [Mn(cit)] apresentou apenas um processo redutivo reversível e os hidroxamatos [Mn(dfb)] e [Mn(aha)3] não apresentaram processos redox na faixa de potenciais utilizada. Em teste de lipofilicidade todos os complexos apresentaram maior afinidade pela fase aquosa, sendo muito pouco particionados para a fase orgânica. Através do ensaio de supressão de fluorescência de calceína foi possível estabelecer que os EUK\'s são relativamente mais estáveis do que os outros complexos, sendo o [Mn(aha)3] o menos estável dos compostos estudados. Nas análises de atividade pró-oxidante, o [Mn(dfb)] oxidou fortemente a sonda mesmo na ausência de outros cofatores, mas este processo é dependente da concentração de O2 no meio. Os EUK\'s atuaram como pró-oxidantes em função da concentração de peróxido no meio. A atividade pró-oxidante foi suprimida por ascorbato, glutationa e Trolox®, que agiram como antioxidantes, sugerindo implicações para a terapia do manganismo. O teste de toxicidade aguda em paulistinhas (Danio rerio) adultos resultou na mortalidade de alguns animais quando expostos a [Mn(dfb)] e [Mn(aha)3]. Comparando o telencéfalo de peixes expostos ao [Mn(dfb)] com um controle em microscópio, não se visualizou nenhuma alteração morfológica na região do núcleo dorsal, indicando que o complexo não causou nenhum dano visível nessa região. / Manganese (Mn) is an abundant element which is present also in food and water. It is the cofactor of important enzymes such as mitochondrial superoxide dismutase. However, miners and other occupationally exposed individuals may present an excessive load of Mn in brain and develop manganism, a neurological disorder akin to Parkinson Disease. Basically, Mn neurotoxicity may stem from its wide redox cycle, generating reactive oxygen species in the process of converting from one oxidation state to another. Thus, in this work we synthesized and evaluated the pro-oxidant and neurotoxic characteristics of Mn(III) complexes with desferrioxamine, [Mn(dfb)]; acetohydroxamate, [Mn(aha)3]; citrate, [Mn(cit)]; chlorosalen, EUK 8; and aceto-salen, EUK 108. Such compounds are proposed as mimetics of superoxide dismutase and/or catalase, however they may also be prooxidant. These complexes were characterized spectrophotometrically (UV/Vis and IR) and by cyclic voltammetry. Molar absorptivities were determined for [Mn(aha)3], EUK 8 and EUK 108. EUK\'s displayed two reductive processes, only one of which was reversible, while [Mn(cit)] displayed only one (reversible) reductive process and hydroxamates [Mn(dfb)] and [Mn(aha)3] did not display redox processes in the working range of potentials. Lipophilicity tests showed that all complexes have very low partition to the organic phase. Calcein fluorescence quenching studies showed that both EUK complexes are relatively more stable than the others, while [Mn(aha)3] is the least stable. In the pro-oxidant activity studies, [Mn(dfb)] strongly oxidized the fluorescent probe even in the absence of ancillary substances such as peroxide. However, this effect was dependant on O2 saturation in the solution. Both EUK acted as pro-oxidants with a linear dependence on peroxide concentration. Pro-oxidant activity was eliminated by the treatment with antioxidants such as ascorbate, glutathione and Trolox®, which is of interest for the therapy of manganism. In the acute toxicity tests induced some mortality in adult Danio rerio exposed to [Mn(dfb)] or [Mn(aha)3]. Comparison of the telencephalus of [Mn(dfb)]-exposed individuals with controls failed to indicate morphological alterations in the dorsal nucleus area, indicating that the complex did not affect visibly this brain region.

A sepse é uma condição de elevada letalidade muito frequente em pacientes graves e pode estar associada à deficiência de vitamina B1 ou tiamina. Sendo a tiamina fundamental para produção de energia, restauração do poder redutor e síntese de ribose e desoxirribose celulares, o objetivo deste estudo foi avaliar o efeito da deficiência de tiamina sobre a resposta inflamatória, através da medida de interleucinas, o estresse oxidante, pela determinação do 4-hidróxi 2-nonenal (4-HNE) um produto de peroxidação de lipídeos de membrana e a migração celular em modelo experimental de sepse. Em um primeiro experimento foi determinada a concentração de pirofosfato de tiamina (PPT) no sangue de camundongos c57bl6 alimentados com ração completa e com ração deficiente em tiamina, para determinação do tempo necessário para a indução de deficiência dessa vitamina. Em um segundo experimento foi utilizada a ligadura e perfuração cecal (CLP) como modelo de sepse em quatro grupos: SHAM ração completa, SHAM ração deficiente em tiamina, CLP ração completa, CLP ração deficiente em tiamina. As concentrações de PPT no sangue foram determinadas por cromatografia líquida de alta eficiência. As dosagens séricas e no líquido peritoneal de TNF-α, IL-1β, IL-6, KC e MCP-1/CCL2 foram realizadas por ELISA. O nível de 4-hidroxi,2-nonenal (4-HNE) no fígado foi avaliado por Western Blot. Contagem de leucócitos no sangue e no líquido peritoneal foi feita por microscopia óptica. Foi avaliada a concentração de bactérias no líquido peritoneal. Nos animais alimentados com ração completa a concentração média de PPT foi 303 42,6 nM, e a deficiência de tiamina foi induzida após 10 dias de ingestão da ração pobre em tiamina, quando observou-se concentração de 12,5 2,4 nM. No lavado peritoneal dos animais submetidos à CLP e privados de tiamina observou-se nível significativamente maior de TNF-α e MCP-1. A IL-1β foi menor no sangue do mesmo grupo. A expressão de 4-HNE foi maior nos grupos privados de tiamina. Quanto à celularidade sanguínea, observou-se apenas maior contagem de mononucleares no grupo submetido à CLP e privado de tiamina. No líquido peritoneal, a contagem de leucócitos totais, mononuleares e monócitos foi mais elevada nos grupos CLP, mas sem relação com o tipo de dieta. No entanto, no líquido peritoneal o grupo CLP deficiente em tiamina revelou população bacteriana significativamente menor que o grupo alimentado com ração completa e os grupos sham. Concluiu-se que a deficiência de tiamina associou-se com aumento da morte bacteriana na cavidade peritoneal, aumento do estresse oxidante, e mudanças na resposta inflamatória. Palavras-chave: Tiamina. Sepse. Estresse oxidante. Inflamação. Modelo de sepse.A sepse é uma condição de elevada letalidade muito frequente em pacientes graves e pode estar associada à deficiência de vitamina B1 ou tiamina. Sendo a tiamina fundamental para produção de energia, restauração do poder redutor e síntese de ribose e desoxirribose celulares, o objetivo deste estudo foi avaliar o efeito da deficiência de tiamina sobre a resposta inflamatória, através da medida de interleucinas, o estresse oxidante, pela determinação do 4-hidróxi 2-nonenal (4-HNE) um produto de peroxidação de lipídeos de membrana e a migração celular em modelo experimental de sepse. Em um primeiro experimento foi determinada a concentração de pirofosfato de tiamina (PPT) no sangue de camundongos c57bl6 alimentados com ração completa e com ração deficiente em tiamina, para determinação do tempo necessário para a indução de deficiência dessa vitamina. Em um segundo experimento foi utilizada a ligadura e perfuração cecal (CLP) como modelo de sepse em quatro grupos: SHAM ração completa, SHAM ração deficiente em tiamina, CLP ração completa, CLP ração deficiente em tiamina. As concentrações de PPT no sangue foram determinadas por cromatografia líquida de alta eficiência. As dosagens séricas e no líquido peritoneal de TNF-α, IL-1β, IL-6, KC e MCP-1/CCL2 foram realizadas por ELISA. O nível de 4-hidroxi,2-nonenal (4-HNE) no fígado foi avaliado por Western Blot. Contagem de leucócitos no sangue e no líquido peritoneal foi feita por microscopia óptica. Foi avaliada a concentração de bactérias no líquido peritoneal. Nos animais alimentados com ração completa a concentração média de PPT foi 303 42,6 nM, e a deficiência de tiamina foi induzida após 10 dias de ingestão da ração pobre em tiamina, quando observou-se concentração de 12,5 2,4 nM. No lavado peritoneal dos animais submetidos à CLP e privados de tiamina observou-se nível significativamente maior de TNF-α e MCP-1. A IL-1β foi menor no sangue do mesmo grupo. A expressão de 4-HNE foi maior nos grupos privados de tiamina. Quanto à celularidade sanguínea, observou-se apenas maior contagem de mononucleares no grupo submetido à CLP e privado de tiamina. No líquido peritoneal, a contagem de leucócitos totais, mononuleares e monócitos foi mais elevada nos grupos CLP, mas sem relação com o tipo de dieta. No entanto, no líquido peritoneal o grupo CLP deficiente em tiamina revelou população bacteriana significativamente menor que o grupo alimentado com ração completa e os grupos sham. Concluiu-se que a deficiência de tiamina associou-se com aumento da morte bacteriana na cavidade peritoneal, aumento do estresse oxidante, e mudanças na resposta inflamatória. / Sepsis is a prevalent condition in critically ill patients and may be associated with thiamine deficiency (TD). Since thiamine is important for energy production, redactor power recovering and ribosis and desoxirribosis synthesis, the aim of this study was to evaluate TD effect in inflammation, oxidative stress and cell recruitment in a sepsis model. Thiamine pyrophosphate (TPP) normal concentration was determined in blood of c57bl6 mice fed with AIN93G chow and also in animals fed with similar AIN93G chow without thiamine in order to determine the time required to produce TD. Another experiment was carried out with cecal ligation and puncture (CLP) as the sepsis model with four groups: SHAM with AIN93G complete chow, SHAM with TD chow, CLP with AIN93G complete chow and CLP with TD chow. TPP blood concentrations were determined by HPLC/Fluorescence. Blood and peritoneal liquid TNF-alpha, IL-1, IL-6, KC and MCP-1/CCL2 determinations were performed by ELISA. The expression of 4-HNE was performed by Western Blot. Blood and peritoneal liquid leukocytes counting were performed by optical microscopy. Peritoneal liquid bacterial concentration was determined. Blood TPP mean concentration in AIN93G complete chow was 287.9 27.8 nM and TD occurred in 10 days in TD chow group and blood concentration in this group was 12.5 2.4 nM. Peritoneal liquid TNF-alpha and MCP-1 concentrations were significantly greater in CLP with TD chow group than the other groups. Blood IL1-β was lower in the same group. Liver 4-HNE expression was highest in TD groups. Blood mononuclear number was greater in CLP TD chow group the others. Peritoneal liquid leukocites, mononuclears and neutrophils numbers were detected in greater number in the same group. However, peritoneal liquid bacterial concentration was significantly lower in the same group. In coclusion TD was associated with greater bacterial killing in peritoneal liquid, greater oxidative stress and change in inflammatory response.

Submitted by LUCIANA DE MORAIS null (lucianademorais@gmail.com) on 2016-09-06T20:17:43Z No. of bitstreams: 1 Dissertação Corrigida PDF.pdf: 813174 bytes, checksum: 4f825525941a01229e7931cfbee55e5c (MD5) / Approved for entry into archive by Juliano Benedito Ferreira (julianoferreira@reitoria.unesp.br) on 2016-09-09T19:44:11Z (GMT) No. of bitstreams: 1 morais_l_me_araca.pdf: 813174 bytes, checksum: 4f825525941a01229e7931cfbee55e5c (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-09T19:44:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 morais_l_me_araca.pdf: 813174 bytes, checksum: 4f825525941a01229e7931cfbee55e5c (MD5) Previous issue date: 2016-08-31 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A mensuração de biomarcadores plasmáticos de estresse oxidativo (BPEO) tem sido largamente empregada para avaliar o desequilíbrio entre oxidantes e antioxidantes. Devido sua função de carrear oxigênio os eritrócitos são ricos em antioxidantes, entretanto os efeitos da hemólise sobre o BPEO de cães são desconhecidos. Considerando que dentre todas as várias fontes de erro analítico, a hemólise é a mais importante na rotina laboratorial, investigamos o efeito da hemólise in vitro sobre os principais BPEO de cães. Para tal, amostras de sangue total de 19 cães clinicamente saudáveis foram hemolisadas em diferentes graus por ação mecânica. Amostras controle contendo baixa concentração de hemoglobina (Hb) no plasma foram comparadas com quatro graus de hemólise mecânica (<0,36; 0,36-0,60; 0,61-1,0; 1,1-4 g/L Hb). Imediatamente após a hemólise foram mensuradas as concentrações plasmáticas de ácido úrico (AU), albumina, bilirrubina, gama glutamiltransferase (GGT), capacidade antioxidante total (TAC) e concentração de oxidante total (TOC). Os erros relativos causados pelos diferentes graus de hemólises foram calculados e confrontados com o erro total aceitável (ETA) e com limite de erro permitido (LEP) empregados nos programas de controle de qualidade de exames laboratoriais. Foi observado que mesmo pequeno grau de hemólise gera algum erro analítico não aceitável (ETA e/ou LEP) nos biomarcadores plasmáticos de estresse oxidativo mensurados, exceto na bilirrubina. Foi possível concluir que a hemólise é um fator limitante para avaliação do estresse oxidativo sistêmico mensurado no plasma, podendo causar erros que potencialmente comprometem o diagnóstico clínico e investigativo. / The measurement of plasma biomarkers of oxidative stress (PBOE) has been widely used to assess the imbalance between oxidants and antioxidants. Due to its function of carrying oxygen red blood cells are rich in antioxidants, however the effects of hemolysis on PBOE dogs are unknown. Whereas among all the various sources of analytical error, hemolysis is the most important in the laboratory routine, we investigated the effect of hemolysis "in vitro" on the main PBOE dogs. For this purpose, whole blood samples from 19 healthy dogs were hemolyzed in different degrees by mechanical action. Control samples containing low concentration of hemoglobin (Hb) levels in plasma were compared with four degrees of hemolysis mechanics (<0.36, from 0.36 to 0.60, 0.61 to 1.0, 1.1 to 4 g/L Hb ). Immediately after the hemolysis were measured plasma concentrations of uric acid (UA), albumin, bilirubin, gamma glutamyl transferase (GGT), total antioxidant capacity (TAC), and total oxidant concentration (TOC). The relative errors caused by different levels of hemolysis were calculated and compared with the total acceptable error (TAE and allowed error limit (LEP) employees in quality control programs for laboratory tests. Even if it was observed small degree of hemolysis generates some not acceptable analytical error (TAE and / or LEP) in plasma biomarkers of oxidative stress measured, except in bilirubin. It was concluded that hemolysis is a limiting factor for the assessment of systemic oxidative stress measured in plasma, may cause errors that potentially compromise the clinical and investigative diagnosis.

Orientador: Paulo César Ciarlini / Banca: Suely Regina Mogami Bomfim / Banca: Ana Claudia de Melo Stefanato Nakamune / Resumo: A mensuração de biomarcadores plasmáticos de estresse oxidativo (BPEO) tem sido largamente empregada para avaliar o desequilíbrio entre oxidantes e antioxidantes. Devido sua função de carrear oxigênio os eritrócitos são ricos em antioxidantes, entretanto os efeitos da hemólise sobre o BPEO de cães são desconhecidos. Considerando que dentre todas as várias fontes de erro analítico, a hemólise é a mais importante na rotina laboratorial, investigamos o efeito da hemólise in vitro sobre os principais BPEO de cães. Para tal, amostras de sangue total de 19 cães clinicamente saudáveis foram hemolisadas em diferentes graus por ação mecânica. Amostras controle contendo baixa concentração de hemoglobina (Hb) no plasma foram comparadas com quatro graus de hemólise mecânica (<0,36; 0,36-0,60; 0,61-1,0; 1,1-4 g/L Hb). Imediatamente após a hemólise foram mensuradas as concentrações plasmáticas de ácido úrico (AU), albumina, bilirrubina, gama glutamiltransferase (GGT), capacidade antioxidante total (TAC) e concentração de oxidante total (TOC). Os erros relativos causados pelos diferentes graus de hemólises foram calculados e confrontados com o erro total aceitável (ETA) e com limite de erro permitido (LEP) empregados nos programas de controle de qualidade de exames laboratoriais. Foi observado que mesmo pequeno grau de hemólise gera algum erro analítico não aceitável (ETA e/ou LEP) nos biomarcadores plasmáticos de estresse oxidativo mensurados, exceto na bilirrubina. Foi possível concluir... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The measurement of plasma biomarkers of oxidative stress (PBOE) has been widely used to assess the imbalance between oxidants and antioxidants. Due to its function of carrying oxygen red blood cells are rich in antioxidants, however the effects of hemolysis on PBOE dogs are unknown. Whereas among all the various sources of analytical error, hemolysis is the most important in the laboratory routine, we investigated the effect of hemolysis "in vitro" on the main PBOE dogs. For this purpose, whole blood samples from 19 healthy dogs were hemolyzed in different degrees by mechanical action. Control samples containing low concentration of hemoglobin (Hb) levels in plasma were compared with four degrees of hemolysis mechanics (<0.36, from 0.36 to 0.60, 0.61 to 1.0, 1.1 to 4 g/L Hb ). Immediately after the hemolysis were measured plasma concentrations of uric acid (UA), albumin, bilirubin, gamma glutamyl transferase (GGT), total antioxidant capacity (TAC), and total oxidant concentration (TOC). The relative errors caused by different levels of hemolysis were calculated and compared with the total acceptable error (TAE and allowed error limit (LEP) employees in quality control programs for laboratory tests. Even if it was observed small degree of hemolysis generates some not acceptable analytical error (TAE and / or LEP) in plasma biomarkers of oxidative stress measured, except in bilirubin. It was concluded that hemolysis is a limiting factor for the assessment of systemic oxidative ... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

A sepse é uma condição de elevada letalidade muito frequente em pacientes graves e pode estar associada à deficiência de vitamina B1 ou tiamina. Sendo a tiamina fundamental para produção de energia, restauração do poder redutor e síntese de ribose e desoxirribose celulares, o objetivo deste estudo foi avaliar o efeito da deficiência de tiamina sobre a resposta inflamatória, através da medida de interleucinas, o estresse oxidante, pela determinação do 4-hidróxi 2-nonenal (4-HNE) um produto de peroxidação de lipídeos de membrana e a migração celular em modelo experimental de sepse. Em um primeiro experimento foi determinada a concentração de pirofosfato de tiamina (PPT) no sangue de camundongos c57bl6 alimentados com ração completa e com ração deficiente em tiamina, para determinação do tempo necessário para a indução de deficiência dessa vitamina. Em um segundo experimento foi utilizada a ligadura e perfuração cecal (CLP) como modelo de sepse em quatro grupos: SHAM ração completa, SHAM ração deficiente em tiamina, CLP ração completa, CLP ração deficiente em tiamina. As concentrações de PPT no sangue foram determinadas por cromatografia líquida de alta eficiência. As dosagens séricas e no líquido peritoneal de TNF-&#945;, IL-1&#946;, IL-6, KC e MCP-1/CCL2 foram realizadas por ELISA. O nível de 4-hidroxi,2-nonenal (4-HNE) no fígado foi avaliado por Western Blot. Contagem de leucócitos no sangue e no líquido peritoneal foi feita por microscopia óptica. Foi avaliada a concentração de bactérias no líquido peritoneal. Nos animais alimentados com ração completa a concentração média de PPT foi 303 42,6 nM, e a deficiência de tiamina foi induzida após 10 dias de ingestão da ração pobre em tiamina, quando observou-se concentração de 12,5 2,4 nM. No lavado peritoneal dos animais submetidos à CLP e privados de tiamina observou-se nível significativamente maior de TNF-&#945; e MCP-1. A IL-1&#946; foi menor no sangue do mesmo grupo. A expressão de 4-HNE foi maior nos grupos privados de tiamina. Quanto à celularidade sanguínea, observou-se apenas maior contagem de mononucleares no grupo submetido à CLP e privado de tiamina. No líquido peritoneal, a contagem de leucócitos totais, mononuleares e monócitos foi mais elevada nos grupos CLP, mas sem relação com o tipo de dieta. No entanto, no líquido peritoneal o grupo CLP deficiente em tiamina revelou população bacteriana significativamente menor que o grupo alimentado com ração completa e os grupos sham. Concluiu-se que a deficiência de tiamina associou-se com aumento da morte bacteriana na cavidade peritoneal, aumento do estresse oxidante, e mudanças na resposta inflamatória. Palavras-chave: Tiamina. Sepse. Estresse oxidante. Inflamação. Modelo de sepse.A sepse é uma condição de elevada letalidade muito frequente em pacientes graves e pode estar associada à deficiência de vitamina B1 ou tiamina. Sendo a tiamina fundamental para produção de energia, restauração do poder redutor e síntese de ribose e desoxirribose celulares, o objetivo deste estudo foi avaliar o efeito da deficiência de tiamina sobre a resposta inflamatória, através da medida de interleucinas, o estresse oxidante, pela determinação do 4-hidróxi 2-nonenal (4-HNE) um produto de peroxidação de lipídeos de membrana e a migração celular em modelo experimental de sepse. Em um primeiro experimento foi determinada a concentração de pirofosfato de tiamina (PPT) no sangue de camundongos c57bl6 alimentados com ração completa e com ração deficiente em tiamina, para determinação do tempo necessário para a indução de deficiência dessa vitamina. Em um segundo experimento foi utilizada a ligadura e perfuração cecal (CLP) como modelo de sepse em quatro grupos: SHAM ração completa, SHAM ração deficiente em tiamina, CLP ração completa, CLP ração deficiente em tiamina. As concentrações de PPT no sangue foram determinadas por cromatografia líquida de alta eficiência. As dosagens séricas e no líquido peritoneal de TNF-&#945;, IL-1&#946;, IL-6, KC e MCP-1/CCL2 foram realizadas por ELISA. O nível de 4-hidroxi,2-nonenal (4-HNE) no fígado foi avaliado por Western Blot. Contagem de leucócitos no sangue e no líquido peritoneal foi feita por microscopia óptica. Foi avaliada a concentração de bactérias no líquido peritoneal. Nos animais alimentados com ração completa a concentração média de PPT foi 303 42,6 nM, e a deficiência de tiamina foi induzida após 10 dias de ingestão da ração pobre em tiamina, quando observou-se concentração de 12,5 2,4 nM. No lavado peritoneal dos animais submetidos à CLP e privados de tiamina observou-se nível significativamente maior de TNF-&#945; e MCP-1. A IL-1&#946; foi menor no sangue do mesmo grupo. A expressão de 4-HNE foi maior nos grupos privados de tiamina. Quanto à celularidade sanguínea, observou-se apenas maior contagem de mononucleares no grupo submetido à CLP e privado de tiamina. No líquido peritoneal, a contagem de leucócitos totais, mononuleares e monócitos foi mais elevada nos grupos CLP, mas sem relação com o tipo de dieta. No entanto, no líquido peritoneal o grupo CLP deficiente em tiamina revelou população bacteriana significativamente menor que o grupo alimentado com ração completa e os grupos sham. Concluiu-se que a deficiência de tiamina associou-se com aumento da morte bacteriana na cavidade peritoneal, aumento do estresse oxidante, e mudanças na resposta inflamatória. / Sepsis is a prevalent condition in critically ill patients and may be associated with thiamine deficiency (TD). Since thiamine is important for energy production, redactor power recovering and ribosis and desoxirribosis synthesis, the aim of this study was to evaluate TD effect in inflammation, oxidative stress and cell recruitment in a sepsis model. Thiamine pyrophosphate (TPP) normal concentration was determined in blood of c57bl6 mice fed with AIN93G chow and also in animals fed with similar AIN93G chow without thiamine in order to determine the time required to produce TD. Another experiment was carried out with cecal ligation and puncture (CLP) as the sepsis model with four groups: SHAM with AIN93G complete chow, SHAM with TD chow, CLP with AIN93G complete chow and CLP with TD chow. TPP blood concentrations were determined by HPLC/Fluorescence. Blood and peritoneal liquid TNF-alpha, IL-1, IL-6, KC and MCP-1/CCL2 determinations were performed by ELISA. The expression of 4-HNE was performed by Western Blot. Blood and peritoneal liquid leukocytes counting were performed by optical microscopy. Peritoneal liquid bacterial concentration was determined. Blood TPP mean concentration in AIN93G complete chow was 287.9 27.8 nM and TD occurred in 10 days in TD chow group and blood concentration in this group was 12.5 2.4 nM. Peritoneal liquid TNF-alpha and MCP-1 concentrations were significantly greater in CLP with TD chow group than the other groups. Blood IL1-&#946; was lower in the same group. Liver 4-HNE expression was highest in TD groups. Blood mononuclear number was greater in CLP TD chow group the others. Peritoneal liquid leukocites, mononuclears and neutrophils numbers were detected in greater number in the same group. However, peritoneal liquid bacterial concentration was significantly lower in the same group. In coclusion TD was associated with greater bacterial killing in peritoneal liquid, greater oxidative stress and change in inflammatory response.

O manganês (Mn) é um elemento químico abundante na natureza, principalmente em minérios e presente também em alimentos e na água. É o cofator de enzimas importantes, como a superóxido dismutase mitocondrial. Entretanto, mineradores e outras pessoas expostas a produtos manufaturados de Mn podem apresentar uma concentração excessiva desse metal no cérebro, adquirindo uma desordem neurológica similar ao mal de Parkinson conhecida por manganismo. Basicamente a neurotoxicidade do Mn pode estar associada com os vários estados de oxidação que ele pode alcançar, gerando espécies reativas de oxigênio durante a interconversão dessas espécies. Dessa forma, neste trabalho sintetizamos e avaliamos as propriedades pró-oxidantes e neurotóxicas de complexos de Mn(III) com desferrioxamina, [Mn(dfb)]; acetohidroxamato, [Mn(aha)3]; citrato, [Mn(cit)]; cloro-salen, EUK 8; e aceto-salen, EUK 108. Tais compostos são propostos como miméticos da SOD e/ou catalase, entretanto podem apresentar atividade pró-oxidante. Estes complexos foram caracterizados espectrofotometricamente (UV/Vis e IV) e por voltametria cíclica. Foram determinadas as absortividades molares dos complexos [Mn(aha)3], EUK 8 e EUK 108. Os EUK\'s apresentaram dois processos redutivos, sendo apenas um reversível, enquanto o [Mn(cit)] apresentou apenas um processo redutivo reversível e os hidroxamatos [Mn(dfb)] e [Mn(aha)3] não apresentaram processos redox na faixa de potenciais utilizada. Em teste de lipofilicidade todos os complexos apresentaram maior afinidade pela fase aquosa, sendo muito pouco particionados para a fase orgânica. Através do ensaio de supressão de fluorescência de calceína foi possível estabelecer que os EUK\'s são relativamente mais estáveis do que os outros complexos, sendo o [Mn(aha)3] o menos estável dos compostos estudados. Nas análises de atividade pró-oxidante, o [Mn(dfb)] oxidou fortemente a sonda mesmo na ausência de outros cofatores, mas este processo é dependente da concentração de O2 no meio. Os EUK\'s atuaram como pró-oxidantes em função da concentração de peróxido no meio. A atividade pró-oxidante foi suprimida por ascorbato, glutationa e Trolox&#174;, que agiram como antioxidantes, sugerindo implicações para a terapia do manganismo. O teste de toxicidade aguda em paulistinhas (Danio rerio) adultos resultou na mortalidade de alguns animais quando expostos a [Mn(dfb)] e [Mn(aha)3]. Comparando o telencéfalo de peixes expostos ao [Mn(dfb)] com um controle em microscópio, não se visualizou nenhuma alteração morfológica na região do núcleo dorsal, indicando que o complexo não causou nenhum dano visível nessa região. / Manganese (Mn) is an abundant element which is present also in food and water. It is the cofactor of important enzymes such as mitochondrial superoxide dismutase. However, miners and other occupationally exposed individuals may present an excessive load of Mn in brain and develop manganism, a neurological disorder akin to Parkinson Disease. Basically, Mn neurotoxicity may stem from its wide redox cycle, generating reactive oxygen species in the process of converting from one oxidation state to another. Thus, in this work we synthesized and evaluated the pro-oxidant and neurotoxic characteristics of Mn(III) complexes with desferrioxamine, [Mn(dfb)]; acetohydroxamate, [Mn(aha)3]; citrate, [Mn(cit)]; chlorosalen, EUK 8; and aceto-salen, EUK 108. Such compounds are proposed as mimetics of superoxide dismutase and/or catalase, however they may also be prooxidant. These complexes were characterized spectrophotometrically (UV/Vis and IR) and by cyclic voltammetry. Molar absorptivities were determined for [Mn(aha)3], EUK 8 and EUK 108. EUK\'s displayed two reductive processes, only one of which was reversible, while [Mn(cit)] displayed only one (reversible) reductive process and hydroxamates [Mn(dfb)] and [Mn(aha)3] did not display redox processes in the working range of potentials. Lipophilicity tests showed that all complexes have very low partition to the organic phase. Calcein fluorescence quenching studies showed that both EUK complexes are relatively more stable than the others, while [Mn(aha)3] is the least stable. In the pro-oxidant activity studies, [Mn(dfb)] strongly oxidized the fluorescent probe even in the absence of ancillary substances such as peroxide. However, this effect was dependant on O2 saturation in the solution. Both EUK acted as pro-oxidants with a linear dependence on peroxide concentration. Pro-oxidant activity was eliminated by the treatment with antioxidants such as ascorbate, glutathione and Trolox®, which is of interest for the therapy of manganism. In the acute toxicity tests induced some mortality in adult Danio rerio exposed to [Mn(dfb)] or [Mn(aha)3]. Comparison of the telencephalus of [Mn(dfb)]-exposed individuals with controls failed to indicate morphological alterations in the dorsal nucleus area, indicating that the complex did not affect visibly this brain region.