Considerando que o colágeno tipo V (Col V) pode ser exposto em processos de remodelamento tecidual, gerando autoimunidade em diversas patologias, postulamos que a administração oral de Col V possa modular a inflamação e remodelamento da sinovite articular experimental, evitando a destruição articular. Neste estudo a artrite foi induzida em ratos Lewis, machos com aproximadamente 250g, por injeção intra-articular de 500 ug de albumina de soro bovino metilada (mBSA) emulsificada em adjuvante de Freund completo (ACF) (10 ul), seguido por reforços intra-articulares de mBSA (500 ug) em solução salina (50 ul), após 7 e 14 dias da primeira injeção (grupo com artrite induzida; AI). Animais sem indução de artrite receberam solução salina (50 ml) por via intra-articular (grupo controle; CT). Após a primeira injeção de mBSA/ACF, a suplementação de Col V bovino (300ul/500ug) foi administrada por via oral nos animais com AI, durante 15 e 30 (AI-ColV15, n=10; AI-ColV30, n=10 ) dias e nos animais CT por 30 (CT-ColV30, n=10) dias. Nossos dados demonstraram que após 15 e 30 dias, a administração oral de Col V levou à diminuição do edema e infiltrado inflamatório severo, conteúdo total de fibras de colágeno, colágeno tipo I, subpopulação de linfócitos, macrófagos, IL-1beta, IL-10 e metaloproteinase 2 no tecido sinovial, e redução IL-1beta, TNFalfa, IL-17 e IL-10 no soro. Ocorreu maior expressão de caspase 9 no tecido sinovial dos animais que receberam o Col V. Pode-se concluir que a suplementação com Col V bovino reduziu a inflamação sinovial e resposta fibrótica independentemente do tempo, possivelmente por aumento da apoptose das células inflamatórias / Whereas type V collagen (Col V) can be exposed in tissue remodeling process, leading to autoimmunity in various pathologies, we postulate that the oral administration Col V can modulate inflammation and remodeling of joint experimental synovitis, preventing joint destruction. In this study, arthritis was induced in Lewis male rats of approximately 250g, by intra-articular injection of 500 ?g serum albumin methylated from bovine serum (mBSA) (500 ug) emulsified in complete Freund\'s adjuvant (CFA) (10 ul), followed by stiffeners intraarticular of mBSA (500 ug) in saline (50 ul) after 7 and 14 days from the first injection (group induced arthritis; AI). Animals received no arthritis induction brine (50 ul) by intraarticular (control group; CT). After the first injection of mBSA / CFA supplementation Col V bovine (300ul / 500ug) was administered orally in animals with AI for 15 and 30 (AI-ColV15, n = 10, I-ColV30, n = 10) days and animals CT per 30 (CT-ColV30, n = 10) days. Our data showed that after 15 and 30 days, oral administration of Col V led to the reduction of edema and severe inflammatory infiltrate, total content of collagen fibers, collagen type I, subpopulation of lymphocytes, macrophages, IL-1beta, IL-10 and metalloproteinase 2 in synovial tissue and reduced the IL-1beta, TNFalfa, and IL-17 IL-10 serum. There increased expression of caspase-9 in the synovial tissue of animals receiving Col V. It can be concluded that supplementation with bovine Col V reduced synovial inflammation and fibrotic response regardless of time, possibly by increased apoptosis of inflammatory cells

O crescimento gengival induzido por ciclosporina-A (CG) é caracterizado por uma variedade de sinalizações que envolvem fatores de crescimento e proteoglicanos, porém pouco compreendidas. Investigamos a expressão gênica dos proteoheparans sulfato de superfície celular sindecam-2 (SDC-2), -4 (SDC-4) e betaglicam nesse CG. A quantidade total e relativa de glicosaminoglicanos sulfatados (GAGs) e a distribuição de SDC-2 e SDC-4 no tecido gengival também foram analisadas. Métodos: A expressão de mRNA dos proteoglicanos SDC-2, SDC-4 e betaglicam foi analisada pela reação de polimerase em cadeia e transcrição reversa (RT-PCR) em amostras gengivais de 9 indivíduos com CG (grupo CsA) e 6 com gengiva normal (grupo controle). Os GAGs foram extraídos e purificados dos tecidos gengivais e analisados tanto por eletroforese em gel de agarose quanto por espectrofotometria. Foi realizada uma avaliação imunohistoquímica dos tecidos com anticorpos para SDC-2 e SDC-4, para sua localização nos tecidos. Os grupos foram comparados pelo teste t de Student. Resultados: Todos os proteoglicanos estudados mostraramse aumentados no grupo CsA (165% para SDC-2, 308% para SDC-4 e 42% para betaglicam), comparativamente ao grupo controle (P < 0.0001). Não foram observadas diferenças significativas na quantidade total e relativa de GAGs. A imunohistoquímica mostrou uma distribuição marcante de SDC-2 e SDC-4 no componentes epitelial, conjuntivo, vascular, nervoso e inflamatório, incluindo os compartimentos celulares e matriciais de toda a casuística. Nossos resultados revelam expressão aumentada de mRNA de SDC-2, SDC-4 e betaglicam no crescimento gengival induzido pela ciclosporina-A, porém não se observaram diferenças na quantidade de glicosaminoglicanos sulfatados em relação ao tecido gengival não exposto ao fármaco. / Cyclosporin-induced gingival overgrowth (CIGO) comprises a variety of signaling pathways including growth factors and proteoglycans that remains not fully understood. We investigated the gene expression of the cell-surface heparan sulfate proteoglycans syndecan-2 (SDC-2), -4 (SDC-4) and betaglycan in CIGO. Total and relative amounts of sulfated glycosaminoglycans (GAGs) and the distribution of SDC-2 and SDC-4 in the gingival tissue were also analyzed. Methods: mRNA expression of the proteoglycans SDC-2, -4 and betaglycan was analyzed by reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR) in gingival samples obtained from 9 individuals with CIGO and 6 with a normal gingiva (control group). GAGs were extracted and purified from gingival tissues and analyzed by agarose gel electrophoresis and spectrophotometry. An immunohistochemical evaluation using panels of antibodies for SDC-2 and -4 was performed for localization in the tissues. Groups were compared by the Student's t test. Results: All proteoglycans expressions revealed increase in the CIGO group (165% for SDC-2, 308% for SDC-4 and 42% for betaglycan) compared to the control group (P < 0.0001). No significant differences were observed for the total and relative amounts of GAGs. Immunohistochemistry showed a marked distribution of SDC-2 and SDC-4 in gingival epithelial, connective, vascular, neural and inflammatory components comprising cellular and matrix environments in both groups. Our results reveal increased mRNA expression of SDC-2, SDC-4 and betaglycan in CIGO, but no significant differences in the sulfated glycosaminoglycans component in situ.

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Rio de Janeiro / A cicatrização de feridas cutâneas visa restaurar a integridade da pele, objetivando um fechamento rápido da lesão e a formação de uma cicatriz funcional e esteticamente satisfatória. Diversos modelos in vivo têm sido estudados a fim de caracterizar diversos componentes e mecanismos envolvidos no reparo tecidual e avaliar os efeitos de potenciais compostos terapêuticos que aceleram o processo de cicatrização. O óleo extraído da gordura subcutânea de capivara possui certas propriedades, entre elas está o seu uso em ferimentos externos com o intuito de acelerar o processo cicatricial, embora tal evento não seja confirmado em pesquisas experimentais. O presente estudo teve como objetivo investigar os possíveis efeitos da aplicação tópica de óleo de capivara em feridas cutâneas induzidas em camundongos Swiss, avaliando sua interferência macro e microscópica no processo de cicatrização das lesões. A lesão foi realizada no dorso dos animais, que receberam aplicação tópica do óleo de capivara (0,1 ml) durante 3, 7, 14 e 21 dias de pós-operatório (PO), conforme protocolo estabelecido. Ao final dos dias, foi realizada eutanásia dos animais e fragmentos de lesão e pele adjacente foram coletados e processados para a microscopia de luz. Cortes histológicos da amostra foram corados com hematoxilina e eosina, azul de toluidina, picro sirius red, resorcina fucsina de Weigert, e imunomarcadas para detecção de antígeno nuclear de proliferação celular. Foram analisados macroscopicamente o aspecto geral da lesão, contração da lesão e reepitelização, e microscopicamente a espessura da neoepiderme, quantidade de leucócitos polimorfonucleares (PMN) e mastócitos, proliferação celular na epiderme e derme, e avaliação das fibras de colágeno e do sistema elástico-microfibrilar na matriz extracelular da derme cicatricial. Os animais tratados topicamente com o óleo de capivara mostraram, comparados ao grupo controle que não recebeu tratamento, melhor desenvolvimento da crosta de fibrina nas fases iniciais da cicatrização e desaparecimento da mesma antes do 14 dia PO; maior contração e reepitelização da área da lesão, bem como neoepiderme mais espessa em 7 dias PO; aumento do número de leucócitos PMN em 3 dias PO e sua gradativa redução nos dias subsequentes e diminuição do número de mastócitos em 21 dias PO. Além disso, no grupo tratado com óleo de capivara foi observada uma benéfica modulação das fibras colágenas e elásticas presentes na matriz extracelular da derme, apresentando aceleração da deposição de fibras de colágeno do tipo I e melhor organização dessas fibras no tecido, bem como aceleração da elastogênese com o aparecimento das fibras do sistema elástico-microfibrilar a partir do 7 dia PO. O presente trabalho demonstrou que o emprego tópico do óleo de capivara em feridas cutâneas de camundongos interfere favoravelmente no processo de cicatrização, acelerando o fechamento da ferida e a reparação da epiderme e derme / The cutaneous wound healing aims to restore the integrity of the skin, aiming a quick closing of the lesion and a functional and aesthetically satisfying scar formation. Several in vivo models have been studied to characterize different components and mechanisms involved in tissue repair and evaluate the effects of potential therapeutic compounds which accelerate the healing process. The oil extracted from the subcutaneous fat of capybara has certain properties, among them is its use in external injuries in order to accelerate the healing process, although this event is not confirmed by experimental research. The present study aimed to investigate the possible effects of topical application of capybara oil in cutaneous wounds induced in Swiss mice, assessing their macro and microscopic interference in the process of wound healing. Lesion was created on the backs of animals which received topical application of capybara oil (0,1 ml) during 3, 7, 14 and 21 days postoperatively (PO), according to established protocol. At the end of the days, euthanasia of animals was performed, lesions and adjacent skin fragments were collected and processed for light microscopy. Sections were stained with hematoxylin-eosin, toluidine blue, picro sirius red, Weigerts resorcin fuchsin, and immunostained for proliferating cell nuclear antigen. Were examined macroscopically the general appearance of the lesion, wound contraction and reepithelialization, and microscopically the neoepidermis thickness, amount of polymorphonuclear (PMN) leukocytes and mast cells, cell proliferating in the epidermis and dermis, and evaluation of collagen and microfibril-elastin fibers system in extracellular matrix (ECM) of dermal scarring. The animals treated topically with capybara oil showed, compared to control group that received no treatment, better development of fibrin crust in the early stages of healing and your disappearance before 14th PO day; higher contraction and reepithelialization of the lesion area, as well as neoepidermis thicker in 7 days PO; increase in PMN leukocytes in 3 days PO and its gradual reduction in subsequent days and reduced number of mast cells in 21 days PO. Furthermore, was observed in the group treated with capybara oil a beneficial modulation of collagen and elastic fibers present in the dermis ECM, presenting accelerating type I collagen fibers deposition and better organization of these fibers, as well as accelerating elastogenesis with emergence of microfibril-elastin fibers system from 7th PO day. The present study showed that topic employment of capybara oil in cutaneous wound on mice interfere favorably in the healing process, accelerating wound closure and repair of the epidermis and dermis

A Diabetes Mellitus Gestacional (DMG) pode ser definida como intolerância a carboidrato durante a gravidez e estima-se que pode afetar 10-22% de todas as pacientes grávidas. Durante a gravidez podem surgir diversas complicações para o feto como risco elevado de aborto espontâneo, anormalidades congênitas e morbidade e mortalidade neonatal. Entretanto, podem surgir também alterações morfofuncionais em diversos órgãos da mãe diabética, porém isso não é bem estabelecido. Investigar se haverá ou não alterações bioquímicas e histopatológicas em diversos órgãos, como hipófise, útero, placenta e pâncreas de ratas grávidas com diabetes mellitus durante e no final da gravidez e compará-las . Além disso, investigar se há alteração na matriz extracelular (MEC) da hipófise desses animais. No 5 dia de vida, ratas Wistar foram divididas em dois grupos: um tratado com estreptozotocina (Grupo Diabético / DIAB), na dose de 90 mg/kg, subcutâneo e outro grupo, que foi tratado com veículo (tampão citrato/CTR). Aos 90 dias de vidas, foram submetidas ao cruzamento. Após isso, foram sacrificadas no 11 e 21 dia de gravidez. Foram avaliados glicemia e bioquímica maternal e número de implantes .O pâncreas, útero, placenta e hipófises foram coradas com Hematoxilina e Eosina e somente as hipófises foram coradas com Massom e Picrosirius, para avaliação da MEC.Os animais diabéticos tanto do 11 quanto do 21 dia apresentaram uma redução no número de implantes, menor peso e maior glicemia e colesterol total, em relação aos animais controle independente do dia da gravidez. Não foi verificada diferença dos níveis de triglicerídeos entre os grupos não diabéticos e diabéticos, independente dos dias. Entretanto, os animais diabéticos que finalizaram o período de gestação apresentaram uma maior glicemia maternal em relação ao grupo diabético do 11 dia. Pâncreas de ratas diabéticas do 21 dia apresentaram vacuolização intracitoplasmática das ilhotas, insulite,migração de células inflamatórias, espessamento da parede do vaso e fibrose periductal e vascular. Essas alterações foram verificadas com bem menor intensidade nos animais diabéticos do 11 dia. Foi verificado que a placenta de animais diabéticos apresenta congestão na interface materno-fetal, migração celular, maior concentração de vasos maternos e fetais, mas em forma irregular , necrose e vacuolização. A hipófise de animais diabéticos mostraram células cromófobas agregadas, aumento da espessura de fibras de colágeno vermelhas da MEC, em contraste com o controle, que foi visualizado fibras em verde e em formato de feixe. A diabetes desempenhou um total remodelamento da hipófise. Gravidez de animais diabeticos mostraram maior dano ao pâncreas e placenta, especialmente no final da gravidez. Em consequência dessa alterações, esses animais diabéticos apresentaram hiperglicemia, maior colesterol total, porém menor peso materno, número de implantes e sem alterações nos triglicerídeos. Esse é o primeiro estudo a demonstrar remodelamento tecidual em alguns elementos da MEC na hipófise, como espessamento da camada da MEC e fibras de colágeno em verde. Alterações da MEC da hipófise são provavelmente devido ao processo de diabetes na gestação. / Gestational Diabetes Mellitus (GDM) can be defined as carbohidrat intolerance during pregnancy and it may affect 10-22% off all pregnant pacients. During pregnancy can surge lots of complications to the fetus such as high risk of spontaneous abortion, congenital abnormalities and neonatal morbity and mortality. However, it can also surge morphofunctional alterations in several organs of the diabetic mother, but it has not been well established .To investigate if there is going to be biochemical and histopathological alterations in several organs, such as pituitary, uterus, placenta and pancreas of pregnant diabetics rats during and in the end of pregnancy and compared them. Furthermore, to investigate if there is pituitary alteration of the extracellular matrix (ECM) in these animals. On the 5th day of life, Wistar rats were divided in two groups: one treated with streptozotocin (Diabetic Group/DIAB) , with the dose of 90 mg/kg, subcutaneous and another group , treated with vehicle (citrate buffer/CTR). At 90 days of life, they were mated . After, they were sacrified at 11o e 21o days of pregnancy. Were evaluated maternal glicemia and biochemistry and implant numbers. The pancreas, uterus,placenta e pituitary were stained with Hematoxilin and Eosin and only the pituitary were stained with Masson and Picrosirius, for ECM evaluation. Diabetic animals of 11o day as well as 21o days during pregnancy showed a reduced implant numbers, reduced weight and higher glicemia and total cholesterol , compared with control animals independent of pregnancy day. It was not verified difference in triglycerides levels between non diabetic and diabetic animals, independent of the day. However, diabetic animals that concluded the gestational period showed a higher maternal glicemia compared with 11o day diabetic group. Pancreas of 21o days diabetic animals showed islets intracitoplasmatic vacuolization, insulitis, inflammatory cell migration, thickness of wall vessel and periductal and vascular fibrosis. These alterations were verified in low intensity in 11o day diabetic animals. It was verified at the placenta of diabetic animal congestion in the interface maternal-fetal ,cell migration , higher concentration of maternal and fetal vessels , but in irregular shape , necrosis and vacuolization.The pituitary of diabetic animals showed chromophobs cells aggregation, stiffness of red collagen fibers of ECM , in contrast of control, that was visualized green ones and in bundle shape . Diabetes performed a total tissue remodeling in pituitary . Pancreas of diabetic pregnant animals showed a more damage pancreas and placenta, especially in the end of pregnancy.In consequence of these alterations,these diabetic animals presented hyperglycemia, higher total cholesterol , but low maternal weight , implant numbers and no changes in triglycerides. This study is the first to demonstrate that during experimental gestational diabetes occurs a tissue remodeling of some elements of ECM in pituitary, such as stiffness of ECM and presence of red collagen fibers. Control animals presented a thin ECM layer and green collagen fibers.Pituitary alterations in ECM probably are due diabetes process during pregnancy.

Introdução: O remodelamento da matriz extracelular no líquen escleroso (LS) caracteriza-se histologicamente por uma faixa hialinizada situada predominantemente na derme superficial, semelhante ao que ocorre na lipoidoproteinose (LPE), uma genodermatose rara, na qual ocorre deficiência na produção da proteína 1 da matriz extracelular (ECM-1). Recentemente, em casos de LS foram descobertos auto-anticorpos contra a ECM-1 e um novo caminho foi proposto para desvendar a sua etiopatologia. O LS também é freqüentemente comparado com a Esclerodermia, visto que alguns autores consideram que são espectros de uma mesma doença. Na Esclerodermia e na LPE há aumento do colágeno tipo V (COL V), mas pouco se sabe sobre este tipo de colágeno no LS. Assim, o objetivo do presente trabalho foi demonstrar a localização e a quantidade de COL V e ECM-1 nas vulvas de pacientes com LS. Materiais e métodos: foram estudadas 21 biópsias de pacientes com LS vulvar e 21 biópsias de vulvas normais. A morfometria foi realizada nas imagens geradas através da imunofluorescência marcada com anticorpos contra os colágenos I (COL I), III (COL III) e V, e também nas de imunoistoquímica para ECM-1. Ademais, utilizou-se microscopia confocal a laser para visualizar o COL V e a ECM-1 na mesma lâmina. Resultados: Peles do grupo controle mostraram fraca e homogênea distribuição das fibras de COL I, III e V na imunofluorescência. Em contraste, peles com LS exibiram desarranjo da arquitetura da derme superficial e difuso aumento da fluorescência das fibras de COL I, III e V na faixa hialina. A fração de área das fibras de COL I, III, e V foram significativamente maiores nas peles de pacientes com LS em relação ao controle (p<0,05). Peles controles mostraram co-localização da ECM-1 e do COL V na parede de pequenos vasos e ao longo da membrana basal. Entretanto, no LS houve perda de expressão da ECM-1 na parede dos vasos sanguíneos (p<0,001) e difuso aumento da fluorescência verde do COL V (p<0,001). Conclusão: Houve inversa relação entre o COL V e a proteína ECe constatado pela histomorfometria, imunofluorescência, imunoistoquímica e reconstrução tridimensional, sugerindo que estratégias terapêuticas para prevenir o aumento da síntese de COL V e a diminuição da ECM-1 poderão ser promissoras no prognóstico e tratamento do LS / Background: The extracellular matrix remodeling in lichen sclerosus (LS) is characterized in routine light microscopy by a hyalinized band predominantly located in the superficial dermis. The same pattern occurs in the lipoid proteinosis (LPE), a rare genodermatosis, in which the production deficiency of extracellular matrix protein 1 (ECM-1) is responsible for triggering the disease. Recently, in cases of LS, autoantibodies were discovered against ECM-1 and a new way to unravel their aetiopathology was proposed. LS is also frequently compared with Scleroderma, since some authors consider that they are spectra of a similar disease. In Scleroderma and LPE there is an increase of type V collagen (COL V), but little is known about this type of collagen in LS. Thus, the objective of the current study was to demonstrate the location and quantity of COL V and ECM-1 on the vulvas of patients with LS. Materials and methods: Twenty one biopsies from patients with vulvar LS matched with 21 biopsies from normal vulvas were included in this study. Immunofluorescence against type I (COL I), (COL III) and V collagen and immunohistochemistry for ECM-1 was performed and the slides were analysed by morphometry. Furthermore, laser confocal microscopy was used to visualize the COL V fibers and the ECM-1 protein on the same slide. Results: Skins of the control group showed low and homogeneous distribution of fibers COL I, III and V in immunofluorescence. In contrast, skins with LS exhibited disruption of the architecture of the superficial dermis and diffuse increase in fluorescence fibers COL I, III and V in the range hyaline. The area fraction of fibers COL I, III, and V were significantly higher in the skin of patients with LS compared to control (p <0.05). Skins controls showed colocalization of ECM-1 and COL V the wall of small vessels and along the basement membrane. However, the LS had loss of expression of ECM-1 the wall of blood vessels (p <0.001) increase the fluorescence and diffuse green COL V (p <0.001). Conclusion: There was an inverse relationship between COL V and ECM-1 protein in LS as demonstrated by histomorphometry, immunofluorescence, immunohistochemistry and three-dimensional reconstruction, suggesting that therapeutic strategies to prevent the increased synthesis COL V and ECM-1 protein in LS as demonstrated by histomorphometry, immunofluorescence, immunohistochemistry and three-dimensional reconstruction, suggesting that therapeutic strategies to prevent the increased synthesis COL V and decreased ECM-1 may be promising in the prognosis and treatment of the LS

A MMP-2 é uma protease que está envolvida em muitos eventos fisiológicos e patológicos e que compartilha similaridades estruturais com a enzima conversora de angiotensina (ECA), de modo que os inibidores da ECA passaram a ser estudados com relação ao efeito inibitório também sobre a MMP-2. No entanto, este potencial inibitório não foi ainda testado na MMP-2 altamente purificada. Este estudo teve como objetivo investigar o potencial inibitório do captopril sobre a atividade da MMP- 2. Primeiramente, supôs-se que a dissolução do captopril poderia induzir a mudanças no pH de soluções tampão. Em segundo lugar, avaliou-se o efeito direto do captopril sobre a MMP-2 presente no plasma humano e a MMP-2 recombinante humana (rhMMP-2) produzida e purificada de E. coli. As análises de atividade in vitro incluíram zimogramas com gelatina e ensaios fluorimétricos com DQ gelatin. A solubilização do captopril reduziu significativamente o pH da solução tampão 50 mM (p<0,01) mas não alterou o pH da solução tampão 200 mM (p>0,05). Resultados de zimografia do plasma e da rhMMP-2 mostraram inibição da atividade gelatinolítica com significância estatística somente em concentrações iguais ou maiores que 4 e 1 mM de captopril, respectivamente (p<0,05). A presença de captopril nos ensaios de fluorimetria resultaram na inibição significante da atividade de rhMMP-2 somente em concentrações iguais ou maiores que 2 mM (p<0,01), enquanto a rhMMP-2 ativada com APMA apresentou inibição significativa diante de 0,5 mM de captopril (p<0,01). As concentrações de captopril efetivas em inibir a MMP-2 in vitro foram muito superiores àquelas referentes à concentração plasmática máxima encontrada no plasma humano após a administração de uma dose de 50 mg de captopril. Em conjunto nossos resultados sugerem que o captopril não parece promover inibição significativa da MMP-2 nas concentrações relatadas in vivo. Além disso, o pH das soluções tamponantes é um aspecto que requer mais atenção durante ensaios de inibição de protease in vitro. / MMP-2 is involved in many physiological and pathological processes. This protease shares structural similarities with the angiotensin-converting enzyme (ACE), and ACE inhibitors have been described to inhibit MMP-2. However, this inhibitory potential has not been tested using a highly purified MM-2 so far. This study aimed at investigating the inhibitory potential of captopril on MMP-2 activity. First it was tested whether the dissolution of captopril would induce changes in the pH of the solutions. Secondly, the direct inhibitory effect of captopril on plasma MMP-2 and on a recombinant human MMP-2 (rhMMP-2) produced and purified from E. coli was tested. The in vitro activity assays included gelatin zymography and a fluorimetric assay with DQ gelatin. Captopril solubilization significantly decreased the pH of the 50 mM Tris buffer solution (p<0.01) but did not decreased the pH of the 200 mM Tris Buffer solution (p>0.05). Zymography results of plasma and rhMMP-2 showed that inhibition of the activity only reached statistical significance >= 4 and 1 mM of captopril, respectively (p<0,05). The presence of captopril in the fluorimetric assay resulted in a significant inhibition of the rhMMP-2 activity only at concentrations >= 2 mM (p<0.01), whereas APMA-activated rhMMP-2 was inhibited by 0.5 mM of captopril (p<0.01). The captopril concentrations found to inhibit MMP-2 are several times of magnitude higher than the maximum plasma concentration after a dose of 50 mg of captopril. In conclusion, captopril does not seem to cause significant inhibition of MMP-2 in the concentrations found in vivo, and more attention has to be given to the pH of the solutions when testing protease inhibition in vitro.

Considerando que o colágeno tipo V (Col V) pode ser exposto em processos de remodelamento tecidual, gerando autoimunidade em diversas patologias, postulamos que a administração oral de Col V possa modular a inflamação e remodelamento da sinovite articular experimental, evitando a destruição articular. Neste estudo a artrite foi induzida em ratos Lewis, machos com aproximadamente 250g, por injeção intra-articular de 500 ug de albumina de soro bovino metilada (mBSA) emulsificada em adjuvante de Freund completo (ACF) (10 ul), seguido por reforços intra-articulares de mBSA (500 ug) em solução salina (50 ul), após 7 e 14 dias da primeira injeção (grupo com artrite induzida; AI). Animais sem indução de artrite receberam solução salina (50 ml) por via intra-articular (grupo controle; CT). Após a primeira injeção de mBSA/ACF, a suplementação de Col V bovino (300ul/500ug) foi administrada por via oral nos animais com AI, durante 15 e 30 (AI-ColV15, n=10; AI-ColV30, n=10 ) dias e nos animais CT por 30 (CT-ColV30, n=10) dias. Nossos dados demonstraram que após 15 e 30 dias, a administração oral de Col V levou à diminuição do edema e infiltrado inflamatório severo, conteúdo total de fibras de colágeno, colágeno tipo I, subpopulação de linfócitos, macrófagos, IL-1beta, IL-10 e metaloproteinase 2 no tecido sinovial, e redução IL-1beta, TNFalfa, IL-17 e IL-10 no soro. Ocorreu maior expressão de caspase 9 no tecido sinovial dos animais que receberam o Col V. Pode-se concluir que a suplementação com Col V bovino reduziu a inflamação sinovial e resposta fibrótica independentemente do tempo, possivelmente por aumento da apoptose das células inflamatórias / Whereas type V collagen (Col V) can be exposed in tissue remodeling process, leading to autoimmunity in various pathologies, we postulate that the oral administration Col V can modulate inflammation and remodeling of joint experimental synovitis, preventing joint destruction. In this study, arthritis was induced in Lewis male rats of approximately 250g, by intra-articular injection of 500 ?g serum albumin methylated from bovine serum (mBSA) (500 ug) emulsified in complete Freund\'s adjuvant (CFA) (10 ul), followed by stiffeners intraarticular of mBSA (500 ug) in saline (50 ul) after 7 and 14 days from the first injection (group induced arthritis; AI). Animals received no arthritis induction brine (50 ul) by intraarticular (control group; CT). After the first injection of mBSA / CFA supplementation Col V bovine (300ul / 500ug) was administered orally in animals with AI for 15 and 30 (AI-ColV15, n = 10, I-ColV30, n = 10) days and animals CT per 30 (CT-ColV30, n = 10) days. Our data showed that after 15 and 30 days, oral administration of Col V led to the reduction of edema and severe inflammatory infiltrate, total content of collagen fibers, collagen type I, subpopulation of lymphocytes, macrophages, IL-1beta, IL-10 and metalloproteinase 2 in synovial tissue and reduced the IL-1beta, TNFalfa, and IL-17 IL-10 serum. There increased expression of caspase-9 in the synovial tissue of animals receiving Col V. It can be concluded that supplementation with bovine Col V reduced synovial inflammation and fibrotic response regardless of time, possibly by increased apoptosis of inflammatory cells

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O câncer de mama é no Brasil o segundo maior causador de morte entre mulheres. Os hormônios sexuais estão dentre os vários fatores indutores ou promotores da carcinogênese. ADAMTS (uma desintegrina e metaloproteinase com domínios trombospondina) é uma enzima Zn2+/Ca2+dependente. Avaliamos a influência dos hormônios na expressão e localização da ADAMTS-1 em 3 linhagens de mama. qPCR demonstrou que a progesterona estimulou o aumento de mRNA de ADAMTS-1 na MCF-10A e na MDA-MB-231, o tratamento com estrógeno e progesterona estimulou a diminuição. No Western blot observamos nas linhagens MCF-10A e MCF-7 que os hormônios tendem a aumentar os níveis de ADAMTS-1, e o estrógeno estimulou uma acentuada secreção em MCF-7. Na linhagem MDA-MB-231, os tratamentos demonstraram uma tendência a diminuir os níveis de ADAMTS-1 intracelular. Na imunofluorescência e Western blot observamos a predominância de ADAMTS-1 nuclear. Os resultados sugerem que os hormônios regulam a expressão de ADAMTS-1 nas células normais e tumorais, e que está predominantemente presente no núcleo celular. / Breast cancer is the second largest cause of death among women in Brazil. Sex hormones are one of the several inducers factors or cancer promoters. ADAMTS (a disintegrin and metaloproteinase with thrombospondin motifs) are dependent on Zn2+/Ca2+ enzymes. We evaluated influence of hormones on ADAMTS-1 levels and localization in three different breast cell lines. qPCR showed that progesterone stimulated an increase of ADAMTS-1 mRNA in MCF-10A, however, in MDA-MB-231, the treatment by estrogen and progesterone decreased levels. Western blot analysis showed a tendency to increased ADAMTS-1 levels in MCF-10A and MCF-7 due to the hormone treatment. Treatment by estrogen led to a marked secretion in MCF-7. In MDA-MB-231 the treatment showed a tendency to decreased intracellular ADAMTS-1 protein levels. Immunofluorescence and Western Blot we observed ADAMTS-1 predominant in the nucleus. Results suggest that sex hormones regulate the ADAMTS-1 expression in normal and tumoral breast cells, ADAMTS-1 is predominant in the cellular nucleus.

A Parede lateral da faringe parece ser a estrutura central envolvida no colapso da faringe nos pacientes com síndrome da apnéia obstrutiva do sono (SAOS). Os pacientes com roncos e apnéia têm uma faringe mais colapsável associada a um espessamento da musculatura da parede lateral da faringe, em grande parte formada pelo músculo constritor superior da faringe. O endomísio da matriz extracelular do músculo esquelético tem uma íntima relação com as células musculares, influenciando suas propriedades mecânicas e biológicas, podendo modificar seu comportamento e função. As fibras colágenas e elásticas formam o arcabouço do tecido conectivo, enquanto os proteoglicanos e as glicoproteínas estruturais (fibronectina) têm importante papel na propriedade de adesão e hidratação dos tecidos e as metaloproteínas são responsáveis pela degradação dos componentes da matriz extracelular. Os fatores determinantes da complacência excessiva da musculatura da parede lateral são desconhecidos. É possível que a MEC tenha um papel relevante neste aspecto. O objetivo deste estudo é descrever e comparar a densidade dos componentes da matriz extracelular do endomísio da musculatura da parede lateral da faringe em controles, roncadores e apnéicos. Neste estudo prospectivo foram avaliados 61 pacientes maiores de 18 anos e não obesos do Departamento de Otorrinolaringologia do Hospital das Clínicas da Faculdade de medicina da Universidade de São Paulo, com indicação de cirurgias faríngeas no período de 2005 e 2006. Os pacientes foram divididos em três grupos: controles (14 pacientes sem roncos ou SAOS), 18 roncadores primários e 29 pacientes com SAOS. Os espécimes foram obtidos da musculatura da parede lateral da faringe (constritor superior da faringe) durante cirurgias faríngeas. Por meio de análise histoquímica e imunohistoquímica foi determinada a área proprocional do colágeno total, fibras elásticas, colágeno tipos I e III, metaloproteínas 1 e 2, versican e fibronectina, no endomísio destas amostras e comparada entre os grupos. Os resultados foram ainda correlacionados com dados antropométricos. O colágeno tipo I foi o componente mais abundante da matriz extracelular no constritor superior da faringe. Observamos uma correlação positiva entre o colágeno I e a idade (r=0,42, p=0,01) e inversa com o colágeno III (r=-0,28, p=0.027). O índice de massa corpórea também mostrou uma correlação inversa com o colágeno III (r=-0,311, p=0,017). Não houve diferenças estatisticamente significantes para os componentes da MEC entre os grupos. Em resume, a análise histológica da musculatura da parede lateral da faringe de um largo grupo de pacientes com distúrbios do sono, revelaram que a composição da matriz extracelular é relacionada à idade e o peso, e não pode ser envolvida nos mecanismos que levam a colapsibilidade e espessamento da parede lateral da faringe. / The lateral muscular pharyngeal wall appears to be the predominant structure involved in the collapse of the pharynx in obstructive sleep apnea (OSA). OSA patients and snorers have a narrower pharynx which is more susceptible to collapse and is associated with muscle thickening in the lateral pharyngeal wall, largely formed by superior pharyngeal constrictor. The endomysial extracellular matrix of skeletal muscle has an intimate relationship with the muscle cells and has an important influence on its mechanical and biological properties and can modify their behavior and function. Collagen and elastic fibers form the scaffolding of the connective tissue and proteoglycans and structural glycoproteins (fibronectin) have important roles in hydration, resiliency and adhesive properties of the tissues and the matrix metalloproteinases are involved in extracellular matrix components degradation. The determining factors in the compliance of lateral muscular pharyngeal wall are also unknown. It is possible that the ECM has a relevant role in this aspect. Our objective was to determine and compare the density of the components of the extracellular matrix in the deep, structural lateral pharyngeal muscular walls in snorers, OSA and control patients and correlate with age and weight. In this prospective study we evaluated 61 patients older than 18 and nonobese with indications for pharyngeal surgery at the department of Otolaryngology of the Hospital das Clínicas of the São Paulo University, between 2005 and 2006. The patients were divided in three groups: controls (14 patients), 18 primary snorers and 29 OSA patients. We obtained specimens from the lateral pharyngeal muscular wall (superior constrictor muscle) during pharyngeal surgeries. Using histochemical and immunohistochemical analyses, we determined the fractional area of total collagen, elastic fibers, collagen I and III, matrix metalloproteinase 1 and 2, versican and fibronectin in the endomysium of these samples, and compared among groups. Results were further correlated with anthropometric data. Collagen type I was the most abundant component of the ECM within the pharyngeal muscle. There was a positive correlation between collagen I and age (r=0.419, p=0.01) and an inverse one with type III collagen (r=-0.284, p=0.027). Body mass index inversely correlated with collagen type III (r=-0,311, p=0,017). There were no statistically significant differences for any of the components of the ECM among groups. In summary, histological analysis of the lateral muscular pharyngeal wall of a large group of patients with sleep disturbances revealed that its extracellular matrix composition is age and weight related but may not be involved in the mechanisms leading to the collapsibility of the lateral wall of the pharynx.