A endometriose é uma doença de origem multifatorial, caracterizada por presença de tecido endometrial fora da cavidade uterina, responsável por sintomas álgicos com grande impacto na qualidade de vida da paciente, além de ser um dos principais fatores de infertilidade. Muitos estudos já foram realizados no intuito de explicar a etiopatogenia da endometriose, assim como muito tem sido estudado para encontrar novas estratégias de tratamento. Várias linhas de medicamentos têm sido estudadas com este intuito, agindo em diferentes pontos da etiopatogênese da doença, uma delas na inibição de metaloproteinases da matriz extracelular, que tem papel no remodelamento do mesotélio do peritônio e angiogênese. O objetivo deste estudo foi avaliar a influência de uma droga (doxiciclina) de baixo custo, com ação conhecida na inibição das metaloproteinases, em endometriose peritoneal induzida em ratas. Para isso, foram usadas 30 ratas adultas Wistar com lesão induzida de endometriose, divididas em três grupos, um grupo controle (C, n=10) sem tratamento, um grupo onde foi administrado doxiciclina em baixa dose (BD, n=10) e um grupo onde foi realizado doxiciclina em alta dose (AD, n=10). Foi realizada avaliação da área das lesões de cada rata e estudo imunohistoquímico para positividade de anticorpo primário de metaloproteinase de matriz 9 (MMP9) e de inibidor de metaloproteinase de matriz 2 (TIMP2). A doxiciclina atuou reduzindo a área das lesões nos grupos BD e AD (p=0,0052) em relação ao grupo C e reduzindo a expressão do TIMP2 no grupo AD (p=0,0009) em relação aos grupos BD e C. Não houve resultado significativo na expressão da MMP9. / Endometriosis is a multifactorial origin disease, characterized by the presence of endometrial tissue outside the uterine cavity, responsible for painful symptoms with important impact on the life quality of the patient, besides being one of the main factors of infertility. Many studies have already been carried out to explain the etiopathogenesis of endometriosis, and much has been studied to find new treatment strategies. Several lines of drugs have been studied for this purpose, acting at different points in the etiopathogenesis of the disease, one of them in the inhibition of extracellular matrix metalloproteinases, which plays a role in the remodeling of the peritoneum mesothelium and angiogenesis. The purpose of this study was to evaluate the influence of a low-cost drug (doxycycline), with known action on the inhibition of metalloproteinases, in induced peritoneal endometriosis in rats. Thirty adult Wistar rats with endometriosis-induced lesions were divided into three groups: one untreated control group (C, n = 10), one group receiving low dose doxycycline (BD, n = 10) and a group where high dose doxycycline (AD, n = 10) was performed. An evaluation of the lesion area of each rat and immunohistochemical study for primary antibody to matrix metalloproteinase 9 (MMP9) and matrix metalloproteinase inhibitor 2 (TIMP2) was performed. Doxycycline worked by reducing the area of lesions in the BD and AD groups (p = 0.0052) in relation to the C group and reducing the expression of TIMP2 in the AD group (p = 0.0009) in relation to the BD and C groups. There was no significant effect on MMP9 expression in the present study.

O quelóide é um processo cicatricial, com freqüência aumentada em regiões com maior tensão na pele ou onde a pele é mais espessa, caracterizado por exceder-se além dos limites da lesão que o originou e pela tendência à recidiva após sua ressecção. Ambos os sexos são acometidos, com maior incidência entre a primeira e a terceira década de vida e em indivíduos de etnia negra. A relação familial é sugerida como herança autossômica dominante. O quelóide apresenta características moleculares distintas da pele normal envolvendo uma variedade de sinalizações ainda pouco compreendidas e um aumento da expressão de componentes da matriz extracelular, como o colágeno, os glicosaminoglicanos e os proteoglicanos. Este estudo analisou a expressão gênica dos proteoglicanos de superfície celular sindecam-2 e sindecam-4 e dos de matriz extracelular decorim e versicam no tecido derivado de quelóide de indivíduos não tratados em comparação com a pele clinicamente normal. Participaram desse estudo 10 indivíduos portadores de quelóides (grupo Q) e 10 indivíduos não portadores dessa cicatriz (grupo N). A expressão gênica dos proteoglicanos foi amplificada pela reação em cadeia da polimerase por transcrição reversa e analisada através de eletroforese em gel de agarose. Foi realizada a localização dos proteoglicanos nos tecidos através de reação imunohistoquímica com anticorpos para os sindecans-2 e 4. Os grupos foram comparados pelo teste t de Student. Os proteoglicanos de superfície celular mostraram-se aumentados no grupo Q (93% para o sindecam-2 e 152,5% para o sindecam-4) em comparação com o grupo N (P<0,01). Não foram observadas diferenças significativas para os proteoglicanos de matriz extracelular entre os dois grupos. A análise imunohistoquímica mostrou uma distribuição marcante dos sindecans-2 e 4 no componente epitelial, conectivo, vascular e nervoso de toda a casuística. Concluímos que o quelóide apresenta aumento significativo da expressão gênica de sindecam- 2 e sindecam-4, mas não apresenta aumento significativo da expressão gênica de decorim e versicam, em relação à pele normal. / Keloid is a cicatricial process, with frequency increased in regions with bigger tension in the skin or where the skin is thicker, characterized for exceeding beyond the limits of the injury that originated it and for the tendency to relapse after its ressection. Its occurs in both genders, with bigger incidence between the first and the third decade of life and in individuals of black ethnia. The familial relation is consistent with an autosomal dominant inheritance. The keloid presents distinct molecular characteristics of the normal skin involving a variety of still little understood signallings and an increase of the expression of components of the extracellular matrix, as the collagen, the glicosaminoglycans and the proteoglycans. This study analyzed the gene expression of the proteoglycans of cell surface syndecan-2 and syndecan-4 and the ones of extracellular matrix decorin and versican in the keloid tissue from not treated individuals in comparison with the normal skin. Tissue samples was obtained from 10 individuals with keloid (Q group) and 10 individuals with normal skin (N group). The gene expression of the proteoglycans was amplified by reverse transcription polymerase chain reaction and analyzed through agarose gel electrophoresis. The localization of the proteoglycans in the tissues was performed through immunohistochemical reaction using panels of antibodies for syndecans-2 and 4. The groups was compared by the Student?s t test. The proteoglycans of cell surface revealed increased in Q group (93% for sydecan-2 and 152,5% for syndecan-4) in comparison with N group (P<0,01). Significant differences for the proteoglycans of extracellular matrix between the two groups was not observed. The immunohistochemical analysis showed a major distribution of syndecans-2 and 4 in epithelial, connective, vascular and neural components in both groups. We conclude that keloid reveal significant increase of the gene expression of syndecan-2 and syndecan-4, but does not present significant increase of the gene expression of decorin and versican, in relation to the normal skin.

Orientador: Edson Rosa Pimentel / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-21T05:39:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Aro_AndreaAparecidade_D.pdf: 5514361 bytes, checksum: 938312e7fcf5c6bdd9bba11064c61b15 (MD5) Previous issue date: 2012 / Resumo: A utilização de extratos vegetais com atividades farmacológicas pode ser promissora no tratamento de lesões tendíneas, considerando a presença de princípios ativos que estimulam a síntese de componentes da matriz extracelular (MEC). Portanto, o presente estudo teve como objetivo investigar após 7, 14 e 21 dias da lesão, os efeitos da aplicação tópica dos extratos de A. vera e A. chica sobre tendões parcialmente transeccionados de ratos. Os grupos tratados com o extrato da A. chica foram denominados A7, A14 e A21 (controles S7, S14 e S21), e após tratamento com a A. vera foram denominados Av7, Av14 e Av21 (controles B7, B14 e B21). Foram realizadas análises bioquímicas tais como Western blotting, zimografia e dosagens de hidroxiprolina, de proteínas não colagênicas (PNCs) e de glicosaminoglicanos (GAGs); assim como análises estruturais, ultraestruturais e funcionais. Após aplicação do extrato da A. chica, a concentração de PNCs foi menor em A7 e a de hidroxiprolina foi maior em A7 e A21, em relação aos controles. Considerando a MMP-9, menor quantidade foi detectada no grupo A14 comparado ao grupo S14. As isoformas latente, intermediária e ativa da MMP-2 foram observadas em todos os grupos, porém maiores quantidades das isoformas latente e intermediária foram encontradas em A21. Os resultados de Western blotting mostraram menor quantidade de colágenos tipos I e III em A7 comparado ao controle. Maior quantidade de dermatan sulfato (DS) foi detectada em A14, e quantidade inferior de DS e condroitin sulfato (CS) foi observada em A21 comparada ao S21. As medidas de birrefringência detectaram maior organização das fibras de colágeno no grupo A21 em relação ao controle, e as análises ultraestruturais mostraram muitos fragmentos de colágeno na região transeccionada nos grupos S7 e A7. A análise do CatWalk mostrou que os animais tratados com A. chica, exibiram maior pressão de contato das patas durante a marcha no 7° dia. Considerando a aplicação de A. vera, foi observada em SDS-PAGE banda menos intensa referente ao colágeno em Av14, confirmado por Western blotting. O grupo Av21 apresentou maior concentração de PNCs comparado ao seu controle. Na dosagem de hidroxiprolina, os grupos Av7 e Av14 apresentaram maiores concentrações, ao passo que Av21 apresentou valor inferior ao controle. O grupo Av14 apresentou maior concentração de GAGs sulfatados e menor quantidade de DS em relação ao controle. Menor quantidade de MMP-9 foi encontrada em Av14, e menores quantidades das isoformas latente e intermediária da MMP-2 foram observadas em Av7 e Av14 em relação aos controles. Maior quantidade da isoforma ativa da MMP-2 foi observada em Av21 comparado a B21. As medidas de birrefringência detectaram maior organização das fibras de colágeno em Av14 em relação ao controle. Ao passo que as medidas de dicroísmo linear realizadas nos cortes corados com azul de toluidina, mostraram menor organização dos GAGs em Av14 comparado ao controle. Nossa conclusão é que a aplicação tópica dos extratos da A. chica e da A. vera é efetiva na síntese e organização de componentes da MEC durante o processo de reparo / Abstract: The use of plant extracts bearing pharmacological activities may be promising in the treatment of tendon injuries, considering the presence of active principles that stimulate the synthesis of extracellular matrix components (ECM). Therefore, this study aimed to investigate after 7, 14 and 21 days of injury, the effects of topical application of extracts of A. vera and A. chica on the healing of partially transected tendons of rats. The groups treated with the extract of A. chica were called A7, A14 and A21 (controls S7, S14 and S21), and after treatment with A. vera were called Av7, Av14 and Av21 (controls B7, B14 and B21). Biochemical analysis were performed such as Western blotting, zymography and quantification of hydroxyproline, non-collagenous proteins (NCPs) and glycosaminoglycans (GAGs); as well as structural, ultrastructural and functional analysis. After application of the extract of A. chica, the concentration of non-collagenous proteins (NCPs) was lower in A7 and hydroxyproline was higher in A7 and A21, compared to controls. Considering the MMP-9, lower amount was found in A14 compared to S14. The latent, intermediate and active isoforms of MMP-2 were observed in all groups, but larger quantities of latent and intermediate isoforms were found in A21. The results of Western blotting showed a lower amount of collagen types I and III compared to the control A7. Higher amount of dermatan sulphate (DS) was detected in A14 and lower amounts of DS and chondroitin sulfate (CS) were observed in A21 compared to S21. The birefringence measurements showed a higher organization of collagen fibers in the A21 group compared to control, and ultrastructural analysis showed many fragments of collagen in the transected region of groups S7 and A7. Analysis of the Catwalk showed that animals treated with A. chica exhibited a higher contact pressure of the legs during walking on the 7th day. Considering the application of A. vera, less intense band related to collagen was observed on SDS-PAGE in Av14, confirmed by Western blotting. The group Av21had a higher concentration of NCPs compared to the control. In the dosage of hydroxyproline, Av7 and Av14 groups had higher concentrations in relation to their controls, while Av21 showed lower value than control group. The group Av14 had a higher concentration of glycosaminoglycans and lower amount of DS compared to control. Lower amount of MMP-9 was found in Av14, and lower amounts of intermediate and latent isoforms of MMP-2 were observed in Av7 and Av14 compared to controls. A higher amount of the active isoform of MMP-2 was observed in Av21 compared to B21. The birefringence measurements showed a higher organization of collagen fibers in Av14 compared to control. While linear dichroism measurements performed on sections stained with toluidine blue, showed lower organization of glycosaminoglycans in Av14 compared to control. Our conclusion is that the topical application of extracts of A. chica and A. vera is effective in the synthesis and organization of ECM components during the repair process / Doutorado / Biologia Celular / Doutor em Biologia Celular e Estrutural

Orientador: Edson Rosa Pimentel / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-04T02:52:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Hocoya_LuciaMassuda_M.pdf: 1034739 bytes, checksum: b693a6ca4a0d913bdd0884beaa896940 (MD5) Previous issue date: 2005 / Resumo: A valva mitral é uma complexa estrutura de tecido conjuntivo, constituída por proteínas colagênicas, não colagênicas e proteoglicanos. Histologicamente, o folheto valvar é constituído por 4 camadas: auricular, esponjosa, fibrosa e ventricular. A camada fibrosa forma o núcleo estrutural, enquanto a camada esponjosa funciona como amortecedor de choques. A corda tendínea possui 2 camadas distintas, um largo núcleo fibroso e uma camada esponjosa ao redor. Várias anormalidades da valva mitral têm sido constatadas, desde lesões causadas por acúmulo degenerativo de cálcio, endocardite infecciosa e anormalidades relacionadas com alterações da quantidade de colágeno, ácido hialurônico e glicosaminoglicanos. Entre os tratamentos normalmente utilizados, tem-se realizado técnica de reparo de porções da valva danificadas, ou a substituição destas por valvas artificiais ou biopróteses. Para tanto, um melhor conhecimento sobre os aspectos organizacionais e composicionais são necessários, tanto do folheto, como da corda tendínea. Para a análise morfológica, montagem total e cortes histológicos do folheto e corda tendínea foram corados com azul de toluidina e analisados em microscopia de polarização. Feixes de colágeno intensamente birrefringentes foram encontrados altamente organizados na corda tendínea e com orientação multidirecional no folheto, onde fibrilas colágenas vindas da corda tendínea ramificam-se e entrelaçam-se formando uma estrutura em rede no folheto. A metacromasia foi intensa nas regiões de inserção das cordas tendíneas no folheto, ocorrendo de maneira não uniforme. Cortes transversais do folheto mostraram a camada esponjosa, com características de tecido conjuntivo frouxo, e a fibrosa, onde os feixes de colágeno estão densamente arranjados. Para o estudo bioquímico componentes da matriz extracelular foram extraídos com cloreto de guanidina 4M, fracionados em DEAE-Sephacel e analisados em SDS-PAGE. As proteínas não colagênicas encontradas mostraram Mr entre 19 e 179 kDa e 19 e 235 kDa para o folheto e corda tendínea respectivamente. Várias proteínas similares são encontradas em ambos os tecidos. Bandas polidispersas em torno de 67 kDa e 80-100 kDa foram encontradas, as quais provavelmente correspondem aos pequenos proteoglicanos fibromodulim e decorim respectivamente. Análise em gel de agarose-poliacrilamida revelou a presença de banda polidispersa e matacromática, indicando a presença de proteoglicanos de alto peso molecular, que provavelmente trata-se do versicam, tanto no folheto, como na corda tendínea. A análise de GAGs mostrou a presença de condroitim sulfato e dermatam sulfato nas duas regiões. De acordo com nossos estudos bioquímicos e morfológicos, podemos concluir que: 1) A corda tendínea apresentou maiores quantidades de proteínas e glicosaminoglicanos que o folheto; 2) Pequenos e grandes proteoglicanos estão presentes em ambos os tecidos; 3) Os feixes de colágeno estão altamente organizados na corda tendínea, enquanto assumem várias direções no folheto; 4) A distribuição de proteoglicanos no folheto ocorre de maneira não uniforme, provavelmente devido a atuação também não uniforme de forças compressivas nesta estrutura / Abstract:The mitral valve is a complex connective tissue structure, constituted by collagenous proteins, non collagenous proteins and proteoglycans. Structurally the valve leaflets are composed of four main layers: auricularis, fibrosa, spongiosa and ventricularis. The fibrosa layer forms the structural core of the valve, while the spongiosa has an important role in absorption of shock. The chordae tendineae has two distinct layers, a large fibrous core surrounded by a spongenous layer. Several abnormalities of mitral valve have been reported, as the result of injuries caused by degenerative calcium accumulation, infectious endocarditis and disorders associated with collagen content, hyaluronic acid and glycosaminoglycans abnormalities. Among the treatments normally used, have been realized repair techniques of portions of the valve or replacement of these with a prosthetic valve or bioprostheses. Detailed information about organization and composition aspects of the leaflets and chordae tendineae are necessary. For morphological analysis, whole mounts and histological sections of leaflets and chordae tendineae were stained by toluidine blue. Analysis of whole mounts in polarization microscopy showed an intense brightness of the collagen fibrils, demonstrating the high molecular organization of the collagen in the chordae tendineae while in the valve leaflets collagen fiber is multidirectional. In this case, collagen fibrils coming from the chordae tendineae branch cross each other forming a network-like structure. Intense metachromasy was observed in leaflet region of chordae tendineae insertion, with a non uniform distribution. Leaflets transversal sections showed the spongiosa layer with soft connective tissue characteristics, and the fibrosa, where collagens bundles are highly arranged. For the biochemical study extracelular matrix components were extracted with 4M guanidinium chloride, fractionated in DEAE-Sephacel and analysed by SDS-PAGE. The non collagenous proteins found showed Mr values between 19-179kDa and 19-235kDa to the leaflet and chordae tendineae respectively. Several similar proteins were found in both tissues. Polidisperses bands around 70kDa and 80-100kDa which probably correspond to the small proteoglycans fibromodulin and decorin respectively were found. The analysis in agarose-polyacrylamide gel revealed a polydisperse and metachromatic band in the leaflet and chordae tendineae, indicating the presence of proteoglycans of high molecular weight presumables versican. According to our morphological and biochemical studies, it may be concluded that: 1) The chordae tendineae showed larger amounts of proteins and glycosaminoglycans than the leaflet; 2) Small and large proteoglycans are present in both tissues; 3) The collagen bundles are highly organized in the chordae tendineae while in the leaflet they have a multidirectional arrangement; 4) Proteoglycans have a non uniform distribution in the leaflets, probably due to a non uniform action of compressive forces on these structures / Mestrado / Biologia Celular / Mestre em Biologia Celular

Orientador: Edson Rosa Pimentel / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-26T15:25:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Vieira_CristianoPedrozo_D.pdf: 3245048 bytes, checksum: 0556c35183a4503cef8427390d086781 (MD5) Previous issue date: 2015 / Resumo: Nutrição terapêutica é a administração de alguns nutrientes, em doses maiores que as necessidades alimentares diárias que podem prevenir deficiências orgânicas e atuar como agentes farmacológicos. A glicina apresenta amplos efeitos benéficos em processos inflamatórios e tumorais. O Chá verde feito de folhas e brotos da planta Camellia sinensis, é a segunda bebida mais consumida em todo mundo. O interesse econômico e social tem ganhado espaço no mercado e atualmente seu consumo faz parte da rotina diária de muitas pessoas que utilizam essa bebida como uma finalidade terapêutica. O Chá verde possui propriedades antimutagênicas, antidiabéticos, antiinflamatórias, antioxidante, antimicrobial e hipocolesterolêmica. A tendinite é reconhecidamente um problema clínico que motiva a comunidade científica a buscar tratamentos que auxiliem no restabelecimento das propriedades funcionais dos tendões. O presente estudo investigou o efeito do chá verde e ou da ração rica em glicina após 7 e 21 dias da indução da tendinite com colagenase. Ensaios bioquímicos, moleculares, morfológicos e biomecânicos foram desenvolvidos. Além disso, tenócitos em cultura foram tratados com glicina após inflamação induzida por TNF-?. Nossos ensaios in vivo mostraram altas concentrações de hidroxiprolina e glicosaminoglicanos no grupo glicina e chá em 21 dias de tratamento. Nos ensaios biomecânicos os grupos chá verde e dieta de glicina em 21 dias suportaram maiores cargas biomecânicas antes da ruptura. Além disso, uma melhor organização das fibras de colágeno foi observada no grupo chá verde em 7 dias. Análises bioquímicas e moleculares da junção miotendínosa mostraram que a inflamação instalada na região osteotendinea pode provocar alterações significativas nesse local. Marcantes alterações foram notadas nas metaloproteínases (MMP) tais como MMP-2, MMP-8 e MMP-9 em animais com tendinite tratados ou não com chá verde e glicina. No estudo in vitro, tenócitos extraídos a partir de tendão de Aquiles foram tratados com TNF-?, seguindo ou não de tratamento com glicina em meio de cultura. Antes e após 24 horas da inflamação foi adicionado glicina. Tenócitos inflamados e tratados com glicina mostraram expressão de colágeno tipo I próxima aos grupos tratados com glicina previamente e depois da inflamação quando comparado ao grupo controle. Todos os grupos tratados com glicina mostraram menor expressão de MMP-2. A atividade da MMP-9 foi alta apenas no grupo tratado com glicina em 48 horas. A concentração de ácido urônico foi menor no grupo tratado com glicina 24 horas após a inflamação. No ensaio de migração celular, resultados em 24 horas de tratamento foram similares ao grupo controle. Em geral, tanto a glicina quanto o chá verde influenciam na síntese dos componentes do tendão, melhoram a organizaçao das fibras colagênicas, aumentam a resistência a cargas do tendão inflamado e consequentemente aceleram o processo de remodelamento após indução da tendinite. Além disso, o tratamento com glicina em cultura de tenócitos mostrou uma reorganização eficiente da matriz extracelular, corroborando com os resultados encontrados in vivo / Abstract: Therapeutic nutrition is the administration of some nutrients, in higher doses than those recommended for the daily food needs that can prevent dysfunctions and act as pharmacological agents. Glycine has large beneficial effects in inflammatory and tumor processes. Green tea made from leaves and buds of the Camellia sinensis plant, is the second most consumed beverage in the world. The economic and social interest has gained space in the market and currently its consumption is part of the daily routine of many people who use this drink as a therapeutic purpose. Green tea has antimutagenic, antidiabetic, anti-inflammatory, antioxidant, antimicrobial and hypocholesterolemic properties. Tendinitis is recognized as a clinical problem that motivates the scientific community to investigate treatments that help in restoring the functional properties of tendons. The present study investigated the effect of green tea and/or diet rich in glycine after 7 and 21 days of tendinitis collagenase-induced. Biochemical, molecular, morphological and biomechanical tests were developed. Furthermore, tenocytes in culture were treated with glycine after inflammation induced by TNF-?. Our tests in vivo showed high concentrations of hydroxyproline and glycosaminoglycans in glycine and green tea group in 21 days of treatment. In biomechanical assay, green tea and glycine diet groups in 21 days showed a high biomechanical loads bore before rupture. In addition, better organization of collagen fibers was observed in green tea group in 7 days. Biochemical and molecular analyzes of myotendinous junction showed that the inflammation installed in osteotendinious region can cause significant change in that region. Remarkable changes were noted in metalloproteinases (MMP) such as MMP-2, MMP-8 and MMP-9 in animals with tendinitis treated with or without glycine and green tea. In the in vitro study, tenocytes from Achilles tendon were treated with TNF-?, or not following treatment with glycine in the culture medium. Before and 24 hours after inflammation was added glycine. Tenocytes inflamed and treated with glycine showed expression of collagen type I close to the treated groups with glycine previously and after the inflammation when compared to the control group. All treated groups showed less glycine MMP-2 expression. The activity of MMP-9 was high only in the group treated with glycine for 48 hours. In the cell migration assay results in 24 hours of treatment were similar to the control group. In general, both glycine and green tea influenced the synthesis of the tendon components, improve the organization of the collagenous fibers, increase the load resistance of the inflamed tendon and consequently accelerate the remodeling process after inducing tendinitis. In addition, the treatment with glycine in tenocytes culture showed efficient reorganization of the extracellular matrix, confirming the results found in vivo / Doutorado / Biologia Celular / Doutor em Biologia Celular e Estrutural

O câncer de mama representa importante problema de saúde pública. O microambiente tumoral tem participação no câncer. Peptídeos derivados da laminina estão envolvidos com progressão tumoral. O peptídeo C16 (KAFDITYVRLKF), da cadeia gama-1 da laminina, estimula adesão, migração e invasão celular, metástase e angiogênese. Para avaliar o efeito deste peptídeo na expressão gênica de células de câncer de mama (MDA-MB-231), células foram tratadas com C16 ou peptídeo controle (FKLRVYTIDFAK) por 24 horas. Após tratamento, a expressão gênica foi avaliada por microarray. C16 regulou a expressão de 80 genes em células MDA-MB-231, incluindo genes associados ao câncer. Os genes FGFR3, GPNMB e SPOCK1 tiveram suas expressões aumentadas após tratamento com C16, como confirmado por PCR quantitativo. Ensaios de invasão em câmaras de Boyden também indicam que C16 estimula invasão de células MDA-MB-231, porém C16 não mostrou efeito sobre proliferação e apoptose. Nossos dados sugerem que o peptídeo C16 regula expressão gênica e estimula invasão de células de câncer de mama MDA-MB-231. / Human breast cancer constitutes a worldwide health care problem. During cancer progression, tumor cells are engaged in an interplay with their microenvironment. Studies have shown that peptides derived from laminin are involved in tumor progression. Among them, C16 (KAFDITYVRLKF), derived from laminin gamma-1 chain, is a cell-adhesive peptide that increases cell migration, invasion, metastasis and angiogenesis. This prompted us to analyze whether C16 would regulate gene expression in human breast cancer cells (MDA-MB-231). Cells were treated with C16 or scrambled peptide control (FKLRVYTIDFAK) for 24 hours and gene expression was analyzed by microarray. Eighty genes were regulated by C16, including genes associated with cancer. Among them, FGFR3, GPNMB and SPOCK1 expression was increased by C16, as confirmed by qPCR. C16 also increased MDA-MB-231 cell invasion. However, no effect on cell proliferation and apoptosis was observed. Concluding, our data suggest that C16 regulates gene expression and enhances invasion of metastatic MDA-MB-231 breast cancer cells.

Neste estudo avaliou-se os efeitos do diabetes mellitus (DM) sobre dois sistemas: glândula parótida de ratos e células cultivadas in vitro. Foram avaliados respectivamente a composição da matriz extracelular e a migração de células expostas a elevada concentração de glicose. Na parótida observou-se aumento de colágenos III, IV e V, laminina e fibronectina, mediado por TGFb2. Em células isoladas observou-se que a glicose dificultou a polarização celular, reduziu a velocidade e direcionalidade de migração, reduziu a persistência e estabilidade das protrusões celulares e a maturação de adesões. Estas alterações estão relacionadas à ativação da GTPase Rac1, dependente de estresse oxidativo. Este estudo sugere, pela primeira vez, que: 1) a hipofunção salivar pode envolver um espessamento da lâmina basal de capilares e parênquima por mecanismos previamente observados em outros orgãos-alvo de complicações diabéticas e 2) que a glicose exerce um efeito direto sobre a migração celular, fator que pode contribuir para a cicatrização deficiente em indivíduos diabéticos. / In this study we evaluated the effects of DM on two different systems: the rat parotid gland and in vitro cultured cells. Extracellular matrix composition and the migratory behavior of cells exposed to a high glucose concentration (HG) were evaluated, respectively. In the parotid, DM led to an increase in collagens III, IV and V, laminin and fibronectin, through a TGFb2-dependent mechanism. In cultured cells, HG impaired cell polarization, reduced migration velocity and directionality, reduced the persistence and stability of protrusive cellular processes, as well as adhesion maturation. These effects were related to Rac1 GTPase activation, dependent on the oxidative stress promoted by HG. This study suggests, for the first time, that: 1) salivary hypofunction in DM might involve the thickening of capillary and parenchyma basal lamina, through mechanisms already described in other target organs for diabetic complications and 2) that glucose directly impairs cell migration, and this effect may contribute to the chronic wound healing observed in diabetic patients.

O câncer de mama é no Brasil o segundo maior causador de morte entre mulheres. Os hormônios sexuais estão dentre os vários fatores indutores ou promotores da carcinogênese. ADAMTS (uma desintegrina e metaloproteinase com domínios trombospondina) é uma enzima Zn2+/Ca2+dependente. Avaliamos a influência dos hormônios na expressão e localização da ADAMTS-1 em 3 linhagens de mama. qPCR demonstrou que a progesterona estimulou o aumento de mRNA de ADAMTS-1 na MCF-10A e na MDA-MB-231, o tratamento com estrógeno e progesterona estimulou a diminuição. No Western blot observamos nas linhagens MCF-10A e MCF-7 que os hormônios tendem a aumentar os níveis de ADAMTS-1, e o estrógeno estimulou uma acentuada secreção em MCF-7. Na linhagem MDA-MB-231, os tratamentos demonstraram uma tendência a diminuir os níveis de ADAMTS-1 intracelular. Na imunofluorescência e Western blot observamos a predominância de ADAMTS-1 nuclear. Os resultados sugerem que os hormônios regulam a expressão de ADAMTS-1 nas células normais e tumorais, e que está predominantemente presente no núcleo celular. / Breast cancer is the second largest cause of death among women in Brazil. Sex hormones are one of the several inducers factors or cancer promoters. ADAMTS (a disintegrin and metaloproteinase with thrombospondin motifs) are dependent on Zn2+/Ca2+ enzymes. We evaluated influence of hormones on ADAMTS-1 levels and localization in three different breast cell lines. qPCR showed that progesterone stimulated an increase of ADAMTS-1 mRNA in MCF-10A, however, in MDA-MB-231, the treatment by estrogen and progesterone decreased levels. Western blot analysis showed a tendency to increased ADAMTS-1 levels in MCF-10A and MCF-7 due to the hormone treatment. Treatment by estrogen led to a marked secretion in MCF-7. In MDA-MB-231 the treatment showed a tendency to decreased intracellular ADAMTS-1 protein levels. Immunofluorescence and Western Blot we observed ADAMTS-1 predominant in the nucleus. Results suggest that sex hormones regulate the ADAMTS-1 expression in normal and tumoral breast cells, ADAMTS-1 is predominant in the cellular nucleus.

O câncer de mama é importante problema de saúde pública. O microambiente onde as células cancerígenas se encontram possui moléculas como a laminina e seus peptídeos bioativos, que influenciam a biologia tumoral. Estudo anterior realizado no laboratório demonstrou que o peptídeo C16, derivado da laminina, aumenta a expressão gênica de GPNMB e SPOCK1. Nesse trabalho, demonstramos que o peptídeo C16 aumentou níveis moleculares de GPNMB e SPOCK em células malignas MDA-MB-231e MCF-7, comparado com células normais MCF-10A. C16 estimulou significantemente a invasão de células MDA-MB-231. Silenciamento de GPNMB diminuiu a invasão celular desencadeada por C16. Contextualizando in vivo nossos resultados in vitro, imunohistoquímica em tissue microarrays mostrou que a presença de GPNMB e SPOCK é significantemente maior em câncer de mama. Assim, C16 regula os níveis de GPNMB e SPOCK em células mamárias malignas. C16 e GPNMB cooperam regulando a invasão de células MDA-MB-231. GPNMB e SPOCK foram mais detectados em câncer de mama comparado com mama normal. / Breast cancer is an important public health. The microenvironment in which cancer cells are found contains molecules such as laminin and its bioactive peptides that influence tumor biology. Previous study conducted in the laboratory showed that the C16 peptide derived from laminin, increases the gene expression of GPNMB and SPOCK1. In this work, we demonstrate that the C16 peptide increased molecular levels of GPNMB and SPOCK in malignant cells MDA-MB-231e MCF-7 cells compared with normal cells MCF-10A. C16 significantly stimulated invasion of MDA-MB-231 cells. GPNMB silencing decreased cell invasion triggered by C16. Contextualizing in vivo our in vitro results, tissue microarrays immunohistochemistry showed that the presence of GPNMB and SPOCK are significantly higher in breast cancer. Thus, C16 regulates the levels of GPNMB and SPOCK in malignant breast cells. C16 and cooperate GPNMB regulating the invasion of MDA-MB-231 cells. SPOCK and GPNMB were more detected in breast cancer compared to normal breast.

O câncer de próstata é o segundo câncer mais freqüentemente diagnosticado em homens. Durante o crescimento tumoral, as células neoplásicas interagem com a matriz extracelular (MEC). Analisamos o efeito de C16, peptídeo derivado da clivagem da MEC, sobre a migração, invasão e regulação dos invadopódios em células de câncer de próstata (DU145). Ensaios de migração e invasão demonstraram que C16 promoveu um aumento da atividade migratória e invasiva de células DU145 de maneira dose dependente. Demonstramos que o peptídeo estimula a fosforilação de Src. Ensaios de degradação em substrato fluorescente mostraram que C16 promoveu a formação de invadopódios de células DU145. O immunoblot nos revelou que este peptídeo também estimula a expressão de Tks4, Tks5, cortactina e MT1-MMP. C16 estimulou a produção de espécies reativas de oxigênio, importantes para o fenótipo invasivo das células tumorais. Nossos resultados sugerem que o peptídeo C16 regula migração, invasão, invadopódios e suas moléculas-chave e a geração de espécies reativas de oxigênio em células DU145. / Prostate cancer is the second most frequently diagnosed cancer in males. During tumor growth, neoplastic cells interact with the extracellular matrix (ECM) Our Laboratory has demonstrated that peptides derived from ECM cleavage are involved in migration, invasion and invadopodia formation in different tumor cell lines. Invadopodia activity depends on expression of the proteins Tks4, Tks5, cortactin, MT1-MMP, as well as reactive oxygen species (ROS) generation. Migration and invasion assays in chemotaxis chambers demonstrated that C16 increased migration and invasion activities of DU145 cells in a dose-dependent manner. We observed that the peptide stimulated phosphorylation of Src. Fluorescent substrate degradation assay showed that C16 increased invadopodia activity of DU145 cells. Immunoblot revealed that this peptide stimulated Tks4, Tks5, cortactin and MT1-MMP expression. Furthermore, C16 increased ROS production. Our results strongly suggested that C16 regulates migration, invasion, invadopodia key-molecules, and ROS generation in DU145 cells.