Tese de Doutorado apresentada ao Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde, da Universidade do Extremo Sul Catarinense, UNESC, para obtenção do título de Doutor em Ciências da Saúde. / Tendinous injury is frequent in athletes and different work activities that involve repetitive movements. Among the several therapy strategies developed to treat musculoskeletal injury are the therapeutic ultrasound therapy (TPU) and electric current. When used in transdermal transport of medicinal drugs, TPU is called phonophoresis. In iontophoresis, the transport of drugs takes place by electrophoresis. Gold nanoparticles (GNP) have anti-inflammatory properties and also act as drug transporters. The present study measured the levels of interleukin 1-â (IL-1â) and tumor necrosis factor á (TNF-á) in acute injury of the calcaneal tendon of rats treated with GNP and GNP in association withdiethylammonium diclofenac (DFDA) by phonophoresis and iontophoresis. In total for the two experiments 105 male Wistar rats were used, divided in groups (n=15). For the experiment using phonophoresis were four groups: Group 1 (non-treated injury); Group 2 (injury treated with DFDA via phonophoresis); Group 3 (injury treated with DFDA via iontophoresis); Group 4 (injury treated with GNP via phonophoresis). For the experiment using iontophoresis were also four groups, with the control group was the same in both experiments: Group 2 (injury treated with GNP via iontophoresis); Group 3 (injury treated with GNP + DFDA via phonophoresis); Group 4 (injury treated with GNP + DFDA via iontophoresis). Cytokine concentrations were measured by immunoblotting. A significant decrease was observed in IL-1â and TNF-á expression in groups treated with phonophoresis and iontophoresis associated to DFDA and GNP, in comparison to untreated rats challenged with injury. The levels of both cytokines at the end of the treatment did not statistically differ against Group 1. The results demonstrate that GNP associated to DFDA and intradermally administered by iontophoresis and phonophoresis reduce IL-1â and TNF-á levels during the acute phase of tendinopathy. / Lesões tendinosas são frequentes em atletas ou atividades profissionais que envolvam trabalho repetitivo. Dentre as diversas terapias disponíveis para o tratamento de lesões musculoesqueléticas agudas destacam-se a terapia ultrassônica (UST) e as correntes elétricas. A UST, quando utilizada para o transporte transdermal de fármacos é denominada fonoforese. Na iontoforese o transporte medicamentoso transcutâneo ocorre por eletroforese. Nanopartículas de ouro (GNP) exibem propriedades antiinflamatórias e de agente transportador de fármacos. O objetivo deste trabalho foi medir os níveis de interleucina 1-â (IL-1â) e fator de necrose tumoral á (TNF-á) na lesão aguda do tendão do calcâneo em ratos submetidos à administração de GNP isoladas ou associadas à diclofenaco dietilamônio (DFDA) por fonoforese e iontoforese. Foram usados, no total para os dois experimentos, 105 ratos Wistar machos, divididos em grupos com quinze ratos em cada. Para o experimento utilizando fonoforese foram quatro grupos: Grupo 1 – Grupo lesão sem tratamento. Grupo 2 – Grupo lesão tratado com DFDA via fonoforese. Grupo 3 – Grupo lesão tratado com DFDA via iontoforese. Grupo 4 – Grupo lesão tratado com GNP via fonoforese. Já para o experimento utilizando a iontoforese também foram quatro grupos, sendo que o grupo controle foi o mesmo nos dois experimentos: Grupo 2 – Grupo lesão tratado com GNP via iontoforese. Grupo 3 – Grupo lesão tratado com GNP + DFDA via fonoforese. Grupo 4 – Grupo lesão tratado com GNP + DFDA via iontoforese. As concentrações das citocinas foram mensuradas por immunoblott. Observou-se uma significativa redução na expressão da IL-1â e TNF-á nos grupos tratados por fonoforese e iontoforese associando DFDA e GNPs em relação ao grupo lesão sem tratamento. Os níveis observados de ambas as citocinas ao final do tratamento não mostrou diferença significativa ao grupo 1. Este trabalho demonstrou que GNP associadas ao DFDA administrados via transdermal por iontoforese e fonoforese reduzem os níveis de IL-1â e TNF-á na fase aguda da tendinopatia.

RIBEIRO, Henrique César Temóteo. Modelo de indução de tendinose de aquiles em ratos : estudo histomorfométrico. 2013. 46 f. Dissertação (Mestrado em Cirurgia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2013. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2014-08-19T13:18:30Z No. of bitstreams: 1 2013_dis_hctribeiro.pdf: 9702726 bytes, checksum: 9b82b41f0dcf744883f4582d7e7f17dd (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2014-08-19T13:26:52Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_dis_hctribeiro.pdf: 9702726 bytes, checksum: 9b82b41f0dcf744883f4582d7e7f17dd (MD5) / Made available in DSpace on 2014-08-19T13:26:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_dis_hctribeiro.pdf: 9702726 bytes, checksum: 9b82b41f0dcf744883f4582d7e7f17dd (MD5) Previous issue date: 2013 / The tendon diseases are major causes of injury in athletes undergoing excessive training. The tendinosis is one of these lesions and is characterized histologically for a hyper cellularity and increased deposition of type III collagen. There are several possible models of tendinosis induction in animals, being most effective in the mechanical reproduction of the events involved in this process. Because the driving characteristic of the hind legs, one incline of the treadmill used in the 10 degrees (acclivity) induction is necessary. The running speed, which the animals were submitted in previous models, is a factor difficult to reproduce. There is need for standardization of model induction Achilles tendinosis, reproducible. The purpose is to define and validate a model for the induction of Achilles tendinosis in rats. We used twelve male Wistar rats randomly divided into experimental group and control group. The experimental group ran on a treadmill for rats with acclivity of 10 degrees, five times per week, daily during 70 minutes at a speed of 18 m / min for a period of 12 weeks. After the protocol, the animals were sacrificad and Achilles tendons were removed left and right, fixed and processed. We have twelve tendons in each group (n=12). After preparing slides using stains of Hematoxylin-Eosin and Picrosirius Red, histomorphometric analysis was performed of the same. The cell density increased in the experimental group compared to control, 626.08 ± 18.37 versus 445.08 ± 16.48, 615.67 in field 1 and ± 13.51 versus 460.00 ± 27.49, field 2, with p < 0.05 . There was a greater deposition of type III collagen in the experimental groups (50, 55 ± 4.002 versus 9.59 ± 0.435 with p < 0.001). It can be observed that the proposed model is effective to develop a degenerative tendinosis type Achilles tendon injury. / As doenças do tendão são importantes causas de lesão em indivíduos submetidos a treinamento excessivo. A tendinose é uma dessas lesões e caracteriza-se histologicamente pela hipercelularidade e aumento do colágeno tipo III. Diversos são os modelos possíveis de indução de tendinose em animais, sendo o mecânico o mais eficaz na reprodução dos eventos envolvidos nesse processo. Devido a característica propulsora das patas traseiras, é necessário um aclive de 10o na esteira utilizada na indução. A velocidade de corrida a qual foram submetidas as cobaias em modelos anteriores é um fator de difícil reprodução. Há, portanto, a necessidade da padronização de um método mais reprodutível. A pesquisa tem como objetivo definir e validar um modelo de indução de tendinose de Aquiles em ratos. Foram utilizados doze ratos machos Wistar divididos aleatoriamente em Grupo experimental e Grupo controle. O grupo experimental correu em uma esteira para ratos com aclive de 10o , cinco vezes por semana, durante 70 minutos diários, com velocidade de 18 m/min, por um periodo de 12 semanas. Após o protocolo, os animais foram submetidos à eutanásia e os tendões de Aquiles direito e esquerdo foram removidos, fixados e processados, tendo o grupo experimental 12 tendões (n=12) e o grupo controle 12 tendões (n=12). Após a preparação de lâminas utilizando as colorações de Hematoxilina-Eosina, Picrosirius Red, foi realizada a análise histomorfométrica das mesmas. A densidade celular aumentou no grupo experimental em relação ao controle, 626,08 ± 18,37 versus 445,08 ± 16,48, no campo 1 e 615,67 ± 13,51 versus 460,00 ± 27,49, no campo 2, com p < 0,05. Houve maior deposição de colágeno tipo III nos grupos experimentais (50, 55 ± 4,002 versus 9,59 ± 0,435 com p<0.001). Pode-se observar que o modelo proposto é eficaz para desenvolver uma lesão degenerativa tipo tendinose no tendão de Aquiles.

Orientador: Laurecir Gomes / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-06T22:35:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Benevides_GustavoPereira_D.pdf: 14498441 bytes, checksum: 14dabe493438b35e04541f31da165221 (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: Os tendões transmitem as forças geradas pelos músculos aos ossos, resultando no movimento articular. A tendinopatia crônica caracterizada por evidentes alterações bioquímicas e biomecânicas, produz severos sintomas clínicos que pode evoluir até a impossibilidade de qualquer atividade ocupacional sendo resistente às condutas clínicas. O desenvolvimento de um modelo experimental é necessário não só para estudar a evolução dessa patologia, mas também para identificar as alterações da composição da matriz extracelular em tendões injuriados. A partir da estimulação elétrica muscular aplicada nos membros inferiores de frangos, foram desenvolvidos quatro diferentes protocolos de exercício. Após oito semanas de exercício os tendões do músculo gastrocnêmio e dos flexores digitais superficiais foram analisados quanto à concentração de hidroxiprolina e em testes biomecânicos. Os tendões responderam de maneira significativamente diferente aos protocolos aplicados e um mesmo protocolo modulou de forma distinta os dois tendões analisados. Os tendões do protocolo com maior déficit biomecânico apresentaram um aumento das proteínas totais, diminuição na concentração dos pequenos proteoglicanos e um aumento significativo na concentração dos glicosaminoglicanos em relação ao grupo controle. Essas dosagens indicam importantes alterações nos constituintes da matriz extracelular sugerindo degeneração tendínea, quadro patobiológico muito semelhante ao da tendinopatia crônica. A partir desse modelo experimental será possível identificar não só outros efeitos deletérios dessa patologia no sistema músculotendíneo, como também estudar a eficácia de novos tratamentos / Abstract: The tendon transmits the strength generated by the muscles to the bone, resulting in joint movement. The chronic tendinopathy, characterized by evident morphological and biomechanical alterations produce severe clinical symptoms that conduct to an incapacity of limb movement, which can develop until the impossibility of any occupational activity and is resistant to the majority of clinical conducts. The development of an experimental model is necessary, not only to study the evolution of this pathology, as well as to identify the alterations of the extracellular matrix components in injured tendons. With electrical muscle stimulation, applied in the inferior limb of chickens, four protocols of exercise were developed. After eight weeks the gastrocnemius and superficial digital flexor tendons were analyzed with respect to hydroxyproline concentration and biomechanical tests. The tendons showed significant differences with respect of protocols applied and the same protocol modulated with distinct form the two tendons analyzed. The tendon with higher biomechanical deficit showed a significant increased of total proteins, a decrease of small proteoglycans concentration and an increase of glycosaminoglycans in relation to the same region of control group. Those dosages pointed to important alterations of extracellular matrix constituents suggesting tendon degeneration, pathobiology stage very similar to chronic tendinopathy. With this experimental model will be possible to identify others deleterious effects of this pathology in the muscle-tendon system, but also to study the efficacy of new treatments / Doutorado / Biologia Celular / Doutor em Biologia Celular e Estrutural

Todo paciente con tendinopatia femoropatelar, que es tratado primero en fisioterapia para eliminar todas las molestias como dolor, edema, limitaciones articulares, alteraciones de la postura y otros, realizara luego el reforzamiento muscular con ejercicios y trabajo propioceptivo, dosificados en forma diaria y controlados permanentemente, respetando el protocolo de tratamiento, de esta manera tendrán una recuperación satisfactoria y completa. El dolor patelo-femoral es una alteración que afecta a una persona de cada cuatro de la población en general. Es causada por una variedad de factores que incluyen una mecánica anormal, insuficiencia del músculo Vasto Medial Oblicuo, estructuras laterales endurecidas y actividades físicas inapropiadas Dadas las diferencias anatómicas y fisiológicas entre los hombres y las mujeres se ha encontrado que éstas pueden desempeñar un papel importante en la incidencia y tipo de lesiones que priman en cada uno de los sexos. Los tratamientos actuales están enfocados al control de la inflamación y el dolor, y la fase de recuperación de la actividad normal es olvidada frecuentemente. Por estos aspectos se hace imprescindible diseñar un programa de rehabilitación utilizando como base la técnica de reforzamiento muscular. La técnica que se pretende utilizar en la rehabilitación de las pacientes con tendinopatia femoropatelar, tiene sus inicios en la “Clínica de la rodilla” en la República de Colombia, hace diez años.

Orientadora : Profª Drª Maria Cristina L. G. Santos / Co-orientador : Prof. Dr. Ricardo Lehtonen de Souza / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular e Molecular. Defesa: Curitiba, 24/09/2014 / Inclui referências / Área de concentração : Biologia celular e molecular / Resumo: O tendão tibial posterior (TTP) é particularmente vulnerável e sua insuficiência é reconhecida como a principal causa do pé plano adquirido do adulto. Alguns pacientes têm uma predisposição sem causa clinicamente reconhecida, sugerindo que as características individuais, incluindo fatores genéticos, desempenham um papel importante na tendinopatia. As metaloproteinases da matriz (MMP) são enzimas responsáveis por degradar e remodelar o colágeno, principal componente dos tendões. O objetivo do presente estudo foi investigar a associação do polimorfismo -77 (rs2252070) da MMP-13 isoladamente e em haplótipo com os polimorfismos -519 (rs1144393) e -1607 (rs1799750) da MMP-1 e -799 (rs11225395) da MMP-8 e a predisposição a disfunção do TTP. A amostra de 200 pacientes selecionados foi dividida em: grupo teste com 100 pacientes submetidos à procedimentos cirúrgicos e de diagnóstico histopatológico de lesão degenerativa do tendão tibial posterior e grupo controle com 100 pacientes com tendão do tibial posterior intacto e sem sinais de degeneração. O DNA dos voluntários foi obtido a partir de células epiteliais da mucosa bucal, por extração com acetato de amônio. A identificação dos genótipos foi realizada por PCR e RFLP. A análise estatística dos resultados foi realizada pelos testes de Mann-Whitney U (idade), Exato de Fisher (IMC), Regressão logística múltipla, Análise por combinação, Chi-quadrado (frequências alélicas e genotípicas) e SNPstats (haplótipos), todos com nível de significância de 5%. Houve uma diferença significativa nas frequências alélicas e genotípicas entre os grupos teste e controle para os polimorfismos -77 da MMP-13, -519 e -1607 da MMP-1 e -799 da MMP-8. Análise de haplótipo indicou diferença significativa entre os dois grupos estudados. De acordo com nossos resultados o polimorfismo -77 da MMP-13 isoladamente e em haplótipo com polimorfismos -519 e -1607 da MMP-1 e -799 da MMP-8 está associado à tendinopatia no tendão do tibial posterior. Palavras-chave: MMPs, MMP-1, MMP-8, MMP-13, Metaloproteinases, Polimorfismos em MMPs, Tendinopatia do Tibial Posterior. / Abstract: Posterior tibial tendon (PTT) is particularly vulnerable and its insufficiency is recognized as the main cause of adult acquired flatfoot. Some patients have a predisposition without clinically recognized cause, suggesting that individual characteristics, including genetic factors, play an important role in tendinopathy. The matrix metalloproteinases (MMP) are enzymes responsible for degrading and remodeling the collagen, the main compomente tendons The objective of the present study is to investigate the association of -77 (rs2252070) matrix metalloproteinase-13 (MMP-13) polymorphism and its haplotypes with -1607 (rs1799750), -519 (rs1144393) MMP-1 and -799 (rs11225395) MMP-8 and risk of PTT dysfunction. The sample of 200 selected patients was divided into test group: 100 patients undergoing surgical procedures and pathological diagnosis of degenerative lesions of the posterior tibial tendon, and control group: 100 patients with posterior tibial tendon intact and no signs of degeneration. The DNA of the volunteers was obtained from oral mucosa epithelial cells, by extraction with ammonium acetate. PCR and RFLP were used for analysis of genotypes. Statistical analysis of results was performed by Man Whitney U test (age), Fisher's Exact (IMC), multiple logistic regression, analysis by combining and Chi-squared (allelic and genotype frequency) and SNPstats (haplotype), test with significance level of 5%. There was a significant difference in the presence of the different alleles and genotypes between the control group and test group for the -77 MMP-13,-519 and -1607 MMP-1, -799 MMP-8, polymorphism. Global haplotype analysis indicated a significant difference between both groups. According to our results, -77 MMP-13polymorphism isolated and its haplotypes with -519, -1607 MMP-1 and -799 MMP-8 are associated to tendinopathy in posterior tibial tendon. Keywords: MMPs, MMP-1, MMP-8, MMP-13, metalloproteinases, Polymorphisms in MMPs, Posterior Tibial Tendinopathy.

INTRODUÇÃO: Este estudo tem como objetivo comparar os achados biomecânicos e anatomopatológicos de um modelo animal inédito de tendinopatia do tendão do calcâneo, induzido por injeções seriadas de baixa dose da enzima colagenase bacteriana, com o modelo mais comumente utilizado na literatura, induzido por injeção única de maior dose da enzima, e com os controles. A hipótese é que a utilização de injeções seriadas resultaria em alterações tendíneas mais progressivas e duradouras, similar à doença nos humanos. MÉTODOS: Quarenta e cinco (N=45) coelhos foram randomizados em três diferentes grupos de estudo (A, B e Controles). Animais do Grupo A (n=18) foram submetidos a três injeções seriadas de baixa dose de colagenase (0,1mg), em ambos os tendões do calcâneo, separadas por intervalo de duas semanas. Animais do Grupo B (n=18) foram injetados com dose única de maior dose (0,3mg). Já no Grupo Controle, animais (n=9) foram injetados bilateralmente com três doses seriadas de solução fisiológica 0,9%. Após a última injeção, foi realizada eutanásia do mesmo número de animais dos Grupos A e B (n=6), com 10 semanas (Subgrupos A1 e B1), 12 semanas (Subgrupos A2 e B2) e 16 semanas (Subgrupos A3 e B3). Todos os animais do Grupo controle foram eutanasiados após 16 semanas. Alterações anatomopatológicas, pelo escore de Bonar, e biomecânicas foram comparadas entre os grupos e dentro de cada grupo, para os diferentes momentos de eutanásia. Valores de p < 0,05 foram considerados estatisticamente significativos. RESULTADOS: Após 16 semanas, o escore anatomopatológico de Bonar foi significativamente maior para ambos os Grupos A (11,8±2,28) e B (5,6±2,51), quando comparados aos controles (2±0,76). Os valores para o grupo A também diferiram do Grupo B (p < 0,001). Para os desfechos biomecânicos, os grupos diferiram quanto à área de secção transversa do tendão (p=0,003), módulo de elasticidade (p=0,024), e tensões no limite da elasticidade (p=0,020) e na resistência máxima (p=0,022), com piores resultados encontrados nos animais do Grupo A. Na semana 12, também houve diferença entre os Grupos A e B para o escore anatomopatológico de Bonar (p=0,028) e para a tensão no limite da elasticidade(p=0,013), novamente com piores resultados no Grupo A. Já na 10a semana, foram os coelhos do Grupo B que demonstraram alterações mais pronunciadas quando comparados aos do Grupo A, com diferença significativa no Escore de Bonar (p=0,033), área de secção transversa do tendão (p=0,038), rigidez (p=0,048), módulo de elasticidade (p=0,024), força, tensão, energia e densidade de energia no limite da elasticidade (p=0,008, p=0,020, p=0,047 e p=0,0015, respectivamente) além de força e tensão no limite da resistência máxima (p=0,004 e p=0,008, respectivamente). A comparação dos desfechos dentro de cada grupo, entre os diferentes subgrupos, apresentou diferenças significativas no escore de Bonar em ambos os grupos A (p=0,012) e B (p < 0,001). Parâmetros biomecânicos não diferiram entre os subgrupos do Grupo A. Já os subgrupos do grupo B apresentaram diferenças na área de secção transversa do tendão (p=0,011), módulo de elasticidade (p=0,024), tensão no limite da elasticidade (p=0,023) e da resistência máxima (p=0,031), assim como na a densidade de energia no limite da elasticidade (p=0,017), com resultados mais pronunciados no subgrupo B1. CONCLUSÃO: O modelo animal de tendinopatia do tendão calcâneo induzida por injeções seriadas de colagenase apresentou alterações anatomopatológicas e biomecânicas mais avançadas na 16a semana, de caráter progressivo e duradouro, similar à doença dos humanos. Tal modelo experimental pode representar uma melhor opção na indução da tendinopatia do tendão do calcâneo, possibilitando a realização de estudos promissores no futuro / INTRODUCTION: This study aims to compare the biomechanical and histological findings of a new animal model of Achilles tendinopathy induced by serial low-dose injections of bacterial collagenase with the most commonly used high-dose single injection and to controls. The hypothesis of the study is that consecutive low-dose injections of collagenase would result in more progressive and long-lasting tendinopathic findings, reproducing better the disease in humans. METHODS: Forty-five (N=45) rabbits were randomly divided into three groups (A, B and Control). Animals in Group A (n=18) underwent three serial low-dose (0,1mg) injections of bacterial type I collagenase in both Achilles tendons, separated by a two-week interval. Animals in Group B (n=18) underwent bilateral single high dose injection (0,3mg) of the same enzyme. In the Control Group, animals (n=9) were injected bilaterally with three consecutive doses of saline solution, separated by a two-week interval. Following the last injection, the same number of rabbits from Groups A and B (n=6) were euthanized after 10 weeks (Subgroups A1 and B1), 12 weeks (Subgroups A2 and B2), and 16 weeks (Subgroups A3 and B3). Animals in the Control Group were all euthanized after 16 weeks. Histological findings, using the Bonar tendinopathy score, and biomechanical properties of the Achilles tendons were compared between the groups and inside each the group, in the different time-points of euthanasia. Findings at 16 weeks were considered primary outcomes. P-values < 0,05 were considered significant. RESULTS: After 16 weeks, the Bonar score was significantly increased for both Groups A (11,8±2,28) and B (5,6±2,51), when compared to controls (2±0,76). Group A has also differed from Group B (p < 0,001). Regarding biomechanical findings, groups differed in cross-sectional area of the Achilles tendon (p=0,003), Young\'s modulus (p=0,024), Yield stress (p=0,020) and ultimate tensile strength (p=0,022), with the worst results in animals from Group A. At 12 weeks, comparison between Groups A and B have shown significant differences for Bonar score (p=0,028) and Yield stress (p=0,013), again with worse results in Group A. Conversely, at 10 weeks, rabbits in Group B showed worse results when compared to Group A, with significant differences in the Bonar score (p=0,033), cross sectional area of the tendon (p=0,038), stiffness (p=0,048), Young\'s modulus (p=0,024), Yield tension (0,008), Yield stress (p=0,020), energy Yield (p=0,047), ultimate tension (p=0,004), ultimate stress (p=0,008) and yield strain energy density (p=0,015). The comparison of outcomes inside each group, in the different time-points of follow-up, demonstrated significant differences in the Bonar score for Group A (p=0,012) and Group B (p < 0,001). Regarding biomechanical properties, Group A showed no differences between the subgroups for any of the parameters evaluated. Subgroups in Group B differed for cross-sectional area of the tendon (p=0,011), Young\'s modulus (p=0,024), Yield stress (p=0,023), ultimate stress (p=0,031) and yield strain energy density (p=0,017), with worst results in the earliest follow-up (Subgroup B1). CONCLUSIONS: The animal model of Achilles tendinopathy induced by consecutive injections of collagenase showed worse histological and biomechanical properties after 16 weeks, demonstrating more progressive and long lasting tendinopathic findings, reproducing better the disease in humans. This novel experimental model can represent a better option to induce Achilles tendinopathy, allowing promising future research on the subject

INTRODUÇÃO: Este estudo tem como objetivo comparar os achados biomecânicos e anatomopatológicos de um modelo animal inédito de tendinopatia do tendão do calcâneo, induzido por injeções seriadas de baixa dose da enzima colagenase bacteriana, com o modelo mais comumente utilizado na literatura, induzido por injeção única de maior dose da enzima, e com os controles. A hipótese é que a utilização de injeções seriadas resultaria em alterações tendíneas mais progressivas e duradouras, similar à doença nos humanos. MÉTODOS: Quarenta e cinco (N=45) coelhos foram randomizados em três diferentes grupos de estudo (A, B e Controles). Animais do Grupo A (n=18) foram submetidos a três injeções seriadas de baixa dose de colagenase (0,1mg), em ambos os tendões do calcâneo, separadas por intervalo de duas semanas. Animais do Grupo B (n=18) foram injetados com dose única de maior dose (0,3mg). Já no Grupo Controle, animais (n=9) foram injetados bilateralmente com três doses seriadas de solução fisiológica 0,9%. Após a última injeção, foi realizada eutanásia do mesmo número de animais dos Grupos A e B (n=6), com 10 semanas (Subgrupos A1 e B1), 12 semanas (Subgrupos A2 e B2) e 16 semanas (Subgrupos A3 e B3). Todos os animais do Grupo controle foram eutanasiados após 16 semanas. Alterações anatomopatológicas, pelo escore de Bonar, e biomecânicas foram comparadas entre os grupos e dentro de cada grupo, para os diferentes momentos de eutanásia. Valores de p < 0,05 foram considerados estatisticamente significativos. RESULTADOS: Após 16 semanas, o escore anatomopatológico de Bonar foi significativamente maior para ambos os Grupos A (11,8±2,28) e B (5,6±2,51), quando comparados aos controles (2±0,76). Os valores para o grupo A também diferiram do Grupo B (p < 0,001). Para os desfechos biomecânicos, os grupos diferiram quanto à área de secção transversa do tendão (p=0,003), módulo de elasticidade (p=0,024), e tensões no limite da elasticidade (p=0,020) e na resistência máxima (p=0,022), com piores resultados encontrados nos animais do Grupo A. Na semana 12, também houve diferença entre os Grupos A e B para o escore anatomopatológico de Bonar (p=0,028) e para a tensão no limite da elasticidade(p=0,013), novamente com piores resultados no Grupo A. Já na 10a semana, foram os coelhos do Grupo B que demonstraram alterações mais pronunciadas quando comparados aos do Grupo A, com diferença significativa no Escore de Bonar (p=0,033), área de secção transversa do tendão (p=0,038), rigidez (p=0,048), módulo de elasticidade (p=0,024), força, tensão, energia e densidade de energia no limite da elasticidade (p=0,008, p=0,020, p=0,047 e p=0,0015, respectivamente) além de força e tensão no limite da resistência máxima (p=0,004 e p=0,008, respectivamente). A comparação dos desfechos dentro de cada grupo, entre os diferentes subgrupos, apresentou diferenças significativas no escore de Bonar em ambos os grupos A (p=0,012) e B (p < 0,001). Parâmetros biomecânicos não diferiram entre os subgrupos do Grupo A. Já os subgrupos do grupo B apresentaram diferenças na área de secção transversa do tendão (p=0,011), módulo de elasticidade (p=0,024), tensão no limite da elasticidade (p=0,023) e da resistência máxima (p=0,031), assim como na a densidade de energia no limite da elasticidade (p=0,017), com resultados mais pronunciados no subgrupo B1. CONCLUSÃO: O modelo animal de tendinopatia do tendão calcâneo induzida por injeções seriadas de colagenase apresentou alterações anatomopatológicas e biomecânicas mais avançadas na 16a semana, de caráter progressivo e duradouro, similar à doença dos humanos. Tal modelo experimental pode representar uma melhor opção na indução da tendinopatia do tendão do calcâneo, possibilitando a realização de estudos promissores no futuro / INTRODUCTION: This study aims to compare the biomechanical and histological findings of a new animal model of Achilles tendinopathy induced by serial low-dose injections of bacterial collagenase with the most commonly used high-dose single injection and to controls. The hypothesis of the study is that consecutive low-dose injections of collagenase would result in more progressive and long-lasting tendinopathic findings, reproducing better the disease in humans. METHODS: Forty-five (N=45) rabbits were randomly divided into three groups (A, B and Control). Animals in Group A (n=18) underwent three serial low-dose (0,1mg) injections of bacterial type I collagenase in both Achilles tendons, separated by a two-week interval. Animals in Group B (n=18) underwent bilateral single high dose injection (0,3mg) of the same enzyme. In the Control Group, animals (n=9) were injected bilaterally with three consecutive doses of saline solution, separated by a two-week interval. Following the last injection, the same number of rabbits from Groups A and B (n=6) were euthanized after 10 weeks (Subgroups A1 and B1), 12 weeks (Subgroups A2 and B2), and 16 weeks (Subgroups A3 and B3). Animals in the Control Group were all euthanized after 16 weeks. Histological findings, using the Bonar tendinopathy score, and biomechanical properties of the Achilles tendons were compared between the groups and inside each the group, in the different time-points of euthanasia. Findings at 16 weeks were considered primary outcomes. P-values < 0,05 were considered significant. RESULTS: After 16 weeks, the Bonar score was significantly increased for both Groups A (11,8±2,28) and B (5,6±2,51), when compared to controls (2±0,76). Group A has also differed from Group B (p < 0,001). Regarding biomechanical findings, groups differed in cross-sectional area of the Achilles tendon (p=0,003), Young\'s modulus (p=0,024), Yield stress (p=0,020) and ultimate tensile strength (p=0,022), with the worst results in animals from Group A. At 12 weeks, comparison between Groups A and B have shown significant differences for Bonar score (p=0,028) and Yield stress (p=0,013), again with worse results in Group A. Conversely, at 10 weeks, rabbits in Group B showed worse results when compared to Group A, with significant differences in the Bonar score (p=0,033), cross sectional area of the tendon (p=0,038), stiffness (p=0,048), Young\'s modulus (p=0,024), Yield tension (0,008), Yield stress (p=0,020), energy Yield (p=0,047), ultimate tension (p=0,004), ultimate stress (p=0,008) and yield strain energy density (p=0,015). The comparison of outcomes inside each group, in the different time-points of follow-up, demonstrated significant differences in the Bonar score for Group A (p=0,012) and Group B (p < 0,001). Regarding biomechanical properties, Group A showed no differences between the subgroups for any of the parameters evaluated. Subgroups in Group B differed for cross-sectional area of the tendon (p=0,011), Young\'s modulus (p=0,024), Yield stress (p=0,023), ultimate stress (p=0,031) and yield strain energy density (p=0,017), with worst results in the earliest follow-up (Subgroup B1). CONCLUSIONS: The animal model of Achilles tendinopathy induced by consecutive injections of collagenase showed worse histological and biomechanical properties after 16 weeks, demonstrating more progressive and long lasting tendinopathic findings, reproducing better the disease in humans. This novel experimental model can represent a better option to induce Achilles tendinopathy, allowing promising future research on the subject

Submitted by Edisangela Bastos (edisangela@ufpa.br) on 2015-05-19T21:42:56Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22974 bytes, checksum: 99c771d9f0b9c46790009b9874d49253 (MD5) Dissertacao_TratamentoAcidoAscorbico.pdf: 1866293 bytes, checksum: aac264823155a87fb2745313a4c5179b (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Rosa Silva (arosa@ufpa.br) on 2015-05-20T17:23:24Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22974 bytes, checksum: 99c771d9f0b9c46790009b9874d49253 (MD5) Dissertacao_TratamentoAcidoAscorbico.pdf: 1866293 bytes, checksum: aac264823155a87fb2745313a4c5179b (MD5) / Made available in DSpace on 2015-05-20T17:23:24Z (GMT). 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O ácido ascórbico (AA) é uma substância conhecida pela participação na hidroxilação de prolina e lisina, importante para síntese da matriz extracelular, bem como eficiência comprovada em diversos tratamentos por suas propriedades antioxidantes. Dessa forma, o presente estudo tem como objetivo avaliar o efeito do tratamento local com AA nos parâmetros de reparo tecidual e funcional no tendão calcâneo de ratos. O trabalho foi aprovado pelo comitê de ética da instituição (CEPAE-UFPA) sob o parecer 161-13. Os animais foram submetidos à ruptura do tendão calcâneo, em três grupos (n=18): Controle; Injúria+AA (30mM); Injúria+veículo (NaCl 0,9%). Todos os tratamentos foram realizados por injeção local, a partir do segundo dia pós-lesão e a cada dois dias até o 14º dia ou 21º dia. Foi avaliado a marcha dos animais pelo Índice funcional de Aquiles (IFA) nos dias 7(n=6), 14(n=6) e 21(n=3) dias pós-lesão, o número de células por marcação com DAPI no 14º(n=9) e 21º(n=9) dia pós –lesão e a estrutura do tecido por marcação com HE, nos mesmos dias. Os animais não diferiram no ganho de massa corporal. O grupo Injúria+AA(-39.51±15.3) apresentou melhora funcional principalmente no 14º dia, se comparado ao grupo Injúria+veículo(-89.22±16.57, p<0,01). A análise histológica demonstrou sob contagem do número de células, que o grupo Injúria+AA(762±29.6) apresentou um menor número de células no 21º dia em relação ao grupo Injúria+veículo(916±57.0, p<0,01). A análise da autofluorescência do colágeno e HE demostrou que o grupo tratado com AA apresentou uma estrutura tecidual mais conservada em 14 e 21 dias pós-lesão em relação ao grupo veículo que, por sua vez, difere bastante do grupo controle. Nossos resultados sugerem que o ácido ascórbico acelera o processo de reparo da lesão tendínea, apresentando melhoras teciduais e funcionais 21 dias após a lesão. / Tendon rupture affects a large part of the population in special seniors and athletes.The repair process requires more studies which can indicate the possibility of new treatments. The ascorbic acid (AA) is a well known substance by its requirement for proline and lysine hydroxylase activity during the collagen synthesisis and the efficiency of this vitamin for various treatments, because of its antioxidant properties. So, the aim of the present study is to evaluate the local treatments effects with this substance on tissue and functional repair the Achilles tendon from rats. The study was approved by the ethics committee of the institution (CEPAE-UFPA) according to the license 161-13. The animals were submitted to rupture of Achilles tendon, divided into three groups (n=27): control, injury+AA (30 mM), injury+vehicle (0.9% NaCl). All treatments were performed by local injection, from the second day after injury and every other day until day 14 or 21. The walk of the animals was assessed by functional index of Achilles (IFA) on days 7(n=6), 14(n=6) e 21(n=3), cells number was assessed by staining with DAPI and tissue organization by staining with HE and autofluorescence, at 14(n=9) and 21(n=9) days of injury. The animals did not differ in body mass gain. The injury+AA group (-39.51±15.3) showed functional improvement especially at day 14 when compared to the injury+vehicle (-89.22±16.57, p<0.01). The histological examination demonstrated in counting the number of cells that the injury+AA group (762±29.6) showed a smaller number of cells on day 21 (762±29.6) in relation to the groups injury+vehicle (916±57.0, p<0.01). The analysis of autofluorescence of collagen and HE showed that the injury+AA group achieved better ECM organization on day 14 and 21 in relation to the groups injury+vehicle, in turn, differs significantly from the control group. Our results suggest that AA accelerates the healing process of tendon injury, presenting tissue and functional improvements 21 days after injury.

Este trabalho investiga a influência de polimorfismos na região promotora do gene das metaloproteases 1, 3 e 8 na fisiopatogenia da insuficiência primária do tendão tibial posterior. A amostra de 150 pacientes selecionados é dividida em grupo-teste: 50 pacientes com diagnóstico clínico e anatomopatológico de tendinopatia do tendão tibial posterior e grupo-controle: 100 pacientes com tendão tibial posterior íntegro. O DNA dos voluntários é obtido a partir de células epiteliais da mucosa bucal mediante a extração com acetato de amônia. As técnicas de PCR e RFLP são utilizadas para análise dos genótipos. A análise estatística dos resultados é realizada pelo teste do qui-quadrado com nível de significância de 5%. Os resultados mostram que os polimorfismos -1607 da MMP-1 e -799 da MMP-8 estão relacionados com risco maior para tendinopatia primária do tendão tibial posterior, enquanto o polimorfismo -1612 da MMP-3 parece não influenciar essa tendinopatia / The aim of this study was to investigate the influence of polymorphisms in the promoter region of the gene of metalloproteinases 1, 3 and 8 in physiopatology of primary posterior tibial tendon insufficiency. The sample of 150 selected patients was divided into test group: 50 patients undergoing surgical procedures and pathological diagnosis of degenerative lesions of the posterior tibial tendon, and control group: 100 patients with posterior tibial tendon intact and no signs of degeneration. The DNA of the volunteers was obtained from oral mucosa epithelial cells, by extraction with ammonium acetate. PCR and RFLP were used for analysis of genotypes. Statistical analysis of results was performed by Chi-squared test with significance level of 5%. The results show that polymorphisms -1607 of MMP-1 and -799 of the MMP-8 are associated with increased risk for primary tendinopathy of the posterior tibial tendon, while the -1612 polymorphism of MMP-3 does not influence this tendinopathy

Este trabalho investiga a influência de polimorfismos na região promotora do gene das metaloproteases 1, 3 e 8 na fisiopatogenia da insuficiência primária do tendão tibial posterior. A amostra de 150 pacientes selecionados é dividida em grupo-teste: 50 pacientes com diagnóstico clínico e anatomopatológico de tendinopatia do tendão tibial posterior e grupo-controle: 100 pacientes com tendão tibial posterior íntegro. O DNA dos voluntários é obtido a partir de células epiteliais da mucosa bucal mediante a extração com acetato de amônia. As técnicas de PCR e RFLP são utilizadas para análise dos genótipos. A análise estatística dos resultados é realizada pelo teste do qui-quadrado com nível de significância de 5%. Os resultados mostram que os polimorfismos -1607 da MMP-1 e -799 da MMP-8 estão relacionados com risco maior para tendinopatia primária do tendão tibial posterior, enquanto o polimorfismo -1612 da MMP-3 parece não influenciar essa tendinopatia / The aim of this study was to investigate the influence of polymorphisms in the promoter region of the gene of metalloproteinases 1, 3 and 8 in physiopatology of primary posterior tibial tendon insufficiency. The sample of 150 selected patients was divided into test group: 50 patients undergoing surgical procedures and pathological diagnosis of degenerative lesions of the posterior tibial tendon, and control group: 100 patients with posterior tibial tendon intact and no signs of degeneration. The DNA of the volunteers was obtained from oral mucosa epithelial cells, by extraction with ammonium acetate. PCR and RFLP were used for analysis of genotypes. Statistical analysis of results was performed by Chi-squared test with significance level of 5%. The results show that polymorphisms -1607 of MMP-1 and -799 of the MMP-8 are associated with increased risk for primary tendinopathy of the posterior tibial tendon, while the -1612 polymorphism of MMP-3 does not influence this tendinopathy