O objetivo deste estudo foi avaliar a eficiência da baixa tensão de oxigênio (5% de CO2; 5% de O2 e 90% de N2) na maturação oocitária in vitro em meio quimicamente definido (0,1% de PVA) ou suplementado com 10 % de PFF. Foram avaliados a migração dos grânulos corticais, a quantificação e distribuição da proteína HSP70, a maturação nuclear, as concentrações intracelulares da glutationa reduzida, a avaliação dos índices de penetração espermática e o desenvolvimento e qualidade de embriões fecundados in vitro em oócitos antes da maturação (0 hora) e após a maturação in vitro nos diferentes tratamentos (atmosfera = 5 ou 20% de O2 e suplementação do meio de maturação = 0,1% de PVA ou 10% de PFF). Para verificar a influência da atmosfera e da suplementação do meio no sistema de maturação foram avaliados o ciclo celular das células do cumulus, o número de células do cumulus por oócitos, as concentrações intracelulares de glutationa reduzida (GSH) das células do cumulus, as concentrações de TBARS no meio de maturação e a resistência das células do cumulus ao estresse oxidativo. Avaliações quanto às concentrações de GSH e HSP70 foram realizadas em oócitos in vivo, visando comparar a eficiência do sistema in vitro. Para a maioria dos parâmetros avaliados não houve interação entre a atmosfera e a suplementação do meio de maturação, indicando que o efeito da atmosfera independe do meio utilizado. Foi observado que em atmosfera com baixa tensão de O2 houve diminuição da concentração de glutationa nas células do cumulus, do índice de clivagem e do número total de blastômeros dos embriões e houve aumento do número de células por oócito após o período de maturação in vitro. A suplementação do meio de maturação com 0,1% de PVA diminuiu os índices de migração dos grânulos corticais, contudo não alterou os índices de penetração espermática. Os oócitos do grupo 0 hora apresentaram índices maiores de HSP70 do que cada um dos demais grupos, indicando provável diminuição dos estoques de HSP70 durante o período de maturação em todos os grupos de maturação in vitro. As células do cumulus provenientes de oócitos maturados em meio suplementado com 0,1% de PVA apresentaram maior número de células na fase S e G2/M do que o grupo 0 hora, entretanto isso não refletiu em aumento no número de células por oócito após a maturação. Este trabalho permite concluir que o uso de baixa tensão de oxigênio não melhora as condições do sistema de maturação oocitária in vitro em suínos, sendo que o efeito do uso desta atmosfera é, na maioria das variáveis avaliadas, independente do tipo de suplementação que se utiliza no meio de maturação in vitro. / The aim of this study was to evaluate the efficiency of low oxygen tension (5% CO2, 5% O2 and 90% N2) on in vitro oocyte maturation using defined media (0.1% PVA) or supplemented with 10% PFF. To achieve this goal, oocytes were evaluated prior to in vitro maturation (0 hour) and after in vitro maturation on different treatments (atmosphere = 5 or 20% O2 and media supplementation = 0.1% PVA or 10% PFF) for cortical granules migration, quantification and distribution of HSP70 protein, nuclear maturation, intracellular concentrations of reduced glutathione, evaluation of sperm penetration and development and quality of in vitro-produced embryos. Furthermore, to evaluate the effects on maturation system, several factors were analyzed, such as: the cell cycle phase of cumulus cells, the number of cumulus cells per oocyte, the intracellular concentrations of reduced glutathione in cumulus cells, the concentrations of TBARS in maturation media and the resistance of cumulus cells to the oxidative stress. Some of these evaluations were performed on in vivo oocytes, aiming to analyze oocyte competence after in vitro maturation. Concerning the majority of the parameters analyzed, there were no interaction between atmosphere and the supplementation of maturation media, indicating that the effect of atmosphere is independent of the media used. It was possible to observe that low tension atmosphere of O2 decreased glutathione concentrations in cumulus cells, cleavage rate and total number of embryo blastomeres and increased the number of cells per oocyte after the period of in vitro maturation. The maturation media supplementation with 0.1% PVA decreased the migration of cortical granules; however this fact did not have effect on in vitro sperm penetration levels. The 0 hour oocytes showed higher levels of HSP70 than each one of the in vitro maturated groups, indicating decrease of this protein stock during the maturation period in all of the in vitro maturated groups. The cumulus cells originated from maturated oocytes in supplemented media with 0.1% PVA showed higher number of cells in S and G2/M phase than 0 hour group; however this fact did not reflect in increased cell numbers per oocyte after maturation. Therefore, the use of low oxygen tension does not improve the conditions of the in vitro porcine oocyte maturation system and their effect in most of the factors analyzed is not dependent on the supplementation of maturation media.

Submitted by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2017-07-19T15:05:15Z No. of bitstreams: 2 Tese - Lismaíra Gonçalves Caixeta Garcia - 2017.pdf: 2339192 bytes, checksum: 8eafbf8b875a28ace87e8f4ccc8608eb (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2017-07-19T15:23:16Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Tese - Lismaíra Gonçalves Caixeta Garcia - 2017.pdf: 2339192 bytes, checksum: 8eafbf8b875a28ace87e8f4ccc8608eb (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-07-19T15:23:16Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Tese - Lismaíra Gonçalves Caixeta Garcia - 2017.pdf: 2339192 bytes, checksum: 8eafbf8b875a28ace87e8f4ccc8608eb (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2017-06-30 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Goiás - FAPEG / Jabuticaba fruit is known and appreciated all over the world. Despite its recognized functional properties, it has a limited market due to its high perishability. The present study aimed to evaluate the physicochemical characterization of jabuticaba fruits variety Pingo de mel during its physiological development, and the effect of different calcium chloride concentrations on the post-harvest conservation of jabuticaba at different storage temperatures. To evaluate the physiological development, the fruits were collected ten days after the anthesis (DAA) until complete maturation, with intervals of four days between the collections. The period between anthesis and maturation was 34 days. For the post-harvest analysis, the fruits were collected 30 days after the anthesis and immersed into calcium chloride solution at different concentrations (0%, 2%, 4%, and 6%) for 30 minutes at room temperature. Then, the fruits were dried and packed in polypropylene bags and stored at different temperatures (6°C, 12°C, and 25°C). Samples were analyzed at time 0 and every two days, up to 12 days of storage. In the physiological development, the mean diameter, mass, soluble solids, and anthocyanins content increased up to 30 DAA, while the soluble pectin increased up to 34 DAA. A reduction in respiratory rate was observed up to 30 DAA, as well as the firmness and total chlorophyll indices up to 34 DAA, and pH up to 18 DAA, which increased up to 34 DAA. In contrast, an opposite behavior was observed for acidity values. Higher levels of phenolic compounds, hydrolyzed tannins, and antioxidant activity were observed at 10 DAA, while the vitamin C content was higher throughout the maturation stage. An increase in moisture, protein, and lipids was observed up to 18 DAA, with reduction until maturation, with opposite behavior for ash and carbohydrates levels. In general, minerals decreased throughout the development stage. In relation to the carbohydrate profile, higher fructose contents were observed with an increase during maturation. In the post-harvest evaluation, the different calcium chloride concentrations had no effect on the maintenance of fruit characteristics over time, at different storage temperatures. Throughout the storage, there was an increase in pectin, antioxidant activity, CO2, total sugars, acidity, and mass loss. Higher storage temperatures affected both the increase in mass loss, pH, and O2 production, and the reduction of vitamin C content Therefore, to obtain better quality fruits concerning the degree of maturation, it is of great importance to harvest jabuticaba between 30 and 34 DAA. Refrigeration was important for the post-harvest conservation of the jabuticaba fruits variety Pingo de mel, once the fruits stored at 6 ° C suffered minor variations, with improvements or little changes during the 12 days. / A jabuticaba é um fruto conhecido e apreciado em praticamente todo o mundo, além disso, possui alegadas propriedades funcionais. No entanto o fruto apresenta comércio limitado, devido a sua alta perecibilidade. Objetivou-se com o presente trabalho caracterizar física e quimicamente os frutos de jabuticaba variedade ‘Pingo de mel’ ao longo do seu desenvolvimento fisiológico, bem como analisar a influencia da aplicação de diferentes concentrações de cloreto de cálcio, associado a diferentes temperaturas de armazenamento na conservação pós-colheita de jabuticaba. Para a caracterização do desenvolvimento fisiológico, os frutos foram coletados aos dez dias após a antese (DAA) e prorrogou-se até o completo amadurecimento, com intervalos de quatro dias entre as coletas. O período compreendido entre a antese e o amadurecimento foi de 34 dias. Para a análise pós-colheita os frutos foram coletados aos trinta dias após a antese e submetidos à imersão em solução de cloreto de cálcio, com diferentes concentrações (0%, 2%, 4% e 6%), durante 30 minutos, à temperatura ambiente. Posteriormente, foram secas e embaladas em potes de polipropileno e armazenadas em diferentes temperaturas (6°C, 12°C e 25°C). As amostras foram analisadas no tempo 0 e a cada dois dias, até os 12 dias de armazenamento. No desenvolvimento fisiológico observou-se que os valores de diâmetros, massa e sólidos solúveis e antocianinas, aumentaram até os 30 DAA, enquanto que os teores de pectina solúvel elevaram-se até os 34 DAA. A taxa respiratória apresentou resultado oposto com redução até os 30 DAA, os teores de firmeza e clorofila total apresentaram redução até os 34 DAA, o pH reduziu até os 18 DAA, com posterior elevação até os 34 DAA, enquanto que a acidez apresentou comportamento contrário. Níveis elevados de compostos fenólicos, taninos hidrolisados e atividade antioxidante foram observados aos 10 DAA, enquanto o conteúdo de vitamina C foi maior ao longo do amadurecimento. Observou-se aumento na umidade, proteína e lipídios até 18 DAA, com redução até a maturação, e notou-se comportamento oposto para os níveis de cinzas e carboidratos. Em geral, os minerais diminuíram ao longo do desenvolvimento. Em relação ao perfil de carboidratos, a frutose apresentou maior concentração, com aumento durante a maturação. Na análise pós-colheita as diferentes concentrações de cloreto de cálcio não apresentaram efeito na conservação das características dos frutos nas diferentes temperaturas de armazenamento e nem mesmo ao longo do tempo. No decorrer dos dias de armazenamento houve aumento dos teores de pectinas, da atividade antioxidante, do CO2, dos açúcares totais, da acidez e da perda de massa. Maiores temperaturas influenciaram no aumento da perda de massa, do pH e da produção de O2 e redução da vitamina C. Portanto para se obter frutos de melhor qualidade em relação ao grau de maturação é de grande importância realizar a colheita entre 30 e 34 DAA. Na pós-colheita a refrigeração foi importante para a conservação pós-colheita dos frutos de jabuticaba variedade ‘Pingo de mel’, visto que as frutas submetidas à temperatura de 6°C de armazenamento sofreram menores variações e/ou mantiveram condições semelhantes ou melhores nos frutos durante os 12 dias.

Made available in DSpace on 2017-07-10T17:37:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Daiana Karoline Kaiser.pdf: 2088385 bytes, checksum: 383be8d1b5bc25970f6a3fe27689bc31 (MD5) Previous issue date: 2016-07-12 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The identification of physiological maturity allows recognize the moment that the seeds have the highest physiological and associate maturity with the fruit color has practical character, it helps in identifying the appropriate harvest time. Also, identify the response of seeds to desiccation is essential for proper postharvest handling aiming at their conservation. This study aimed to determine whether the physiological maturity of A. edulis seeds is achieved in the same maturation stage, regardless of the collection region and the colorimetry of the fruit can determine the maturity of seeds. In addition, it evaluated the desiccation tolerance and longevity of seeds in ex situ conditions. To determine the maturity of seeds, fruits were harvested in Santa Helena, Entre Rios do Oeste and Guaíra-PR and visually classified into five maturity stages by staining the epicarp and a digital colorimeter. The variables analyzed in the seeds understood morphological characteristics, germination and vigor. In studies of desiccation and longevity, the fruits were harvested in Guaíra-PR. The variables quantified in seeds comprised the determination of water content (WC), dry matter (DM), ratio of seed husk and its (SCR) and the probability of desiccation sensitivity (PSD). Seeds with 30% moisture were dried until they reach 23%, 15%, 10% and 5% moisture. Subsequently, four sub-samples were submitted to germination. At the same time, subsamples with 30% water content, 10% and 5% were stored in permeable packaging to 20.1 °C and 39.1% RH for 180, 270 and 365 days. The stabilization of the dry matter of seeds was found in fruits with orange coloring. With advancing maturity, red fruits possessed seeds with lower moisture, coinciding with the maximum germination percentage and speed, besides generating seedlings with larger size and mass accumulation. The green spectrum discriminated maturity in different places of harvest. Seeds used in the test had desiccation and longevity WC 30.42%, DM 24.99 mg, SCR 0.27 and PSD 7%. The germination, mean germination time, dry mass and length of seedlings remained unchanged after drying to 5% moisture. There accelerating germination of seeds with WC 10% and 5%. The loss of germination was 50% at 116 days (WC 30%) and 232 days (WC 10% and 5%). Seeds stored with WC 5% had lower loss in germination rate and high seedling growth. At the end of storage increased by 15% in the mean germination time, 13% reduction in dry matter 9% and the seedlings length. A. edulis seeds with maturity should be harvested when the fruits are red colored, regardless of harvest or with reflectance values between 28.0 to 49.2 nm in the green range of the color spectrum. A. edulis seed is desiccation tolerant to the removal of 82% of cellular water content (WC 5%), with 50% loss of germination to 232 days / A identificação da maturidade fisiológica possibilita reconhecer o momento que as sementes possuem o maior potencial fisiológico e, associar a maturidade com a cor do fruto possui caráter prático, pois auxilia na identificação da época adequada de colheita. Além disso, identificar a resposta das sementes à dessecação é indispensável para o adequado manejo pós-colheita visando sua conservação. Objetivou-se determinar se a maturidade fisiológica de sementes de A. edulis é alcançada no mesmo estádio de maturação do fruto, independentemente da região de coleta e, se a colorimetria do fruto pode indicar a maturidade das sementes. Em adição, foi avaliada a tolerância à dessecação e a longevidade das sementes em condições ex situ. Para determinação da maturidade das sementes, frutos foram colhidos em Santa Helena, Entre Rios do Oeste e Guaíra-PR e classificados visualmente em cinco estádios de maturação pela coloração do epicarpo e com um colorímetro digital. As variáveis analisadas nas sementes compreenderam características morfológicas, germinação e vigor. Nos estudos de dessecação e longevidade, os frutos foram colhidos em Guaíra-PR. As variáveis quantificadas nas sementes compreenderam a determinação do teor de água (TA), massa seca (MS), razão entre a semente e seu tegumento (SCR) e a probabilidade de sensibilidade ao dessecamento (PSD). Sementes com 30% de umidade foram secas até atingirem 23%, 15%, 10% e 5% de umidade. Subsequentemente, quatro subamostras foram submetidas à germinação. Na mesma ocasião, subamostras com teores de água de 30%, 10% e 5% foram armazenadas em embalagem permeável a 20,1 ºC e 39,1% UR, por 180, 270 e 365 dias. A estabilização da matéria seca das sementes foi evidenciada em frutos com coloração laranja. Com o avanço da maturação, frutos vermelhos possuíram sementes com menor umidade, coincidindo com a máxima porcentagem e velocidade de germinação, além de gerarem plântulas com maior tamanho e acúmulo de massa. O espectro verde discriminou a maturidade nos diferentes locais de colheita. Sementes utilizadas no ensaio de dessecação e longevidade possuíam TA de 30,42%, MS de 24,99 mg, SCR de 0,27 e PSD de 7%. A germinabilidade, o tempo médio de germinação, a massa seca e o comprimento de plântulas permaneceram inalterados após à secagem a 5% de umidade. Houve aceleração do processo germinativo em sementes com TA 10% e 5%. A perda de 50% da germinabilidade ocorreu após 116 dias (TA 30%) e após 232 dias (TA 10% e 5%). Sementes armazenadas com TA 5% apresentaram menor perda em velocidade de germinação e maior crescimento de plântulas. Ao final do armazenamento houve aumento de 15% no tempo médio de germinação, redução de 13% na massa seca e 9% no comprimento de plântulas. Sementes de A. edulis com maturidade devem ser colhidas quando os frutos estiverem com coloração vermelha, independentemente do local de colheita ou, com valores de reflectância entre 28,0 a 49,2 nm na escala verde do espectro de cores. Sementes de A. edulis são tolerantes à dessecação até a remoção de 82% do conteúdo de água celular (TA 5%), com perda de 50% da capacidade germinativa aos 232 dias.

Submitted by Cristiane Chim (cristiane.chim@ucpel.edu.br) on 2018-09-17T11:58:26Z No. of bitstreams: 1 Esther Gonçalves de Souza e Silva Ballester.pdf: 1253998 bytes, checksum: dec0a6b4df41e79f23faed68b5338063 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-09-17T11:58:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Esther Gonçalves de Souza e Silva Ballester.pdf: 1253998 bytes, checksum: dec0a6b4df41e79f23faed68b5338063 (MD5) Previous issue date: 2018-06-19 / Introduction: Glucocorticoids have a well-known effect on fetal lung maturation and are recommended in pregnancies at risk of preterm birth. However, the application of corticoid causes immediate glycemic change and, for this reason, we must be very careful with its use in diabetic patients. Objective: The objective of this study was to compare the glycemic changes after the use of corticosteroids for fetal pulmonary maturation in diabetic and non-diabetic pregnant women. Among diabetics, compare diabetic patients with gestational diabetes. Methods: A longitudinal study was performed with pregnant women hospitalized at the School Hospital of the Federal University of Pelotas (HE-UFPel) who received two doses of betamethasone 12mg intramuscularly, with a 24-hour interval. These pregnant women were submitted to glycemic control immediately before the first dose and after, every 12 hours for 48 hours. Results: The total sample consisted of 44 pregnant women, of which 22 were diabetic, 22 were non-diabetic. The mean blood glucose was significantly higher among diabetics, with the peak being 24 hours after the first dose. Among diabetics, the mean was higher in patients with previous diabetes Conclusion: Betamethasone for fetal lung maturation causes hyperglycemia, especially in patients with previous diabetes mellitus, but this alteration can also be observed in patients without diabetes. Therefore, we suggest that all patients receiving corticotherapy for fetal pulmonary maturation should be submitted to glycemic 9 control and correction of blood glucose if necessary, reducing the risk of hyperglycemia. / Introdução: Os glicocorticoides têm sua ação bem conhecida no amadurecimento pulmonar fetal, sendo recomendados em gestações com risco de parto prematuro. No entanto, a aplicação do corticoide provoca alteração glicêmica imediata e, por este motivo, devemos ter muito cuidado com seu uso em pacientes diabéticas. Objetivo: O objetivo deste estudo foi comparar as alterações glicêmicas após o uso de corticoterapia para maturação pulmonar fetal em gestantes diabéticas e não diabéticas. Entre as diabéticas, comparar as pacientes diabéticas prévias com as diabéticas gestacionais. Métodos: Estudo longitudinal com gestantes internadas no Hospital Escola da Universidade Federal de Pelotas (HE-UFPel) que receberam duas doses de betametasona 12mg, por via intramuscular, com intervalo de 24 horas. Estas gestantes foram submetidas a controle glicêmico por hemoglicoteste (HGT) imediatamente antes da primeira dose e após, de 12 em 12 horas por 48 horas. Resultados: O total da amostra foi de 44 gestantes, sendo 22 diabéticas, 22 não diabéticas. As médias de HGT foram significativamente maiores entre as diabéticas, sendo o pico nas 24h após a primeira dose. Entre as diabéticas, a média foi maior nas diabéticas prévias. Conclusão: A betametasona realizada para amadurecimento pulmonar fetal provoca hiperglicemia, principalmente nas pacientes com diabetes mellitus prévio, porém essa alteração também pode ser observada nas pacientes sem diabetes. Sendo assim, sugere-se que todas pacientes que receberem corticoterapia para amadurecimento 7 pulmonar fetal sejam submetidas a controle glicêmico, e correção da glicemia caso necessário, diminuindo os riscos de eventual hiperglicemia.

Orientador: Eunice Oba / Coorientador: Álan Maia Borges / Banca: Fernanda da Cruz Landim / Banca: Fabiana Ferreira de Souza / Banca: Luiz Sérgio de Almeida Camargo / Banca: Moysés dos Santos Miranda / Resumo: Esta pesquisa pretendeu estabelecer estratégias para aumentar a eficiência da produção in vitro de embriões (PIVE) bubalinos. Neste contexto, avaliou a eficiência de protocolos de sincronização de doadoras de oócitos bubalinas visando aumentar a disponibilidade e qualidade dos oócitos obtidos pela aspiração folicular guiada por ultrassom (OPU) e o efeito da fonte de obtenção dos oócitos sobre a quantidade e qualidade dos mesmos. Além disso, analisou-se o efeito do fotoperíodo sobre a quantidade e qualidade do oócitos disponíveis, além da competência destes expressos pelas taxas de PIVE. Por fim, avaliou-se o efeito da adição do óleo essencial de Lippia origanoides (OELO) nas concentrações de 2,5; 5,0 e 10μg/mL, no meio de maturação in vitro (MIV) sobre as taxas de maturação oocitária, qualidade embrionária e PIVE em bovinos e bubalinos. Ovários e oócitos de animais não protocolados, protocolados por aspiração prévia dos folículos e protocolados com uso de hormônios esteróides e gonadotróficos, foram avaliados ultrassonograficamente e de acordo com a qualidade dos oócitos recolhidos por OPU. Demonstrou-se não haver variação na população folicular, no número e na qualidade dos oócitos recuperados por sessão, exceto uma redução dos folículos e oócitos Grau A foi notada quando o ciclo estral foi sincronizado por aspiração prévia dos folículos(p<0,05). Em relação a fonte de obtenção, para todos parâmetros avaliados, foi notada superioridade quando oócitos são recuperados de ovários de frigorífico(p<0,05). A qualidade dos oócitos recolhidos por OPU e a PIVE bubalinos foi influenciada pelo fotoperíodo na região estudada, elevando-se durante os meses de baixa luminosidade(p<0,05), fato não observado em bovinos. Por fim, a partir de avaliações da cromatina com DAPI, encontrou-se uma elevação da taxa de maturação nuclear em bovinos quando utilizou-se concentrações de... / Abstract: This study aimed to develop strategies to increase the efficiency of buffalo in vitro embryo production (IVEP). In this context, we evaluated the efficiency of synchronization protocols on buffalo oocyte donor aimed at increasing the availability and quality of oocytes obtained by ovum pick-up (OPU) and the effect of the source of obtaining oocytes on the quantity and quality. In addition, we analyzed the effect of photoperiod on the quantity and quality of oocytes available on ovary, beyond the competence of those expressed by the blastocyst rate. Finally, we evaluate the effect of essential oil of Lippia origanoides (EOLO) added at concentrations of 2.5, 5.0 and 10μg/ml, on in vitro maturation (IVM) media over oocyte maturation rate, embryo quality and IVEP on cattle and buffalo. Ovaries and oocytes of animals without protocol, protocol by prior aspiration of follicles and protocol with use of steroids and gonadotropic hormones were evaluated by ultrasonography and according to the of oocyte quality. It was demonstrated not vary the follicular population, number and quality of oocytes retrieved per session between the protocols but a reduction of follicles and Grade A oocytes was noted when the follicles were aspirated previously OPU. Regarding the oocyte source (live animals and abattoir ovaries), all evaluated parameters showed superiority when oocytes were derived from abattoir ovaries. The quality of oocytes collected by OPU and IVEP buffaloes was influenced by photoperiod in the region studied, increased when daylight decreases, which was not observed in cattle. Finally, from evaluations of chromatin stained with DAPI, it was found that bovine nuclear maturation rate increased when used concentrations of 2,5μg/ml EOLO. The quality of oocytes, expressed by cell number, increased when used concentrations of 2.5 and 5μg/ml of EOLO in buffaloes. Although it has not changed the blastocyst rate of PIVE in both species, the EOLO has ... / Doutor

A ocorrência de mamões Golden com casca verde e polpa mole, em determinadas épocas do ano, tem sido relatada por produtores da região Norte do Espírito Santo. Não sendo possível distinguir frutos com o distúrbio do amolecimento precoce (DAP) apenas pela análise da cor da casca e da firmeza da polpa no momento da colheita, o objetivo deste trabalho foi estudar aspectos da fisiologia e bioquímica do amadurecimento que pudessem auxiliar no entendimento da perda precoce da firmeza. As coletas ocorreram no período de maior frequência de frutos com o distúrbio (meados de verão a final de outono). Os frutos foram coletados no estádio 1 de maturação, armazenados a 10º±1oC e 85±10% UR, durante 10 dias e submetidos à metodologia do Índice de Amolecimento (IA). O sintoma do amolecimento precoce foi observado claramente no 4°dia após o armazenamento sendo verificada a perda de firmeza nos frutos com DAP entre o 2° e o 8°dia a 10°C, sendo o decréscimo na firmeza equivalente a 71% da firmeza inicial, comportamento atípico para frutos armazenados sob refrigeração. Frutos com e sem DAP não apresentaram diferença significativa no teor de sólidos solúveis, acidez titulável e ácido ascórbico. A atividade respiratória e a produção de etileno foram reduzidas com o armazenamento refrigerado, sem diferença entre os frutos com e sem DAP, o que sugere que o aparecimento do distúrbio não se deve ao aumento na produção de etileno no período póscolheita. Os resultados indicam forte associação entre o amolecimento precoce e mudanças na parede celular. O rendimento das frações solúvel em água (FSA) e em NaOH (FSH) nos frutos com DAP, foi superior ao observado nos frutos sem DAP, durante todo o período de armazenamento. O menor nível da fração solúvel em imidazol (FSI) no tempo 0 pode estar associado à maior atividade da pectinametilesterase nos frutos com DAP. O decréscimo na fração celulose (CEL) em frutos com DAP pode indicar modificação na parede celular, ao nível celulose-hemicelulose. A produção de etileno não acompanhou as modificações na parede celular, sugerindo que alterações na estrutura da parede podem ter ocorrido durante o crescimento do fruto. Frutos com DAP apresentaram níveis de auxina (AIA) 6 vezes menor do que frutos sem DAP, no dia 0, sem diferença durante o armazenamento. Possivelmente os níveis de AIA nos frutos com DAP estavam reduzidos quando o fruto ainda estava ligado à planta. O distúrbio possivelmente está relacionado à alteração na parede celular e níveis de AIA. Desta forma, uma alteração hormonal durante o desenvolvimento do fruto anterior à colheita -, associada à sensibilidade do fruto à essa sinalização hormonal, levaria à mudanças na parede celular, o que determinaria a ocorrência do distúrbio do amolecimento precoce. / The occurrence of green skin and soft pulp in Golden papaya fruit during certain seasons has been reported by orchards in northern Espírito Santo State, Brazil. It is not possible solely by skin color and pulp firmness analysis to distinguish early softening disorder fruits (DAP), at the time of harvest, from those without the disorder. The aim of this work was to study the physiological and biochemical ripening aspects that might help to understand the early softening disorder. Fruits were harvested on the most common seasons (mid-summer to mid-autumn) in maturity stage 1 and evaluated for 10 days. Fruits were stored at 10°C, and submitted to softening index (IA). The symptoms of early softening disorder were clearly observed on the 4th day after storage. However, the firmness decrease in DAP fruits happened between the 2nd and 8th day at 10°C, with a decrease of 71% of initial firmness, presenting an atypical behavior for fruits stored under refrigeration. There was no difference between fruits with DAP and without DAP for soluble solids, titratable acidity and ascorbic acid content. Besides that, there was no difference between fruits with DAP and without DAP for respiration rate and ethylene production under refrigerated storage, which suggests that the disorder occurrence is not related to an increase in ethylene in the postharvest period. The results indicate a strong association between early softening disorder and changes in the cell wall composition. The cell wall polymers fractionation show that the yield of water soluble polymers (FSA) and NaOH soluble polymers (FSH) was higher in fruits with DAP than on fruits without DAP during the entire storage period. The smallest level of the imidazole soluble fraction (FSI) in DAP fruit, on day 0, may be related to a higher activity of pectinmethylesterase. The decrease in cellulose-rich polysaccharides (CEL) in the DAP fruit suggest modifications in the cellulose-hemicellulose domain. Ethylene production did not follow cell wall modification, suggesting that changes in the cell wall structure could be happening during fruit growth. DAP fruit presented an AIA level 6 times smaller than fruit without DAP, in day 0, without storage differences. Possibly, AIA levels in DAP fruit were reduced while fruits were still connected to the plant. The disorder may be related to cell wall changes and to AIA level. Should a hormonal change occur during fruit development i. e. prior to harvesting -- and still depending on fruit sensibility to hormonal signaling, cell wall changes could have different intensities, which determine if the fruit will or not have the flesh early softening observed after harvest.

Os objetivos dessa pesquisa foram avaliar as alterações de natureza física, fisiológica e bioquímica durante a formação das sementes de soja, produzidas nos anos 2009 e 2010, em Piracicaba, São Paulo. Foram utilizadas sementes de dois cultivares de soja, CD - 202 e CD - 224, e os tratamentos foram compostos pelos momentos de colheita, ao longo do processo de formação das sementes, e pela utilização ou não da secagem artificial. Para as avaliações foram determinados os número de dias para a emergência da plântula, para a floração, para a floração plena, para a colheita, os parâmetros físicos (produtividade, teor de água das sementes e massa de mil sementes) fisiológicos (viabilidade e vigor) e bioquímicos (teores de óleo, de proteína, de clorofila, carotenoides, de lignina e de carboidratos). O delineamento experimental utilizado foi em blocos ao acaso, em que cada bloco continha uma unidade experimental de cada cultivar, distribuída de forma casualizada, em esquema fatorial de onze (momentos de colheita) x dois (sem secagem e com secagem), com quatro repetições e as análises estatísticas foram realizadas com o software R. Foi possível concluir que na maturidade fisiológica das sementes de soja, estádio R7, independentemente do cultivar e da avaliação das sementes úmidas ou secas, a produtividade, a viabilidade e os teores de lignina são máximos; No momento de colheita das sementes de soja, estádio R9, independentemente do cultivar e da avaliação de sementes úmidas ou secas, o acúmulo de massa é máximo, há a redução do teor de água, da viabilidade e do vigor e a semente tem mais óleo e proteína; O vigor das sementes é máximo no estádio R7 para as sementes avaliadas secas e no estádio R8 para as avaliadas úmidas, independentemente do cultivar; Há a degradação completa da clorofila nos estádios R7, para as sementes do cultivar CD - 202, e R8, para as sementes do cultivar CD - 224; Há carotenoides em todos os estádios de desenvolvimento da semente de soja, porém há mais carotenoides no início do processo de formação das sementes; Há variação da quantidade de carboidratos em função da avaliação das sementes úmidas ou secas. / This experiment aimed at the evaluation of the physical, physiological and biochemical changes during formation of soy seeds, produced in 2009 and 2010, in Piracicaba, São Paulo. Seeds of two cultivars of soy were used, namely CD - 202 and CD - 224, and treatments were composed by the moment of harvest, along the process of formation of seeds, and by the use or non-use of artificial drying. For the evaluations, we determined the number of days for seedling emergency, flowering, full flowering, harvest, physical parameters (productivity, rate of water in the seeds and mass of a thousand seeds) physiological parameters (viability and vigor) and biochemical parameters (rate of oil, of protein, of chlorophyll, of lignin and carbohydrates). The experimental delineation in use was in random blocks, in which each block contained one experimental unit of each cultivar, distributed at random, in a factorial scheme of eleven (harvesting periods), x two (dried and not dried), at four repetitions, and the statistical analysis were performed with software R. It was possible to conclude that at physiological maturity of soy seeds, stage R7, independently of the cultivar and of the evaluation of dry or humid seeds, the productivity, viability and rates of lignin are at their maximum; In the moment of harvest of soy seeds, stage R9, independently of the cultivar and evaluation of humid or dry seeds, the accumulation of mass is at its maximum, there is a drop in the level of water, of the viability and vigor, and the seed contains more oil and protein; The vigor of the seeds is at its maximum at stage R7 for the seeds which were evaluated dry and at stage R8 for the ones evaluated as humid, independently of the cultivar; There is the complete deterioration of the chlorophyll at stages R7, for the seeds of cultivar CD - 202 and R8, for the seeds of cultivar CD - 224; There are carotenoids in all stages of development of soy seed, however there are more of them in the beginning of the process of formation of seeds. There is variation of quantity of carbohydrates according to the evaluation of humid or dry seeds.

L’accouchement prématuré est un problème de santé publique dans le monde et notamment dans les pays économiquement développés avec un taux variant entre 7 et 12 % des naissances. Le diagnostic du risque d’accouchement prématuré est difficile à faire et les outils à notre disposition ont peu évolué ces dernières années. La contraction utérine est la conséquence directe de l’activité électrique au niveau du myomètre. Le type de contraction est lié à l’importance de l’excitabilité cellulaire et de sa diffusion à l’ensemble du myomètre. Le recueil et l’analyse de cette activité électrique par des électrodes de surface est aujourd’hui le seul moyen non invasif d’étudier, pendant la grossesse, les mécanismes qui sont à l’origine de la contraction. L’enregistrement de l’électromyogramme utérin ou électrohystérogramme (EHG) est donc prometteur pour réaliser un diagnostic et une surveillance des femmes à risque d’accouchement prématuré. Dans ce travail de thèse 3 études cliniques ont été réalisées. Dans la première, j’ai étudié différentes électrodes de surface permettant d’enregistrer les signaux électriques. Je propose à la fin de cette première partie un système d’électrodes pour permettre à la fois un enregistrement de qualité et une pose aisée compatible avec une application clinique. Dans la deuxième étude j’ai étudié la détection automatique des contractions par l’EHG avec des résultats encourageants pour l’application clinique et notamment en ambulatoire. Enfin dans la troisième étude j’ai étudié la prédiction du risque d’accouchement prématuré par l’analyse de paramètres électriques issus de l’EHG. Les résultats obtenus permettent d’améliorer la prédiction du risque d’accouchement prématuré par rapport aux outils utilisés en routine. / Premature birth is a public health problem in the world, particularly in economically developed countries with a rate varying between 7% and 12% of births. The diagnosis of the risk of premature labor is difficult to make and the tools at our disposal have changed little in recent years. Uterine contraction is a direct consequence of electrical activity at the level of the myometrium. The type of contraction is related to the importance of cell excitability and its diffusion to the entire myometrium. The analysis of this electrical activity by surface electrodes is currently the only non-invasive way to study the mechanisms that are at the origin of the contraction. The recording of the uterine electromyogram or electrohysterogram (EHG) is therefore promising for the diagnosis and surveillance of women at risk of preterm birth. In this thesis work 3 clinical studies have been carried out. In the first clinical study, different surface electrodes to record electrical signals were tested. I propose at the end of this first part a system of electrodes to allow at the same time a recording of quality and an easy pose compatible with a clinical application. In the second study , the automatic detection of contractions by the El-IG was studied with encouraging results for the clinical application and especially in ambulatory. Finally, in the third clinical experiment, I studied the prediction of the risk of premature delivery by the analysis of electrical parameters extracted from the EHG. The results obtained make it possible to improve the prediction of the risk of premature delivery compared to the tools used routinely.

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Les espèces du complexe Scedosporium apiospermum sont des agents pathogènes émergents qui se situent au deuxième rang parmi les champignons filamenteux rencontrés au cours de la mucoviscidose. Ils sont omniprésents et particulièrement rencontrés dans les zones polluées. En dépit de leur importance clinique, nos connaissances sur leur biologie moléculaire et leur physiologie restent limitées. Chez les champignons, la paroi constitue un bouclier protecteur face à des conditions environnementales défavorables, et joue un rôle essentiel dans la pathogénicité. Ici, nous avons étudié les changements dynamiques de la paroi des conidies de S. boydii, l’une des deux espèces majeures de ce complexe avec S. apiospermum, avec pour objectif d'identifier des facteurs de virulence potentiels. En utilisant une large variété de techniques, allant de la microscopie électronique à balayage ou à transmission à l’analyse protéomique des protéines à ancre glycosylphosphatidylinositol (GPI) en passant par la microélectrophorèse et la partition de phase, la cytométrie en flux, la microscopie de force atomique, la résonance paramagnétique électronique, ou encore des techniques moléculaires, nous avons mis en évidence diverses modifications qui se produisent dans la paroi pendant la maturation et la germination des conidies de S. boydii et nous avons identifié la DHN-mélanine ainsi qu'un nombre important de protéines à ancre GPI. Enfin, nous avons fourni la première séquence complète du génome de S. apiospermum qui appuierait les différents domaines de la recherche sur ces champignons que ce soit pour l’étude des mécanismes pathogènes ou pour des applications biotechnologiques. / Species of the Scedosporium apiospermum complex are emerging human pathogens which rank the second, after Aspergillus fumigatus, among the filamentous fungi colonizing the airways of patients with cystic fibrosis. These fungi are ubiquitous in nature and particularly encountered in polluted areas. Despite their clinical relevance, our knowledge about their molecular biology and physiology remains rather limited. In fungi, the cell wall forms a protective shield against adverse environmental conditions, and therefore plays a key role in pathogenesis, which makes it an interesting target for antifungal drug development. Here, in an attempt to identify potential virulence factors, we investigated the dynamic changes of the cell wall of conidia in S. boydii, one of the main pathogenic species within this species complex with Scedosporium apiospermum. Using various techniques, ranging from scanning and transmission electron microscopy to proteomic analysis of glycosylphosphatidylinositol (GPI)- anchored proteins, through two-phase partitioning and microelectrophoresis, atomic force microscopy and chemical force spectroscopy, flow 5 cytometry, electron paramagnetic resonance and molecular techniques, we highlighted various modifications occurring in the cell wall during maturation and germination of S. boydii and we identified DHN-melanin as well as a substantial number of GPI-anchored proteins in the cell wall. Finally, we provided the first publicly available genome sequence of S. apiospermum that would support various research fields on these fungi whether for understanding their pathogenic mechanisms or for various biotechnological applications.