Avaliamos o efeito do treinamento físico intenso e da restrição alimentar no eixo reprodutor e na expressão do RNAm do MCH em ratas fêmeas. Utilizamos ratas fêmeas sedentárias alimentadas (SA), sedentárias com restrição alimentar, treinadas alimentadas (TA) e treinadas com restrição alimentar. O grupo TR entrou em anestro a partir da quarta semana de experimento. Os grupos restritos apresentaram redução de peso corporal, ovários, úteros e tecido adiposo branco, comparados aos alimentados. Houve redução sérica de leptina nos grupos SR e TR. Os grupos TA, SR e TR apresentaram cistos ovarianos. A expressão do RNAm do ppMCH na área incerto-hipotalâmica (IHy) foi menor nos animais TR, SR e nos animais alimentados em proestro, e na área hipotalâmica lateral (LHA) foi maior nos animais em restrição alimentar e nos animais alimentados em proestro. Conclui-se que a leptina exerce forte influencia no eixo reprodutor feminino, tal ação parece ter envolvimento do MCH, sobretudo o proveniente da IHy, uma vez que o MCH da LHA tem relação com o estímulo a busca de alimento. / We evaluated the effect of intense physical training and food restriction on the reproductive axis and MCH mRNA expression in female rats. We used female rats fed sedentary (SF), food-restricted sedentary, trained fed (TF) and trained with food restriction. The group entered anestrus TR from the fourth week of the experiment. The restricted groups had reduced body weight, ovary, uterus and white adipose tissue, compared to the fed. There was a reduction of serum leptin in the SR and TR groups. The TF groups, SR and TR had ovarian cysts. The expression of mRNA ppMCH incerto-hypothalamic area (IHy) was lower in TR animals, SR and animals fed on proestrus, and the lateral hypothalamic area (LHA) were higher in animals on restricted food and animal feeding in proestrus. It is concluded that leptin exerts a strong influence on female reproductive axis, such action appears to have involvement of MCH, especially from the IHy, since the MCH of the LHA is related to the motivational behavior associated to the search for food.

Avaliamos o efeito do treinamento físico intenso e da restrição alimentar no eixo reprodutor e na expressão do RNAm do MCH em ratas fêmeas. Utilizamos ratas fêmeas sedentárias alimentadas (SA), sedentárias com restrição alimentar, treinadas alimentadas (TA) e treinadas com restrição alimentar. O grupo TR entrou em anestro a partir da quarta semana de experimento. Os grupos restritos apresentaram redução de peso corporal, ovários, úteros e tecido adiposo branco, comparados aos alimentados. Houve redução sérica de leptina nos grupos SR e TR. Os grupos TA, SR e TR apresentaram cistos ovarianos. A expressão do RNAm do ppMCH na área incerto-hipotalâmica (IHy) foi menor nos animais TR, SR e nos animais alimentados em proestro, e na área hipotalâmica lateral (LHA) foi maior nos animais em restrição alimentar e nos animais alimentados em proestro. Conclui-se que a leptina exerce forte influencia no eixo reprodutor feminino, tal ação parece ter envolvimento do MCH, sobretudo o proveniente da IHy, uma vez que o MCH da LHA tem relação com o estímulo a busca de alimento. / We evaluated the effect of intense physical training and food restriction on the reproductive axis and MCH mRNA expression in female rats. We used female rats fed sedentary (SF), food-restricted sedentary, trained fed (TF) and trained with food restriction. The group entered anestrus TR from the fourth week of the experiment. The restricted groups had reduced body weight, ovary, uterus and white adipose tissue, compared to the fed. There was a reduction of serum leptin in the SR and TR groups. The TF groups, SR and TR had ovarian cysts. The expression of mRNA ppMCH incerto-hypothalamic area (IHy) was lower in TR animals, SR and animals fed on proestrus, and the lateral hypothalamic area (LHA) were higher in animals on restricted food and animal feeding in proestrus. It is concluded that leptin exerts a strong influence on female reproductive axis, such action appears to have involvement of MCH, especially from the IHy, since the MCH of the LHA is related to the motivational behavior associated to the search for food.

O MCH é um neuropeptídeo sintetizado preferencialmente no hipotálamo que exibe projeções para todo o neuroeixo, podendo modular vários processos fisiológicos, como a ingestão aguda de alimento. Um alvo de suas projeções é o núcleo accumbens (Acb), componente do estriado ventral envolvido na recompensa de estímulos hedônicos. Nossa contribuição visa mapear as células imunorreativas (ir) ao MCH responsáveis pelas aferências do Acb, onde também investigamos aposições entre os sistemas MCH, GABA e ChAT. Utilizaram-se os métodos de simples e duplas imunoperoxidases e combinação de imunofluorescência e captação de traçadores retrógrados. A maior densidade de fibras ir-MCH ocupa a parte shell do Acb (AcbSh); as aferências ir-MCH partem, por exemplo, da área hipotalâmica lateral e área perifornicial. Controles anterógrados foram obtidos a partir da LHA. Observaram-se aposições entre terminais ir-MCH e células ir-GABA e ir-ChAT, no AcbSh. Assim, sugere-se que os territórios hipotalâmicos que contém MCH inervem o AcbSh e contatem outros sistemas neuroquímicos no Acb. / MCH is a neuropeptide synthesized preferentially in the hypothalamus that shows projections throughout neuraxis, and may modulate various physiological processes such as food intake. One target of its projections is the nucleus accumbens (Acb), a component of the striatum involved in reward of hedonic stimuli. Our contribution aims to map immunoreactive (ir) cells responsible for the MCH inputs of the Acb, and to investigate appositions between MCH fibers, GABA and ChAT cells. We used the single and double immunoperoxidase methods and immunofluorescence combined with retrograde tracer. The highest density of fiber MCH-ir occupies the shell part of the Acb (AcbSh); MCH-ir inputs are mainly from lateral hypothalamic and perifornical areas. Anterograde controls were obtained from the LHA. We have founded appositions between MCH-ir terminals and GABA- and ChAT-ir cells at AcbSh. Thus, is suggested that hypothalamic areas containing MCH innervate the AcbSh and contact other neurochemical systems systems in the Acb.

Estudos hodológicos sugerem um dimorfismo sexual das projeções da área incerto-hipotalâmica (IHy), com áreas relevantes para o controle reprodutivo mais densamente inervadas em fêmeas. Estudos funcionais mostraram que o RNAm do precursor do hormônio concentrador de melanina (ppMCH) varia apenas na IHy, durante o ciclo estral e é reduzido em ratas em anestro induzido por restrição alimentar (RA). Nosso objetivo foi analisar em camundongos fêmeas, as alterações na morfologia de útero e ovários e na expressão do RNAm do ppMCH da IHy ocasionadas pelo anestro induzido por RA. Para isso, camundongos fêmeas C57BL/6 foram distribuídas em controle (C), restrito (R; ração = 70% do C) e realimentado (RR). Os animais R foram perfundidos após 4, 8 e 12 dias para coleta de encéfalo, útero e ovários. Houve um aumento no número de folículos antrais nos animais R12 comparados ao R4 e redução da área uterina nos animais R8 com recuperação dos RR. Não foi possível detectar alterações na expressão do RNAm do ppMCH na IHy. / Hodological studies suggest a sexual dimorphism of the incerto-hypothalamic area (IHy) projections since relevant areas to the reproductive control are more densely innervated in females. Functional studies have shown that the MCH precursor mRNA (ppMCH) varies only in the IHy during the estrous cycle of an intact rat and is decreased in anestrus rats induced by food restriction. We aim to analyze, in female mice, the changes in uterine and ovarian morphology and expression of IHy ppMCH mRNA in anestrus induced by food restriction. For this, C57BL/6 female mice were distributed in control (C), food restricted (FR) and refed (RR). FR were perfused after 4, 8 and 12 days to collect the brain, uterus and ovaries. Our results show an increased number of antral follicles of R12 compared to R4 and a reduction in the uterine area of R8 with restoration in RR. It was not possible to detect changes in ppMCH mRNA expression in IHy.

Seres humanos com danos nos corpos mamilares exibem prejuízos no funcionamento da memória episódica. O presente estudo investigou a possível participação do núcleo mamilar medial (MM), estrutura densamente inervada por fibras imunorreativas ao hormônio concentrador de melanina (MCH) potencialmente envolvida no comportamento alimentar, em processos de evocação de memórias sobre locais em que alimento foi previamente encontrado, em ratos. Investigou-se ainda seu envolvimento na memória espacial motivada aversivamente, por meio do labirinto aquático de Morris, e em processos de ansiedade, por meio do labirinto em cruz elevado. Descreve-se uma tarefa comportamental envolvendo busca alimentar orientada por memória espacial em ratos, funcionalmente análoga ao teste de aprendizagem de pares associados, utilizado para avaliar memória episódica em seres humanos. Ratos treinados a escavar numa arena para obter alimento foram expostos ao pareamento de um determinado sabor, e.g., amendoim, com um local da arena e, numa segunda tentativa, ao pareamento de um outro sabor, e.g., avelã, com um local diferente da mesma arena. Antes de uma terceira tentativa, ainda na caixa de espera, os animais receberam uma amostra de amendoim ou avelã. Então, inseridos na arena para uma terceira tentativa, deveriam procurar e escavar por alimento enterrado no local sinalizado pela amostra. As associações sabor-local, a seqüência das associações, os locais do pareamento e a amostra oferecida antes da terceira tentativa, variaram quase aleatoriamente a cada dia. O treinamento dos animais para a aquisição da tarefa foi prolongado. O número de visitas e o tempo de permanência no local da arena sinalizado pela amostra foram significativamente maiores em relação aos parâmetros correspondentes ao local pareado com alimento mas não sinalizado pela amostra, quando o intervalo de tempo entre a 2ª e 3ª tentativas foi 60 ou 120 minutos; Testes de Avaliação sem oferta de alimento na arena na 3ª tentativa, permitiram excluir a hipótese de que os animais desempenharam essa tarefa com base em estímulos olfativos, levando à conclusão que o fizeram com base na memória das associações sabor-local. Ratos com danos seletivos do MM, induzidos pela aplicação tópica, micro-iontoforética, de N-Metil-D-Aspartato (NMDA), testados na tarefa de pares associados sabor-local, não exibiram prejuízo de desempenho em relação aos animais controle. Análises adicionais revelaram que houve uma redução da busca por alimento em ambos os grupos (lesado e controle) nos testes pós-operatórios, em relação ao seu próprio desempenho nos testes pré-operatórios; porém, essa redução foi mais acentuada em relação ao local sinalizado pela amostra, particularmente nos animais do grupo lesado. Estes resultados, embora não conclusivos, podem representar indícios em favor da idéia de que o MM estaria envolvido numa circuitaria relacionada à memória espacial voltada à busca alimentar. Mais estudos seriam necessários para avaliar essa possibilidade. Além disso, esses animais não exibiram qualquer prejuízo no teste de memória de referência espacial no labirinto aquático de Morris e no paradigma do teste e re-teste no labirinto em cruz elevado, sugerindo que esse tipo de lesão não leva a deficiência no funcionamento da memória espacial motivada por estimulação aversiva, na memória aversiva por espaços abertos ou nos mecanismos responsáveis pela ansiedade. / Human beings with damage to the mammillary bodies exhibit episodic memory disruption. This study investigated the potential participation of the medial mammillary nucleus (MM), a structure that receives a high density of melaninconcentrating hormone immunoreactive fibers (MCH) potentially involved in food intake, in processes of retrieval of memory about places where food was previously found, in rats. In addition, we investigated the possible involvement of this brain structure in both aversively motivated spatial memory, using the Morris´ water maze, and in anxiety, using the elevated plus maze. A behavioral task involving search for food guided by spatial memory, in rats, functionally analogous to the paired-associate learning task used for studying episodic memory in humans, was described. Rats trained to dig for food in an arena were exposed both to the pairing of a taste, peanut, with a specific place in the arena and, in a second trial, to the pairing of another taste, hazelnut, with another place in the arena. Immediately before a third trial, while still in the waiting box, the animals received a sample of either peanut or hazelnut. Then, they were inserted into the arena for a third trial and could search and dig for food buried in the place previously associated with the sample. The taste-place associations, sequence of associations, pairing places and sample offered before the third trial, were all varied quasi-randomly every day. The animals took extensive training to learn this task. It was found that the number of visits and the time spent in the place indicated by the sample were significantly greater as compared to the corresponding parameters of the place previously associated with a taste but not indicated by the sample, when the time interval between the second and the third trials was both 60 and 120 min; probe tests with no food in the arena in the third trial allowed to exclude the hypothesis that the rats were performing the task relying on olfactory cues, leading to the conclusion that the animals performed the task relying on the memory for the associations tastefood. Rats with selective damage to the MM, induced by topic, microiontophoretic, injections of N-Methyl-D-Aspartate (NMDA), tested in the taste-place pairedassociate learning task, did not exhibit any disruption of performance relative to the controls. Additional analyses revealed that both MM and control subjects exhibited a reduction of food search during the post-operatory tests as compared to their own performance in pre-operatory tests; however, this reduction was stronger towards the place indicated by the sample, particularly for the animals subjected to MM damage. Even though not conclusive, these results may suggest that the MM might be involved in search for food guided by spatial memory. More studies would be required to evaluate this possibility. Further, these rats did not exhibit any disruption of performance in the reference memory test in the water maze and in the test/re-test elevated plus maze, suggesting that this type of damage does not disrupt aversively motivated spatial memory, open-space aversive memory and anxiety.

Seres humanos com danos nos corpos mamilares exibem prejuízos no funcionamento da memória episódica. O presente estudo investigou a possível participação do núcleo mamilar medial (MM), estrutura densamente inervada por fibras imunorreativas ao hormônio concentrador de melanina (MCH) potencialmente envolvida no comportamento alimentar, em processos de evocação de memórias sobre locais em que alimento foi previamente encontrado, em ratos. Investigou-se ainda seu envolvimento na memória espacial motivada aversivamente, por meio do labirinto aquático de Morris, e em processos de ansiedade, por meio do labirinto em cruz elevado. Descreve-se uma tarefa comportamental envolvendo busca alimentar orientada por memória espacial em ratos, funcionalmente análoga ao teste de aprendizagem de pares associados, utilizado para avaliar memória episódica em seres humanos. Ratos treinados a escavar numa arena para obter alimento foram expostos ao pareamento de um determinado sabor, e.g., amendoim, com um local da arena e, numa segunda tentativa, ao pareamento de um outro sabor, e.g., avelã, com um local diferente da mesma arena. Antes de uma terceira tentativa, ainda na caixa de espera, os animais receberam uma amostra de amendoim ou avelã. Então, inseridos na arena para uma terceira tentativa, deveriam procurar e escavar por alimento enterrado no local sinalizado pela amostra. As associações sabor-local, a seqüência das associações, os locais do pareamento e a amostra oferecida antes da terceira tentativa, variaram quase aleatoriamente a cada dia. O treinamento dos animais para a aquisição da tarefa foi prolongado. O número de visitas e o tempo de permanência no local da arena sinalizado pela amostra foram significativamente maiores em relação aos parâmetros correspondentes ao local pareado com alimento mas não sinalizado pela amostra, quando o intervalo de tempo entre a 2ª e 3ª tentativas foi 60 ou 120 minutos; Testes de Avaliação sem oferta de alimento na arena na 3ª tentativa, permitiram excluir a hipótese de que os animais desempenharam essa tarefa com base em estímulos olfativos, levando à conclusão que o fizeram com base na memória das associações sabor-local. Ratos com danos seletivos do MM, induzidos pela aplicação tópica, micro-iontoforética, de N-Metil-D-Aspartato (NMDA), testados na tarefa de pares associados sabor-local, não exibiram prejuízo de desempenho em relação aos animais controle. Análises adicionais revelaram que houve uma redução da busca por alimento em ambos os grupos (lesado e controle) nos testes pós-operatórios, em relação ao seu próprio desempenho nos testes pré-operatórios; porém, essa redução foi mais acentuada em relação ao local sinalizado pela amostra, particularmente nos animais do grupo lesado. Estes resultados, embora não conclusivos, podem representar indícios em favor da idéia de que o MM estaria envolvido numa circuitaria relacionada à memória espacial voltada à busca alimentar. Mais estudos seriam necessários para avaliar essa possibilidade. Além disso, esses animais não exibiram qualquer prejuízo no teste de memória de referência espacial no labirinto aquático de Morris e no paradigma do teste e re-teste no labirinto em cruz elevado, sugerindo que esse tipo de lesão não leva a deficiência no funcionamento da memória espacial motivada por estimulação aversiva, na memória aversiva por espaços abertos ou nos mecanismos responsáveis pela ansiedade. / Human beings with damage to the mammillary bodies exhibit episodic memory disruption. This study investigated the potential participation of the medial mammillary nucleus (MM), a structure that receives a high density of melaninconcentrating hormone immunoreactive fibers (MCH) potentially involved in food intake, in processes of retrieval of memory about places where food was previously found, in rats. In addition, we investigated the possible involvement of this brain structure in both aversively motivated spatial memory, using the Morris´ water maze, and in anxiety, using the elevated plus maze. A behavioral task involving search for food guided by spatial memory, in rats, functionally analogous to the paired-associate learning task used for studying episodic memory in humans, was described. Rats trained to dig for food in an arena were exposed both to the pairing of a taste, peanut, with a specific place in the arena and, in a second trial, to the pairing of another taste, hazelnut, with another place in the arena. Immediately before a third trial, while still in the waiting box, the animals received a sample of either peanut or hazelnut. Then, they were inserted into the arena for a third trial and could search and dig for food buried in the place previously associated with the sample. The taste-place associations, sequence of associations, pairing places and sample offered before the third trial, were all varied quasi-randomly every day. The animals took extensive training to learn this task. It was found that the number of visits and the time spent in the place indicated by the sample were significantly greater as compared to the corresponding parameters of the place previously associated with a taste but not indicated by the sample, when the time interval between the second and the third trials was both 60 and 120 min; probe tests with no food in the arena in the third trial allowed to exclude the hypothesis that the rats were performing the task relying on olfactory cues, leading to the conclusion that the animals performed the task relying on the memory for the associations tastefood. Rats with selective damage to the MM, induced by topic, microiontophoretic, injections of N-Methyl-D-Aspartate (NMDA), tested in the taste-place pairedassociate learning task, did not exhibit any disruption of performance relative to the controls. Additional analyses revealed that both MM and control subjects exhibited a reduction of food search during the post-operatory tests as compared to their own performance in pre-operatory tests; however, this reduction was stronger towards the place indicated by the sample, particularly for the animals subjected to MM damage. Even though not conclusive, these results may suggest that the MM might be involved in search for food guided by spatial memory. More studies would be required to evaluate this possibility. Further, these rats did not exhibit any disruption of performance in the reference memory test in the water maze and in the test/re-test elevated plus maze, suggesting that this type of damage does not disrupt aversively motivated spatial memory, open-space aversive memory and anxiety.