Submitted by Renata Lopes (renatasil82@gmail.com) on 2017-03-14T15:26:23Z No. of bitstreams: 1 romulotadeupacedeassislage.pdf: 8686289 bytes, checksum: e76b40cfa379f42f86828b9387fdbc74 (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2017-03-16T13:11:14Z (GMT) No. of bitstreams: 1 romulotadeupacedeassislage.pdf: 8686289 bytes, checksum: e76b40cfa379f42f86828b9387fdbc74 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-16T13:11:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 romulotadeupacedeassislage.pdf: 8686289 bytes, checksum: e76b40cfa379f42f86828b9387fdbc74 (MD5) Previous issue date: 2016-08-25 / FAPEMIG - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais / O objetivo desse trabalho foi pesquisar a ocorrência de Mycobacterium bovis, Micobactérias não tuberculosas (MNT) e Actinomicetos em Queijo Minas Artesanal (QMA) da microrregião do Serro. Avaliou-se a presença dos patógenos por meio de cultivo bacteriano em queijos com períodos de maturação em temperatura ambiente entre 4 e 8 dias, em queijarias certificadas ou cadastradas pelo Instituto Mineiro de Agropecuária (IMA), que possuem assim o aval do órgão para o comercio estadual. Todas as amostras de queijos foram provenientes de rebanhos submetidos ao teste de tuberculinização intradérmica comparada, conforme disposto no Programa Nacional de Controle e Erradicação da Brucelose e da Tuberculose (PNCEBT), realizado por médico veterinário particular credenciado no programa, apresentando resultado negativo. Das amostras coletadas (n = 55), 4 (7,27%) apresentaram resultados positivos (4/55) para microrganismos de crescimento rápido em meio Stonebrink. Estes isolados das amostras de queijos positivas foram submetidos à amplificação gene hsp65 do DNA por PCR, sequenciamento de DNA e sua comparação com as sequencias depositadas no banco de dados “Basic Local Alignment Search Tool Nucleotide” (BLASTn), não restringindo a busca para gênero ou espécie. As sequências identificadas apresentaram maior similaridade com as espécies Mycobacterium novocastrense (uma amostra), Gordonia bronchiallis (três amostras). Não foram encontrados resultados positivos para M. bovis. Enfim, a presença de DNA de M. novocastrense e G bronchiallis nas amostras sugere necessidade de medidas de identificação e controle mais rigorosas, tanto em nível de rebanho como na matéria prima e no produto acabado. Essa lacuna na legislação seria algo para reflexão, dada a importância das micobactérias não tuberculosas e de outros Actinomicetos à saúde pública, principalmente quando destinados a grupos específicos como pacientes com imunossupressão. / The aim of this study was to estimate the occurrence of non-tuberculous Mycobacteria and other Actinomycetes in artisanal cheeses, named of “Queijo Minas Artesanal” (QMA), from Serro, a micro region of Minas Gerais state, Brazil. The presence of pathogens in cheeses with ripening between 4 and 8 days at room temperature means cultivation and molecular speciation methods was evaluated. QMA has been certified or registered by “Instituto Mineiro de Agropecuária (IMA)”, which has endorsed its interstate trade over the country. Of the samples collected (n = 55), 4 (7.27%) showed positive results (4/55) for fast-growing micro-organisms by means of bacterial culture. These isolates from cheeses positive samples were submitted to DNA amplification by PCR, DNA sequencing and its comparison with the sequences deposited in “Basic Local Alignment Search Tool Nucleotide” (BLASTn) database, not restricting the search to genus or species. The sequences identified presented higher similarity with Mycobacterium novocastrense (a sample), nontuberculous mycobacteria (NTM) and Gordonia bronchiallis (three samples) species. All samples of cheeses were from herds subject to intradermal comparative test, as provided by Brazilian programme for the control and eradication of brucellosis and tuberculosis, performed by private accredited veterinarian, showing negative results. Finally, the presence of DNA of Mycobacterium novocastrense and Gordonia bronchiallis in cheeses suggests a supposed disability in the current control of pathogens program, as well as the need for identification measures and stricter control, either at the level of flock as raw materials and the finished product. This gap in the legislation would be something for reflection, given the importance of NTM and other Actinomycetes to public health, especially when aimed at specific groups such as patients with immunosuppression.

BCG é uma das vacinas mais usadas no mundo. Avanços na manipulação genética têm permitido o seu uso como carreador de antígenos heterólogos, porém o aprimoramento dos sistemas de expressão se faz necessário, sendo o promotor um importante elemento, uma vez que regula o nível de produção do antígeno, induzindo uma resposta imunológica adequada. Avaliamos a atividade de diferentes promotores de micobactérias, como o PAg, PAN, PBlaF*, Phsp60 e um promotor ainda não caracterizado do micobacteriófago L5, usando o gene gfp como repórter da expressão, todos clonados no vetor extracromossomal, pLA71. Foi possível avaliar as cepas de M. smegmatis e BCG fluorescentes para quase todas as construções e alguns plasmídeos pLA71-p mostraram características diferentes dependentes da micobactéria transformada. Numa escala de força de expressão, os diferentes promotores se apresentaram como fraco (pLA71-PAN-gfp), médio (pLA71-PBlaf*-gfp) e forte (pLA71-Phsp60-gfp). Os rBCG foram usados para infecção de macrófagos e a atividade dos promotores não foi afetada após a internalização. Para ensaio de localização, camundongos foram inoculados com BCG e foi possível confirmar a presença de colônias (recombinantes ou não) nos pulmões após 1 e 3 dias de inoculação, por plaqueamento em meio sólido e por microscopia confocal. / BCG is one of the most widely used vaccines in the world. Advances in genetic manipulation have allowed their use as a carrier for heterologous antigens, however the improvement of systems of expression is necessary, the promoter being an important element, since it regulates the expression level of the antigen, inducing an adequate immune response. We evaluated the activity of different promoters of mycobacteria, such as PAg, PAN, PBlaF* and Phsp60, and the not yet characterized promoter of the micobacteriophage L5, using GFP as a reporter gene expression activity, all cloned in the extrachromosomal vector, pLA71. It was possible to evaluate promoters in the M. smegmatis and BCG strains, fluorescent for almost all constructions and some pLA71-p plasmids showed different characteristics dependent on the transformed mycobacterium. The different promoters showed expression levels as weak (pLA71-PAN-gfp), medium (pLA71-PBlaf*-gfp) and strong (pLA71-Phsp60-gfp). The rBCG were used for infection of macrophages and the activity of the promoters wasnt affected after internalization. For BCG location test, mice were inoculated and it was possible to confirm the presence of colonies (recombinant or not) in the lungs after 1 and 3 days after inoculation by plating on solid medium and by confocal microscopy.

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / The Mycobacterium genus includes M. tuberculosis complex (CMTB) species and others called nontuberculous mycobacteria (MNT). The CMTB bacilli cause tuberculosis (TB), a bacterial infectious disease, which commonly affects the lungs. Since the MNT cause other mycobacterial infections. The correct diagnosis of diseases caused by mycobacteria is essential for determining treatment. The tuberculosis treatment regimen in Brazil is recommended by the National Tuberculosis Control/Ministry of Health (PNCT/MS) and was recently modified. The main changes proposed by the Technical Advisory Committee of PNCT/MS were: to introduce a fourth drug, ethambutol, during the attack and take the combination of drugs in tablet form, with fixed-dose combinations (FDC) 4 in 1, for intensive treatment phase, and 2 in 1 for the maintenance phase. Due to the high incidence of tuberculosis in Brazil and worldwide, the emergence of resistant strains and the deployment of new therapies by the Ministry of Health, this study aimed to evaluate the susceptibility to antituberculosis or individually associated clinical isolates of Mycobacterium tuberculosis from the University Hospital Mary. The antimicrobial susceptibility alone or associated (rifampicin, isoniazid, pyrazinamide and ethambutol) was evaluated using the microdilution method (MMC) and compared to the proportion method (MP), gold standard method for susceptibility to mycobacteria. The MMC has proven to be a rapid, easily performed and well correlated with the MP. We have found various clinical isolates of M. tuberculosis resistant to one, two or three drug when tested against four drugs alone. However, when they were tested against four drugs associated with the FDC no strain was considered resistant. This fact is against the concept of FDC which aims to unite the four anti-TB drugs to combat the resistance of the bacilli. / O gênero Mycobacterium é constituído por espécies do Complexo M. tuberculosis (CMTB) e outras denominadas de micobactérias não tuberculosas (MNT). Os bacilos do CMTB causam a tuberculose (TB), uma doença infecciosa bacteriana, a qual comumente afeta os pulmões. Já as MNT causam outras micobacterioses. O diagnostico correto das doenças causadas pelas micobactérias é essencial para a definição do tratamento. O esquema de tratamento para a tuberculose no Brasil é preconizado pelo Programa Nacional de Controle da Tuberculose/Ministério da Saúde (PNCT/MS) e foi recentemente modificado. As principais mudanças propostas pelo Comitê Técnico Assessor do PNCT/MS foram: introduzir um quarto fármaco, o etambutol, na fase de ataque e adotar a associação dos fármacos em forma de comprimidos, com doses fixas combinadas (DFC) 4 em 1, para a fase de tratamento intensivo, e, 2 em 1, para fase de manutenção. Devido à grande incidência da tuberculose no Brasil e no mundo, à emergência de cepas resistentes e à implantação de novas terapias pelo Ministério da Saúde, este trabalho objetivou avaliar a suscetibilidade aos tuberculostáticos associados ou individualmente dos isolados clínicos de Mycobacterium tuberculosis do Hospital Universitário de Santa Maria. A suscetibilidade aos antimicrobianos isolados ou associados (rifampicina, isoniazida, pirazinamida e etambutol) foi avaliada através do método de microdiluição em caldo (MMC) e comparados ao método das proporções (MP), método padrão ouro para suscetibilidade de micobactérias. O MMC mostrou-se ser um método rápido, de fácil realização e boa correlação com o MP. Foram encontrados vários isolados clínicos de M. tuberculosis resistentes a um, dois ou três fármacos quando testados frente aos quatro fármacos isoladamente. Porem, quando estes foram, testados contra os quatro fármacos da DFC associados nenhuma cepa foi considerada resistente. Este fato vem de encontro ao conceito da DFC a qual pretende unir os quatro medicamentos anti-TB para combater a resistência dos bacilos.

A tuberculose (TB) é uma doença infecciosa causada por bactérias do gênero Mycobacterium que acomete principalmente o sistema respiratório. A cepa Beijing 1471 (M. tuberculosis) induz uma resposta altamente pró-inflamatória, enquanto que a cepa MP287/03 (M. bovis) induz uma fraca resposta inflamatória. O receptor P2X7 (P2X7R) é um sensor de ATP extracelular, uma molécula associada ao dano que é liberada a partir de células necróticas. A TB induzida por ambas as cepas hipervirulentas Beijing 1471 e MP287/03 é atenuada em camundongos deficientes do P2X7R. Portanto o objetivo do nosso trabalho foi avaliar o papel do P2X7R na resposta imune da TB induzida por essas cepas hipervirulentas. Nós percebemos que apesar das diferenças na capacidade imunomodulatória induzida pelas cepas Beijing 1471 e MP287/03, o P2X7R exerce um papel importante na severidade da doença induzida por ambas as cepas, e que a ausência desse receptor foi capaz de restabelecer a resposta imune pulmonar a perfis semelhantes ao induzido pela cepa de menor virulência H37Rv de M. tuberculosis. / Tuberculosis (TB) is infectious diseases caused by Mycobacterium tuberculosis (Mtb) that mainly affect the respiratory system. Beijing 1471 strain (Mtb) induce a strong pro-inflammatory response, while MP287/03 strain (M. bovis) induce a weak pro-inflammatory response. The P2X7 receptor (P2X7R) is a sensor of extracellular ATP, a damage-associated molecule that is released from necrotic cells and that induces pro-inflammatory cytokine. TB caused by both hypervirulent strains Beijing 1471 and MP287/03 is attenuated in P2X7R deficient mice (P2X7RKO). Therefore, our aim was to investigate the role of P2X7R in imune response of TB induced by MP287/03 and Beijing 1471 strains. We has note that despite Beijing 1471 and MP287/03 strains have opposite immunomodulatory properties, the P2X7R have an important role in modulating the immune response induced by both strains. Thus, the lung immune responses induced by both hypervirulent infections in the absence of this receptor were similar to that induced by less virulent H37Rv Mtb mycobacteria.

Orientador: Antônio Carlos Paes / Coorientador: Márcio Garcia Ribeiro / Banca: Christian Hirsch / Banca: Hélio Langoni / Resumo: O leite constitui importante fonte de nutrientes para a alimentação humana. No entanto, também pode servir como veículo para disseminação de microorganismos patogênicos. A tuberculose e as micobacterioses estão entre as infecções mais debilitantes que acometem humanos e os animais, com evolução crônica e progressiva, tendo recrudescido sua incidência em vários países. Espécies de Mycobacterium sp. tem alta capacidade de sobrevivência em leite e seus subprodutos. O presente estudo investigou a ocorrência de micobactérias em amostras de leite bovino cru, de rebanhos do sudeste do estado de São Paulo, utilizando cultivo microbiológico nos meios de Lowenstein-Jensen e Stonebrink, seguido de tipificação molecular pelo teste de reação em cadeia pela polimerase com o uso de enzimas de restrição. Foram processadas 300 amostras, 100 de tanques de expansão individuais, 100 de tanques coletivos e 100 obtidas no comércio informal da região amostrada. Obteve-se isolamento de 15 diferentes espécies de Mycobacterium, a saber: M. bovis, M. gordonae, M. fortuitum, M. intracellulare, M. flavescens, M. duvalli, M. haemophilum, M. immunogenum, M. lentiflavum, M. mucogenicum, M. novocastrense, M. parafortuitum, M. smegmatis, M. terrae e M. vaccae. Os isolamentos ocorreram nas seguintes proporções: 9% das amostras de tanques individuais, 7% das amostras de tanques coletivos e 8% das amostras de leite informal. Não houve associação estatística entre a ocorrência de micobactérias com os fatores epidemiológicos considerados nas propriedades amostradas. Considerando o impacto das micobacterioses na saúde pública e animal, particularmente a tuberculose bovina, a prevenção da exposição da população ao risco destas infecções torna-se fundamental. A investigação da presença de micobactérias em leite pode contribuir na melhoria da segurança alimentar inerente ao produto / Abstract: Milk represents an important source of nutrients for humans. However, it can also serve as a dissemination vehicle for pathogenic microorganisms. Tuberculosis and micobacteriosis are among the most debilitating diseases that affect humans and animals, being chronic and progressive, re-emerging its incidence in many countries. Mycobacterium sp. has high survivability in milk and its byproducts. The main objective of the study was to investigate the occurrence of mycobacteria in bovine raw milk samples from farms along southeast region of Sao Paulo state, using microbiological culture on Lowenstein-Jensen and Stonebrink media followed by molecular typification with polymerase chain reaction tests using restriction enzimes. Three hundred milk samples were processed, 100 from individual bulk tanks, 100 from collective bulk tanks and 100 obtained in informal trading of sampled region. Fifteen different isolates of Mycobacterium species were obtained: M. bovis, M. gordonae, M. fortuitum, M. intracellulare, M. flavescens, M. duvalli, M. haemophilum, M. immunogenum, M. lentiflavum, M. mucogenicum, M. novocastrense, M. parafortuitum, M. smegmatis, M. terrae and M. vaccae. Isolations occurred on following proportions: 9% of the individual bulk tanks samples, 7% of the collective bulk tanks samples and 8% of the informal trade milk samples. There was no statistical association between the occurrence of mycobacteria on samples with the epidemiological factors considered on sampled farms. Considering the impact of mycobacteriosis on public and animal health, especially bovine tuberculosis, is from main importance the prevention of public exposure to risk of these diseases. Investigative approaches of the presence of mycobacteria in raw milk may contribute to improvement of food security inherent in the product / Mestre

A tuberculose (TB) é uma doença infecciosa causada por bactérias do gênero Mycobacterium que acomete principalmente o sistema respiratório. A cepa Beijing 1471 (M. tuberculosis) induz uma resposta altamente pró-inflamatória, enquanto que a cepa MP287/03 (M. bovis) induz uma fraca resposta inflamatória. O receptor P2X7 (P2X7R) é um sensor de ATP extracelular, uma molécula associada ao dano que é liberada a partir de células necróticas. A TB induzida por ambas as cepas hipervirulentas Beijing 1471 e MP287/03 é atenuada em camundongos deficientes do P2X7R. Portanto o objetivo do nosso trabalho foi avaliar o papel do P2X7R na resposta imune da TB induzida por essas cepas hipervirulentas. Nós percebemos que apesar das diferenças na capacidade imunomodulatória induzida pelas cepas Beijing 1471 e MP287/03, o P2X7R exerce um papel importante na severidade da doença induzida por ambas as cepas, e que a ausência desse receptor foi capaz de restabelecer a resposta imune pulmonar a perfis semelhantes ao induzido pela cepa de menor virulência H37Rv de M. tuberculosis. / Tuberculosis (TB) is infectious diseases caused by Mycobacterium tuberculosis (Mtb) that mainly affect the respiratory system. Beijing 1471 strain (Mtb) induce a strong pro-inflammatory response, while MP287/03 strain (M. bovis) induce a weak pro-inflammatory response. The P2X7 receptor (P2X7R) is a sensor of extracellular ATP, a damage-associated molecule that is released from necrotic cells and that induces pro-inflammatory cytokine. TB caused by both hypervirulent strains Beijing 1471 and MP287/03 is attenuated in P2X7R deficient mice (P2X7RKO). Therefore, our aim was to investigate the role of P2X7R in imune response of TB induced by MP287/03 and Beijing 1471 strains. We has note that despite Beijing 1471 and MP287/03 strains have opposite immunomodulatory properties, the P2X7R have an important role in modulating the immune response induced by both strains. Thus, the lung immune responses induced by both hypervirulent infections in the absence of this receptor were similar to that induced by less virulent H37Rv Mtb mycobacteria.

Introdução: No ano de 2007, foram diagnosticados 190 casos de infecção hospitalar por Micobactéria de Crescimento Rápido (MCR) em pacientes submetidos a cirurgias videoassistidas em hospitais da região metropolitana de Vitória/ES. Os pacientes foram acompanhados na unidade de referência do Hospital Universitário Cassiano Antonio de Moraes da Universidade Federal do Espírito Santo (HUCAM/UFES), onde foi instituído tratamento específico e estabelecida investigação por métodos de imagens, sobretudo Tomografia Computadorizada (TC), para identificação do número, extensão e localização das lesões. Objetivo: Identificar a distribuição e a frequência dos achados de TC em pacientes com diagnóstico clínico e epidemiológico de infecção hospitalar por MCR após cirurgias laparoscópicas. Métodos: Foi conduzido um estudo descritivo utilizando os dados de prontuários da unidade de referência do HUCAM/UFES e as imagens das tomografias computadorizadas realizadas. Os exames foram analisados, em consenso, por dois radiologistas, que identificaram, separadamente, o comprometimento de pele/subcutâneo, de planos musculofasciais da parede abdominal e do intraperitoneal. Os padrões de comprometimento tabulados foram: densificações, coleções, nódulos maiores ou iguais a 1,0 cm (nódulos), nódulos menores que 1,0 cm (nódulos pequenos), nódulos com pseudocavitação e nódulos pequenos com pseudocavitação. Resultados: 26 pacientes atendiam aos critérios preestabelecidos. As infecções foram relacionadas a: nove cirurgias bariátricas, uma cirurgia bariátrica com colecistectomia, sete colecistectomias, uma colecistectomia somada à correção de hérnia inguinal com colocação de tela, três cirurgias para correção de refluxo gastroesofágico (CRGE), três laparoscopias diagnósticas, uma salpingectomia e uma apendicectomia.O menor intervalo de tempo entre a cirurgia e o exame de tomografia computadorizada foi de 8 dias, o maior, 351 dias, com média de 112 dias e mediana de 83. Todos os pacientes apresentaram algum achado de imagem no subcutâneo, sendo que seis pacientes tiveram comprometimento exclusivo na pele/subcutâneo, e os demais apresentaram comprometimento concomitante de planos musculofasciais e/ou intraperitoneal. Os achados no subcutâneo foram: densificação (88,4%), nódulo pequeno (61,5%), nódulo pequeno pseudocavitado (23,0%), nódulo (38,4%), nódulo pseudocavitado (15,3%) e coleção (26,9%); os achados nos planos musculofasciais foram: densificação (61,5%), nódulo pseudocavitado (3,8%) e coleção (15,3%); e os achados intraperitoneais foram: densificação (46,1%), nódulo pequeno (42,3%), nódulo (15,3%) e coleção (11,5%). Nenhum dos cinco pacientes que realizaram a biópsia subcutânea anteriormente à TC apresentou nódulo subcutâneo maior do que 1,0 cm; comparativamente, dentre aqueles que realizaram a biópsia após a TC, constatou-se que 10 pacientes (47,6%) apresentaram nódulos subcutâneos. A comparação entre os 16 pacientes com intervalo de tempo entre cirurgia e TC menor do que 3 meses e os 10 pacientes com intervalo maior do que 3 meses demonstrou que: os pacientes com menor intervalo de tempo apresentavam maior porcentagem de densificações no subcutâneo (100%), nos planos musculofasciais (81,2%) e intraperitoneais (70,0%); já no grupo com maior intervalo, as porcentagens foram de 66,6%, 30,0% e 10,0%, respectivamente. Conclusão: os achados tomográficos, em ordem decrescente de frequência, foram: a) no subcutâneo: densificação, nódulo pequeno, nódulo, nódulo pequeno pseudocavitado, nódulo pseudocavitado e coleção; b) nos planos musculofasciais: densificação, coleção e nódulo pseudocavitado; e c) intraperitoneal: densificação, nódulo pequeno, nódulo e coleção / Introduction: In 2007, 190 cases of hospital-acquired infection due to rapidly growing mycobacterial (RGM) were diagnosed in patients undergoing video-assisted surgery in the hospitals of the metropolitan region of Vitória, ES (Brazil). The patients were followed at the referral unit of the University Hospital Cassiano Antonio de Moraes of the Federal University of Espírito Santo (HUCAM), where specific treatment was instituted and research by imaging methods - particularly computed tomography (CT) - was initiated to identify the number, extent, and location of the lesions. Objective: To identify the distribution and frequency of CT findings in patients with clinical and epidemiological diagnosis of hospital-acquired RGM infection after laparoscopic surgery. Method: A descriptive study was conducted using medical records data from the referral unit of the HUCAM and the computed tomography (CT) images. The scans were analyzed by two radiologists, in consensus, who individually identified compromised skin/subcutaneous areas, muscle-fascial planes of the abdominal wall and intraperitoneal regions. The involvement patterns were tabulated as: densification, collections, nodules >= 1.0 cm (nodules), nodules < 1.0 cm (small nodules), pseudocavitated nodules, and small pseudocavitated nodules. Results: Twenty-six patients met the established criteria. The infections were related to 9 bariatric surgeries, 1 bariatric surgery with cholecystectomy, 7 cholecystectomies, 1 cholecystectomy along with inguinal hernia correction with screen placement, 3 surgeries for correction of gastroesophageal reflux, 3 diagnostic laparoscopies, 1 salpingectomy, and 1 appendectomy. The shortest time interval between surgery and CT examination was 8 days and the longest interval was 351 days, with a mean of 112 days and a median of 83 days. All patients presented subcutaneous involvement on the CT image; 6 patients had exclusive impairment in the skin/subcutaneous tissue whereas the others had concomitant impairment in musculo-fascial and/or intraperitoneal planes. The subcutaneous findings were: densification (88.4%), small nodules (61.5%), small pseudocavitated nodules (23.0%), nodules (38.4%), pseudocavitated nodules (15.3%), and collections (26.9%). The findings in the musculo-fascial planes were: densification (61.5%), pseudocavitated nodules (3.8%), and collections (15.3%). The intraperitoneal findings were: densification (46.1%), small nodules (42.3%), nodules (15.3%) and collections (11,5%). None of the 5 patients who underwent biopsy before CT showed subcutaneous nodules larger than 1.0 cm; in contrast, of those who underwent biopsy after CT, 10 patients (47.6%) had subcutaneous nodules. A comparison between the 16 patients with a time interval of less than 3 months between surgery and CT, and the 10 patients with an interval of more than 3 months showed that patients with a shorter time interval had a higher percentage of subcutaneous densification (100%), musculo-fascial plane densification (81.2%), and intraperitoneal densification (70.0%); for those with a longer interval, the percentages were 66.6%, 30.0%, and 10.0%, respectively. Conclusion: the subcutaneous CT findings in descending order of frequency were: densification, small nodules, nodules, small pseudocavitated nodules, pseudocavitated nodules, and collections. The musculo-fascial plane CT findings were: densification, collections, and pseudocavitated nodules. The intraperitoneal CT findings were: densification, small nodule, nodules and collections

Introdução: No ano de 2007, foram diagnosticados 190 casos de infecção hospitalar por Micobactéria de Crescimento Rápido (MCR) em pacientes submetidos a cirurgias videoassistidas em hospitais da região metropolitana de Vitória/ES. Os pacientes foram acompanhados na unidade de referência do Hospital Universitário Cassiano Antonio de Moraes da Universidade Federal do Espírito Santo (HUCAM/UFES), onde foi instituído tratamento específico e estabelecida investigação por métodos de imagens, sobretudo Tomografia Computadorizada (TC), para identificação do número, extensão e localização das lesões. Objetivo: Identificar a distribuição e a frequência dos achados de TC em pacientes com diagnóstico clínico e epidemiológico de infecção hospitalar por MCR após cirurgias laparoscópicas. Métodos: Foi conduzido um estudo descritivo utilizando os dados de prontuários da unidade de referência do HUCAM/UFES e as imagens das tomografias computadorizadas realizadas. Os exames foram analisados, em consenso, por dois radiologistas, que identificaram, separadamente, o comprometimento de pele/subcutâneo, de planos musculofasciais da parede abdominal e do intraperitoneal. Os padrões de comprometimento tabulados foram: densificações, coleções, nódulos maiores ou iguais a 1,0 cm (nódulos), nódulos menores que 1,0 cm (nódulos pequenos), nódulos com pseudocavitação e nódulos pequenos com pseudocavitação. Resultados: 26 pacientes atendiam aos critérios preestabelecidos. As infecções foram relacionadas a: nove cirurgias bariátricas, uma cirurgia bariátrica com colecistectomia, sete colecistectomias, uma colecistectomia somada à correção de hérnia inguinal com colocação de tela, três cirurgias para correção de refluxo gastroesofágico (CRGE), três laparoscopias diagnósticas, uma salpingectomia e uma apendicectomia.O menor intervalo de tempo entre a cirurgia e o exame de tomografia computadorizada foi de 8 dias, o maior, 351 dias, com média de 112 dias e mediana de 83. Todos os pacientes apresentaram algum achado de imagem no subcutâneo, sendo que seis pacientes tiveram comprometimento exclusivo na pele/subcutâneo, e os demais apresentaram comprometimento concomitante de planos musculofasciais e/ou intraperitoneal. Os achados no subcutâneo foram: densificação (88,4%), nódulo pequeno (61,5%), nódulo pequeno pseudocavitado (23,0%), nódulo (38,4%), nódulo pseudocavitado (15,3%) e coleção (26,9%); os achados nos planos musculofasciais foram: densificação (61,5%), nódulo pseudocavitado (3,8%) e coleção (15,3%); e os achados intraperitoneais foram: densificação (46,1%), nódulo pequeno (42,3%), nódulo (15,3%) e coleção (11,5%). Nenhum dos cinco pacientes que realizaram a biópsia subcutânea anteriormente à TC apresentou nódulo subcutâneo maior do que 1,0 cm; comparativamente, dentre aqueles que realizaram a biópsia após a TC, constatou-se que 10 pacientes (47,6%) apresentaram nódulos subcutâneos. A comparação entre os 16 pacientes com intervalo de tempo entre cirurgia e TC menor do que 3 meses e os 10 pacientes com intervalo maior do que 3 meses demonstrou que: os pacientes com menor intervalo de tempo apresentavam maior porcentagem de densificações no subcutâneo (100%), nos planos musculofasciais (81,2%) e intraperitoneais (70,0%); já no grupo com maior intervalo, as porcentagens foram de 66,6%, 30,0% e 10,0%, respectivamente. Conclusão: os achados tomográficos, em ordem decrescente de frequência, foram: a) no subcutâneo: densificação, nódulo pequeno, nódulo, nódulo pequeno pseudocavitado, nódulo pseudocavitado e coleção; b) nos planos musculofasciais: densificação, coleção e nódulo pseudocavitado; e c) intraperitoneal: densificação, nódulo pequeno, nódulo e coleção / Introduction: In 2007, 190 cases of hospital-acquired infection due to rapidly growing mycobacterial (RGM) were diagnosed in patients undergoing video-assisted surgery in the hospitals of the metropolitan region of Vitória, ES (Brazil). The patients were followed at the referral unit of the University Hospital Cassiano Antonio de Moraes of the Federal University of Espírito Santo (HUCAM), where specific treatment was instituted and research by imaging methods - particularly computed tomography (CT) - was initiated to identify the number, extent, and location of the lesions. Objective: To identify the distribution and frequency of CT findings in patients with clinical and epidemiological diagnosis of hospital-acquired RGM infection after laparoscopic surgery. Method: A descriptive study was conducted using medical records data from the referral unit of the HUCAM and the computed tomography (CT) images. The scans were analyzed by two radiologists, in consensus, who individually identified compromised skin/subcutaneous areas, muscle-fascial planes of the abdominal wall and intraperitoneal regions. The involvement patterns were tabulated as: densification, collections, nodules >= 1.0 cm (nodules), nodules < 1.0 cm (small nodules), pseudocavitated nodules, and small pseudocavitated nodules. Results: Twenty-six patients met the established criteria. The infections were related to 9 bariatric surgeries, 1 bariatric surgery with cholecystectomy, 7 cholecystectomies, 1 cholecystectomy along with inguinal hernia correction with screen placement, 3 surgeries for correction of gastroesophageal reflux, 3 diagnostic laparoscopies, 1 salpingectomy, and 1 appendectomy. The shortest time interval between surgery and CT examination was 8 days and the longest interval was 351 days, with a mean of 112 days and a median of 83 days. All patients presented subcutaneous involvement on the CT image; 6 patients had exclusive impairment in the skin/subcutaneous tissue whereas the others had concomitant impairment in musculo-fascial and/or intraperitoneal planes. The subcutaneous findings were: densification (88.4%), small nodules (61.5%), small pseudocavitated nodules (23.0%), nodules (38.4%), pseudocavitated nodules (15.3%), and collections (26.9%). The findings in the musculo-fascial planes were: densification (61.5%), pseudocavitated nodules (3.8%), and collections (15.3%). The intraperitoneal findings were: densification (46.1%), small nodules (42.3%), nodules (15.3%) and collections (11,5%). None of the 5 patients who underwent biopsy before CT showed subcutaneous nodules larger than 1.0 cm; in contrast, of those who underwent biopsy after CT, 10 patients (47.6%) had subcutaneous nodules. A comparison between the 16 patients with a time interval of less than 3 months between surgery and CT, and the 10 patients with an interval of more than 3 months showed that patients with a shorter time interval had a higher percentage of subcutaneous densification (100%), musculo-fascial plane densification (81.2%), and intraperitoneal densification (70.0%); for those with a longer interval, the percentages were 66.6%, 30.0%, and 10.0%, respectively. Conclusion: the subcutaneous CT findings in descending order of frequency were: densification, small nodules, nodules, small pseudocavitated nodules, pseudocavitated nodules, and collections. The musculo-fascial plane CT findings were: densification, collections, and pseudocavitated nodules. The intraperitoneal CT findings were: densification, small nodule, nodules and collections

Submitted by Edisangela Bastos (edisangela@ufpa.br) on 2013-04-29T22:09:36Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_DiversidadeGeneticaEspecies.pdf: 1083351 bytes, checksum: 237ca9f105fc1f7f2686f5b026251b29 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Rosa Silva(arosa@ufpa.br) on 2013-05-02T15:40:03Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_DiversidadeGeneticaEspecies.pdf: 1083351 bytes, checksum: 237ca9f105fc1f7f2686f5b026251b29 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-05-02T15:40:03Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_DiversidadeGeneticaEspecies.pdf: 1083351 bytes, checksum: 237ca9f105fc1f7f2686f5b026251b29 (MD5) Previous issue date: 2009 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Nos últimos anos tem sido observado um aumento de relatos de infecções associadas às micobactérias não tuberculosas (MNT). No entanto, o conhecimento da frequência e as espécies envolvidas nas infecções pulmonares no Brasil são limitados. Neste trabalho foi avaliada a ocorrência de espécies de MNT isoladas no Laboratório de Micobactérias do Instituto Evandro Chagas, Laboratório de Regional de Saúde Pública da Região Norte. Foram analisadas todas as MNT isoladas de espécimes clínicos pulmonares e não pulmonares de indivíduos com infecção, de acordo com os critérios da American Thoracic Society e Ministério da Saúde entre os anos de 2004 a 2007. As MNT foram caracterizadas por PCR-restriction analysis (PRA-hsp65) e sequenciamento dos genes do RNAr 16S, hsp65, rpoB. Foram identificados 51 indivíduos com infecção pulmonar, sendo as seguintes MNT envolvidas: M. abscessus (n=2), M. bolletii (n=4), M. massiliense (n=9), M. avium (n=5), M. colombiense (n=5), M. fortuitum (n=4), M. simiae (n=2), M. interjectum (n=4), M. intracellulare (n=5), M. kansasii (n=1), M. scrofulaceum (n=1) e M. terrae (n=1). Em oito indivíduos foram isoladas MNT não identificadas ao nível de espécie, podendo representar nova entidade taxonômica pertencente ao complexo M.simiae. O presente estudo descreveu a diversidade de MNT isoladas de espécimes clínicos pulmonares no estado do Pará, Região Amazônica Brasileira. O achado de casos infecções pulmonares diagnosticados e tratados sem sucesso por vários meses como tuberculose apontam para a necessidade de isolamento e identificação da micobactéria envolvida antes estabelecimento de falência terapêutica. / Recent years has seen an increase in reports of infections associated with nontuberculous mycobacteria (NTM). However, knowledge of the frequency and the species involved in pulmonary and non-pulmonary infections in Brazil are limited. We evaluated the occurrence of species of NTM isolated Mycobacteria Laboratory of the Instituto Evandro Chagas, Regional Laboratory of Public Health of the North. We analyzed all NTM isolates from pulmonary clinical specimens of individuals with infection, according to the criteria of the American Thoracic Society and the Department of Health between the years 2004 to 2007. The NTM were characterized by PCR-restriction analysis (PRA-hsp65) and 16S rRNA, hsp65 e rpoB genes sequencing. We identified 51 patients with infection caused by NTM, which the M. abscessus (n=2), M. bolletii (n=4), M. massiliense (n=9), M. avium (n=5), M. colombiense (n=5), M. fortuitum (n=4), M. simiae (n=2), M. interjectum (n=4), M. intracellulare (n=5), M. kansasii (n=1), M. scrofulaceum (n=1) e M. terrae (n=1) species that involved in lung infection. In eight individuals the NTM isolates were not identified at the species level, which may represent new taxonomic entity from M. simiae complex. This study describes the diversity of NTM isolated from pulmonary clinical specimens in the state of Pará, Brazilian Amazon Region. The finding cases of lung infections diagnosed and treated unsuccessfully for several months as tuberculosis suggest the need for isolation and identification of mycobacteria involved before establishment of treatment failure.

Submitted by Edisangela Bastos (edisangela@ufpa.br) on 2013-06-25T19:11:18Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Tese_CaracterizacaoGeneticaMicobacterias.pdf: 2178660 bytes, checksum: 2d25a97aa686e758a27ecf791fce061f (MD5) / Approved for entry into archive by Irvana Coutinho(irvana@ufpa.br) on 2013-06-28T12:15:06Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Tese_CaracterizacaoGeneticaMicobacterias.pdf: 2178660 bytes, checksum: 2d25a97aa686e758a27ecf791fce061f (MD5) / Made available in DSpace on 2013-06-28T12:15:06Z (GMT). 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O presente trabalho descreve a diversidade de MNT isoladas de espécimes pulmonares encaminhados ao Instituto Evandro Chagas entre 1999 e 2011 para pesquisa de micobactérias. As MNT foram inicialmente caracterizadas por PCR-restriction analysis (PRA-hsp65) e reidentificadas por sequenciamento dos genes RNAr 16S, hsp65, rpoB e região ITS1. De acordo com os achados, o método de PRA-hsp65 mostrou-se uma ferramenta prática para identificação MNT, permitindo a distinção de uma grande variedade de espécies de forma rápida, simples e barata, em comparação com o sequenciamento. Além disso, como sugerido no presente estudo, de acordo com a diversidade de espécies local, este método pode ser passível de modificações para proporcionar maior poder discriminatório. Para isolados do complexo Mycobacterium avium (MAC), a aplicação da análise de sequência do gene rpoB não se mostrou como alternativa adequada para discriminação de isolados do Estado do Pará, gerando resultados discrepantes com baixa resolução taxonômica. Um espectro particular de MNT foi associado aos casos de infecção pulmonar na região, representado principalmente por espécies dos complexos M. chelonae-M. abscessus (M. abscessus, M. massiliense e M. bolletii), M. avium (M. avium, M. intracellulare e M. colombiense) e M. simiae (M. simiae e taxa não nomeados). Dentre esse último, duas potenciais espécies foram detectadas, M. paraensis sp. nov. e M. amazoniensis sp. nov., sendo propostas como novos membros do complexo M. simiae. Entre os indivíduos afetados, as principais características encontradas foram sexo feminino, a idade superior a 50 anos, etnia parda e história de infecção prévia por tuberculose. Embora este estudo não demonstre a real magnitude de infecções pulmonares por MNT no Estado do Pará, ele descreve a diversidade de espécies e claramente retrata a importância desse grupo na região, chegando a representar 13,5% dos isolamentos micobacterianos em um laboratório de referência. Conjuntamente a esse achado, a identificação de casos de MNT em indivíduos presuntivamente diagnosticados com TB, indica a necessidade de confirmação bacteriológica, especialmente nos casos de resistência primária ao esquema básico da tuberculose. / In recent years have been seen increased reports of nontuberculous mycobacteria (NTM) infections in the world. However, data on frequency and NTM species associated with pulmonary infections are still limited in Brazil, especially in states of Northern Brazil. The knowledge of species associated with NTM lung infections has clinical and epidemiological importance, being molecular techniques efficient tools to provide diagnostic species-specific, which is necessary for choice of appropriate therapy. This study describes the diversity of NTM isolated from respiratory specimens at the Evandro Chagas Institute between 1999 and 2011. The NTM were initially characterized by PCR-restriction analysis (PRA-hsp65) and reidentificated by sequencing of 16S rRNA, hsp65, rpoB and ITS1 targets. According to ours findings, the PRA-hsp65 method proved to be a convenient tool for identifying NTM, allowing distinction of a variety of species quickly, simply and inexpensively, as compared to the sequencing. Moreover, as suggested in this study, according to local species diversity, this method can be subject to modifications to provide greater discriminatory power. Sequence analysis of the rpoB gene of Mycobacterium avium complex (MAC) revealed that this target is not a suitable alternative for discrimination of isolates from State of Para, because it generated discrepant results with low taxonomic resolution. M. chelonae, M. avium and M. simiae complexes were the most frequent NTM. Two potential species were detected, M. paraensis sp. nov. and M. amazoniensis sp. nov., being proposed as new members of the M. simiae complex. Among the patients with NTM disease, the main characteristics found were women older than 50 years, pardo ethnic group and previous tuberculosis. Although this study does not show the real magnitude of NTM lung infections in State of Para, it describes the diversity of species and clearly reveals the importance of this group in the region, which has accounted 13.5% of mycobacterial isolates in a reference laboratory. The findings highlight the need for bacteriological confirmation of cases presumptively diagnosed as TB with primary resistance to therapy for TB.