The aim of the study in this thesis was to assess the stability of the mycotoxin, cyclopiazonic acid (CPA) in milk and dairy products processed from contaminated milk. A method was developed to detect CPA in milk and milk products using micellar electrokinetic capillary chromatography (MEKC), a technique of capillary electrophoresis (CE), which was rapid and non-labour-intensive. The quantifying efficiency of CE in detecting CPA was compared to Reverse Phase Liquid Chromatography. Heat-stability of CPA in milk was assessed under different conditions. A longer heat treatment of 60 degrees centigrade for 30 minutes led to a 10% decrease in the level of CPA. The results from this thesis demonstrate that CPA in milk at concentrations found in naturally contaminated milk could not be eliminated by the heat-treatment during milk processing, storage, processing and manufacture of dairy products. Occurrence of CPA in cheese curd, butter or cream following manufacture with contaminated milk was demonstrated. CPA is left in milk despite UV-visible radiation treatment with or without hydrogen peroxide and/or riboflavin. Chemical treatment, which is capable of completely eliminating CPA, is prohibited and impractical to use for milk treatment. Stability of CPA in milk and milk products confirms the potential of the toxin to reach consumers of dairy products. / Doctor of Philosophy (PhD)

Le micotossine sono metaboliti tossici prodotti da funghi in grado di svilupparsi sulle derrate alimentari. Diverse strategie sono state considerate per risolvere questo problema studiando la crescita di funghi/produzione di micotossine. Questa tesi è focalizzata sullo sviluppo/validazione di modelli matematici per prevedere la contaminazione di micotossine (deossinivalenolo, fumonisine e aflatossine) in cereali (mais/grano) sulla base di dati meteorologici. Il primo capitolo fornisce un’introduzione sulla teoria dei modelli e sui pat-sistemi modelizzati. Il secondo si concentra sulla presenza di tricoteceni e zearalenone nel frumento coltivato in Italia. Nel cap.3 sono stati confrontate le differenze predittive di modelli empirici/meccanicistici per la contaminazione di deossinivalenolo nel grano. Nel cap.4 è stata descritta la contaminazione da fumonisine e aflatossine in mais coltivato in Italia. I capitoli 5 e 6 analizzano il pato-sistema mais-Aspergillus flavus, il primo si concentra sulla sporulazione di A. flavus , il secondo sullo sviluppo di un modello per prevedere la contaminazione da aflatossina. Un altro modello meccanicistico per prevedere la presenza di fumonisina nel mais è descritto nel cap.7. L'ultimo capitolo riassume l'attività svolta nel progetto europeo MYCORED in cui sono stati coinvolti diversi paesi in tutto il mondo che hanno fornito i dati necessari per la validazione dei modelli. / Mycotoxin are toxic secondary metabolite produced by fungi able to colonize crops and thus posing a potential menace to human/animal health. Several strategies have been considered to mitigate the problem studying the variables related to mould growth and mycotoxin production. This thesis focuses on the development and validation of mechanistic models to predict mycotoxins (deoxinivalenol, fumonisins and aflatoxins) contamination in cereals (maize/ wheat) based on meteorological data. The first chapter introduce modelling theory, and patho-systems analysed. Chapter 2 focuses on trichothecenes and zearalenone occurrence in wheat produced in Italy. Predictive performance of empirical and mechanistic models for deoxnivalenol contamination in wheat were discussed in chapter 3. Chapter 4 described fumonisins and aflatoxins occurrence in maize grown in Italy. Chapters 5 and 6 analised the patho-system maize-Aspergillus flavus; the former focuses on the dynamics of A. flavus sporulation the lalatter on the development of a mechanistic model to predict aflatoxin produced by A. falvus. Another mechanistic model for Fusarium ear rot and fumosin production in maize (chapter 7). The last chapter summarised the activity done in the European project MYCORED in which several countries worldwide were involved and wheat and/or maize samples collected with data necessary for model validation.

Several Fusarium species can cause Fusarium head blight (FHB) and Fusarium crown rot (FCR) diseases in wheat and these are of economic importance in wheat production systems globally. Fusarium graminearum represents a model pathogen species to study these diseases because it has a sequenced genome, commercially available gene expression arrays and an growing collection of mutants impaired in pathogenicity and virulence, at least for FHB. FCR occurs at the stem base of the wheat plant, causing major reductions in grain yield. FCR has been much less intensively researched than FHB and the infection process of F. graminearum during crown rot disease in wheat has not been studied previously at the molecular level. Fungal biomass estimations by real-time quantitative PCR analysis of DNA from inoculated plants identified three distinct phases of infection during FCR, an initial increase in fungal mass in phase 1 up to 2 days post inoculation (dpi), then a reduction during phase 2 until 14 dpi followed by a large increase thereon in phase 3 that corresponded to symptom development. Histological characterisation of F. graminearum colonisation during these three phases of infection showed that initially the spores germinated on the stem surface at the point of inoculation forming a superficial hyphal mat. This occurred within the first two days of infection. The second phase was characterised by a period of low amounts of fungal tissue present in the infected plants and 14 days following infection hyphae were only observed below the point of inoculation at the stem base of the wheat seedling and had penetrated and colonised the adaxial epidermis of the outer leaf sheath. Following this, the third phase was characterised by a major colonisation of the internal tissues of the crown which corresponded to visible symptom development around 35 days after inoculation. Fungal gene expression during all three phases of infection were examined using the Affymetrix GeneChip system comprised of 22,000 F. graminearum gene probe sets. This analysis showed 1,839 genes were significantly up regulated in planta compared to axenic vegetative mycelia, including some known FHB virulence genes (e.g. those involved in the biosynthesis of trichothecene toxins). Fungal genes differentially regulated between the phases were identified indicating that FCR disease development requires a coordinated process involving distinct fungal gene expression programs. A bioinformatic comparison of global F. graminearum gene expression during FCR of wheat with published data for FHB of barley indicated similarities at very early stages of infection but divergence thereafter. It was decided to functionally test whether F. graminearum utilises the same virulence genes in FCR and FHB diseases. Because no virulence genes have been previously identified from FCR studies a small group of genes were initially selected from the FCR gene expression studies for further functional analysis using gene knock-out technology. Only two of these genes showed a changed phenotype during Fusarium infection of wheat plants and they encoded a probable ABC transporter (FgABC1) and a probable superoxide dismutase (FgSOD1). It was interesting to note that even though both FgABC1 and FgSOD1 exhibited similar transcription profiles during both FCR of wheat and FHB of barley it was found that FgABC1 was specifically required for full FCR disease development on the wheat cultivar Kennedy whereas FgSOD1 was specifically required for FHB disease on the same cultivar. This indicated that F. graminearum virulence genes can show specificity to the infection of different plant tissues and that these types of genes cannot be predicted based only on their transcription profiles. It is suggested that F. graminearum induces a global set of virulence factors but only some of these may be effective in particular tissues. To test further whether there was tissue specialisation for specific tissues and FCR & FHB diseases, a group of F. graminearum genes that were known virulence factors during FHB were tested to see if they were also virulence factors for FCR. This analysis showed that two genes displayed specificity only for FHB and five were virulence factors for both FHB and FCR. One of the genes that was a virulence factor for both diseases was the Tri5 gene that is necessary for the biosynthesis of trichothecene mycotoxins. This gene and these toxins did not appear to be necessary for symptom development and the induction of host defence responses but were necessary for fungal colonisation of the crown and stem in later stages of infection. Interestingly there were parallels in the role played by the Tri5 gene in FCR and that reported for FHB where it is necessary for colonisation for the spike. This study is the first molecular analysis of any Fusarium species during crown rot of wheat. Importantly, it shows that there may be specialisation towards host tissues for some virulence genes but also suggests that some factors may be non-specifically required for infection and it is these factors that will represent attractive targets for future control measures of both diseases.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The effects of aflatoxin B1 (AFB1) (1μg/mL) were evaluated and sorbents β-glucans derived from Saccharomyces cerevisae with 65% of active ingredient (β-glu) (1mg/mL) and montmirillonite (MMT) (5mg/mL) under ruminal fermentation. Two in vitro assays were conducted. On the first assay the objectives were to determine the production of short chain fatty acids, the production of ammonia during 24-h in vitro. While on the second assay the production of methane (CH4) and kinetic parameters based on gas production date were determined (GPmax= maxim gas production in t time; Lag= lag phase before gas production commenced; S=gas production rate (h-1)) during 72-h in vitro incubation. In each assay six repetitions were made for the following treatments: CONT: control (without AFB1 or sorbents); AF: AFB1 (1μg/mL); β-glu (1mg/mL); β-glu + AF: (1mg/mL of β-glu + 1μg/mL of AFB1); MMT: (5mg/mL); MMT + AF: (5mg/mL of MMT + 1μg/mL of AFB1). The amount of AGCC produced by the β-glu (67,7 mM) treatment was significantly higher about CONT (57,72 mM) and MMT (53,3 mM). treatments. On the other hand, MMT clay reduced the production of NH3 (9,6 mM) about CONT (11,4 mM), AF (12,6 mM) and β-glu (12,2 mM). The amount of GPmax by the β-glu treatment was 103,4 mL, significantly higher about produced CONT (89,0 mL) e MMT (91,6 mL). There was also higher gas production rate by the β-glu treatment. The montmorilonite raised the lag phase and reduced the CH4 production. The results of this study suggest that AFB1 (1μg/mL) has no toxic effect on ruminal fermentation. Whereas the β-glu impacts the ruminal fermentation by increase the AGCC produced. The montmorilonite can delay the bacterial colonization but does t effect the quantity of AGCC produced. / Foram avaliados os efeitos da aflatoxina B1 (AFB1) (1μg/mL) e os adsorventes β-glucanas devivadas de Saccharomyces cerevisae com 65% de princípio ativo (β-glu) (1mg/mL) e montmorilonita (MMT) (5mg/mL) sobre a fermentação ruminal. Foram conduzidos dois ensaios in vitro, no primeiro ensaio o propósito foi determinar a produção de ácidos graxos de cadeia curta, a produção de amônia em 24h de incubação. Enquanto no segundo ensaio determinou-se a produção de metano (CH4) e os parâmetros da cinética da produção de gases (Vf = volume final de gás (ml) no tempo t; L = tempo de colonização; S = taxa de degradação (h-1)) no período de 72h de incubação. Em cada ensaio seis repetições foram realizadas para os seguintes tratamentos: CONT: controle (sem AFB1 ou adsorventes); AF: AFB1 (1μg/mL); β-glu (1mg/mL); β-glu + AF: (1mg/mL de β-glu + 1μg/mL de AFB1); MMT: (5mg/mL); MMT + AF: (5mg/mL de MMT + 1μg/mL de AFB1). A quantidade produzida de AGCC foi significativamente maior no tratamento β-glu (67,7 mM) em relação aos tratamentos CONT (57,72 mM) e MMT (53,3 mM). A MMT reduziu significativamente a produção de NH3 (9,6 mM) em relação aos tratamentos CONT (11,4 mM), AF (12,6 mM) e β-glu (12,2 mM). O tratamento β-glu produziu maior volume de gás (103, 4 mL) em relação aos tratamentos CONT (89,0 mL) e MMT (91,6 mL). Também o tratamento β-glu teve maior taxa de degradação em relação aos demais tratamentos. A montmorilonita aumentou o tempo de colonização e reduziu a produção de CH4. Os resultados deste estudo sugerem que a AFB1 (1μg/mL) não é tóxica a fermentação ruminal. Enquanto, o uso do β-glu impacta a fermentação ruminal, aumentando a produção de AGCC. O uso de montmorilonita pode retardar a colonização bacteriana no alimento porém, não interfere significativamente na quantidade total de AGCC produzidos.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:07Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2005Bitstream added on 2014-06-13T20:06:31Z : No. of bitstreams: 1 simionato_emrs_dr_araiq.pdf: 1448519 bytes, checksum: c3598044af75bc6995e8a70285111589 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / As investigações sobre a incidência de micotoxinas em alimentos são de suma importância para que esforços possam ser concentrados na prevenção, controle e na destoxificação dos produtos susceptíveis a esse tipo de contaminação. Dentre as micotoxinas existentes, a ocratoxina A, produzida por Aspergillus ochraceus, e Penicillium verrucosum é nefrotóxica, e o seu alvo secundário é o fígado. Esta micotoxina, que também apresenta atividade fortemente teratogênica em animais de laboratórios, tem sido encontrada em baixas concentrações em amostras de milho, soja, trigo, cevada, arroz, sorgo e amendoim. O brasileiro consome em média 46,8 litros de cerveja por ano, e esta tem como matéria-prima principal cevada, além de coadjuvantes como o milho e o arroz. Considerando-se que vários métodos analíticos, relatados na literatura, para a determinação das ocratoxinas A e B em diferentes tipos de amostras, sobretudo em bebidas, requerem o pré-tratamento da amostra (clean up) ou o emprego de colunas de imunoafinidade, foi desenvolvido um novo método analítico, por injeção direta da amostra de cerveja, empregando cromatografia líquida de alta eficiência, com uma coluna cromatográfica aniônica-ISRP (Internal Surface Reverse Phase). Assim foi possível efetuar a extração e pré-concentração on line da ocratoxina A (OTA) e ocratoxina B (OTB) presentes em amostras reais de cervejas. Os resultados obtidos indicaram que o método proposto é eficiente para a detecção e quantificação de OTA e OTB em cervejas. A avaliação da ocorrência destas ocratoxinas em cervejas comercializadas em Bauru e região mostraram que 7,1 % das amostras de cervejas nacionais, num total de 42 amostras, e 11,0 % das cervejas importadas num total de 09 amostras, estavam contaminadas com OTA. A OTB não foi detectada nas amostras de cervejas importadas. / The investigations on the incidence of mycotoxins in food are crucial in order that the effords can be concentrated on prevention, control, and on the de-toxication of the products susceptible to this kind of contamination. Among the existent mycotoxins, the ochratoxins A, produced by Aspergillus ochraceus, Penicillium verrucosum and Peniciliumnomis, is nephrotoxic, and its secundary target is the liver. This mycotoxin, which also presents an activity strongly teratogenic in laboratory animals, has been found, in low concentrations, in corn, soy, wheat, barley, rice, sorghum, and peanuts samples. Brasilian people have an average ingestion of 4.8 litters of beer yearly, and beer, has as the main raw material, barley, besides corn and rice. Considering that various analytical methods reported in the literature for determining the ochratoxins A and B, in different types of samples, particularly in alcoholic beverages, require the pretreatment [clean-up] of the sample or the immunoaffinity columns,this present study proposed the development of a new analytic method, by direct injection of the beer sample, employing the high efficiency liquid chromatography, with an anionic chromatographic column ISRP(Internal Surface Reverse Phase), which possibilitate to carry out the extraction and pre-concentration on line of the Ochratoxin A (OTA) and Ochratoxin B (OTB) present in real beer samples, without the presence of interferent peaks. This study results indicated that the proposed method is effective for detection and quantitification OTA and OTB in beers. The survey of these ochratoxins occurrence in beers marketed in Bauru, and region (Sao Paulo State, Brazil), showed that 7.1% of the ochratoxins of national beers and 11.0% of the imported beers were contaminated by OTA. OTB was not detected in imported beers samples.

O trabalho teve por finalidade avaliar o efeito da adição de cepa de bactéria ácido-lática e biomassa de Saccharomyces cerevisiae resultante da fermentação alcoólica de cerveja em rações sobre o desempenho de frangos de corte intoxicados com aflatoxina B1 (AFB1). Para este fim, selecionou-se a cepa bacteriana (Lactobacillus rhamnosus, LYO) que apresentou maior crescimento celular médio, sendo seca posteriormente. O resíduo da fermentação alcoólica (RFC) contendo S. cerevisiae foi obtido em microcervejaria, seco e triturado. Preliminarmente, foram realizados ensaios in vitro para avaliação da capacidade de remoção da AFB1 pela LYO (inviabilizada por tratamento térmico a 121ºC por 15 minutos, em solução ou seca por atomização ou por liofilização) e RFC em solução tampão (pH 3,0 e 6,0) a 25ºC. O experimento in vivo foi conduzido utilizando-se 200 pintos machos de um dia de idade, provenientes de matrizes comerciais de frangos de corte. As aves foram distribuídas aleatoriamente em 8 tratamentos com 25 aves cada, em arranjo fatorial 2 x 2 x 2, correspondendo a dois níveis (0 e 2.000 µg/kg) de incorporação de AFB1 às rações e dois níveis (0 e 1%) de incorporação de LYO (seca por atomização) e RFC. As aves receberam as rações experimentais do 1º ao 21º dia de vida. Semanalmente, avaliou-se o ganho de peso (GP), consumo de ração (CR) e a conversão alimentar (CAL), e ao término do experimento, determinou-se a viabilidade das aves sobreviventes comparado ao total. Análises de bioquímica sérica aos 14 e 21 dias das aves incluíram a determinação de proteína total (PT), glicose (GLI), albumina (ALB), globulina (GLO), cálcio (CA), ácido úrico (AU) e as enzimas aspartato-amino-transferase (AST) e gama-glutamil-transferase (GGT). Ao final do período de intoxicação, todas as aves foram sacrificadas e pesadas, determinando-se o peso relativo do fígado, rins e bursa de Fabricius, além das análises histopatológicas desses órgãos. Nos ensaios in vitro, LYO em solução conseguiu remover a AFB1 em 46,0% e 35,8% em pH 3,0 e 6,0, respectivamente, enquanto que RFC mostrou-se capaz de adsorver a AFB1 em 50,5% e 48,5% nos respectivos valores de pH. No entanto, LYO atomizada perdeu completamente sua capacidade de adsorção, enquanto que LYO liofilizada conseguiu manter a sua habilidade em adsorver a AFB1 em 36,6% em pH 3,0 e 27,2% em pH 6,0. No estudo in vivo, os tratamentos com LYO isolada ou associada com RFC não apresentaram efeitos satisfatórios sobre as variáveis estudadas nos frangos de corte, exceto pelo aumento no CA, ALB, PT e GLO. O RFC resultou em uma maior amenização dos efeitos nos índices de produtividade e bioquímica sérica, como aumento do GP, ALB, PT, GLO e CA, além de diminuição das alterações histopatológicas, em comparação ao grupo controle. Os experimentos demonstraram que o RFC apresenta potencial para uso como aditivo anti-aflatoxinas para frangos de corte, e que novos estudos são necessários para viabilizar a produção em escala de LYO liofilizada para uso na alimentação animal. / The study aimed to evaluate the effect of adding strain of lactic acid bacteria and biomass of Saccharomyces cerevisiae from the beer alcoholic fermentation in diets on performance of broilers intoxicated with aflatoxin B1 (AFB1). For this purpose, the bacterial strain (Lactobacillus rhamnosus, LYO), which presented higher cell growth, was selected and subsequently dried. The residue of alcoholic fermentation (RAF) containing S. cerevisiae was obtained in microbrewery, dried and ground. Preliminarily, it was accomplished in vitro tests to evaluate the capacity of AFB1 removal by LYO (non-viable by heat treatment at 121ºC for 15 minutes, in solution or dried by spray-drying or lyophilization) and RAF in buffer solution (pH 3.0 and 6.0) at 25ºC. The in vivo test was conducted using 200 one day old male chicks, from arrays of commercial broilers. The birds were randomly assigned to 8 treatments with 25 birds each in a factorial 2 x 2 x 2, corresponding to two levels (0 and 2,000 µg/kg) of AFB1 incorporation to feed and two levels (0 and 1%) of incorporation of LYO (spray-dried) and RAF. The chicks received the experimental diets from 1st to 21st days of life. Weight gain (WG), feed intake (FI) and calculation of feed conversion (FC) were assessed weekly and at the end of the experiment, it was determined the viability of the surviving broilers compared to the total. Serum biochemical analysis at days 14 and 21 included the determination of total protein (TP), glucose (GLU), albumin (ALB), globulin (GLO), calcium (CA), uric acid (UA) and the enzymes aspartate-aminotransferase (AST) and gamma-glutamyl-transferase (GGT). At the end of the intoxication period, broilers of all treatments were sacrificed and weighed, determining the relative weights of liver, kidneys and bursa of Fabricius, beside the histopathological analysis of these organs. in vitro tests showed that LYO in solution could bind 46.0% and 35.8% of AFB1 at pH 3.0 and 6.0, respectively, while RFC was able to bind 50.5% and 48.5% of AFB1 the respective pH values. However, atomized LYO completely lost its adsorption capacity, whereas lyophilized LYO could maintain its ability to bind AFB1 by 36.6% at pH 3.0 and 27.2% at pH 6.0. in vivo study results demonstrated that the treatments with LYO, isolated or associated with RFC, showed no satisfactory effect on the variables analyzed in broilers, except for an increase in CA, ALB, PT and GLO. The use of RFC resulted in greater mitigation of effects on performance and serum biochemistry parameters, such as increased GP, ALB, PT, GLO and CA, besides the reduction of histopathological changes, compared to the control group. The experiments demonstrated that RFC has potential for use as anti-aflatoxin additive for broilers, and further studies are necessary to enable the scale production of LYO lyophilized for use in animal feed.

Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2017-04-10T13:07:53Z No. of bitstreams: 1 Elainy Cristina Lopes.pdf: 328224 bytes, checksum: 6e351f9ac2697618f1bcab616530817e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-10T13:07:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Elainy Cristina Lopes.pdf: 328224 bytes, checksum: 6e351f9ac2697618f1bcab616530817e (MD5) Previous issue date: 2012-07-30 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / Two studies were conducted to evaluate the addition of different types of adsorbents in diets containing corn contaminated by mycotoxins (fumonisins B1 and B2 in 721 and 257 ppb total of 978 ppb and 94.7 ppb in Cyclopiazonic acid). Two experiments were occurring simultaneously, a metabolism and another performance with broilers Ross in a randomized design. These experiments occurred in order to test the effect of three types of adsorbents with the treatments distributed as follows: T1: reference diet with corn considered adequate (control), T2: diet with naturally contaminated maize considered inappropriate, T3, T4 and T5 were more T2 addition of adsorbents A, B and C, respectively. In the diets were analyzed found fumonisins, the total quantities of 125, 509, 677, 589 and 625 ppb for T1, T2, T3, T4 and T5, respectively. In the first study used 180 birds were housed in metabolic cages divided into five treatments and six replicates to evaluate the apparent metabolizable energy and apparent metabolizable energy corrected for nitrogen balance and metabolizability coefficient of dry matter, crude protein and gross energy. No statistical difference was detected for these variables. In the second study we used 360 broiler chicks during the period 1 to 42 days of age housed in pens with wood shavings bedding, distuibuídos in five treatments and six replications with 12 birds per replicate. We evaluated the feed intake, weight gain, feed conversion, carcass weights and percentages, cuts, offal and serum biochemical parameters. The results showed significant differences in feed conversion in the final period. But the amount of mycotoxins present in feed birds offered was not enough for there to be poisoning birds and incurs a significant effect of supplementation of the diets of these animals adsorbents. / Foram realizados dois estudos com o objetivo de avaliar a adição de diferentes tipos de adsorventes em dietas contendo milho contaminado por micotoxinas (fumonisinas B1 e B2 em 721 e 257 ppb totalizando em 978 ppb e ácido ciclopiazônico em 94,7 ppb). Foram dois experimentos que ocorreram simultaneamente, um de metabolismo e o outro de desempenho com frangos de corte da linhagem Ross em delineamento inteiramente casualizado. Estes experimentos ocorreram com a finalidade de testar o efeito dos três tipos de adsorventes sendo os tratamentos distribuídos da seguinte forma: T1: dieta referência com milho considerado adequado (controle); T2: dieta com milho contaminado naturalmente considerado inadequado; T3, T4 e T5 foram T2 mais adição dos adsorventes A, B e C, respectivamente. Nas rações analisadas foram encontradas as fumonisinas, nas quantidades totais de 125, 509, 677, 589 e 625 ppb para os tratamentos T1, T2, T3, T4 e T5, respectivamente. No primeiro estudo foram utilizadas 180 aves alojadas em gaiolas metabólicas divididas em cinco tratamentos e seis repetições, para avaliar a energia metabolizável aparente e a energia metabolizável aparente corrigida pelo balanço de nitrogênio e os coeficientes de metabolizabilidade da matéria seca, proteína bruta e energia bruta. Não foi detectada diferença estatística para estas variáveis. No segundo estudo utilizaram-se 360 pintos de corte no período de 1 a 42 dias de idade alojados em boxes com cama de maravalha, distuibuídos em cinco tratamentos e seis repetições com 12 aves por repetição. Foram avaliados o consumo de ração, ganho de peso, conversão alimentar, pesos e percentagens da carcaça, dos cortes, vísceras e parâmetros bioquímicos séricos. Os resultados mostraram diferenças significativas para a conversão alimentar no período final. Porém a quantidade de micotoxinas presente na ração ofertada as aves não foi suficiente para que houvesse intoxicação das aves e acarretasse um efeito significativo da suplementação dos adsorventes nas dietas destes animais.

O objetivo da pesquisa foi avaliar os efeitos da AFB1 e FB1, isoladas e associadas e com ou sem a inclusão de um antioxidante (cúrcuma) em frangos de corte, utilizando-se os seguintes tratamentos (T): T1 (controle): 0 AFB1 + 0 FB1 + 0 Cúrcuma; T2: 0 AFB1 + 0 FB1 + 222 mg/kg Cúrcuma; T3: 0 AFB1 + 20 mg/kg FB1 + 0 Cúrcuma; T4: 0 AFB1 + 20 mg/kg FB1 + 222 mg/kg Cúrcuma; T5: 0,5 mg/kg AFB1 + 0 FB1 + 0 Cúrcuma; T6: 0,5 mg/kg AFB1 + 0 FB1 + 222 mg/kg Cúrcuma; T7: 0,5 mg/kg AFB1 + 20 mg/kg FB1 + 0 Cúrcuma; T8: 0,5 mg/kg AFB1 + 20 mg/kg FB1 + 222 mg/kg Cúrcuma. Os parâmetros avaliados incluíram: conversão alimentar, ganho de peso, consumo alimentar, proteínas séricas, hematologia, enzimas hepáticas, histopatologia de vísceras, resposta vacinal, resíduos de aflatoxinas e fumonisina em vísceras e músculos. Os dados foram analisados como um fatorial 2 x 2 x 2 por análise de variância. Não houve interação significativa para os três fatores analisados no desempenho zootécnico, porém houve diferença significativa nas dietas contendo aflatoxina, quando comparada com as outras dietas, para todas as variáveis analisadas. A AST e LDH foram as únicas variáveis significativas para a interação de todos os fatores (AFB1, FB1 e CMT), porém as outras variáveis, exceto a GGT, apresentaram diferença significativa nas dietas contendo aflatoxina, quando comparada com as outras dietas, para todas as variáveis analisadas. As lesões histopatológicas no fígado, rim e bursa de Fabricius foram aumentando gradualmente do tratamento controle até o tratamento contendo adição de aflatoxina e fumonisina, com ou sem cúrcuma, sendo que o efeito mais severo foi observado nos órgãos desses tratamentos. Não houve diferença significativa com a inclusão da cúrcuma. Não houve nenhuma variável significativa para a interação de todos os fatores avaliados para a biometria dos órgãos, porém fígado, rim e coração apresentaram diferença significativa nas dietas contendo aflatoxina, quando comparada com as outras dietas, para todas as variáveis analisadas. Nenhuma variável foi significativa para a interação de todos os fatores avaliados para o hemograma aos 21 dias, porém aos 42 dias, leucócitos, linfócitos e basófilos apresentaram diferença significativa para a interação de todos os fatores. Não houve diferença estatística para a interação dos três fatores analisados para os títulos de anticorpos para a doença de Newcastle. Os resíduos de FB2 no fígado e AFB2 no músculo peitoral foram as únicas variáveis significativas para a interação de todos os fatores analisados. Os resultados obtidos indicam que não houve efeito da cúrcuma na diminuição dos efeitos deletérios da aflatoxina e fumonisina. / The objective of this research project was to evaluate the effects of AFB1 and FB1, alone or in combination and associated or not with an antioxidant (turmeric) in broiler chickens, using the following treatments (T): T1 (control): 0 AFB1 + 0 FB1 + 0 Turmeric; T2: 0 AFB1 + 0 FB1 + 222 mg/kg Turmeric; T3: 0 AFB1 + 20 mg/kg FB1 + 0 Turmeric; T4: 0 AFB1 + 20 mg/kg FB1 + 222 mg/kg Turmeric; T5: 0.5 mg/kg AFB1 + 0 FB1 + 0 Turmeric; T6: 0.5 mg/kg AFB1 + 0 FB1 + 222 mg/kg Turmeric; T7: 0.5 mg/kg AFB1 + 20 mg/kg FB1 + 0 Turmeric; T8: 0.5 mg/kg AFB1 + 20 mg/kg FB1 + 222 mg/kg Turmeric. The parameters evaluated included: feed conversion, weight gain, food intake, serum proteins, hematology, liver enzymes, histopathology of viscera, vaccine response and residues of aflatoxin and fumonisin in tissues of viscera and muscles. Data were analyzed as a 2 x 2 x 2 factorial by analysis of variance. There was no significant interaction for the three analyzed factors on the performance, but there were significant differences in the diets containing aflatoxin when compared to the other diets, for all variables analyzed. AST and LDH were the only significant variables for the interaction of all factors (AFB1, FB1 e CMT), but other variables, with the exception of GGT, showed significant difference in diets containing aflatoxin when compared to other diets for all the variables analyzed. Histopathological lesions in the liver, kidney and bursa of Fabricius were gradually increased from the control treatment to aflatoxin and fumonisin treatment, with or without turmeric, with the most severe effect being observed in the organs of these treatments. There was no significant variable for the interaction of all factors evaluated for organ biometry, but liver, kidney and heart showed a significant difference in diets containing aflatoxin when compared to other diets for all variables analyzed. No variable was significant for the interaction of all factors evaluated for the blood test at 21 days, but at 42 days leukocytes, lymphocytes and basophils showed significant differences for the interaction of all factors. There was no statistical difference for the interaction of all factors analyzed for antibody titers to Newcastle disease. The residues of FB2 in the liver and AFB2 in the pectoral muscle were significant for the interaction of all the factors. The results showed no effect of turmeric powder in reducing the deleterious effects of aflatoxin and fumonisin.

As aflatoxinas são metabólitos secundários produzidos por fungos toxigênicos das espécies Aspergillus flavus, A. parasiticus e A. nomius. São amplamente encontradas em matérias-primas de rações animais, em especial o milho, e têm a capacidade de levar a quadros clínicos agudos ou crônicos de aflatoxicose, caracterizados por, desde a morte por hepatite aguda até a diminuição do desempenho zootécnico por diminuição de peso ou consumo de ração. A aflatoxina B1 tem sido considerada o metabólito mais perigoso, uma vez que possui alto poder hepatotóxico, além de ser mutagênica e carcinogênica. Atualmente a ciência trabalha rumo à descoberta de substâncias que sejam indicadoras confiáveis de contaminação por componentes tóxicos em homens e em animais, os chamados biomarcadores, que medem uma mudança celular, biológica ou molecular em um meio biológico (tecidos humanos, células ou fluídos) que fornecem informação a respeito de uma doença ou exposição a uma determinada substância. Sua detecção pode auxiliar na identificação, no diagnóstico e no tratamento de indivíduos afetados que podem estar sob risco, mas ainda não exibem os sintomas. Sendo assim, com o auxílio de análises que confirmem a patogenicidade da aflatoxina B1 (determinação da atividade de enzimas hepáticas, da avaliação da função renal, de hematologia, da dosagem de minerais séricos e da avaliação de desempenho zootécnico), o objetivo deste trabalho foi avaliar a aplicabilidade da determinação de resíduos hepáticos de aflatoxinas e do aduto sérico AFB1-lisina na avaliação da eficiência de adsorventes em frangos de corte. Utilizou-se 240 pintos de 1 dia, machos, de linhagem Cobb 500®, distribuídos aleatoriamente em 4 dietas experimentais: Controle Negativo: Ração Basal (RB); RB + 0,5% de adsorvente ((aluminosilicato de cálcio e sódio hidratado/HSCAS); RB + 0,5% de adsorvente + 500 µg de AFB1/kg de ração e; RB + 500 µg de AFB1/kg de ração.Os resultados experimentais mostram que o efeito deletério da AFB1, na concentração utilizada, é mais pronunciado que os efeitos protetores do HSCAS sobre os parâmetros de saúde dos animais. Não houve ação efetiva do adsorvente utilizado sobre quase nenhuma variável estudada, apenas para a redução das lesões histopatológicas em fígado, na redução da concentração de gama-glutamiltransferase (GGT), fósforo e aumento da contagem de hemáceas aos 21 dias de idade. Porém, influenciou positivamente a redução de resíduos hepáticos de aflatoxina G1 aos 21 dias e as concentrações de AFB1-lisina sérica aos 21 e aos 42 dias de idade. Estes dados são importantes porque permite concluir que, embora sintomatologicamente o HSCAS não tenha exercido função efetiva, molecularmente foi capaz de mostrar de eficácia sobre os alguns biomarcadores de aflatoxinas no organismo das aves / Aflatoxins are secondary metabolites produced by toxigenic fungi of the species Aspergillus flavus, A. parasiticus and A. nomius. They are widely found in raw materials of animal feed, in particular corn, and have the ability to lead to clinical cases of acute or chronic aflatoxicosis, characterized by acute hepatites leading to death until lower performance by decreased weight or feed intake. Aflatoxin B1 has been considered the most dangerous metabolite, since it has high hepatotoxic power, besides being mutagenic and carcinogenic. Nowadays science works toward the discovery of substances that are reliable indicators of contamination by toxic components in humans and animals, called biomarkers, which measure a cell change, biological or molecular in a biological medium (human tissues, cells or fluids) that provide information regarding a disease or exposure to a particular substance. Its detection can assist in the identification, diagnosis and treatment of affected individuals who may be at risk, but still do not exhibit symptoms. Thus, with the help of analysis that confirm aflatoxin B1 pathogenicity (determination of liver enzymes activity, assessment of renal function, hematology, dosage of serum minerals and evaluation of animal performance), the objective of this work was to evaluate the applicability of the determination of aflatoxin liver residues and serum AFB1-lysine adduct in the evaluation of the adsorbents efficiency in broiler chickens. Two hundred and fourty day-old male chicks, Cobb 500® lineage, were randomly distributed into 4 experimental diets: Negative Control: Basal Feed (BF); BF + 0.5% adsorbent (hydrated sodium calcium aluminosilicate/HSCAS); RB + 0.5% adsorbent + 500 µg AFB1/kg of feed; and RB +500 µg AFB1/kg of feed. The experimental results show that the deleterious effect of AFB1, at the concentration used, is more pronounced that the protective effects of HSCAS on animal health parameters. There was no effective action of the adsorbent used on almost any variable studied, only for the reduction of the histopathological lesions in the liver, reduction of gamma-glutamyltransferase (GGT) and phosphorus concentration, and increased count of red blood cells at 21 days. However, influenced positively the reduction of aflatoxin G1 liver residues at 21 days and the concentrations of serum AFB1-lysine at 21 and 42 days. These are important data because they allow to conclude that, although symptomatically the HSCAS has not exercised effective function, molecularly was able to show some efficacy on aflatoxin biomarkers in the birds body

O projeto avaliou os efeitos da aflatoxina B1 (AFB1) e fumonisina B1 (FB1), isoladas e associadas, sobre a produtividade e a qualidade dos ovos de codornas poedeiras (Coturnix coturnix japonica). Duzentas e oitenta e oito aves, adquiridas com idade de 8 semanas, foram subdivididas em 6 grupos experimentais (48 aves por grupo) e submetidas a 6 tipos de tratamentos, constituídos por rações contendo AFB1 e FB1 nas concentrações: (0 AFB1+0 FB1), (0 AFB1+10 mg/kg FB1), (50 &microg/kg AFB1+0 FB1), (50 µg/kg AFB1+10 mg/kg FB1), (200 µg/kg AFB1+0 FB1), e (200 µg/kg AFB1+10 mg/kg FB1). As aves foram alimentadas durante 140 dias (5 ciclos de 28 dias). Os parâmetros de produtividade foram avaliados semanalmente, através do consumo de ração, peso dos ovos, índice de conversão alimentar e curva de produção. A qualidade dos ovos foi avaliada a cada ciclo de 28 dias, cada ovo produzido nesse dia foi analisado individualmente para a determinação do valor de unidade Haugh, gravidade específica e percentual do peso da casca. Ao final do 5º período experimental, o peso médio dos ovos foi significativamente menor (p < 0,05) nas aves alimentadas com 10 mg FB1/kg, 50 &microg/kg AFB1, 200 µg/kg AFB1 e com o tratamento de associação de 10 mg FB1/kg + 50 µg/kg AFB1. Em relação à produção de ovos, as codornas alimentadas com 10 mg FB1/kg apresentaram uma diminuição significativa (p < 0,05), ao final do 3º, 4º e 5º ciclos. O consumo médio diário de ração foi significativamente menor (p< 0,05) nas aves alimentadas com 10 mg FB1/kg, ao final do 4º e 5º ciclos, enquanto que os níveis de 50 ou 200 µg/kg AFB1 provocaram uma diminuição significativa (p < 0,05), ao final do 5º período experimental. Ao final do 1º, 2º e 5º ciclos, o consumo médio de ração foi significativamente menor (p< 0,05) nas aves tratadas com 10 mg FB1/kg + 50 µg/kg AFB1. Os índices de conversão alimentar e os valores de Unidades Haugh não foram afetados (p > 0,05) pelos tratamentos. A gravidade específica dos ovos foi significativamente menor (p < 0,05) ao final do 5º ciclo, nas aves tratadas com 10 mg FB1/kg + 200 µg/kg AFB1. Observou-se uma diminuição significativa (p < 0,05) na porcentagem do peso de casca, nas aves tratadas com 10 mg FB1/kg ao final do 1º ciclo, entretanto, houve um aumento significativo (p < 0,05) nos tratamentos com 200 µg/kg AFB1 e também com 10 mg/kg FB1 + 50 µg/kg AFB1 ao final do 1º ciclo. Já ao final do 5º ciclo, o aumento na porcentagem de peso de casca (p < 0,05) ocorreu somente nas aves tratadas com 10 mg/kg FB1 + 200 µg/kg AFB1. Os resultados demonstraram que a administração prolongada de FB1 e AFB1, isoladas ou associadas nos níveis utilizados no presente experimento, pode causar prejuízos econômicos aos produtores de ovos de codornas. / This study evaluated the individual and combined effects of aflatoxin B1 (AFB1) and fumonisin B1 (FB1) on egg quality and performance of laying Japanese quail (Coturnix coturnix japonica). Two hundred twenty-eight birds were purchased at 8 week of age and randomly distributed into 6 experimental groups and given rations containing AFB1 and FB1 at the following levels: (0 AFB1+0 FB1), (0 AFB1+10 mg/kg FB1), (50 &microg/kg AFB1+0 FB1), (50 &microg/kg AFB1+10 mg/kg FB1), (200 &microg/kg AFB1+0 FB1), e (200 &microg/kg AFB1+10 mg/kg FB1). The birds were fed for 140 days (5 28-day laying periods). Each treatment consisted of four replicates of twelve quail. Egg production and individual egg weight were checked daily. Feed consumption and feed utilization were determined weekly. Eggs laid in the last day of each 28-day laying period were collected and submitted to individual analysis for specific gravity, Haugh units and percent egg shell. Results showed that average egg weight at the end of the fifth cycle was significantly lower (p < 0,05) for groups fed 10 mg FB1/kg, 50 &microg/kg AFB1, 200 &microg/kg AFB1 and also for the group fed 10 mg FB1/kg + 50 &microg/kg AFB1. Average egg production significantly decreased (p < 0,05) for groups fed 10 mg FB1/kg by the end of the third, fourth and fifth cycles. Feed consumption was significantly lower (p < 0,05) for group exposed to 10 mg FB1/kg, by the end of fourth and fifth cycles, whereas birds fed 50 or 200 &microg/kg AFB1 showed a significant decrease (p < 0,05) on feed consumption, by the end of fifth cycle. Birds exposed to 10 mg FB1/kg + 50 &microg/kg AFB1 also showed lower values (p < 0,05) of feed consumption, by the end of first, second and fifth cycles. Feed utilization and Haugh units were not affected (p > 0,05) by AFB1 and FB1. Average egg specific gravity was significantly lower (p < 0,05) for group fed 10 mg FB1/kg + 200 &microg/kg AFB1, by the end of fifth cycle. Percent egg shell was significantly lower (p < 0,05) for group exposed to 10 mg FB1/kg, by the end of the first cycle, however, birds exposed to 200 &microg/kg AFB1 and also to 10 mg/kg FB1 + 50 &microg/kg AFB1, showed a significantly increase (p < 0,05) of percent egg shell, by the of the first cycle. Percent egg shell was significantly higher (p < 0,05) for group fed 10 mg/kg FB1 + 200 &microg/kg AFB1 , by the end of fifth cycle. The results obtained in the present study showed that the prolonged administration of FB1 and AFB1, singly or combined at the levels checked, may cause economic losses to the quail egg producers.