Em homens, os níveis de testosterona e de testosterona biodisponível (livre e a ligada à albumina) declinam com a idade, apresentando elevado risco de desenvolver resistência à insulina e diabetes tipo II. Já foi demonstrada a ação clássica (efeito genômico) da testosterona sobre a síntese e a liberação de insulina em pâncreas de rato. Os objetivos do presente trabalho são determinar: 1) a ação não clássica específica da testosterona, da nandrolona e de outros esteróides sexuais sobre a secreção de insulina em ilhotas pancreáticas isoladas de ratos machos adultos; 2) a influência de aminoácidos sobre esta ação; 3) a ação da testosterona sobre o transporte de aminoácidos; 4) a participação dos canais de Ca2+ dependentes de voltagem do tipo L e dos canais KATP na ação da testosterona e da nandrolona sobre a captação de 45Ca2+; 5) a participação da via da fosfolipase C na ação da testosterona sobre a captação de 45Ca2+. As ilhotas foram isoladas de pâncreas de 3 ratos Wistar machos (pesando 180-220g) por experimento pela técnica de Lacy e Kostianovsky (Diabetes, 16:35-39, 1967). Nos experimentos de secreção de insulina, amostras de 10μL de ilhotas isoladas foram pré-incubadas por 30 minutos e incubadas por 3 minutos em presença ou não de testosterona (1μM), T-BSA (1μM), nandrolona (1μM), 17 -estradiol (10 nM) ou progesterona (1μM) em um incubador metabólico Dubnoff em tampão KRb-HEPES com glicose 3 mM a 37ºC, pH 7,4 e gaseificação constante com carbogênio (O2:CO2; 95:5; v/v). Nos experimentos com glutamina, lisina, alanina e leucina, as ilhotas eram incubadas por mais 3 minutos com estes aminoácidos. A incubação foi interrompida em banho de gelo. Os tubos com as ilhotas eram centrifugados por 2 minutos a 45 x G, o sobrenadante coletado e a insulina quantificada por radioimunoensaio. No experimento de captação de aminoácido, as ilhotas isoladas (10μL) foram pré-incubadas por 30 minutos e incubadas por 15, 30 ou 60 minutos com 0,2 μCi de [1-14C] ácido a-metil aminoisobutírico mais testosterona (1μM). Após o final da incubação os tubos eram centrifugados por 2 minutos a 45 x G. O sobrenadante (meio externo) era preservado. As ilhotas era transferidas para tubos Eppendorff contendo 1 mL de água destilada (meio interno). Os tubos com as ilhotas eram congelados por 24 horas e após sonicados por 30 segundos. Eram retiradas amostras de 100 μL de cada frasco e do respectivo meio externo para contagem da radioatividade. Os resultados foram expressos pela relação entre a radioatividade contida no tecido (meio interno) e no meio de incubação (meio externo). Nos experimentos de captação de 45Ca 2+, as ilhotas isoladas (50μL) eram pré-incubadas por 45 ou 50 minutos com 0,2 μCi 45Ca2+, novamente pré-incubadas por 10 minutos com nifedipina (1μM), diazoxida (100μM), glibenclamida (25μM), ou tolbutamida (10μM) e incubadas com ou sem testosterona (0,1μM) ou nandrolona (0,1μM) por 1 minuto. No experimento com U73122 (2μM), as ilhotas eram pré-incubadas por mais 15 minutos com este fármaco e incubadas com ou sem testosterona (1μM) por 1 minuto. Para a interrupção da incubação, utilizou-se 1 mL de tampão frio com cloreto de lantânio (10 mM) Após, os tubos eram centrifugados por 2 minutos a 45 x G, o sobrenadante desprezado e as ilhotas lavadas duas vezes com a solução de cloreto de lantânio. As ilhotas eram transferidas para tubos tipo Eppendorff contendo 1 mL de água destilada. Os tubos eram congelados por 24 horas e após sonicados por 30 segundos. Eram retiradas amostras de 50 μL de cada frasco para contagem da radioatividade. A testosterona e a nandrolona estimularam a secreção de insulina após incubação de 3 minutos, através do fechamento de canais K+ ATP tendo, como conseqüência, o aumento da captação de Ca2+ e a exocitose do hormônio. A testosterona ligada à albumina, que não entra na célula e interage com receptor de membrana, também estimulou a secreção de insulina em 3 minutos, sugerindo um efeito de membrana dos andrógenos. Em nossas condições experimentais, o 17- -estradiol e a progesterona não mostraram efeito sobre a secreção de insulina. A ação androgênica sobre a secreção de insulina ocorreu somente na ausência de glicose ou em concentrações sublimiares (3mM). A testosterona não estimulou a captação do aminoácido metilaminoisobutírico [14C]. A L-alanina estimulou a secreção de insulina. Porém, quando associadas testosterona e alanina somente, houve redução na secreção. Também foi observado que uma mistura de aminoácidos (MIX- glutamina, lisina, leucina e alanina,) em diferentes concentrações proporcionais foi efetiva na secreção de insulina. Houve aumento significativo na secreção de insulina quando associados testosterona e a concentração 2x maior dos aminoácidos. Também, os andrógenos aumentaram a captação de Ca2+ em 60 segundos. A ação da testosterona sobre a captação de Ca2+ ocorreu em concentrações limiares de glicose (5 e 8 mM), porém não em concentrações elevadas (11 mM). Quando a testosterona foi incubada na presença de nifedipina (bloqueador de canais de Ca2+ dependentes de voltagem do tipo L), seu efeito estimulatório sobre a captação de 45Ca2+ foi anulado. Ocorreu inibição da ação androgênica quando a testosterona foi incubada em presença de diazoxida, a qual aumenta a probabilidade de abertura do canal K+ ATP. O efeito da testosterona e da nandrolona sobre a captação de 45Ca2 é análogo à ação das sulfoniluréias (glibenclamida e tolbutamida), as quais inibem o canal K+ ATP. Ambos os efeitos indicam que a ação da testosterona envolve o fechamento do canal K+ ATP e conseqüente despolarização da membrana da célula . O inibidor da fosfolipase C, o U73122, bloqueou a ação estimulatória de testosterona sobre a captação de 45Ca2+. Nossa conclusão para estes achados seria que a testosterona e a nandrolona, na presença de baixas concentrações de substratos energéticos como a glicose e aminoácidos, estimulariam a liberação da insulina para modular os efeitos catabólicos dos contra-reguladores e, assim, manter a homeostase. O mecanismo de secreção da insulina pelos andrógenos envolve a ativação de PLC via ligação ao receptor de membrana acoplado à proteína Gq, o fechamento de K+ ATP e a entrada de Ca2+ através de canais de cálcio dependentes de voltagem do tipo L. / In men, testosterone and bioavailable testosterone levels ( free and and albumin-bound) decline with age, with high risk of developing insulin resistance and type 2 diabetes. It has been already shown the classic action of testosterone (genomic effect) on the insulin synthesis and release in rat pancreas. The objective of this survey is to determine: 1) the specific non-classical action of testosterone, nandrolone and other sex steroids on insulin secretion in isolated pancreatic islets from adult male rats; 2) aminoacids influence on this action; 3) testosterone action on amino acid transport; 4) the participation of L-type voltagegated Ca2+ channels and KATP channels in the testosterone and nandrolone action on the 45Ca2+ uptake; 5) the participation of phospholipase C via in the testosterone action on the 45Ca2+ uptake. The islets were isolated from the pancreas of 3 male Wistar rats (weighing between 180 and 200g) per experiment by the technique of Lacy and Kostianovsky (Diabetes, 16:35-39, 1967). In the experiments of insulin secretion, samples of 10μL of isolated islets were preincubated for 30 minutes and incubated for 3 minutes in the presence or absence of testosterone (1μM), T-BSA (1μM), nandrolone (1μM), 17 -estradiol (10 nM) or progesterone (1μM) in a Dubnoff metabolic incubator in KRb-HEPES buffer with 3 mM glucose at 37ºC, pH 7,4 and constant gasification constante with carbogen (O2:CO2; 95:5; v/v). In experiments with glutamine, lysine, alanine and leucine, the islets were incubated for another 3 minutes with these amino acids. The incubation was stopped in an ice bath. The tubes containing the islets were centrifuged for 2 minutes at 45xG, the supernatant collected and insulin measured by radioimmunoassay. In the experiment of amino acid uptake, isolated islets (10μL) were pre-incubated for 30 minutes and incubated for 15, 30 or 60 minutes with 0,2 μCi of [1-14C] a-metyl aminoisobutyric plus testosterone (1μM). After the end of incubation, tubes were centrifuged for 2 minutes at 45 x G. The supernatant (environment) was preserved. The islets were transferred to Eppendorff tubes containing 1mL of distilled water (internal environment). The tubes with islets were frozen for 24 hours and after this sonicated for 30 seconds. Samples of 100 μL were removed from each bottle and respective environment for radioactivity counting. Results were expressed by the relation between the radioactivity contained in the tissue (internal environment) and the incubation environment (external environment) . In the experiments of 45Ca 2+ uptake, the isolated islets (50μL) , were pre-incubated for 45 or 50 minutes with 0,2 μCi 45Ca2+, preincubated again for 10 minutes with nifedipine (1μM), diazoxide (100μM), glibenclamide (25μM), or tolbutamide (10μM) and incubated with or without testosterone (1μM) for 1 minute. In this experiment with U73122 (2μM), the islets were pre-incubated for more 15 minutes with this drug and incubated with or without testosterone (1μM) for 1 minute. For the interruption of incubation, it was used a cold 1mL buffer with lanthanum chloride (10mM). After, tubes were centrifuged for 2 minutes at 45 x G, the supernatant discarded and the islets washed twice with lanthanum chloride solution. The islets were transferred to Eppendorf tubes containing 1ml of distilled water. The tubes were frozen for 24 hours and after it, sonicated for 30 seconds. Samples of 50 μL were taken from each bottle for radioactivity counting. In isolated pancreatic islets of rats, testosterone and nandrolone have stimulated insulin secretion, after a 3-minute incubation period, closing the K+ ATP channels, having as consequence the increase of Ca2+ inflow and the hormone exocytosis. Testosterone conjugated to bovine serum albumin, which is not membrane permeable and interacts with the receptor of membrane, also stimulated insulin secretion in 3 minutes, suggesting an androgen membrane effect. In our experimental conditions, 17- -estradiol and progesterone have not demonstrated effects in insulin secretion. Testosterone has not stimulated the uptake of methylaminoisobutyric acid [1-14C]. L-alanine has stimulated insulin secretion. However, when testosterone was associated only with alanine, insulin secretion has decreased. It has also been noted that an aminoacid mixture (MIX-alanine, glutamine, lysine and leucine) in different proportional concentrations has been effective in insulin secretion. When associated, testosterone and MIX, there has been an increase in insulin secretion when the concentration of amino acids has been 2 times higher. Also, the androgens have increased the 45Ca2+ uptake in 60 seconds. However, the androgenic action has occurred only in absence of glucose or at sub stimulatory concentrations (3 mM). The action of testosterone on 45Ca2+ uptake has occurred at stimulatory glucose concentrations (5 and 8 mM), but not in high concentrations (11 mM). When testosterone has been incubated in the presence of nifedipine (Ca2+ type L channel blocker), its stimulatory effect on 45Ca2+ uptake has been nullified. When it was used diazoxide to produce the opening of K+ ATP channels, it has occurred the inhibition of androgenic action. The testosterone and nandrolone effect is analogous to the action of sulphonilureias (glibenclamida and tolbutamida), which inhibit the K+ ATP channel. Both effects show that testosterone action involves the K+ ATP channel closing and consequent membrane depolarization of cell. The presence of U73122, which inhibits the activation of PLC, has inhibited the testosterone action on 45Ca2+ uptake. Our conclusion for these results would be that testosterone and nandrolone, in the presence of low concentrations of energetics substrates as glucose and amino acids would stimulate the insulin liberation for modulating the catabolic effects of counter-regulators and, then, sustaining homeostasis. It can also be observed that the associated mechanism involves a Gq protein-coupled membrane receptor-binding, the PLC activation, the K+ ATP closing and Ca2+ entry through the voltage-dependent L-type calcium channels.

A popularização do treinamento resistido associada a busca pelo corpo perfeito traz consigo uma maior procura por recursos anabolizantes por atletas e amadores. A utilização de anabolizantes geralmente ocorre em associação com outras substâncias, o que pode agravar os seus efeitos colaterais. Apesar de haver vários estudos abordando os efeitos colaterais do decanoato de nandrolona, pouco se conhece sobre a sua associação com treinamento resistido e Lepidium meyenii. Objetivo: avaliar o efeito do treinamento resistido associado a decanoato de nandrolona e Lepidium meyenni (Maca) sob o peso corporal, parâmetros comportamentais e hepáticos em ratos wistar. Para isso, foi aplicado um modelo experimental com 60 ratos adultos, divididos em cinco grupos: controle sedentário (SC), treinamento resistido (ST), decanoato de nandrolona sedentário (ND), Lepidium meyenii sedentário (LM) e treinamento resistido decanoato de nandrolona e Lepidium meyenii (STNL). O protocolo de treinamento resistido consta de 3 séries com 10 repetições com 80% 1RM e teve duração de 5 semanas, com freqüência de 3 vezes por semana no aparato proposto por Tamaki et al. (1992). O decanoato de nandrolona intramuscular na dose de 18mg/kg/semana e Lepidium meyenii na dose de 450 mg/kg/semana foi administrado por gavagem. Ao término do treinamento, foram realizados os seguintes testes comportamentais: Labirinto em Cruz Elevado (Plus-Maze), Reconhecimento de Objeto e Residente-Intruso. Para avaliação hepática foram realizadas as seguintes análises bioquímicas: alanina aminotransferase (ALT), aspartato aminotransferase (AST), fosfatase alcalina (FA) e gama glutamiltransferase (GGT). Foram observado efeitos positivos da administração de decanoato de nandrolona, Lepidium meyenii e treinamento resistido sob o peso (SC 490,0 g ± 2,9 g; ST 450,0 g ± 1,3 g; ND 410 g ± 1,0 g; LM 430 g ± 1,4 g e STNL 390 g ± 0,7 g). Os testes comportamentais apresentaram alterações em um ou mais grupos para os parâmetros de agressividade, ansiedade e memória. No Labirinto em Cruz Elevado encontrou-se menor número de entradas no braços abertos do grupo ST (SC 2,50 ± 0,62; ST 1,42 ± 0,26; ND 1,58 ± 0,39; LM 1,57 ± 0,33 e STNL 1,58 ± 0,19), menor número de entradas nos braços fechados nos grupos ST e STNL (SC 6,13 ± 0,93; ST 2,75 ± 0,67; ND 3,25 ± 0,52; LM 4,17 ± 0,45 e STNL 2,33 ± 0,33) e menor tempo de permanência no grupo ST (SC 42,88 s ± 13,88 s; ST 17,67 s ± 70 s; ND 28,50 s ± 12,50 s; LM 20,42 s ± 5,8 s e STNL 34,25 s ± 15,24 s). No teste residente intruso observou-se menor número de ataques nos grupos ST e LM (SC 9,13 ± 2,31; ST 6,00 ± 1,38; ND 8,50 ± 1,25; LM 5,75 ± 1,01 e STNL 8,75 ± 1,46). No teste para memória verificou-se menor índice de reconhecimento de objeto nos grupos ND e LM (SC 0,27 ± 0,20; ST 0,01 ± 0,20; ND -0,35 ± 0,16; LM -0,23 ± 0,16 e STNL -0,23 ± 0,21). Apesar de não terem sido encontradas variações significativas nas análises bioquímicas (AST, ALT, FAL e GGT), houve uma diminuição significativa no peso do fígado nos grupos ND e STNL, (SC 14,4 g ± 0,4 g; ST 14,62 g ± 1,0 g; ND 11,61 g ± 04 g; LM 13,7 g ± 0,5 g e STNL 11,82 g ± 0,5 g), sugerindo lesão hepática. Com base nestes resultados não recomenda-se o uso de esteróides anabolizantes ou a sua associação com Lepidium meyenii. / The popularization of strength training associated with the search for the perfect body increases the demand for anabolic resources for athletes and amateurs. The use of anabolic steroids often occurs in combination with other substances, which may worsen the side effects. Although there are several studies addressing the side effects of nandrolone decanoate, little is known about its association with strength training and Lepidium meyenii. This study aims to evaluate the effect of strength training associated with nandrolone decanoate and Lepidium meyenni (Maca) on body mass, behavioral and liver parameter in Wistar rats. For this, an experimental model was applied to 60 adult rats were divided into five groups: sedentary control (SC), strength training (ST), nandrolone decanoate sedentary (ND), Lepidium meyenii sedentary (LM) and strength training, nandrolone decanoate and Lepidium meyenii (STNL). The strength training protocol consist of 3 series 10 repetitions 80% 1RM and was performed three times a week for five weeks in the apparatus proposed by Tamaki et al. (1992). The nandrolone decanoate intramuscular injection at a dose of 18 mg/kg/week and Lepidium meyenii at 450 mg/kg/week was administered by gavage. At the end of training, the following behavioral tests were performed: Plus-Maze Test, Object Recognition Test and Resident-Intruder. For liver evaluation were made biochemical analysis: alanine aminotransferase (ALT), aspartate aminotransferase (AST), alkaline phosphatase (ALP) and gamma glutamyl transferase (GGT). It was observed positive effects of administration of nandrolone decanoate, Lepidium meyenii and strength training on body mass (SC 490,0 g ± 2,9 g; ST 450,0 g ± 1,3 g; ND 410 g ± 1,0 g; LM 430 g ± 1,4g and STNL 390 g ± 0,7 g). Behavioral tests showed alterations at one or more groups for the aggressiveness parameters, anxiety and memory. In the Plus-Maze Test it found smaller number of entries in the open arms in ST group (SC 2,50 ± 0,62; ST 1,42 ± 0,26; ND 1,58 ± 0,39; LM 1,57 ± 0,33 and STNL 1,58 ± 0,19), smaller number of entries in ST e STNL groups (SC 6,13 ± 0,93; ST 2,75 ± 0,67; ND 3,25 ± 0,52; LM 4,17 ± 0,45 and STNL 2,33 ± 0,33) and shorter permanence in the open arms in ST group (SC 42,88 s ± 13,88 s; ST 17,67 s ± 70 s; ND 28,50 s ± 12,50 s; LM 20,42 s ± 5,8 s and STNL 34,25 s ± 15,24 s). In the Resident Intruder it was observed smaller number of attacks in ST and LM groups (SC 9,13 ± 2,31; ST 6,00 ± 1,38; ND 8,50 ± 1,25; LM 5,75 ± 1,01 and STNL 8,75 ± 1,46). In the Object Recognition Test it was verified lower object recognition índex in ND and LM groups (SC 0,27 ± 0,20; ST 0,01 ± 0,20; ND - 0,35 ± 0,16; LM -0,23 ± 0,16 e STNL -0,23 ± 0,21). Despite not having been found significant variations in biochemical analysis (AST, ALT, FAL and GGT), there was a significant decrease in liver weight in ND and STNL groups (SC 14,4 g ± 0,4 g; ST 14,62 g ± 1,0 g; ND 11,61 g ± 04 g; LM 13,7 g ± 0,5 g e STNL 11,82 g ± 0,5 g)., suggesting liver damage. Based on these results, the use of anabolic steroids is not recommended, as well as its association with Lepidium meyenii.

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Agradecemos a compreensão. on 2016-04-29T21:55:00Z (GMT) / Submitted by ÉRICK VALENTINO null (erick_valentino@hotmail.com) on 2016-05-01T17:52:34Z No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO FINAL.pdf: 3662256 bytes, checksum: 2afc06f93e79f4b0b2037b646b91fce4 (MD5) / Approved for entry into archive by Juliano Benedito Ferreira (julianoferreira@reitoria.unesp.br) on 2016-05-02T19:04:22Z (GMT) No. of bitstreams: 1 valentino_e_me_bot.pdf: 3662256 bytes, checksum: 2afc06f93e79f4b0b2037b646b91fce4 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-05-02T19:04:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 valentino_e_me_bot.pdf: 3662256 bytes, checksum: 2afc06f93e79f4b0b2037b646b91fce4 (MD5) Previous issue date: 2016-03-01 / Pró-Reitoria de Pesquisa (PROPe UNESP) / O envelhecimento populacional tem sido considerado um dos maiores desafios de saúde pública contemporânea, entre outros fatores leva à diminuição de hormônios, à perda progressiva da massa muscular e diminuição da força muscular. O exercício físico atua positivamente sobre esse sistema, bem como os derivados sintéticos da testosterona, os quais apresentam um efeito anabólico. Assim este trabalho teve como objetivo avaliar se a associação do exercício físico potencializado ou não por dose supra-fisiológica de decanoato de nandrolona previnem alterações decorrentes da idade no músculo sóleo de ratos e nas junções neuromusculares associadas. Foram utilizados 40 ratos Sprague-Dawley machos, com 90 dias de idade, os quais foram tratados durante 8 semanas e distribuídos, de acordo com o tratamento, em grupos de animais sedentários ou treinados, com ou sem o uso deDN. O treinamento físico foi realizado por sessões de saltos em água, três vezes por semana. Após atingirem 300 dias de idade, os músculos sóleos foram coletados e realizadas as seguintes análises: Análise morfológica e morfométrica das junções neuromusculares; Análise ultraestrutural das fibras musculares e junções neuromusculares associadas; Análise Imunohistoquímica e morfométrica das fibras Fast e Slow; Análise da Distribuição dos nAChRs por meio de microscopia confocal. Os resultados mostraram que houve diminuição do peso dos animais que fizeram uso de DN, embora o peso do músculo sóleo não tenha se alterado. A morfologia geral e morfometria das JNM se mantiveram constante nos grupos estudados, sendo que ultraestruturalmente as dobras juncionais eram escassas. Quanto à distribuição dos nAChRs , os animais que realizaram exercício, apresentaram um padrão de distribuição em de braços contínuos dos nAChR, nos demais o padrão em "ilha" estava presente. Na análise das fibras fast e Slow, o padrão morfométrico e quantitativo se mantiveram em todos os grupos experimentais. Sendo que núcleos centrais e áreas focais de lesão, bem como desorganização miofibrilar, foram observadas ultraestruturalmente nos animais que usaram DN. Os resultados permitem concluir que as alterações observadas neste estudo referem-se ao fator idade e que o exercício físico realizado na juventude manteve o padrão estrutural dos nAChR presentes nos jovens, já o DN não preveniu alterações morfológicas no sistema neuromuscular decorrente da idade. / Population aging has been considered one of the greatest challenges of contemporary public health; among other factors there is decreased hormone release, progressive loss of muscle mass, and decreased muscle strength. Physical exercise has a beneficial effect on that system, as well as synthetic testosterone derivatives, which have anabolic effect. This study had the objective of evaluating whether the association of physical exercise enhanced or not by supraphysiological dose of nandrolone decanoate prevents age-related alterations in the soleus muscle of rats and in the associated neuromuscular junctions. 40 male Sprague-Dawley rats, 90 days old, were treated for 8 weeks and distributed according to the treatment in sedentary or exercised group, with or without the use of ND. Physical training was conducted by jumps in water three times per week. At the age of 300 days, the soleus muscles were collected and analyzed as follows: morphologic and morphometric analysis of neuromuscular junctions; ultrastructural analysis of muscle fibers and associated neuromuscular junctions; immunohistochemistry and morphometric analysis of fast and slow-twitch fibers; analysis of the distribution of nAChRs by confocal microscopy. The results demonstrated that there was a decreased weight in the animals that used ND, although the weight of the soleus muscle did not change. The general morphology and morphometry of the NMJ remained constant in the groups studied, and in regard to ultrastructure the junctional folds were scarce. The animals that performed exercise had a pattern of nAChRs in continuous branches, in all the other animals the "island" pattern was present. The morphometric and quantitative pattern of slow and fast-twitch fibers remained stable in all groups. Central nuclei and focal areas of injury, as well as myofibrillar disorganization were observed in the animals that used ND. The results enable the conclusion that the alterations observed in this study were consequent to aging, and that physical exercise performed in youth maintained the structural pattern of nAChR present in the young animals. ND did not prevent morphological changes in the neuromuscular system consequent to aging. / PROPe: 0057/008/13

Em homens, os níveis de testosterona e de testosterona biodisponível (livre e a ligada à albumina) declinam com a idade, apresentando elevado risco de desenvolver resistência à insulina e diabetes tipo II. Já foi demonstrada a ação clássica (efeito genômico) da testosterona sobre a síntese e a liberação de insulina em pâncreas de rato. Os objetivos do presente trabalho são determinar: 1) a ação não clássica específica da testosterona, da nandrolona e de outros esteróides sexuais sobre a secreção de insulina em ilhotas pancreáticas isoladas de ratos machos adultos; 2) a influência de aminoácidos sobre esta ação; 3) a ação da testosterona sobre o transporte de aminoácidos; 4) a participação dos canais de Ca2+ dependentes de voltagem do tipo L e dos canais KATP na ação da testosterona e da nandrolona sobre a captação de 45Ca2+; 5) a participação da via da fosfolipase C na ação da testosterona sobre a captação de 45Ca2+. As ilhotas foram isoladas de pâncreas de 3 ratos Wistar machos (pesando 180-220g) por experimento pela técnica de Lacy e Kostianovsky (Diabetes, 16:35-39, 1967). Nos experimentos de secreção de insulina, amostras de 10μL de ilhotas isoladas foram pré-incubadas por 30 minutos e incubadas por 3 minutos em presença ou não de testosterona (1μM), T-BSA (1μM), nandrolona (1μM), 17 -estradiol (10 nM) ou progesterona (1μM) em um incubador metabólico Dubnoff em tampão KRb-HEPES com glicose 3 mM a 37ºC, pH 7,4 e gaseificação constante com carbogênio (O2:CO2; 95:5; v/v). Nos experimentos com glutamina, lisina, alanina e leucina, as ilhotas eram incubadas por mais 3 minutos com estes aminoácidos. A incubação foi interrompida em banho de gelo. Os tubos com as ilhotas eram centrifugados por 2 minutos a 45 x G, o sobrenadante coletado e a insulina quantificada por radioimunoensaio. No experimento de captação de aminoácido, as ilhotas isoladas (10μL) foram pré-incubadas por 30 minutos e incubadas por 15, 30 ou 60 minutos com 0,2 μCi de [1-14C] ácido a-metil aminoisobutírico mais testosterona (1μM). Após o final da incubação os tubos eram centrifugados por 2 minutos a 45 x G. O sobrenadante (meio externo) era preservado. As ilhotas era transferidas para tubos Eppendorff contendo 1 mL de água destilada (meio interno). Os tubos com as ilhotas eram congelados por 24 horas e após sonicados por 30 segundos. Eram retiradas amostras de 100 μL de cada frasco e do respectivo meio externo para contagem da radioatividade. Os resultados foram expressos pela relação entre a radioatividade contida no tecido (meio interno) e no meio de incubação (meio externo). Nos experimentos de captação de 45Ca 2+, as ilhotas isoladas (50μL) eram pré-incubadas por 45 ou 50 minutos com 0,2 μCi 45Ca2+, novamente pré-incubadas por 10 minutos com nifedipina (1μM), diazoxida (100μM), glibenclamida (25μM), ou tolbutamida (10μM) e incubadas com ou sem testosterona (0,1μM) ou nandrolona (0,1μM) por 1 minuto. No experimento com U73122 (2μM), as ilhotas eram pré-incubadas por mais 15 minutos com este fármaco e incubadas com ou sem testosterona (1μM) por 1 minuto. Para a interrupção da incubação, utilizou-se 1 mL de tampão frio com cloreto de lantânio (10 mM) Após, os tubos eram centrifugados por 2 minutos a 45 x G, o sobrenadante desprezado e as ilhotas lavadas duas vezes com a solução de cloreto de lantânio. As ilhotas eram transferidas para tubos tipo Eppendorff contendo 1 mL de água destilada. Os tubos eram congelados por 24 horas e após sonicados por 30 segundos. Eram retiradas amostras de 50 μL de cada frasco para contagem da radioatividade. A testosterona e a nandrolona estimularam a secreção de insulina após incubação de 3 minutos, através do fechamento de canais K+ ATP tendo, como conseqüência, o aumento da captação de Ca2+ e a exocitose do hormônio. A testosterona ligada à albumina, que não entra na célula e interage com receptor de membrana, também estimulou a secreção de insulina em 3 minutos, sugerindo um efeito de membrana dos andrógenos. Em nossas condições experimentais, o 17- -estradiol e a progesterona não mostraram efeito sobre a secreção de insulina. A ação androgênica sobre a secreção de insulina ocorreu somente na ausência de glicose ou em concentrações sublimiares (3mM). A testosterona não estimulou a captação do aminoácido metilaminoisobutírico [14C]. A L-alanina estimulou a secreção de insulina. Porém, quando associadas testosterona e alanina somente, houve redução na secreção. Também foi observado que uma mistura de aminoácidos (MIX- glutamina, lisina, leucina e alanina,) em diferentes concentrações proporcionais foi efetiva na secreção de insulina. Houve aumento significativo na secreção de insulina quando associados testosterona e a concentração 2x maior dos aminoácidos. Também, os andrógenos aumentaram a captação de Ca2+ em 60 segundos. A ação da testosterona sobre a captação de Ca2+ ocorreu em concentrações limiares de glicose (5 e 8 mM), porém não em concentrações elevadas (11 mM). Quando a testosterona foi incubada na presença de nifedipina (bloqueador de canais de Ca2+ dependentes de voltagem do tipo L), seu efeito estimulatório sobre a captação de 45Ca2+ foi anulado. Ocorreu inibição da ação androgênica quando a testosterona foi incubada em presença de diazoxida, a qual aumenta a probabilidade de abertura do canal K+ ATP. O efeito da testosterona e da nandrolona sobre a captação de 45Ca2 é análogo à ação das sulfoniluréias (glibenclamida e tolbutamida), as quais inibem o canal K+ ATP. Ambos os efeitos indicam que a ação da testosterona envolve o fechamento do canal K+ ATP e conseqüente despolarização da membrana da célula . O inibidor da fosfolipase C, o U73122, bloqueou a ação estimulatória de testosterona sobre a captação de 45Ca2+. Nossa conclusão para estes achados seria que a testosterona e a nandrolona, na presença de baixas concentrações de substratos energéticos como a glicose e aminoácidos, estimulariam a liberação da insulina para modular os efeitos catabólicos dos contra-reguladores e, assim, manter a homeostase. O mecanismo de secreção da insulina pelos andrógenos envolve a ativação de PLC via ligação ao receptor de membrana acoplado à proteína Gq, o fechamento de K+ ATP e a entrada de Ca2+ através de canais de cálcio dependentes de voltagem do tipo L. / In men, testosterone and bioavailable testosterone levels ( free and and albumin-bound) decline with age, with high risk of developing insulin resistance and type 2 diabetes. It has been already shown the classic action of testosterone (genomic effect) on the insulin synthesis and release in rat pancreas. The objective of this survey is to determine: 1) the specific non-classical action of testosterone, nandrolone and other sex steroids on insulin secretion in isolated pancreatic islets from adult male rats; 2) aminoacids influence on this action; 3) testosterone action on amino acid transport; 4) the participation of L-type voltagegated Ca2+ channels and KATP channels in the testosterone and nandrolone action on the 45Ca2+ uptake; 5) the participation of phospholipase C via in the testosterone action on the 45Ca2+ uptake. The islets were isolated from the pancreas of 3 male Wistar rats (weighing between 180 and 200g) per experiment by the technique of Lacy and Kostianovsky (Diabetes, 16:35-39, 1967). In the experiments of insulin secretion, samples of 10μL of isolated islets were preincubated for 30 minutes and incubated for 3 minutes in the presence or absence of testosterone (1μM), T-BSA (1μM), nandrolone (1μM), 17 -estradiol (10 nM) or progesterone (1μM) in a Dubnoff metabolic incubator in KRb-HEPES buffer with 3 mM glucose at 37ºC, pH 7,4 and constant gasification constante with carbogen (O2:CO2; 95:5; v/v). In experiments with glutamine, lysine, alanine and leucine, the islets were incubated for another 3 minutes with these amino acids. The incubation was stopped in an ice bath. The tubes containing the islets were centrifuged for 2 minutes at 45xG, the supernatant collected and insulin measured by radioimmunoassay. In the experiment of amino acid uptake, isolated islets (10μL) were pre-incubated for 30 minutes and incubated for 15, 30 or 60 minutes with 0,2 μCi of [1-14C] a-metyl aminoisobutyric plus testosterone (1μM). After the end of incubation, tubes were centrifuged for 2 minutes at 45 x G. The supernatant (environment) was preserved. The islets were transferred to Eppendorff tubes containing 1mL of distilled water (internal environment). The tubes with islets were frozen for 24 hours and after this sonicated for 30 seconds. Samples of 100 μL were removed from each bottle and respective environment for radioactivity counting. Results were expressed by the relation between the radioactivity contained in the tissue (internal environment) and the incubation environment (external environment) . In the experiments of 45Ca 2+ uptake, the isolated islets (50μL) , were pre-incubated for 45 or 50 minutes with 0,2 μCi 45Ca2+, preincubated again for 10 minutes with nifedipine (1μM), diazoxide (100μM), glibenclamide (25μM), or tolbutamide (10μM) and incubated with or without testosterone (1μM) for 1 minute. In this experiment with U73122 (2μM), the islets were pre-incubated for more 15 minutes with this drug and incubated with or without testosterone (1μM) for 1 minute. For the interruption of incubation, it was used a cold 1mL buffer with lanthanum chloride (10mM). After, tubes were centrifuged for 2 minutes at 45 x G, the supernatant discarded and the islets washed twice with lanthanum chloride solution. The islets were transferred to Eppendorf tubes containing 1ml of distilled water. The tubes were frozen for 24 hours and after it, sonicated for 30 seconds. Samples of 50 μL were taken from each bottle for radioactivity counting. In isolated pancreatic islets of rats, testosterone and nandrolone have stimulated insulin secretion, after a 3-minute incubation period, closing the K+ ATP channels, having as consequence the increase of Ca2+ inflow and the hormone exocytosis. Testosterone conjugated to bovine serum albumin, which is not membrane permeable and interacts with the receptor of membrane, also stimulated insulin secretion in 3 minutes, suggesting an androgen membrane effect. In our experimental conditions, 17- -estradiol and progesterone have not demonstrated effects in insulin secretion. Testosterone has not stimulated the uptake of methylaminoisobutyric acid [1-14C]. L-alanine has stimulated insulin secretion. However, when testosterone was associated only with alanine, insulin secretion has decreased. It has also been noted that an aminoacid mixture (MIX-alanine, glutamine, lysine and leucine) in different proportional concentrations has been effective in insulin secretion. When associated, testosterone and MIX, there has been an increase in insulin secretion when the concentration of amino acids has been 2 times higher. Also, the androgens have increased the 45Ca2+ uptake in 60 seconds. However, the androgenic action has occurred only in absence of glucose or at sub stimulatory concentrations (3 mM). The action of testosterone on 45Ca2+ uptake has occurred at stimulatory glucose concentrations (5 and 8 mM), but not in high concentrations (11 mM). When testosterone has been incubated in the presence of nifedipine (Ca2+ type L channel blocker), its stimulatory effect on 45Ca2+ uptake has been nullified. When it was used diazoxide to produce the opening of K+ ATP channels, it has occurred the inhibition of androgenic action. The testosterone and nandrolone effect is analogous to the action of sulphonilureias (glibenclamida and tolbutamida), which inhibit the K+ ATP channel. Both effects show that testosterone action involves the K+ ATP channel closing and consequent membrane depolarization of cell. The presence of U73122, which inhibits the activation of PLC, has inhibited the testosterone action on 45Ca2+ uptake. Our conclusion for these results would be that testosterone and nandrolone, in the presence of low concentrations of energetics substrates as glucose and amino acids would stimulate the insulin liberation for modulating the catabolic effects of counter-regulators and, then, sustaining homeostasis. It can also be observed that the associated mechanism involves a Gq protein-coupled membrane receptor-binding, the PLC activation, the K+ ATP closing and Ca2+ entry through the voltage-dependent L-type calcium channels.

A popularização do treinamento resistido associada a busca pelo corpo perfeito traz consigo uma maior procura por recursos anabolizantes por atletas e amadores. A utilização de anabolizantes geralmente ocorre em associação com outras substâncias, o que pode agravar os seus efeitos colaterais. Apesar de haver vários estudos abordando os efeitos colaterais do decanoato de nandrolona, pouco se conhece sobre a sua associação com treinamento resistido e Lepidium meyenii. Objetivo: avaliar o efeito do treinamento resistido associado a decanoato de nandrolona e Lepidium meyenni (Maca) sob o peso corporal, parâmetros comportamentais e hepáticos em ratos wistar. Para isso, foi aplicado um modelo experimental com 60 ratos adultos, divididos em cinco grupos: controle sedentário (SC), treinamento resistido (ST), decanoato de nandrolona sedentário (ND), Lepidium meyenii sedentário (LM) e treinamento resistido decanoato de nandrolona e Lepidium meyenii (STNL). O protocolo de treinamento resistido consta de 3 séries com 10 repetições com 80% 1RM e teve duração de 5 semanas, com freqüência de 3 vezes por semana no aparato proposto por Tamaki et al. (1992). O decanoato de nandrolona intramuscular na dose de 18mg/kg/semana e Lepidium meyenii na dose de 450 mg/kg/semana foi administrado por gavagem. Ao término do treinamento, foram realizados os seguintes testes comportamentais: Labirinto em Cruz Elevado (Plus-Maze), Reconhecimento de Objeto e Residente-Intruso. Para avaliação hepática foram realizadas as seguintes análises bioquímicas: alanina aminotransferase (ALT), aspartato aminotransferase (AST), fosfatase alcalina (FA) e gama glutamiltransferase (GGT). Foram observado efeitos positivos da administração de decanoato de nandrolona, Lepidium meyenii e treinamento resistido sob o peso (SC 490,0 g ± 2,9 g; ST 450,0 g ± 1,3 g; ND 410 g ± 1,0 g; LM 430 g ± 1,4 g e STNL 390 g ± 0,7 g). Os testes comportamentais apresentaram alterações em um ou mais grupos para os parâmetros de agressividade, ansiedade e memória. No Labirinto em Cruz Elevado encontrou-se menor número de entradas no braços abertos do grupo ST (SC 2,50 ± 0,62; ST 1,42 ± 0,26; ND 1,58 ± 0,39; LM 1,57 ± 0,33 e STNL 1,58 ± 0,19), menor número de entradas nos braços fechados nos grupos ST e STNL (SC 6,13 ± 0,93; ST 2,75 ± 0,67; ND 3,25 ± 0,52; LM 4,17 ± 0,45 e STNL 2,33 ± 0,33) e menor tempo de permanência no grupo ST (SC 42,88 s ± 13,88 s; ST 17,67 s ± 70 s; ND 28,50 s ± 12,50 s; LM 20,42 s ± 5,8 s e STNL 34,25 s ± 15,24 s). No teste residente intruso observou-se menor número de ataques nos grupos ST e LM (SC 9,13 ± 2,31; ST 6,00 ± 1,38; ND 8,50 ± 1,25; LM 5,75 ± 1,01 e STNL 8,75 ± 1,46). No teste para memória verificou-se menor índice de reconhecimento de objeto nos grupos ND e LM (SC 0,27 ± 0,20; ST 0,01 ± 0,20; ND -0,35 ± 0,16; LM -0,23 ± 0,16 e STNL -0,23 ± 0,21). Apesar de não terem sido encontradas variações significativas nas análises bioquímicas (AST, ALT, FAL e GGT), houve uma diminuição significativa no peso do fígado nos grupos ND e STNL, (SC 14,4 g ± 0,4 g; ST 14,62 g ± 1,0 g; ND 11,61 g ± 04 g; LM 13,7 g ± 0,5 g e STNL 11,82 g ± 0,5 g), sugerindo lesão hepática. Com base nestes resultados não recomenda-se o uso de esteróides anabolizantes ou a sua associação com Lepidium meyenii. / The popularization of strength training associated with the search for the perfect body increases the demand for anabolic resources for athletes and amateurs. The use of anabolic steroids often occurs in combination with other substances, which may worsen the side effects. Although there are several studies addressing the side effects of nandrolone decanoate, little is known about its association with strength training and Lepidium meyenii. This study aims to evaluate the effect of strength training associated with nandrolone decanoate and Lepidium meyenni (Maca) on body mass, behavioral and liver parameter in Wistar rats. For this, an experimental model was applied to 60 adult rats were divided into five groups: sedentary control (SC), strength training (ST), nandrolone decanoate sedentary (ND), Lepidium meyenii sedentary (LM) and strength training, nandrolone decanoate and Lepidium meyenii (STNL). The strength training protocol consist of 3 series 10 repetitions 80% 1RM and was performed three times a week for five weeks in the apparatus proposed by Tamaki et al. (1992). The nandrolone decanoate intramuscular injection at a dose of 18 mg/kg/week and Lepidium meyenii at 450 mg/kg/week was administered by gavage. At the end of training, the following behavioral tests were performed: Plus-Maze Test, Object Recognition Test and Resident-Intruder. For liver evaluation were made biochemical analysis: alanine aminotransferase (ALT), aspartate aminotransferase (AST), alkaline phosphatase (ALP) and gamma glutamyl transferase (GGT). It was observed positive effects of administration of nandrolone decanoate, Lepidium meyenii and strength training on body mass (SC 490,0 g ± 2,9 g; ST 450,0 g ± 1,3 g; ND 410 g ± 1,0 g; LM 430 g ± 1,4g and STNL 390 g ± 0,7 g). Behavioral tests showed alterations at one or more groups for the aggressiveness parameters, anxiety and memory. In the Plus-Maze Test it found smaller number of entries in the open arms in ST group (SC 2,50 ± 0,62; ST 1,42 ± 0,26; ND 1,58 ± 0,39; LM 1,57 ± 0,33 and STNL 1,58 ± 0,19), smaller number of entries in ST e STNL groups (SC 6,13 ± 0,93; ST 2,75 ± 0,67; ND 3,25 ± 0,52; LM 4,17 ± 0,45 and STNL 2,33 ± 0,33) and shorter permanence in the open arms in ST group (SC 42,88 s ± 13,88 s; ST 17,67 s ± 70 s; ND 28,50 s ± 12,50 s; LM 20,42 s ± 5,8 s and STNL 34,25 s ± 15,24 s). In the Resident Intruder it was observed smaller number of attacks in ST and LM groups (SC 9,13 ± 2,31; ST 6,00 ± 1,38; ND 8,50 ± 1,25; LM 5,75 ± 1,01 and STNL 8,75 ± 1,46). In the Object Recognition Test it was verified lower object recognition índex in ND and LM groups (SC 0,27 ± 0,20; ST 0,01 ± 0,20; ND - 0,35 ± 0,16; LM -0,23 ± 0,16 e STNL -0,23 ± 0,21). Despite not having been found significant variations in biochemical analysis (AST, ALT, FAL and GGT), there was a significant decrease in liver weight in ND and STNL groups (SC 14,4 g ± 0,4 g; ST 14,62 g ± 1,0 g; ND 11,61 g ± 04 g; LM 13,7 g ± 0,5 g e STNL 11,82 g ± 0,5 g)., suggesting liver damage. Based on these results, the use of anabolic steroids is not recommended, as well as its association with Lepidium meyenii.

Em homens, os níveis de testosterona e de testosterona biodisponível (livre e a ligada à albumina) declinam com a idade, apresentando elevado risco de desenvolver resistência à insulina e diabetes tipo II. Já foi demonstrada a ação clássica (efeito genômico) da testosterona sobre a síntese e a liberação de insulina em pâncreas de rato. Os objetivos do presente trabalho são determinar: 1) a ação não clássica específica da testosterona, da nandrolona e de outros esteróides sexuais sobre a secreção de insulina em ilhotas pancreáticas isoladas de ratos machos adultos; 2) a influência de aminoácidos sobre esta ação; 3) a ação da testosterona sobre o transporte de aminoácidos; 4) a participação dos canais de Ca2+ dependentes de voltagem do tipo L e dos canais KATP na ação da testosterona e da nandrolona sobre a captação de 45Ca2+; 5) a participação da via da fosfolipase C na ação da testosterona sobre a captação de 45Ca2+. As ilhotas foram isoladas de pâncreas de 3 ratos Wistar machos (pesando 180-220g) por experimento pela técnica de Lacy e Kostianovsky (Diabetes, 16:35-39, 1967). Nos experimentos de secreção de insulina, amostras de 10μL de ilhotas isoladas foram pré-incubadas por 30 minutos e incubadas por 3 minutos em presença ou não de testosterona (1μM), T-BSA (1μM), nandrolona (1μM), 17 -estradiol (10 nM) ou progesterona (1μM) em um incubador metabólico Dubnoff em tampão KRb-HEPES com glicose 3 mM a 37ºC, pH 7,4 e gaseificação constante com carbogênio (O2:CO2; 95:5; v/v). Nos experimentos com glutamina, lisina, alanina e leucina, as ilhotas eram incubadas por mais 3 minutos com estes aminoácidos. A incubação foi interrompida em banho de gelo. Os tubos com as ilhotas eram centrifugados por 2 minutos a 45 x G, o sobrenadante coletado e a insulina quantificada por radioimunoensaio. No experimento de captação de aminoácido, as ilhotas isoladas (10μL) foram pré-incubadas por 30 minutos e incubadas por 15, 30 ou 60 minutos com 0,2 μCi de [1-14C] ácido a-metil aminoisobutírico mais testosterona (1μM). Após o final da incubação os tubos eram centrifugados por 2 minutos a 45 x G. O sobrenadante (meio externo) era preservado. As ilhotas era transferidas para tubos Eppendorff contendo 1 mL de água destilada (meio interno). Os tubos com as ilhotas eram congelados por 24 horas e após sonicados por 30 segundos. Eram retiradas amostras de 100 μL de cada frasco e do respectivo meio externo para contagem da radioatividade. Os resultados foram expressos pela relação entre a radioatividade contida no tecido (meio interno) e no meio de incubação (meio externo). Nos experimentos de captação de 45Ca 2+, as ilhotas isoladas (50μL) eram pré-incubadas por 45 ou 50 minutos com 0,2 μCi 45Ca2+, novamente pré-incubadas por 10 minutos com nifedipina (1μM), diazoxida (100μM), glibenclamida (25μM), ou tolbutamida (10μM) e incubadas com ou sem testosterona (0,1μM) ou nandrolona (0,1μM) por 1 minuto. No experimento com U73122 (2μM), as ilhotas eram pré-incubadas por mais 15 minutos com este fármaco e incubadas com ou sem testosterona (1μM) por 1 minuto. Para a interrupção da incubação, utilizou-se 1 mL de tampão frio com cloreto de lantânio (10 mM) Após, os tubos eram centrifugados por 2 minutos a 45 x G, o sobrenadante desprezado e as ilhotas lavadas duas vezes com a solução de cloreto de lantânio. As ilhotas eram transferidas para tubos tipo Eppendorff contendo 1 mL de água destilada. Os tubos eram congelados por 24 horas e após sonicados por 30 segundos. Eram retiradas amostras de 50 μL de cada frasco para contagem da radioatividade. A testosterona e a nandrolona estimularam a secreção de insulina após incubação de 3 minutos, através do fechamento de canais K+ ATP tendo, como conseqüência, o aumento da captação de Ca2+ e a exocitose do hormônio. A testosterona ligada à albumina, que não entra na célula e interage com receptor de membrana, também estimulou a secreção de insulina em 3 minutos, sugerindo um efeito de membrana dos andrógenos. Em nossas condições experimentais, o 17- -estradiol e a progesterona não mostraram efeito sobre a secreção de insulina. A ação androgênica sobre a secreção de insulina ocorreu somente na ausência de glicose ou em concentrações sublimiares (3mM). A testosterona não estimulou a captação do aminoácido metilaminoisobutírico [14C]. A L-alanina estimulou a secreção de insulina. Porém, quando associadas testosterona e alanina somente, houve redução na secreção. Também foi observado que uma mistura de aminoácidos (MIX- glutamina, lisina, leucina e alanina,) em diferentes concentrações proporcionais foi efetiva na secreção de insulina. Houve aumento significativo na secreção de insulina quando associados testosterona e a concentração 2x maior dos aminoácidos. Também, os andrógenos aumentaram a captação de Ca2+ em 60 segundos. A ação da testosterona sobre a captação de Ca2+ ocorreu em concentrações limiares de glicose (5 e 8 mM), porém não em concentrações elevadas (11 mM). Quando a testosterona foi incubada na presença de nifedipina (bloqueador de canais de Ca2+ dependentes de voltagem do tipo L), seu efeito estimulatório sobre a captação de 45Ca2+ foi anulado. Ocorreu inibição da ação androgênica quando a testosterona foi incubada em presença de diazoxida, a qual aumenta a probabilidade de abertura do canal K+ ATP. O efeito da testosterona e da nandrolona sobre a captação de 45Ca2 é análogo à ação das sulfoniluréias (glibenclamida e tolbutamida), as quais inibem o canal K+ ATP. Ambos os efeitos indicam que a ação da testosterona envolve o fechamento do canal K+ ATP e conseqüente despolarização da membrana da célula . O inibidor da fosfolipase C, o U73122, bloqueou a ação estimulatória de testosterona sobre a captação de 45Ca2+. Nossa conclusão para estes achados seria que a testosterona e a nandrolona, na presença de baixas concentrações de substratos energéticos como a glicose e aminoácidos, estimulariam a liberação da insulina para modular os efeitos catabólicos dos contra-reguladores e, assim, manter a homeostase. O mecanismo de secreção da insulina pelos andrógenos envolve a ativação de PLC via ligação ao receptor de membrana acoplado à proteína Gq, o fechamento de K+ ATP e a entrada de Ca2+ através de canais de cálcio dependentes de voltagem do tipo L. / In men, testosterone and bioavailable testosterone levels ( free and and albumin-bound) decline with age, with high risk of developing insulin resistance and type 2 diabetes. It has been already shown the classic action of testosterone (genomic effect) on the insulin synthesis and release in rat pancreas. The objective of this survey is to determine: 1) the specific non-classical action of testosterone, nandrolone and other sex steroids on insulin secretion in isolated pancreatic islets from adult male rats; 2) aminoacids influence on this action; 3) testosterone action on amino acid transport; 4) the participation of L-type voltagegated Ca2+ channels and KATP channels in the testosterone and nandrolone action on the 45Ca2+ uptake; 5) the participation of phospholipase C via in the testosterone action on the 45Ca2+ uptake. The islets were isolated from the pancreas of 3 male Wistar rats (weighing between 180 and 200g) per experiment by the technique of Lacy and Kostianovsky (Diabetes, 16:35-39, 1967). In the experiments of insulin secretion, samples of 10μL of isolated islets were preincubated for 30 minutes and incubated for 3 minutes in the presence or absence of testosterone (1μM), T-BSA (1μM), nandrolone (1μM), 17 -estradiol (10 nM) or progesterone (1μM) in a Dubnoff metabolic incubator in KRb-HEPES buffer with 3 mM glucose at 37ºC, pH 7,4 and constant gasification constante with carbogen (O2:CO2; 95:5; v/v). In experiments with glutamine, lysine, alanine and leucine, the islets were incubated for another 3 minutes with these amino acids. The incubation was stopped in an ice bath. The tubes containing the islets were centrifuged for 2 minutes at 45xG, the supernatant collected and insulin measured by radioimmunoassay. In the experiment of amino acid uptake, isolated islets (10μL) were pre-incubated for 30 minutes and incubated for 15, 30 or 60 minutes with 0,2 μCi of [1-14C] a-metyl aminoisobutyric plus testosterone (1μM). After the end of incubation, tubes were centrifuged for 2 minutes at 45 x G. The supernatant (environment) was preserved. The islets were transferred to Eppendorff tubes containing 1mL of distilled water (internal environment). The tubes with islets were frozen for 24 hours and after this sonicated for 30 seconds. Samples of 100 μL were removed from each bottle and respective environment for radioactivity counting. Results were expressed by the relation between the radioactivity contained in the tissue (internal environment) and the incubation environment (external environment) . In the experiments of 45Ca 2+ uptake, the isolated islets (50μL) , were pre-incubated for 45 or 50 minutes with 0,2 μCi 45Ca2+, preincubated again for 10 minutes with nifedipine (1μM), diazoxide (100μM), glibenclamide (25μM), or tolbutamide (10μM) and incubated with or without testosterone (1μM) for 1 minute. In this experiment with U73122 (2μM), the islets were pre-incubated for more 15 minutes with this drug and incubated with or without testosterone (1μM) for 1 minute. For the interruption of incubation, it was used a cold 1mL buffer with lanthanum chloride (10mM). After, tubes were centrifuged for 2 minutes at 45 x G, the supernatant discarded and the islets washed twice with lanthanum chloride solution. The islets were transferred to Eppendorf tubes containing 1ml of distilled water. The tubes were frozen for 24 hours and after it, sonicated for 30 seconds. Samples of 50 μL were taken from each bottle for radioactivity counting. In isolated pancreatic islets of rats, testosterone and nandrolone have stimulated insulin secretion, after a 3-minute incubation period, closing the K+ ATP channels, having as consequence the increase of Ca2+ inflow and the hormone exocytosis. Testosterone conjugated to bovine serum albumin, which is not membrane permeable and interacts with the receptor of membrane, also stimulated insulin secretion in 3 minutes, suggesting an androgen membrane effect. In our experimental conditions, 17- -estradiol and progesterone have not demonstrated effects in insulin secretion. Testosterone has not stimulated the uptake of methylaminoisobutyric acid [1-14C]. L-alanine has stimulated insulin secretion. However, when testosterone was associated only with alanine, insulin secretion has decreased. It has also been noted that an aminoacid mixture (MIX-alanine, glutamine, lysine and leucine) in different proportional concentrations has been effective in insulin secretion. When associated, testosterone and MIX, there has been an increase in insulin secretion when the concentration of amino acids has been 2 times higher. Also, the androgens have increased the 45Ca2+ uptake in 60 seconds. However, the androgenic action has occurred only in absence of glucose or at sub stimulatory concentrations (3 mM). The action of testosterone on 45Ca2+ uptake has occurred at stimulatory glucose concentrations (5 and 8 mM), but not in high concentrations (11 mM). When testosterone has been incubated in the presence of nifedipine (Ca2+ type L channel blocker), its stimulatory effect on 45Ca2+ uptake has been nullified. When it was used diazoxide to produce the opening of K+ ATP channels, it has occurred the inhibition of androgenic action. The testosterone and nandrolone effect is analogous to the action of sulphonilureias (glibenclamida and tolbutamida), which inhibit the K+ ATP channel. Both effects show that testosterone action involves the K+ ATP channel closing and consequent membrane depolarization of cell. The presence of U73122, which inhibits the activation of PLC, has inhibited the testosterone action on 45Ca2+ uptake. Our conclusion for these results would be that testosterone and nandrolone, in the presence of low concentrations of energetics substrates as glucose and amino acids would stimulate the insulin liberation for modulating the catabolic effects of counter-regulators and, then, sustaining homeostasis. It can also be observed that the associated mechanism involves a Gq protein-coupled membrane receptor-binding, the PLC activation, the K+ ATP closing and Ca2+ entry through the voltage-dependent L-type calcium channels.

Orientador: Fernanda Klein Marcondes / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-19T19:10:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Neves_VanderJosedas_D.pdf: 1737689 bytes, checksum: d320aa9ee9ef10e1c44b199ad2dae541 (MD5) Previous issue date: 2012 / Resumo: A associação entre o tratamento com o esteróide anabólico nandrolona e treinamento físico resistido de alta intensidade induziu hipertrofia cardíaca concêntrica, disfunção sistólica e diastólica em ratos. O objetivo deste trabalho foi avaliar se esta hipertrofia seria patológica, por meio da análise da expressão gênica de marcadores de hipertrofia cardíaca patológica (ß-miosina de cadeia pesada (ß-MHC), ?-miosina de cadeia pesada (ß-MHC), ß-actina esquelética e peptídeo natriurético atrial). Outro objetivo deste estudo foi analisar o efeito da nandrolona associada ou não ao treinamento físico sobre a pressão arterial in vivo, a eletrofisiologia cardíaca, e a população de adrenoceptores ß1 (AR-ß1) e ß2 (AR-ß2) no átrio direito de ratos. Foram utilizados 88 ratos Wistar, divididos em quatro grupos experimentais: não treinado+veículo (NTV), treinado+veículo (TV), não treinado+nandrolona (NTN), treinado+nandrolona (TN). Os animais foram tratados por 6 semanas com veículo propilenoglicol (0,2 mL/Kg) ou decanoato de nandrolona (5 mg/Kg), i.m. 2x/semana. O treinamento foi realizado por saltos em água com sobrecarga de peso variando de 50-70% do peso corporal, 5 dias/semana, por 6 semanas. Na sétima semana, os animais foram mortos por decapitação e o coração foi isolados para análise dos marcadores de hipertrofia cardíaca e da população de adrenoceptores ß atriais. Em outros animais, submetidos aos mesmos tratamentos, foi analisada a pressão arterial 1x/semana e o eletrocardiograma foi realizado no fim do período experimental. Os resultados foram comparados por ANOVA bifatorial seguido por teste de Tukey e a pressão arterial por Análise de Variância com Medidas Repetidas e com Estrutura de Variância Autoregressiva. A nandrolona diminuiu a expressão de ß-MHC nos grupos NTN (26%) e TN (42,5%) em comparação ao grupo NTV. O treinamento diminuiu a expressão de ß-MHC nos grupos TV (59,5%) e TN (22,7%) comparados ao grupo NTV. Apenas no grupo TN houve aumento de ß-actina esquelética (117,3%) e peptídeo natriurético atrial (114%) comparado a NTV. Nos grupos TV e TN, a pressão arterial sistólica, média e diastólica diminuiu em comparação aos respectivos grupos não treinados. A freqüência cardíaca diminuiu nos grupos TV e TN nas semanas 5 e 6 em comparação aos respectivos grupos não treinados. A nandrolona induziu aumento da pressão arterial sistólica nos grupos NTN e TN na quinta semana de tratamento em comparação com a primeira e segunda semanas. No eletrocardiograma, a nandrolona prolongou o intervalo QTc em 3,7% no grupo NTN e 2,7% no TN em comparação aos respectivos grupos tratados com nandrolona. A nandrolona induziu aumento de 50,1% na população de AR-ß1 no grupo NTN e 75,6% no TN em comparação ao NTV, e também induziu aumento de 66,5% na população de AR-ß2 no grupo NTN e 126,7% no TN em comparação ao NTV. Os resultados do presente trabalho mostram que a hipertrofia cardíaca induzida pela nandrolona, isoladamente, ou em associação ao treinamento físico é patológica, e sugerem que as alterações na população de adrenoceptores ß podem representar um mecanismo compensatório aos efeitos desencadeados pela nandrolona sobre o miocárdio hipertrofiado / Abstract: The nandrolone or its association with physical training induced concentric cardiac hypertrophy associated with systolic and diastolic dysfunction in the heart of rat. In this way, to complement these results, the objective of this study was to evaluate the influence of nandrolone and resistance training on cardiac hypertrophy, the gene expression of pathological cardiac hypertrophy markers (ß-myosin heavy chain (ß-MHC), ß-myosin heavy chain (ß-MHC), ß-skeletal actin and atrial natriuretic peptide), blood pressure in vivo, cardiac electrophysiology, and the population of ß1-adrenoceptor (AR-ß1) and ß2 (ß2-AR) in right atrium of 88 Wistar rats, which were divided into four groups: non trained+vehicle (NTV), Trained+vehicle (TV), non trained+nandrolone (NTN), trained+nandrolone (TN). The animals were treated for 6 weeks with vehicle propylene glycol (0.2 mL/kg) or nandrolone decanoate (5 mg/kg), i.m. 2x/week. The training was carried out by jumping into water with overweight ranging from 50-70% of body weight, 5 days/week for 6 weeks. After sacrifice of animals, were performed the analysis of cardiac hypertrophy markers of ß adrenoceptors population. In other animals underwent the same treatment, blood pressure was analyzed 1x/semana and electrocardiogram was performed at the end of trial period. The results were calculated by two-way ANOVA followed by Tukey test and blood pressure by Analysis of Variance with Repeated Measures of Structure of Self-regressive Variance. The results showed cardiac hypertrophy 9% higher in the TV group and 8% for NTN compared to NTV, and this effect was potentiated in TN group. The nandrolone decreased the expression of ß-MHC in the NTN group (26%) and TN (42.5%), both compared to NTV. Training decreased the expression of ß-MHC in TV group (in 59.5%) and TN (22.7%) compared to NTV. Only in the TN group, both ß-skeletal actin (117.3%) and atrial natriuretic peptide (114%) were increased compared to NTV. In TV and TN groups, systolic, mean and diastolic blood pressures were decreased compared to the respective non trained groups. The heart rate decreased in the groups TV and TN in the weeks 5 and 6 in comparison to the respective groups NTV and NTN. The nandrolone increased systolic blood pressure in TN and NTN groups in the fifth week of treatment compared to the first and second weeks. The electrocardiogram analysis shown that nandrolone prolonged QTc interval by 3.7% in the NTN group and 2.7% in TN compared to respective groups NTV and TV. The nandrolone induced an increase of 50.1% in the population of AR-ß1 on NTN group and 75.6% in TN compared to NTV, and also increased 66.5% in the ß2-AR population in the NTN group and 126,7% in TN compared to NTV. In conclusion, the results of this study confirm that cardiac hypertrophy induced by only nandrolone or in combination with physical training is pathological, and suggest that changes in the population of ß-adrenoceptors are an attempt of right atrium to compensate the negative effects of nandrolone on the hypertrophied myocardium / Doutorado / Fisiologia Oral / Doutor em Odontologia

Made available in DSpace on 2015-02-04T21:42:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Rogerio Rocha Lucena.pdf: 371834 bytes, checksum: 2130ebadbe5c5c312172ce9ac4aa777a (MD5) Previous issue date: 2009-12-10 / O uso indiscriminado de esteróides anabólicos androgênicos (EAA) de base sintética tem gerado conseqüências fisiológicas danosas, e muitas vezes letais para os usuários. Unindo-se a hipótese da existência de contaminação por metais pesados no processo de fabricação destas substâncias sintéticas os riscos tornam-se potencialmente maiores. Esta revisão não sistemática teve como objetivo principal verificar os efeitos adversos provocados pelos esteróides anabolizantes sintéticos (EAA), e suas possíveis impurezas de metais pesados, na saúde dos consumidores destas drogas injetáveis. Observou-se que os agravos mais importantes à saúde dos consumidores de EAA têm como alvo o sistema nervoso, sistema cardiovascular, fígado e rins, órgãos estes, também afetados pela ingestão de metais pesados, potencializando, portanto, os seus efeitos. Em uma simulação conservadora para o consumo do Decanoato de Nandrolona, em doses suprafisiológicas (100 vezes a recomendada) e considerando impurezas da ordem de 1ppm de Cd, 1ppm Pb, 0,5ppm de Hg e 5ppm de As, a contribuição percentual para o valor provisório de ingestão diária tolerável (PTDI) destes metais seria em torno de 8,4%, 2,3%, 18,1% e 19,5% respectivamente.

O decanoato de nandrolona é um esteróide anabólico-androgênico (EAA), derivado da testosterona, utilizado de maneira abusiva por indivíduos procurando ganho de força física ou apenas efeitos estéticos. Doses suprafisiológicas desses compostos têm sido associadas a efeitos psiquiátricos adversos, especialmente episódios de impulsividade e aumento no comportamento agressivo. Considerando o desconhecimento dos mecanismos neurais envolvidos nessa desinibição comportamental, nós investigamos a integridade da transcrição de componentes do sistema serotoninérgico (intimamente relacionados à expressão de comportamentos emocionais) em diversas áreas cerebrais de camundongos sob a administração prolongada de nandrolona. Camundongos machos adultos da linhagem C57Bl/6J receberam uma injeção subcutânea diária de 15 mg/kg de decanoato de nandrolona durante 28 dias. Diferentes grupos de animais foram utilizados para a análise de comportamentos emocionais e para a quantificação da expressão de genes relacionados à serotonina (5-HT), utilizando a transcrição reversa do RNA associada à técnica de PCR em tempo-real. Os camundongos tratados apresentaram um aumento na massa corporal, hiperatividade motora e aumento de comportamentos relacionados à ansiedade em ambientes novos. A imobilidade avaliada no teste de nado forçado apresentou-se reduzida. Os animais que receberam a nandrolona se mostraram mais agressivos e impulsivos para iniciar o ataque aos camundongos oponentes, no modelo de residenteintruso. O EAA induziu uma redução significante na quantidade de transcritos da maioria dos receptores pós-sinápticos de 5-HT investigados na amígdala e no córtex pré-frontal. A expressão do gene do receptor 5-HT1B (reconhecidamente envolvido com as alterações comportamentais observadas) estava também reduzida no hipocampo e hipotálamo. No mesencéfalo, região onde se encontram os corpos neuronais dos neurônios serotoninérgicos que inervam o sistema límbico e demais áreas cerebrais, não se observou nenhuma alteração na expressão dos genes relacionados aos receptores serotoninérgicos pré-sinápticos. Os transcritos do transportador e da enzima de síntese de 5-HT, indicadores da integridade serotoninérgica pré-sináptica, também não se apresentaram alterados. Dessa maneira, concluímos que o efeito de altas doses do EAA decanoato de nandrolona em camundongos confirma os dados encontrados em literatura quanto à desinibição comportamental observada em usuários abusivos humanos. Nosso modelo também foi eficiente em mostrar pela primeira vez alterações moleculares induzidas por este EAA. A redução generalizada na expressão dos genes de receptores de 5-HT na amígdala e córtex pré-frontal sugere essas áreas, pós-sinápticas ao sistema serotoninérgico, como críticas nos efeitos induzidos pelo EAA. Nosso trabalho também sugere um papel importante para o receptor 5-HT1B na desinibição comportamental observada / Nandrolone decanoate is a highly abused anabolic-androgenic steroid (AAS) by individuals looking for gains in physical strength or body appearance. Supraphysiological doses of this testosterone synthetic derivative have been associated with many physical and psychiatric adverse effects, especially reported episodes of impulsiveness and overt aggressive behavior. Since the neural mechanisms underlying AAS-induced behavioral disinhibition are unknown, we investigated the integrity of serotonergic system transcription in several brain areas of mice under prolonged nandrolone administration. Male C57Bl/6J mice received 15 mg/kg of nandrolone decanoate subcutaneously once daily for 28 days, and different sets of animals were used to investigate motor and emotion-related behaviors or 5-HT-related gene expression by qRT-PCR. AAS-injected mice had increased body weight, were hyperactive and displayed more anxious-like behaviors in novel environments. They exhibited reduced immobility in the forced swim test, higher probability of being aggressive and elevated impulsivity to attack the opponent. AAS induced substantial reduction in the transcription of most postsynaptic 5-HT receptors investigated in the amygdala and prefrontal cortex. Interestingly, 5-HT1B mRNA was further reduced in the hippocampus and hypothalamus. At the midbrain level, there was no alteration in 5- HT receptors, transporter or synthetic enzyme gene transcription. In conclusion, high doses of AAS nandrolone in male mice recapitulate the behavioral disinhibition observed in abusers. Furthermore, they are associated with overall decrease in 5-HT receptor gene expression in the amygdala and prefrontal cortex, implicating these areas as critical sites for AASinduced effects and indicating a role for the 5-HT1B receptor in this behavioral disinhibition

O decanoato de nandrolona é um esteróide anabólico-androgênico (EAA), derivado da testosterona, utilizado de maneira abusiva por indivíduos procurando ganho de força física ou apenas efeitos estéticos. Doses suprafisiológicas desses compostos têm sido associadas a efeitos psiquiátricos adversos, especialmente episódios de impulsividade e aumento no comportamento agressivo. Considerando o desconhecimento dos mecanismos neurais envolvidos nessa desinibição comportamental, nós investigamos a integridade da transcrição de componentes do sistema serotoninérgico (intimamente relacionados à expressão de comportamentos emocionais) em diversas áreas cerebrais de camundongos sob a administração prolongada de nandrolona. Camundongos machos adultos da linhagem C57Bl/6J receberam uma injeção subcutânea diária de 15 mg/kg de decanoato de nandrolona durante 28 dias. Diferentes grupos de animais foram utilizados para a análise de comportamentos emocionais e para a quantificação da expressão de genes relacionados à serotonina (5-HT), utilizando a transcrição reversa do RNA associada à técnica de PCR em tempo-real. Os camundongos tratados apresentaram um aumento na massa corporal, hiperatividade motora e aumento de comportamentos relacionados à ansiedade em ambientes novos. A imobilidade avaliada no teste de nado forçado apresentou-se reduzida. Os animais que receberam a nandrolona se mostraram mais agressivos e impulsivos para iniciar o ataque aos camundongos oponentes, no modelo de residenteintruso. O EAA induziu uma redução significante na quantidade de transcritos da maioria dos receptores pós-sinápticos de 5-HT investigados na amígdala e no córtex pré-frontal. A expressão do gene do receptor 5-HT1B (reconhecidamente envolvido com as alterações comportamentais observadas) estava também reduzida no hipocampo e hipotálamo. No mesencéfalo, região onde se encontram os corpos neuronais dos neurônios serotoninérgicos que inervam o sistema límbico e demais áreas cerebrais, não se observou nenhuma alteração na expressão dos genes relacionados aos receptores serotoninérgicos pré-sinápticos. Os transcritos do transportador e da enzima de síntese de 5-HT, indicadores da integridade serotoninérgica pré-sináptica, também não se apresentaram alterados. Dessa maneira, concluímos que o efeito de altas doses do EAA decanoato de nandrolona em camundongos confirma os dados encontrados em literatura quanto à desinibição comportamental observada em usuários abusivos humanos. Nosso modelo também foi eficiente em mostrar pela primeira vez alterações moleculares induzidas por este EAA. A redução generalizada na expressão dos genes de receptores de 5-HT na amígdala e córtex pré-frontal sugere essas áreas, pós-sinápticas ao sistema serotoninérgico, como críticas nos efeitos induzidos pelo EAA. Nosso trabalho também sugere um papel importante para o receptor 5-HT1B na desinibição comportamental observada / Nandrolone decanoate is a highly abused anabolic-androgenic steroid (AAS) by individuals looking for gains in physical strength or body appearance. Supraphysiological doses of this testosterone synthetic derivative have been associated with many physical and psychiatric adverse effects, especially reported episodes of impulsiveness and overt aggressive behavior. Since the neural mechanisms underlying AAS-induced behavioral disinhibition are unknown, we investigated the integrity of serotonergic system transcription in several brain areas of mice under prolonged nandrolone administration. Male C57Bl/6J mice received 15 mg/kg of nandrolone decanoate subcutaneously once daily for 28 days, and different sets of animals were used to investigate motor and emotion-related behaviors or 5-HT-related gene expression by qRT-PCR. AAS-injected mice had increased body weight, were hyperactive and displayed more anxious-like behaviors in novel environments. They exhibited reduced immobility in the forced swim test, higher probability of being aggressive and elevated impulsivity to attack the opponent. AAS induced substantial reduction in the transcription of most postsynaptic 5-HT receptors investigated in the amygdala and prefrontal cortex. Interestingly, 5-HT1B mRNA was further reduced in the hippocampus and hypothalamus. At the midbrain level, there was no alteration in 5- HT receptors, transporter or synthetic enzyme gene transcription. In conclusion, high doses of AAS nandrolone in male mice recapitulate the behavioral disinhibition observed in abusers. Furthermore, they are associated with overall decrease in 5-HT receptor gene expression in the amygdala and prefrontal cortex, implicating these areas as critical sites for AASinduced effects and indicating a role for the 5-HT1B receptor in this behavioral disinhibition