A ovinocultura é um sistema de criação muito antigo em nosso país e ainda continua apresentando uma série de problemas que dificultam a produção econômica desses animais e necessitam de urgentes soluções. Visando minorar estes prejuízos esta pesquisa foi idealizada com o intuito de realizar um estudo minuncioso das principais enfermidades reprodutivas parasitárias e bacterianas. Todos os animais foram submetidos ao exame clínico geral e específico do sistema reprodutor e colheram-se amostras de soro, sêmen, abortamentos, lóquios, secreções, fezes e zaragatoa prepucial e vaginal dependendo da enfermidade a ser estudada. Não foi possível o isolamento nos fetos de nenhum agente etiológico. Conclui-se que a toxoplasmose é a enfermidade de maior importância nos rebanhos de estado de São Paulo e a de maior fator de risco em casos de abortamentos, a neosporose estaria relacionada principalmente com animais que apresentam repetição de cio, leptospirose foi observado em baixa titulação e a mais prevalente foi a Leptospira australis sorovar australis proveniente de animais silvestres, a campilobacteriose e a brucelose são as duas enfermidades da reprodução com menor ocorrência no estado. Foi isolado o primeiro caso de endometrite no Brasil por Histophilus somni. Foi isolado o primeiro caso de orquite por Actinobacillus seminis no estado de São Paulo. / Sheep industry is a traditional system in Brazil and presents a series of issues that complicate economical exploitation and urgently need solution. In order to reduce losses this research was idealized to carefully study the major bacterial and parasitary reproductive diseases. All animals were submitted to a general and specific reproductive system clinical examination. Blood, semen, abortions, lochia, vaginal discharges, feces, and preputial/vaginal swabs were collected according to the studied disease. It was not possible to isolate any etiological agent from aborted fetuses. The conclusion was that toxoplasmosis was the major disease on São Paulo herds and has the biggest risk factor in abortions, neosporosis would be related to animals that present heat repetition, leptospirosis was observed with low antibodies titles and the most prevalent was Leptospira australis sorovar australis arising from wild animals, campilobacteriosis and brucellosis are both the reproductive diseases with the lowest occurrence in the state. The first endometritis case caused by Histophilus somni. In Brazil was isolated. The first orchitis case caused by Actinobacillus seminis in São Paulo state was isolated.

Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2016-10-10T15:19:58Z No. of bitstreams: 1 Giulliano Aires Anderlini.pdf: 1405471 bytes, checksum: 7d4130063d4be965f6896a3b0207d35f (MD5) / Made available in DSpace on 2016-10-10T15:19:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Giulliano Aires Anderlini.pdf: 1405471 bytes, checksum: 7d4130063d4be965f6896a3b0207d35f (MD5) Previous issue date: 2009-02-10 / The objective of this paper was to determine the prevalence and to identify the risks concernig to Toxoplasma gondii, Neospora caninum and Chlamidophyla abortus goats infections in the State of Alagoas. The research took place on 24 farms of goat breeding from 10 municipalities around the three different Alagoas Mesoregions. A total of 454 goat sera sample were examined for anti-Toxoplasma gondii and anti-Neospora caninum antibodies studies through out indirect immunofluorescence antibody test (IFIAT). To detect anti-Chlamidophyla abortus antibodies 255 goat serum were tested by micro method of complement fixation. The farms were analyzed by questionnaires considering their production system, nutritional, reproductive and sanitary management in order to evaluate the risks of toxoplasmosis in goats. The prevalence of anti-Toxoplasma gondii antibodies was 39% with 95,8% of farms presenting seropositive animals. Significant association was observed to mesoregion (OR = 0,23; I.C. 95% = 0,09 – 0,57), age (OR = 0,36; I.C. 95% = 0,20 – 0,64), semi-intensive herd management (OR = 8,70; I.C. 95% = 1,87 – 40,43), cats accessing to water offered to animals (OR = 3,38; I.C. 95% = 1,89 – 6,02) and cats eating placental remnants (OR = 2,73; I.C. 95% = 1,38 – 5,40). The prevalence of anti- Neospora caninum antibodies was 5,3% with 62,5% of farms presenting seropositive animals with no significant association observed to variables searched as risk factors in this study. Concerning to anti-Chlamidophyla abortus antibodies were observed general prevalence of 1,17%. We conclude that goat herd in the State of Alagoas is exposed to infections by T. gondii, N. caninum and C. abortus with events in different State Mesoregions. It is necessary to intensify and go deep on the epidemiological studies in addition to implementing orientation programs for farmers on sanitary care and goats management in order to reduce the prevalence of infection by those pathogens. / Objetivou-se com este estudo determinar a prevalência e identificar os fatores de risco associados às infecções por Toxoplasma gondii, Neospora caninum e Chlamydophila abortus em caprinos do Estado de Alagoas. A pesquisa foi realizada em 10 municípios, sendo analisadas 24 propriedades de produção de caprinos com aptidão mista situadas nas três Mesorregiões do Estado de Alagoas. Foram coletadas amostras sanguíneas de 454 animais para pesquisa de anticorpos anti-Toxoplasma gondii e anti- Neospora caninum através da prova sorológica de Imunofluorescência Indireta. Para pesquisa de anticorpos anti-Chlamydophila abortus foram utilizadas amostras sanguíneas de 255 matrizes caprinas sendo utilizada a microtécnica da Reação da Fixação do Complemento. Para o estudo dos fatores de risco foram aplicados questionários com questões referentes ao sistema de produção e manejos nutricional, reprodutivo e sanitário. A prevalência geral de anticorpos anti-Toxoplasma gondii foi de 39% com 95,8% das propriedades apresentando animais positivos. Foi observadaassociação significativa para as variáveis: Mesorregião (OR = 0,23; I.C. 95% = 0,09 –0,57), idade (OR = 0,36; I.C. 95% = 0,20 – 0,64), sistema de criação semi-intensivo(OR = 8,70; I.C. 95% = 1,87 – 40,43), acesso dos gatos à água fornecida aos animais (OR = 3,38; I.C. 95% = 1,89 – 6,02) e gatos se alimentando de restos placentários (OR = 2,73; I.C. 95% = 1,38 – 5,40). A prevalência geral de anticorpos anti-Neospora caninum foi de 5,3% com 62,5% das propriedades apresentando animais positivos não sendo observada associação significativa para os fatores analisados. Com relação a anticorpos anti- Clamydophila abortus observou-se prevalência geral de 1,17%. Conclui-se que o rebanho caprino do Estado de Alagoas está exposto às infecções por T. gondii, N. caninum e C. abortus com focos da infecção nas diferentes Mesorregiões do Estado. É necessário intensificar e aprofundar os estudos epidemiológicos além de implementar programas de orientação aos produtores sobre medidas sanitárias e de manejo dos rebanhos caprinos objetivando reduzir a prevalência de infecção por estes agentes patogênicos.

Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2016-10-14T17:13:47Z No. of bitstreams: 1 Luciana Aguiar Figueredo.pdf: 484321 bytes, checksum: 451ef9f1a4cb4dc98bf3fce3bb539453 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-10-14T17:13:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Luciana Aguiar Figueredo.pdf: 484321 bytes, checksum: 451ef9f1a4cb4dc98bf3fce3bb539453 (MD5) Previous issue date: 2008-02-15 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Neosporosis is a disease caused by the coccidian parasite Neospora caninum that affects a great variety of domestic and wild animals. This disease has been associated with abortion in cattle in many parts of the word and today it is recognized a cause of significant losses to the worldwide livestock industry. Studies have been carried out to access the occurrence of antibodies to N. caninum in dogs from many Brazilian states. To date, however, there is no study reporting the occurrence of antibodies against N. caninum in dogs in the State of Pernambuco. In this context, the objective of this study was to access the occurrence of antibodies to N. caninum in two municipalities of Pernambuco. A total of 455 serum samples of dogs, being 287 from the municipality of Paulista (metropolitan region of Recife) and 168 from the municipality Amaraji(Atlantic Rainforest region), were tested by an immunofluorescence antibody reaction to detect antibodies to N. caninum. Out of the 455 samples tested, 118 (25.9%; IC 95%, 21.9–30.2) were positive. The seroprevalence rates found in Paulista and Amaraji were26.1% (IC 95%: 21.1–31.6) and 25.6% (IC 95%: 19.1 32.8), respectively. In conclusion, dogs from Amaraji and Paulista are exposed to N. caninum infection,constituting a potential risk factor for the occurrence of outbreaks of abortion in cattle and other ruminants in these municipalities. / A neosporose é uma doença causada pelo coccídio Neospora caninum que afeta uma grande variedade de animais silvestres e domésticos. Essa doença tem sido associada a aborto em bovinos em muitas partes do mundo e hoje é reconhecida como uma causa de perdas significativas para a indústria mundial de animais de produção. Estudos têm sido realizados para avaliar a prevalência de anticorpos anti-N. caninum em cães de muitos estados brasileiros. Até o momento, entretanto, não existe estudo relatando a ocorrência de anticorpos anti-N. caninum em cães no Estado de Pernambuco. Nesse contexto, objetivou-se com o presente estudo avaliar a ocorrência de anticorpos anti-N. caninum em dois municípios no Estado de Pernambuco. No total, 455 amostras de soro de cães, sendo 287 do município de Paulista (Região Metropolitana de Recife) e 168 do município de Amaraji (Zona da Mata), foram testadas pela reação deimunofluorescência indireta para detecção de anticorpos anti-N. caninum. Das 455 amostras testadas, 118 (25,9%; IC 95%, 21,9–30,2) foram positivas. As freqüências encontradas em Paulista e Amaraji foram 26,1% (IC 95%: 21,1–31,6) e 25,6% (IC 95%: 19,1–32,8), respectivamente. Conclui-se que os cães de Amaraji e Paulista encontram-se expostos à infecção por N. caninum, constituindo um potencial fator de risco para ocorrência de surtos de abortos em bovinos e outros ruminantes nesses municípios.

Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2016-10-21T15:37:04Z No. of bitstreams: 1 Ricardo Cesar de Souza Carneiro da Cunha.pdf: 419241 bytes, checksum: 2ff0fd964e17e18b1562b290bcad2530 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-10-21T15:37:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ricardo Cesar de Souza Carneiro da Cunha.pdf: 419241 bytes, checksum: 2ff0fd964e17e18b1562b290bcad2530 (MD5) Previous issue date: 2012-02-28 / The study and the knowledge about zoonosis in geographic area are necessary to implement measures of health education and surveillance. Zoonosis such as leptospirosis and toxoplasmosis the role of wild carnivores as reservoirs is important, because carnivores can spread zoonotic agents in environment. The objective in this research was to determine the occurrence of antibodies anti-Leptospira spp., anti-Toxoplasma gondii, and anti-Neospora caninum in domestic and wild carnivores from Conservation Units of Pernambuco State - Brazil. Between August 2010 to October 2011, traps to capture wild carnivores in five Conservation Units: ―72º Batalhão de Infantaria Motorizado in Petrolina, ―Estação Ecológica do Tapacurá in São Lourenço da Mata, ―Parque Estadual Dois Irmãos in Recife, ―Reserva Ecológica Mata do Curado in Recife, and ―Estação Ecológica de Caetés in Paulista. In addition, the wild carnivores from ―Centro de Triagem de Animais Silvestres from ―Instituto Brasileiro do Meio Ambiente e dos Recursos Naturais Renováveis and the zoos of Pernambuco were included in study. A total of 210 blood samples were collected from 46 wild carnivores, 18 crab-eating foxes (Cerdocyon thous), three oncillas (Leopardus tigrinus), three ocelots (Leopardus pardalis), three jaguars (Panthera onca), one jaguarundi (Puma yaguaroundi), 12 coatis (Nasua nasua), three raccoons (Procyon cancrivorus), two tayra (Eira barbara), one ferret (Galictis cuja) and 137 dogs and 27 cats from interior and surroundings Conservation Units. Antibodies anti-Leptospira spp., anti-T. gondii and anti-N. caninum were found in 17.4% (8/46), 52.2% (24/46) and 0% (0/46) of wild carnivores and 3.8% (2/53), 32.3% (53/164) and 14% (23/164) of domestic carnivores, respectively. The serovars most prevalents of Leptospira spp. were Butembo, Panama, Copenhageni, Icterohaemorrhagiae e Castellonis. This study represented the first serological survey in free-living wild carnivores in Pernambuco and reported for the first time the occurrence of antibodies anti-Leptospira spp. and anti-T. gondii in free-living wild carnivores and anti-N. caninum antibodies in cats of Pernambuco. / O estudo e o conhecimento das zoonoses numa área geográfica torna-se de suma importância para implementação de medidas de educação e vigilância em saúde. Zoonoses como a leptospirose e a toxoplasmose, a participação de carnívoros selvagens como reservatórios possui grande importância, pois estes animais podem disseminar agentes zoonóticos no meio ambiente. Objetivou-se nesta pesquisa determinar a ocorrência de anticorpos anti-Leptospira spp., anti-Toxoplasma gondii e anti-Neospora caninum em carnívoros selvagens e domésticos de Unidades de Conservação de Pernambuco. Para tanto, no período de agosto de 2010 a outubro de 2011 foram dispostas armadilhas para captura dos carnívoros em cinco Unidades de Conservação: 72º Batalhão de Infantaria Motorizado em Petrolina, Estação Ecológica do Tapacurá em São Lourenço da Mata, no Parque Estadual Dois Irmãos em Recife, na Reserva Ecológica Mata do Curado em Recife e na Estação Ecológica de Caetés em Paulista. Além disso, os carnívoros selvagens que foram encaminhados ao Centro de Triagem de Animais Silvestres do Instituto Brasileiro do Meio Ambiente e dos Recursos Naturais Renováveis e do acervo dos zoológicos de Pernambuco foram incluídos na pesquisa. No total, foram colhidas 210 amostras sanguíneas de 46 carnívoros selvagens, sendo: 18 cachorros-do-mato (Cerdocyon thous), três gatos-do-mato-pequeno (Leopardus tigrinus), três jaguatiricas (Leopardus pardalis), três onças-pintadas (Panthera onca), um gato-mourisco (Puma yaguaroundi), 12 quatis (Nasua nasua), três guaxinins (Procyon cancrivorus), dois papa-mel (Eira barbara), um furão-pequeno (Galictis cuja) e 137 cães e 27 gatos domésticos do interior e do entorno das Unidades de Conservação. Anticorpos anti-Leptospira spp., anti-T. gondii e anti-N. caninum foram encontrados respectivamente em 17,4% (8/46), 52,2% (24/46) e 0% (0/46) dos carnívoros selvagens e em 3,8% (2/53), 32,3% (53/164) e 14% (23/164) dos carnívoros domésticos. Os sorovares mais prováveis de Leptospira spp. foram Butembo, Panama, Copenhageni, Icterohaemorrhagiae e Castellonis. Este trabalho representou o primeiro inquérito sorológico em carnívoros selvagens de vida livre em Pernambuco e relatou pela primeira vez a ocorrência de anticorpos anti-Leptospira spp. e anti-T. gondii em carnívoros selvagens em vida livre e anticorpos anti-N. caninum em gatos de Pernambuco.

Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de Minas Gerais / Lectins are proteins that bind specifically to carbohydrates and have important role in modulation of the immune response. KM+ and Jacalin (JAC) are lectins from the seeds from jackfruit (Artocarpus integrifolia) and ScLL is a lectin from the Synadenium carinatum latex. Neospora caninum is an apicomplexan parasite that causes neuromuscular disease in dogs and reproductive disorders in cattle, with serious economic impact on the livestock industry. The immunestimulatory role of plant lectins has been investigated in several parasitic infections, but not in neosporosis. This study aimed to evaluate the adjuvant effect and the immunestimulatory potential of KM+, JAC and ScLL in immunization of mice against neosporosis. C57BL 6 mouse groups were subcutaneously immunized three times at 15-day intervals with Neospora lysate antigen (NLA) associated with lectins (NLA+KM, NLA+JAC and NLA+ScLL groups), NLA alone, lectins alone (KM, JAC and ScLL groups), and PBS group (infection control). Animals were challenged with Nc-1 isolate (2x107 tachyzoites) and evaluated for morbidity, mortality, specific antibody response, cytokine production by spleen cells, cerebral parasite burden and histopathological lesions. Serological assays demonstrated higher levels of IgG to N. caninum for NLA+KM and NLA+ScLL than NLA+JAC and NLA groups. NLA+KM group induced higher levels of IgG2a isotype whereas NLA+ScLL induced higher levels of IgG1 isotype. In all groups, IgG1 response was higher than IgG2a response before and after challenge, but the IgG2a/IgG1 ratio increased after challenge in NLA+KM, NLA+ScLL and KM groups. Cytokine production after in vitro antigenic stimulation showed that NLA+KM induced high levels of IFN-g and IL-10, presenting the highest IFN-g/IL-10 ratio, followed by NLA+ScLL group, indicating a pattern of immune response toward Th1 type. NLA+JAC induced low levels of these cytokines and the lowest IFN-g/IL-10 ratio in relation to other groups, indicating a profile of Th2 type immune response. After parasite challenge, NLA+KM mice showed the highest survival with low brain parasite burden and moderate tissue inflammation, whereas NLA+ScLL mice presented intermediate survival with low brain parasite burden and low scores of morbidity and inflammation. NLA+JAC group exhibited intermediate survival, but with the highest brain parasite burden and mild inflammation. In conclusion, KM+ and ScLL lectins showed suitable adjuvant effect by increasing NLA immunogenicity and immunostimulatory role by conferring partial protection of mice immunized and challenged with lethal dose of N. caninum, while the JAC lectin showed no adequate adjuvant effect in the immunization against neosporosis. / Lectinas são proteínas que se ligam especificamente a carboidratos e possuem importantes papéis na modulação da resposta imune. KM+ e Jacalina (JAC) são lectinas da semente da jaca (Artocarpus integrifolia) e ScLL é uma lectina do látex da planta Synadenium carinatum. Neospora caninum é um parasito do filo Apicomplexa que causa doença neuromuscular em cães e desordens reprodutivas em bovinos, causando sério impacto econômico na indústria agropecuária. O papel imunoestimulador de lectinas de plantas tem sido investigado em diversas infecções parasitárias, mas não na neosporose. Esse estudo teve como objetivo avaliar o efeito adjuvante e o potencial imunoestimulador de KM+, JAC e ScLL na imunização de camundongos contra a neosporose. Grupos de camundongos C57BL/6 foram imunizados subcutaneamente por três vezes, em intervalos de quinze dias, com o antígeno de lisado total de Neospora (NLA) associado com as lectinas (grupos NLA+KM, NLA+JAC, NLA+ScLL), NLA somente, lectinas somente (KM, JAC e ScLL), além do grupo PBS (controle da infecção). Os animais foram desafiados com isolado Nc-1 (2x107 taquizoítas) e avaliados quanto aos escores de morbidade, mortalidade, resposta imune humoral específica, produção de citocinas por células do baço, carga parasitária cerebral e lesões histopatológicas. Resultados sorológicos demonstraram maiores níveis de IgG anti N. caninum produzidos pelos animais dos grupos NLA+KM e NLA+ScLL que NLA+JAC e NLA somente. O grupo NLA+KM induziu maiores níveis do isotipo IgG2a, enquanto NLA+ScLL induziu maiores níveis do isotipo IgG1. Em todos os grupos, a resposta de IgG1 foi maior do que de IgG2a antes e após o desafio, porém a razão IgG2a/IgG1 aumentou após o desafio nos grupos NLA+KM, NLA+ScLL e KM. A produção de citocinas após o estímulo antigênico in vitro demonstrou que NLA+KM induziu altos níveis de IFN-g e IL-10, apresentando a maior razão IFN-g/IL-10, seguido pelo grupo NLA+ScLL, indicando um padrão de resposta imune direcionado ao perfil Th1. NLA+JAC induziu baixos níveis destas citocinas e menor razão IFN-g/IL-10 em relação aos demais grupos, indicando um padrão de resposta imune do tipo Th2. Após o desafio com o parasito, camundongos do grupo NLA+KM apresentaram a maior sobrevida com baixa carga parasitária cerebral e moderada inflamação tecidual, enquanto animais imunizados com NLA+ScLL apresentaram sobrevida intermediária com baixa carga parasitária cerebral e baixos escores de morbidade e inflamação. O grupo NLA+JAC exibiu sobrevida intermediária, mas com alta carga parasitária cerebral e suave inflamação. Em conclusão, as lectinas KM+ e ScLL mostraram ser adjuvantes satisfatórios por aumentar a imunogenicidade do NLA e apresentaram efeito imunoestimulador por conferir proteção parcial dos camundongos imunizados e desafiados com dose letal de N. caninum, enquanto a lectina Jacalina não produziu efeito adjuvante suficiente na imunização contra a neosporose. / Mestre em Imunologia e Parasitologia Aplicadas

Neosporosis is a parasite disease caused by Neospora caninum protozoan and characterized as a major cause of abortion in cattle. Eventually is possible birth of animals with neurological signs, stillbirths or birth of clinically normal calves, but chronically infected. Although there are many researches related to bovine neosporosis, there are still doubts about the cycle and the pathogenesis of N. caninum infection, so that is suitable for certain control and prophylaxis strategies to disease. Gerbils are considered highly sensitive of the parasite replication. Thus, this study aimed to verify the occurrence of infection with N. caninum by oral inoculation of tachyzoites in gerbils (M. unguiculatus). Seventeen animals were orally inoculated with 4x105 N. caninum tachyzoites. The detection frequency of total DNA samples of N. caninum showed that the protozoan infectivity occurs via this route of inoculation, noting that 81.8 % of the inoculated animal parasite DNA was detected. In relation to tissues, it can be observed that the DNA parasite was found in all organs evaluated (heart, lungs, kidneys, liver, spleen, brain), by variable frequency, demonstrating the wide distribution of this parasite in animals tissues. / Neosporose é uma enfermidade de origem parasitária, causada pelo protozoário Neospora caninum e caracteriza-se como uma das principais causas de aborto em bovinos. Eventualmente, é possível ocorrer o nascimento de animais com sinais neurológicos, natimortos, ou ainda, o nascimento de bezerros clinicamente normais, porém cronicamente infectados. Embora existam inúmeras pesquisas relacionadas à neosporose bovina, ainda existem imprecisões quanto ao ciclo e patogenia da infecção por N. caninum, para que possam ser determinadas estratégias adequadas ao controle e profilaxia da doença. Os gerbils (Meriones unguiculatus) são considerados altamente sensíveis a replicação do protozoário. Assim, este estudo teve como principal objetivo verificar a ocorrência de infecção pelo N. caninum através da inoculação oral de taquizoítos em gerbils. Foram inoculados 17 animais pela via oral, com 4x105 taquizoítos de N. caninum. A frequência de detecção total de DNA de N. caninum das amostras demonstrou que ocorre infectividade pelo protozoário através desta via de inoculação, observando que em 81,8% dos animais inoculados foi detectado DNA do parasita. Em relação aos tecidos, pode-se observar que o DNA do protozoário foi encontrado em todos os órgãos avaliados (coração, pulmões, rins, fígado, baço, cérebro), com frequências variáveis, demonstrando assim a ampla distribuição deste protozoário em diferentes tecidos dos animais.

Submitted by Simone Souza (simonecgsouza@hotmail.com) on 2017-10-18T13:47:39Z No. of bitstreams: 1 DISS_2014_Ricardo Vilas Boas.pdf: 6795713 bytes, checksum: 1ad10c8b43fdf390a1ec7efe5f9c145d (MD5) / Approved for entry into archive by Jordan (jordanbiblio@gmail.com) on 2017-11-07T15:53:07Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DISS_2014_Ricardo Vilas Boas.pdf: 6795713 bytes, checksum: 1ad10c8b43fdf390a1ec7efe5f9c145d (MD5) / Made available in DSpace on 2017-11-07T15:53:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DISS_2014_Ricardo Vilas Boas.pdf: 6795713 bytes, checksum: 1ad10c8b43fdf390a1ec7efe5f9c145d (MD5) Previous issue date: 2014-02-28 / A neosporose é uma enfermidade parasitária considerada uma das principais causas de abortamento em bovinos em todo o mundo. Objetivou-se pesquisar a prevalência de anticorpos anti-Neospora caninum em fêmeas bovinas e possíveis fatores de risco para a infecção desses animais. Para isso, foram analisados 621 amostras de soro sanguíneo procedentes de 63 propriedades com rebanho leiteiro de agricultura familiar no município de Ji-Paraná, principal bacia leiteria do estado de Rondônia, as quais foram submetidas a Reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI), sendo considerados bovinos positivos amostras com titulo 100 para N. caninum. Do total de amostras analisadas(66/621), encontrou-se uma prevalência de 10,61% (IC 95% 8,04-13,86%). Os títulos variaram de 100 a 1600, assim distribuídos: 22 (33,33%) amostras de soro apresentaram título de 100; 21 (31,82%) título de 200; 16 (24,24%) título de 400, três (4,55%) título de 800 e quatro (6,06%) amostras apresentaram título de 1600. A prevalência de anticorpos anti-N. caninum por propriedade foi de 60,31% (38/63), sendo que apenas as variáveis ocorrências de aborto e nascimento de bezerros fracos tiveram associação com a ocorrência de propriedades soropositivas para N. caninum. Conclui-se que as fêmeas bovinas leiteiras na região estão expostas à infecção por N. caninum e que a presença de determinados problemas reprodutivos, como aborto e nascimentos de bezerros fracos, estão associados à ocorrência de neosporose no rebanho da região. / The neosporosis is considered a parasitic disease leading cause of abortion in cattle worldwide. The aim of this study was to investigate the prevalence of antibodies anti- Neospora caninum of dairy cows and associate to possible risk factors infection. 621 serum samples taken from dairy cows on 63 familiar agriculture farms in the county of Ji-Paraná, in the main milk producing region of Rondônia, Brazil, were evaluated by means Immunofluorescence Assay (IFAT). Samples were considered positive with a titer 100. Among all the samples analyzed (66/621), the prevalence was 10.61% (IC 95% 8,04-13,86%). The titers of antibodies ranging between 100 and 1600, distributed as follows: 22 (33.33%) serum samples had titers of 100, 21 (31.82%) title 200; 16 (24.24%) title 400, three (4.55%) title 800 and of four (6.06%) samples had titers of 1600. The prevalence of anti-N. caninum in farms was 60.31% (38/63), It is concluded that the dairy cows in the area studied are exposed to infection by N. caninum and that the presence of reproductive problems, such as abortion, and weak calves born are associated with the occurrence of neosporosis in cattle in the county.

O herpesvírus bovino tipo 1, vírus da diarréia viral bovina e Neospora caninum estão frequentemente associados a casos de abortamento em bovinos de leite. A tese foi fracionada em três capítulos, sendo o primeiro referente às considerações gerais dos tópicos abordados nos demais capítulos. O segundo capítulo objetivou verificar os fatores de risco associados à soroprevalência do herpesvírus bovino tipo 1 (BoHV-1), vírus da diarréia viral bovina (BVDV) e de ambos agentes virais (BoHV-1 e BVDV) em vacas leiteiras mestiças não vacinadas do município de Uberlândia, Minas Gerais, por meio do teste de vírusneutralização. O terceiro capítulo objetivou verificar os fatores de risco associados à soroprevalência do Neospora caninum no município de Uberlândia, Minas Gerais em vacas leiteiras mestiças pela técnica de ELISA. No período de janeiro a julho de 2013 foram colhidas 264 amostras de sangue para determinações dos títulos de anticorpos contra o BoHV e BVDV e 740 amostras para o Neospora caninum. / ABSTRACT Bovine herpesvirus 1, bovine viral diarrhea virus and Neospora caninum are often associated with cases of abortion in dairy cattle. The thesis was fractionated into three chapters, the first one relating to the general considerations about the topics discussed in the following chapters. The second chapter aimed verify the risk factors associated with seroprevalence of bovine herpesvirus 1 (BoHV-1), virus bovine viral diarrhea (BVDV) and both viral agents (BoHV-1 and BVDV) in unvaccinated crossbred dairy cows from the county of Uberlândia, Minas Gerais, through virus neutralization test. The third chapter aimed to verify the risk factors associated with the seroprevalence of Neospora caninum from the county of Uberlândia, Minas Gerais, Brazil, in crossbred dairy cows using the ELISA technique. From January to July 2013, 264 blood samples were collected for determinations of antibody titers against BoHV and BVDV and 740 samples for Neospora caninum. / Tese (Doutorado)

Submitted by Mario BC (mario@bc.ufrpe.br) on 2017-04-25T12:16:44Z No. of bitstreams: 1 Carlos Andre Barbosa de Franca.pdf: 2030226 bytes, checksum: 965977096ae399d28e6c310614ac0961 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-25T12:16:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Carlos Andre Barbosa de Franca.pdf: 2030226 bytes, checksum: 965977096ae399d28e6c310614ac0961 (MD5) Previous issue date: 2016-05-16 / This study aimed to carry out a sero-epidemiological investigation associated with the infection by Neospora caninum in dairy cattle herds deriving from family-based farming in the microregion of Vale do Ipojuca, in the Brazilian State of Pernambuco. Blood serum samples were collected from 341 bovines derived from 25 farms in 16 municipalities of the microregion. The samples were processed by the Indirect Immunofluorescent Assay Technique (IFAT). An investigative questionnaire was applied for the analysis of the risk factors, with objective questions about the hygiene-sanitary and reproductive management. Subsequently, the data were analyzed by logistic regression, considering as a dependent variable the serological results. The prevalence of anti-Neospora caninum antibodies was 18.2% (62/341) in cattle herds, with 80% (20/25) of foci. No risk factors associated with the infection have been confirmed in this study. These results show that the infection by N. caninum is present in cattle herds of the region of Vale do Ipojuca, and can cause loss to family farmers. / Objetivou-se com este estudo realizar um inquérito soroepidemiológico associado à infecção por Neospora caninum em rebanhos bovinos leiteiros da agricultura familiar na microrregião do Vale do Ipojuca, Estado de Pernambuco. Foram coletadas amostras de soro sanguíneo de 341 bovinos, procedentes de 25 propriedades rurais, em 16 municípios da microrregião. As amostras obtidas foram processadas pela técnica de Reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI). Para a análise dos fatores de risco foi aplicado um questionário investigativo, com perguntas objetivas sobre o manejo higiênico-sanitário e reprodutivo. Posteriormente, os dados foram analisados por regressão logística, considerando como variável dependente o resultado sorológico. A prevalência de anticorpos anti-Neospora caninum foi 18,2% (62/341) no rebanho bovino, com 80% (20/25) de focos. Neste estudo não foi confirmado nenhum fator de risco associado à infecção. Esses resultados evidenciam que a infecção pelo N. caninum encontra-se presente nos bovinos da região do Vale do Ipojuca e pode ocasionar prejuízos aos produtores da agricultura familiar.

Made available in DSpace on 2014-08-20T14:31:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertacao_francine_sinnott.pdf: 966836 bytes, checksum: 31b75fbc3400564832438403aff0c6e0 (MD5) Previous issue date: 2014-02-25 / Neosporosis is a disease caused by the obligate intracellular parasite Neospora caninum, causing reproductive disorders, such abortions and sltillbirths in several animals, being considered a major cause of abortion in cattle worldwide. The serological standard diagnosis is indirect fluorescent-antibody test (IFAT), but due to morphological and antigenic similarities of N. caninum with other protozoa of the phylum Apicomplexa, such as Toxoplasma gondii and Sarcocystis spp., false positive results may occur. To improve the diagnosis of this disease and reduce cross-reactions with other coccidian, the use of specific recombinant proteins of N. caninum has been described. The Nc-p43 surface protein encoded by the gene NcSRS2 is specific of the parasite and is present in tachyzoites and bradyzoites of N. caninum. Indirect ELISA format assays have been developed for the diagnosis of neosporosis, however the blocking ELISA may present additional level of specificity. In this context, the objective of this study was develop and standardize a blocking ELISA (b-ELISA) for the diagnosis of bovine neosporosis. To this end, NcSRS2 gene, previously cloned into plasmid vector, was used to produce the recombinant protein (rNc-p43) in prokaryotic expression system Escherichia coli. The purified protein was used to produce a polyclonal antibody (pAb/rNc-p43) in rabbit and this was further purified and characterized by indirect ELISA. For the development of the b-ELISA were used a total of 152 cattle sera (71 negative and 81 positive) and 10 positive cattle sera for toxoplasmosis, all previously confirmed by IFI. As controls, a pool of all positive sera and a pool of all negative sera were used, in addition to a normal calf serum, confirmed by IFAT, used with negative reference sera. The percent inhibition for each sample was determined by comparing the optical density (OD) mean of test sera to the OD mean of negative reference sera. The cut-off value was determined as the percent inhibition of negative pool. The results suggest that the b-ELISA is a tool that can be used for diagnosis of bovine neosporosis, with a sensitivity of 98.7% and specificity of 88.7% when compared with the IFAT. Antibodies against T. gondii present in positive samples for toxoplasmosis were not able to recognize the rNc-p43. The b-ELISA showed that serum samples positive for N. caninum is able to prevent the binding of pAb/rNc-p43, enabling detect different class of antibodies in a single assay. This technique is / Neosporose é a doença causada pelo parasito intracelular obrigatório Neospora caninum, causando problemas reprodutivos, como abortos e mortalidade neonatal em diversos animais, sendo considerada uma das principais causas de abortos em bovinos em todo o mundo. O diagnóstico sorológico padrão é a imunofluorescência indireta (IFI), porém devido a semelhanças morfológicas e antigênicas de N. caninum com outros protozoários do filo Apicomplexa, como Toxoplasma gondii e Sarcocystis spp., pode ocorrer resultados falsos positivos. Para melhorar o diagnóstico desta parasitose e diminuir as reações cruzadas com outros coccídeos, à utilização de proteínas recombinantes específicas de N. caninum vem sendo descrita. A proteína de superfície Nc-p43 codificada pelo gene NcSRS2 é específica do parasito e está presente em taquizoítos e bradizoítos de N. caninum. Ensaios no formato ELISA indireto vêm sendo desenvolvidos para o diagnóstico da neosporose, no entanto os ELISAs de bloqueio podem apresentar nível adicional de especificidade. Neste contexto, o objetivo deste trabalho foi desenvolver e padronizar um ELISA no formato bloqueio (b-ELISA) para o diagnóstico da neosporose bovina. Para tal, o gene NcSRS2, previamente clonado em vetor plasmidial, foi utilizado para produzir a proteína recombinante (rNc-p43) em sistema de expressão procarioto Escherichia coli. A proteína purificada foi utilizada para produzir um anticorpo policlonal (pAb/rNc-p43) em coelho e este foi posteriormente purificado e caracterizado através de ELISA indireto. Para o desenvolvimento do b-ELISA foram utilizados um total de 152 soros bovinos (71 negativos e 81 positivos) e 10 soros bovinos positivos para toxoplasmose, todos previamente confirmados por IFI. Como controles, um pool de todos os soros positivos e um pool de todos os soros negativos foi utilizado, além de um soro normal de terneiro, confirmado através de IFI, utilizado como controle negativo referencial. O percentual de inibição de cada amostra foi determinado pela comparação da média da densidade óptica (DO) de cada soro teste com a média da DO do controle negativo referencial. O ponto de corte foi determinado pelo percentual de inibição do pool negativo. Os resultados obtidos sugerem que o b-ELISA é uma ferramenta que pode ser utilizada no diagnóstico da neosporose bovina, com sensibilidade de 98.7% e especificidade de 88.7%, quando comparado com a IFI. Os anticorpos contra T. gondii presentes nas amostras positivas para toxoplasmose não foram capazes de reconhecer a rNc-p43. O b-ELISA demonstrou que as amostras de soros positivas para N. caninum são capazes de impedir a ligação do pAb/rNc-p43, possibilitando a detecção de diferentes classes de anticorpos em um único ensaio. Esta técnica pode ser uma alternativa de triagem para a detecção de anticorpos contra N. caninum em populações de bovinos.