O vírus da imunodeficiência felina (FIV) é um membro da subfamília Lentivirinae da família Retroviridae. A infecção é caracterizada por imunodepressão com um declíneo progressivo dos linfócitos T CD4+, propiciando, desta maneira, o surgimento de infecções oportunistas. Já o vírus da leucemia viral felina (FeLV) pertence a subfamília Oncovirinae da família Retroviridae. Este vírus é um importante patógeno dos gatos domésticos que causa uma variedade de desordens neoplásicas e degenerativas e também apresenta distribuição mundial. O presente estudo compreendeu um levantamento da prevalência das infecções por FIV e FeLV no Município de Porto Alegre. Foram analisadas 65 amostras de gatos sadios e doentes. A detecção destas viroses foi realizada utilizando um “kit” comercial de ELISA para ambas as viroses e um protocolo de reação em cadeia da polimerase aninhada (Nested-PCR) para detecção do FIV. Os resultados demonstraram que 21,5% (14/65) dos gatos foram positivos para FIV combinado os resultados de ambos os testes, 10,8% (7/65) foram positivos para FeLV e 6,1% (4/65) foram positivos para ambos os vírus. Foram também realizados hemogramas de 48 animais, dos quais 8 apresentaram resultados positivos para FIV na Nested-PCR. Através do teste T de Student, verificou-se que não houve diferença significativa nos valores hematológicos destes animais. Conclui-se que a utilização do ELISA com a PCR dobrou a chance de detecção de gatos FIV positivos. Desta forma, a prevalência de FIV foi aproximadamente o dobro do que a de FeLV, ao contrário do que ocorre na maior parte de outros locais estudados. / Feline immunodeficiency virus (FIV) belongs to the Lentivirinae subfamily of the Retroviridae family. The infection is characterized by immunodepression and progressive decline in CD4+ T cells that may render the animal susceptible to opportunistic infections. Feline leukemia virus (FeLV) belongs to subfamily Oncovirinae of the Retroviridae family. The virus also affects domestic cats, being an important pathogen that causes a variety of neoplastic disorders and degenerative diseases. Both viruses have a worldwide distribution. The present study aims to determine the prevalence of infection with FIV and FeLV in Porto Alegre municipality. A total of 65 cats were tested, comprising healthy and sick cats. A commercial ELISA kit was used to detect anti-FIV antibodies and FeLV antigen. A nested polymerase chain reaction (Nested-PCR) was also used for FIV provirus detection. The results showed that 21.5% of the sampled cats were positive for FIV in the ELISA and Nested-PCR, 10.8% were positive for FeLV in the ELISA and 6.1% were positive for both viruses. Haemogram of 48 animals were performed but it was not found any significant association between hematologic values of FIV positive and negative animals. It was concluded that the use of ELISA and Nested-PCR increased the possibility to detect FIV positive cats. The prevalence of FIV infected cats was higher than the prevalence of FeLV positive cats, the opposite of what is normally found in studies performed in other regions.

O vírus da imunodeficiência felina (FIV) é um membro da subfamília Lentivirinae da família Retroviridae. A infecção é caracterizada por imunodepressão com um declíneo progressivo dos linfócitos T CD4+, propiciando, desta maneira, o surgimento de infecções oportunistas. Já o vírus da leucemia viral felina (FeLV) pertence a subfamília Oncovirinae da família Retroviridae. Este vírus é um importante patógeno dos gatos domésticos que causa uma variedade de desordens neoplásicas e degenerativas e também apresenta distribuição mundial. O presente estudo compreendeu um levantamento da prevalência das infecções por FIV e FeLV no Município de Porto Alegre. Foram analisadas 65 amostras de gatos sadios e doentes. A detecção destas viroses foi realizada utilizando um “kit” comercial de ELISA para ambas as viroses e um protocolo de reação em cadeia da polimerase aninhada (Nested-PCR) para detecção do FIV. Os resultados demonstraram que 21,5% (14/65) dos gatos foram positivos para FIV combinado os resultados de ambos os testes, 10,8% (7/65) foram positivos para FeLV e 6,1% (4/65) foram positivos para ambos os vírus. Foram também realizados hemogramas de 48 animais, dos quais 8 apresentaram resultados positivos para FIV na Nested-PCR. Através do teste T de Student, verificou-se que não houve diferença significativa nos valores hematológicos destes animais. Conclui-se que a utilização do ELISA com a PCR dobrou a chance de detecção de gatos FIV positivos. Desta forma, a prevalência de FIV foi aproximadamente o dobro do que a de FeLV, ao contrário do que ocorre na maior parte de outros locais estudados. / Feline immunodeficiency virus (FIV) belongs to the Lentivirinae subfamily of the Retroviridae family. The infection is characterized by immunodepression and progressive decline in CD4+ T cells that may render the animal susceptible to opportunistic infections. Feline leukemia virus (FeLV) belongs to subfamily Oncovirinae of the Retroviridae family. The virus also affects domestic cats, being an important pathogen that causes a variety of neoplastic disorders and degenerative diseases. Both viruses have a worldwide distribution. The present study aims to determine the prevalence of infection with FIV and FeLV in Porto Alegre municipality. A total of 65 cats were tested, comprising healthy and sick cats. A commercial ELISA kit was used to detect anti-FIV antibodies and FeLV antigen. A nested polymerase chain reaction (Nested-PCR) was also used for FIV provirus detection. The results showed that 21.5% of the sampled cats were positive for FIV in the ELISA and Nested-PCR, 10.8% were positive for FeLV in the ELISA and 6.1% were positive for both viruses. Haemogram of 48 animals were performed but it was not found any significant association between hematologic values of FIV positive and negative animals. It was concluded that the use of ELISA and Nested-PCR increased the possibility to detect FIV positive cats. The prevalence of FIV infected cats was higher than the prevalence of FeLV positive cats, the opposite of what is normally found in studies performed in other regions.

O vírus linfotrópico das células T humanas tipo 1 (HTLV-1), é responsável por patologias como a mielopatia associada ao HTLV-1 ou paraparesia espástica tropical (HAM/TSP) e a leucemia/linfoma das células T do adulto (ATL) dentre outras. As vias de replicação até hoje demonstradas, não suportam a hipótese de um estado virêmico. Neste estudo, a detecção de partículas virais plasmáticas foi executada, por PCR em Tempo Real e Nested PCR em 190 amostras de pacientes infectados pelo HTLV-1(assintomáticos ou com HAM/TSP), em acompanhamento, no Instituto de Infectologia Emílio Ribas. 12 indivíduos (8%) testados por PCR em tempo real (n=150) e 6 indivíduos (18%) testados por Nested PCR (n=33, dado que sete amostras foram excluídas da análise) apresentaram RNA do HTLV-1 detectável no plasma. Em conclusão, foi possível identificar RNA plasmático do HTLV-1, tanto em pessoas assintomáticas quanto com HAM/TSP. Esta detecção abre novas possibilidades de discussão sobre a replicação do HTLV-1 e das vias de transmissão, sugerindo maiores investigações para elucidar o assunto. / The human T-cell lymphotropic virus type1 (HTLV-1) is responsible for some pathologies such as HTLV-1-associated myelopathy/tropical spastic paraparesis (HAM/TSP) and Adult T-cell Leukemia/ Lymphoma (ATL) among others. Its ways of replication so far presented do not support the hypothesis of a viremic stage. In this study, the detection of the plasmatic viral load was performed by real time PCR and Nested PCR in 190 samples from HTLV-1 infected individuals (Either Asymptomatic or HAM/TSP cases) following up at Instituto de Infectologia Emílio Ribas. 12 individuals (8%) tested by Real time PCR (n= 150) and 6 individuals (18%) tested by Nested PCR (n= 33, given that 7 samples were excluded from the analysis) presented detectable HTLV-1 RNA in the plasma. In conclusion, it was possible to indentify HTLV-1 plasmatic RNA in asymptomatic carriers as well as in HAM/TSP cases. This detection opens new possibilities of discussion about HTLV-1 replication and transmission pathways, suggesting further investigation for clarifying this matter.

O vírus linfotrópico das células T humanas tipo 1 (HTLV-1), é responsável por patologias como a mielopatia associada ao HTLV-1 ou paraparesia espástica tropical (HAM/TSP) e a leucemia/linfoma das células T do adulto (ATL) dentre outras. As vias de replicação até hoje demonstradas, não suportam a hipótese de um estado virêmico. Neste estudo, a detecção de partículas virais plasmáticas foi executada, por PCR em Tempo Real e Nested PCR em 190 amostras de pacientes infectados pelo HTLV-1(assintomáticos ou com HAM/TSP), em acompanhamento, no Instituto de Infectologia Emílio Ribas. 12 indivíduos (8%) testados por PCR em tempo real (n=150) e 6 indivíduos (18%) testados por Nested PCR (n=33, dado que sete amostras foram excluídas da análise) apresentaram RNA do HTLV-1 detectável no plasma. Em conclusão, foi possível identificar RNA plasmático do HTLV-1, tanto em pessoas assintomáticas quanto com HAM/TSP. Esta detecção abre novas possibilidades de discussão sobre a replicação do HTLV-1 e das vias de transmissão, sugerindo maiores investigações para elucidar o assunto. / The human T-cell lymphotropic virus type1 (HTLV-1) is responsible for some pathologies such as HTLV-1-associated myelopathy/tropical spastic paraparesis (HAM/TSP) and Adult T-cell Leukemia/ Lymphoma (ATL) among others. Its ways of replication so far presented do not support the hypothesis of a viremic stage. In this study, the detection of the plasmatic viral load was performed by real time PCR and Nested PCR in 190 samples from HTLV-1 infected individuals (Either Asymptomatic or HAM/TSP cases) following up at Instituto de Infectologia Emílio Ribas. 12 individuals (8%) tested by Real time PCR (n= 150) and 6 individuals (18%) tested by Nested PCR (n= 33, given that 7 samples were excluded from the analysis) presented detectable HTLV-1 RNA in the plasma. In conclusion, it was possible to indentify HTLV-1 plasmatic RNA in asymptomatic carriers as well as in HAM/TSP cases. This detection opens new possibilities of discussion about HTLV-1 replication and transmission pathways, suggesting further investigation for clarifying this matter.

Cryptococcus neoformans (C. neoformans), um fungo que se encontra disseminado em várias partes do mundo, inclusive no Brasil, é o responsável pela criptococose infecção oportunista mais comum em pacientes com a síndrome da imunodeficiência adquirida (SIDA). O caráter sistêmico da criptococose pode levar esses pacientes a óbito. A finalidade de se obter um diagnóstico laboratorial rápido e acurado de C. neoformans, principalmente para o seguimento dos pacientes HIV nos levou a investigar \"seqüências iniciadoras\" (Si) A, B e C das regiões 18SrDNA, 5,8SrDNA e ITS do Cryptococcus spp. Pela Nested PCR com estas seqüências, sugerimos a melhor delas para o desenvolvimento de um diagnóstico molecular em relação aos métodos usuais. Para tal, foram avaliadas amostras de soro e líquor de 39 pacientes, que já haviam recebido tratamento clínico. Todos os casos foram selecionados em grupos, como segue:7 com criptococose (GIII), 14 HIV positivos (GIV), 18 HIV positivos associados com a criptococose (GV) em relação a 10 controles - indivíduos sadios (GI) e amostras de culturas referência (GII). Os resultados obtidos pela Nested PCR com as \"Sis\" A, B e C foram comparados àqueles obtidos pelos métodos de diagnóstico convencionais. As análises desse estudo mostraram que as \"Sis\" A, B e C detectam C. neoformans com especificidade variada, tanto no soro (SiA 91,66%, SiB-100%, SiC 75%), como no líquor (SiA 83,33%, SiB 100% e SiC 75%) mas não apresentaram falso positivo, quando esses resultados foram comparados aos obtidos das culturas heterólogas (GVI). A SiB, em líquor, apresentou sensibilidade, acurácia, valores preditivo positivo e negativo, e especificidade de 100% para a detecção de C. neoformans da mesma forma que no soro, porém neste o valor preditivo negativo foi 89%, acurácia 94% e a sensibilidade 88%. Em amostras de soro e líquor, os testes Tinta da China e Látex, mostraram resultados falso positivos para o GIV e falso negativos nos grupos GIII e GV. As análises comparativas entre as técnicas mostraram que a ordem de eficiência da sensibilidade para detecção de C. neoformans no soro foi SiB>SiA=Látex>SiC e no líquor foi SiB> SiA>tinta da China>Látex=SiC. No soro, a especificidade entre as técnicas foi SiB>SiA=Látex>SiC e no líquor foi SiB=tinta da China>Látex>SiA>SiC. De acordo com nossos dados, concluímos que, independente da doença associada (HIV) ou se o paciente for tratado, a SiB foi a melhor seqüência para a detecção de C. neoformans, tanto em amostras diretamente de soro, como de líquor para todos os grupos estudados. Tendo em vista os fatos, acreditamos que, a aplicação da técnica da Nested PCR com a \"SiB\", em amostras de líquor e soro, é um método viável e acurado para realizar o diagnóstico molecular do C. neoformans em pacientes HIV. O uso de amostras de soro, para o segmento dos pacientes com SIDA, durante o tratamento, pode ser a forma menos invasiva em relação ao líquor para a detecção do C. neoformans, com vantagens sobre os métodos utilizados / Cryptococcus neoformans (C. neoformans), a fungus that is widespread in many parts of the world, including Brazil, is responsible for cryptococcosis the most common opportunistic infection in patients with acquired immunodeficiency syndrome (AIDS). The systemic character of cryptococcosis may be fatal. In order to obtain a rapid and accurate laboratory diagnosis to follow - up of HIV-cryptococcosis patients led us to investigate the sensibility and especificity of three primers (A, B and C) of 18SrDNA, 5,8SrDNA and ITS regions of Cryptococcus spp. Using Nested PCR with those primers we suggest the best among them to be used as a method of molecular diagnosis in relation to the usual techniques. For this purpose, the serum and cerebrospinal fluid (CSF) of 39 patients, who had received medical treatment, were evaluated. All cases were separated in groups, as follows: 7 with cryptococcosis (group III), 14 HIV positive (group IV), 18 HIV positive associated with cryptococcosis (group V) were compared to, 10 healthy subjects (group I) controls, as well as to reference cultures (group II) samples. The results obtained by nested PCR with primers A and B and C were compared to those obtained by conventional diagnostic methods. The analyses of primers A, B and C detected C. neoformans both in serum (SiA 91,6%, SiB-100%, SiC 75%), and in CSF (SiA 83,3%, SiB 100% e SiC 75%). Besides, they were specific for the identification of C. neoformans and showed that there were no false positives when compared with heterologous cultures (group VI) samples. The primer B in CSF showed 100% sensitivity, 100% accuracy and 100% predictive values (positive and negative), and 100% specificity for the detection of C. neoformans, the same that occurs in serum, but in this case, with 88% in sensitivity, 89% predictive value negative and 94% accuracy. In serum and CSF samples the China Ink and the Latex tests showed false positive results for group IV and false negative for III and V groups. The comparative analysis among the techniques (Nested PCR, China Ink, Latex) indicated that the efficiency order of sensitivity for the detection of C. neoformans were PrB> PrA = Latex> PrC in serum and PrB > PrA > China Ink> Latex = PrC in CSF. For the serum and CSF specificities the same techniques were used with the following results: PrB>PrA=Latex>PrC and PrB=China Ink>Latex>PrA>PrC. According to our data we conclude that, whether the patients had been under treatment or not, the Nested PCR by PrB was the best way to detect C. neoformans both in serum and in CSF for all groups. The following up of AIDS patients, throughout the course of therapy was found to be feasible, accurate and less invasive to detect C. neoformans by using serum samples (directly)

Cryptococcus neoformans (C. neoformans), um fungo que se encontra disseminado em várias partes do mundo, inclusive no Brasil, é o responsável pela criptococose infecção oportunista mais comum em pacientes com a síndrome da imunodeficiência adquirida (SIDA). O caráter sistêmico da criptococose pode levar esses pacientes a óbito. A finalidade de se obter um diagnóstico laboratorial rápido e acurado de C. neoformans, principalmente para o seguimento dos pacientes HIV nos levou a investigar \"seqüências iniciadoras\" (Si) A, B e C das regiões 18SrDNA, 5,8SrDNA e ITS do Cryptococcus spp. Pela Nested PCR com estas seqüências, sugerimos a melhor delas para o desenvolvimento de um diagnóstico molecular em relação aos métodos usuais. Para tal, foram avaliadas amostras de soro e líquor de 39 pacientes, que já haviam recebido tratamento clínico. Todos os casos foram selecionados em grupos, como segue:7 com criptococose (GIII), 14 HIV positivos (GIV), 18 HIV positivos associados com a criptococose (GV) em relação a 10 controles - indivíduos sadios (GI) e amostras de culturas referência (GII). Os resultados obtidos pela Nested PCR com as \"Sis\" A, B e C foram comparados àqueles obtidos pelos métodos de diagnóstico convencionais. As análises desse estudo mostraram que as \"Sis\" A, B e C detectam C. neoformans com especificidade variada, tanto no soro (SiA 91,66%, SiB-100%, SiC 75%), como no líquor (SiA 83,33%, SiB 100% e SiC 75%) mas não apresentaram falso positivo, quando esses resultados foram comparados aos obtidos das culturas heterólogas (GVI). A SiB, em líquor, apresentou sensibilidade, acurácia, valores preditivo positivo e negativo, e especificidade de 100% para a detecção de C. neoformans da mesma forma que no soro, porém neste o valor preditivo negativo foi 89%, acurácia 94% e a sensibilidade 88%. Em amostras de soro e líquor, os testes Tinta da China e Látex, mostraram resultados falso positivos para o GIV e falso negativos nos grupos GIII e GV. As análises comparativas entre as técnicas mostraram que a ordem de eficiência da sensibilidade para detecção de C. neoformans no soro foi SiB>SiA=Látex>SiC e no líquor foi SiB> SiA>tinta da China>Látex=SiC. No soro, a especificidade entre as técnicas foi SiB>SiA=Látex>SiC e no líquor foi SiB=tinta da China>Látex>SiA>SiC. De acordo com nossos dados, concluímos que, independente da doença associada (HIV) ou se o paciente for tratado, a SiB foi a melhor seqüência para a detecção de C. neoformans, tanto em amostras diretamente de soro, como de líquor para todos os grupos estudados. Tendo em vista os fatos, acreditamos que, a aplicação da técnica da Nested PCR com a \"SiB\", em amostras de líquor e soro, é um método viável e acurado para realizar o diagnóstico molecular do C. neoformans em pacientes HIV. O uso de amostras de soro, para o segmento dos pacientes com SIDA, durante o tratamento, pode ser a forma menos invasiva em relação ao líquor para a detecção do C. neoformans, com vantagens sobre os métodos utilizados / Cryptococcus neoformans (C. neoformans), a fungus that is widespread in many parts of the world, including Brazil, is responsible for cryptococcosis the most common opportunistic infection in patients with acquired immunodeficiency syndrome (AIDS). The systemic character of cryptococcosis may be fatal. In order to obtain a rapid and accurate laboratory diagnosis to follow - up of HIV-cryptococcosis patients led us to investigate the sensibility and especificity of three primers (A, B and C) of 18SrDNA, 5,8SrDNA and ITS regions of Cryptococcus spp. Using Nested PCR with those primers we suggest the best among them to be used as a method of molecular diagnosis in relation to the usual techniques. For this purpose, the serum and cerebrospinal fluid (CSF) of 39 patients, who had received medical treatment, were evaluated. All cases were separated in groups, as follows: 7 with cryptococcosis (group III), 14 HIV positive (group IV), 18 HIV positive associated with cryptococcosis (group V) were compared to, 10 healthy subjects (group I) controls, as well as to reference cultures (group II) samples. The results obtained by nested PCR with primers A and B and C were compared to those obtained by conventional diagnostic methods. The analyses of primers A, B and C detected C. neoformans both in serum (SiA 91,6%, SiB-100%, SiC 75%), and in CSF (SiA 83,3%, SiB 100% e SiC 75%). Besides, they were specific for the identification of C. neoformans and showed that there were no false positives when compared with heterologous cultures (group VI) samples. The primer B in CSF showed 100% sensitivity, 100% accuracy and 100% predictive values (positive and negative), and 100% specificity for the detection of C. neoformans, the same that occurs in serum, but in this case, with 88% in sensitivity, 89% predictive value negative and 94% accuracy. In serum and CSF samples the China Ink and the Latex tests showed false positive results for group IV and false negative for III and V groups. The comparative analysis among the techniques (Nested PCR, China Ink, Latex) indicated that the efficiency order of sensitivity for the detection of C. neoformans were PrB> PrA = Latex> PrC in serum and PrB > PrA > China Ink> Latex = PrC in CSF. For the serum and CSF specificities the same techniques were used with the following results: PrB>PrA=Latex>PrC and PrB=China Ink>Latex>PrA>PrC. According to our data we conclude that, whether the patients had been under treatment or not, the Nested PCR by PrB was the best way to detect C. neoformans both in serum and in CSF for all groups. The following up of AIDS patients, throughout the course of therapy was found to be feasible, accurate and less invasive to detect C. neoformans by using serum samples (directly)

El moteado del níspero, causado por el hongo Fusicladium eriobotryae es la principal enfermedad que afecta al cultivo del níspero, produciendo pérdidas importantes en la cosecha en los años con condiciones climáticas adecuadas. Sin embargo, no existen estudios sobre la epidemiología y el control de esta enfermedad, por lo que éstos constituyen el principal objetivo de la presente Tesis. Para ello, se va ha caracterizar in vitro y en campo la influencia de las principales variables climáticas en el desarrollo de F. eriobotryae, desarrollándose ecuaciones matemáticas que modelicen esta relación. Por otro lado, se va a llevar a cabo un modelo epidemiológico para el moteado del níspero capaz de predecir, en función de las principales variables climáticas el riesgo de infección. Además, se realizará un estudio del control de la enfermedad que comprenderá, por un lado, la evaluación in vitro y en planta de la efectividad de las principales materias activas utilizadas para el control del moteado del níspero, y por otro la evaluación del grado de resistencia de una colección de aislados de F. eriobotryae a DMI y Metil-Tiofanato y la caracterización molecular de la misma. / González Domínguez, E. (2014). Biology, epidemiology and control of Fusicladium eriobotryae, causal agent of loquat scab [Tesis doctoral no publicada]. Universitat Politècnica de València. https://doi.org/10.4995/Thesis/10251/38715 / TESIS