Foram avaliados, com o auxílio de um aparelho dinâmico, bidimensional e transdutores eletrônicos multifreqüênciais (convexo de 4 a 7 MHz e linear de 7 a 12 MHz), os pâncreas de 33 cães da raça Poodle Toy, 17 fêmeas e 16 machos, com idade entre seis e 168 meses, peso corpóreo entre 1,85 a 6,15 quilogramas, sem processos patológicos aparentes. Estudaram-se as características anátomo sonográficas e suas correlações com as variáveis: sexo, idade e peso. A avaliação ultra-sonográfica do pâncreas permitiu identificar pelo menos uma região (lobo direito) e uma estrutura interna pancreática (veia pancreaticoduodenal), em todos os animais. O sexo, a idade e o peso não influenciaram na visibilização da glândula. Os valores métricos, referentes à espessura média e o desvio padrão das diferentes regiões e estruturas internas pancreáticas foram: lobo direito, tanto no plano longitudinal, como no transversal 0,72 ± 0,10 cm, lobo esquerdo 0,77 ± 0,11 cm, corpo 0,66 ± 0,09 cm, veia pancreaticoduodenal, em ambos planos, 0,18 ± 0,03 cm, artéria pancreaticoduodenal, no plano longitudinal 0,13 ± 0,01 cm, e no plano transversal 0,13 ± 0,02 cm, ducto pancreático, no plano longitudinal 0,08 ± 0,01 cm e no plano transversal 0,08 ± 0,02 cm. Observaram-se correlações positivas entre a espessura do lobo direito e a idade (p = 0,00), e entre essa espessura e o peso (p = 0,00). Correlações positivas foram observadas entre a espessura do lobo esquerdo e a idade (p = 0,04), e entre essa espessura o peso (p = 0,04). O estabelecimento dos padrões anátomo ultra-sonográficos permitiram verificar que a topologia e a arquitetura foram semelhantes em todos os animais. Os contornos foram classificados como pouco definidos ou definidos e não variaram com o sexo, o peso e a idade. A ecogenicidade pancreática, quando comparada ao baço, foi predominantemente hipoecogênica, independente de sexo, idade ou peso; a ecogenicidade em relação ao fígado, apresentou-se isoecogênica ou discretamente hiperecogênica; e em relação à gordura mesentérica foi hipoecogênica ou isoecogênica. A ecotextura mostrou-se homogênea a difusamente heterogênea. Observaram-se correlações positivas entre a ecogenicidade em relação ao fígado e a idade (p = 0,00) e o peso (p = 0,00), e entre a ecogenicidade em relação à gordura mesentérica, e a idade (p = 0,01) e ao peso (p = 0,02). Quanto à ecotextura pancreática, também foram observadas correlações positivas em relação à idade (p = 0,001) e ao peso (p = 0,002). / Pancreas of 33 healthy Toy Poodles, 16 male and 17 bitches, ranging from 6 to 168 months of age and weighing from 1,85 to 6,15 kg where evaluated with a dynamic bidimensional equipament and multifrequency ultrasound (curvilinear array 4-7 MHz and linear array 7-12 MHz) scanner. Ultrasonographic anatomy and correlation with gender, age and weight were studied. Ultrasonography allowed visualization of at least one region (right lobe) and one internal structure (pancreaticoduodenal vein) in all animals. Gender, age and weight had no influence on visualization. Measures of thickness where 0,72 ± 0,10 cm for the right lobe in longitudinal and transversal cut, 0,77 ± 0,11 cm for the left lobe and 0,66 ± 0,09 cm for the body. Diameter of the pancreaticoduodenal vein was 0,18 ± 0,03 cm in both cuts, diameter of the pancreaticoduodenal artery measured 0,13 ± 0,01 cm in the longitudinal cut and 0,13 ± 0,02 cm in the transversal; values obtained for the pancreatic duct where 0,08 ± 0,01 cm (longitudinal) and 08 ± 0,02 cm (transversal). Right lobe thickness was positively correlated to age (p = 0,00) and weight (p = 0,00). Left lobe thickness was positively correlated to age (p = 0,04) and weight (p = 0,04). Topology and architecture, similar in all animals, allowed recognition of a pattern. Outline was classified as poorly defined or defined and did not change with gender, weight and age. Echogenicity showed to be predominately hypoechoic compared to the spleen, iso or slightly hyperechoic when compared to liver and iso or hypoechoic when compared to mesenteric fat. Echotexture varied from homogeneous to diffusely heterogeneous. Pancreatic ecogenicity compared to the liver ecogenicity changed positively with age (p = 0,00) and weight (p = 0,00). Echogenicity compared to the mesenteric fat changed positively with age (p = 0,01) and weight (p = 0,02). Pancreatic echotexture showed a positive correlation with age (p = 0,001) and weight (p = 0,002).

Orientador: Dirlei Antonio Berto / Resumo: Objetivou-se com este estudo avaliar a influência dos nucleotídeos (inosinato e guanilato dissódico) sobre o desempenho, peso relativo e turnover do 13C no intestino delgado, baço, fígado e pâncreas de leitões desmamados com idade média de 21 dias. Foram avaliados os seguintes tratamentos: dieta controle sem suplementação de nucleotídeos (Nu); dietas contendo 0,2% de Nu; 0,4% de Nu e 0,6% de Nu. No primeiro experimento 84 leitões desmamados (6,04 ± 0,25 kg) foram distribuídos em um delineamento experimental em blocos ao acaso com quatro tratamentos (níveis de Nu), sete repetições e três animais por unidade experimental, para avaliação do desempenho. No segundo experimento foram utilizados 87 leitões desmamados (6,03 ± 0,23 kg) em delineamento experimental em blocos ao acaso, com os mesmos tratamentos, sendo abatidos três leitões no dia do desmame (dia zero) e três leitões por tratamento nos dias 3, 5, 8, 12, 23, 35 e 49 após o desmame, para avaliar o turnover do 13C na mucosa e na parede intestinal (duodeno e jejuno), no baço, fígado e pâncreas, e o peso relativo do intestino delgado e do baço, fígado e pâncreas. No primeiro experimento não foi verificado efeito dos tratamentos (P > 0,05) nas variáveis de desempenho dos leitões no período de 21 a 36 dias de idade. No período de 21 a 48 dias de idade dos leitões houve efeito quadrático (P < 0,01) dos níveis de Nu no consumo diário de ração e ganho diário de peso. No período experimental total (21 a 55 dias de idade dos leitões... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: This study was conducted to evaluate effects of dietary supplementation of nucleotide (disodium 5´guanylate and disodium 5´inosinate) on the growth performance, relative weight and carbon turnover 13C of the small intestine, spleen, liver and pancreas of weaned piglets of 21 days of age. The treatments were dietary supplementation with 0% (control); 0.2%; 0.4% or 0.6% nucleotide of diet. In the first trial eighty-four weaned piglets (6.04 ± 0.25 kg average initial BW) were allotted to four dietary treatments (Nu levels) with seven pens per treatment and three pigs per pen, in a randomized complete block design to evaluate the performance. In the second trial eighty-seven weaned piglets (6.03 ± 0.23 kg average initial BW) were used in a randomized complete block design, with the same treatments, and on the day of weaning (day zero) were slaughtered three piglets and days 3, 5, 8, 12, 23, 35 and 49 after weaning, three pigs per treatment were slaughtered, to evaluate the effect of nucleotide on the turnover 13C in the mucosa and intestinal wall (duodenum and jejunum), spleen, liver and pancreas and relative weight of the small intestine and spleen, liver and pancreas. During the first period (21 to 36 days of age), no differences were detected on the performance. During the second period (21 to 48 days of age), a quadratic effect (P < 0.01) of the levels of nucleotide was verified on average daily feed intake and average daily weight gain. During the whole experimental period ... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2015-12-17T13:47:02Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2867561 bytes, checksum: e94d57961f4a02535d956529297fe507 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-12-17T13:47:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2867561 bytes, checksum: e94d57961f4a02535d956529297fe507 (MD5) Previous issue date: 2012-09-17 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O Trypanosoma cruzi, um protozoário parasita intracelular, é o agente causador da doença de Chagas, que acomete vários órgãos, principalmente o coração. Nessa doença, modificações na biomecânica de cardiomiócitos e no metabolismo glicêmico de repouso e durante o exercício físico têm sido raramente relatadas. Assim, o presente estudo investigou os efeitos da infecção experimental com T. cruzi sobre a morfofisiologia cardíaca e pancreática em ratos Wistar. A relação entre função pancreática e a tolerância ao exercício nesses animais foi adicionalmente analisada. Vinte e oito ratos Wistar machos foram divididos em um grupo não infectado (n=14) e um grupo infectado (n=14). Após nove semanas da inoculação com formas tripomastigotas de T. cruzi, os animais foram submetidos a um protocolo incremental de corrida para avaliação do desempenho físico. Em seguida, os corações e pâncreas foram removidos para a análise histopatológica, estereológica e bioquímica. Cardiomiócitos foram isolados por dispersão enzimática para análise das propriedades biomecânicas. Os resultados demonstraram que a infecção com T. cruzi induziu alterações morfológicas no coração e pâncreas, manifestando-se como focos inflamatórios difusos, atrofia e morte celular, necrose e fibrose tecidual. Os animais infectados apresentaram aumento da oxidação de lipídeos e proteínas no coração e pâncreas, respectivamente. Esses animais demonstraram alteração na cinética de glicose em repouso e durante o exercício, redução da tolerância ao exercício e disfunção biomecânica em ambos os componentes de contração e relaxamento dos cardiomiócitos. Não houve alteração do número de células β nas ilhotas pancreáticas ou modificação na proporção de minerais no tecido cardíaco dos animais infectados. Assim, os resultados indicaram que a infecção com T. cruzi é capaz de induzir modificações patológicas na estrutura e função cardíaca e pancreática conduzindo a disfunções na biomecânica de cardiomiócitos e no metabolismo glicêmico, eventos potencialmente relacionados à reduzida tolerância ao exercício físico em ratos. / Trypanosoma cruzi, an intracellular protozoan parasite, is the causative agent of Chagas’ disease, which impair several organs, mainly the heart. In this disease, changes in cardiomyocytes biomechanics and glucose metabolism at rest and during exercise have been rarely reported. Thus, the present study investigated the effects of experimental T. cruzi infection on the cardiac and pancreatic morphophysiology in rats Wistar. The relationship between pancreatic function and exercise tolerance in these animals it was additionally analyzed. Twenty-eight male Wistar rats were divided into an uninfected (n=14) and an infected group (n=14). After nine weeks of inoculation with trypomastigote forms of T. cruzi, animals were subjected to an incremental running protocol to evaluate the physical performance. Then, hearts and pancreases were removed for histopathological, stereological and biochemical analysis. Cardiomyocytes were isolated by enzymatic dispersion for analysis of biomechanical properties. The results showed that T. cruzi infection induced morphological changes in the heart and pancreas, which were evidenced by diffuse inflammatory foci, atrophy and cell death, necrosis and tissue fibrosis. Infected animals presented increased oxidation of lipids and proteins in the heart and pancreas, respectively. These animals showed changes in glucose kinetics at rest and during exercise, reduced exercise tolerance and biomechanical dysfunction in both components of contraction and relaxation of cardiomyocytes. There was no change in the number of β cells in the pancreatic islets or modification in the proportion of minerals in the cardiac tissue from infected animals. Thus, the results indicated that T. cruzi infection is able to induce pathological changes in the cardiac and pancreatic structure and function, conducing to dysfunctions in cardiomyocytes biomechanics and glucose metabolism, events potentially related to the reduced exercise tolerance in rats.

O adenocarcinoma de ducto pancreático (PDAC) é a quarta causa de morte em decorrência de neoplasias nos países ocidentais. Atualmente, a cirurgia ressectiva é a única possibilidade de cura para a doença, porém, a recidiva tumoral acontece em menos de um ano após a intervenção cirúrgica, mesmo com a quimioterapia adjuvante. A terapia fotodinâmica (PDT) é uma alternativa promissora no tratamento do câncer. No entanto, pouco se sabe sobre o uso da PDT em tumores pancreáticos. Portanto, o objetivo deste trabalho foi avaliar a eficiência da PDT com o azul de metileno (MB) como fotossensibilizador (MB-PDT) em induzir a morte de linhagens de PDAC humanas (AsPC-1, Panc-1, MIAPaCa-2 e BxPC-3) e estudar a contribuição de vias de necrose regulada nos efeitos citotóxicos da terapia sobre estes modelos. Os resultados obtidos mostraram que a MB-PDT foi capaz de induzir a morte massiva das células de PDAC. Além disso, eles indicaram que há dois perfis de susceptibilidade entre as quatro linhagens estudadas quando submetidas a MBPDT com 4,5 J/cm2 de energia e 6min de irradiação. De acordo com os dados apresentados, a diferença nas sensibilidades das linhagens à terapia não está associada à diferenças na capacidade de incorporação do MB ou na localização sub-celular do fotossensibilizador nas diferentes células, uma vez que a localização é, predominantemente, lisossomal em todas elas. Adicionalmente, mostrou-se que as linhagens menos susceptíveis ao tratamento, MIAPaCa-2 e Panc-1, apresentam níveis significativamente menores de RIPK3 e MLKL, dois dos componentes do necrossomo, essenciais para a execução da necroptose. Além disso, foi visto que a MB-PDT induz um aumento de fosforilação de MLKL em AsPC-1, demonstrando a ativação da necroptose após a terapia nestas células, mas não em MIAPaCa-2 (menos responsiva à terapia com 4,5 J/cm2 deenergia e 6min de tempo de irradiação). Ainda, a inibição da via de sinalização necroptótica diminuiu significativamente as porcentagens de morte das células mais susceptíveis (BxPC-3 e AsPC-1), não alterando a resposta de Panc-1 e MIAPaCa-2, corroborando a ativação e importância da necroptose para a citotoxicidade da MB-PDT. Finalmente, neste trabalho foi mostrado que o aumento do tempo de irradiação, mantendo-se a quantidade total de energia aplicada no tratamento, melhora a eficiência da MB-PDT em induzir a morte das células que apresentam limitações para executar a necroptose, sugerindo que mais de uma via de morte esteja sendo ativada após a terapia e que o tempo de irradiação atuaria modulando esta ativação. Complementarmente, foi mostrado que os tempos maiores de irradiação aumentam o estresse oxidativo intracelular que é acompanhado por uma diminuição significativa do conteúdo intracelular de glutationa reduzida (GSH), indicando, preliminarmente, que a ferroptose pode estar sendo acionada após os protocolos mais longos de irradiação. Coletivamente, os resultados apresentados neste trabalho confirmam a eficiência da MB-PDT no tratamento de diferentes linhagens de PDAC, indicando que a necroptose está sendo ativada e contribuindo para a citotoxicidade da terapia sobre as células que não apresentam resistência à esta via de morte. Ainda, eles demonstram que o aumento do tempo de irradiação pode transpor a barreira de resistência de algumas linhagens à terapia, provavelmente por induzir a ativação de outras vias de necrose regulada, mostrando a importância da otimização do protocolo de tratamento no aumento da eficiência da MB-PDT sobre os tumores de pâncreas. Finalmente, os resultados confirmam a MB-PDT como alternativa eficaz no tratamento do PDAC, apresentando um amplo espectro de atuação sobre subtipos tumorais resistentes à vias clássicas de morte celular, uma característica importante no contexto de uma terapia anti-cancer. / Pancreatic ductal adenocarcinoma (PDAC) is the fourth leading cause of death due to neoplasms in western countries. Currently, resective surgery is the only therapetical approach to cure this disease, but tumor´s recurrence occurs less than one year after the surgery, even with adjuvant chemotherapy. Photodynamic therapy (PDT) is a promising alternative for the cancer treatment. However, the efficacy of PDT to treat pancreatic tumors as well as the mechanisms involved in the induction of tumorigenic cell death remain unclear. For this purpose, in this study, we set out to evaluate the efficacy of PDT using methylene blue (MB) as a photosensitizer (MB-PDT), in inducing death of human PDAC derived cell lines (AsPC-1, Panc-1, MIAPaCa-2 and BxPC-3) and to deeper investigate the contribution of necroptosis to the cytotoxic effects of the therapy. We observed that MB-PDT was able to induce massive death of PDAC cells. Moreover, our results indicated that upon MB-PDT (4.5 J/cm2 energy and 6min of irradiation time), there were two susceptibility profiles among the four cell lines studied. Data also showed that this differential profile of cell response was neither associated with the differences in the MB incorporation capacity nor with the subcellular location of the photosensitizer, since the localization was predominantly lysosomal in all of tested cell lines. In addition, less susceptible cells, MIAPaCa-2 and Panc-1, showed significantly lower levels of RIPK3 and MLKL, two of the necrosome components, essential for triggering necroptosis. Furthermore, while MB-PDT (4.5 J/cm2 and 6min of irradiation) has been able to increase MLKL´s phosphorylation levels, an essential step in necroptosis induction, in AsPC-1cells, less responsive MIAPaCa-2 cells presented no variations on the phosphorylation state of this pseudokinase. Moreover, pharmacological inhibition of the necroptotic signaling pathway significantly decreased cell death percentages of the most susceptible cells (BxPC-3 andAsPC-1), without altering the response of Panc-1 and MIAPaCa-2, corroborating that activation of necroptosis was strongly involved in the cytotoxicity of MB-PDT. Finally, this work showed that increasing the irradiation time improved the efficacy of MB-PDT in killing cells which display limitations to perform necroptosis, suggesting that the irradiation time would be modulating the degree of oxidative stress generated and this stimuli would in turn, be responsible for triggering other regulated cell death pathways in a RIKP3 and MLKL independent way. Indeed, this increase in oxidative stress was accompanied by a significant decrease in GSH, a global indicatior of less antioxidant cell capacity, preliminarily pointing at the induction of ferroptosis by longer irradiation protocols. In summary, we demonstrated that MB-PDT is able to induce cell death in different PDAC cell lines and that different regulated cell death mechanisms are being activated upon MB-PDT induction. Furthermore, it was demonstrated that increased irradiation time may overcome the resistance barrier of some cell lines, probably inducing the activation of other regulated cell death pathways, showing the importance of optimizing the irradiation protocol in order to maximize the efficacy of the therapy. Finally, our observations point MB-PDT as an alternative and effective therapy for pancreatic cancer treatment, displaying a broad-spectrum action on tumors displaying different resistance mechanisms to classic cell death pathways, a desired property for improving an anticancer therapy.

O projeto teve como objetivo avaliar o efeito do uso de enzimas exógenas sobre os grânulos de zimógenos no pâncreas. O projeto foi dividido em três experimentos, sendo o experimento I para avaliação do uso da protease via ração nas dosagens de 50, 100 e 150% das recomendações do fabricante. O experimento II, foi realizado avaliando-se o uso da enzima amilase nas dosagens de 50, 100 e 150% das recomendações do fabricante e o experimento III foi realizado avaliando-se as dosagens de amilase, amilase + fitase, protease e protease + fitase sobre os grânulos de zimógenos. Em cada experimento, foi utilizado delineamento inteiramente casualizado sendo um total de nove tratamentos com oito repetições. Aos 21 e 42 dias de idade, as aves foram sacrificadas por deslocamento cervical para coleta e processamento do pâncreas para análise histopatológica e posterior análise pelo programa Image Pro Plus&reg;. Este programa permitiu a mensurar a porcentagem dos grânulos de zimógenos nas imagens obtendo-se um índice matemático da presença dos grânulos de zimógenos no pâncreas, o qual pode ser avaliado estatisticamente e submetidos a regressão polinomial os experimentos I e II e ao teste de Tukey o experimento III. Uma redução significativa (P<0,05) com efeito quadrático na presença dos grânulos de zimógenos pode ser observada nos experimentos I e II. O experimento III apresentou diferença estatística (P<0,05) entre o uso de fitase 100% + Protease 100% quando comparado com o controle. / This research project was conducted in the poultryhouse of the Faculty of Veterinary Medicine USP - Department of Nutrition and Animal Production, Pirassununga Site. Thus, this present study aimed to evaluate the effect of exogenous enzymes on the zymogenes granules of pancreas. It was performed three experimental trials; the first experiment has evaluated the addition of 50, 100 and 150% of protease manufactory recommendation in the feed. The trial two was conducted to evaluate the addition of 50, 100 and 150% of amylase manufactory recommendation in feed, and the experiment three was conducted to evaluated the addition of amylase, amylase + phytase, protease and protease + phytase in the feed on the zymogens granules. Each experiment was designed totally randomized with a total of nine treatments with eight replicates each. The birds were killed by cervical dislocation at days 21 e 42 to collect the pancreas for histopathology analysis followed by the Image Pro Plus&reg; program analysis, this program allowed to transform the image into a mathematic number, which could be used in statistical analysis. At the experiments I and II, the statistical analysis were conducted by the polynomial regression method and the experiment three was evaluated by Tukey test. A significant reduction (P<0,05) with quadratic effect was observed on the zymogens granules at the experiments I and II. The experiment III show a significant difference between the treatment with phytase 100% + Protease 100% and the control group.

O adenocarcinoma de ducto pancreático (PDAC) é a quarta causa de morte em decorrência de neoplasias nos países ocidentais. Atualmente, a cirurgia ressectiva é a única possibilidade de cura para a doença, porém, a recidiva tumoral acontece em menos de um ano após a intervenção cirúrgica, mesmo com a quimioterapia adjuvante. A terapia fotodinâmica (PDT) é uma alternativa promissora no tratamento do câncer. No entanto, pouco se sabe sobre o uso da PDT em tumores pancreáticos. Portanto, o objetivo deste trabalho foi avaliar a eficiência da PDT com o azul de metileno (MB) como fotossensibilizador (MB-PDT) em induzir a morte de linhagens de PDAC humanas (AsPC-1, Panc-1, MIAPaCa-2 e BxPC-3) e estudar a contribuição de vias de necrose regulada nos efeitos citotóxicos da terapia sobre estes modelos. Os resultados obtidos mostraram que a MB-PDT foi capaz de induzir a morte massiva das células de PDAC. Além disso, eles indicaram que há dois perfis de susceptibilidade entre as quatro linhagens estudadas quando submetidas a MBPDT com 4,5 J/cm2 de energia e 6min de irradiação. De acordo com os dados apresentados, a diferença nas sensibilidades das linhagens à terapia não está associada à diferenças na capacidade de incorporação do MB ou na localização sub-celular do fotossensibilizador nas diferentes células, uma vez que a localização é, predominantemente, lisossomal em todas elas. Adicionalmente, mostrou-se que as linhagens menos susceptíveis ao tratamento, MIAPaCa-2 e Panc-1, apresentam níveis significativamente menores de RIPK3 e MLKL, dois dos componentes do necrossomo, essenciais para a execução da necroptose. Além disso, foi visto que a MB-PDT induz um aumento de fosforilação de MLKL em AsPC-1, demonstrando a ativação da necroptose após a terapia nestas células, mas não em MIAPaCa-2 (menos responsiva à terapia com 4,5 J/cm2 deenergia e 6min de tempo de irradiação). Ainda, a inibição da via de sinalização necroptótica diminuiu significativamente as porcentagens de morte das células mais susceptíveis (BxPC-3 e AsPC-1), não alterando a resposta de Panc-1 e MIAPaCa-2, corroborando a ativação e importância da necroptose para a citotoxicidade da MB-PDT. Finalmente, neste trabalho foi mostrado que o aumento do tempo de irradiação, mantendo-se a quantidade total de energia aplicada no tratamento, melhora a eficiência da MB-PDT em induzir a morte das células que apresentam limitações para executar a necroptose, sugerindo que mais de uma via de morte esteja sendo ativada após a terapia e que o tempo de irradiação atuaria modulando esta ativação. Complementarmente, foi mostrado que os tempos maiores de irradiação aumentam o estresse oxidativo intracelular que é acompanhado por uma diminuição significativa do conteúdo intracelular de glutationa reduzida (GSH), indicando, preliminarmente, que a ferroptose pode estar sendo acionada após os protocolos mais longos de irradiação. Coletivamente, os resultados apresentados neste trabalho confirmam a eficiência da MB-PDT no tratamento de diferentes linhagens de PDAC, indicando que a necroptose está sendo ativada e contribuindo para a citotoxicidade da terapia sobre as células que não apresentam resistência à esta via de morte. Ainda, eles demonstram que o aumento do tempo de irradiação pode transpor a barreira de resistência de algumas linhagens à terapia, provavelmente por induzir a ativação de outras vias de necrose regulada, mostrando a importância da otimização do protocolo de tratamento no aumento da eficiência da MB-PDT sobre os tumores de pâncreas. Finalmente, os resultados confirmam a MB-PDT como alternativa eficaz no tratamento do PDAC, apresentando um amplo espectro de atuação sobre subtipos tumorais resistentes à vias clássicas de morte celular, uma característica importante no contexto de uma terapia anti-cancer. / Pancreatic ductal adenocarcinoma (PDAC) is the fourth leading cause of death due to neoplasms in western countries. Currently, resective surgery is the only therapetical approach to cure this disease, but tumor´s recurrence occurs less than one year after the surgery, even with adjuvant chemotherapy. Photodynamic therapy (PDT) is a promising alternative for the cancer treatment. However, the efficacy of PDT to treat pancreatic tumors as well as the mechanisms involved in the induction of tumorigenic cell death remain unclear. For this purpose, in this study, we set out to evaluate the efficacy of PDT using methylene blue (MB) as a photosensitizer (MB-PDT), in inducing death of human PDAC derived cell lines (AsPC-1, Panc-1, MIAPaCa-2 and BxPC-3) and to deeper investigate the contribution of necroptosis to the cytotoxic effects of the therapy. We observed that MB-PDT was able to induce massive death of PDAC cells. Moreover, our results indicated that upon MB-PDT (4.5 J/cm2 energy and 6min of irradiation time), there were two susceptibility profiles among the four cell lines studied. Data also showed that this differential profile of cell response was neither associated with the differences in the MB incorporation capacity nor with the subcellular location of the photosensitizer, since the localization was predominantly lysosomal in all of tested cell lines. In addition, less susceptible cells, MIAPaCa-2 and Panc-1, showed significantly lower levels of RIPK3 and MLKL, two of the necrosome components, essential for triggering necroptosis. Furthermore, while MB-PDT (4.5 J/cm2 and 6min of irradiation) has been able to increase MLKL´s phosphorylation levels, an essential step in necroptosis induction, in AsPC-1cells, less responsive MIAPaCa-2 cells presented no variations on the phosphorylation state of this pseudokinase. Moreover, pharmacological inhibition of the necroptotic signaling pathway significantly decreased cell death percentages of the most susceptible cells (BxPC-3 andAsPC-1), without altering the response of Panc-1 and MIAPaCa-2, corroborating that activation of necroptosis was strongly involved in the cytotoxicity of MB-PDT. Finally, this work showed that increasing the irradiation time improved the efficacy of MB-PDT in killing cells which display limitations to perform necroptosis, suggesting that the irradiation time would be modulating the degree of oxidative stress generated and this stimuli would in turn, be responsible for triggering other regulated cell death pathways in a RIKP3 and MLKL independent way. Indeed, this increase in oxidative stress was accompanied by a significant decrease in GSH, a global indicatior of less antioxidant cell capacity, preliminarily pointing at the induction of ferroptosis by longer irradiation protocols. In summary, we demonstrated that MB-PDT is able to induce cell death in different PDAC cell lines and that different regulated cell death mechanisms are being activated upon MB-PDT induction. Furthermore, it was demonstrated that increased irradiation time may overcome the resistance barrier of some cell lines, probably inducing the activation of other regulated cell death pathways, showing the importance of optimizing the irradiation protocol in order to maximize the efficacy of the therapy. Finally, our observations point MB-PDT as an alternative and effective therapy for pancreatic cancer treatment, displaying a broad-spectrum action on tumors displaying different resistance mechanisms to classic cell death pathways, a desired property for improving an anticancer therapy.

Objetivos: Comparar quantitativamente por técnicas de ressonância magnética (RM), a fração de gordura pancreática em indivíduos sadios, obesos e diabéticos (tipos 1 e 2). Secundariamente, buscou-se identificar diferença das medidas do ADC (difusão) no parênquima pancreático. Materiais e Métodos: Estudo retrospectivo com avaliação por dois radiologistas de imagens de RM abdominal de 89 indivíduos (56 controles; 33 diabéticos). Utilizadas três sequências: T1-GRE em fase e fora de fase; difusão (mapa ADC). Calculados e comparados frações de gordura e valores médios do ADC pancreáticos nos grupos. Resultados: Observaram-se diferenças significativas da fração de gordura pancreática entre diabéticos tipo 2 (DM2) e sadios e diabéticos tipo 1 (DM1), com valores de p de 0,01 e 0,02 para homens e 0,02 e 0,01 para mulheres, com confiabilidade interobservador ótima (coeficiente de correlação intraclasse > 0,8). Em obesos não diabéticos, observaram-se frações de gordura pancreática semelhantes às dos diabéticos tipo 2. Observou-se também diferença significativa nos valores de ADC entre DM2 e sadios e DM1 (p: 0,02 e 0,03 no sexo masculino; p: 0,002 e 0,001 no sexo feminino), menores nos DM2. Discussão: Observaram-se frações de gordura pancreáticas significativamente maiores em DM2, comparativamente a indivíduos sadios e DM1, achado que fomenta a hipótese da infiltração gordurosa do órgão como um fator causal associado para a falência de células beta pancreáticas. / Objectives: To compare, through quantitative MRI techniques, the pancreatic fat fraction in healthy, obese and diabetic (type 1 and 2) individuals. Secondarily, weve tried to identify differences in ADC (diffusion) values in the pancreatic parenchyma. Materials and Methods: A retrospective study, with review, by two radiologists, of abdominal MR images of 89 subjects (56 controls; 33 diabetics). Three sequences have been used: T1-GRE in-phase and out-of-phase; diffusion (ADC map). Fat fractions and average values of the ADC in pancreatic parenchyma have been calculated and compared. Results: We observed significant differences between pancreatic fat fractions of diabetics type 2 (DM2) and healthy and diabetic type 1 (DM1) individuals, with p values of 0.01 and 0.02 for men and 0.02 and 0.01 for women, with good interobserver reliability (intraclass correlation coefficients > 0.8). Obese nondiabetic sujects showed high pancreatic fat fraction similar to DM2. There was also a significant difference in ADC values between DM2 and DM1 and healthy individuals (p: 0.02 and 0.03 in males; p: 0.002 and 0.001 in females), lower in DM2. Discussion: We observed significantly higher pancreatic fat fractions in DM2, when compared to healthy and DM1 individuals. This finding favors the hypothesis of fatty infiltration of the organ as an associated causal factor to the pancreatic beta cells failure.

Submitted by Daniella Santos (daniella.santos@ufma.br) on 2017-11-16T22:21:31Z No. of bitstreams: 1 JAIROPACHECO.pdf: 369663 bytes, checksum: 88040c6ca9dd34246e1a5b2567d1bc88 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-11-16T22:21:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 JAIROPACHECO.pdf: 369663 bytes, checksum: 88040c6ca9dd34246e1a5b2567d1bc88 (MD5) Previous issue date: 2012-09-10 / Objective: To determine the major complications in patients undergoing gastroduodenopancreatectomy for pancreatic cancer and periampullary region, possible determinant factors and associated mortality. Methods: Retrospective study including patients diagnosed with pancreatic cancer and periampullary region undergone GDP from January 1987 to December 2007. Epidemiological and clinical data, laboratory and disease-related data and the procedure were reviewed. Results: 105 patients were included. Males represented 52%. Signs and/or symptoms more frequent were pain and jaundice. Jaundice was observed in 78.89%. Most didn´t have diabetes, and the use of alcohol and smoke was less frequent. Most were submitted to classical resection with median operative time of 440 minutes. Duct-to-mucosa pancreatic reconstruction was carried out in 69 patients. Complications were observed in 54 patients (51.4%). The mortality rate was 7.6% (eight patients). Pancreatic fistula was observed in 21 cases (20%), with 9 cases (8.5%) grade A, 2 (1.9%) grade B, and 10 (9.5%) grade C. Other complications observed were biliary fistula (5.7%), operative wound infection (5.7%), intraabdominal abscess/collection (5.7%) and hemoperitoneum (2.8%). Clinical complications observed were pneumonia (3.8%) and urinary tract infection (1.9%). High CA 19-9 tumor marker and duct-to-mucosa pancreatic enteric reconstruction technique presented a statistically significant result. Conclusion: Pancreatic fistula remains the most important complication associated with higher mortality. The surgical technique used and CA 19-9 were prognostic factors. In this study, the pancreatic reconstruction technique using ductto-mucosa anastomosis type presented less failure. / Objetivo: Determinar as principais complicações em pacientes submetidos a gastroduodenopancreatectomia por câncer de pâncreas e região periampolar, possíveis fatores determinantes e mortalidade associada. Métodos: Estudo retrospectivo incluindo pacientes com diagnóstico de câncer de pâncreas e região periampolar submetidos a gastroduodenopancreatectomia no período de janeiro de 1987 a dezembro de 2007. Dados clínicos e epidemiológicos, laboratoriais e dados relacionados a doença e ao procedimento foram revistos. Resultados: Foram incluídos 105 pacientes. Sexo masculino correspondeu a 52%. Sinais e/ou sintomas mais freqüentes foram dor e icterícia. Icterícia foi observada em 78,89%. A maioria não apresentava diabetes, e o uso de álcool e fumo foi menos freqüente. A maioria foi submetida a ressecção clássica com mediana do tempo operatório de 440 minutos. A reconstrução pancreática ducto-mucosa foi realizada em 69 pacientes. Complicações foram observadas em 54 pacientes (51,4%). A mortalidade foi de 7,6% (oito pacientes). Fístula pancreática foi observada em 21 casos (20%), sendo 9 casos (8,5%) grau A, 2 (1,9%) grau B e 10 (9,5%) grau C. Outras complicações observadas foram fístula biliar (5,7%), infecção de ferida operatória (5,7%), coleção/abscesso intra-abdominal (5,7%) e hemoperitônio (2,8%). Complicações clínicas observadas foram pneumonia (3,8%) e infecção do trato urinário (1,9%). Marcador tumoral CA 19-9 elevado e a técnica de reconstrução pancreatoentérica ducto mucosa apresentaram resultado estatisticamente significativo. Conclusão: Fístula pancreática permanece a complicação mais importante, associada a maior mortalidade. A técnica cirúrgica empregada e CA 19-9 foram fator prognóstico. Nesse estudo, a técnica de reconstrução pancreática utilizando a anastomose tipoducto-mucosa apresentou menor falha.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Dieta materna hiperlipídica (HF) em roedores ocasiona o desenvolvimento de resistência à insulina e o diabetes mellitus tipo 2 na prole adulta. Camundongos fêmeas foram alimentadas com dieta SC (standard chow) ou HF (hiperlipídica) durante oito semanas anteriores ao acasalamento, durante o período gestacional e metade da lactação. Os filhotes machos foram avaliados ao nascimento (0 dia) e aos 10 dias de idade. Nas progenitoras, foram avaliados o ganho de massa corporal (MC), a pressão arterial (PA), a eficiência alimentar (EA) e o teste oral de tolerância à glicose (TOTG). Na prole, foram avaliadas a evolução da massa corporal (MC), a glicemia, a estrutura da ilhota do pâncreas e a massa de célula-beta. Nas progenitoras, a ganho de massa corporal (MC) e a eficiência alimentar (EA) do grupo HF apresentaram um aumento de 50% em relação ao grupo SC durante o período pré-gestacional e um aumento de 70% do ganho de MC e 250% na EA, durante a gestação (P<0,0001). A pressão arterial e os níveis de corticosterona foram maiores no grupo HF quando comparados ao grupo SC (P=0,001). Em relação à massa corporal das proles, não houve diferença ao nascimento, contudo aos 10 dias de idade o grupo HF apresentou um aumento neste parâmetro, assim como um aumento dos níveis de glicemia e aumento do diâmetro da ilhota em relação ao grupo SC (P<0,001). Ao nascimento, a razão da massa de célula-beta/massa do pâncreas (MCB/MP), foi menor no grupo HF quando comparado ao grupo SC (-54%, P<0,0001), no entanto essa diferença não foi observada aos 10 dias de idade. A MCB/MP foi maior no grupo HF aos 10 dias de idade em relação ao grupo SC (+146%, P<0,0001). Desta forma, sugere-se que a administração de dieta materna hiperlipídica durante o período pré-gestacional, durante a gestação e metade da lactação, culmina em alterações precoces no pâncreas da prole, incluindo um remodelamento e uma hipertrofia da célula-beta, a qual apresenta uma recuperação da massa de célula-beta ao final da organogênese, podendo desta forma afetar a sua função na vida adulta.

Orientador: José Alexandre Curiacos de Almeida Leme / Banca: Eliete Luciano / Banca: José Rodrigo Pauli / Resumo: O exercício físico é bem conhecido por seus inúmeros benefícios à saúde, no entanto, apesar de bem estudado, os seus efeitos sobre o organismo diabético tipo 1 e sua relação com estresse oxidativo ainda necessitam serem melhor investigados. Portanto, o presente estudo teve como objetivo investigar os efeitos do treinamento físico em biomarcadores de danos oxidativos aos lipídios de membrana no fígado e pâncreas e a proteção antioxidante (enzimas catalase e superóxido dismutase) em ratos diabéticos aloxânicos. Para isso, ratos linhagem Wistar foram distribuídos em 4 grupos: controle sedentário (CS), controle treinado (CT), diabético sedentário (DS) e diabético treinado (DT). O treinamento consistiu de uma sessão de natação de 1 hora por dia, durante 5 dias/semana, durante 8 semanas, com uma carga equivalente ao limiar anaeróbio de 5,8 % e da massa corporal para o grupo CT e 4,2% para o grupo DT. Foram analisadas as concentrações de glicose sanguínea, proteína C reativa, glicogênio hepático, as atividades das enzimas Catalase (Cat) e superóxido dismutase (SOD) no fígado e pâncreas e além disso foram analisados os biomarcadores de danos oxidativos aos lipídios de membrana (produtos que reagem ao ácido tiobarbitúrico - TBARs) no fígado. O treinamento físico reduziu sintomas diabéticos, amenizou a perda de massa corporal, e aumentou o conteúdo de glicogênio hepático, reduziu concentrações de proteína C reativa, no fígado a catalase não diferiu significativamente, a atividade da SOD foi baixa e os níveis de peroxidação foram altos. No pâncreas, o treinamento físico aumentou as concentrações de catalase em animais diabéticos, sem, contudo alterar a atividade da SOD, indicando melhorias na saúde dos ratos diabéticos. O treinamento físico contribuiu no controle do estresse oxidativo, amenizando prejuízos promovidos pela diabetes aloxanica. Palavras-chave: fígado, pâncreas, radicais... / Abstract: Exercise is well known for its numerous health benefits, however, although well studied, its effect on the diabetic body and its relationship with oxidative stress remains to be further investigated. Therefore, this study aimed to investigate the effects of exercise training in biomarkers of oxidative damage to membrane lipids in the liver and pancreas and antioxidant protection (superoxide dismutase and catalase enzymes) in diabetic rats aloxanics. For this, Wistar rats were distributed in 4 groups: sedentary control (SC), trained control (TC), sedentary diabetic (SD) and trained diabetic (TD). Training consisted of a swim session for 1 hour per day for 5 days / week for 8 weeks with a load equivalent to anaerobic threshold, and 5.8% of body weight for CT group and 4.2% the DT group. They were analyzed in blood glucose concentrations, cholesterol, triglycerides and activity of catalase (CAT) and superoxide dismutase (SOD) in the liver and pancreas and analyzed biomarkers of oxidative damage to membrane lipids (products react thiobarbituric acid - TBARS) in the liver. Physical training reduced diabetic symptoms alleviated loss of body mass, and increased the hepatic glycogen content, reduced C-reactive protein concentrations in the liver catalase did not differ significantly, the SOD activity was low and peroxidation levels were high. In the pancreas, physical training increased catalase levels in diabetic animals without, however, changing the activity of SOD and suggest improvements in the health of diabetic rats. Physical training has helped in controlling oxidative stress, mitigating losses promoted by alloxan diabetes / Mestre