Orientador: Patricia Pintor dos Reis / Resumo: Introdução: O carcinoma de pâncreas apresenta altas taxas de mortalidade, geralmente associadas ao diagnóstico tardio da doença. MicroRNAs (miRNAs) são importantes reguladores da expressão gênica e têm sido apontados como biomarcadores com valor diagnóstico, prognóstico no câncer. Objetivos: (1) identificar níveis de expressão de miRNAs em tumores de pacientes com câncer de pâncreas; (2) identificar, “in silico”, genes-alvo dos miRNAs e vias moleculares envolvendo miRNAs e genes-alvo correspondentes; (3) realizar estudos funcionais “in vitro” para demonstrar experimentalmente os efeitos da desregulação de miRNAs nos potenciais de migração e invasão celulares. Materiais e Métodos: Foram incluídas 19 amostras de adenocarcinoma ductal pancreático (PDAC) e 6 de adenocarcinoma de ampola de Vater (AMP), pareadas com tecido histologicamente normal. Além disso, 3 linhagens celulares de carcinoma pancreático (BxPC-3, Capan-2 e Panc-1) foram analisadas quanto ao seu perfil global de expressão de miRNAs. Em todas as amostras, o perfil de expressão de miRNAs foi determinado utilizando a plataforma GeneChip® 4.0 miRNAarrays. A validação “in silico” utilizou dados de transcriptoma do The CancerGenome Atlas (TCGA) (N=178 carcinomas pancreáticos e 4 tecidos histologicamente normais dos mesmos pacientes). A linhagem Panc-1 foi testada em ensaios de migração e invasão antes e depois da expressão dos miRNAs miR-148a-3p e miR-216b-5p por meio de moléculas miméticas. Análises computacionais utili... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Introduction: Pancreatic carcinoma is associated with high mortality rates, usually due to late disease diagnosis. MicroRNAs (miRNAs) are important gene expression regulators and have been identified as biomarkers with diagnostic, prognostic and therapeutic value in cancer. Objectives: (1) to identify miRNA expression levels in tumors of patients with pancreatic cancer; (2) to identify, in silico, miRNA target genes and molecular pathways involving miRNAs and corresponding target genes; (3) to perform in vitro functional studies to experimentally demonstrate the effects of miRNAdysregulation on cell migration and invasion. Materials and Methods: We included 19 pancreatic ductal adenocarcinoma (PDAC) and 6 adenocarcinoma of Vater ampulla (AMP) samples, paired with histologically normal tissues. In addition, 3 pancreatic carcinoma cell lines (BxPC-3, Capan-2 and Panc-1) were analyzed for their global miRNA expression profile. miRNA expression profiles were determined using the GeneChip® 4.0 miRNA arrays platform. In silico validation used transcriptome data from The Cancer Genome Atlas (TCGA) (N = 178 pancreatic carcinomas and 4 histologically normal tissues from the same patients). The Panc-1 cell line was used for migration and invasion assays before and after miR-148a-3p and miR-216b-5p expression by mimetic molecules. Computational analyzes used bioinformatics algorithms to identify target genes regulated by miRNAs (miRNA Data Integration Portal, mirDIP) and molecular pathw... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Made available in DSpace on 2013-08-07T19:04:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000408885-Texto+Completo-0.pdf: 1396208 bytes, checksum: dd98a3afb76ce78d614e56b181e411fd (MD5) Previous issue date: 2008 / A drenagem venosa sistêmica do enxerto pancreático tem sido associada à hiperinsulinemia, que, por sua vez, pode estar relacionada à dislipidemia, resistência insulínica (RI) e síndrome metabólica. É possível que a RI seja responsável, pelo menos em parte, pela hiperinsulinemia descrita em transplantados de pâncreas, atribuída à drenagem venosa sistêmica. Entretanto a prevalência de resistência à insulina associada a este procedimento bem como a capacidade da célula beta do enxerto em sobrepor-se a este efeito não são bem conhecidas. O objetivo desse estudo foi avaliar o metabolismo glicídico em transplantados de pâncreas com drenagem venosa sistêmica, através de insulinemia, glicemia e peptídeo C de jejum, hemoglobina glicosilada, HOMA e curvas de glicose e insulina séricas após sobrecarga de glicose. Foram analisados 30 transplantados de pâncreas insulino-independentes, 23 SPK, 2 PAK e 5 PTA. A glicemia, insulinemia e peptídeo C basais foram respectivamente: 85,7+-14,2 mg/dl, 17,8+-8,6 mU/ml, 3,4+-1,7 ng/ml. A hemoglobina glicosilada média foi de 6,0(+-0,7)%.Através do HOMA, identificou-se dois grupos de pacientes, insulino-resistentes (n=20) e insulino-sensíveis (n=10). Ambos apresentaram controle glicêmico adequado e semelhante, entretanto, apenas o grupo resistente apresentou hiperinsulinemia basal, além de resposta insulínica exacerbada à sobrecarga de glicose oral. Conclui-se que hiperinsulinemia não é achado universal em transplantados de pâncreas com drenagem venosa sistêmica. Tal achado parece estar relacionado com resistência à insulina, presente em grande parte desta população. Ainda, o controle glicêmico é adequado, evidenciando a capacidade da célula beta pancreática a sobrepor-se ao aumento da RI.

Orientador: Everardo Magalhaes Carneiro / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-17T06:09:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ferreira_Fabiano_M.pdf: 3302549 bytes, checksum: c3ba9da824c1686ac3b1a46a714aeaa2 (MD5) Previous issue date: 2002 / Resumo: Sabe-se que 50% da insulina secretada no periodo pós-prandial imediato depende da estimulação colinérgica e que no diabetes tipo 2, a fase rápida da secreção de insulina é a primeira a desaparecer. Ilhotas de ratos desnutridos também apresentam perfil de secreção de insulina sem o padrão bifásico. Até o momento, pouco se sabe a respeito da regulação autonômica, especialmente da modulação colinérgica da secreção de insulina, em ilhotas de Langerhans de ratos submetidos à restrição protéica. Assim, o presente projeto tem como objetivo estudar o efeito da restrição protéica sobre a modulação colinérgica da secreção de insulina em ilhotas isoladas de ratos. Os animais foram divididos em dois grupos experimentais, um grupo controle tratado com dieta normoprotéica (NP) (17%) e outro grupo desnutrido tratado com dieta hipoprotéica (LP) (6%). Após dois meses de desnutrição os animais foram sacrificados para o início dos experimentos. Nossos resultados indicaram que a dieta hipoprotéica induz uma diminuição na massa corpórea dos animais. A albuminemia está diminuída no grupo tratado com dieta hipoprotéica. O grupo LP mostrou níveis de ácidos graxos livres aumentados no plasma e redução dos níveis de proteínas totais em relação ao grupo NP, caracterizando o quadro de desnutrição. A insulinemia está reduzida nos animais LP e a glicemia mantida, sugerindo uma maior sensibilidade dos animais LP ao hormônio. A resposta secretória de insulina pelas ilhotas LP foi menor que a resposta secretória das ilhotas NP, quando estimuladas com o agonista muscarinico carbacol (CCh) e o forbol éster (PMA) em presença glicose (G). A curva dose resposta para o carbacol mostrou que as ilhotas de ratos submetidos a restrição protéica são menos sensíveis que as ilhotas dos animais controle (LP Ecso= 4.64:t0.98 e NP Ecso= 2.15:tO.70 (p<0.05)). Quando as ilhotas foram estimuladas com PMA (200"M) the increased in insulin secretion was higher in NP islets (3.04 fold for 8.3 mM ofG and 1.50 fold for 16.7 mM of G) (p<0.05). A monitoração do efluxo de cálcio mostrou um maior efluxo de cálcio nas ilhotas de animais LP estimuladas com CCh e PMA em presença de glicose. A técnica de imunohistoquímica, mostrou uma diminuição na quantidade da proteína quinase C alfa (pKCa) que foi confirmada utilizando-se a técnica de Western Blotting, onde encontramos PKCa e fosfolipase C betal (PLC_I) diminuídas em ilhotas isoladas de ratos LP (p<0.05). o RT -PCR mostrou uma diminuição na quantidade de mRNA para a enzima PKCa, o que nos sugeriu uma possível relação entre a restrição protéica a qual o animal foi submetido e alterações na transcrição de genes que codificam enzimas relacionadas com o processo secretório estimulado com glicose e potencializadas com CCh. Até o momento podemos concluir que, a alteração no conteúdo destas enzimas neste modelo experimental permite explicar, pelo menos em parte, a pobre resposta secretória encontrada frente a G, e a associação de CCh e PMA. Mais ainda, a restrição protéica efetuada no período pós desmame poderia estar induzindo modificações importantes em enzimas envolvidas com a transdução de sinais no sistema colinérgico da ilhota, repercutindo na fase adulta do animal. / Abstract: We studied the effects of carbamy1choline (CCh) and Phorbol 12-Myristate 13 Acetate (PMA), in insulin secretion of isolated Largerhans islets of male Wistar rats maintained with normal protein diet (17% of protein =NP) or low protein diet (6% of protein =LP). Islets isolated by collagenase digestion of pancreata, were incubated (lh) in Krebs medium with 8.3 mM or 16.7 mM of glucose (G), with or without CCh and PMA. The insulin content of media was available by radioimunoassay. Concentrations of CCh (O, l-I 000 j..lM) increased insulin secretion in both groups. Stimulation with CCh shifted the LP dose-response curve to the right (LP Ecso = 4.64:tO,98 and NP Ecso = 2.15 0,70) (p<0,05). When the islets were stimulated with PMA (20011M) the increased in insulin secretion was higher Ín NP islets (3.04 fold for 8.3 mM ofG and 1.50 fold for 16.7 mM of G) (p<0.05). Immunocitoquemical showed a decrease in PKCa content in LP islets and Western blot analysis revealed that PKCa and PLCf31 expression in LP isolated rat islets, after 2.5 h of incubation in 8.3 mM glucose media, were lower than NP (p<0.05) and RTPCR showed a decrease in rnRNA levels to PKCa (p<0.05). Low protein intake is associated with a lowered PKCa and PLCf31 expression in Langerhans islets. This alteration may be one factor involved in reduced insulin secretion by LP animals isolated islets, when stimulated with CCh and PMA in presence of glucose. / Mestrado / Fisiologia / Mestre em Biologia Funcional e Molecular

Orientador: Antonio Carlos Boschero / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-03T22:28:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ferreira_Fabiano_D.pdf: 6716031 bytes, checksum: 7a322dacafc8b91a5a991abd76e64422 (MD5) Previous issue date: 2004 / Resumo: A regulação da secreção de insulina em resposta à alimentação é determinada pela ação direta de nutrientes sobre as células B pancreáticas e pelos efeitos indiretos mediados pela ativação hormonal e neural. Sabe-se que 5()o,Io da insulina secretada no período pós-prandial imediato depende da estimulação colinérgica e que no diabetes tipo 2, a fase rápida da secreção de insulina é a primeira a desaparecer. llhotas de ratos desnutridos também apresentam perfil de secreção de insulina sem o padrão bifãsico. Sabe-se que a regulação da secreção de insulina estimulada por glicose pode ser modulada pelas vias que envolvem a ativação das proteínas quinas e C e A (pKC e PKA). Assim, o presente trabalho teve como objetivo estudar a participação das proteínas PKA e PKC na modulação do processo secretório de insulina em ilhotas isoladas de ratos submetidos à restrição protéica. Os animais foram divididos em dois grupos experimentais, um grupo controle tratado com dieta normoprotéica (NP) (17%) e outro grupo desnutrido tratado com dieta hipoprotéica (LP) (6%). Após dois meses de desnutrição os animais foram sacrificados para o início dos experimentos. llhotas isoladas do pâncreas destes animais foram utilizadas para protocolos de secreção estática e dinâmica de insulina, imunohistoquímica para as enzimas PKA e PKC e análise da expressão gênica para as proteínas em questão. Nossos resultados demonstraram que a dieta LP reduziu a massa corpórea e a albuminemia dos animais. O grupo de animais submetidos a dieta LP mostrou níveis !elevados de ácidos graxos livres no plasma e redução dos níveis de proteínas totais em relação ao grupo NP, caracterizando o quadro de desnutrição. A insulinemia no período alimentado apresentou-se reduzida nos animais LP e a glicemia mantida, sugerindo uma maior sensibilidade dos animais LP ao hormônio insulina.. A resposta secretória de insulina pelas ilhotas LP foi menor que a resposta das ilhotas NP, quando estimuladas com o forbol éster (PMA), um potente estimulador da PKC e Forskolin, um potente estimulador da PKA .Quando ilhotas foram estimuladas com PMA (400 11M) o aumento da secreção de insulina foi significativamente maior no grupo NP quando comparado ao grupo LP. A técnica de imunohistoquímica, revelou uma diminuição na quantidade das enzimas PKA e PKC, estes resultados foram confirmados utilizando-se a técnica de Westem Blotting, onde foram encontrados níveis reduzidos da PKC e PKA em aproximadamente 30% no grupo LP (p<0.05). RT -PCR mostrou uma diminuição também na quantidade de mRNA para ambas as enzimas em estudo, o que nos sugeriu uma possível relação entre a restrição protéica, a qual o animal foi submetido, e alterações na transcrição de genes que codificam enzimas relacionadas com o processo secretório. Até o momento podemos concluir que, a alteração no conteúdo destas enzimas neste modelo experimental permite explicar, pelo menos em parte, a diminuição na resposta secretória encontrada na estimulação com glicose, PMA e F orskolin. Mais ainda, a restrição protéica no período pós-desmame induziu modificações transcricionais para enzimas chave no processo secretório de insulina / Abstract: The effects of carbamylcholine (CCh) and phorbol12-myristate 13-acetate (PMA) on insulin secretion were studied in pancreatic islets from rats maintained on a normal (17%; NP) or low (6%; LP) protein diet. Isolated islets were incubated for 1 h in Krebs-bicarbonate solution containing 8.3 mmol/L glucose, with orwithoutPMA (400 J.UI1ol/L) and CCh. Increasing concentrations ofCCh (0.1-1 000 _mol/L) dose dependent1y increased the insulin secretion by islets from both groups of rats. However, the dose--response curve to CCh was shifted to the right in LP islets with an ECso of2.15 :t: 0.7 and 4.64:t: 0.1 _mol CCh/L in NP and LP islets, respectively (P < 0.05). The PMA-induced insulin secretion was three-fold higher in NP compared to LP islets. Western bloting revealed that the PKCa. and PLCJ31 contents ofLP islets were 300,10 lower than in NP islets (P < 0.05). In addition, PKCa. mRNA expression was reduced by 50% in islets from LP rats. In conclusion, a reduced expression ofPKCa. and PLCJ31 may be involved in the decreased insulin secretion by islets from LP rats following stimulation with CCh and PMA. We also investigated the efIects offorskolin, a stímulator ofadenylyl cyc1ase, on insulin secretíon by pancreatic islets from rats fed a normal (17%; NP) or low (6%; LP) protein diet for 8 weeks. Isolated islets were incubated for 1 h in Krebs-bicarbonate solution containing 8.3 mmol glucose/L, with or without 10 J.UI101 forskolin/L. The forskolin-induced insulin secretion was higher in NP than in LP islets (P < 0.05). Western Iblotting revealed that the amount of the alpha cata1ytic subunit of protein kinase A (pKAa.) was 35% lower in LP compared with NP islets (P < 0.05). Moreover, PKAa. MRNA expression was reduced by 300.10 in islets from LP rats (P < 0.05). Our results indicated a possible relationship between a low protein diet and a reduction ofPKAa. expression. These alterations in PKAa. may be partly responsible for the decreased insulin secretion by islets from rats fed a low protein diet / Doutorado / Fisiologia / Doutor em Biologia Funcional e Molecular

Orientador: Antonio Ari Gonçalves / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-26T01:08:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Brito_IsauraJaquelinedeLima_M.pdf: 989146 bytes, checksum: 48b07c7eba19250d2d3629159416bbd5 (MD5) Previous issue date: 2000 / Resumo: A participação do sistema nervoso parassimpático na modulação da secreção de insulina manifesta-se claramente durante a fase cefálica a qual se segue ao estímulo iniciado pelo estímulo sensorial provocado pelo alimento na boca. O objetivo deste trabalho foi estudar os efeitos, a curto e médio prazo, que a vagotomia subdiafragmática seletiva do ramo pancreático poderia provocar na permeabilidade da membrana plasmática ao Ca2+. Para avaliar os efeitos da vagotomia usamos os secretagogos: glicose e arginina e a potencialização pela carbamilcolina sobre os efeitos de glicose. Adicionalmente estudamos os efeitos sistêmicos que esta desnervação poderia provocar sobre a tolerância à glicose e à insulina. Antes de avaliar os efeitos da vagotomia (após 8 e 30 dias) verificamos que a resposta característica da fase cefálica, estava ausente, resultando em aumento da glicemia ¿Observação: O resumo, na íntegra poderá ser visualizado no texto completo da tese digital / Abstract: purpose of this work was to study the effects of pancreatic vagotomy on the systemic responses to glucose (GTT) , insulin (ITI), and on the B cell membrane permeability to Ca2+. The experiments were performed on vagotomized rats (pancreatic branch) after being checked for the absence of the cephalic phase of secretion, 8 or 30 days after surgery. In the absence of the parasympathetic control, the glycemia was not altered after 12 h fasting levels of (P>0,05). However, the handling of an overload of glucose (1g/kg of body weight) was affected by vagotomy ...Note: The complete abstract is available with the full electronic digital thesis or dissertations / Mestrado / Fisiologia / Mestre em Biologia Funcional e Molecular

Orientador: Antonio Carlos Boschero / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-14T01:04:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Carneiro_EverardoMagalhaes_M.pdf: 1981760 bytes, checksum: 0bb22ed92d8cdf0c398d609a5820a71f (MD5) Previous issue date: 1989 / Resumo: O presente trabalho visou estudar a permeabilidade ao K+, (Ca) independente em Ilhotas de Langerhans de rato. Para isso utilizamos o antibiótico aminoglicosídeo gentamicina, que possui propriedades de antagonista de Ca 'POT. + 2¿. Ilhotas isoladas de rato, pela colagenese, foram previamente marcadas com 'POT. B.6¿ RbCl (usado como substituto de K ¿+¿ e perfundidas em solução de Krebs-bicarbonato contendo diferentes concentrações de glicose, Ca 'POT. + 2¿, teofilina, neuraminidase e gentamicina / Mestrado / Fisiologia / Mestre em Ciências Biológicas

Orientadores: Marta H. Krieger-Azollini, Antonio Carlos Boschero / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-20T01:40:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Crepaldi_SilviaCristina_M.pdf: 5590505 bytes, checksum: b013d47cf01e064c820efc4b70d7cbef (MD5) Previous issue date: 1991 / Resumo: o presente trabalho teve como objetivo analisar o efeito da PRL no processo de maturacão da resposta secretória à glicose em células B pancreáticas. Enfase foi dada, ao estudo de possíveis alteracões nas permeabilidades dos íons potássio e cálcio e sobre a secrecão de insulina.Para isto, ilhotas de ratos Wistar recém-nascidos, foram cultivadas por 7 a 9 dias, em Meio Essencial Mínimo, acrescido de 11% de soro fetal bovino (v/v), 2% da mistura penicilina (100 U/ml)-estreptomicina (0,1 mg/ml), com concentracão final de glicose de 10 mM. As ilhotas foram mantidas a 37°C; pH 7,4; em uma atmosfera com 5% de C02. O meio de cultura foi renovado a cada 48 horas. Parte do material em cultura serviu como controle e parte recebeu tratamento diário com PRL (2 ~g/ml).Após o período de cultura, foram executados os seguintes protocolos:a) Perfusão de ilhotas para a análise da dinâmica do efluxo do aSRb+, do 45Ca2+ e da secrecão de insulina. b) Medidas do influxo de 45Ca2+. c) Extracão e dosagem do (conteúdo total de insulina por ilhota.Os resultados mostraram que: 1. A capacidade da glicose em alterar o efluxo do 8sRb+, foi maior em ilhotas tratadas com PRL do que em relacão às controle. 2. O efeito da tolbutamida, diminuindo e da diazoxida,aumentando o efluxo do 8SRb+, foi mais acentuado em ilhotas tratadas com PRL do que nas controle. 3. O aumento na incorporação de 45Ca que ocorreu frente ao aumento da concentração de glicose ou de K+, foi semelhante em ambos os grupos experimentais.4. Na ausência do Ca2+ extracelular, glicose não provocou redução no. efluxo do 45Ca2+, em ambos os grupos de ilhotas.5. O tratamento hormonal melhorou a resposta secretória das ilhotas, quando estimuladas por 16,7 mM de glicose. 6. O conteúdo total de insulina foi maior em ilhotas tratadas com PRL do que em ilhotas controle. Concluindo, os resultados indicam que em ilhotas neonatais de rato, o tratamento crônico com PRL, aumentou o conteúdo de insulina, potencializou a capacidade da glicose em reduzir o efluxo do K+ e em aumentar a secreção de insulina. Contudo, o tratamento com PRL não influiu de maneira significativa sobre o efeito da glicose a nível dos fluxos de Ca2+ / Abstract: The present study aimed to compare the effect of PRL on the maturation of the mechanisms of insulin secretion induced by glucose in neonatal pancreatic islets. Our attention were centralized mainly on possible alterations in Ca2+ and K+ fluxes and insulin release.For this purpose islets from neonatal Wistar rats were cultured for 7 to 9 days in Minimal Essential Medium,supplemented with 11% fetal calf serum (v/v), 2% penicilin (100 Ujml)-streptomicin (0,1 mg/ml) and glucose (final concentration 10 mM). The islets were maintened at 37°C; pH 7,4; in a 5% CO2 atmosphere. Culture medium was renewed every 48 hours. Part of the islets was used as control and part was treated daily with PRL (2 j.lg/ml). After culture, the following protocols were executed: a) Measurement of 86Rb+ and 45Ca2+ efflux rate and insulin release by perifused islets.b) Measurement of 45Ca influx in incubated islets. c) Measurement of total insulin content in the islets. The results showed that: 1. The capacity of glucose in changing the 8BRb+ effl~, was higher in PRL-treated islets than in control islets. 2. The effects of tolbutamide (lowering) and diazoxide (increasing) the B6Rb+ efflux, were higher in PRL-treated than in control islets. 3. PRL-treatment did not affect the ability of glucose and high K+ to increase the 45Ca uptake by incubated islets. 4. Glucose failed to affect the 45Ca2+ efflux from islets perifused in the apsence of Ca2+, either in PRL-treated or control islets. 5. Total insulin content was higher in PRL-treated than in contraI islets. 6. Finally, glucose induced higher increase in insulin secretion in PRL-treated islets than in contraI islets. The results indicate that in neonatal rat islets, the cronic treatment wi th PRL increased the insulin content of islets and significantly changed the ability of glucose in reducing the K+ efflux and to increasing the insulin secretion. However, PRL treatment did not influence the effect of glucose on Ca2+ fluxes / Mestrado / Fisiologia e Biofisica / Mestre em Ciências Biológicas

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Departamento de Biologia Celular, Programa de Pós-Graduação em Biologia Molecular, 2017. / Submitted by Albânia Cézar de Melo (albania@bce.unb.br) on 2017-06-21T15:23:09Z No. of bitstreams: 1 2017_FelipeSilvaRedorat.pdf: 3524406 bytes, checksum: e6d1df094ec3fee8264548d8fca4c1d4 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana (raquelviana@bce.unb.br) on 2017-07-31T16:42:10Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2017_FelipeSilvaRedorat.pdf: 3524406 bytes, checksum: e6d1df094ec3fee8264548d8fca4c1d4 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-07-31T16:42:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2017_FelipeSilvaRedorat.pdf: 3524406 bytes, checksum: e6d1df094ec3fee8264548d8fca4c1d4 (MD5) Previous issue date: 2017-07-31 / No Brasil o câncer de pâncreas representa 2% de todos os tipos de câncer, sendo responsável por 4% do total de mortes por essa doença. Seu tratamento raramente se restringe a remoção cirúrgica do tumor devido a elevada agressividade desta doença. Para a maioria dos casos a alternativa terapêutica é a cirurgia e/ou a quimioterapia associada ou não a radioterapia. O câncer de pâncreas é uma doença silenciosa com diagnóstico geralmente tardio, o que dificulta significativamente o tratamento devido a presença de metástases. Este fator também contribui decisivamente para um pobre prognóstico e uma sobrevida após o diagnóstico bastante reduzida, variando de seis a dezoito meses para um grande número de casos. As drogas de primeira escolha para serem utilizadas na quimioterapia desse tipo de câncer, Gencitabina e o 5-fluoracila (5-FU), atuam interferindo com a capacidade celular de sintetizar seu DNA, e assim inibindo a mitose e induzindo a morte celular por apoptose. Em razão dos mecanismos de ação destes fármacos causarem elevada toxicidade para todas as células, o tratamento do câncer de pâncreas está associado a diversos efeitos adversos severos como por exemplo a pancitopenia. Apesar dos avanços terapêuticos para o tratamento do câncer, o câncer de pâncreas persiste como o grande desafio, necessitando urgentemente de alternativas terapêuticas centrais e adjuvantes, que sejam eficientes na eliminação das células tumorais e tumorais com menos toxicidade para às células normais. Com base no acima exposto, nosso grupo passou a avaliar a proteína RAS mutada (KRAS), presente em mais de 40% dos casos de cânceres de pâncreas. Em seguida, nosso grupo sintetizou nove derivados de quinolonas com potencial predito computacionalmente de interferência indireta com a atividade das proteínas RAS. Desta forma, o objeto deste trabalho foi realizar a prova de conceito sobre as propriedades dos derivados das quinolonas atuarem reduzindo ou anulando a atividade anormal de KRAS, na expectativa que este potencial de inibição pudesse contribuir com a redução da taxa de proliferação celular, redução da migração celular e indução da apoptose nestas células tumorais. Embora os agentes aqui avaliados não tenham apresentado resultados promissores para o seu emprego direto, nossos resultados abrem um amplo horizonte para a síntese de outras séries de derivados das quinolonas que com elevado potencial de uso como drogas efetivas no tratamento do câncer de pâncreas. / In the Brazil, pancreatic cancer represents 2% of all cancer types. Accounting for 4% of all deaths from this disease. Its treatment is rarely restricted to the surgical removal of the tumor due to the high aggressiveness of this disease. For most cases the alternative therapy is surgery and/or chemotherapy associated or not with radiotherapy. Pancreatic cancer is a silent disease with a generally late diagnosis, which makes treatment difficult because of metastases presence. This factor also contributes decisively to a poor prognosis and a very short life after diagnosis, ranging from six to eighteen months for many the cases. The first choice drugs that are used in chemotherapy of this type of cancer, Gemcitabine and the 5-fluororacil (5-FU), act interfering with the cellular capacity to synthesize its DNA, thus inhibiting the mitosis and inducing the cell death by apoptosis. Because the mechanisms of action of these drugs cause high toxicity to all cells, the treatment of pancreatic cancer is associated with several severe adverse effects such as pancytopenia. Despite therapeutic advances in the treatment of cancer, pancreatic cancer persists as the major challenge, urgently requiring central therapeutic alternatives and adjuvants, which are efficient in eliminating tumor and tumor cells with less toxicity to normal cells. Based on the above, our group went on to evaluate the RAS protein (KRAS), changed in more than 40% of cases of pancreatic cancers. Next, our group synthesized nine quinolone derivatives with computational potential of indirectly interfering with the activity of RAS proteins. Thus, the objective of this work was to carry out the proof of concept on the properties of the quinolones derivatives to reduce or cancel the abnormal activity of KRAS, in the expectation that this potential inhibition could contribute to the reduction of the rate of cell proliferation, reduction of migration Cell and induction of apoptosis in these tumor cells. Although the agents evaluated here have not presented promising results for their direct use, our results open a wide horizon for the synthesis of other series of quinolone derivatives that with high potential of use as effective drugs in the treatment of pancreatic cancer.

Made available in DSpace on 2014-05-03T02:01:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000457548-Texto+Completo-0.pdf: 766828 bytes, checksum: 22a981e2f27dd96bd986b29478dc3ae1 (MD5) Previous issue date: 2013 / Metabolic Surgery for the treatment of type 2 Diabetes Mellitus (T2DM) in patients not morbidly obese (BMI <35 kg/m2) has been widely studied. Taking into account that approximately 12% of pancreas transplants are performed in T2DM patients, we tought to evaluate the impact of the metabolic surgery in the management of obese T2DM on the waiting lists for pancreas transplant. We performed a Roux-en-Y gastrointestinal bypass in 5 insulin-dependent T2DM patients, candidates for pancreas after kidney transplant, with BMI <35 kg/m2. Three patients became insulin independent by the end of the first year while the other two have reduced insulin requirements by 70%. Furthermore, all patients achieved improved control on lipids levels. We conclude the surgery is effective in controlling blood glucose and lipids metabolism in obese T2DM kidney transplant recipients. In this population, a pancreas transplant, along with its associated morbidity, may be avoided. / A cirurgia metabólica para tratamento do Diabetes Mellitus tipo 2 (DM2) em pacientes sem obesidade mórbida (IMC <35 kg/m2) vem sendo amplamente estudada. Levando em conta que aproximadamente 12% dos transplantes de pâncreas são realizados em pacientes com DM2, pensamos em avaliar o impacto da cirurgia metabólica no manejo de obesos, diabéticos tipo 2, em lista de espera para transplante de pâncreas. Realizamos o bypass gastrointestinal em Y de Roux em 5 pacientes diabéticos tipo 2, insuino-dependentes, candidatos ao transplante de pâncreas após rim, com IMC<35 kg/m2. Três pacientes tornaram-se insulino independentes ao final do primeiro ano, enquanto os outros dois reduziram sua necessidade insulinica em torno de 70%. Além disto, todos os pacientes obtiveram melhora no controle dos lipídios. Concluímos que a cirurgia é efetiva no controle da glicemia e no metabolismo dos lipídeos em pacientes obesos, transplantados renais, com DM2. Nesta população de pacientes, o transplante de pâncreas, com suas co-morbidades associadas, pode ser evitado.

Orientador: Benedito de Oliveira Filho / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-23T21:32:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Lima_JoseAugustoFerrazde_D.pdf: 9723365 bytes, checksum: 7a7e5a81f0a1e933d7b4f6a5dcb3d1bb (MD5) Previous issue date: 1998 / Resumo: O pacu Piraractus mesopotamicus Holmberg, 1887 (Characiformes, Characidae, Serrasalminae) é um peixe teleósteo de água doce, que no seu habitat natural alimenta-se preferencialmente de frutas. Tal qual o tambaqui Colossoma macropomum, o pacu encontra-se classificado, junto com a carpa Cyprinus carpio e o bagre americano Ictalurus punctatus, na superordem Ostariophysi. O tecido pancreático do pacu, semelhante ao tambaqui, exibe uma ilhota principal e pequenos corpos de Brockman. As ilhotas pancreáticas do pacu foram analisadas histologicamente e mostraram os quatro tipos de células endócrinas encontradas nas ilhotas de Langerhans dos mamíferos. Hormônios polipeptídeos, de um extrato de ilhotas principais de pacu, foram purificados com elevado rendimento em fase reversa de HPLC e suas estruturas primárias foram determinadas por degradação automática de Edmann. A estrutura primária da insulina do pacu, foi determinada como - Cadeia A: GIVEQCCHKPCSIFDLQNYCN; Cadeia B: NAGAPQHLCGSHLVDALYLVCGPSGFFYNPK. Em comparação com a insulina da carpa a insulina do pacu contém apenas duas substituições (Glu -+ Asp em AiS e Thr -+ Ser em B24). Comparada com a insulina humana, ambas, contém uma. extensão dipeptídica no N terminal e uma deleção do resíduo C terminal. A insulina do pacu mostrou ser idêntica à insulina do tambaqui o pâncreas do pacu, também sintetiza glucagon e GLP-1. A estrutura primária do glucagon do pacu foi estabelecida como: SEGTFSNDYSKYLETQRAQDFVQWLMNS. O glucagon do pacu difere do glucagon humano, em 7 substituições de aminoácidos e do glucagon do bagre americano por uma simples substituição na posição 17{Arg _ Gln). Um resíduo Gln, nesta posição, nunca foi observado, préviamente, para nenhum glucagon de teleosteos ou de mamíferos. A estrutura primária do peptídeo "glucagon-like" GLP) do pacu foi determinada como: HADGTYTSDVSA YLQDQAAKDFITWLKSGQPKQE. O GLP do pacu contém 34 resíduos de amino ácidos e difere do GLP do bagre americano apenas na posição 12 (Ser - Ala) e 33 (Pro - Gln). Em comum com outras espécies de teleósteos, o pacu expressa dois genes para somatostatina. A somatostatin-14, derivada da preprosomatostatina-I (PSS-I), é idêntica à somatostatina-14 dos mamíferos e do bagre americano, Um fragmento de prosomatostatina-22 mostrou 67% de identidade seqüencial com os resíduos (1-58) da preprossomatostatina (PSS-II) do bagre americano. A comparação da estrutura primária dos hormônios das ilhotas sugere que a seqüência de aminoácidos tem sido mais conservada entre os Ostariophysi que entre os outros grupos, já estudados, do taxon Euteleostei / Abstract: The fruit-eating teleost fish, the pacu Piaractus mesopotamicus Holmberg, 1887 (Characiformes, Characidae, Serrasalminae), similarly to tambaqui Colossoma macropomum, is classified with the carp and the catfish in the superorder Ostariophysi. The pacu and tambaqui have the pancreatic tissue exibiting both principal islet and small Brockmann bodies (Bbs). The pacu Bbs were analyzed histologically and shown to contain four kinds of endocrine cells (A. B, C, O) found in mammalian islets of Langerhans. Hormonal polypeptide in an extract of pacu Brockmann bodies were purified to homogeneity in high yeld by reversed phase HPLC and their primary structures determined by automated Edman degradation. The primary structure of pacu insulin was established as ¿ A chain: GIVEQCCHKPCSIFDLQNYCN, B-chain: NAGAPQHLCGSHLVDALYLVCGPSGFFYNPK. Pacu and tambaqui insulin are identical, they contain only two substitutions (Glu _ Asp at A15 and Thr _ Ser at B24) compared with carp insulin. The B-chains of both insulins contain a dipeptide extension in the N terminus and a deletion of the C terminal residue compared with human insulin. The pacu pancreas also synthesizes glucagon and GLP-1. The primary structure of pacu glucagon was established as: HSEGTFSNDYSKYLETQRAQDFVQWLMNS. Pacu glucagon differs from human glucagon by 7 amino acids and from catfish glucagon by a single substitution at position 17(Arg _ Gln). A Gln resídue at this position has not been observed previously in any teleostean or mammalían glucagon. The primary structure of pacu glucagon-Iíke peptide (GLP) was established as: ADGTYTSDVSAYLQDQAAKDFITWLKSGQPKQE. Pacu GLP contains 34 amino acid residues and differs from catfish GLP only at positions 12 (Ser - Ala) and 33 (pro - Gln). In common with other teleost species, the pacu expresses two somatostatin genes. Somatostatin-14, derived from preprosomatostatin-I (PSS-I), is identical to mammalían and catfish somatostatin-14. A fragment of prosomatostatin-22 showed 67% sequence identity with residues (1-58) of catfish preprosomatostatin-II (PSS-II). A comparison of the primary structures of the islets hormones suggest that amino acid sequences may have been more conserved within the Ostariophysi than in other groups of the taxon Euteleostei, that have been studied. Isolation of these hormones will now permit an investigation of their effect on lipide and carbohydrate metabolism in the serrasalminae fishes, pacu and tambaqui / Doutorado / Fisiologia / Doutor em Ciências Biológicas