En este trabajo se desarrolla un modelo matemático con parámetros difusos para el análisis de la dinámica poblacional de los parásitos gastrointestinales Ostertagia ostertagi bajo diferentes condiciones climáticas. Ostertagia es el nematode predominante en la región pampeana de Argentina. La parasitosis gastrointestinal es una de las enfermedades con mayor impacto económico, tornando ineficientes a los siste-mas de producción de carne. En la región de la Pampa Húmeda, se ha estimado que se pierden anualmente unos 22 millones de dólares por mortalidad de terneros y 170 millones de dólares en perdidas sub-clínicas. El modelo está compuesto por dos módulos. El primer módulo se compone de dos modelos para los estadios de vida libre y el otro módulo consiste de dos modelos para el estadio parasitario. Cada uno de los mo-delos está formulado en términos de ecuaciones en diferen-cias con paso diario. Los parámetros para todos los modelos son formas funcionales definidas por sistemas de inferencia difusa, los cuales incorporan información cualitativa y cuan-titativa de los procesos involucrados. Estos parámetros difu-sos tienen la suficiente flexibilidad para replicar las condicio-nes de campo, particularmente las climáticas, las cuales son fundamentales para el desarrollo de estrategias de control. El modelo completamente integrado es capaz de evaluar posibles escenarios a los que los sistemas de producción se pueden enfrentar, dando una rápida respuesta a cerca de la dinámica de la infección. También el modelo permite simular control parasitario. Se considera que el efecto de un trata-miento con antihelmínticos afecta directamente a la pobla-ción de parásitos adultos (Ad) y a la cantidad de huevos por gramos de materia fecal (HPG). Por ejemplo, se puede suponer que cuando el antihelmíntico es el más efectivo, el HPG y la población Ad, caen a casi 0. Por lo tanto es posible analizar el impacto de diferentes estrategias de control parasitario, simulado eficiencia y/o retardo de diferentes drogas sobre la dinámica de la infección en la pastura así como en la pobla-ción de parásitos dentro del hospedador. Así, es posible generar un conjunto de simulaciones en las que se modifica el momento del año en el que se produce el tratamiento anti-helmíntico y deducir cuál es el patrón de aplicación más eficiente. El modelo puede ser una buena herramienta para la generación de nuevas estrategias de desparasitación, las cuales pueden tener un impacto económico importante para las diferentes áreas de producción ganadera del país. / A mathematical model with fuzzy parameters was developed for the analysis of the population dynamics of gastrointestinal parasites Ostertagia ostertagi under different climatic con-ditions. Ostertagia spp., is the predominant nematode in the pampas region of Argentina. Gastrointestinal parasitism is one of the diseases that have the highest economic impact on the Argentinian beef production system, rendering it inefficient. In the region of the Humid Pampas, it has been estimated that some 22 million dollars are lost annually because of the death of calves and 170 million dollars are lost in sub-clinic costs. The model is composed by two modules. A first module is composed by two models for the free- living stage while the second module consists of two models for the parasitic stage. The models are formulated in terms of a system of difference equations with daily time-step. In all models, the parameters are functional forms defined through fuzzy rule based systems which incorporate both quantitative and qualitative informa-tion on the processes involved. These fuzzy parameters allow for the flexibility needed when attempting to replicate field conditions, particularly weather conditions, which are funda-mental for developing any control strategy. The completely integrated model is able to evaluate possible scenarios that a meat production system could face, giving a rapid answer about the infection dynamics. The scenarios may be as diver-se as wished. Also, the model allows simulating worm control. We can consider the effect of an anthelmintic suppression treatment on the population of adult parasits (Ad) and the series of egg per grams of dung (EPG) values by, for example, supposing that when the anthelmintic is most effective, the EPG and adult population Ad count falls almost to 0. Therefore it is possible analyze the impact of different strategies of parasite control, simulating the efficiency and/or delay of various drugs on the dynamics of pasture infection. For example, it is possible to generate a set of simulations by varying the time of year of the sequence of application of a medical treatment with drugs and to infer which pattern is more efficient. The model can be a tool for generating new strategies for deworming, which can have an important economic impact if talking into account the area of the cattle production region in our country.

Cabo Blanco es un Puerto de pescadores en la Región Piura, Provincia de Talara. Gran parte de la población depende de la pesca artesanal, uno de sus recursos pesqueros demersales de importancia comercial es Caulolatilus affinis “Peje Blanco” (PRODUCE, 2012). El presente estudio tuvo como objetivo identificar las especies de Platelmintos parásitos presentes en Caulolatilus affinis “peje blanco” procedentes del Puerto Cabo Blanco, Piura. Los peces se obtuvieron del Terminal pesquero del Centro Comercial Minka (Callao), el muestreo se realizó desde febrero hasta diciembre del 2015, y fueron disectados en el Laboratorio de Parasitología en Fauna Silvestre y Zoonosis, Facultad de Ciencias Biológicas - UNMSM. Se tomaron los datos morfométricos y sexado de los peces antes de proceder con el examen parasitológico. Los parásitos encontrados se colocaron en solución salina fisiológica (NaCl al 0.85%) para su limpieza. Posteriormente, se procesaron de acuerdo a técnicas convencionales hasta el montaje permanente. Se identificaron los trematodos Proctoeces magnorus e Hypocreadium balistes; y los monogeneos Encotyllabe pagrosomi, Choricotyle caulolatili, Jaliscia caballeroi y Jaliscia caulolatili. Se registran por primera vez para el Perú a los trematodos Proctoeces magnorus e Hypocreadium balistes; y a los monogeneos Encotyllabe pagrosomi y Jaliscia caulolatili. Caulolatilus affinis es un nuevo hospedero para H. balistes. Todas las especies estudiadas se encuentran, por primera vez, en Caulolatilus affinis en el norte del Perú. Palabras clave: Caulolatilus affinis, monogeneos, digeneos, Perú. / --- Cabo Blanco is a fishermen Caleta from Piura Region, Talara Province. Great part of the population depends on traditional fishing; Caulolatilus affinis "Peje Blanco" is a fishing resource demersal of commercial important (PRODUCE, 2012). This study aimed to identify the species of parasitic Platyhelminthes present in Caulolatilus affinis "Peje blanco" from the Puerto Cabo Blanco, Piura. The fish were obtained from Minka Mall, sampling was conducted from February to December 2015, and it was dissected at the Laboratory of Parasitology of Wildlife and Zoonoses, Faculty of Biological Sciences - San Marcos University. Morphometric data and sexing of fishes were taken before proceeding with parasitological examination. The parasites founded were placed in physiological saline (0.85% NaCl) for clean. Then, they were processed according to conventional techniques to permanent mounting. The trematodes Hypocreadium balistes and Proctoeces magnorus were identified; and monogeneos Encotyllabe pagrosomi, Choricotyle caulolatili, Jaliscia caballeroi and Jaliscia caulolatili. The trematodes Proctoeces magnorus and Hypocreadium balistes; and monogenean Encotyllabe pagrosomi and Jaliscia caulolatili are reported for the first time for Peru. Caulolatilus affinis is a new host for H. balistes. All species are studied for the first time in Caulolatilus affinis in northern Peru. Keywords: Caulolatilus affinis, monogenean, digenean, Peru. / Tesis

Los parásitos nematodos producen diversas proteínas solubles que unen lípidos (LBPs) estructuralmente distintas a las del huésped. Las funciones que cumplen se desconocen pero se hipotetiza que estarían involucradas en las funciones típicas internas de organismos multicelulares, como la utilización y transporte de compuestos no solubles, y en externas especializadas. Algunas de estas proteínas participarían en la modificación del entorno local en el tejido del huésped, posibilitando la modulación y la evasión de la respuesta inmune. Entre las LBPs producidas por nematodos se encuentran las FAR (Fatty Acid and Retinol binding proteins), una clase novedosa de proteínas que unen ácidos grasos y retinol. Tienen un tamaño aproximado de 19 kDa y sus estructuras que parecen ser ricas en alfa-hélices aún no han sido completamente dilucidadas. La comprensión del rol que cumple esta familia de proteínas tiene gran interés fisiopatológico ya que podrían desempeñar funciones relevantes en la biología de los parásitos que las producen y dadas las diferencias estructurales que presentarían con respecto a las LBPs de sus huéspedes, servirían como potenciales blancos para el diseño de nuevas terapias antiparasitarias. Con la finalidad de contribuir a la caracterización de las proteínas FAR y avanzar de este modo en la determinación de su función biológica, se llevaron a cabo estudios biofísicos y estructurales que permitieron resolver la estructura de Na-FAR-1 en solución por espectroscopía de resonancia magnética nuclear. Determinándose que consta de once hélices que conforman una cavidad interna de gran tamaño, donde podrían ubicarse ligandos hidrofóbicos. La estequiometría de unión de los complejos formados por Na-FAR-1 estaría dada por cuatro moléculas de ácido oleico por molécula de proteína, pero se limitaría a una única molécula de ligando en el caso del retinol y de los análogos fluorescentes de ácidos grasos empleados para su estudio. A su vez se evidenció que además de los ligandos esperados como ácidos grasos y retinol, esta proteína es capaz de unir fosfolípidos y diacilglicéridos. La amplia diversidad de unión a ligandos, sumada a su localización en el intestino del nematodo, indicarían que podría participar en el direccionamiento hacia los distintos tejidos de los lípidos ingeridos.

Tesis por compendio / [ES] La producción en acuicultura se ha visto menguada por aparición de enfermedades en los sistemas de cría de peces. En concreto, en la dorada (Sparus aurata), hay dos parásitos destacados: Enteromyxum leei (Myxozoa) y Enterospora nucleophila (Microsporidia). Hasta la fecha, para ninguno de los dos se ha establecido un cultivo in vitro, y solo para E. leei se ha conseguido establecer un modelo de mantenimiento de la infección in vivo. La presente tesis pretende incrementar el conocimiento sobre estos parásitos y sus relaciones con el hospedador, sentando las bases para generar soluciones que puedan ser aplicadas en la acuicultura. El objetivo con E. leei fue estudiar la inmunidad adquirida inducida en la dorada y la posibilidad de generar herramientas de diagnóstico y vacunas frente a esta enfermedad. Para ello, primero se demostró la resistencia del pez al parásito tras una segunda exposición, la cual duró hasta 16 meses. Además, la resistencia parece estar correlacionada con altos niveles de inmunoglobulina (Ig) M específica en sangre, y una alta expresión de Igs, incluso antes de la re-exposición al parásito. El siguiente paso fue afinar el protocolo de infección con E. leei. Los resultados mostraron que una semana es suficiente para transmitir la infección de E. leei por efluente, independientemente de la temperatura. Tras la demostración de la respuesta adaptativa eficaz frente a E. leei, y al disponer de un modelo de infección refinado, se realizó un ensayo de inmunización pasiva. Aquí, los resultados mostraron que los anticuerpos especi'ficos efectivamente consigue ralentizar la invasión del intestino por el parásito y disminuir los síntomas de la enfermedad. Paralelamente, el resultado del análisis del repertorio de las regiones variables de la IgM e IgT del intestino peces resistentes mostró la inducción de una respuesta policlonal en las ce'lulas B. En base a estos resultados, se realizó una búsqueda de antígenos de E. leei que pudieran ser utilizados como candidatos para la producción de vacunas (análisis proteómico) o herramientas de diagnóstico (análisis in silico). Para ello, se ensambló un transcriptoma de novo utilizando una muestra mixta de intestino de dorada y parásito. Los resultados dieron lugar a 7 y 12 candidatos en la búsqueda in silico y proteómica, respectivamente. En los estudios de E. nucleophila, debido a que fue descrita muy recientemente, el punto de partida fue más básico. Las muestras de este parásito solo se pueden obtener de brotes naturales en piscifactorias. Por ello, primero se realizó un estudio de caracterización de la patología de la infección a partir de peces infectados naturalmente. En etapas tempranas de la infección, el parásito se localiza principalmente en el intestino, pero meses después, la prevalencia en intestino baja e incrementa en los órganos hematopoyéticos y el esto'mago. Los signos clínicos de la infección consistieron en una reducción significativa del crecimiento, emaciación, y palidez de las paredes intestinales. A nivel celular, en los casos ma's graves se observó hipercelularidad en el epitelio intestinal y proliferación de ce'lulas rodlet, un elevado número de linfocitos en la base del epitelio e infiltración de granulocitos acidófilos en el epitelio intestinal. Finalmente se probaron varias formas de transmisión horizontal de E. nucleophila (cohabitación, efluente, intubación oral y anal) con para desarrollar un modelo de mantenimiento in vivo. Se consiguió la transmisión el parásito por todas las vías, pero con una disminución de prevalencia a lo largo del tiempo. Variables como la temperatura, la dosis, y el estado de los peces donantes parecen ser más determinantes que la ruta seleccionada para la transmisión. Entre las rutas probadas, la intubación anal parece ser la más prometedora, pero ninguna de ellas fue capaz de reproducir los signos clínicos observados en las infecciones naturales. / [CA] La producció en aqüicultura s'ha vist minvada per aparició de malalties en els sistemes de cria de peixos. En concret, en l'orada (Sparus aurata), hi ha dos paràsits destacats: Enteromyxum leei (Myxozoa) i Enterospora nucleophila (Microsporidia). Fins avui, per a cap dels dos s'ha establert un cultiu in vitro, i només per a E. leei s'ha aconseguit establir un model de manteniment de la infecció in vivo. La present tesi pretén incrementar el coneixement sobre aquests paràsits i les seves relacions amb l'hoste, establint les bases per a generar solucions que puguin ser aplicades en l'aqüicultura. L'objectiu amb E. leei va ser estudiar la immunitat adquirida induïda en l'orada i la possibilitat de generar eines de diagnòstic i vacunes enfront d'aquesta malaltia. Per a això, primer es va demostrar la resistència del peix al paràsit després d'una segona exposició, la qual va durar fins a 16 mesos. A més, la resistència sembla estar correlacionada amb alts nivells d'immunoglobulina (Ig) M específica en sang, i una alta expressió de Igs, fins i tot abans de la re-exposició al paràsit. El següent pas va ser afinar el protocol d'infecció amb E. leei. Els resultats van mostrar que una setmana és suficient per a transmetre la infecció de E. leei per efluent, independentment de la temperatura. Després de la demostració de la resposta adaptativa eficaç enfront de E. leei, i en disposar d'un model d'infecció refinat, es va realitzar un assaig d'immunització passiva. Aquí, els resultats van mostrar que els anticossos específics efectivament aconsegueix alentir la invasió de l'intestí pel paràsit i disminuir els símptomes de la malaltia. Paral·lelament, el resultat de l'anàlisi del repertori de les regions variables de la IgM i IgT de l'intestí peixos resistents va mostrar la inducció d'una resposta policlonal en les cèl·lules B. Sobre la base d'aquests resultats, es va realitzar una cerca d'antígens de E. leei que poguessin ser utilitzats com a candidats per a la producció de vacunes (anàlisis proteómico) o eines de diagnòstic (anàlisi in silico). Per a això, es va assemblar un transcriptoma de novo utilitzant una mostra mixta d'intestí d'orada i paràsit. Els resultats van donar lloc a 7 i 12 candidats en la cerca in silico i proteòmica, respectivament. En els estudis de E. nucleophila, pel fet que va ser descrita molt recentment, el punt de partida va ser més bàsic. Les mostres d'aquest paràsit només es poden obtenir de brots naturals en piscifactorias. Per això, primer es va realitzar un estudi de caracterització de la patologia de la infecció a partir de peixos infectats naturalment. En etapes primerenques de la infecció, el paràsit es localitza principalment en l'intestí, però mesos després, la prevalença en intestí baixa i incrementa en els òrgans hematopoètics i l'estómac. Els signes clínics de la infecció van consistir en una reducció significativa del creixement, emaciació, i pal·lidesa de les parets intestinals. A nivell cel·lular, en els casos més greus es va observar hipercelularidad en l'epiteli intestinal i proliferació de cèl·lules rodlet, un elevat nombre de limfòcits en la base de l'epiteli i infiltració de granulòcits acidòfils en l'epiteli intestinal. Finalment es van provar diverses formes de transmissió horitzontal de E. nucleophila (cohabitació, efluent, intubació oral i anal) amb per a desenvolupar un model de manteniment in vivo. Es va aconseguir la transmissió el paràsit per totes les vies, però amb una disminució de prevalença al llarg del temps. Variables com la temperatura, la dosi, i l'estat dels peixos donants semblen ser més determinants que la ruta seleccionada per a la transmissió. Entre les rutes provades, la intubació anal sembla ser la més prometedora, però cap d'elles va ser capaç de reproduir els signes clínics observats en les infeccions naturals. / [EN] Aquaculture production is hampered by the emergence of parasite diseases in fish farming systems. Among them, in Sparus aurata, there are two important enteric parasites described: Enteromyxum leei (Myxozoa) Enterospora nucleophila (Microsporidia). To date, no in vitro culture has been established for either parasite, and only for E. leei was it possible to establish a model for maintaining the infection in vivo. The aim of this thesis is to gain new knowledge about these parasites and their relationship with the host, also the basic foundations for generating solutions that can be applied in aquaculture. The general objective for E. leei was to study the acquired immunity induced in gilthead bream and the possibility of generating diagnostic tools and vaccines against this disease. To this end, resistance against the parasite was assessed with a second exposure against the parasite, which showed a resistance for at least 16 months. Besides resistance seemed to be correlated with high levels of specific immunoglobulin (Ig) M in blood, and a high expression of Igs, in particular, the soluble forms, even before re-exposure to the parasite. The next step was refining the protocol for effluent infection with E. leei by studying infection at different exposure time points, temperatures and population densities. The results showed that one week of exposure is sufficient to spread E. leei infection by effluent, regardless of temperature. After demonstrating the resistance against E. leei, and with a refined infection model, a passive immunization assay was performed. The results showed that the serum with specific antibodies effectively slows down the invasion of the gut by the parasite and reduces the symptoms of the disease. At the same time, the analysis of the repertoire of the variable regions of intestinal IgM and IgT showed an induction of a polyclonal response in B cells. On the basis of these results, a research was carried out for E. leei antigens that could have use as candidates for the production of vaccines (proteomic study) or diagnostic tools (in silico study) using the parasite transcriptomic data. To do this, a de novo transcriptome was assembled using a mixed sample of gilthead sea bream and parasite, with a posterior filtrate of the sequences. The In silico and proteomic analysis search resulted in 7 and 12 transcripts, respectively, which are being used for diagnostic and vaccine production. The starting point was more basic in E. nucleophila studies, since this is a recently described disease. The samples of this parasite can only be obtained from natural outbreaks in fish farms. Therefore, first study was carried out to characterize the pathology of the infection of naturally infected fish. In the early stages of the infection, the parasite is mainly located in the intestine, but months later, the prevalence is lower in the intestine and increases in the hematopoietic organs and the stomach. Clinical signs of infection were significant reduction in growth, wasting, and intestinal walls paleness. At the cellular level, in the most severe cases hypercellularity in the intestinal epithelium, proliferation of rodlet cells, high number of lymphocytes at the base of the epithelium and infiltration of acidophilic granulocytes in the intestinal epithelium were observed. Finally, horizontal transmission of E. nucleophila was tried using different transmission methods: cohabitation, effluent, and oral and anal intubation. Transmission of the parasite was achieved with all routes, but there was a decrease in prevalence over time in all cases except for the anal route. Variables such as temperature, dose, and the status of the donor fish appear to be more important than the selected route. Among the routes tested, anal intubation seemed to be the most promising, as it was sustained over a longer period of time, but none of them was able to reproduce the same clinical signs of infection observed in natural infections. / The authors kindly acknowledge the collaboration of anonymous fish farming companies allowing access to the animals during the disease outbreaks. We thank J. Monfort and L. Rodríguez (IATS-CSIC) for the technical assistance on histological processing.This work has been carried out with financial support from the European Union and the Spanish Ministry of Economy and Competitiveness (MINECO) under grant projects ParaFishControl (H2020-634429) and AGL2013-R-48560-C2-2-R, respectively. APS was contracted under ParaFishControl project. Primer sequences and access to the gilthead sea bream transcriptomic database were kindly provided by Prof. J. Pérez-Sánchez of the IATS- Nutrigenomics group. The authors thank I. Vicente for fish maintenance and technical assistance during samplings. The authors thank P. Boudinot (INRAE) for his help in designing and interpreting the immunoglobulin repertoire study and results, J. Pérez-Sánchez (IATS-CSIC) for providing access to the gilthead sea bream genome sequences to perform the repertoire analysis.This work was funded by the European Research Council (ERC Consolidator Grant 2016 725061 TEMUBLYM). / Picard Sánchez, MA. (2021). Control of enteric parasitic diseases of farmed gilthead sea bream: New insights into Enteromyxum leei (Myxozoa) and Enterospora nucleophila (Microsporidia) infections [Tesis doctoral]. Universitat Politècnica de València. https://doi.org/10.4995/Thesis/10251/167035 / TESIS / Compendio