Netta peposaca (marrecão) distribui-se nos ambientes aquáticos interiores de faixa de clima temperado e subtemperado do Cone Sul da América do Sul. No Brasil ocorrem em banhados e várzeas do Rio Grande do Sul e, esporadicamente, na zona costeira meridional de Santa Catarina, Paraná e São Paulo. Existem, descritas no mundo, mais de 140 espécies de anatídeos, dos quais, cerca de 24 ocorrendo no Brasil e, destas espécies, 21 somente no RS, caracterizando-o como sendo o maior Estado do Brasil em diversidade de espécies desta família. Com os objetivos fazer um levantamento quantitativo e qualitativo de helmintos e artrópodes de N. peposaca em vida livre e relatar as estimativas dos parâmetros Prevalência, Abundância e Intensidade Média destes parasitos no hospedeiro, foram analisados 30 anatídeos, dos quais 17 eram procedentes da Estância Boa Vista, situada na BR 471, Km 473, município de Rio Grande e os outros 13 de áreas situadas à margem da BR 116, Km 491, município de Turuçú-RS, que foram necropsiados e o conteúdo da cavidade abdominal, do sistema respiratório (narinas, traquéia e pulmões), do sistema digestório (cabeça (boca e faringe), esôfago e papo, pró-ventrículo, moela, intestino delgado (dividido em 3 partes iguais), intestino grosso (cecos, colon-reto) e cloaca), do sistema genito-urinário (rins, ureter, testículos e oviduto), o globo ocular, o fígado, o pâncreas, o baço e o coração, bem como suas penas, foram analisados. Cada órgão teve seus conteúdos processados em tamis de malha 150μm, inspecionados microscopicamente e/ou através de lupa (40x) na busca de nematóides, trematódeos, cestóides e acantocéfalos que foram acondicionados em álcool 70ºGL; suas penas, lavadas em solução detergente e processadas em tamis de malha 150μm, tendo o conteúdo retido acondicionado em frascos contendo Álcool 70o GL, para posterior processamento e identificação. Os resultados obtidos para os helmintos foram: Capillaria sp (P=36,67%; A=0,80; IM=2,18) na mucosa do esôfago/papo, Capillaria sp. (P=83,33%; A=5,50; IM=6,60) nos cecos, Epomidiostomum sp. (P= 86,67%; A=4,27; IM=4,92) na mucosa da moela, Strongyloides minimum (P=30%; A=0,90; IM=3,00) no intestino delgado (ID-3ª porção) e Tetrameres sp (P=73,33%; A=4,10; IM=5,59) no esôfago e proventrículo (Filo Nematoda); Apatemon gracilis (P=10%; A=0,63; IM=6,33) no ID (1ª porção), Dendritobilharzia pulverulenta (P=40%; A=0,67; IM=1,67) no conteúdo da carcaça e coração, Echinoparyphium recurvatum (P=30%; A=2,63; IM=8,78) no ID (1ª, 2ª e 3ª porção), Echinostoma revolutum (P=13,33%; A=0,33; IM=2,50) no ID (3ª porção), Eucotyle warreni (P=20%; A=0,33; IM=1,67) nos rins, Notocotylus sp (P=13,33%; A=0,63; IM=4,75) nos cecos, Typhlocoelum cucumerinum (P=30%; A=0,37; IM=1,22) na traquéia e Zygocotyle lunatum (P=80%; A=2,07; IM=2,58) nos cecos (Classe Trematoda); Cloacotaenia megalops (P=90%; A=4,70; IM=5,22) na cloaca (Classe Cestoda). Os resultados obtidos para os ectoparasitos foram: na Classe Insecta, Ordem Phthiraptera, Família Menoponidae – Holomenopon leucoxanthum (P=96,67%; A=19,77; IM=20,45), Trinoton querquedulae (P=83,33%; A=3,93; IM=4,72); Família Philopteridae – Acidoproctus fuligulae (P=96,67%; A=12,90; IM=13,34), Anatoecus icterodes (P=60%; A=2,40; IM=4,0), Anaticola chaetodens (P=16,67; A=0,23; IM=1,40) e na Classe Arachnida, Ordem Acari, Família Rhinonyssidae – Rhinonyssus rhinolethrum (P=16,67; A=1,23; IM=7,40). / Netta peposaca (Rosybill or Rosy-billed Pochard) presents a distribution in the aquatic environmental in the interior range of tempered climate of the in the southern of South America. In Brazil occurs in marshes and fertile valley of the Rio Grande do Sul State and eventually at the meridional coastal zone of Santa Catarina, Paraná and São Paulo States. More than 140 species of anatids were described trough the world, 24 occurs in Brazil, and 21 only in the Rio Grande do Sul State, which characterize as a greatest Brazil State in diversity of this family species. 30 anatids from different areas, 17 from Estancia da Boa Vista (BR 471, Km 473) Rio Grande County and the other 13 from Turuçu County (BR 116, Km 491), were analyzed to realize a quantitative and qualitative investigation of helmints and arthropods which ones infested the wildlife N. peposaca and report the parameters estimative of Prevalence(P), Abundance(A) and Mean Intensity(MI) of this parasites in the host, the animals were necropsied the abdominal, respiratory (nasal cavity, trachea and lungs), gastrointestinal (mount, and pharynx, esophagus, crop, proventriculus, gizzard, small intestine(divided in 3 equal parts), large intestine(cecums, colon rectum and cloaca) and genitourinary system (kidneys, ureters, testis and oviduct) contents and ocular globe, liver, pancreas, spleen, heart and feathers were analyzed. Each organ had their content were processed in tamises with 150 μm of mesh, inspected microscopically and/or through the magnifying glass (40x) to search for nematods, trematods, cestods and acantocephalos which ones were maintened in alcohol 70ºGL; the feathers were washed in detergent solution processed in tamises with 150 μm of mesh and maintained at bottles with alcohol 70ºGL, to posterior processing and identification. The obtained results were to helmints Capillaria sp. (P=36,67%; A=0,80; MI=2,18) at esophagus and crop mucosa Capillaria sp. (P=83,33%; A=5,50; MI=6,60) at the cecums, Epomidiostomum sp. (P= 86,67%; A=4,27; MI=4,92) at the gizzard mucosa, Strongyloides minimum (P=30%; A=0,90; MI=3,00) at the small intestine (SI-3ª portion) and Tetrameres sp. (P=73,33%; A=4,10; MI=5,59) at the oesophagous and proventriculus (Nematoda Phylum); Apatemon gracilis (P=10%; A=0,63; MI=6,33) at the SI (1ª portion), Dendritobilharzia pulverulenta (P=40%; A=0,67; MI=1,67) at the heart and carcass, Echinoparyphium recurvatum (P=30%; A=2,63; MI=8,78) at SI (1ª, 2ª e 3ª portion), Echinostoma revolutum (P=13,33%; A=0,33; MI=2,50) at SI (3ª portion), Eucotyle warreni (P=20%; A=0,33; MI=1,67) at kidneys, Notocotylus sp. (P=13,33%; A=0,63; MI=4,75) at cecums, Typhlocoelum cucumerinum (P=30%; A=0,37; MI=1,22) at the trachea and Zygocotyle lunatum (P=80%; A=2,07; MI=2,58) at the cecums (Trematoda Class); Cloacotaenia megalops (P=90%; A=4,70; MI=5,22) at cloaca (Cestoda Class). The obtained results for ectoparasites were Insecta Class, Phthiraptera Order, Menoponidae Family– Holomenopom leucoxanthum (P=96,67%; A=19,77; IM=20,45), Trinoton querquedulae (P=83,33%; A=3,93; MI=4,72); Philopteridae Family – Acidoproctus fuligulae (P=96,67%; A=12,90; MI=13,34), Anatoecus icterodes (P=60%; A=2,40; MI=4,0), Anaticola chaetodens (P=16,67; A=0,23; MI=1,40) and in the Arachnida Class, Acari Order, Rhinonyssidae Family – Rhinonyssus rhinolethrum (P=16,67; A=1,23; MI=7,40).

Submitted by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2013-06-14T13:04:04Z No. of bitstreams: 1 dissertação_final_Fernanda Rezende1.pdf: 11790769 bytes, checksum: c513dea1d65a522e22458b1ce1b6e3e5 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-06-14T13:04:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertação_final_Fernanda Rezende1.pdf: 11790769 bytes, checksum: c513dea1d65a522e22458b1ce1b6e3e5 (MD5) Previous issue date: 2013 / Os mosquitos da espécie Anopheles (Nyssorhynchus) aquasalis, Curry 1932 são vetores da malária humana nas Américas. Desde o ano de 2004, esse vetor tem sido mantido em colônia no Laboratório de Malária do Centro de Pesquisas René Rachou (Lamal), Fiocruz-MG, onde tem sido utilizado para estudos de interação parasito-vetor. Na natureza, as larvas desses insetos desenvolvem-se em água salobra e, no insetário de criação do Lamal utiliza-se água do mar na proporção de 1:10 em água da torneira. No ano de 2008, observou-se uma queda significativa na produção de mosquitos da colônia, devido, principalmente, à mortalidade excessiva de larvas. As larvas, de 3º e 4º estádios, apresentavam características morfológicas semelhantes àquelas relacionadas com contaminação por bacilos entomopatogênicos. Como algumas bactérias do gênero Bacillussão patogênicas às larvas de mosquitos, o objetivo do presente trabalho foi identificar a (as) espécie (es) responsável (is) pela mortalidade das larvas de Anopheles aquasalis, bem como identificar as toxinas envolvidas nessa mortalidade. Através da caracterização morfológica e molecular foi possível identificar o Bacillus sphaericuscomo contaminante na colônia de criação de Anopheles aquasalis. Visando uma comparação inter-insetários, analisou-se ainda amostras de três insetários distintos, sendo a presença dos bacilos identificadas em dois desses. Pela técnica de PCR buscou-se amplificar as 5 toxinas mais frequentes das estirpes de B. sphaericus(BinA, BinB, Mtx1, Mtx2 e Mtx3 ), sendo que apenas 3 (família das MTxs) foram detectadas nas amostras estudadas. Os resultados dos ensaios biológicos confirmaram a toxidade destas toxinas para as larvas de 3º e 4º estádios. Os ensaios biológicos realizados identificaram as estirpes isoladas do Laboratório de Malária como de alta toxicidade para o Anopheles aquasalis. Em resumo, este trabalho foi o primeiro a demonstrar a ocorrência de contaminação natural por bacilos entomopatogênicos em colônias de mosquitos mantidas em insetário e a caracterizar as toxinas envolvidas nesta contaminação. Espera-se que estes resultados possam contribuir para traçar estratégias de monitoramento e controle de contaminação em insetários de experimentação. / Mosquitoes of the species Anopheles (Nyssorhynchus) aquasalis, Curry 1932 are vectors of human malaria in the American continent. Since 2004, this vector has been kept in colony at the Malaria Laboratory in René Rachou Research Center (Lamal), Fiocruz-Minas, where it has been used for studies on vector-parasite interaction. In nature, these insects' larvae grow in brackish water and, in the creation insectarium of Lamal sea water is used in the proportion 1:10 in tap water. In 2008, a significant decrease was observed in the production of mosquitoes of the colony, mostly due to the excessive mortality of larvae. These larvae, from 3rd and 4 th stage, showed morphologic characteristics similar to those related to contamination by entomopathogenic bacillus. As somebacteria from genus Bacillusare pathogenic to mosquitoes' larvae, the purpose of the present work was to identify the species responsible for the mortality of Anopheles aquasalislarvae, as well as identify the toxins included in this mortality. Through morphologic andmolecular characterization, it was possible to identify Bacillus sphaericusas contaminant in the creation colony of Anopheles aquasalis. Seeking an inter-insectariums comparison, samplesof three distinct insectariums were still analyzed, and the presence of Bacillus sphaericuswas identified in two of them. Using the technique of PCR, an amplification of the5 most frequent in the lineage of B. sphaericus(BinA, BinB, Mtx1, Mtx2 e Mtx3) was tried, with only 3 (MTxs families) being identified in the studied samples. The results of biologic trials confirmed the toxicity of these toxins for larvae in 3rd and 4th stage. In addition, the biologic trials identified the isolated lineages of the Malaria Laboratory as of high toxicity for Anopheles aquasalis. In short, this is a pioneer work, since it was the first to show the occurrence of natural contamination by entomopathogenic bacillus in colonies of mosquitoes maintained in insectariums and to characterize the toxins involved in this contamination. It is expected that these results might contribute to trace strategies in order to monitor and control contamination in experimentation insectariums.

Submitted by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2013-08-14T17:17:44Z No. of bitstreams: 1 dissertação Fernanda Alvarenga Cardoso 1.pdf: 1458584 bytes, checksum: a3070865cab7509b6900f5f36ab2b623 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-08-14T17:17:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertação Fernanda Alvarenga Cardoso 1.pdf: 1458584 bytes, checksum: a3070865cab7509b6900f5f36ab2b623 (MD5) Previous issue date: 2013 / Nas últimas décadas, a reação em cadeia da polimerase (PCR) vem sendo utilizada para o diagnóstico da leishmaniose visceral (LV) com diferentes objetivos: o diagnóstico da infecção, da doença e o controle de cura. Para utilização em larga escala, a etapa de eletroforese para detecção dos produtos amplificados na PCR, torna a técnica complexa e onerosa. A PCR-ELISA representa uma alternativa de detecção do produto amplificado por PCR através de um ensaio imunoenzimático (ELISA). Esta técnica é capaz de conferir maior sensibilidade e rapidez para a análise de grandes números de amostras clínicas com o uso de equipamentos utilizados para processamento de ELISA e, portanto, permite realizar PCR para fins de diagnóstico em laboratórios de média complexidade. Assim, este estudo objetivou desenvolver e validar o método de detecção colorimétrica dos produtos de amplificação gerados pela reação de PCR para o diagnóstico da LV em amostras de sangue periférico.O método de PCR-ELISA foi desenvolvido para detecção de fragmento de DNA do cinetoplasto (kDNA), complexo Donovani-específico. Utilizando-se cepas referências de Leishmania em cultivo e de painel de amostras de sangue periférico humano de 11 indivíduos não infectados, moradores de área endêmica e 14 casos de LV, caracterizadas clínica e parasitologicamente, determinou-se o limite de detecção da reação, medidas de precisão (repetibilidade e reprodutibilidade) e limite entre positivo e negativo (cut-off). A avaliação do desempenho do ensaio foi realizada com amostras de sangue periférico de 105 pacientes portadores de LV, 25 pacientes portadores da co-infecção Leishmania/HIV e de 73 indivíduos moradores de área endêmica para a LV. Foi desenvolvido ainda um ensaio de PCR-ELISA para detecção do DNA amplificado do gene humano ACTB, para uso como controle do processo de extração de DNA e amplificação por PCR das amostras clínicas. O ensaio PCR-ELISA kDNA desenvolvido apresentou limite de detecção de 1 parasito/mL de sangue e 0,07fg/µL de DNA de L. (L.) infantum, sensibilidade de 100% (IC 95%: 97,1 a 100%) e especificidade de 95% (IC 95%: 83,5 a 98,6%). Todos os indivíduos assintomáticos de área endêmica, com positividade por outras técnicas diagnósticas, foram também positivos pela PCR-ELISA. Todas as amostras foram testadas satisfatoriamente para o ensaio de PCR-ELISA ACTB. O ensaio de PCR-ELISA kDNA, desenvolvido e validado neste estudo, apresenta simplicidade metodológica e operacional, permite interpretação objetiva da amplificação por PCR do DNA de Leishmania do complexo Donovani e desempenho adequado no diagnóstico da LV em laboratórios de referência. / In recent decades, the polymerase chain reaction (PCR) has been used for the diagnosis of visceral leishmaniasis (VL) with different goals: diagnosis of infection, disease control and cure. For large-scale use, the step of electrophoresis to detect amplified products of PCR makes this technique more complex and costly. The PCR-ELISA is an alternative for the detection of the amplified PCR product through an immunoenzymatic assay (ELISA). This technique offers higher sensitivity and speed for the analysis of large numbers of clinical specimens, using equipment widely used for processing sets of ELISA and therefore allows performing PCR for diagnostic purposes in laboratory of medium complexity. Thus, this study aimed to develop and validate the colorimetric detection method (ELISA) for amplification products generated by PCR targeting the diagnosis of VL.The method of PCR-ELISA was developed to detect a fragment of DNA of kinetoplast (kDNA) specific from Leishmania donovani complex. Using reference strains of Leishmania in cultivation and a panel of human peripheral blood samples of 11 non-infected individuals, residents of endemic area and 14 cases of VL with clinical and parasitological characterization, we determined the detection limit of the reaction, precision measurements (repeatability and reproducibility) and limit between positive and negative (cut-off). The performance of the assay was evaluated with peripheral blood samples of 105 patients with VL, 25 patients showing the co-infection Leishmania/HIV and 73 individuals living in endemic areas for VL. A PCR-ELISA assay for detection of DNA from the human ACTB gene was also developed for use as control for the process of DNA extraction and amplification by PCR of clinical samples. The PCR-ELISA kDNA assay developed showed a detection limit of 1 parasite/ml blood and 0.07 fg/µL of DNA from L. (L.) infantum. The assay showed a sensitivity of 100% (IC 95%: 97.1 to 100%) and specificity of 95% (IC 95%: 83.5 to 98.6%). All asymptomatic individuals from an endemic area, who were diagnosed for LV by other techniques, were also positive by PCR-ELISA kDNA. All samples were tested satisfactorily by PCR-ELISA ACTB assay. The PCR-ELISA kDNA assay was developed and validated in this study. It presents methodological and operational simplicity; enables objective interpretation of PCR amplification of DNA from Leishmania donovani complex and have sufficient performance for diagnosis of VL in reference laboratories.

Submitted by Alessandra Portugal (alessandradf@ioc.fiocruz.br) on 2013-09-17T15:45:54Z No. of bitstreams: 1 Tese Biologia Parasitaria Michele Costa da Silva.pdf: 12475456 bytes, checksum: 609ce8de504a83a73a1066ce6c810c6c (MD5) / Made available in DSpace on 2013-09-17T15:45:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese Biologia Parasitaria Michele Costa da Silva.pdf: 12475456 bytes, checksum: 609ce8de504a83a73a1066ce6c810c6c (MD5) Previous issue date: 2011 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / O munícipio de Sumidouro é localizado na região serrana do estado do Rio de Janeiro, onde a infecção por Schistosoma mansoni tem sido descrita em humanos e em roedores silvestres. A população humana vem sendo submetida a sucessivos programas de controle desde a década de 1950. Vários estudos indicam que o rato d’água (Nectomys squamipes) é um reservatório natural de S. mansoni, a sua presença em localidades endêmicas, pode prejudicar os programas de controle da esquistossomose. Em condições de laboratório, vermes adultos de S. mansoni apresentam plasticidade fenotípica induzida por modificações no microambiente do parasita, principalmente durante a primeira passagem em condições de laboratório. Em nosso estudo, avaliamos o efeito do praziquantel (PZQ) no isolado R, isolado de N. squamipes naturalmente infectados, provenientes de Sumidouro, utilizando parâmetros parasitológicos e morfológicos. Os parâmetros parasitológicos (ovos eliminados nas fezes, a redução de vermes adultos e o oograma) foram utilizados para avaliar os efeitos do PZQ no isolado R de S. mansoni. Utilizamos também, um isolado de laboratório (isolado BH) como controle. Camundongos infectados com 50 cercárias foram tratados por via oral com PZQ nas seguintes dosagens: 62,5mg/kg (grupo 1), 125mg/kg (grupo 2), 250mg/kg (grupo 3) e 500mg/kg (grupo 4). Cada dose foi dividida em 3 dias (49, 50 e 51 dias pós-infecção). Os dados foram analisados usando o teste estatístico ANOVA. Nos experimentos com o isolado R, não foram observados ovos nas fezes com as doses 250mg/kg e 500mg/kg (p<0,05), enquanto a excreção em BH chegou à zero com todas as doses. A redução da carga parasitária foi significativamente maior (p<0,05) nas duas concentrações maiores testadas de PZQ, independente do isolado. Com 62,5mg/kg, a porcentagem de ovos imaturos variou de 17% (isolado R) à 38% (isolado BH). Na dosagem de 125mg/kg, a porcentagem de ovos imaturos variou de 20% (isolado R) à 16% (isolado BH). Com 250mg/kg, a contagem de ovos imaturos caiu significativamente à 1% (isolado R) e à 4% (isolado BH). Com 500mg/kg, não foram encontrados ovos imaturos no isolado R, enquanto que em BH o valor era de 8%. Nenhuma dosagem afetou, significativamente (p>0,05), a porcentagem de ovos maduros, independente do isolado. Todos os grupos tratados apresentaram um grande aumento na quantidade de ovos mortos, com diferenças significativas (p<0,001) de 62% e 64% nos grupos 3 e 4, respectivamente (isolado R). A porcentagem de ovos mortos subiu de 34% (grupo 1) para 58% (grupo 3) no isolado BH. Embora o grupo 4 tenha mostrado um pequeno aumento na porcentagem de ovos mortos (46%), foi significativamente maior (p<0,001) comparado com os 8% do controle. Os helmintos machos do isolado R (grupos 3 e 4) apresentaram diminuição dos tubérculos. Dos espécimes fêmeas analisados do isolado R, 44% (grupo 3) não apresentaram ovo. O isolado BH, também apresentou diminuição de tubérculos nos helmintos machos (grupos 3 e 4). Os lobos testiculares dos vermes dos grupos tratados apresentaram área e comprimento menor em relação aos helmintos recuperados de camundongos não tratados. Os nossos dados demonstram que o isolado silvestre testado é susceptível ao PZQ. / Sumidouro municipality is a mountain region of the Rio de Janeiro state, where natural schistosomiasis mansoni has been described in both human and water rat population. The human population has been submitted to successive control programs since around 1955. A number of studies suggest that water rat (Nectomys squamipes) is one natural reservoir of Schistosoma mansoni, which may implicate as a confounding factor for control programs of schistosomiasis. Under laboratory conditions, S. mansoni adult worms present phenotypic plasticity induced by modifications in the parasite's microenvironment, mainly during the first passage under laboratory conditions. In our study the effects of praziquantel (PZQ) were evaluated on the isolate (R) first isolated from naturally-infected N. squamipes from Sumidouro by parasitological and morphological parameters. The therapeutic effects of PZQ against a S. mansoni isolate derived from N. squamipes (isolate R) and a susceptible isolate (BH) were analyzed in Swiss mice by fecal egg counting, adult worm load and oogram pattern. Infected mice were orally administrated with 62.5mg/kg; 125mg/kg 250mg/kg and 500mg/kg, each dose divided over 3 days (49, 50 and 51 days after infection). The data were analyzed using one-way analysis of variance (ANOVA). In regard to isolate R, no fecal eggs were observed with 250mg/kg and 500mg/kg (p < 0.05), whereas BH excretion reached zero with all doses. Mean worm burden reduction was significantly (p < 0.05) higher at the two highest concentrations tested of PZQ, regardless of isolate. At 62.5mg/kg, the percentage of immature eggs varied from 17% (isolate R) to 38% (BH isolate). At 125mg/kg, the percentage of immature eggs varied from 20% (isolate R) to 16% (isolate BH). At 250mg/kg, immature eggs dropped significantly to 1% (isolate R) and 4% (isolate BH). At 500mg/kg, no immature eggs were found in isolate R, whereas in BH was 8%. No dosage significantly (p > 0.05) affected the percentage of mature eggs, regardless of isolate. There was a large increase in the percentages of dead eggs in all treated groups with significant (p < 0.001) increases of 62% and 64% in groups 3 and 4, respectively (isolate R). The percentage of dead eggs rose from 34% (group 1) to 58% (group 3) in isolate BH. Although group 4 showed lowest increase in the percentage of dead eggs (46%), it was significantly higher (p < 0.001) compared to the 8% in the control. Male worms from isolate R (groups 3 and 4) showed decrease of the tubercles. In female worms from isolate R, 44% (group 3) showed no egg. The isolate BH also showed decrease of the tubercles in male worms (groups 3 and 4). In general, morphometric values of reproductive system (testicular lobes) specimens grown in treated mice were lower than those of control mice. Our findings indicate that the wild isolate from N. squamipes is susceptible to PZQ.

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2016-02-15T09:26:55Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 617451 bytes, checksum: 4cfa790ea53c2b9f35c44def1d4652fe (MD5) / Made available in DSpace on 2016-02-15T09:26:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 617451 bytes, checksum: 4cfa790ea53c2b9f35c44def1d4652fe (MD5) Previous issue date: 2015-03-26 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / As formigas cortadeiras dos gêneros Atta e Acromyrmex constituem importantes pragas florestais, de pastagens e de áreas cultivadas no Brasil. Dentre estas a formiga cortadeira Atta bisphaerica Forel, 1908 destaca-se como importante praga de cana-de-açúcar e também de áreas de pastagem. Atualmente, o método mais utilizado para controle dessas formigas é a utilização de iscas granuladas. Porém, este parece não ser o método mais eficiente para o controle das mesmas, pois as iscas com polpa cítrica não têm se mostrado muito atrativa para A. bisphaerica, cortando principalmente gramíneas. Além disso, iscas granuladas podem causar danos a outras espécies benéficas, ao solo e até mesmo ao homem. Forídeos (Diptera: Phoridae) parasitoides vêm sendo estudados nas ultimas duas décadas no Brasil para que possam ser utilizados como uma estratégia alternativa no manejo de formigas cortadeiras. No entanto, existe apenas um trabalho desenvolvido com forídeos de A. bisphaerica. Nesse trabalho de Bragança e colaboradores, foram encontradas três espécies de forídeos utilizando A. bisphaerica como hospedeiro (Apocephalus attophilus, Eibesfeldtphora bragancai e Myrmosicarius grandicornis). Porém, observações em campo feitas recentemente indicaram que um maior número de espécies pertencentes a estes gêneros podem estar associadas a esta espécie. Também não existem informações sobre as taxas de parasitismo natural de A. bisphaerica por forídeos a distribuição sazonal destes, sendo estas informações importantes para se formular estratégias de manejo de formigas cortadeiras. / Leaf-cutting ants from Atta and Acromyrmex are important forest pests, pastures and cultivated areas in Brazil. Among these the leaf-cutting ant Atta bisphaerica Forel, 1908 stands out as an important pest of sugarcane and also to pasture areas. Currently, the most widely used method to control these ants is the use of granulated bait. However, this does not seem to be the most efficient method for controlling the same, because the lures with citrus pulp do not have been very attractive to A. bisphaerica mainly cutting grass. Furthermore, granular bait may harm other beneficial species, soil and even to humans. Phorid (Diptera: Phoridae) parasitoids have been studied over the past two decades in Brazil so they can be used as an alternative strategy in the management of cutting ants. However, there is only one work with phorid flies from A. bisphaerica. In this work Bragança and collaborators found three species of phorid use A. bisphaerica as host (Apocephalus attophilus, Eibesfeldtphora bragancai and Myrmosicarius grandicornis). However, recent observations made in the field indicated that a greater number of species belonging to these genera may be associated with this species. There is also no information on the parasitism rate by A. bisphaerica phorids the seasonal distribution of these, which are important information to formulate management strategies of cutting ants.

As leishmanioses são zoonoses de caráter incurável que apresentam diversas manifestações clínicas no homem e tem o cão como seu principal reservatório no ambiente urbano. A Leishmaniose visceral (LV) é a forma mais grave da parasitose e sua ocorrência tem aumentado no Brasil, apesar das ações dos órgãos de saúde pública. Até o do ano de 2002, o Estado do Rio Grande do Sul era área indene para as leishmanioses humana e canina. Em 2003 foi registrado o primeiro caso humano da forma tegumentar e em 2006 e 2008 identificaram-se, respectivamente 3,5% e 30,5% de cães sororreagentes para Leishmania sp. em Porto Alegre/RS. Em 2009, foram confirmados os primeiros casos autóctones humanos de LV e caninos de Leishmaniose visceral canina (LVC) no município de São Borja/RS e registrada, pela primeira vez, a ocorrência do inseto vetor no estado. Em 2010, foi notificado o primeiro caso confirmado de LVC e identificados cães sororreagentes em Porto Alegre/RS. Tendo em vista a importância desta zoonose e as dificuldades de um diagnóstico confiável em cães, o presente estudo objetivou identificar aspectos epidemiológicos da LVC em cães em uma região com registros de casos no município de Porto Alegre/RS. Coletaram-se 300 amostras de sangue de cães desta região as quais foram testas pelos métodos TR-DPP® e ELISA para diagnóstico de Leishmania chagasi. Um questionário epidemiológico foi aplicado durante entrevista com os tutores, contendo aspectos relativos à criação dos animais e fatores ambientais. Na área de estudo, observou-se presença frequente de lixo não acondicionado e saneamento básico precário nas moradias, além de extensas áreas de mata verde e pequenos sítios alternados com áreas urbanizadas. Verificou-se que 83% (250/300) dos cães não tinham raça definida, 58% (175/300) eram fêmeas, 78% (238/300) dormiam ao ar livre e 61% (183/300) conviviam com outras espécies animais. Clinicamente, observou-se que 90% (270/300) dos animais apresentavam infestação por ectoparasitos, 70% (210/300) apresentavam alterações dermatológicas, 24% (72/300) emagrecimento e anorexia e 22% (65/300) alterações oculares. Os resultados dos testes sorológicos foram 100% concordantes uma vez que as mesmas três amostras (1%) apresentaram reação positiva e as demais 297 (99%) foram negativas em ambos os métodos diagnósticos. Concluiu-se que, apesar da baixa prevalência de cães soropositivos para L. chagasi, existem condições de transmissão de LVC, com risco de LV para a população humana no município de Porto Alegre. / Leishmanioses are zoonoses of incurable character that present different clinical manifestations in the man and have the dog as its main reservoir in the urban environment. Visceral leishmaniasis (VL) is the most severe form of the parasitosis and its incidence has been increasing in Brazil, despite the actions of public health authorities. To the year of 2002, the state of Rio Grande do Sul was unscathed to the human and canine Leishmanioses. In 2003, it was first recorded a human case of cutaneous leishmaniasis and in 2006 and 2008 were identified, respectively, 3.5% and 30.5% of seropositive dogs to Leishmania sp. in Porto Alegre/RS. In 2009, the first autochthonous human cases of VL and canine visceral leishmaniasis (CVL) were confirmed in the municipality of São Borja/RS and it was registered, for the first time, the occurrence of the vector insect in the state. In 2010 was reported the first confirmed CVL case and seropositive dogs were identified in Porto Alegre/RS. Given the importance of this zoonosis and the difficulties of a reliable diagnosis in dogs, this study goal was to identify epidemiological aspects of CVL and evaluate the performance of ELISA and TR-DPP® in the diagnosis of this disease in dogs on a region with records of cases in the city of Porto Alegre/RS. Blood samples were collected from 300 dogs of this region. An epidemiological questionnaire, containing aspects of care and management of the animals, was conducted during an interview with the owners. Within the study area, it was observed the frequent presence of unpacked garbage and poor sanitation in the homes, and large areas of green forest and small farms alternated with urbanized areas. It was found that 83% (250/300) dogs were of mixed breeds, 58% (175/300) were females, 78% (238/300) slept outdoors and 61% (183/300) coexisted with other animal species. Clinically, it was observed that 90% (270/300) of the animals had infestation by ectoparasites, 70% (210/300) had dermatological alterations, 24% (72/300) had weight loss and anorexia and 22% (65/300) had ocular disorders. The results of serological tests were 100% consistent since, in both diagnostic methods, the same three samples showed a positive reaction and the remaining 297 were negative. Despite the low prevalence of dogs seropositive for L. chagasi, it was concluded that there are conditions for the transmission of CVL, resulting in a risk of VL for the human population in the municipality of Porto Alegre.

Made available in DSpace on 2011-05-04T12:42:02Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010 / Ascaris lumbricoides e Trichuris trichiura são os helmintos intestinais de maior prevalência na população mundial e também no material arqueológico. Porém, na América do Sul pré-colombiana, o encontro de ovos de A. lumbricoides é raro. Recentemente um estudo de diagnóstico paleoparasitológico molecular apontou para um sub-diagnóstico de Ascaris sp. na América do Sul. No registro arqueológico de parasitos intestinais predominam achados de ovos de Trichuris sp. ao invés de Ascaris sp. Isto parece contraditório, em virtude do número de ovos eliminados por cada parasito. Os objetivos desta pesquisa foram: avaliar marcadores moleculares para o diagnóstico de Ascaris sp. e Trichuris sp. em material moderno pela caracterização molecular destes parasitos; caracterizar geneticamente isolados de sítios arqueológicos sul americanos para verificar a real paleodistribuição destes parasitos em uma perspectiva paleoepidemiológica e compará-la com a epidemiologia moderna destas infecções; avaliar os fatores envolvidos na paleodistribuição encontrada. As amostras foram submetidas ao diagnóstico por microscopia óptica, seguida da extração do DNA, PCR e sequenciamento nucleotídico. Na avaliação dos marcadores moleculares, a região ITS1 de Ascaris sp. apresentou variação intra-indivíduo, o que descartou seu uso com fins taxonômicos e diagnósticos. A caracterização molecular dos genes mitocondriais cox1 e nad1 de Ascaris sp. mostrou infecção cruzada de genótipos entre as espécies humana e suína, o que denota a necessidade de monitoramento das populações avaliadas assim como de outras regiões brasileiras para que a infecção não venha a se tornar uma zoonose em potencial no Brasil. Foi possível o diagnóstico molecular de Trichuris sp. pelo gene ribossomal 18S DNA. A análise paleogenética mostrou que há subdiagnóstico para ambas as infecções na América do Sul pré-colombiana. Este é o primeiro diagnóstico paleoparasitológico molecular de T. trichiura em material sul americano. Estes são também os primeiros registros de recuperação de DNA de parasitos intestinais em material de sítio arqueológico do tipo “sambaqui” e também do período colonial brasileiro. Comparando-se a paleoepidemiologia molecular de Ascaris sp. com a epidemiologia molecular moderna foi possível notar que há haplótipos antigos que ainda estão presentes hoje, no entanto a maioria dos haplótipos é característica ao material arqueológico. Observou-se que há haplótipos comuns ao Velho e Novo Mundo, contudo, há também especificidades regionais. Os resultados da análise genética claramente apontam para uma pobre preservação dos ovos no material arqueológico, principalmente de Ascaris sp. Os fatores principais envolvidos nessa paleodistribuição, seriam fatores tafonômicos que proporcionaram a quebra maior de ovos de Ascaris sp. do que de Trichuris sp., e evidências de consumo de plantas vermífugas pelos povos pré-históricos, as quais teriam maior ação sobre Ascaris sp. do que Trichuris sp. / Ascaris lumbricoides and Trichuris trichiura are the intestinal helminths with higher prevalence in the world today as it was in the past. However, in pre-Columbian South America the findings of A. lumbricoides eggs are rare. Recently a study of paleoparasitological molecular diagnosis showed a sub-diagnosis of Ascaris sp. in South America. In the archeological material, eggs of Trichuris sp. are more common compared with Ascaris sp. eggs. This is contradictory taking into account the number of eggs eliminated by each parasite. The aims of this research was: to evaluate molecular markers for Ascaris sp. and Trichuris sp. diagnosis in modern material; genetic characterization of the samples South American archeological sites aiming the paleodistribution of these parasites in a paleoepidemiological perspective; compare results with the modern epidemiology of these infections; evaluate the factors involved in paleodistribution. Extraction of DNA, PCR and nucleotide sequencing were performed after microscopy. In the evaluation of the molecular markers Ascaris sp. ITS1 region showed intra-individual variation. Therefore, this region to taxonomical and diagnoses studies was discarded. With the molecular characterization of Ascaris sp. cox1 and nad1 mitochondrial genes it was possible to identify cross infection of genotypes between human and pig hosts. Results showed that surveillance field works in modern populations are necessary to verify the zoonotic potential of this infection in Brazil. The molecular diagnosis of Trichuris sp. by ribossomal 18S DNA gene was possible. The paleogenetic analysis showed that there is subdiagnosis for both infections in pre-Columbian South America. This is the first paleoparasitological molecular record of T. trichiura in South American samples. These are also the first recovery of DNA of intestinal parasites in "sambaqui" archeological site, and also of the Brazilian colonial period. Molecular paleoepidemiology of Ascaris sp. infection compared with modern molecular epidemiology showed that there are ancient haplotypes still present today. However, most of the haplotypes are characteristic of the archaeological material. It was observed that there are common haplotypes both to the Old World and to the New World, but showing regional specificities. The results of the genetic analysis clearly pointed to a poor preservation of eggs in archeological material, mainly of Ascaris sp. Taphonomy may be the main factor involved in paleodistribution, breaking more eggs of Ascaris sp. than Trichuris sp. Evidences of consumption of vermifuge plants by prehistoric groups should also have influence, as some plants should have more efficacy eliminating Ascaris sp. than Trichuris sp.

Submitted by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2012-08-21T16:31:44Z No. of bitstreams: 1 Dissertação Renato Abdala.pdf: 2009448 bytes, checksum: 415669cc9e6a0622d6f58202d33f6488 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-08-21T16:31:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação Renato Abdala.pdf: 2009448 bytes, checksum: 415669cc9e6a0622d6f58202d33f6488 (MD5) / CPqRR/FIOCRUZ: Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas René Rachou CNPq: Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico INCT-DT: Instituto Nacional de Ciência e tecnologia de Doenças Tropicais / Neste estudo foram avaliadas as principais alterações hematológicas e imunofenotípicas em pacientes portadores da fase crônica da esquistossomose (INF), subcategorizados por cargas parasitárias distintas, apresentando menos de 100 ovos por grama de fezes (<100) e mais de 100 ovos por grama de fezes (>100) e indivíduos negativos para ovos residentes (CA) ou não (CT) em áreas endêmicas para a doença. Amostras de fezes e sangue periférico foram coletadas para realização de exame parasitológico pelo método de Kato-Katz e hemograma, respectivamente. Logo após, foi realizado a avaliação do perfil imunofenotípico ex vivo dos leucócitos circulantes e a produção de citocinas em culturas de células mononucleares do sangue periférico, após estimulação antigênica in vitro por 12 horas na ausência ou presença de antígenos solúveis do ovo (SEA), do verme adulto (SWAP) e proteínas recombinantes (Sm22.6 e Sm29) do Schistosoma mansoni. Os resultados mostraram aumento no número absoluto de eosinófilos nos grupos INF e >100. Em relação ao perfil imunofenotípico, foi observado aumento da expressão dos receptores do Tipo Toll-2, CD80, CD86 e CD54 em monócitos dos grupos CA, INF, e >100 em relação ao grupo CT. Foi observado também aumento do receptor CD18 em linfócitos T CD4+ dos grupos CA e <100 em relação ao grupo CT, diminuição do CD18 no grupo >100 em relação ao grupo <100 e aumento da expressão do CD18 no grupo <100 em relação ao grupo CA. Em linfócitos T CD8+ foi observado aumento na expressão do receptor do tipo Toll-2 nos grupos INF, <100 e >100 em relação ao grupo CT, aumento do CD18 nos grupos <100 e CA em relação ao grupo CT e diminuição do CD18 no grupo >100 em relação ao grupo <100. Em linfócitos B, foi observado aumento da expressão do receptor CD80 e CD86 no grupo <100 em relação ao CT e aumento na expressão do CD86 no grupo CA em relação ao grupo CT. A análise após estimulação antigênica revelou, em monócitos, aumento da síntese de TGF-nos grupos INF e >100 estimulados com Sm22.6 e SEA em relação ao CA, redução na síntese de IL-10 e IL-12 no grupo INF em relação ao grupo CA estimulado com Sm22.6 e redução na síntese de IL-1nos grupos CAINF, <100 e >100estimulados com Sm22.6 e SEA em relação ao meio. Houve também, redução de expressão de IL-5 no grupo <100 em relação ao CA estimulado com Sm22.6, aumento na síntese de IFN- nos grupo INF e >100 estimulados com SEA em relação ao meio e aumento na síntese de F-e IL-10 nos grupo INF e >100 estimulados com Sm22.6 e SEAem relação ao grupo CA em linfócitos T CD4+. Além disso, houve aumento da síntese de IL-12 e TNF-no grupo INF em relação ao CA estimulado com SEA, redução de IL-8 no grupo >100 em relação ao grupo <100 estimulados com SEA, SWAP e Sm22.6 e redução de síntese de IL-5 no grupo INF estimulado com SWAP em relação ao CA em linfócitos T CD8+. Após a realização desse trabalho, pode-se concluir que indivíduos portadores da fase crônica e residentes em área endêmica para a doença apresentam forte expressão de moléculas co-estimuladoras, de adesão e de ativação celular em monócitos, linfócitos B, linfócitos T CD4+ e CD8+ do sangue periférico, sugerindo que estes indivíduos possuam intensa atividade das células envolvidas na resposta imune contra a infecção pelo S. mansoni. Além disso, de uma maneira geral, os indivíduos infectados apresentaram, após estimulação antigênica com antígenos recombinantes, redução na síntese de citocinas pró inflamatórias e aumento da síntese de citocinas reguladoras tanto para monócitos quanto para linfócitos. Isto mostra uma enorme capacidade que esses antígenos possuem em induzir uma modulação da resposta imune relacionada à resistência a infecção e a uma menor gravidade da doença. A categorização da população estudada, segundo intensidades de infecção distintas, definiu a contribuição dessa variável para os mecanismos de resistência e susceptibilidade durante a infecção esquistossomótica. / In this study, hematological and immunological features were determined in patients with chronic phase of schistosomiasis (INF), subcategorized by distinct parasitic loads in those with less than 100 eggs per gram of feces (<100) or more than 100 eggs per gram of feces (> 100). Non infected patients resident (CA) or not (CT) in endemic areas for the disease were evaluated as control groups. Stool samples and peripheral blood were collected to perform parasitological exams and hemogram, respectively. Afterwards, it was performed the immunophenotypic profile of circulating leukocytes and cytokine pattern in peripheral blood mononuclear cells cultures after antigenic stimulation in vitro at 12 hours in the absence or presence of soluble egg antigens (SEA), soluble worm antigen preparation (SWAP) and recombinant proteins of Schistosoma mansoni (Sm22.6 and Sm29 ). The results showed an increase in the absolute number of eosinophils in INF and >100 groups. It was also observed an increase in expression of TLR2, CD80, CD86 and CD54 on monocytes from CA, INF, and >100 groups as compared to CT group. It was still observed an increase in the CD18 receptor expression in T CD4+ lymphocytes from CA and <100 groups as compared to CT group. Decreased CD18 expression on >100 as compared to <100 group as well as increased expression of CD18 in <100 group as compared to CA group were also detected. Analyses of T CD8+ lymphocytes demonstrated an increase in the TLR2 expression from INF, <100 and >100 groups as compared to the CT group. Increased CD18 expression in <100 and CA groups as compared to CT group as well as decreased in CD18 expression from >100 as compared to <100 group were still revealed. In B lymphocytes, there was an increase in the both CD80 and CD86 expressions on <100 group as compared to CT group, and an increase in the CD86 expression from CA group as compared to CT group. The analysis after antigenic stimulation revealed in monocytes increased TGF- synthesis from INF and >100 groups stimulated with SEA and Sm22.6 as compared to CA group, and decreased IL-10, IL-12 synthesis from INF group as compared to CA group, and decreased IL-1 syntheses from CA, INF, <100 and >100 groups estimualated with SEA and Sm22.6 as compared to absence of stimulation. There was also reduction in positivity for IL-5 from <100 group stimulated with Sm22.6 as compared to CA group and increase in the IFN- from INF and >100 groups stimulated with SEA as compared to absence of stimulation  increase in F- and IL-10 synthesis from INF and >100 groups stimulated with SEA and Sm22.6 as compared to absence of stimulation by T CD4+ lymphocytes besides of increased IL-12 and TNF- from INF group stimulated with SEA as compared to CA group decreased IL-8 syntheses from >100 group stimulated with SEA, SWAP and Sm22.6 as compared to <100 group and decreased IL-5 syntheses from INF group stimulated with SWAP as compared to CA group by T CD8+ lymphocytes. In conclusion, the individuals with chronic phase of schistosomiasis and residents in endemic areas for the disease have strong expression of co-stimulatory, adhesion and cell activation molecules in circulating monocytes, B cells and CD4+ and CD8+ T lymphocytes, suggesting that these individuals have intense cellular activity that might be involved in immune response against S. mansoni infection. Overall, infected individuals presented, after antigenic stimulation in vitro with recombinant specific antigens, reduced syntheses of pro-inflammatory cytokines apart of increased regulatory cytokine synthesis from both monocytes and lymphocytes revealing a great ability of these antigens to induce a modulation of immune response related to the resistance to infection as well as a lower disease severity. The subcategorization of the study population according to distinct intensity of infection better define the contribution of this parameter to resistance or susceptibility during Schistosoma mansoni infection.

Submitted by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2012-09-11T14:28:57Z No. of bitstreams: 1 FlaviaCarolinaFaustinoAraujo_Estudo comparativo da variabilidade genetica de plasmodium vivax provenientes de infecções primarias e episódios de recaída após tratamento com Primaquina e Cloroquina_2012.pdf: 1462963 bytes, checksum: ef871e04e689d7f6a46a593ebf6d70a8 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-09-11T14:28:57Z (GMT). No. of bitstreams: 1 FlaviaCarolinaFaustinoAraujo_Estudo comparativo da variabilidade genetica de plasmodium vivax provenientes de infecções primarias e episódios de recaída após tratamento com Primaquina e Cloroquina_2012.pdf: 1462963 bytes, checksum: ef871e04e689d7f6a46a593ebf6d70a8 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) Fundação de Amparo à Pesquisa de Minas Gerais (FAPEMIG) Rede malária Pronex – CNPq, MS-DECIT, Fapemig, Fapemat, Faperj Centro de Pesquisas René Rachou / A malária humana é causada por protozoários do gênero Plasmodium. Aproximadamente 40% da população mundial encontra-se em risco de infecção. No Brasil foram registrados 333.339 casos da doença em 2010, sendo 85% deles causados pelo Plasmodium vivax. O P. vivax apresenta uma característica importante em seu ciclo de vida, a possibilidade de desenvolver formas latentes no fígado, os hipnozoítos, que podem causar episódios de recaída. Pouco se sabe a respeito dos mecanismos de latência e ativação dos hipnozoítos. Porém dados da literatura relatam uma correlação entre cepa do parasito e padrão de recaída, sugerindo uma programação genética dos parasitos. A escassez de marcadores genéticos para P. vivax tem dificultado as análises de importantes fenótipos do parasito, tais como os padrões de recaídas. Nesse contexto, o objetivo do presente trabalho foi estudar a variabilidade dos parasitos presentes nas infecções primárias e nos episódios de recaída. Sessenta e cinco amostras pareadas de 30 pacientes foram genotipadas utilizando 10 marcadores moleculares (08 microssatélites e os blocos 2 e 10 da MSP-1) através de eletroforese capilar em sequenciador automático de DNA. Além disso, a presença de infecção múltipla nos pacientes foi confirmada através da clonagem dos fragmentos amplificados e genotipagem a partir de diferentes colônias. Na análise baseada nos alelos predominantes foi demonstrado que os parasitos da recaída são principalmente heterólogos em relação à infecção primária e que geralmente ocorre uma flutuação entre os alelos predominantes nos diferentes episódios do indivíduo. Entretanto, o número de alelos por marcador foi limitado e geralmente os alelos foram idênticos nos diferentes episódios da doença num mesmo paciente. A principal contribuição deste trabalho foi demonstrar uma alta taxa de infecções múltiplas tanto das infecções primárias como nas recaídas, pela primeira vez demonstrada, sendo que infecções múltiplas puderam ser identificadas com apenas 5 marcadores. A presença de repetidas recaídas após o tratamento cloroquina/primaquina pode sugerir presença de parasitos resistentes ao tratamento. Com estes resultados espera-se contribuir para o esclarecimento dos aspectos relacionados à diversidade genética dos parasitos das recaídas do P. vivax, que poderão ajudar no seu prognóstico, direcionamento o tratamento e auxiliando no controle da doença. / Human malaria is caused by protozoa from the genus Plasmodium. Approximately 40% of world population is at risk of infection. In Brazil, 333,339 cases of the disease were recorded in 2010 and 80% of these are caused by Plasmodium vivax. P. vivax presents an important characteristic in its life cycle which is the possibility to develop latent forms of the parasite, the hypnozoítes which can cause relapses. Little is known about the mechanism of latency and activation. However, the literature reports a correlation between parasite strain and pattern of relapse, suggesting a genetic programming of parasites. The scarcity of genetic markers for P. vivax has hampered the analysis of important parasite phenotypes, such as patterns of relapse.In this context, the aim of this work was to study the variability of the parasites present in primary infections and relapse episodes. Sixty-five paired samples of 30 patients were genotyped using 10 molecular markers (08 microsatellites and blocks 2 and 10 of MSP-1) by capillary electrophoresis on an automated DNA sequencer. Moreover, the presence of multiple infections was confirmed by cloning of amplicons and genotyping of different colonies. We showed that relapse parasites are mainly heterologous compared to the ones of the primary infection and that a change in the alleles composition occurs in the different episodes of the individual. However, the number of alleles per marker was usually limited and the alleles were identical in the different episodes of the disease in the same patient. The main contribution of this work was to demonstrate a high rate of multiple infections both in primary infection and relapse, demonstrated for the first time, and multiple infections could be identified with only five markers. The presence of repeated relapses after treatment chloroquine / primaquine may suggest the presence of parasites resistant to treatment. With these results we hope to contribute to the clarification of aspects of the genetic diversity of parasites in relapses of P. vivax, which may help in the prognostic treatment guidance and ultimately help control disease.

Submitted by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2013-01-25T14:36:48Z No. of bitstreams: 1 Andrezza campos chagas.pdf: 9538726 bytes, checksum: eda677be23a8d55d8d9077d3ad01a4c8 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-01-25T14:36:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Andrezza campos chagas.pdf: 9538726 bytes, checksum: eda677be23a8d55d8d9077d3ad01a4c8 (MD5) Previous issue date: 2010 / O simulídeo Thyrsopelma guianense é o principal vetor da oncocercose no Brasil, e pouco se conhece sobre a composição e função da saliva em simulídeos. Artrópodes hematófagos contém uma “poção mágica” para interagir com à hemostase, inflamação e imunidade de seus hospedeiros. A glândula salivar de fêmeas de T. guianense é constituída de dois lobos idênticos contendo uma glândula principal (envolvida com a alimentação com sangue) e uma acessória (envolvida com a alimentação com açúcar), a última similar à glândula de macho. A análise histoquímica demonstrou uma saliva é rica em polissacarídeos, proteínas e lipídios principalmente na glândula principal. Essa região contém cavidades secretoras elétron-densas, enquanto, o lúmen da glândula acessória é elétron-lucente. Os homogenados salivares inibiram a coagulação sanguínea, atuando em fXa mas não em trombina. Esses homogenados também apresentaram atividade enzimática de lisozima em pH 7,0. O sialotranscriptoma isolou e identificou 1.772 transcritos, classificados como secretores (S) (74,7%), celulares (C) (16,2%), produtos de função desconhecida (U) (9%) e elementos de transposição (0,1%). Esse sialotranscriptoma identificou famílias de proteínas ubíquas como antígeno-5, Yellow, domínios ML, lipocalina, lisozima, cecropina, serpina, domínios Kunitz, serino proteases, hialuronidase, apirase, glicosidases, adenosina deaminase e destabilase, além de famílias de proteínas específicas para insetos como Aegyptina e a superfamília D7/OBP. Cerca de 63,4% dos produtos secretores corresponderam a famílias de proteínas encontradas somente em Simulium, como SVEP/Marydilan, proteínas ácidas ricas em His, Sv 7,8 kDa, mucinas, tipo-colágeno, básicas 7-13 kDa, Sv 7,8 kDa, 4,8 kDa, básicas 7,4 kDa, básica 13 kDa e família 5-Cys. Várias famílias de proteínas foram deorfanizadas do sialotranscriptoma de S. nigrimanum como Sn 8-10 Cys W, ácida 28 kDa, básica 28 kD, 19 kDa, básica 8 kDa e Sn básica 4,4 kDa. Transcritos com similaridade para kunitoxina foram encontrados em T. guianense. Observamos um aumento na expressão de transcritos para a classe S e expecionalmente em SVEP, e nos subgrupos síntese de proteína e metabolismo energético da classe C, em relação a outros sialotranscriptomas de Simulium. O proteoma confirmou 28 das 32 famílias de proteínas encontradas no transcriptoma e disponibilizamos 101 sequências de proteínas de interesse para o NCBI. Essa é a primeira descrição de um sialoma (do grego Greek Sialo=saliva) de um vetor de oncocercose. Assim, nossos resultados ajudam no entendimento do papel da saliva de Simulium na transmissão de Onchocerca volvulus e para a evolução de proteínas salivares em simulídeos, além de consistir numa plataforma de novos compostos antihemostáticos e candidatos a vacina contra oncocercose. / O simulídeo Thyrsopelma guianense é o principal vetor da oncocercose no Brasil, e pouco se conhece sobre a composição e função da saliva em simulídeos. Artrópodes hematófagos contém uma “poção mágica” para interagir com à hemostase, inflamação e imunidade de seus hospedeiros. A glândula salivar de fêmeas de T. guianense é constituída de dois lobos idênticos contendo uma glândula principal (envolvida com a alimentação com sangue) e uma acessória (envolvida com a alimentação com açúcar), a última similar à glândula de macho. A análise histoquímica demonstrou uma saliva é rica em polissacarídeos, proteínas e lipídios principalmente na glândula principal. Essa região contém cavidades secretoras elétron-densas, enquanto, o lúmen da glândula acessória é elétron-lucente. Os homogenados salivares inibiram a coagulação sanguínea, atuando em fXa mas não em trombina. Esses homogenados também apresentaram atividade enzimática de lisozima em pH 7,0. O sialotranscriptoma isolou e identificou 1.772 transcritos, classificados como secretores (S) (74,7%), celulares (C) (16,2%), produtos de função desconhecida (U) (9%) e elementos de transposição (0,1%). Esse sialotranscriptoma identificou famílias de proteínas ubíquas como antígeno-5, Yellow, domínios ML, lipocalina, lisozima, cecropina, serpina, domínios Kunitz, serino proteases, hialuronidase, apirase, glicosidases, adenosina deaminase e destabilase, além de famílias de proteínas específicas para insetos como Aegyptina e a superfamília D7/OBP. Cerca de 63,4% dos produtos secretores corresponderam a famílias de proteínas encontradas somente em Simulium, como SVEP/Marydilan, proteínas ácidas ricas em His, Sv 7,8 kDa, mucinas, tipo-colágeno, básicas 7-13 kDa, Sv 7,8 kDa, 4,8 kDa, básicas 7,4 kDa, básica 13 kDa e família 5-Cys. Várias famílias de proteínas foram deorfanizadas do sialotranscriptoma de S. nigrimanum como Sn 8-10 Cys W, ácida 28 kDa, básica 28 kD, 19 kDa, básica 8 kDa e Sn básica 4,4 kDa. Transcritos com similaridade para kunitoxina foram encontrados em T. guianense. Observamos um aumento na expressão de transcritos para a classe S e expecionalmente em SVEP, e nos subgrupos síntese de proteína e metabolismo energético da classe C, em relação a outros sialotranscriptomas de Simulium. O proteoma confirmou 28 das 32 famílias de proteínas encontradas no transcriptoma e disponibilizamos 101 sequências de proteínas de interesse para o NCBI. Essa é a primeira descrição de um sialoma (do grego Greek Sialo=saliva) de um vetor de oncocercose. Assim, nossos resultados ajudam no entendimento do papel da saliva de Simulium na transmissão de Onchocerca volvulus e para a evolução de proteínas salivares em simulídeos, além de consistir numa plataforma de novos compostos antihemostáticos e candidatos a vacina contra oncocercose.