Στην παρούσα διπλωματική εργασία μελετήθηκε η αποδέσμευση τριών βιοδραστικών ουσιών με διαφορετική διαλυτότητα στο νερό, από υδρόφιλες μήτρες αποτελούμενες από άλατα του φωσφορικού ασβεστίου. Οι υδρόφιλες μήτρες κυρίως πολυμερών, χρησιμοποιούνται ευρύτατα στην ελεγχόμενη αποδέσμευση βιοδραστικών ουσιών από στερεές φαρμακοτεχνικές μορφές διότι μπορούν να παρέχουν τα απαιτούμενα χαρακτηριστικά αποδέσμευσης (ρυθμός και ποσοστό αποδέσμευσης έναντι χρόνου). Σημαντικά πλεονεκτήματα των αλάτων του φωσφορικού ασβεστίου είναι το χαμηλό κόστος παραγωγής των και το γεγονός ότι πρόκειται για βιοσυμβατά και βιοδιασπώμενα υλικά. Οι βιοδραστικές ενώσεις που μελετήθηκαν ήταν η καφεϊνη, η θεοφυλλίνη και η θεοβρωμίνη που έχουν την ίδια βασική χημική δομή και ανήκουν στην κατηγορία των μεθυλοξανθινών, αλλά έχουν διαφορετική διαλυτότητα στο νερό. Οι υδρόφιλες μήτρες των αλάτων του φωσφορικού ασβεστίου που μελετήθηκαν στην παρούσα εργασία ήταν α) δισκία τα οποία παρασκευάσθηκαν με συμπίεση μιγμάτων των αλάτων του φωσφορικού ασβεστίου και της βιοδραστικής ένωσης με ορισμένη σύσταση και β) οστικά τσιμέντα τα οποία παρασκευάσθηκαν με επεξεργασία μίγματος αλάτων του φωσφορικού ασβεστίου και της βιοδραστικής ένωσης με φωσφορικό οξύ. Μελετήθηκε η μεταβολή του ρυθμού και του ποσοστού αποδέσμευσης των βιοδραστικών ουσιών έναντι του χρόνου α) για διαφορετικές συστάσεις της υδρόφιλης μήτρας, β) με την υδατοδιαλυτότητα της βιοδραστικής ένωσης, γ) με την ταχύτητα ανάδευσης του μέσου διαλυτοποίησης και δ) με την σύσταση του μέσου διαλυτοποίησης. Επίσης τα κινητικά δεδομένα (ποσοστό αποδέσμευσης έναντι του χρόνου) αναλύθηκαν με βάση ορισμένα κινητικά πρότυπα προκειμένου να προσδιορισθεί το κινητικό πρότυπο ή πρότυπα που καθορίζουν την αποδέσμευση των παραπάνω βιοδραστικών ενώσεων από τα δισκία και τα οστικά τσιμέντα αλάτων του φωσφορικού ασβεστίου. / -

Glucose phosphate isomerase (GPI) was purified from human placenta utilizing cross-linked spherical particle phosphocellulose. In three steps, GPI could be purified approximately 5500 fold with greater than 50% recovery. The purified enzyme exhibited four bands upon non-denaturing PAGE and isoelectric focusing (IEF) when stained with GPI specific activity stain. The four isozymes were isolated by preparative IEF. The isoelectric points of the isozymes were determined. Sodium dodecyl sulfate (SDS) gel electrophoresis showed two types of subunits with different molecular weights. Structural analyses showed both types of subunits had blocked amino termini. Other properties of the isozymes and subunits, including immunological reactivity, pH stability, peptide mapping and amino acid composition, were also established.

Orientador: Jacinta Enzweiler / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Geociencias / Made available in DSpace on 2018-08-08T10:56:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Bosso_SergioTagliaferri_D.pdf: 3507482 bytes, checksum: 382e63843f28e5d40450a8a59a249945 (MD5) Previous issue date: 2007 / Resumo: Os 50 anos de extração e beneficiamento de minérios de chumbo, em Adrianópolis (PR), geraram uma grande quantidade de rejeitos, parte dos quais ainda se encontra disposta nas imediações da refinaria que existia na localidade. Solos da área acumularam chumbo e apresentam concentrações anômalas deste elemento. A ingestão acidental de solos contaminados por chumbo, e de poeiras deles derivadas, é considerada a principal rota para a absorção de Pb, especialmente para crianças, que têm mais contato com solos e também por características do seu organismo, são mais suscetíveis que adultos aos efeitos adversos do chumbo. Em outros estudos, realizados com a população local, um número significativo de crianças e adultos apresentou concentrações de Pb no sangue acima dos valores recomendados, porém a rota de absorção não foi estabelecida. Sabe-se que a biodisponibilidade depende das fases em que o Pb se encontra e não apenas da sua concentração total, e que a fração bioacessível, isto é, solúvel em condições gastro-intestinais, permite inferir sobre os riscos que os materiais apresentam. Neste trabalho, oito amostras de solos ([Pb]= 0,04 ? 4,1% m/m) e quatro de rejeitos ([Pb]= 1,2 - 15 % m/m) da área foram usadas para estimar a bioacessibilidade do Pb em pH=1,5 (estômago) e pH=7 (intestino). Em três testes diferentes, o Pb de todas amostras de solos e de três rejeitos apresentou elevada solubilidade (5090%) nas soluções de simulação gástrica e bem menor (2-22%) nas de simulação intestinal. Nas amostras de solos, nenhuma fase de Pb foi identificada por difração de raios X, mas nos rejeitos havia óxidos de Pb, cerussita e lanarkita, que se caracterizam pela solubilidade em meio ácido, mas a presença de outras fases não pode ser descartada. As mesmas fases foram observadas por microscopia eletrônica de varredura (MEV), tanto nos solos como nos rejeitos. O Pb de uma das amostras de rejeito é menos solúvel (~ 20% em meio ácido) e nela foram identificados, entre outras fases, plumbogumita e plumbojarosita, que são menos solúveis. Amostras de dois solos e dois rejeitos foram colocados em contato com três materiais fosfatados (dihidrogenofosfato de sódio, superfosfato e rocha fosfática), com o objetivo de transformar as fases de Pb mais solúveis em fosfatos de Pb, que são menos solúveis. A bioacessiblidade do Pb após tratamentos por 1, 3 e 6 meses foi reduzida em 90% em pH ácido. Na análise elementar dos produtos formados, realizada no MEV, foi possível identificar a associação de Pb com P em vários grãos, principalmente nos rejeitos com maior teor de Pb. Estes resultados indicam que a aplicação direta de compostos fosfatados aos solos contaminados pode ser uma alternativa para diminuir a biodisponibilidade do Pb nesses materiais. / Abstract: The extraction and refining of lead ores in Adrianópolis (Paraná state, Brazil) for approximately 50 years produced a large amount of wastes, from which part is disposed nearby the former plant. As a consequence of lead processing, Pb has accumulated in soils of the area, which present anomalous concentrations of this element. The incidental ingestion of lead contaminated soils, and derived dusts, is considered as the main route for Pb absorption, specially for children, because they usually have more contact with soils and due to characteristics of their organisms, they are more susceptible to the adverse effects of Pb than adults. In other studies with local population, it was shown that a significant number of children and adults had Pb blood levels above recommended values. It is known that bioavailability depends on Pb speciation rather than just on total concentration, and that the risks presented by the materials can be inferred measuring bioaccessible fraction, i.e., soluble in gastric-intestinal conditions. In this work, eight samples of soils ([Pb]= 0.04 ? 4.1% m/m) and four of wastes ([Pb]= 1.2 - 15 % m/m) from the area were used to estimate bioaccessibility of Pb in pH=1,5 (stomach) e pH=7 (intestine). In three different tests, lead form all soil samples and from three wastes presented high solubility (50-90%) in gastric condition and much lower (2-22%) for intestinal conditions. None Pb phase was identified by X-ray diffraction in soil samples, but wastes contain were Pb oxides, cerussite and lanarkite, which are characterized by solubility in acid media, but the presence of other phases cannot be precluded. The same phases were observed by scanning electron microscopy (SEM) in soils and in wastes. One waste had less soluble Pb (~ 20% in acid pH). In this sample, among other phases, plumbogummite e plumbojarosite, which are les soluble, were identified. Two of the soils and of the wastes were put in contact with three phosphatic materials (sodium dihydrogen phosphate, super phosphate and phosphatic rock), to transform the more soluble Pb phases into Pbphosphates, which are less soluble. The bioaccessible fraction of Pb in the products, measured after 1, 3 and 6 months of treatment, was reduced in up to 90% in acidic pH. With elemental analysis of the products, by EDS-SEM, association between Pb and P was observed in several grains, specially in wastes with higher lead content. Theses results suggest that the direct application of phosphatic compounds on the contaminated soils could decrease the Pb bioavailability of these materials. / Doutorado / Metalogenese / Doutor em Geociências

Neste trabalho foram estudados novos eletrólitos poliméricos e vidros fosfatos utilizando a técnica de Ressonância Magnética Nuclear. Os eletrólitos estudados foram o poliéster (etileno glicol / ácido cítrico - EG/AC) e os filmes de hidroxietilcelulose (HEC) entrecruzados com diisocianatos de poli (óxido de etileno) e poli (óxido de propileno), ambos dopados com sais de lítio No estudo dos eletrólitos poliméricos, foram realizadas medidas da forma de linha e da taxa de relaxação spin-rede do 1H e do 7Li em função da temperatura e da viscosidade, com objetivo de estudar a mobilidade da cadeia polimérica e dos íons lítio. Os valores para o tempo de correlação, obtidos dos dados de relaxação, mostram que a mobilidade da cadeia polimérica e dos íons lítio são comparáveis aos encontrados em outros eletrólitos poliméricos similares Os sistemas vítreos estudados foram o vidro fosfato In(PO3)3 e o sistema binário (1-x)In(PO3)3 - xBaF2, com o objetivo de determinar o grau de polimerização da cadeia de fosfatos. Os estudos do 31P MAS RMN para diferentes tempos de fusão dos vidros fosfatos, permitiram verificar que presença da água reduz o comprimento da cadeia pela hidrólise das ligações P-O-P produzindo duas cadeias com grupos terminais -P-OH. A adição do BaF2 no vidro fosfato, reduz o comprimento da cadeia de fosfatos formando oxigênio não ponteante. Altas concentrações do BaF2 causa a depolimerização da cadeia de fosfatos formando grupos pirofosfatos (Q1) e grupos ortofosfatos (Q0). / In this work we report the study of new polymer electrolytes and phosphate glasses using Nuclear Magnetic Resonance (NMR) technique. The polymer electrolytes studied were polyester (glycol ethylene / citric acid) and films formed by hydroxyethylcelluloses (HEC), poly(ethy1ene oxide) and poly(propy1ene oxide) diisocyanates, both with lithium salt. To study the mobility of polymer chains and lithium ions in the polymer electrolytes, measurements of the temperature and viscosity dependence of 1H e do 7Li lineshape and spin-lattice relaxation rate were realized. The correlation times obtained from relaxation data, show that the mobility of polymer chains and lithium ions are comparable to those found in other similar polymer electrolytes. The degree of polymerization of the phosphate chain was studied in phosphate glass In(PO3)3 and in the binary system(1-x)In(PO3)3 - xBaF2. The 31P MAS NMR for different melting times, indicate that the water reduces the chain length by hydrolyzing P-O-P bonds to produce two separated chains, terminated by -P-OH groups. The addition of BaF2 in the phosphate glass, reduces the phosphate chain length by forming non-bridging oxygen ions. High concentration of BaF2 causes depolymerization of the phosphate chain to create pyrophosphate groups (Q1) and orthophosphate groups (Q0).

Neste trabalho foram estudados novos eletrólitos poliméricos e vidros fosfatos utilizando a técnica de Ressonância Magnética Nuclear. Os eletrólitos estudados foram o poliéster (etileno glicol / ácido cítrico - EG/AC) e os filmes de hidroxietilcelulose (HEC) entrecruzados com diisocianatos de poli (óxido de etileno) e poli (óxido de propileno), ambos dopados com sais de lítio No estudo dos eletrólitos poliméricos, foram realizadas medidas da forma de linha e da taxa de relaxação spin-rede do 1H e do 7Li em função da temperatura e da viscosidade, com objetivo de estudar a mobilidade da cadeia polimérica e dos íons lítio. Os valores para o tempo de correlação, obtidos dos dados de relaxação, mostram que a mobilidade da cadeia polimérica e dos íons lítio são comparáveis aos encontrados em outros eletrólitos poliméricos similares Os sistemas vítreos estudados foram o vidro fosfato In(PO3)3 e o sistema binário (1-x)In(PO3)3 - xBaF2, com o objetivo de determinar o grau de polimerização da cadeia de fosfatos. Os estudos do 31P MAS RMN para diferentes tempos de fusão dos vidros fosfatos, permitiram verificar que presença da água reduz o comprimento da cadeia pela hidrólise das ligações P-O-P produzindo duas cadeias com grupos terminais -P-OH. A adição do BaF2 no vidro fosfato, reduz o comprimento da cadeia de fosfatos formando oxigênio não ponteante. Altas concentrações do BaF2 causa a depolimerização da cadeia de fosfatos formando grupos pirofosfatos (Q1) e grupos ortofosfatos (Q0). / In this work we report the study of new polymer electrolytes and phosphate glasses using Nuclear Magnetic Resonance (NMR) technique. The polymer electrolytes studied were polyester (glycol ethylene / citric acid) and films formed by hydroxyethylcelluloses (HEC), poly(ethy1ene oxide) and poly(propy1ene oxide) diisocyanates, both with lithium salt. To study the mobility of polymer chains and lithium ions in the polymer electrolytes, measurements of the temperature and viscosity dependence of 1H e do 7Li lineshape and spin-lattice relaxation rate were realized. The correlation times obtained from relaxation data, show that the mobility of polymer chains and lithium ions are comparable to those found in other similar polymer electrolytes. The degree of polymerization of the phosphate chain was studied in phosphate glass In(PO3)3 and in the binary system(1-x)In(PO3)3 - xBaF2. The 31P MAS NMR for different melting times, indicate that the water reduces the chain length by hydrolyzing P-O-P bonds to produce two separated chains, terminated by -P-OH groups. The addition of BaF2 in the phosphate glass, reduces the phosphate chain length by forming non-bridging oxygen ions. High concentration of BaF2 causes depolymerization of the phosphate chain to create pyrophosphate groups (Q1) and orthophosphate groups (Q0).

Submitted by CLAUDIA VILALVA CASSARO null (claudia.v.cassaro@gmail.com) on 2018-03-21T13:51:17Z No. of bitstreams: 1 dissertacao claudia_cassaroFINAL.pdf: 3809022 bytes, checksum: a5c8891039ce6bc569b42ee66058c846 (MD5) / Rejected by Luciana Pizzani null (luciana@btu.unesp.br), reason: Solicitamos que realize uma nova submissão seguindo as orientações abaixo: Necessário fazer as seguintes correções no arquivo submetido: problema 1: Assinalar a agência de fomento (no seu caso CAPES). problema 2: No campo número do financiamento: colocar o número do processo. Assim que tiver efetuado as correções submeta o arquivo em PDF novamente. Agradecemos a compreensão. on 2018-03-22T12:35:28Z (GMT) / Submitted by CLAUDIA VILALVA CASSARO null (claudia.v.cassaro@gmail.com) on 2018-03-22T15:52:41Z No. of bitstreams: 1 dissertacao claudia_cassaroFINAL.pdf: 3809022 bytes, checksum: a5c8891039ce6bc569b42ee66058c846 (MD5) / Approved for entry into archive by ROSANGELA APARECIDA LOBO null (rosangelalobo@btu.unesp.br) on 2018-03-23T12:00:14Z (GMT) No. of bitstreams: 1 cassaro_cv_me_bot.pdf: 3809022 bytes, checksum: a5c8891039ce6bc569b42ee66058c846 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-03-23T12:00:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 cassaro_cv_me_bot.pdf: 3809022 bytes, checksum: a5c8891039ce6bc569b42ee66058c846 (MD5) Previous issue date: 2018-02-23 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O reparo do tecido ósseo é um desafio antigo da ciência mundial. A partir das décadas de 70-80, os biomateriais passaram a ser explorados e hoje desempenham importante papel na engenharia tecidual. Estes, quando aplicados na enxertia óssea, devem ser bioativos, biocompatíveis e reabsorvíveis. A integração entre os diversos materiais de origem sintética e os arcabouços biológicos possui amplo espectro de uso. Dentre os arcabouços destacam-se os compostos à base de fibrina por suas propriedades hemostáticas, estabilidade e morfologia favorável à proliferação celular. A presente revisão abordou a estrutura e constituição do tecido ósseo e suas limitações no processo de reparo, a relevância da engenharia tecidual aplicada à esta finalidade e os biomateriais utilizados para otimizar tal processo, com ênfase especial aos materiais compostos por fosfatos de cálcio, células tronco mesenquimais e sua aplicação junto ao arcabouço biológico selante de fibrina, com destaque para o selante heterólogo de fibrina, agora denominado biopolímero de fibrina, um produto único e em fase de testes em experimentação animal e estudos clínicos. Propõe-se, ao final desta, uma nova abordagem para a regeneração de defeitos ósseos de ratos baseada na associação entre o selante heterólogo de fibrina, o fosfato de cálcio bifásico e células tronco mesenquimais. / Bone tissue repair is an ancient challenge of world science. From the 70s and 80s, biomaterials began to be explored and nowadays play an important role in tissue engineering. These, when applied in bone grafting, have to be bioactive, biocompatible and resorbable. The integration between the various materials of synthetic origin and biological scaffolds has a wide spectrum of use. Among these scaffolds, fibrin-based compounds are distinguished by their hemostatic properties, stability and morphology favorable to cell proliferation. The present review addressed the structure and constitution of bone tissue and its limitations in the repair process, the relevance of tissue engineering approaches applied to this purpose and the biomaterials used to optimize this process, with special emphasis on materials composed of calcium phosphates, mesenchymal stem cells and its application with the biological sealant fibrin scaffold, highlighting the heterologous fibrin sealant, now named as fibrin biopolymer, a unique product testing in animal experimentation and clinical studies. At the end of this, a new approach is proposed for the regeneration of rat bone defects based on the association between heterologous fibrin sealant, biphasic calcium phosphate and mesenchymal stem cells.

Orientador: Benedito Barraviera / Resumo: O reparo do tecido ósseo é um desafio antigo da ciência mundial. A partir das décadas de 70-80, os biomateriais passaram a ser explorados e hoje desempenham importante papel na engenharia tecidual. Estes, quando aplicados na enxertia óssea, devem ser bioativos, biocompatíveis e reabsorvíveis. A integração entre os diversos materiais de origem sintética e os arcabouços biológicos possui amplo espectro de uso. Dentre os arcabouços destacam-se os compostos à base de fibrina por suas propriedades hemostáticas, estabilidade e morfologia favorável à proliferação celular. A presente revisão abordou a estrutura e constituição do tecido ósseo e suas limitações no processo de reparo, a relevância da engenharia tecidual aplicada à esta finalidade e os biomateriais utilizados para otimizar tal processo, com ênfase especial aos materiais compostos por fosfatos de cálcio, células tronco mesenquimais e sua aplicação junto ao arcabouço biológico selante de fibrina, com destaque para o selante heterólogo de fibrina, agora denominado biopolímero de fibrina, um produto único e em fase de testes em experimentação animal e estudos clínicos. Propõe-se, ao final desta, uma nova abordagem para a regeneração de defeitos ósseos de ratos baseada na associação entre o selante heterólogo de fibrina, o fosfato de cálcio bifásico e células tronco mesenquimais. / Abstract: Bone tissue repair is an ancient challenge of world science. From the 70s and 80s, biomaterials began to be explored and nowadays play an important role in tissue engineering. These, when applied in bone grafting, have to be bioactive, biocompatible and resorbable. The integration between the various materials of synthetic origin and biological scaffolds has a wide spectrum of use. Among these scaffolds, fibrin-based compounds are distinguished by their hemostatic properties, stability and morphology favorable to cell proliferation. The present review addressed the structure and constitution of bone tissue and its limitations in the repair process, the relevance of tissue engineering approaches applied to this purpose and the biomaterials used to optimize this process, with special emphasis on materials composed of calcium phosphates, mesenchymal stem cells and its application with the biological sealant fibrin scaffold, highlighting the heterologous fibrin sealant, now named as fibrin biopolymer, a unique product testing in animal experimentation and clinical studies. At the end of this, a new approach is proposed for the regeneration of rat bone defects based on the association between heterologous fibrin sealant, biphasic calcium phosphate and mesenchymal stem cells. / Mestre

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / The manipulation of oocytes enclosed in follicles Ovarian Pre-Antral, allows increasing the reproductive potential of females from the isolation and cultivation. The follicular viability can be affected negatively correlated with age, malnutrition, exposure to radio or chemotherapy and health conditions. The alternatives are to use these research for development of culture media which provides the maintenance of viability allows the activation and follicular development in vitro, for subsequent fertilization. Physiologically various growth factors are involved in the process of folliculogenesis, many of which have so far not been tested in goats. Among them the Sphingosine 1-phosphate (S1P) and Leukemia Inhibitory Factor (LIF), since, follicular development were obtained with these factors in other species, allowing follicular growth and ant apoptotic effect on ovarian tissue. The aim of this study was to evaluate the addition of different concentrations of S1P and the LIF to culture media separately, evaluating the maintenance of viability, activation and follicular development. Thus, the preantral follicle cultured with S1P in situ LIF for 7 days and follicular development as possible to maintain viability, activation and growth of preantral follicle in vitro. Concluding that the S1P 1 ng/ml LIF and 10ng/ml, were the concentration that the maintenance of viability and follicular activation of in situ and grown in vitro for 7 days improved the viability, activation and preantral follicular growth. / A Manipulação de Oócito Incluso em Folículos Ovariano Pré-Antral (MOIFOPA) possibilita o aumento do potencial reprodutivo das fêmeas a partir do isolamento e cultivo de FOPA. A viabilidade folicular pode sofrer influências negativas com a idade, desnutrição, exposição a rádio ou quimioterápicos e condições sanitárias adversas. As alternativas para aproveitamento desses FOPA são pesquisas voltadas para elaboração de meios de cultivos que proporcione o manutenção da viabilidade a possibilite a ativação e o desenvolvimento folicular in vitro, para posterior fertilização. Fisiologicamente vários fatores de crescimento estão envolvidos durante o processo da foliculogênese, muitos dos quais até o momento não foram testados em cabras. Dentre eles, a Esfingosina 1-fosfato (S1P) e o Fator Inibidor da Leucemia (LIF), uma vez que, o desenvolvimento folicular foram obtido com esses fatores em outras espécies, possibilitando crescimento folicular e efeito anti-apoptótico no tecido ovariano. O objetivo desse trabalho foi avaliar a adição de diferentes concentrações de S1P e o do LIF separadamente aos meios de cultivo, avaliando a manutenção da viabilidade, ativação e desenvolvimento folicular. Dessa forma, os FOPA cultivados in situ com S1P e LIF por 7 dias possibilitaram desenvolvimento folicular conforme a manutenção da viabilidade, ativação e crescimento dos FOPA in vitro. Concluindo que a S1P 1ng/ml e o LIF 10ng/ml, foram as concentração que condicionaram a manutenção da viabilidade e a ativação dos FOPA in situ cultivados in vitro por 7 em dias melhor mantiveram a viabilidade, ativação e crescimento folicular.