Animal and Plant Health Inspection Service (APHIS), la primera autoridad encargada del control sanitario del Departamento de Agricultura de los Estados Unidos de Norteamérica, en el 2000 notificó la detención de embarques de espárrago fresco procedente de Perú con infestaciones de huevos y larvas de Copitarsia sp., ante este acontecimiento se estableció la fumigación con Bromuro de Metilo como requisito fitosanitario de los embarques de espárrago fresco peruano antes de su ingreso a los Estados Unidos. Sin embargo su uso excesivo está originando a la industria del espárrago fresco costos estimados de US$ 2.6 millones, pérdidas de calidad, reducción de tiempo de vida útil del producto y ruptura de la cadena de frío. Pogue y Simmons en el 2008 dieron a conocer una nueva especie, Copitarsia corruda, antes considerada Copitarsia decolora (Simmons y Pogue 2004), debido a que son especies crípticas, pero en la morfología interna (genitalia) y a nivel molecular, son distintas. Por tanto se busca implementar alternativas de control de esta especie, usando un controlador biológico del género Trichogramma, parasitoide principalmente de huevos de Lepidópteros. Por tal razón, en el presente trabajo de investigación se propuso realizar pruebas experimentales en el Laboratorio de Ensayos bajo condiciones ambientales normales para determinar la actividad parasítica del género Trichogramma sobre huevos de Copitarsia corruda, ya que tiende a matar a la plaga antes de que cause daño sobre los cultivos de espárrago. El objetivo principal de la investigación es evaluar la eficiencia de ocho especies de Trichogramma (T. atopovirilia, T. cacoeciae, T. dendrolimi, T. exiguum, T. galloi, T. nerudai, T. pintoi y T. pretiosum) sobre huevos de Copitarsia corruda. Por tanto, los resultados sugieren que T. nerudai y T. galloi son los más eficientes en comparación al resto de especies parasitoides del mismo género. Palabras claves: Copitarsia corruda, Trichogramma, Parasitoide, Espárrago, eficiente, oviposición. / *** Animal and Plant Health Inspection Service (APHIS), the First Authority of sanitary control of the Department of Agriculture of the United States of North America, in 2000 reported the detention of shipments of fresh asparagus from Peru with infestations of eggs and larvae of Copitarsia sp., before this event to established the fumigation with methyl bromide as phytosanitary requirement shipments of Peruvian fresh asparagus before coming to the United States. But overuse is giving rise to fresh asparagus industry estimated costs of $ 2.6 million, loss of quality, reduction of shelf life of the product and rupture of the cold chain. Pogue and Simmons in 2008 released a new species, Copitarsia corruda, once considered Copitarsia decolora (Simmons y Pogue 2004), because they are cryptic species, but internal morphology (genitaly) and molecular level are different. Therefore seeks to implement alternative control of this species, using a biological control agent of the genus Trichogramma parasitoid of eggs lepidoptera mainly. For this reason, in this research work is proposed to realize some experimental testing at the Test Laboratory under normal environment conditions to determine the parasitic activity of the genus Trichogramma on eggs Copitarsia corruda, as it tends to kill the pest before it causes damage on crops of asparagus. Therefore, the main objective of the research is to evaluate the efficiency of eight species of Trichogramma (T. atopovirilia, T. cacoeciae, T. dendrolimi, T. exiguum, T. galloi, T. nerudai, T. pretiosum and T. pintoi) on eggs Copitarsia corruda. The results suggest that T. nerudai and T. galloi are more efficient compared to other parasitoid species of the same genus. Keywords: Copitarsia corruda, Trichogramma, parasitoid, Asparagus, efficient. Oviposition.

Existen muy pocos datos sobre la incidencia de hongos toxicogénicos en uvas cultivadas en Sudamérica. Los estudios realizados son orientados principalmente a la determinación de especies potenciales productoras de OTA, principal micotoxina regulada en vinos a nivel mundial. Así mismo, es escasa la información sobre la incidencia de otras especies toxicogénicas y sus toxinas en uvas, jugos y vinos de la región. El objetivo de la investigación consistió en aislar e identificar hongos potencialmente toxicogénicos de uvas cultivadas en la provincia de Río Negro, Argentina y determinar la capacidad toxicogénica de los mismos. Se analizaron 10 muestras de uvas de variedad Malbec de los viñedos de las localidades de Villa Azul y Maiqué en la Provincia de Río Negro. Se aislaron 441 cepas de hongos, de los cuales el 40.8% pertenece al género Penicillium y el 21.8% al género Alternaria. Se realizó la identificación a nivel grupo-especie de los aislamientos pertenecientes éstos géneros. Se obtuvieron 85 aislamientos pertenecientes al género Alternaria, de los cuales 5 pertenecían al grupo-especie A. alternata, 5 al grupo-especie A. arborescens y 75 al grupo-especie A. tenuissima. Así mismo, se determinaron los perfiles de producción (AOH, AME y AT) de los aislamientos, encontrándose que todos produjeron al menos una toxina y el 66% produjeron tres toxinas. Del mismo modo, se identificaron 43 cepas de Penicillium expansum, evaluándose la capacidad de producir patulina, resultando todos productores de la toxina en medio de cultivo. Todos los aislamientos produjeron la lesión característica al ser inoculados en manzanas y el 95% produjo patulina en este sustrato. La alta incidencia de especies toxicogénicas de Alternaria y de Penicillium expansum en uvas de la región patagónica representa un riesgo que debe ser evaluado. No se encontraron cepas del género Aspergillus, lo que permitiría inferir que esta región presenta una ventaja competitiva, ya que el riesgo toxicológico atribuible a la presencia de OTA en los vinos estaría muy disminuido y al ser esta la única micotoxina regulada a nivel global, es de interés que los productos de la región cumplan con los estándares internacionales de calidad. La metodología desarrollada en el presente trabajo podría ser aplicada para determinar el potencial riesgo de contaminación con micotoxinas de uvas y subproductos en países de Sudamérica, como el Perú, donde existen escasos datos sobre dicha contaminación.

Se realizó la caracterización morfológica, fisiológica y molecular de tres cepas de Beauveria brongniartii: CIPCa18(85), CIPCu1(44) y CIPH1(1), además de evaluar su actividad entomopatógena en Phthorimaea operculella y Symmetrischema tangolias. La cepa CIPCu1(44) presentó conidias redondas, pequeñas y la formación de sinemas, diferenciándose de las cepas CIPCa18(85) y CIPH1(1) que presentaron conidias elipsoidales. El análisis molecular mediante la técnica RAPD permitió determinar que esta cepa estaba genéticamente más relacionada con la cepa de Beauveria bassiana CIPLM1 (50.4% de similaridad). Al evaluar la actividad entomopatógena de las tres cepas en larvas de primer estadío de P. operculella y S. tangolias, se encontró que utilizando 1 x 109 conidias/ml el porcentaje de mortalidad fue hasta del 100%. Se determinó que para P. operculella la CL50 de las cepas CIPCa18(85), CIPCu1(44) y CIPH1(1) fue 2.71 x 105, 5.53 x 105 y 5.19 x 105 conidias/ml y la CL90 fue 6.81 x 106, 1.22 x 107 y 5.97 x 106 conidias/ml, mientras que para S. tangolias la CL50 para las cepas CIPCa18(85), CIPCu1(44) y CIPH1(1) fue 1.16 x 106, 9.37 x 106 y 4.52 x 106 conidias/ml y la CL90 fue 6.01 x 107, 1.46 x 109 y 2.17 x 108 conidias/ml respectivamente. En ensayos posteriores se determinó que la cepas de B. brongniartii necesitaron mayor tiempo (9-10 días) para que las CL50 pudieran causar el 50% de mortalidad a las larvas de primer estadío de S. tangolias mientras que sólo necesitaron 3 a 5 días para causar el 50% de mortalidad en P. operculella. Posteriormente se evaluó cada CL50 y CL90 en huevos, larvas de último estadío y pupas de P. operculella y S. tangolias, encontrándose que todos los estados de desarrollo fueron susceptibles con diferente grado de infección. En todas estas evaluaciones, la cepa CIPCa18(85) presentó la mejor actividad entomopatógena para el control de P. operculella y S. tangolias. / --- The objective of this research was to carry out morphological, phisiological and molecular characterization of three isolates of Beauveria brongniartii: CIPCa18(85), CIPCu1(44) y CIPH1(1). In addition, entomogenous activity was tested in Phthorimaea operculella y Symmetrischema tangolias. Isolate CIPCu1(44) showed shorter and spherical conidia while isolates CIPCa18(85) y CIPH1(1) showed tipical elipsoidal conidia. RAPD technique showed a relation between isolates CIPCu1(44) and CIPLM1 (B. bassiana) with 50.4% of similarity. Patogegenicity test showed that isolates were effective to first instar larves, the use of 1 x 109 conidia/ml caused until 100% mortality for both insects. CL50 for isolates CIPCa18(85), CIPCu1(44) and CIPH1(1) obtained in P. operculella larves were 2.71 x 105, 5.53 x 105 and 5.19 x 105 conidias/ml and CL90 for each isolate were 6.81 x 106, 1.22 x 107 and 5.97 x 106 conidias/ml respectively. CL50 for isolates CIPCa18(85), CIPCu1(44) and CIPH1(1) obtained in S. tangolias were 1.16 x 106, 9.37 x 106 and 4.52 x 106 conidias/ml and CL90 for each isolate were 6.01 x 107, 1.46 x 109 and 2.17 x 108 conidias/ml respectively. In other essays, isolates of B. brongniartii needed more time to kill 50% of S. tangolias larves (9 to 10 days) while isolates of B. brongniartii needed only 3 to 5 days to kill 50% of P. operculella. With CL90, isolates needed about 3 days for both insects. Finally, each CL50 y CL90 of three isolates were tested in eggs, last instar larves and pupae, results showed that all develop stages were susceptible to B. brongniartii. Isolate CIPCa18(85) showed the best entomogenous activity to make control of P. operculella y S. tangolias because it came of the same insect order, we suggest more studies with this isolate in greenhouse.

Las Enfermedades Transmitidas por Alimentos (ETA) y dentro de ellas las parasitarias constituyen un grave problema de salud pública por la alta morbilidad que generan a nivel mundial y por sus repercusiones económicas, con mayor énfasis en países en desarrollo como el Perú. En nuestro país, las enteroparasitosis presentan alta prevalencia y dentro de ellas las producidas por protozoos que afectan a niños y a inmunosuprimidos por ser los más susceptibles; debido a la naturaleza de su mecanismo de transmisión que por lo general es fecal-oral, interviniendo para ello el agua y alimentos contaminados con las formas parasitarias infectantes de estos protozoos. El presente estudio tuvo como objetivo determinar el grado de contaminación por enteroparásitos en verduras crudas expendidas en establecimientos de consumo público de alimentos del Distrito de Cercado de Lima. Se recolectaron al azar 105 muestras de lechuga (Lactuca sativa) de restaurantes, cebicherías y pollerías de la zona en estudio. Las muestras fueron procesadas por el método directo de observación y por la técnica de coloración de Ziehl Neelsen modificado, encontrándose un porcentaje de 12.38 ± 6.29 % de contaminación enteroparasitaria, obteniéndose 1.9 % para Giardia sp, 3.81% para Isospora sp, 6.67 % para Cryptosporidium parvum. Por los resultados hallados en el presente estudio se recomienda el monitoreo continuo a todo establecimiento de consumo público de alimentos a cargo de entidades competentes como las municipalidades y Ministerio de Salud. Así como el diseño de sistemas de prevención y control.

El presente trabajo de investigación se realizó en la gestión agrícola 2008 a 2009 en la comunidad de Calahuancani del municipio de Ancoraimes provincia Omasuyos del departamento de La Paz. Los objetivos fueron: a) Evaluar la fluctuación poblacional de la polilla de la quinua (larvas y adulto) a lo largo de las fases fenológicas del cultivo de la quinua. b) Evaluar el efecto de la precipitación, humedad relativa y temperatura en la fluctuación poblacional de la kcona kcona o polilla de la quinua. c) Evaluar el rendimiento de grano de variedades de quinua entre los tratamientos de infestación de larvas. d) Realizar el análisis económico del cultivo bajo los niveles de infestación con larvas. La siembra se realizó el 7 de Noviembre del 2008 empleando una densidad de siembra de 9 kg/ha. Para evaluar el efecto de la precipitación, humedad relativa y la temperatura en la fluctuación poblacional de la polilla de la quinua, se utilizó correlación multiple recomendada por Little y Hills (1976). y para evaluar el rendimiento de grano entre los tratamientos de infestación larval, se utilizó el diseño Bloques al Azar en parcelas divididas. Para evaluar la fluctuación poblacional de larvas de polillas de la quinua se realizó por el método de manta entomológica (método directo), estas evaluaciones se realizaron cada siete días desde la fase fenológica de dos hojas verdaderas hasta madures fisiológica de la quinua. Para evaluar la población de insecto adulto se utilizó trampas luz y su posterior conteo del insecto plaga en todas las fases fenológicas, cada siete días. La fluctuación de larvas polilla de la quinua en la gestión agrícola 2008-2009, se presento larvas en su primera generación en las fases fenológicas de seis hojas verdaderas y ramificación causando daños en las hojas en forma de minas y la segunda generación la mas agresiva en las fases fenológicas de floración a madures fisiológico en las dos variedades, en mayor población de larvas de polilla de la quinua en la variedad Jiwaki con respecto a la variedad Toledo.

Las Enfermedades Transmitidas por Alimentos (ETA) y dentro de ellas las parasitarias constituyen un grave problema de salud pública por la alta morbilidad que generan a nivel mundial y por sus repercusiones económicas, con mayor énfasis en países en desarrollo como el Perú. En nuestro país, las enteroparasitosis presentan alta prevalencia y dentro de ellas las producidas por protozoos que afectan a niños y a inmunosuprimidos por ser los más susceptibles; debido a la naturaleza de su mecanismo de transmisión que por lo general es fecal-oral, interviniendo para ello el agua y alimentos contaminados con las formas parasitarias infectantes de estos protozoos. El presente estudio tuvo como objetivo determinar el grado de contaminación por enteroparásitos en verduras crudas expendidas en establecimientos de consumo público de alimentos del Distrito de Cercado de Lima. Se recolectaron al azar 105 muestras de lechuga (Lactuca sativa) de restaurantes, cebicherías y pollerías de la zona en estudio. Las muestras fueron procesadas por el método directo de observación y por la técnica de coloración de Ziehl Neelsen modificado, encontrándose un porcentaje de 12.38 ± 6.29 % de contaminación enteroparasitaria, obteniéndose 1.9 % para Giardia sp, 3.81% para Isospora sp, 6.67 % para Cryptosporidium parvum. Por los resultados hallados en el presente estudio se recomienda el monitoreo continuo a todo establecimiento de consumo público de alimentos a cargo de entidades competentes como las municipalidades y Ministerio de Salud. Así como el diseño de sistemas de prevención y control.

Se realizó la caracterización morfológica, fisiológica y molecular de tres cepas de Beauveria brongniartii: CIPCa18(85), CIPCu1(44) y CIPH1(1), además de evaluar su actividad entomopatógena en Phthorimaea operculella y Symmetrischema tangolias. La cepa CIPCu1(44) presentó conidias redondas, pequeñas y la formación de sinemas, diferenciándose de las cepas CIPCa18(85) y CIPH1(1) que presentaron conidias elipsoidales. El análisis molecular mediante la técnica RAPD permitió determinar que esta cepa estaba genéticamente más relacionada con la cepa de Beauveria bassiana CIPLM1 (50.4% de similaridad). Al evaluar la actividad entomopatógena de las tres cepas en larvas de primer estadío de P. operculella y S. tangolias, se encontró que utilizando 1 x 109 conidias/ml el porcentaje de mortalidad fue hasta del 100%. Se determinó que para P. operculella la CL50 de las cepas CIPCa18(85), CIPCu1(44) y CIPH1(1) fue 2.71 x 105, 5.53 x 105 y 5.19 x 105 conidias/ml y la CL90 fue 6.81 x 106, 1.22 x 107 y 5.97 x 106 conidias/ml, mientras que para S. tangolias la CL50 para las cepas CIPCa18(85), CIPCu1(44) y CIPH1(1) fue 1.16 x 106, 9.37 x 106 y 4.52 x 106 conidias/ml y la CL90 fue 6.01 x 107, 1.46 x 109 y 2.17 x 108 conidias/ml respectivamente. En ensayos posteriores se determinó que la cepas de B. brongniartii necesitaron mayor tiempo (9-10 días) para que las CL50 pudieran causar el 50% de mortalidad a las larvas de primer estadío de S. tangolias mientras que sólo necesitaron 3 a 5 días para causar el 50% de mortalidad en P. operculella. Posteriormente se evaluó cada CL50 y CL90 en huevos, larvas de último estadío y pupas de P. operculella y S. tangolias, encontrándose que todos los estados de desarrollo fueron susceptibles con diferente grado de infección. En todas estas evaluaciones, la cepa CIPCa18(85) presentó la mejor actividad entomopatógena para el control de P. operculella y S. tangolias. / The objective of this research was to carry out morphological, phisiological and molecular characterization of three isolates of Beauveria brongniartii: CIPCa18(85), CIPCu1(44) y CIPH1(1). In addition, entomogenous activity was tested in Phthorimaea operculella y Symmetrischema tangolias. Isolate CIPCu1(44) showed shorter and spherical conidia while isolates CIPCa18(85) y CIPH1(1) showed tipical elipsoidal conidia. RAPD technique showed a relation between isolates CIPCu1(44) and CIPLM1 (B. bassiana) with 50.4% of similarity. Patogegenicity test showed that isolates were effective to first instar larves, the use of 1 x 109 conidia/ml caused until 100% mortality for both insects. CL50 for isolates CIPCa18(85), CIPCu1(44) and CIPH1(1) obtained in P. operculella larves were 2.71 x 105, 5.53 x 105 and 5.19 x 105 conidias/ml and CL90 for each isolate were 6.81 x 106, 1.22 x 107 and 5.97 x 106 conidias/ml respectively. CL50 for isolates CIPCa18(85), CIPCu1(44) and CIPH1(1) obtained in S. tangolias were 1.16 x 106, 9.37 x 106 and 4.52 x 106 conidias/ml and CL90 for each isolate were 6.01 x 107, 1.46 x 109 and 2.17 x 108 conidias/ml respectively. In other essays, isolates of B. brongniartii needed more time to kill 50% of S. tangolias larves (9 to 10 days) while isolates of B. brongniartii needed only 3 to 5 days to kill 50% of P. operculella. With CL90, isolates needed about 3 days for both insects. Finally, each CL50 y CL90 of three isolates were tested in eggs, last instar larves and pupae, results showed that all develop stages were susceptible to B. brongniartii. Isolate CIPCa18(85) showed the best entomogenous activity to make control of P. operculella y S. tangolias because it came of the same insect order, we suggest more studies with this isolate in greenhouse.

El control biológico de plagas mediante enemigos naturales (parasitoides, depredadores y entomopatógenos) es una de las estrategias de control que promueve en sus premisas el Manejo Integrado de Plagas (MIP). En los últimos años ha habido un incremento sobre la importancia económica de estos enemigos en la agricultura y de las restricciones de los métodos tradicionales de control a través del uso de plaguicidas. En este sentido, el empleo de enemigos naturales para el control biológico de plagas ha aumentado considerablemente a nivel mundial, a través de la importación de especies (control biológico clásico y neoclásico), el control biológico aumentativo o por conservación. El control biológico por conservación es la técnica más implementada en países en vías de desarrollo, a través de la reducción en el uso de plaguicidas y del manejo del hábitat. Sin embargo, el control químico a través del uso de plaguicidas (fungicidas, insecticidas y herbicidas) sigue siendo la estrategia de control más utilizada, principalmente en la Región Neotropical y particularmente en Argentina. Frente a la compatibilización de estrategias en el marco del MIP, el estudio de la selectividad de los plaguicidas es relevante. La evaluación de la selectividad de los plaguicidas hacia organismos benéficos contempla el estudio de los efectos secundarios. Dentro de los efectos secundarios de los plaguicidas sobre los enemigos naturales, los efectos subletales son los que han adquirido mayor importancia en los últimos años, ya que consideran como parámetros de evaluación ecotoxicológica aquellos relacionados con el rol de los enemigos naturales en la reducción de los niveles poblacionales de las plagas en los cultivos. En este sentido, la ecotoxicología moderna considera que no solo la mortalidad debería ser considerada como único punto final de evaluación. Atributos tales como el tiempo de desarrollo, fecundidad, fertilidad y comportamiento así como los parámetros demográficos, son de suma importancia, ya que influyen sobre el desempeño de los enemigos naturales como agentes de control biológico de plagas. Eretmocerus mundus Mercet (Hymenoptera: Aphelinidae), es un microhimenóptero endoparasitoide de la mosca blanca Bemisia tabaci Gennadius (Hemiptera: Aleyrodidae) plaga de importancia económica a nivel mundial por sus daños directos y por ser vector de virus fitopatógenos. Uno de los principales problemas para el establecimiento del parasitoide en las zonas de cultivo es la alta contaminación con plaguicidas. Dentro de los ambientes agrícolas los sistemas hortícolas bajo cubierta o “protegidos” muestran un alto disturbio ecológico. Los insecticidas de amplio espectro son los responsables en gran parte de este disturbio, cuyo uso indiscriminado ha reducido la diversidad de organismos asociados a los cultivos, principalmente los benéficos. El objetivo principal de esta tesis fue evaluar los efectos ecotoxicológicos letales y subletales de insecticidas convencionales y biorracionales sobre B. tabaci y su principal parasitoide E. mundus, a fin de establecer estrategias de control que minimicen el impacto de plaguicidas sobre organismos no blanco. Los resultados de estos estudios servirán a futuro para la implementación de programas de MIP en cultivos hortícolas. Para evaluar los efectos de los insecticidas de uso habitual en cultivos bajo cubierta del Cinturón Hortícola Platense (CHP, noreste de la provincia de Buenos Aires, Argentina) sobre el parasitoide E. mundus y su huésped se realizó la puesta a punto de métodos de bioensayos de toxicidad, seguido de la posterior aplicación para estudiar a nivel ecotoxicológico el impacto de cinco insecticidas de amplio uso en la región para el control de plagas sucsopicadoras (cipermetrina, acetamiprid, piriproxifén, azadiractina y spirotetramat). El material biológico para los estudios se obtuvo a partir de muestreos en invernáculos pertenecientes al CHP con bajo uso de plaguicidas y/o cultivos orgánicos. A partir de este se establecieron las colonias de organismos en laboratorio de donde se obtuvieron los individuos para los ensayos de toxicidad. Los bioensayos de laboratorio se realizaron sobre distintos estados de desarrollo del parasitoide (pupa y adulto), considerando un estado protegido (desarrollado dentro del huésped) y un estado de vida libre. La exposición de los insectos a los diferentes productos comerciales de los insecticidas seleccionados para la evaluación se realizó utilizando diferentes vías de exposición: contacto por inmersión, contacto residual a través de superficies tratadas y contacto a través del huésped contaminado, evaluando las máximas concentraciones recomendadas para su uso a campo (MCRC), y en algunos casos también concentraciones menores. Evaluación de la toxicidad de acetamiprid, azadiractina, cipermetrina, piriproxifén y spirotetramat sobre ninfas de segundo estadio de Bemisia tabaci: los ensayos de evaluación de insecticidas sobre las ninfas de segundo estadio (estadio preferido por el parasitoide E. mundus para la oviposición) se realizaron utilizando la vía de exposición por contacto a través de la vía de inmersión. Se evaluaron las MCRC así como concentraciones menores para cada uno de los productos. Todos los insecticidas redujeron la supervivencia de las ninfas de segundo estadio de B. tabaci. Azadiractina y spirotetramat mostraron un mayor efecto provocando una elevada disminución en la supervivencia, tanto a la MCRC como en concentraciones que se encuentran por debajo de ella. El valor de CL50 para spirotetramat fue muy cercano a la MCRC. Los insecticidas neurotóxicos cipermetrina y acetamiprid y el IGR piriproxifén dejaron una mayor proporción de ninfas supervivientes, mostrando que estas son menos susceptibles a estos insecticidas. También estos tres insecticidas tuvieron valores de CL50 superiores a la MCRC. Adicionalmente se realizaron ensayos para evaluar la toxicidad de la MCRC de spirotetramat en huevos (tratamiento por inmersión) y sobre el comportamiento de oviposición en adultos (tratamiento residual - superficies tratadas - hojas de pimiento) de B. tabaci. No se observó efecto ovicida para este insecticida. Además tampoco se observaron efectos letales ni en la fase móvil ni en la fase sésil del primer estadio ninfal 24 h después de la fijación. Sin embargo, se observó una mortalidad del 100 % en este estadio a las 96 h postratamiento. En la evaluación sobre el comportamiento de oviposición de hembras de B. tabaci se observó que la misma fue escasa o casi nula en la mayoría de las hojas en todas las franjas horarias observadas. El efecto disuasorio de la oviposición fue ˃ 90%. Estudios ecotóxicológicos de los efectos secundarios de acetamiprid, azadiractina, cipermetrina, piriproxifén y spirotetramat sobre pupas de Eretmocerus mundus: los ensayos de evaluación de la toxicidad de insecticidas sobre pupas se realizaron utilizando la vía de exposición por contacto a través de la metodología de inmersión. Se evaluaron las MCRC y la mitad de la misma para cada uno de los productos sobre dos estados morfológicos bien diferenciados (pupa 48 h de edad y pupa donde se observa el adulto farado) dentro del desarrollo pupal de E. mundus. El porcentaje de emergencia y la longevidad de los adultos emergentes del parasitoide dependieron del tipo de tratamiento realizado y del estado morfológico expuesto. Todos los insecticidas con excepción de spirotetramat provocaron una disminución en la emergencia y en la longevidad de los adultos emergidos. El mayor porcentaje de emergencia y de longevidad se obtuvo en las pupas tratadas en el estado de adulto farado. Se observaron efectos subletales teratológicos (malformaciones) en las pupas tratadas con cipermetrina, acetamiprid, azadiractina y piriproxifén. El desarrollo normal durante el periodo intermuda pupa-adulto fue modificado por todas las concentraciones de los insecticidas evaluados. Conjuntamente con la evaluación del efecto directo o a corto plazo de los cinco insecticidas sobre el estado de pupa también fueron evaluados los efectos subletales de tres de ellos, azadiractina, cipermetrina y spirotetramat, sobre la capacidad reproductiva de hembras sobrevivientes al tratamiento con insecticidas. Azadiractina afectó el parasitismo efectivo (acumulado durante 5 días consecutivos), el porcentaje de emergencia y la longevidad de la progenie. Cipermetrina tuvo efecto sobre el parasitismo efectivo y la longevidad de la progenie. Spirotetramat no mostró ningún efecto perjudicial sobre la capacidad reproductiva de las hembras, solo se observó una disminución en la longevidad de la progenie. Estudios ecotoxicológicos de los efectos secundarios de acetamiprid, azadiractina, cipermetrina, piriproxifén y spirotetramat sobre adultos de Eretmocerus mundus: en los ensayos de evaluación de insecticidas sobre adultos se evaluaron los efectos letales (supervivencia) y subletales (capacidad reproductiva en hembras y patrones de comportamiento) de las MCRC y diluciones de la misma de acetamiprid, azadiractina, cipermetrina, piriproxifén y spirotetramat. Se prestó especial atención a los efectos subletales que los insecticidas anteriormente mencionados tenían sobre el comportamiento del parasitoide. Adicionalmente se estudió el posible efecto del insecticida spirotetramat sobre parámetros demográficos (tasa intrínseca de crecimiento poblacional r, tasa reproductiva neta Ro y tiempo generacional T) de E. mundus. Para la evaluación de los efectos letales se utilizó una metodología de exposición residual por medio de superficie tratada (vidrio–hoja). Todos los insecticidas evaluados disminuyeron la supervivencia adulta de E. mundus. Cipermetrina fue el insecticida mas tóxico y spirotetramat el menos tóxico. La superficie de exposición que mostró un mayor efecto sobre la longevidad adulta fue la hoja vegetal. La evaluación de los efectos subletales se llevó a cabo a través de la realización de diferentes tipos de bioensayos. Se midió el efecto de la MCRC del insecticida spirotetramat y el efecto de la mitad de la MCRC de los insecticidas acetamiprid, azadiractina, cipermetrina y piriproxifén sobre la capacidad reproductiva de hembras sobrevivientes al tratamiento residual en vidrio. Ninguno de los insecticidas evaluados incidió sobre el parasitismo efectivo. Azadiractina, cipermetrina y piriproxifén redujeron el porcentaje de emergencia de la progenie en el primer día de exposición al huésped. Al finalizar los cinco días de exposición, acetamiprid y piriproxifén fueron diferentes respecto del control. La proporción de sexos no fue significativamente diferente del control para todos los insecticidas evaluados en el primer día de exposición al huésped. Al finalizar los cinco días de exposición cipermetrina provoco un sesgo hacia la proporción de machos cercano al 92%. Acetamiprid, azadiractina y piriproxifén disminuyeron la longevidad en la progenie. Conjuntamente a estos ensayos se realizaron bioensayos comportamentales para seguir evaluando los efectos subletales de los insecticidas. Se utilizaron diferentes vías de exposición (residual y contacto por inmersión) y se evaluaron los posibles tipos de respuestas que podían manifestar los adultos del parasitoide frente a residuos de insecticidas y el impacto de estos sobre los mecanismos de cópula, búsqueda del huésped, oviposición y parasitismo. Las respuestas encontradas para el comportamiento frente a residuos de insecticidas fueron variadas: inhibición de la alimentación, aumento de la frecuencia de los mecanismos de aseo, temblores, volteo, hiperactividad; observándose una elevada susceptibilidad de los adultos de E. mundus a cuatro (acetamiprid, azadiractina, cipermetrina, piriproxifén) de los cinco insecticidas evaluados. Los ensayos de elección frente a huéspedes tratados y no tratados mostraron que las hembras de E. mundus fueron capaces de elegir las ninfas no tratadas para su parasitación. Todos los insecticidas mostraron un efecto disuasorio de la oviposición. Los bioensayos de cópula mostraron que el tiempo que tardaba el macho en encontrar a la hembra y la posición de este con respecto a la hembra en el momento de la cópula se vieron afectados por los insecticidas acetamiprid y azadiractina. El tiempo de duración de la cópula solo fue diferente del control para el insecticida azadiractina. Los ensayos de oviposición y parasitismo realizados con las hembras del parasitoide E. mundus mostraron que todos los insecticidas, con excepción de spirotetramat, retardaron el encuentro con el huésped y modificaron la secuencia normal de comportamientos seguidos al encuentro del mismo y previos a la oviposición. Los bioensayos demográficos realizados con el insecticida spirotetramat demostraron que este afectó los parámetros demográficos: tasa intrínseca de crecimiento poblacional r, tasa reproductiva neta Ro y tiempo generacional T, observándose una disminución en los mismos. De acuerdo a los resultados obtenidos en la presente tesis, el segundo estadio ninfal de B. tabaci fue susceptible a los diferentes grupos de insecticidas evaluados. El insecticida azadiractina resultó ser el más tóxico y piriproxifén el menos tóxico. El estado de desarrollo de pupa de E. mundus no representaría un estado de protección a xenobióticos como los insecticidas, aun siendo un endoparasitoide, ya que este estado fue muy susceptible a cuatro (acetamiprid, azadiractina, cipermetrina, piriproxifén) de los cinco insecticidas evaluados. Para el insecticida spirotetramat, no se observaron efectos nocivos (letales ni subletales) sobre el estado de pupas del parasitoide en condiciones de laboratorio. La inocuidad del insecticida azadiractina, ampliamente utilizado en producción orgánica, es discutida de acuerdo a estos estudios, aunque debería ser corroborada en campo, como asímismo analizada su persistencia. El estado adulto de E. mundus fue también altamente susceptible hacia los insecticidas acetamiprid, azadiractina, cipermetrina, piriproxifén y en menor medida hacia spirotetramat. La supervivencia fue drásticamente afectada por cipermetrina y en menor medida por spirotetramat. La capacidad reproductiva de las hembras sobrevivientes a los tratamientos con los diferentes insecticidas evaluados mostró que el parasitismo efectivo fue el único parámetro que no se vio afectado por la acción de los insecticidas. Los efectos subletales de los insecticidas evaluados a nivel comportamental mostraron que cuatro (acetamiprid, azadiractina, cipermetrina y piriproxifén) de los cinco insecticidas evaluados afectaron el desempeño normal tanto de los machos como de las hembras del parasitoide en los comportamientos asociados a los mecanismos de cópula, búsqueda del huésped, oviposición y parasitismo. Spirotetramat afectó los parámetros demográficos del parasitoide reduciendo la tasa intrínseca de crecimiento poblacional r, la tasa reproductiva neta Ro y el tiempo generacional T, con implicancias en el crecimiento poblacional de la especie. / Biological control of pests by natural enemies (parasitoids, predators and entomopathogens) is one of the control strategies that promotes Integrated Pest Management (IPM). In recent years, there has been an increase in the economic importance of natural enemies in agriculture at expenses of reducing traditional control methods based on the use of chemical pesticides. Hence, the use of natural enemies for the control of insect pests has greatly increased worldwide through the importation of species (classical and neoclassical biological control), as well as the augmentation and conservation of spontaneously occurring natural enemies in crops. Conservation biological control is the most implemented strategy in developing countries, achieved by the reduction of the use of chemical pesticides and habitat management practices. Despite the advent of biological control, chemical control through the use of pesticides (fungicides, insecticides and herbicides) is still the main pest control strategy of pest control today, mainly in the Neotropical Region, and particularly in Argentina. In view of trends towards the joint use of pest control strategies under the IPM concept, the assessment of pesticide selectivity on beneficials becomes a relevant issue. The assessment of pesticide selectivity to beneficial organisms includes research on sublethal pesticide side-effects, a topic that has assumed greater importance in recent years since it takes into account ecotoxicological evaluation parameters. From this perspective, modern ecotoxicology considers that not only mortality should be considered a single endpoint for toxicity assessment on beneficials, but also further features such as developmental time, fecundity, fertility, behavior and demographic parameters, which are paramount because these also rule the performance of natural enemies as agents of biological pest control. Eretmocerus mundus Mercet (Hymenoptera: Aphelinidae) is a main microhymenopteran parasitoid of the whitefly, Bemisia tabaci Gennadius (Hemiptera: Aleyrodidae). Whitefly populations produce economically important damage to crops worlwide by their direct feeding and also by transmitting plant viruses. One of the major problems in settlement of beneficials in cropping areas is the high levels of pesticide contamination. Also, horticultural crops under "protected" systems show high ecological disturbance due to indiscriminate use of broad-spectrum insecticides, which significantly accelerates the loss of biodiversity, mainly on beneficial species. The main objective of this Thesis was to evaluate the lethal and sublethal ecotoxicological effects of conventional and biorational insecticides on B.tabaci and its major parasitoid E. mundus, in order to establish control strategies to minimize the impact of pesticides on non-target organisms. The results of these studies can help to design and implement Integrated Pest Management (IPM) programs in horticultural crops. Five insecticides (cypermethrin, acetamiprid, pyriproxyfen, azadirachtin and spirotetramat) widely used in under cover crops in the horticultural belt that surrounds La Plata city, Buenos Aires province, Argentina, were selected to assess their toxicity and side effects on the parasitoid E. mundus and its host B.tabaci. The biological material for the studies was obtained from the collection of samples in greenhouses containing low-pressure pesticide and/or organic crops. Collected organisms were established in laboratory and reared for toxicity testing. Laboratory bioassays were conducted on different developmental stages of the parasitoid (pupa and adult), focusing on a protected stage (developing inside the host's body) and a free-living stage. The exposure of insects to the selected commercial products was performed throughout dipping, residual contact-bioassays treated surfaces and hosts, by using the maximum recommended concentrations (MRFC) and lower. Evaluation of the toxicity of acetamiprid, azadirachtin, cypermethrin, pyriproxyfen and spirotetramat on the second stage nymphs of Bemisia tabaci: toxicity bioassays of the insecticides on nymphs (N2, stage preferred by the parasitoid E. mundus for oviposition) were performed by using dipping test. MRFC and lowest concentrations for each product were assessed. Results show that all insecticides tested reduce the survival of B. tabaci nymphs of the second stage. Azadirachtin and spirotetramat showed a greater negative effect on nymphal survival both MRFC and concentrations below. The LC50 value for spirotetramat was very close to the MRFC. The neurotoxic insecticide cypermethrin and acetampirid as well as the IGR pyriproxyfen allowed a higher surviving ratio of nymphs, showing that they are less susceptible to the products at the concentrations tested. Also, these three insecticides showed higher LC50 values for MRFC. Further, tests were conducted to evaluate the toxicity of MRFC spirotetramat on eggs (dipping test) and oviposition behavior in adults (surface treatment - residual - pepper leaves) of B. tabaci. No ovicidal effects were observed in bioassays with spirotetramat. Furthermore, lethal effects were not observed either in the mobile phase or in the sessile phase first instars nymphal of B. tabaci after fixation (24 h). However, the mortality of this stage was reached 100% at 96 h post-treatment. The evaluation on oviposition behavior of B. tabaci females was observed that it was low or almost zero in most of the leaves in all slots observed. The deterrent effect on oviposition was ˃ 90 %. Ecotoxicological studies on the side effects of acetamiprid, azadirachtin, cypermethrin, spirotetramat and pyriproxyfen on Eretmocerus mundus pupae: toxicity assessments of insecticides on E. mundus pupae were performed using dipping test. The MRFC and the half for each of the products were evaluated on two distinct morphological states (pupa 48 h old and pupa where the adult farado is observed) within the pupal development of E. mundus. The percentage of emergency and longevity of adult parasitoids emerging depended on the type of treatment performed (factor one) and exposed morphological state (factor two). All insecticides tested, except spirotetramat, origin a decrease in the emergency and longevity of emerged adults. The highest percentage of emergency and longevity was obtained treated in the pupa where the adult farado is observed. Sublethal effects were observed as teratological effects (malformations) in pupae treated with cypermethrin, acetamiprid, azadirachtin and pyriproxyfen. The development during the intermolt period was interrupted by all insecticides. Beside the evaluation of the direct effect or short-term effect of the five insecticides tested on the E. mundus pupal stage, sublethal effects of azadirachtin, cypermethrin and spirotetramat on the reproductive capacity of surviving females were evaluated. Azadirachtin showed a greater negative effect on effective parasitism (accumulated for 5 consecutive days) and the percent emergence and longevity of the progeny. Cypermethrin show a slight effect on the effective parasitism and longevity of progeny. Spirotetramat did not show detrimental effects on the reproductive capacity of the females, only a decrease in longevity of progeny was observed. Ecotoxicological studies on the side effects of acetamiprid, azadirachtin, cypermethrin, spirotetramat and piriproxyfen on Eretmocerus mundus adults: lethal (survival) and sublethal effects (reproductive capacity in females, behavior patterns) of MRFC and the half for each product were evaluated in adults treatments. Special attention was given to the sublethal effects that the insecticides had on parasitoid behavior. Additionally, the possible effect of the spirotetramat on demographic parameters (intrinsic rate of increase r, net reproductive rate Ro and generation time T) of E. mundus was studied. Residual exposure through surface treated methodology (glass-leaf) was used in assessing the lethal effects. All insecticides tested reduced the adult survival of E. mundus. Cypermethrin was the most toxic insecticide and spirotetramat the least toxic. The exposition area that showed a greater effect was the leaves circles. Evaluation of sublethal effects was carried out through the implementation of various types of bioassays. The effect of the MRFC of spirotetramat and the effect of the half the MRFC of acetamiprid, azadirachtin, cypermethrin and pyriproxyfen on reproductive capacity of surviving females of residual treatment in glass were evaluated. None of the insecticides affects the effective parasitism. Azadirachtin, pyriproxyfen and cypermethrin reduced the percentage of emergence of progeny on the first day of exposure to the host. At the end of the five-day exposition, acetamiprid and pyriproxyfen they were different compared to the control. The sex ratio was not significantly different from control for all insecticides tested on the first day of exposure to the host. At the end of five-days of exposure, cypermethrin caused a bias close to the proportion of 92% males. Acetamiprid, azadirachtin and pyriproxyfen decreased progeny longevity. Along with these trials, behavioral assays were performed to further evaluate the sublethal effects of insecticides. Different exposure pathways (residual and dipping) were used, and different types of responses that the adult parasitoids could manifest against insecticide residues and the impact of these on the copulation and oviposition mechanisms and host searching were evaluated. Behavioral responses found against insecticide residues were varied: feeding inhibition, increase of frequency of grooming, tremors, knock-down and hyperactivity, showing that E. mundus adults are sensitive to four (acetamiprid, azadirachtin, cypermethrin, pyriproxyfen) of the five insecticides evaluated. Choice tests with treated and untreated hosts showed that females of E. mundus were able to choose untreated nymphs for parasitism. All insecticides showed an oviposition deterrent effect. Mating bioassays showed that the time it took the male to find the female and the position of this with respect to the female at the time of mating were affected by insecticides acetamiprid and azadirachtin. The duration of mating was only different from control for insecticidal azadirachtin. Oviposition and parasitism assays made with the females of the parasitoid E. mundus showed that all insecticides, except spirotetramat, delay the meeting with the host and modify the normal sequence of behaviors to meet the same row and pre-oviposition. Demographic bioassays with spirotetramat showed that this affects demographic parameters, intrinsic rate of increase r, net reproductive rate Ro and generation time T causing a decrease in them. According to the results obtained in this thesis, the second nymphal stage of B. tabaci was susceptible to different groups of insecticides evaluated. Azadirachtin was the most toxic and pyriproxyfen the least toxic. The developmental state of E. mundus “pupa” does not represent a state of protection to xenobiotic such as insecticides, even as a endoparasitoid; since this state was very susceptible to four (acetamiprid, azadirachtin, cypermethrin, pyriproxyfen) of five insecticides evaluated. The safety of azadirachtin insecticide widely used in organic production, is discussed according to these studies but should be confirmed in the field, and its persistence should be analyzed. The adult stage of E. mundus was also highly susceptible to the acetamiprid, azadirachtin, cypermethrin, pyriproxyfen and to a lesser extent spirotetramat. Survival was drastically affected by cypermethrin and spirotetramat to a lesser extent. The reproductive capacity in surviving females showed that the effective parasitism was the only parameter that was not affected by the action of insecticides. Sublethal effects of insecticides evaluated at the behavioral level showed that four (acetamiprid, azadirachtin, cypermethrin, pyriproxyfen) of the five insecticides evaluated affected the normal performance of both males and females of the parasitoid in the behaviors associated with the mechanisms of copulation, host searching and oviposition. Spirotetramat affected demographic parameters of the parasitoid, reducing its intrinsic rate of increase r, net reproductive rate Ro and generation time T, with implications for the population growth of the species.

Tesis para optar al Grado de Magister en Ciencias Agropecuarias Mención Sanidad Vegetal / En la actualidad en Chile no existe una normativa específica en materia de control biológico aumentativo mediante artrópodos, así como tampoco protocolos comerciales estandarizados para la especie Cryptolaemus montrouzieri (M). El objetivo del presente trabajo fue la elaboración de un modelo conceptual o esquema teórico que contiene los requisitos mínimos para la determinación de la calidad en las etapas de obtención, multiplicación, cosecha/acopio y despacho de Cryptolaemus montrouzieri con fines comerciales, basado en literatura científica nacional e internacional y en entrevistas con expertos, instituciones y empresas relacionadas con la crianza y comercialización de este controlador biológico. Se identificaron los factores claves que inciden en su efectividad como agente de control biológico, los cuales se agruparon en diferentes etapas involucradas en el proceso productivo de este coccinélido, iniciándose con la obtención de material vivo, la multiplicación, la obtención del material reproducido en laboratorio, hasta su despacho al cliente final. Para facilitar la visualización del modelo conceptual propuesto, se sistematizó la información en cuadros explicativos y se graficaron las diferentes etapas en software Stella y los factores claves que inciden en la calidad de los organismos multiplicados. / Currently in Chile there is no specific legislation on augmentative biological control by arthropods, nor commercial standardized protocols for the species Cryptolaemus montrouzieri (M). The aim of this work was to develop a conceptual model or theoretical framework that contains the minimum requirements for quality determination in the steps of obtaining, multiplying, harvesting and storage and delivery of Cryptolaemus montrouzieri for commercial purposes, based on national and international scientific literature and interviews with experts, institutions and companies involved in rearing and marketing of biological control agents. The key factors that influence their effectiveness as biological control agent is identified, and grouped into different stages involved in the production process of this coccinellid, starting with obtaining living material, multiplication, obtaining the material reproduced in the laboratory , through to supply to the end customer. To facilitate the visualization of the proposed conceptual model, the information was systematized in explanatory tables and plotted by Stella software the different stages and the key factors that affect the quality of the multiplied organisms.

Tesis para optar al grado de Magíster en Ciencias Agropecuarias Mención Sanidad Vegetal / Botrytis cinerea produce importantes pérdidas en uva de mesa en Chile. En el control químico de este patógeno se utiliza entre otras moléculas a boscalid, carboxamida que actúa inhibiendo la enzima succinato deshidrogenasa. En aislados de Botrytis recolectados de cultivos sometidos a un uso intensivo del fungicida, se ha demostrado la asociación entre la pérdida de sensibilidad con mutaciones en el gen sdhB, en donde se han identificado las mutaciones P225F/L/T y N230I asociadas a aislados resistentes y en mayor frecuencia las mutaciones H272R/Y/L asociadas a aislados resistentes y moderadamente resistentes. Durante las últimas dos temporadas (2011-2012 y 2012- 2013), en la zona Central de Chile, se ha reportado una baja sensibilidad a boscalid. El objetivo de la presente investigación fue determinar la presencia de mutaciones en el gen sdhB en aislados chilenos de Botrytis cinerea de distinto nivel de sensibilidad a boscalid. Con este propósito, 50 aislados monoconidiales fueron caracterizados genética y fenotípicamente. Para la caracterización fenotípica se verificó la sensibilidad a boscalid mediante evaluación del comportamiento de germinación conidial, determinándose 4 categorías según valores EC50: Sensible (S) (>0,05-1,37μg.mL-1), Levemente Resistente (LR) (1,38-7,80μg.mL-1), Moderadamente Resistente (MR) (7,81-50μg.mL-1) y Resistente (R) (>50μg.mL-1). Aislados R y MR con mutaciones se compararon con sensibles, según parámetros como: crecimiento miceliar, esporulación, sensibilidad osmótica, capacidad formadora de esclerocios y virulencia. La detección de mutaciones se realizó mediante la técnica PCR-PIRA (Primer-Introduced Restriction Enzyme Analyses) y el uso de partidores específicos H272Y/R-fw y H272- rev, cuyos productos fueron digeridos con las enzimas de restricción EcoRV y HhaI respectivamente. Los aislados de Botrytis cinerea mostraron niveles de sensibilidad a boscalid variables entre 0,13 μg.mL-1 (S) y 1,1*109 μg.mL-1 (R). La utilización del PCR-PIRA, permitió identificar las mutaciones H272Y/R en el gen sdhB que resultaron ser inespecíficas de un determinado nivel de sensibilidad a boscalid. De acuerdo a los parámetros de adaptabilidad evaluados tales como crecimiento miceliar, capacidad formadora de esclerocios y esporulación de aislados resistentes con mutaciones H272Y/R respecto de los sensibles fueron significativamente diferentes (p<0,05), lo cual implicaría que las mutaciones detectadas y asociadas a la resistencia a boscalid generarían un costo metabólico en los aislados de Botrytis. / Botrytis cinerea produces serious losses in table grapes in Chile. In the chemical control of this pathogen is used among other molecules like boscalid, carboxamide that inhibits the succinate dehydrogenase enzyme. Botrytis isolates collected from different crops subjected to intensive fungicide application has shown an association between sensitivity loss and mutations in the sdhB gene, where P225F/L/T and N230I mutations have been identified in resistant isolates and most frequently mutations like H272R/Y/L on moderately resistant and resistant isolates. During the past two seasons (2011-2012 and 2012-2013) in the central Chile, has reported a low sensitivity to boscalid. The objective of this research was determine the mutations presence in the sdhB gene of Botrytis cinerea isolates with different sensitivity levels to boscalid. For this purpose, 50 monoconidial isolates were characterized genetically and phenotypically. For phenotypic characterization was verified the sensitivity to boscalid by conidial germination, were classified into four resistance phenotypes based on the EC50 values them: Sensitive (S) (>0.05-1.37 μg.mL-1), Low resistant (LR) (1.38-7.80 μg.mL-1), moderately resistant (MR) (7.81-50μg.mL-1) and resistant (R) (>50μg.mL-1). Isolate R and MR with mutations were compared with sensitive isolates, with parameters such as mycelial growth, sporulation, osmotic sensitivity, sclerotia production and virulence. Mutations detection was performed by PIRA-PCR (Primer- Introduced Restriction Enzyme Analyses) with specific primers H272-rev H272Y/R-fw whose products were digested with restriction enzymes EcoRV and HhaI respectively. Botrytis cinerea isolates showed different sensitivity levels between 0.13 μg.mL-1 boscalid (S) and 1.1*10-9 μg.mL-1 (R). The PIRA-PCR method has detected H272Y/R mutations, none were specific a sensitivity level to boscalid. According to adaptability parameters evaluated such as mycelial growth, sclerotia production and sporulation of resistant isolates with mutations H272Y/R compare with sensitive were significantly different (p <0.05), which imply that the mutations detected generate a metabolic cost in Botrytis cinerea isolates to boscalid.