Se evaluó las diferencias bioquímicas en el ámbito de la actividades proteolíticas y de la inhibición de la actividad proteolítica ensayas con proteínas de hojas de papa, entre los clones "resistentes" (282LM87B, 220LM87B, 136LM86B y 662LM86B) y "susceptible" (Revolución) a la mosca minadora Liriomyza huidobrensis, Blanchard (Díptera, Agromyzidae), una plaga perjudicial del cultivo de la papa (Solanum tuberosum spp) especialmente en lugares donde el uso de insecticidas es intenso. Las plantas de papa resistentes, y Revolución, fueron sometidas previamente al daño por el ataque de adultos de la mosca minadora (daño por mosca) o por herida con estilete (daño artificial), y para ser evaluados mediante el grado de inducción de las proteínas en las hojas. Entre los clones resistentes, se encontró importantes márgenes de variación de las actividades proteolíticas en las hojas y la inhibición proteolítica de los extractos de larvas por efecto de las proteínas de hojas de los clones 282LM87B y 662LM86B con respecto a Revolución. Las unidades de actividad proteolítica por gramo de proteína de las de hojas (ug-') y las unidades de actividad proteolítica de larvas (U) fueron 20,5 ug-' y 0.05 U con 282LM87B; 20.83 ug-' y 0,12 U con 662LM86B y 17,5 ug-' y 0,25 U con Revolución, respectivamente. Mediante ensayos de zimografía para determinar isoinhibidores de proteasas se encontró dos bandas, de 63 y 105 kDa de peso molecular aproximado, expresados mayormente entre los clones resistentes. Este ensayo determinó una diferenciación visual importante entre los clones resistentes con el susceptible. Se siguió el nivel de expresión de la banda de 105 kDa entre plantas de diferentes edades (20-80 días) dañadas artificialmente y en el cual se observó disminución en el nivel de su expresión en plantas de más de 60 días. Se discute la correlación de los niveles mayores de actividad proteolítica y de la inhibición de la actividad proteolítica hallados en los clones resistentes, especialmente en 282LM87B, con el atributo de la resistencia a la mosca minadora. Palabras claves: Sólanum tuberosum, mosca minadora, zimografia, plantas resistentes.

Evalúa la actividad biocida in vitro y en campo mediante el método de aspersión directa del extracto acuoso liofilizado de la corteza de Hura crepitans sobre los fitopatógenos del algodonero Aphis gossypii pulgón de la melaza y Bemisia tabaci mosca blanca. Se realizó el estudio fitoquímico cualitativo y cuantitativo, análisis por espectrofotometría UV y por HPLC de los metabolitos presentes en la corteza de Hura crepitans. Los resultados obtenidos fueron analizados por el método Probit, éstos demuestran que Hura crepitans tiene actividad biocida sobre Aphis gossypii con un CL50 de 0.156 (mg/mL). La dosis efectiva en el estudio in vitro fue de 50mg/mL. Con respecto al estudio en campo, la dosis probada y efectiva fue de 2.85mg/mL. El extracto acuoso de la corteza de Hura crepitans no presentó actividad biocida sobre Bemisia tabaci. Los metabolitos encontrados fueron: rutina, saponinas y otros compuestos fenólicos. En conclusión el extracto acuoso de la corteza de Hura crepitans presenta actividad biocida sobre Aphis gossypii a nivel de laboratorio y en campo pero no tiene actividad biocida sobre Bemisia tabaci. / Tesis

En el cultivo de la vid, se reporta a Botrytis cinerea Pers como el hongo patógeno causante de lesiones cancrosas, necrosamiento de brotes y racimos de flores, y pudrición de frutos y semillas, que ocasionan grandes pérdidas económicas a los agricultores. El control de este patógeno se realiza hasta nuestros días con sustancias de origen químico: plaguicidas; los cuales son aplicados al follaje, a las semillas y al suelo, ocasionando problemas en el ambiente. En el presente trabajo, se colectaron 56 muestras de hojas de vid, infectadas con Botrytis cinerea Pers, en un viñedo del caserío La Huaca, en el distrito de San Benito, provincia de Contumaza, departamento de Cajamarca, durante el verano del 2006; de las cuales se aislaron e identificaron 12 cepas de Trichoderma viride. En la evaluación de la actividad antagonista de las 12 cepas de T. viride sobre B. cinerea mediante el método Precolonizado de Placas a 24° C y 28° C, se seleccionó a las cinco cepas: CH-13, CH-25, CH-30, CH-38 y CH-52 que presentaron los mayores porcentajes de área ocupada sobre el patógeno. Estas cepas presentaron actividad antagonista del tipo micoparasitismo, observándose enrollamiento y penetración de las hifas de las cepas de T. viride sobre las hifas de B. cinerea. De las cinco cepas seleccionadas de T. viride, la cepa CH-30 presentó el mayor porcentaje de área ocupada sobre B. cinerea a 24° C y 28° C con un 54.67% y 98% respectivamente. Por los resultados obtenidos, las cinco cepas nativas de Trichoderma viride pueden ser consideradas como una alternativa ecológica para su evaluación como agentes potenciales de control biológico del patógeno B. cinerea. / In the culturing of grapevine, there is reported Botrytis cinerea Pers as the fungus pathogenic causative of canker injuries, necrotizing of outbreaks and clusters of flowers, and rotting of fruits and seeds, which cause big economic losses to the farmers. The control of this pathogenic is realized actually by substances of chemical origin: pesticides; which are applied to the foliage, to the seeds and to the soil, causing environment problems. In this present work, there were collected 56 samples of leaves of grapevine, infected with Botrytis cinerea Pers, in a vineyard of The Huaca hamlet, in San Benito district, Contumaza province, Cajamarca department, during the summer of 2006; from these ones, there were isolated and identified 12 strains of Trichoderma viride. In the evaluation of the antagonist activity of these 12 strains of T. viride on B. cinerea by the method of Plates pre-colonized in 24° C and 28 °C, was selected five strains: CH-13, CH-25, CH-30, CH-38 and CH-52 that presented the major percentages of occupied area over the fungus pathogenic. These strains showed antagonist activity of mycoparasitism kind, being observed rolling and penetration of mycelium of T. viride strains on the mycelium of B. cinerea. From 5 T. viride strains selected, the CH-30 one showed the major percentage of occupied area on B. cinerea in 24° C and 28 °C with 54.67% and 98% respectively. For the results obtained, five native strains of Trichoderma viride can be considered as an ecological alternative for its evaluation as potential agents of biological control of the pathogenic B. cinerea.

Se evaluó las diferencias bioquíinicas en el ámbito de la actividades proteolíticas y de la inhibición de la actividad proteolítica ensayas con proteínas de hojas de papa, entre los clones "resistentes" (282LM87B, 220LM87B, 136LM86B y 662LM86B) y "susceptible" (Revolución) a la inosca ininadora Lirionzyza hmidobrensis, Blanchard (Díptera, Agromyzidae), una plaga perjudicial del cultivo de la papa (Solarium tuberosunz spp) especialmente en lugares donde el uso de insecticidas es intenso. Las i plantas de papa resistentes, y Revolución, fueron sometidas previamente al daño por el ataque de adultos de la mosca minadora (daño por mosca) o por herida con estilete (daño artificial), y para ser evaluados mediante el grado de inducción de las proteínas en las hojas. Entre los clones resistentes, se encontró importantes márgenes de variación de las actividades proteolíticas en las hojas y la inhibición proteolítica de los extractos de larvas por efecto de las proteínas de hojas de los clones 282LM87B y 662LM86B con respecto a Revolución. Las unidades de actividad proteolítica por gramo de proteína de las de hojas (ug-') y las unidades de actividad proteolítica de larvas (U) heron 20,5 ugeyl 0.05 U con 282LM87B; 20.83 ug-'y 0,12 U con 662LM86B y 17,5 ug-'y 0,25 U con Revolución, respectivamente. Mediante ensayos de zimografía para determinar isoinhibidores de proteasas se encontró dos bandas, de 63 y 105 kDa de peso molecular aproximado, expresados mayosinente entre los clones resistentes. Este ensayo determinó una diferenciación visual iinpoitante entre los clones resistentes con el susceptible. Se siguió el nivel de expresión de la banda de 105 kDa entre plantas de diferentes edades (20-80 días) dañadas artificialinente y en el cual se observó disminución en el nivel de su expresión en plantas de más de 60 días. Se discute la correlación de los niveles mayores de actividad proteolítica y de la inhibición de la actividad proteolítica hallados en los clones resistentes, especialmente en 282LM87B, con el atributo de la resistencia a la mosca minadora. Palabras claves: Solanum tuberosum, mosca minadora, zimografía, plantas resistentes.

La producción de granos es una de las principales actividades de nuestro país y por ende, es de suma importancia la preservación de su calidad durante el almacenamiento. La contaminación insectil es uno de los mayores problemas de los granos almacenados. Según estimaciones de la Organización de las Naciones Unidas para la Agricultura y la Alimentación (FAO), entre 10 y 30% de la producción agrícola mundial se pierde anualmente durante la última etapa de la comercialización por la acción de las plagas insectiles, cifra que se eleva a más del 50% en países subdesarrollados. Los insectos plaga pueden causar reducción del peso, calidad, valor comercial y poder germinativo de las semillas. En las etapas de almacenamiento, el método de control más utilizado es el químico, pero su aplicación debería ser rigurosamente controlada para evitar consecuencias negativas sobre el alimento del hombre y animales. Es allí donde la búsqueda de agentes de control natural, control biológico, nuevas técnicas de monitoreo, prácticas culturales adecuadas, mejoramiento genético y otras medidas terapéuticas de bajo impacto ambiental son necesarias. Basado en estudios previos obtenidos en este laboratorio, en esta tesis se propuso avanzar en el conocimiento de la bioquímica de los hidrocarburos (HC) epicuticulares y las secreciones volátiles de origen lipídico de insectos tenebriónidos (Coleóptera); así como investigar métodos alternativos de bajo impacto para el control de estos insectos plaga de granos almacenados. Este conocimiento podrá contribuir al desarrollo de nuevas estrategias ecológicamente aceptables para el control de plagas. En este trabajo se efectuó el análisis de los HC epicuticulares de adultos de Tribolium castaneum (Coleoptera: Tenebrionidae) empleando cromatografía gaseosa capilar (CGC) de alta resolución acoplada a espectrometría de masa (MS). Se detectaron 42 componentes lineales y ramificados. Comparada con las de otros órdenes de insectos, la composición de HC en T. castaneum es menos compleja; incluye estructuras saturadas y/o ramificadas con longitudes de 23 a 39 átomos de carbono, predominando n-C27:0 y n-C29:0. Se identificaron y cuantificaron secreciones de defensa de Ulomoides dermestoides (Coleoptera: Tenebrionidae), extraídas del espacio de cabeza mediante la técnica de microextracción en fase sólida (HS-SPME) acoplada a CGC-MS. Los principales compuestos volátiles orgánicos (VOC) identificados fueron metil-1,4-benzoquinona (MBQ), etil-1,4-benzoquinona (EBQ) y 1-pentadeceno (n-C15:1); estos compuestos son semejantes a los reportados en Tribolium spp. El análisis cuantitativo de las secreciones liberadas por adultos vivos de ambas especies mostró que las benzoquinonas representan alrededor del 80% de las mismas en condiciones de estrés. Basado en el empleo de estas técnicas, se desarrolló una metodología para detectar VOC de insectos plaga en muestras de granos almacenados, que podría ser de utilidad como indicador de contaminación insectil. La técnica de HS-SPME acoplada a CGC permite detectar las secreciones volátiles de insectos vivos, en forma rápida, con alta sensibilidad y sin utilizar solventes. Este es el primer método químico que propone la detección de quinonas volátiles como un indicador de contaminación con tenebriónidos en granos almacenados. En cuanto a su metabolismo, se demostró que la síntesis de n-C15:1 ocurriría vía de novo en la glándula a partir de [1-14C] acetato, o a partir de palmitato exógeno (incorporado a través del alimento, o sintetizado en integumento y/o cuerpo graso). Asimismo, se demostró síntesis de novo de BQ en las glándulas. Estos ensayos se efectuaron empleando trazadores radiactivos y análisis por radiocromatografía en capa fina (radio-TLC). En referencia a herramientas de bajo impacto para el control de insectos plagas de granos almacenados, se evaluó el potencial insecticida de tierras de diatomeas (TDs) de yacimientos locales, logrando seleccionar un yacimiento con capacidad insecticida similar a la de un producto comercial. Dentro de los coleópteros plaga de granos almacenados ensayados, T. castaneum fue la especie más tolerante. El empleo de esta metodología permitirá incorporar valor agregado a las TDs de yacimientos locales. Finalmente, se evaluó el efecto del hongo entomopatógeno Beauveria bassiana en la supervivencia y ciclo de vida de T. castaneum y U. dermestoides. Ambos tenebriónidos mostraron una disminución significativa en la progenie, a pesar de los bajos índices de mortalidad observados. Es probable que la infección produzca un estado de aislamiento e inanición, alterando el desarrollo de las colonias de ambas especies. Los resultados de este trabajo de tesis aportan al conocimiento de la bioquímica de los lípidos cuticulares y secreciones volátiles de tenebriónidos; asimismo proporcionan información de utilidad para el desarrollo de nuevas estrategias ecológicamente aceptables para el control de insectos plaga de granos almacenados

Memoria para optar al Título Profesional de Ingeniero Agrónomo / Botrytis cinerea Pers. causa niveles importantes de pudrición, los que pueden superar el 10% en peras de exportación en Chile, principalmente en la variedad Packham’s Triumph. La enfermedad postcosecha más importante producida por B. cinerea en peras almacenadas en frío corresponde a la pudrición calicinal, cuyo control se realiza en floración, período en que el hongo produce infecciones latentes que se manifiestan en pudrición tras la madurez de la fruta. En años con primaveras húmedas se ha observado un aumento de la incidencia de la enfermedad, lo cual ha generado cuestionamientos acerca de los tratamientos de control e incertidumbre sobre la capacidad del patógeno de infectar los frutos durante su crecimiento. Los objetivos del presente estudio fueron determinar la ocurrencia de infecciones en campo durante el período de crecimiento de frutos bajo condiciones artificiales de alta humedad con y sin inoculación del patógeno, y determinar el nivel de infección en precosecha para evaluar la efectividad de las medidas de control realizadas por los productores en dos huertos comerciales de la zona central de Chile. En uno de los huertos estudiados se determinó que las inoculaciones lograron generar infecciones en el período de crecimiento de frutos, lo que permite concluir que el patógeno efectivamente puede infectar peras cv. Packham’s Triumph durante el crecimiento de los frutos. Por otro lado, el patógeno fue recuperado desde la cavidad calicinal de fruta no inoculada en crecimiento en ambos huertos, observándose también pudrición calicinal en postcosecha, lo que sería consecuencia de la inefectividad de las aplicaciones de fungicidas realizadas en floración por los productores. Este trabajo establece una base para la realización de estudios en campo en pudrición calicinal de perales en Chile. / Botrytis cinerea Pers. causes significant levels of postharvest decay that may be over 10% in pear fruit in Chile, especially in the cultivar Packham's Triumph. Calyx-end rot is the most important postharvest disease caused by B. cinerea in stored pears, and its control is achieved in the flowering period, when the fungus produces latent infections that manifest in fruit decay after ripening. It has been observed that there is an increased incidence of the disease in years with humid and rainy conditions during spring and summer, which has raised questions about control treatments and pathogen's ability to infect fruit during its growth under these conditions. The objectives of this study were to determine the occurrence of infections in the orchard during fruit growth under artificial high humidity conditions with and without pathogen inoculation, and to determine the level of preharvest infection in order to evaluate the efficacy of control measures taken by the growers in two commercial orchards of central Chile. In one of the studied orchards, inoculations resulted in infections during fruit growth, leading to the conclusion that the pathogen can effectively infect Packham's Triumph pears during this period. Moreover, the pathogen was isolated from the calyx cavity of non-inoculated fruit during the growth period, and postharvest calyx-end decay was also observed, which would indicate the inefficacy of fungicide applications performed by the growers. This work provides basic information for further field studies on calyx-end rot of pears in Chile.

Memoria para optar al Título Profesional de Ingeniera Agrónoma / En Chile, los nemátodos fitoparásitos constituyen uno de los principales problemas sanitarios que enfrenta el cultivo de la vid (Vitis vinífera L.). Su control se realiza mediante el uso de nematicidas químicos altamente tóxicos, los cuales generan problemas medioambientales, como la contaminación del suelo de napas subterráneas. Pese a que existen otras alternativas para estos productos, tales como portainjertos resistentes, enmiendas orgánicas y control biológico, no han sido implementados de forma masiva en el país debido a que no existe un desarrollo importante de ellos.

Memoria para optar al título profesional de Ingeniero Agrónomo / En Chile, Lobesia botrana es una plaga sometida a una campaña de erradicación/contención por el SAG, y su manejo emplea la confusión sexual (CS) como una herramienta fundamental, la cual es normalmente evaluada respecto del impacto en los machos (capturas en trampas) o, indirectamente, por los daños producidos en los cultivos infestados. El presente estudio abordó el desarrollo de las bases para implementar la técnica de la “hembra centinela”, confinando hembras vírgenes por un tiempo acotado y evaluando, luego, su estatus de cópula. En teoría, una hembra en esas condiciones (CS) no debería copular, o bien hacerlo en baja proporción. Para el estudio, se utilizaron pupas proporcionadas por FDF (colonia oficial autorizada por el SAG) y los estudios se desarrollaron en laboratorio, bajo bioseguridad, evaluando en hembras adultas: edad a la copula; dimensiones de la bursa copulatrix en vírgenes y copuladas, y su conservación fijadas en alcohol en el tiempo. Adicionalmente, se evaluaron dos métodos de confinamiento (con un ala amarrada a una plataforma vs. libres en jaulas de acceso restringido). Se midió los respectivos % de cópula al exponerlas a machos vírgenes. Se observó que las hembras son capaces de copular y oviponer entre las 24 y 48 horas después de la emergencia desde la pupa.

Memoria para optar al Título Profesional de Ingeniero Agrónomo Mención Sanidad Vegetal / Durante 3 temporadas (2011, 2012 y 2013), se estudió en el Laboratorio de Entomología Frutal Profesor Luciano Campos Street, Facultad de Ciencias Agronómicas, Universidad de Chile; el desarrollo y comportamiento de Lobesia botrana a distintas temperaturas, para determinar su umbral de y los requerimientos térmicos necesarios para su ciclo de vida. El estudio se realizó para cada uno de los estados de desarrollo de esta polilla (huevo-larva, larva-pupa, pupa-adulto). Las temperaturas evaluadas fueron 15ºC, 17ºC, 20ºC, 23ºC y 25ºC respectivamente.

Memoria para optar al Título Profesional de Ingeniero Agrónomo / El control de enfermedades de poscosecha es una problemática constante en la producción de uva de mesa, siendo Botrytis cinerea y Penicillium expansum, dos de los patógenos más importantes. El cuestionamiento a la cantidad máxima de residuos de agroquímicos permitidos en la fruta en los mercados de destino y la acotada cantidad de fungicidas disponibles en el mercado, han llevado a la búsqueda de alternativas a los fungicidas sintéticos, la cual se ha enfocado a productos naturales, amigables con el medio ambiente y libres de residuos. El principal objetivo de este estudio fue evaluar la actividad de 15 extractos de macrohongos en el control de ambos patógenos. Los macrohongos fueron colectados desde su ambiente natural, posteriormente secados, triturados y macerados en alcohol al 95%, y los extractos resultantes fueron utilizados en bioensayos de inhibición in vitro e in vivo. Para el control in vitro se enmendó agar papa dextrosa con cada extracto en etanol al 1% donde se sembró micelio y conidias de los patógenos. El control in vivo se realizó sobre bayas de uva de mesa del cv. Red Globe sometidas o no a desinfección previa con NaClO (0,5%). A las bayas se les realizó una herida y luego se aplicaron los extractos 1 y 24 horas antes de la inoculación con conidias de los patógenos. Los extractos con mayor efectividad inhibitoria in vitro del crecimiento miceliar de B. cinerea fueron Suillus luteus, Agarical sp. y Amanita sp. los que inhibieron en un 92,9, 71,0 y 69,4%, respectivamente. Para el control in vitro de P. expansum los dos extractos que tuvieron un mayor efecto fueron los de Agarical sp. y Agaricus arvensis con un 35,3 y 34,6% de inhibición del crecimiento miceliar, respectivamente. Los extractos con mayor efectividad en la inhibición de la germinación de conidias fueron: Agarical sp. y Macrolepiota rhacodes, para B. cinerea, y Agaricus arvensis y Laetiporus sulphureus para P. expansum. En el control in vivo solo el extracto de Amanita sp. tuvo un efecto en la inhibición de la pudrición causada por B. cinerea sobre las bayas, aplicado 24 horas antes de la inoculación, e igualmente en bayas sin desinfectar inoculadas con P. expansum. / Postharvest rots of table grapes are a constant problem for the industry with Botrytis cinerea and Penicillium expansum as the most important pathogens. Restrictions on the maximum amount of pesticide residues allowed on the fruit, and the limited number of fungicides registered in the markets have prompted the look for alternatives to the traditional chemical fungicides, focusing mainly on natural products environmentally friendly and free from residue restrictions. This study was aimed to evaluate the activity of 15 extracts of mushrooms in the control of both pathogens. The mushrooms were collected from their natural sources, dried, grounded and macerated in ethanol 95%, and the extracts obtained were evaluated in vitro and in vivo. Potato dextrose agar media was amended with the ethanol extracts at a rate of 1%, for the in vitro tests with mycelia or conidia of the pathogens. In vivo assays were conducted on Red Globe berries that were surface disinfected with NaOCl (0,5 %) or not disinfected at all. The berries were wound inoculated with a spore suspension of each pathogen 1 or 24 hours after the extracts treatments. The extracts that gave the greatest inhibition of the mycelial growth of B. cinerea were those of Suillus luteus, Agarical sp. and Amanita sp, which gave a 92.9, 71.0 and 69.4 % inhibition, respectively. While the extracts with the higher inhibition of the mycelial growth of P. expansum were those of Agarical sp. and Agaricus arvensis with 35.3 and 34.6 % inhibition, respectively. The extracts with the higher inhibition of the conidia germination were those of Agarical sp. and Macrolepiota rhacodes, for B. cinerea, and Agaricus arvensis and Laetiporus sulphureus for P. expansum. Only the extract of Amanita sp. reduced the rot caused by B. cinerea when applied 24 hours before berry inoculation and the rot caused by P. expansum on berries that were not disinfected.