Orientadores: Silmara Marques Allegretti, Vera Lúcia Garcia Rehder / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-23T02:12:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Oliveira_ClaudineideNascimentoFernandesde_D.pdf: 6645819 bytes, checksum: c09a778f460110b77585bd22b8da5344 (MD5) Previous issue date: 2012 / Resumo: A propagação da esquistossomose e a ameaça de tolerância e resistência ao fármaco de escolha, o praziquantel, têm intensificado as pesquisas utilizando plantas medicinais com o intuito de promover o desenvolvimento de novos fármacos esquistossomicidas. A planta Phyllanthus amarus (quebra-pedra) possui atividades antiinflamatória e hepatoprotetora já comprovadas cientificamente, o que fez com que a mesma fosse selecionada para este estudo, uma vez que a principal patologia da esquistossomose é a formação de granulomas (processo inflamatório) no fígado. Esse trabalho teve como objetivo fazer um fracionamento biomonitorado do extrato etanólico de P. amarus por meio de ensaios in vitro e in vivo com o intuito de verificar a ação esquistossomicida dessa planta contra o S. mansoni linhagem BH. Para a realização dos testes in vitro, os vermes adultos coletados foram incubados em placas contendo meio de cultura RPMI 1640, um casal de verme e amostras de extrato etanólico bruto, frações de diferentes polaridades ou lignanas isoladas nas concentrações 200, 100, 50 e 25 ?g/mL. Os vermes foram observados por um período de 72 horas, sendo avaliados a taxa de mortalidade, a oviposição, o acasalamento e as alterações tegumentares. A melhor atividade in vitro foi observada com a fração 2 butanólica, pois foi letal para 100% dos vermes em 48 h de observação, sendo assim selecionada para os testes in vivo. A fração 2 butanólica é composta majoritariamente por lignanas, por isso algumas delas (nirantina, filantina + nirantina e filantina + filtetralina + nirtetralina), mesmo não sendo efetivas nos testes in vitro, foram selecionadas para avaliação in vivo. Nos testes in vivo camundongos Balb/c foram tratados oralmente, 45 ou 60 dias após a infecção. No 45° dia de infecção os animais foram tratados com 100 e 200 mg/kg da fração 2 butanólica, 100 mg/kg das lignanas nirantina, filantina + nirantina e filantina + filtetralina + nirtetralina em dose única e 100 mg/kg da fração 2 butanólica distribuídos em 3 dias consecutivos. Já no 60° dia de infecção o tratamento foi feito em dose única com a fração 2 butanólica, nirantina, filantina + nirantina e filantina + filtetralina + nirtetralina (100mg/kg). A atividade in vivo foi avaliada com base nos seguintes parâmetros: ação sobre os vermes adultos, ovos eliminados nas fezes, oograma, formação das reações granulomatosas, e ação sobre o tegumento (feita por microscopia eletrônica de varredura - MEV). Os tratamentos mais efetivos no 45° dia de infecção foram apresentados pelos grupos tratados com filantina + nirantina e nirantina (100mg/kg). A lignana nirantina apresentou taxa de redução do número de ovos de 90,3% e a associação da filantina + nirantina, 63,8%. Os resultados referentes aos demais parâmetros (redução do total de vermes, de vermes fêmeas e do número de granulomas) foram semelhantes, apresentando taxas de redução em torno de 58%. Além dessas alterações, as imagens obtidas por MEV mostraram extensas lesões no tegumento dos vermes machos. No 60° dia de infecção, a associação de lignanas filantina + nirantina e a fração 2 butanólica (100mg/kg) apresentaram as taxas de redução mais significativas: 50,8% e 46,7% para o número total de vermes, 47,2% e 42,7% para o número de vermes fêmeas, 87,5% e 98,3% para o número de ovos e 44% e 18% para o número de granulomas, respectivamente. Assim sendo, de acordo com os parâmetros biológicos avaliados neste trabalho, a associação das lignanas filantina: nirantina na concentração de 100 mg/kg revelou um efeito esquistossomicida promissor, uma vez que foi efetiva nos dois períodos estudados / Abstract: The dissemination of schistosomiasis and the threat of its causing agents becoming resistant to the drug of choice, i.e., praziquantel, have intensified the research with medicinal plants to promote the development of new schistosomicidal drugs. Phyllanthus amarus (stone-breaker) is a plant whose anti-inflammatory and hepatoprotective activities have already been attested, which is the reason why it was chosen for this study, as the main pathology of schistosomiasis is the formation of granulomas (inflammatory process) in the liver. The aim of this work was to carry out a bioguided fractionation of the ethanol extract of P. amarus by means of in vitro and in vivo assays in order to verify the schistosomicidal potential of that plant against S. mansoni, BH strain. To carry out the in vitro assays, the collected adult worms were incubated in plates containing RPMI 1640 medium, a pair of mating worms, and samples of crude ethanol extract, fractions of different polarities or isolated lignans at the concentrations of 200, 100, 50 and 25 ?g/mL. The worms were observed over a period of 72 hours, in which mortality rate, egg laying, mating, and tegumentary changes were evaluated. The best in vitro activity was provided by butanol fraction 2, as it proved lethal for 100% of the worms over 48 hours of observation, and so it was used in the in vivo assays. Butanol fraction 2 is mainly composed of lignans, and some of them (nirantin, filantin: nirantin, and filantin + filtetralin + nirtetralin), albeit not effective in the in vitro assays, were selected for in vivo evaluation. In the in vivo assays, Balb/c mice were treated orally 45 or 60 days following infection. On the 45th day following infection, the animals were treated with 100 and 200 mg/kg of butanol fraction 2, 100 mg/kg of filantina:nirantin and filantin + filtetralin + nirtetralin in a single dose, and 100 mg/kg of butanol fraction 2 distributed over 3 consecutive days. On the 60th day following infection, the treatment was carried out in a single dose with 100 mg/kg of butanol fraction 2, nirantin, filantina:nirantin, and filantin + filtetralin + nirtetralin. The in vivo activity was evaluated based on the following parameters: action on adult worms, eggs eliminated in the stool, egg counting, granulomatous reactions, and action on the tegument of the worms (using scanning electron microscopy (SEM). The most effective treatments on the 45th day were those carried out with 100 mg/kg of filantina:nirantin, and nirantin. The association of filantina:nirantin provided a reduction of 63.8% in the number of eggs, whereas nirantin achieved a reduction rate of 90.3%. The results for the other parameters (reduction in the total number of worms, number of females, and number of granulomas) were similar with reduction rates around 58%. In addition to such changes, images obtained by SEM showed extensive lesions on the tegument of male worms. On the 60th day following infection, the filantin + nirantin association and butanol fraction 2 at 100 mg/kg achieved the most significant xxiii reduction rates: 50.8% and 46.7% in the total number of worms, respectively; 47.2% and 42.7% in the number of females, respectively; 87.5% and 98.3% in the number of eggs, respectively; and 44% and 18% in the number of granulomas, respectively. Therefore, according to the biological parameters evaluated in this work, the association of the lignans filantina:nirantin at 100 mg/kg has a promising schistosomicidal activity, as it was effective over two periods of treatment / Doutorado / Parasitologia / Doutora em Parasitologia

No presente trabalho foram estudadas as separações de 18 flavonóides (9 agliconas e 9 glicosídeos) pelas técnicas de Cromatografia Líquida de Alta Eficiência em fase reversa (RP-HPLC) e Cromatografia Micelar Eletrocinética em fluxo reverso (RF-Meck). Em ambas as técnicas foram avaliados solventes puros (metanol, acetonitrila e tetrahidrofurano) e suas misturas como formas de promover a variação de seletividade, através da modificação da fase móvel em HPLC, e da natureza do aditivo orgânico em RF-Meck. Nos estudos efetuados em HPLC utilizando-se gradiente, pode-se comprovar a possibilidade da modelagem do fator de retenção em funçã da proporção de solvente utilizados (MeOH, ACN, THF e suas misturas). Pode-se ainda, com base nos dados de retenção e na análise hierárquica de c1usters, diferenciar quatro diferentes grupos de sistemas cromatográficos com diferentes seletividades para flavonóides agliconas, e outros quatro com diferentes seletividades para glicosídeos. Os sistemas cromatográficos mais ortogonais (cada um pertencente a um grupo de seletividade) foram aplicados na separação de uma planta modelo (Azadirachta indica), de onde pode-se escolher a fase móvel mais seletiva para se otimizar a separação dos flavonóides glicosilados presentes nas folhas desta planta. No método final otimizado pode-se identificar e quantificar cinco dos flavonóides majoritários presentes, sendo três glicosídeos de quercetina (rutina, isoquercitrina e quercitrina) e dois glicosídeos de kaempferol (astragalin e nicotiflorin), em amostras de duas diferentes procedências (Piracicaba-SP e Silvânia-GO). Nos estudos envolvendo a separação dos dezoito flavonóides por RFMEKC pode-se comprovar diferenças significativas de seletividade quando se varia a natureza do solvente orgânico utilizado como aditivo, além de se observar tendências na migração em função das propriedades do solvente adicionado e da estrutura molecular do flavonóide. O solvente de menor eficiência para separação dos flavonóides foi o MeOH. Através da análise dos eletroferogramas obtidos através de um planejamento experimental de misturas, e das trocas de pares críticos observadas nos vários eletrólitos utilizados, obteve-se um método de separação com apenas um par crítico em menos de 12 minutos de corrida. O coeficiente de variação obtido para o fator de retenção foi de 1,5% e para área de 3%, considerando-se cinco injeções. O método desenvolvido foi aplicado com sucesso na identificação dos flavonóides majoritários presentes na planta modelo (Neem), obtendo-se o mesmo resultado do estudo anterior. Como forma de avaliar a concentração de flavonóides totais presentes em espécies vegetais é comum a análise de extratos após hidrólise ácida (conversão de todos glicosídeos em agliconas). Desta forma otimizou-se uma metodologia de separação em RP-HPLC de 8 flavonóides agliconas comumente presentes em alimentos e extratos vegetais de uso cosmético. A otimização foi efetuada mediante um planejamento experimental de misturas, para escolha da fase móvel mais seletiva, e de um planejamento fatorial composto central, para otimização das condições de gradiente. O método obtido foi o mais rápido já visto dentro da literatura consultada. A separação em linha de base foi efetuada em menos de 15 minutos, com coeficientes de variação de área entre 0,1 e 1,8%, coeficiente de correlação de 0,9993 a 0,9994 na faixa de 5 a 100 µg/mL, e limites de quantificação estimados na faixa de 0,1 a 0,21µg/mL. O método desenvolvido foi aplicado na otimização das condições de hidrólise de um extrato de Neem. A otimização foi efetuada através de metodologia de superfície de resposta, levando-se em consideração a concentração de ácido adicionada, o tempo de reação, a temperatura, e a concentração de um antioxidante (ácido ascórbico) adicionado. O resultado da otimização foi uma metodologia de hidrólise com tempo de reação igual a 5 minutos, utilizando-se 1,4 mol/L de HCI, 119°C e 500 µg/mL de ácido ascórbico. Através das metodologias de análise e de hidrólise desenvolvidas pode-se constatar a presença e quantificar no extrato de Neem os flavonóides agliconas quercetina, kaempferol e miricetina. Com o objetivo de se avaliar quais os componentes presentes em extratos vegetais são os responsáveis pelo poder antioxidante atribuído a determinadas plantas, foi montado um sistema de avaliação de poder antioxidante \"on-line\" com reação pós-coluna em HPLC (baseado na literatura) utilizando-se como \"radical livre modelo\" o ABTS. A análise da planta modelo (Neem) neste sistema mostrou que os flavonóides glicosilados identificados nas partes anteriores deste trabalho são os responsáveis pelo poder antioxidante atribuído a esta planta. De posse desta informação, e visando a obtenção de extratos para aplicações cosméticas com poder antioxidante, modelou-se a extração dos flavonóide do Neem em função da composição do solvente extrator (água, etanol , propilenoglicol e suas misturas), de acordo com um planejamento simplex centróide ampliado. Além da previsão da concentração dos princípios ativos pode-se ainda prever outras propriedades dos extratos obtidos, tais como, índice de refração e densidade, muitas vezes constituintes de especificações técnicas de acordo com as aplicações a que se destinam (cremes, xampús, etc). / At this work, separation of 18 flavonoids (9 aglycones and 9 glycosides) using High Performance Liquid Chromatography (HPLC) and Reduced Flow Micellar Electrokinetic Chromatography (RF-MEKC) were evaluated. For both techniques, pure solvents (methanol, acetonitrile and tetrahydrofuran) e their mixtures were evaluated as an approach of varying selectivity by changing mobile phase in HPLC and organic additive type in RF-MEKC. For HPLC studies using gradient elution, it was possible to guarantee the modeling for retention factor in function of organic solvent used (methanol, acetonitrile and tetrahydrofuran and theirs mixtures). It can be also confirmed, based on retention data and hierarquical clusters analysis, four different chromatographic groups with different selectivity for flavonoid aglycone, and four groups with different selectivity for glycosides. More orthogonal chromatographic systems (each one belonging to a selectivity group) were applied to Neem (Azadirachta Indica) analysis. From this study, it can be chosen the most selective mobile phase composition and optimize flavonoid glycosides separation present at Neem leaves. Applying optimized method, five major flavonoids can be identified and quantified, three quercetin glycosides (rutin, isoquercitrin and quercitrin) and two kaempferol glycosides (astragalin and nicotiflorin), at two samples from different origins (Piracicaba-SP and Silvânia-GO). For studies regarding eighteen flavonoids separation by RF-MEKC can be proved significant selectivity differences when distinct organic solvent are used as additive. Moreover, it can be noted tendencies in migration behaviour depending of solvent used and molecular structure of flavonoids. The solvent with less efficiency to f/avonoid separation is methanol. Analyzing electropherograms obtained by a design of mixtures and by criticai pairs changes observed in diverse electro/ytes, a separation method with only one criticai pair and 12 minutes run was obtained. Coefficient of variation obtained for retention factor was 1.5% and 3% for area (n=5). Developed method was applied to identify major flavonoids at model plant (Neem) and same results observed at previous work were obtained. In order to evaluate total flavonoid concentration present in a plant is a common approach to analyse extracts after acid hydrolyze (convert ali glycosides to aglycones). A method was optimized to separate 8 flavonoid aglicones by RPHPLC usually present in food and vegetal extracts to cosmetic use. Optimization was performed by a mixture factorial design to select the most selective mobile phase composition and one facto ria I design with central point to optimize gradient parameters. Developed methodology is the faster reported in literature until now. Baseline separation was achieved in less than 15 minutes, with coefficients of variation between 0.1 and 1.8%, correlation coefficient from 0,9993 to 0,9994 at 5-100 µg/mL concentration range and quantification limits from 0.1 to 0.21 µg/mL. Developed method was used to optimize hydrolize parameters for a Neem extract. Optimization was realized by a response surface methodology, having concentration of acid added, reaction time, temperature and antioxidant (ascorbic acid) concentration added as parameters. From this study was developed a hydrolyze methodology with 5 minutes of reaction time, using 1.4 mol/L HCI, 119°C and 500 µg/mL of ascorbic acid. Applying method of analysis and hydrolyze developed at Neem extracts it can be identified and quantified aglicones quercetin, kaempferol and miricetin. Aiming to evaluate which compounds in a vegetal extract have antioxidant activity credited to some plants, an on-line system with post-column reaction was built in HPLC (based on literature), using ABTS as free radical mode!. Neem analysis at this system showed that flavonoid glycosides identified before are the responsible for antioxidant activity described for this plant. Based on this information and intending to obtain vegetal extracts with antioxidant activity for cosmetic use, Neem extraction procedure was modeled in function of solvent mixture used (water, ethanol, propylene glycol and their mixtures), following a simplex centroid designo Besides the concentration of active components prediction it can also be predict other properties like refractive index and density, properties that might be included at technical specifications depending of the intended use (creams, shampoos, etc).

MATOS, Mayara Patrícia Viana de. Aspectos bioquímicos e etnofarmacológicos do látex de Himatanthus drasticus Mart. (Plumel). 2013. xix, 89 f. : Dissertação (Mestrado) - Universidade Federal do Ceará, Centro de Ciências, Departamento de Bioquímica e Biologia Molecular, Programa de Pós-Graduação em Bioquímica. Fortaleza-CE, 2013. / Submitted by Eric Santiago (erichhcl@gmail.com) on 2016-06-20T13:34:18Z No. of bitstreams: 1 2013_dis_mpvmatos.pdf: 2159476 bytes, checksum: ddbc07e064712e575447b91164349d1e (MD5) / Approved for entry into archive by José Jairo Viana de Sousa (jairo@ufc.br) on 2016-07-26T20:01:21Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_dis_mpvmatos.pdf: 2159476 bytes, checksum: ddbc07e064712e575447b91164349d1e (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-26T20:01:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_dis_mpvmatos.pdf: 2159476 bytes, checksum: ddbc07e064712e575447b91164349d1e (MD5) Previous issue date: 2013 / Himatanthus drasticus (Apocynaceae) is traditionally used in folk medicine in Northeastern Brazil. The plant is wildly distribuited from Guianas until Southeast Brazil. Latex obtained by cutting its stem bark is mixed with water and extensively sold in public markets. People use Janaguba milk (“Leite de Janaguba”- LJ) to treat or prevent different inflammatory disorders such as gastritis, ulcers as well as cancer, among other uses. Despite, there is not enough scientific data confirming these pharmacological properties. In this work, Janaguba milk was preliminarily investigated in an attempt to validate its anti- inflammatory activity. Its major protein fraction (HdLP) was assessed for the presence of anti- inflammatory, anti-nociceptive and toxicological effects. LJ inhibited the inflammatory response induced by carrageenan in rats (98%, p < 0.05), whereas HdLP did it independent of the route of administration. HdLP significantly reduced the infiltration of neutrophils into the peritoneal cavity (96%, p < 0.05) concomitant with increased nitric oxide synthesis in plasma and decrease of pro-inflammatory cytokines IL- 1 and TNF-α in peritoneal fluid. This fraction also prevented vacuolization and Kupfer cell hyperplasia caused by carrageenan in liver. Further, the anti-inflammatory properties were shown to be associated with the protein fraction of LJ. HdLP exhibited anti-inflammation, even after heat-treatment (100 C, 30 min) or proteolysis. Moreover, a pro-inflammatory effect was observed after HdLP treatment. It also suppressed abdominal constrictions in acetic acid-treated mice and reduced paw licking induced by formalin, both in a dose-dependent manner. An acute toxicological evaluation demonstrated no toxic effects after 14 days from LJ and HdLP administration by oral route even when high doses were tested. A qualitative phytochemical analysis showed the absence of lupeol and presence of saponinas, tannins and free steroids in HdLP. However, pharmacological properties are probably not related to them. It is therefore concluded that the latex of Himatanthus drasticus exhibits both the anti-inflammatory and anti-nociceptive activities claimed by its users. The protein fraction of the latex is an important contributor to the pharmacological properties of LJ. Resistance to heat and proteolytic treatment can explain the effectiveness of HdLP even when administered orally. The absence of toxic effects by oral route confirms the potential use of this plant as a phytotherapic agent. / Himatanthus drasticus (Apocynaceae) é uma espécie tradicionalmente utilizada na medicina popular da região nordeste deste país. Sua distribuição ocorre das Guianas ao sudeste do Brasil. O látex desta planta é obtido após uma injúria no caule e amplamente comercializado em mercados públicos. As pessoas ingerem o látex, conhecido como Leite de Janaguba (LJ), para o tratamento e/ou prevenção de diferentes doenças inflamatórias, gastrite, úlcera, câncer, entre outras. Apesar das diversas informações oriundas da medicina popular, não existem relatos científicos suficientes confirmando tais propriedades farmacológicas. Neste trabalho, LJ foi investigado com o propósito de validar sua tão popularmente relatada atividade anti-inflamatória. A fração proteica deste látex (HdLP) também foi investigada quanto à presença de atividades anti-inflamatória, antinociceptiva, além de seus efeitos toxicológicos. LJ inibiu a resposta inflamatória induzida por carragenina em ratos (98%, p < 0.05), assim como o fez a fração HdLP, independente da rota de administração. HdLP reduziu a infiltração de neutrófilos na cavidade peritoneal (96%, p < 0.05). Paralelamente a isto, ocorreu o aumento da síntese de óxido nítrico no plasma e a redução de citocinas pró-inflamatórias (IL-1 e TNF-α) no fluido peritonal. Esta fração também preveniu a vacuolização e hiperplasia das células de Kupfer, causadas pelo efeito da carragenina no fígado. Atividade anti-inflamatória está provavelmente associada com a fração proteica de LJ. HdLP exibiu um efeito anti-inflamatório mesmo após aquecimento (100 C, 30 minutos) ou proteólise. Além desta atividade, um efeito pró-inflamatório foi observado após o tratamento com HdLP. Esta também suprimiu contrações abdominais induzidas por ácido acético e reduziu a lambedura de pata induzida por formalina, ambos de maneira dose-dependente. A avaliação da toxicidade aguda demonstrou a ausência de efeitos tóxicos após tratamento com LJ e HdLP (v.o.) mesmo utilizando doses 5000 vezes maiores que as recomendadas. Uma dosagem qualitativa de fitoquímicos em HdLP mostrou a ausência de lupeol e presença de saponinas, taninos e esteróides livres. Entretanto, as propriedades farmacológicas provavelmente não estão relacionadas com estas moléculas. Desta forma, concluímos que o látex de H. drasticus exibe duas das atividades farmacológicas relatadas por seus usuários e a fração proteica deste látex é um importante contribuinte para tais propriedades medicinais. A resistência ao aquecimento e à proteólise pode explicar a efetividade de HdLP quando administrada oralmente. A ausência de efeitos tóxicos por via oral torna esta planta uma potencial candidata a fitoterápico.

No presente trabalho foram estudadas as separações de 18 flavonóides (9 agliconas e 9 glicosídeos) pelas técnicas de Cromatografia Líquida de Alta Eficiência em fase reversa (RP-HPLC) e Cromatografia Micelar Eletrocinética em fluxo reverso (RF-Meck). Em ambas as técnicas foram avaliados solventes puros (metanol, acetonitrila e tetrahidrofurano) e suas misturas como formas de promover a variação de seletividade, através da modificação da fase móvel em HPLC, e da natureza do aditivo orgânico em RF-Meck. Nos estudos efetuados em HPLC utilizando-se gradiente, pode-se comprovar a possibilidade da modelagem do fator de retenção em funçã da proporção de solvente utilizados (MeOH, ACN, THF e suas misturas). Pode-se ainda, com base nos dados de retenção e na análise hierárquica de c1usters, diferenciar quatro diferentes grupos de sistemas cromatográficos com diferentes seletividades para flavonóides agliconas, e outros quatro com diferentes seletividades para glicosídeos. Os sistemas cromatográficos mais ortogonais (cada um pertencente a um grupo de seletividade) foram aplicados na separação de uma planta modelo (Azadirachta indica), de onde pode-se escolher a fase móvel mais seletiva para se otimizar a separação dos flavonóides glicosilados presentes nas folhas desta planta. No método final otimizado pode-se identificar e quantificar cinco dos flavonóides majoritários presentes, sendo três glicosídeos de quercetina (rutina, isoquercitrina e quercitrina) e dois glicosídeos de kaempferol (astragalin e nicotiflorin), em amostras de duas diferentes procedências (Piracicaba-SP e Silvânia-GO). Nos estudos envolvendo a separação dos dezoito flavonóides por RFMEKC pode-se comprovar diferenças significativas de seletividade quando se varia a natureza do solvente orgânico utilizado como aditivo, além de se observar tendências na migração em função das propriedades do solvente adicionado e da estrutura molecular do flavonóide. O solvente de menor eficiência para separação dos flavonóides foi o MeOH. Através da análise dos eletroferogramas obtidos através de um planejamento experimental de misturas, e das trocas de pares críticos observadas nos vários eletrólitos utilizados, obteve-se um método de separação com apenas um par crítico em menos de 12 minutos de corrida. O coeficiente de variação obtido para o fator de retenção foi de 1,5% e para área de 3%, considerando-se cinco injeções. O método desenvolvido foi aplicado com sucesso na identificação dos flavonóides majoritários presentes na planta modelo (Neem), obtendo-se o mesmo resultado do estudo anterior. Como forma de avaliar a concentração de flavonóides totais presentes em espécies vegetais é comum a análise de extratos após hidrólise ácida (conversão de todos glicosídeos em agliconas). Desta forma otimizou-se uma metodologia de separação em RP-HPLC de 8 flavonóides agliconas comumente presentes em alimentos e extratos vegetais de uso cosmético. A otimização foi efetuada mediante um planejamento experimental de misturas, para escolha da fase móvel mais seletiva, e de um planejamento fatorial composto central, para otimização das condições de gradiente. O método obtido foi o mais rápido já visto dentro da literatura consultada. A separação em linha de base foi efetuada em menos de 15 minutos, com coeficientes de variação de área entre 0,1 e 1,8%, coeficiente de correlação de 0,9993 a 0,9994 na faixa de 5 a 100 &#181;g/mL, e limites de quantificação estimados na faixa de 0,1 a 0,21&#181;g/mL. O método desenvolvido foi aplicado na otimização das condições de hidrólise de um extrato de Neem. A otimização foi efetuada através de metodologia de superfície de resposta, levando-se em consideração a concentração de ácido adicionada, o tempo de reação, a temperatura, e a concentração de um antioxidante (ácido ascórbico) adicionado. O resultado da otimização foi uma metodologia de hidrólise com tempo de reação igual a 5 minutos, utilizando-se 1,4 mol/L de HCI, 119°C e 500 &#181;g/mL de ácido ascórbico. Através das metodologias de análise e de hidrólise desenvolvidas pode-se constatar a presença e quantificar no extrato de Neem os flavonóides agliconas quercetina, kaempferol e miricetina. Com o objetivo de se avaliar quais os componentes presentes em extratos vegetais são os responsáveis pelo poder antioxidante atribuído a determinadas plantas, foi montado um sistema de avaliação de poder antioxidante \"on-line\" com reação pós-coluna em HPLC (baseado na literatura) utilizando-se como \"radical livre modelo\" o ABTS. A análise da planta modelo (Neem) neste sistema mostrou que os flavonóides glicosilados identificados nas partes anteriores deste trabalho são os responsáveis pelo poder antioxidante atribuído a esta planta. De posse desta informação, e visando a obtenção de extratos para aplicações cosméticas com poder antioxidante, modelou-se a extração dos flavonóide do Neem em função da composição do solvente extrator (água, etanol , propilenoglicol e suas misturas), de acordo com um planejamento simplex centróide ampliado. Além da previsão da concentração dos princípios ativos pode-se ainda prever outras propriedades dos extratos obtidos, tais como, índice de refração e densidade, muitas vezes constituintes de especificações técnicas de acordo com as aplicações a que se destinam (cremes, xampús, etc). / At this work, separation of 18 flavonoids (9 aglycones and 9 glycosides) using High Performance Liquid Chromatography (HPLC) and Reduced Flow Micellar Electrokinetic Chromatography (RF-MEKC) were evaluated. For both techniques, pure solvents (methanol, acetonitrile and tetrahydrofuran) e their mixtures were evaluated as an approach of varying selectivity by changing mobile phase in HPLC and organic additive type in RF-MEKC. For HPLC studies using gradient elution, it was possible to guarantee the modeling for retention factor in function of organic solvent used (methanol, acetonitrile and tetrahydrofuran and theirs mixtures). It can be also confirmed, based on retention data and hierarquical clusters analysis, four different chromatographic groups with different selectivity for flavonoid aglycone, and four groups with different selectivity for glycosides. More orthogonal chromatographic systems (each one belonging to a selectivity group) were applied to Neem (Azadirachta Indica) analysis. From this study, it can be chosen the most selective mobile phase composition and optimize flavonoid glycosides separation present at Neem leaves. Applying optimized method, five major flavonoids can be identified and quantified, three quercetin glycosides (rutin, isoquercitrin and quercitrin) and two kaempferol glycosides (astragalin and nicotiflorin), at two samples from different origins (Piracicaba-SP and Silvânia-GO). For studies regarding eighteen flavonoids separation by RF-MEKC can be proved significant selectivity differences when distinct organic solvent are used as additive. Moreover, it can be noted tendencies in migration behaviour depending of solvent used and molecular structure of flavonoids. The solvent with less efficiency to f/avonoid separation is methanol. Analyzing electropherograms obtained by a design of mixtures and by criticai pairs changes observed in diverse electro/ytes, a separation method with only one criticai pair and 12 minutes run was obtained. Coefficient of variation obtained for retention factor was 1.5% and 3% for area (n=5). Developed method was applied to identify major flavonoids at model plant (Neem) and same results observed at previous work were obtained. In order to evaluate total flavonoid concentration present in a plant is a common approach to analyse extracts after acid hydrolyze (convert ali glycosides to aglycones). A method was optimized to separate 8 flavonoid aglicones by RPHPLC usually present in food and vegetal extracts to cosmetic use. Optimization was performed by a mixture factorial design to select the most selective mobile phase composition and one facto ria I design with central point to optimize gradient parameters. Developed methodology is the faster reported in literature until now. Baseline separation was achieved in less than 15 minutes, with coefficients of variation between 0.1 and 1.8%, correlation coefficient from 0,9993 to 0,9994 at 5-100 &#181;g/mL concentration range and quantification limits from 0.1 to 0.21 &#181;g/mL. Developed method was used to optimize hydrolize parameters for a Neem extract. Optimization was realized by a response surface methodology, having concentration of acid added, reaction time, temperature and antioxidant (ascorbic acid) concentration added as parameters. From this study was developed a hydrolyze methodology with 5 minutes of reaction time, using 1.4 mol/L HCI, 119°C and 500 &#181;g/mL of ascorbic acid. Applying method of analysis and hydrolyze developed at Neem extracts it can be identified and quantified aglicones quercetin, kaempferol and miricetin. Aiming to evaluate which compounds in a vegetal extract have antioxidant activity credited to some plants, an on-line system with post-column reaction was built in HPLC (based on literature), using ABTS as free radical mode!. Neem analysis at this system showed that flavonoid glycosides identified before are the responsible for antioxidant activity described for this plant. Based on this information and intending to obtain vegetal extracts with antioxidant activity for cosmetic use, Neem extraction procedure was modeled in function of solvent mixture used (water, ethanol, propylene glycol and their mixtures), following a simplex centroid designo Besides the concentration of active components prediction it can also be predict other properties like refractive index and density, properties that might be included at technical specifications depending of the intended use (creams, shampoos, etc).

Luffa operculata é uma planta medicinal popularmente usada para tratamento de rinites e rinossinusites. A infusão de seu fruto seco é usada no nariz, liberando secreção mucosa profusa, mas pode causar irritação, epistaxe ou anosmia. Avaliamos os efeitos de diferentes concentrações da infusão do fruto seco da Luffa operculata na velocidade de transporte mucociliar (VTM), freqüência de batimento ciliar (FBC), diferença de potencial transepitelial (DPT) e morfologia do epitélio (microscopia de luz e eletrônica de transmissão), no modelo do palato isolado de rã. Os resultados apontam para dano epitelial dose-dependente no epitélio mucociliar, sugerindo que ela seja potencialmente nociva à mucosa nasal humana / Luffa operculata is a medicinal plant popularly used for treatment of rhinitis and rhinosinusitis. Its dry fruit infusion is used into the nose, delivering profuse mucous secretion, but may cause nasal mucosa irritation, epistaxis or anosmia. We evaluated the effects of different concentrations of Luffa operculata dry fruit infusion on mucociliary transport velocity (MTV), ciliary beat frequency (CBF), transepithelial potential difference (TPD) and epithelial morphology (light and electron transmission microscopy) of the isolated frog palate preparation. Results pointed to dose-dependent epithelial damage on mucociliary epithelium, suggesting that it is potentially noxious to the human nasal mucosa

Luffa operculata é uma planta medicinal popularmente usada para tratamento de rinites e rinossinusites. A infusão de seu fruto seco é usada no nariz, liberando secreção mucosa profusa, mas pode causar irritação, epistaxe ou anosmia. Avaliamos os efeitos de diferentes concentrações da infusão do fruto seco da Luffa operculata na velocidade de transporte mucociliar (VTM), freqüência de batimento ciliar (FBC), diferença de potencial transepitelial (DPT) e morfologia do epitélio (microscopia de luz e eletrônica de transmissão), no modelo do palato isolado de rã. Os resultados apontam para dano epitelial dose-dependente no epitélio mucociliar, sugerindo que ela seja potencialmente nociva à mucosa nasal humana / Luffa operculata is a medicinal plant popularly used for treatment of rhinitis and rhinosinusitis. Its dry fruit infusion is used into the nose, delivering profuse mucous secretion, but may cause nasal mucosa irritation, epistaxis or anosmia. We evaluated the effects of different concentrations of Luffa operculata dry fruit infusion on mucociliary transport velocity (MTV), ciliary beat frequency (CBF), transepithelial potential difference (TPD) and epithelial morphology (light and electron transmission microscopy) of the isolated frog palate preparation. Results pointed to dose-dependent epithelial damage on mucociliary epithelium, suggesting that it is potentially noxious to the human nasal mucosa