The use of water based adhesive primers in enhancing the durability of aluminum adhesively bonded with epoxy was studied. The effects of the thickness of both the aluminum oxide surface layer and the primer layer on bond durability were established. 5052 aluminum alloy was oxidized by phosphoric acid anodization prior to primer coating. The oxide layer thickness was controlled mainly by changing anodization voltage and directly measured using a HR-SEM (high resolution scanning electron microscope). The oxide layer was also examined by AES (Auger electron spectroscopy) and XPS (X ray photoelectron spectroscopy). The surface oxide layer was porous and the thickness varied from 0.2 to 2.2 μm. The anodized aluminum substrates contained 3 atomic % of phosphorus and were coated with several solid concentrations of water based adhesive primers. These primers contained non-reactive polyurethane emulsions, and were dried at room temperature. The primer thicknesses were measured by ellipsometry. The primer penetrated into the aluminum oxide pores, confirmed by observing the primer surface after the aluminum oxide was removed by dissolving in dilute NaOH aqueous solution. All adhesive bonding was done using the wedge test configuration with a structural epoxy adhesive, Naviloc® XY 0210, which was cured for 30 min. at 180°C. The wedge samples were immersed in 80°C water and crack lengths were monitored as a function of time. Both the initial crack length and crack propagation were minimized when the primer thickness was a little less than the aluminum oxide thickness. In a separate study, the aluminum oxide surfaces were aged in hot water or hot humid environment before bonding. The crack lengths of the aged samples for both 60°C water immersion and 70°C ≥95 %R.H. conditions were similar to those of non-aged sample. On the other hand, when the samples were aged in 80°C water, the oxide was hydrated and the crack length increased. The locus of failure also changed from cohesive failure in the adhesive for the lower temperature aged samples to a mixed mode of cohesive failure and aluminum oxide-primer interfacial failure for the 80°C aged samples. / Master of Science

Microalgae are photosynthetic organisms considered to be one of the most promising high-value chemicals and biofuel-producing organisms. However, there are several challenges for the widespread implementation of industrial processes using microalgae. The work presented in this dissertation proposes solutions to the different challenges involving the use of microalgae as microbial cell factories. To investigate the application of anaerobic digestion as a way to generate nutrients for microbial growth, salmon offal was used as substrate for anaerobic digestion, and soil from a flooded run-off pond on the Virginia Tech campus in Blacksburg, VA. A fast reduction in volatile solids and the short-chain fatty acid production profile is favorable for the growth of microalgae. A novel algae strain Scenedesmus sp. A6 was isolated from a decorative waterfountain in a hotel in Madison, IN. Mixotrophic growth trials were conducted using wastewater from the salmon offal digestion, that demostrated the A6 isolate grows six times faster in the wastewater then autotrophically. Bioassays of ethanolic cell extracts of A6 cultures demonstrated antimicrobial activity against E. coli cells at concentrations above 50 µg/ml. Genome sequencing and assembly revealed multiple copies of genes involved with acetate and ammonia metabolism, and several genes involved with secondary metabolite synthesis. An alternative to the high capital investment of photobioreactors for the cultivation of microalgae is the use of open-source and open-hardware bioreactor controller. Here, the concept of an open-hardwate bioreactor control called ``BioBrain'' is introduced. The BioBrain device is based on the Arduino Mega micro-controller board, and is capable of monitoring and controlling culture conditions during simple strain characterization studies, with an estimated construction cost of less than $800 USD. Finally, a new primer design tool for the ligation-independant cloning technique 𝜆-PCR was developed called lambdaPrimeR. The contributions of this work are the discovery and development of different tools that can overcome the challenges of the use of microalgae as microbial cell factories in industrial processes. / Ph. D. / Microalgae are single-celled organisms capable of photosynthesis and have the potential to revolutionize fuel and high-value chemical production. However, the high process costs involving the cultivation and biomass harvesting of these organisms limits the number of industrial applications of microalgae. Therefore, reduction of the overall costs of any process involving microalgae is vital for the widespread use of these organisms in industry. On this dissertation, I explore different approaches to tackle the challenges of using microalgae as a high-value chemicals cell factories. First, the use of anaerobic digestion of salmon offal to generate low-cost nutrients for algae growth is successfully demonstrated, with the discovery of a novel algae isolate Scenedesmus sp. A6, capable of very robust growth on the anaerobic digestion wastewater. Further characterization of this novel isolate showed that it has antimicrobial activity against E. coli cells. Therefore, the Scenedesmus sp. A6 isolate has the potential to be used as a high-value chemical cell factory. Reduction in equipment and instrumentation costs was also achieved by the design and construction of an open-hardware and open-source bioreactor controller device called the “BioBrain”, and a low-cost modular bubble column photobioreactor called “The Big Large Tube”. Together, these two devices represent a significant reduction in equipment costs for the cultivation of microalgae. Finally, an open-source Bioinformatics tool called “lambdaPrimeR” was developed to facilitate the use of a novel Genetic Engineering technique called λ-PCR, that has the potential to make genetic engineering of microalgae much easier.

Yes / Magnetic nanoparticles and surface-enhanced Raman scattering (SERS) active nanoparticles were coated with short chain DNA tags. These were then used to identify a target bacterial DNA sequence. The tags function as primers in a standard PCR with the reverse primers and forward primers on the SERS nanoparticles and magnetic nanoparticles, respectively. During the PCR cycles, a composite nanostructure is formed that is both magnetically responsive and SERS active. After magnetic trapping, the intensity of the SERS signal can be related back to the concentration of the target DNA. A test assay was performed that showed a detection limit (based on the signal to noise ratio) of less than 3 zeptomole (41 pg/L). For comparison, a PCR assay based on the standard SYBR Green method was performed. This used the same primers and target DNA and had a detection limit of 10 attomoles (138 ng/L), 3,000 times less sensitive. The work documents the proof of principle study and shows for the first time the use of SERS-NP labels in the quantification of nucleic acid amplification tests and PCR.

OBJETIVOS:1a etapa: validar teste de cisalhamento utilizando um novo dispositivo de padronização através da comparação dos valores de resistência de união (RU) entre a zircônia com dois tratamentos de superfície e um cimento resinoso, aos resultados obtidos com testes de cisalhamento convencional e microcisalhamento; 2a etapa: avaliar o efeito dos primers metálicos à base de MDP por meio da RU entre zircônia Y-TZP e diferentes tipos de cimentos resinosos (de ativação química, duais e auto-adesivo); 3a etapa: avaliar o efeito de dois lasers Nd:YAG e Er:YAG e do jateamento com óxido de alumínio (JAT) na superfície da zircônia Y-TZP antes da sua sinterização final e da abrasão triboquímica mais silano (controle positivo) após a sinterização final, por meio da resistência à flexão (RF), rugosidade superficial (RS) e RU; 4a etapa: avaliar a estabilidade da união entre a zircônia e um cimento resinoso com um primer à base de MDP e de um laser de alta potência após a termociclagem. Os tratamentos superficiais utilizados nesta etapa foram escolhidos com base nos resultados da 2a e 3a etapas. MATERIAL E MÉTODOS: para os testes de RU foram confeccionados corpos de prova de Y-TZP com dimensões 6x6x3mm, e para o teste de RF 2,5x4,5x20 mm. Para 1a etapa os tratamentos de superfície foram JAT+Signum Ziconia Bond (SZB Heraeus), abrasão triboquímica foi realizada Rocatec (ROC 3M Espe), o silano utilizado foi RelyX Ceramic Primer (3M Espe) e os cimentos resinosos: Panavia F (Kuraray), NX3 (Kerr), seT (SDI), Multilink (Ivoclair). Durante a 3a etapa a abrasão triboquímica foi realizada ROC, o laser Nd:YAG (Power Laser ST6, Lares Research - 1,2W, 10 Hz) e Er:YAG (Kavo Key II, KaVo Co. - 120 mJ, 6 Hz). O teste de cisalhamento com dispositivo de padronização foi o método de avaliação da RU utilizado para as 2a, 3a e 4a etapas. Os dados dos testes de RU, RG foram analisados pela ANOVA e Tukey (=0,05) e RF por Kruskall-Wallis (=0,05). RESULTADOS: 1a etapa: pelo teste de microcisalhamento os materiais se comportaram da seguinte forma: JAT+SZB>ROC>CO, sendo que para os outros dois testes de cisalhamento o seguinte ranqueamente foi obtido: JAT+SZB=ROC>CO. 2a etapa: o SZB apresentou maiores valores de RU para todos os cimentos quando comparados aos grupos controle. O ZP aumento os valores para o cimento Panavia F e NX3. Já o AP aumentou os valores para o cimento seT. 3a etapa: para o teste de RU o JAT e Er:YAG resultaram em valores similares ao ROC, sendo que Nd:YAG resultou em maiores valores comparado ao ROC. Quando avaliados por RS: Nd:YAG>Er:YAG>JAT>ROC; já para RF: ROC>JAT=Nd:YAG= Er:YAG. 4a etapa: Após o teste de cisalhamento os seguinte ranqueamento foi obtido: Nd:YAG 24h>Nd:YAG termociclado=SZB 24h>SZB termociclado. CONCLUSÕES: Uma vez que o teste de cisalhamento com dispositivo de padronização mostrou resultados similares ao teste de cisalhamento convencional pode ser um método viável para avaliação da RU. O tratamento com Nd:YAG antes da sinterização final se mostrou efetivo nos valores de RU. / OBJECTIVES: first stage: validate shear test using a new device for standardized by comparing the values of bond strength (BS) with conventional shear test and microshear test, between zirconia and a resin cement with two surface treatments. Second stage: evaluate the effect of metal primers based on MDP by BS between YTZP and different types of resin cements. Third stage: evaluate Y-TZP surface treatments effect of two lasers (Nd:YAG and Er:YAG) and two sandblasting procedures, with Al2O3 (JAT) before final sintering and tribochemical slicatization after the final sintering, through the flexural resistance (FR) surface roughness (SR) and BS. Fourth stage: evaluate the bonding stability between zirconia and resin cement using a MDP-based primer or a high power laser, after thermal cycling. MATERIAL AND METHODS: BS Y-TZP specimens were prepared with dimensions of 6x6x3mm, and for FS test with 2,5x4,5x20 mm. In the first stage the surface treatments of the specimens were JAT+ Signum Ziconia Bond (SZB - Heraeus), tibochemical silicatization using Rocatec (ROC - 3MEspe) and control (CO - without treatment). In the second stage the primers used were Alloy-Primer (AP - Kuraray), SZB, Z-Prime Plus (ZP - Bisco), and the resin cements: Panavia F (Kuraray), NX3 (Kerr), set (SDI), Multilink (Ivoclair). During the third stage the tribochemical silicatization was perfomed using ROC. The shear bond strength device standardized was used to evaluate the BS of second, third and fourth stage. Test data for BS, SR were analyzed by ANOVA and Tukey test ( = 0.05) and FS by Kruskall-Wallis test ( = 0.05). RESULTS: first Stage: the microshear test groups behave as follow: JAT+SZB> ROC>CO, and for the other two shear tests following the ranking were obtained: JAT+SZB=ROC>CO. Second stage: the SZB showed higher BS for all cements when compared to control groups. The ZP values increased for Panavia F and NX3. AP values increased only for the seT cement. Third stage: BS values for JAT and Er:YAG were similar to ROC, and Nd:YAG was higher compared to the ROC. When evaluated by SR: Nd:YAG> Er:YAG>JAT> ROC, while for FS: ROC> JAT = Nd:YAG = Er:YAG. Fourth stage: after the shear test the following ranking was obtained: Nd:YAG 24h> Nd:YAG thermocycled = SZB 24h> SZB thermocycled. CONCLUSIONS: shear bond strength test with standardized device showed similar result to the conventional shear bond strength, and it can be considered a viable method for evaluating the BS. Treatment with Nd:YAG before the final sintering was effective in BS.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:26:09Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-12-03Bitstream added on 2014-06-13T20:14:46Z : No. of bitstreams: 1 marucci_sc_me_jabo_parcial.pdf: 42548 bytes, checksum: 705ccf6a74fac7e11f4cb25dc8fb9403 (MD5) Bitstreams deleted on 2015-01-16T10:37:51Z: marucci_sc_me_jabo_parcial.pdf,Bitstream added on 2015-01-16T10:38:35Z : No. of bitstreams: 1 000638549.pdf: 1096070 bytes, checksum: 93634385c53868612602ba315f79ea43 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Como uma alternativa para diminuir as agressões constantes que o ecossistema vem sofrendo, devido à grande quantidade de produtos químicos utilizados no controle de pragas, pesquisas envolvendo microrganismos capazes de promover o controle biológico tem se intensificado. Dentre estes microrganismos a bactéria Bacillus thuringiensis tem se destacado. Essa bactéria caracteriza-se pela produção de proteínas tóxicas a representantes de diversas ordens de insetos. Em particular, as proteínas Vip3A, estão em amplo estudo devido a sua especificidade, alto potencial ativo e como alternativa para o controle da resistência de insetos às proteínas Cry. Diante disto, o objetivo deste trabalho foi selecionar, a partir de 1080 isolados de diferentes regiões brasileiras, aqueles portadores de genes vip3A e obter a sequência de nucleotídeos completa dos mesmos. As linhagens padrão B. thuringiensis var. kurstaki HD1, B. thuringiensis var. tolworthi HD125 e o isolado I187 tiveram seus DNAs amplificados com oligonucleotídeos baseados na sequência de genes vip3A, descritos no banco de dados de B. thuringiensis e, a partir dos amplicons obtidos, a sequência completa de nucleotídeos dos mesmos foi determinada, utilizando-se da estratégia de “primer walking”. A proteína Vip3Aa43 (GenBank: [HQ594534]) da linhagem HD1 demonstrou ser 100% idêntica às proteínas Vip3Aa já descritas. Já as proteínas Vip3Aa42 (GenBank: [HQ587048]) da linhagem HD125 e Vip3Ag5 (GenBank: [HQ542193]) do isolado I187 demonstraram similaridade de 99% com as proteínas descritas Vip3Aa35 e Vip3Ag2, respectivamente, demonstrando serem duas novas proteínas Vip3A, devido às substituições de aminoácidos ocorridas. Os três genes vip3A obtidos poderão ser utilizados na produção de plantas Bt, piramidadas ou não, visando ao manejo da resistência dos insetos praga / As an alternative to decrease the constant aggressions that the ecosystem has suffered due to the large amount of chemical products used in pest control, researches involving microorganisms able to promoting biological control have been intensified. Among these microorganisms the bacterium Bacillus thuringiensis has been stood out. This bacterium is characterized by the production of toxic proteins to representatives of several insect orders. In particular, the Vip3A proteins are in large study due to its specificity, and high active potential as an alternative to control of insect's resistance to Cry proteins. According to this, the aim of this work was to select from 1080 isolates in different Brazilian regions, those carrying vip3A genes and obtain the complete nucleotide sequence of the same. The standard strains B. thuringiensis var. kurstaki HD1, B. thuringiensis var. tolworthi HD125 and the isolate I187 had their DNA amplified with primers based on vip3A gene sequence described in database of B. thuringiensis, and from the amplicons obtained, the full sequence of nucleotides was determined, by the use of the strategy of primer walking. The protein Vip3Aa43 (GenBank: [HQ594534]) of HD1 strain showed to be 100% identical to Vip3Aa proteins already described. However, the proteins Vip3Aa42 (GenBank: [HQ587048]) of HD125 strain and Vip3Ag5 (GenBank: [HQ542193]) of the isolate I187 showed 99% similarity with the Vip3Aa35 and Vip3Ag2 proteins described, respectively, showing been two new Vip3A proteins due to amino acid substitutions occurred. The three vip3A genes obtained can be used in the production of Bt crops, pyramidal or not, aiming to resistance management of pest insects

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:51:41Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo2823_1.pdf: 9037757 bytes, checksum: fa5b9563e9f3a0baec78ac68dd1bc1a2 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2009 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / As infecções causadas por papilomavírus humanos (HPV) destacam-se por sua elevada frequência, implicações clínicas e interpessoais, além de serem identificadas como fatores relacionados à oncogenese. A infeção pelo HPV é considerada uma doença sexualmente transmissível relatada entre 10% a 20% da população adulta mundial. O HPV DNA está prevalente em 2% a 68% dos adultos. O HPV é considerado o agente etiológico essencial no desenvolvimento de neoplasias de colo uterino, que é a segunda causa mais importante de mortes em mulheres. A infecção pelo HPV tem sido correlacionada também com o câncer de anus, em 85% dos casos (Palesfsky, 1998), 35% a 50% dos casos de cânceres de vulva, vagina e pênis e em 10% dos casos de neoplasias de laringe, trato respiratório e digestivo (zur Hausen, 2009). O câncer gástrico é uma das principais causas de óbitos em todo mundo. Sua heterogeneidade o transforma em modelo para estudos em carcinogênese. A identificação de papilomavírus humano em neoplasias gástricas e esofágicas sugere a possibilidade de seu envolvimento na oncogênese destas neoplasias. Normalmente, amostras oriundas de biópsias diagnósticas e exéreses cirúrgicas são inclusas em parafina para posterior estudo histopatológico. Estas amostras podem servir de fonte para identificação genômica, através de técnicas adequadas. A presente Tese buscou o desenvolvimento de uma nova técnica de identificação de genes a partir de materiais biológicos conservados em parafina. Foram utilizadas amostras provenientes de pacientes portadores de adenocarcinoma gástrico e carcinoma epipermóide perianal. Os fragmentos do gene da proteína viral L1 foram amplificados através de PCR com o primer GP5+/6+ e o primer MY09/11, identificados com o uso dos equipamentos Bioanalyzer e Papillocheck. A técnica desenvolvida demonstrou-se eficiente na identificação do gene da proteína viral L1, em amostras fixadas em parafina

OBJETIVOS:1a etapa: validar teste de cisalhamento utilizando um novo dispositivo de padronização através da comparação dos valores de resistência de união (RU) entre a zircônia com dois tratamentos de superfície e um cimento resinoso, aos resultados obtidos com testes de cisalhamento convencional e microcisalhamento; 2a etapa: avaliar o efeito dos primers metálicos à base de MDP por meio da RU entre zircônia Y-TZP e diferentes tipos de cimentos resinosos (de ativação química, duais e auto-adesivo); 3a etapa: avaliar o efeito de dois lasers Nd:YAG e Er:YAG e do jateamento com óxido de alumínio (JAT) na superfície da zircônia Y-TZP antes da sua sinterização final e da abrasão triboquímica mais silano (controle positivo) após a sinterização final, por meio da resistência à flexão (RF), rugosidade superficial (RS) e RU; 4a etapa: avaliar a estabilidade da união entre a zircônia e um cimento resinoso com um primer à base de MDP e de um laser de alta potência após a termociclagem. Os tratamentos superficiais utilizados nesta etapa foram escolhidos com base nos resultados da 2a e 3a etapas. MATERIAL E MÉTODOS: para os testes de RU foram confeccionados corpos de prova de Y-TZP com dimensões 6x6x3mm, e para o teste de RF 2,5x4,5x20 mm. Para 1a etapa os tratamentos de superfície foram JAT+Signum Ziconia Bond (SZB Heraeus), abrasão triboquímica foi realizada Rocatec (ROC 3M Espe), o silano utilizado foi RelyX Ceramic Primer (3M Espe) e os cimentos resinosos: Panavia F (Kuraray), NX3 (Kerr), seT (SDI), Multilink (Ivoclair). Durante a 3a etapa a abrasão triboquímica foi realizada ROC, o laser Nd:YAG (Power Laser ST6, Lares Research - 1,2W, 10 Hz) e Er:YAG (Kavo Key II, KaVo Co. - 120 mJ, 6 Hz). O teste de cisalhamento com dispositivo de padronização foi o método de avaliação da RU utilizado para as 2a, 3a e 4a etapas. Os dados dos testes de RU, RG foram analisados pela ANOVA e Tukey (=0,05) e RF por Kruskall-Wallis (=0,05). RESULTADOS: 1a etapa: pelo teste de microcisalhamento os materiais se comportaram da seguinte forma: JAT+SZB>ROC>CO, sendo que para os outros dois testes de cisalhamento o seguinte ranqueamente foi obtido: JAT+SZB=ROC>CO. 2a etapa: o SZB apresentou maiores valores de RU para todos os cimentos quando comparados aos grupos controle. O ZP aumento os valores para o cimento Panavia F e NX3. Já o AP aumentou os valores para o cimento seT. 3a etapa: para o teste de RU o JAT e Er:YAG resultaram em valores similares ao ROC, sendo que Nd:YAG resultou em maiores valores comparado ao ROC. Quando avaliados por RS: Nd:YAG>Er:YAG>JAT>ROC; já para RF: ROC>JAT=Nd:YAG= Er:YAG. 4a etapa: Após o teste de cisalhamento os seguinte ranqueamento foi obtido: Nd:YAG 24h>Nd:YAG termociclado=SZB 24h>SZB termociclado. CONCLUSÕES: Uma vez que o teste de cisalhamento com dispositivo de padronização mostrou resultados similares ao teste de cisalhamento convencional pode ser um método viável para avaliação da RU. O tratamento com Nd:YAG antes da sinterização final se mostrou efetivo nos valores de RU. / OBJECTIVES: first stage: validate shear test using a new device for standardized by comparing the values of bond strength (BS) with conventional shear test and microshear test, between zirconia and a resin cement with two surface treatments. Second stage: evaluate the effect of metal primers based on MDP by BS between YTZP and different types of resin cements. Third stage: evaluate Y-TZP surface treatments effect of two lasers (Nd:YAG and Er:YAG) and two sandblasting procedures, with Al2O3 (JAT) before final sintering and tribochemical slicatization after the final sintering, through the flexural resistance (FR) surface roughness (SR) and BS. Fourth stage: evaluate the bonding stability between zirconia and resin cement using a MDP-based primer or a high power laser, after thermal cycling. MATERIAL AND METHODS: BS Y-TZP specimens were prepared with dimensions of 6x6x3mm, and for FS test with 2,5x4,5x20 mm. In the first stage the surface treatments of the specimens were JAT+ Signum Ziconia Bond (SZB - Heraeus), tibochemical silicatization using Rocatec (ROC - 3MEspe) and control (CO - without treatment). In the second stage the primers used were Alloy-Primer (AP - Kuraray), SZB, Z-Prime Plus (ZP - Bisco), and the resin cements: Panavia F (Kuraray), NX3 (Kerr), set (SDI), Multilink (Ivoclair). During the third stage the tribochemical silicatization was perfomed using ROC. The shear bond strength device standardized was used to evaluate the BS of second, third and fourth stage. Test data for BS, SR were analyzed by ANOVA and Tukey test ( = 0.05) and FS by Kruskall-Wallis test ( = 0.05). RESULTS: first Stage: the microshear test groups behave as follow: JAT+SZB> ROC>CO, and for the other two shear tests following the ranking were obtained: JAT+SZB=ROC>CO. Second stage: the SZB showed higher BS for all cements when compared to control groups. The ZP values increased for Panavia F and NX3. AP values increased only for the seT cement. Third stage: BS values for JAT and Er:YAG were similar to ROC, and Nd:YAG was higher compared to the ROC. When evaluated by SR: Nd:YAG> Er:YAG>JAT> ROC, while for FS: ROC> JAT = Nd:YAG = Er:YAG. Fourth stage: after the shear test the following ranking was obtained: Nd:YAG 24h> Nd:YAG thermocycled = SZB 24h> SZB thermocycled. CONCLUSIONS: shear bond strength test with standardized device showed similar result to the conventional shear bond strength, and it can be considered a viable method for evaluating the BS. Treatment with Nd:YAG before the final sintering was effective in BS.

Esta pesquisa in vitro avaliou a influência do aquecimento de diferentes agentes de acoplamento na resistência de união de um cimento resinoso (Panavia F2.0®/Kuraray Noritake. Japão) e uma zircônia (Y-TZP - YZ ). Inicialmente, placas de zircônia foram silicatizadas com o sistema Rocatec (3M / ESPE). Foram aplicados os agentes de acoplamento químico: Single Bond Universal (3M/ESPE); Monobond N (Ivoclar Vivadent) e Clearfil Ceramic Primer (Kuraray Co); após, foram aquecidos em um forno resistivo em diferentes temperaturas (750C e 1000C) por 5 min, antes da cimentação resinosa de um cilindro de resina composta previamente confeccionado (diam. 0,8 mm). Os grupos controle de cada agente de acoplamento foram mantidos à temperatura ambiente (240C). Metade dos corpos-de-prova foi submetida imediatamente ao teste de microcisalhamento (0,5 mm/min) realizado com auxílio de um fio ortodôntico e a outra metade envelhecida por meio de a 2.000 ciclos térmicos (50C e 550C), seguido de armazenamento em água destilada a 370 C por 2 meses, antes do ensaio mecânico. A análise de variância de três fatores (ANOVA) e o teste de Tukey (p?0,05) mostraram que o aquecimento dos agentes químicos de acoplamento produziu maiores valores de resistência de união entre o cimento e a zircônia. A resistência de união imediata foi superior para o Monobond N (30 MPa) e Single Bond Universal (32,5 MPa). Após o envelhecimento, houve redução da resistência de união em todos os grupos e o grupo Monobond N (16,9 MPa) apresentou resistência de união superior à dos demais. A associação de um tratamento térmico simples a um agente de acoplamento é válida para produzir resistência de união superior entre o cimento resinoso e a zircônia. / This in vitro study evaluated the influence of the heating different coupling agents on microshear bond strength between zirconia (Y-TZP-YZ ) and a resin cement (Panavia F2.0® / Kuraray Noritake, Japan). Initially, the zirconia blocks were silicoated with the Rocatec system (3M / ESPE). After, the chemical coupling agents were applied: Single Bond Universal (3M / ESPE); Monobond N (Ivoclar Vivadent) and Clearfil Ceramic Primer (Kuraray Co). They were then heated in a resistive furnace at different temperatures (750C and 1000C) for 5 min prior to resin cementation of a preformed resin composite cilinder (0.8 mm diameter). Control groups were maintained at room temperature (240C). Half of the specimens were immediately submitted to the microshear test (0.5 mm/min) performed with an orthodontic wire and the other half was subjected to 2,000 thermal cycles (50C and 550C), followed by storage in distilled water at 370C for 2 months before the microshear test. 3-way ANOVA and Tukey\'s test (p<0.05) showed that the heating of the chemical coupling agents produced higher bond strength between the ceramic and resin cement. Immediate bond strength was superior for Monobond N (30 MPa) and Single Bond Universal (32,5 MPa). After aging, there was reduction of bond strength in all groups and the Monobond N group (16,9 MPa) was superior to the others. The combination of a simple heat treatment with a coupling agent is valid to produce greater bond strength.

A presença de DNA fetal livre de células no plasma materno possibilitou o surgimento de novas tecnologias para o diagnóstico pré natal não invasivo. Existem técnicas de genotipagem fetal já estabelecidas em investigações de sequências exclusivas fetais, mas a sua aplicação para a identificação humana em testes de paternidade ainda é pouco conhecida. A metodologia de genotipagem fetal não invasiva foi padronizada com o uso de três lócus InDels e iniciadores inserção-específicos. Entretanto, para que se alcance o poder satisfatório, é necessário investigar elevado número de lócus informativos. Para suprir a ausência de informações suficientes sobre lócus deste tipo, são descritas, no presente trabalho, as condições laboratoriais para PCR e as frequências alélicas de um conjunto de lócus InDels, ainda inéditos, em uma amostra representativa da população urbana brasileira, visando aumentar a robustez e a confiabilidade da genotipagem fetal não invasiva na investigação de paternidade. Foram selecionados 20 lócus, um em cada cromossomo. Em um dos lócus polimórficos foi encontrado um alelo novo, não registrado no banco de dados do NCBI. O poder de discriminação e o poder de exclusão dos 16 lócus polimórficos combinados (0,999 e 0,937, respectivamente) tiveram valores dentro do esperado para um conjunto com essa quantidade de lócus bialélicos. Alguns lócus apresentaram elevado número de indivíduos que não responderam à amplificação, indicando a necessidade de reajustes na padronização dos procedimentos laboratoriais e a possibilidade de variabilidade das sequências complementares aos iniciadores empregados, o que exigirá o sequenciamento completo das regiões. Para a maioria dos lócus, entretanto, os parâmetros forenses atingiram valores esperados e sugerem que podem ser úteis na composição de painel robusto e eficiente para ser usado na genotipagem fetal não invasiva. / The presence of cell-free fetal DNA in maternal plasma allows for new non-invasive prenatal diagnosis technologies to develop. Even though there are already well-established fetal genotyping techniques in fetal-exclusive sequence investigations, their application to human identification in paternity tests is not yet well-known. Non-invasive fetal genotyping methodology was previously standardized using three InDel loci and insertion-specific primers. However, in order to attain satisfactory power, it is necessary to investigate large number of informative loci. To compensate for the absence of sufficient information about this type of locus, this work describes the PCR conditions and determinates allelic frequencies for a set of unpublished InDel loci, in a representative group of Brazilian population, raising the robustness and reliability of non-invasive fetal genotyping in paternity investigation. We selected 20 loci, one in each chromosome. Not previously registered on NCBI database allele was found in one of the polymorphic loci. Discrimination and exclusion power of the 16 polymorphic loci combined (0.999 and 0.937, respectively) had expected values for an ensemble with such an amount of biallelic loci. Some loci showed many non-amplified individuals, vincing the need of corrections in the standardizing process and the possible variability of the complementary sequences to the primers used. However, for most loci, the forensic parameters reached the expected values and suggest that they may be useful in the more robust panel for utilization in non-invasive fetal genotyping.

Submitted by PPG Odontologia (odontologia-pg@pucrs.br) on 2018-05-28T13:41:25Z No. of bitstreams: 1 RAQUEL_DE_OLIVEIRA_LOPES_TES.pdf: 2230148 bytes, checksum: a749d045cae0f8098669b38fe6b648b6 (MD5) / Approved for entry into archive by Caroline Xavier (caroline.xavier@pucrs.br) on 2018-06-11T18:19:23Z (GMT) No. of bitstreams: 1 RAQUEL_DE_OLIVEIRA_LOPES_TES.pdf: 2230148 bytes, checksum: a749d045cae0f8098669b38fe6b648b6 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-06-11T18:25:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 RAQUEL_DE_OLIVEIRA_LOPES_TES.pdf: 2230148 bytes, checksum: a749d045cae0f8098669b38fe6b648b6 (MD5) Previous issue date: 2018-01-17 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior - CAPES / (Artigo Os adesivos universais s?o t?o eficientes quanto um primer para a ades?o ? zirc?nia?) O objetivo do trabalho foi comparar a resist?ncia de uni?o ? cer?mica de zirc?nia de quatro adesivos universais e um primer para zirc?nia. Setenta e cinco amostras de zirc?nia foram confeccionadas e inclu?das em resina acr?lica. A superf?cie das amostras foi polida com lixas de carbeto de sil?cio nas granula??es 600, 800 e 1.200 e jateadas com ?xido de alum?nio 50 ?m por 5 s. As amostras foram divididas aleatoriamente em cinco grupos (n=15): G1 ? Single Bond Universal (SBU); G2 ? All Bond Universal (ABU); G3 ? Peak Universal Bond (PUB); G4 ? Ambar Universal (AU) e G5 ? Z-Prime Plus (ZP). Um cone de resina composta foi constru?do, atrav?s de uma matriz, sobre o material adesivo aplicado na superf?cie das amostras. Os corpos de prova foram armazenados em ?gua destilada a 37?C por 24 h, sendo submetidos ao teste de resist?ncia de uni?o ? tra??o em m?quina de ensaio universal EMIC com velocidade de 0,5 mm/min. Os tipos de falhas foram classificados em adesiva, coesiva ou mista. Os valores de resist?ncia de uni?o foram submetidos ? an?lise de vari?ncia (ANOVA), seguido do teste de Tukey (?=0,05). M?dias de resist?ncia de uni?o (MPa) seguidas de letras distintas diferem estatisticamente entre si: G5=21,12a, G1=20,55a, G4=19,12ab, G2=14,22b, G3=8,45c. As falhas foram predominantemente mistas no G1, G4 e G5, e predominantemente adesivas no G2 e G3. Os adesivos SBU e AU obtiveram resist?ncia de uni?o compar?vel ao ZP. / (Artigo Bond to zirconia ceramic: evaluation of different primers and a universal adhesive) The aim of the study was to evaluate the effect of a universal adhesive and different primers on the bond strength to zirconia ceramic. Seventy-five zirconia ceramic samples were obtained and divided into five groups (n=15): G1 ? Scothbond Universal (SBU); G2 ? silane + SBU; G3 - Signum Zirconia Bond; G4 - Z-Prime Plus; G5 - MZ Primer. A cone of composite resin was built. The specimens were stored in 100% relative humidity with distilled water at 37?C for 48 h, and then submitted to a tensile bond strength test in a universal testing machine at a crosshead speed of 0.5 mm/min. The type of failure that occurred during the debonding procedure was analyzed. The mean results of the bond strength test (MPa) followed by the same letter represent no statistical difference by ANOVA and Tukey?s post-hoc test (p<0.05): G2=27.55a (?6.99), G4=23.71a (?5.65), G1=22.64a (?5.67), G5=13.64b (?5.49), G3=7.54c (?4.75). G2 and G4 exhibited predominantly cohesive failure in the resin composite cone. G1 and G5 had predominantly mixed failures, and G3 exhibited only adhesive failures. The SBU and Z-Prime Plus provided higher bond strength to zirconia ceramic. / (Artigo Os adesivos universais s?o t?o eficientes quanto um primer para a ades?o ? zirc?nia?) The aim of the study was to compare four universal adhesives and a primer on the bond strength to zirconia ceramic. Seventy-five zirconia ceramic samples were obtained and embedded in acrylic resin. The surface of the samples was polished with 600-, 800- and 1200-grit silicon carbide abrasive papers, and sandblasted with 50 ?m aluminum oxide particles for 5 s. The samples were divided into five groups (n=15): Single Bond Universal (SBU); G2 ? All Bond Universal (ABU); G3 ? Peak Universal Bond (PUB); G4 ? Ambar Universal (AU) e G5 ? Z-Prime Plus (ZP). A cone of composite resin was built on the adhesives and primer applied. The specimens were stored in distilled water at 37oC for 24 h, and then submitted to a tensile bond strength test in a universal testing machine at a crosshead speed of 0.5 mm/min. The type of failure that occurred during the debonding procedure was classified as adhesive, cohesive or mixed. The values of bond strength were analyzed by analysis of variance (ANOVA) followed by Tukey?s test (?=0.05). Means of bond strength (MPa) followed by the distinct letters represent statistical difference: G5=21,12a, G1=20,55a, G4=19,12ab, G2=14,22b, G3=8,45c. The failures were predominantly mixed in G1, G4 and G5, and predominantly adhesive in G2 and G3. SBU and AU adhesives obtained bond strength comparable to ZP.