Orientador: Joaquim Mansano Garcia / Coorientador: Naiara Saraiva Zoccal / Banca: Fábio Morato Monteiro / Banca: José Octavio Jacomini / Banca: Maria Emilia Franco Oliveira / Banca: Gilson Hélio Toniollo / Resumo: A progesterona e seus análogos têm sido utilizados para diversas finalidades na reprodução animal. O objetivo deste estudo foi avaliar a influencia da progesterona injetável no número de oócitos recuperados, na qualidade oocitária e produção embrionária de novilhas Nelore pré-púberes. Foram utilizadas 31 fêmeas com idade entre 18 a 20 meses, não gestantes e não cíclicas. As doadoras de oócitos foram divididas em 3 grupos experimentais em delineamento crossover da seguinte maneira: Grupo P0 (n=11), os animais deste grupo receberam duas aplicações de solução placebo (1 mL), com intervalo de 7 dias iniciando 14 dias (D-14) antes da primeira aspiração (D-0); Grupo P7 (n=10): os animais receberam uma aplicação de solução placebo (1 mL) 14 dias (D-14) e uma de progesterona (P4) injetável (150mg) 7 dias (D-7) antes da aspiração; Grupo P14 (n=10), neste grupo os animais receberam duas aplicações de P4 injetável (150mg) com intervalo de 7 dias, a primeira 14 dias (D-14) e a segunda 7 (D-7) dias antes da aspiração. Realizaram-se um total de três aspirações foliculares em intervalos de 28 dias. Os animais que apresentaram CL durante o experimento foram alocados em um grupo separado para serem analisados e comparados com o grupo sem CL. Os oócitos recuperados foram selecionados e submetidos aos procedimentos da PIVE. Após a confirmação da homocedasticidade (BoxCox) e normalidade (teste de Cramér-von Mises) dos dados, realizou-se a análise de variância (ANOVA). O teste de Tukey foi utilizado para as comparações das médias das variáveis, para as correlações dos dados foi utilizado o teste de correlação de Pearson, e significantes quando p≤ 0,05. Não foram verificadas diferenças significativas (p>0,05) quanto ao número de oócitos recuperados (oócitos totais), oócitos viáveis (G I, II, III), entre os animais tratados (grupos P7 e P14) em relação aos animais que não receberam P4 (grupo P0). As... / Abstract: Progesterone has been used for various purposes in the animal reproduction. The objective of this study was to evaluate the influence of exogenous progesterone injection in the number of recovered oocyte, oocyte quality and embryo production of prepubertal Nelore heifers. We used 31 females (18 to 20 months) non pregnant and without corpus luteum (CL). Cows were divided in 3 groups in a cross-over design: Group I P0 (n=11), animals received two placebo solution applications (1 mL), 7-day interval and starting 14 days (D-14) before the first aspiration (D-0); Group II P7 (n=10) treated group, the animals received a placebo solution application (1 mL) 14 days (D-14) and injecting progesterone (P4; 150 mg) 7 days (D-7) before aspiration; Group III P14 (n = 10), animals received two injections of P4 (150mμg) with an interval of 7 days, the first 14 days (D-14) and the second 7 days (D-7) before aspiration. We conducted 3 aspiration with 28-day intervals. The animals with CL during the experiment were placed in a separate group to be analyzed and compared with the group without CL. The recovered oocytes were selected and submitted to the procedures of the in vitro embryo production (IVEP). After confirming the homocedasticity (BoxCox) and normality (Cramér-von Mises test) of the data, carried out the analysis of variance (ANOVA). Tukey's test was used to compare the means of the variables and the pearson correlation test was used for correlations of the data, considered significant when p ≤ 0.05. There were no significant differences (p> 0.05) in the number of oocytes retrieved (total oocytes), viable oocytes (GI, II, III), between the animals treated (P7 and P14 groups) and animals that did not receive P4 (P0 group). The animals showed an average of 14.98 ± 10.82 oocytes collected by aspiration session. The mean and standard deviation of rates (%) of viable oocytes and embryos produced did not differ (p> 0.05) between groups. The ... / Doutor

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro Tecnológico, Programa de Pós-Graduação em Engenharia Química, Florianópolis, 2010 / Made available in DSpace on 2012-10-25T07:05:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 277394.pdf: 3434968 bytes, checksum: 7619623bf18a1a98673c0f49b310f62b (MD5) / Nanopartículas poliméricas, tais como nanocápsulas e nanoesfe-ras, apresentam grande potencial de aplicação em diversas áreas, como por exemplo, na liberação controlada de fármacos. Para tanto, diversas técnicas para obtenção de nanopartículas poliméricas podem ser aplica-das. Entretanto, o processo de polimerização em miniemulsão apresenta diversas vantagens, entre elas, a encapsulação de compostos hidrofóbi-cos em apenas uma etapa. Dessa forma, este trabalho propõe o estudo da polimerização em miniemulsão de acetato de vinila a 70oC aplicando-se diferentes agentes hidrofóbicos para retardar a degradação difusional, tais como Miglyol 812, óleo de castanha do Pará e hexadecano. Para aumentar a estabilidade da miniemulsão contra coalescência, diferentes surfatantes e procedimentos de adição destes foram avaliados. Os surfa-tantes aplicados apresentam valores distintos de balanço hidrofílico-lipofílico, HLB, sendo a lecitina, surfatante hidrofóbico e Tween 80, hidrofílico. A combinação destes surfatantes apresenta resultados satis-fatórios na obtenção de nanopartículas estáveis. Adicionalmente, foi estudado o efeito de diferentes iniciadores, tais como 2,2'-azo-bis-isobutironitrila e peróxido de potássio. Os resultados obtidos evidenciam que a cinética da reação depende fortemente do tipo de iniciador aplica-do. O uso de um estabilizador polimérico também foi avaliado, diversos tipos de poli(álcool vinílico) com diferentes graus de hidrólise e massa molar foram aplicados. A concentração ótima de estabilizador poliméri-co foi encontrada, sendo que acima desta, observou-se a formação de agregados de poli(álcool vinílico). Análises por microscopia eletrônica corroboram tais resultados. Com objetivo de aumentar a resistência me-cânica do polímero, monômero trifuncional foi aplicado. Análises de teor de gel comprovaram que o mesmo reticula o poli(acetato de vinila) satisfatoriamente. Finalmente, a encapsulação de progesterona em nano-partículas poliméricas foi realizada adicionando-se o hormônio na for-mulação da miniemulsão. Os resultados obtidos revelam que a polimeri-zação de acetato de vinila em miniemulsão se apresentou versátil na encapsulação de componentes hidrofóbicos em apenas uma etapa.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde. Programa de Pós-Graduação em Nutrição. / Made available in DSpace on 2012-10-22T17:03:41Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Alterações no comportamento alimentar das mulheres durante o ciclo menstrual podem estar relacionadas com as flutuações de estradiol e progesterona. Ademais, a leptina é um hormônio apontado como controlador do apetite e do gasto energético, além de possuir uma provável relação com sistema reprodutivo. O objetivo deste trabalho transversal quantitativo foi relacionar as concentrações plasmáticas de estradiol, progesterona e leptina com o consumo alimentar nas fases folicular e lútea do ciclo menstrual. Foram investigadas 30 alunas dos cursos de Pós-Graduação da Universidade Federal de Santa Catarina. O consumo alimentar foi obtido por meio de Registro Alimentar de 3 dias e analisado no software Nutwin. As dosagens de estradiol, progesterona e leptina foram feitas em um dia para cada fase. Dados antropométricos de peso, estatura e as dobras cutâneas triciptal, subescapular e abdominal foram utilizados na avaliação do Estado Nutricional. Os sintomas pré-menstruais foram auto referidos em um questionário na fase lútea. Os dados foram avaliados no programa SPSS 10.0 for Windows. Segundo o Índice de Massa Corporal (IMC) 100% da amostra era eutrófica, porém a avaliação da distribuição de gordura a partir das dobras cutâneas apontou 57% com eutrofia, 20% com sobrepeso e 23% com magreza. A leptina correlacionou-se positivamente com o IMC (r=0,44; p=0,013 e r=0,56; p=0,001) e com o percentual de gordura corporal (r=0,49; p=0,006 e r=0,71; p=0,000) nas fases folicular e lútea, respectivamente. O consumo energético e de macronutrientes foi maior na fase lútea, com diferença significativa (p<0,0001) para o consumo energético, de carboidratos e lipídios. O consumo calórico na fase folicular foi inferior às necessidades nutricionais (90%). Já na fase lútea, este foi superior ao calculado para o grupo (118%). O consumo de carboidratos em grama e protéina em grama/kg estiveram acima do preconizado pela Dietary Reference Intakes (DRIs). A distribuição percentual dos macronutrientes sobre o Valor Calórico Total esteve dentro dos limites das DRIs em ambas as fases do ciclo menstrual. Aumento significativo foi observado na fase lútea para o estradiol (p<0,0001), progesterona (p<0,0001) e leptina (p<0,05). A progesterona correlacionou-se positivamente com o consumo calórico (r=0,38; p=0,036) e de carboidratos (r=0,38; p=0,035) na fase lútea. Os sintomas da Síndrome Pré-Menstrual ocorreram em 97% da amostra investigada, sendo: 66% com severidade e 3% leve. O apetite foi maior na fase pré-menstrual em 54% das participantes e 50% relataram ter vontade de comer alimentos doces neste período. Sugere-se que as flutuações regulares do ciclo ovariano feminino podem influenciar o consumo alimentar, exercendo papel central na manutenção do balanço energético e na estabilidade do peso corporal. Changes in the eating behavior of women during the menstrual cycle can be related with the fluctuations of estradiol and progesterone. Moreover, leptin is a hormone that has also been pointed as controller of appetite and energy expenditure, besides a probable relation with the reproductive system. The objective of this work quantitative transversal line was to relate the plasmatic concentrations of estradiol, progesterone and leptin with the food intake, during the follicular and luteal phases of the menstrual cycle. Thirty female graduate students (Stricto Sensu) from University Federal of Santa Catarina have been investigated. The food intake was had from three-day food intake records and the data has been tabulated with the software Nutwin. The dosages of estradiol, progesterone and leptin had been made in one day for each phase. Weight, height, triciptal, subescapular and abdominal skin folds data were also collected for evaluation of the Nutritional State. The premenstrual symptoms were registered by the participants in a proper questionnaire, during the luteal phase. The data were evaluated with SPSS 10.0 for Windows. According to Body Mass Index (BMI) the sample was 100% eutrophic, while the evaluation of skin folds revealed that 57% were eutrophic, 20% were overweight and 23% underweight. Leptin was positively correlated with BMI (r=0,44; p=0,013 and r=0,56; p=0,001) and with the percentage of body fat (r=0,49; p=0,006 and r=0,71; p=0,000) in the follicular and luteal phases, respectively. Caloric and macronutrient consumption in the luteal phase was greater than in the follicular phase, with significant difference (p<0,0001) for energy, carbohydrate and fat. The energy intake in the follicular phase was lower than nutritional recommendations (90%). In the luteal phase, however, it was above the calculated average for the group (118%). The carbohydrate (g) and protein (g/kg) consumption were well above the recommended for Dietary Reference Intakes (DRIs). The percentage distribution of macronutrients of Total Caloric Value (TCV) was inside the limits of the DRIs in both phases of the menstrual cycle. Hormonal concentrations were significantly higher in the luteal phase for estradiol (p<0,0001), progesterone (p<0,0001) and leptin (p<0,05). Progesterone correlated positively with the caloric (r=0,38; p=0,036) and carbohydrate (r=0,38; p=0,035) consumption in the luteal phase. Premenstrual Syndrome (PMS) symptoms occurred in 97% of the investigated sample, being: 66% with severity and 3% mild. The increase of appetite in the premenstrual period was greater in 54% of the participants and 50% revealed a strong desire for sweets during the same period. It is suggested that the regular fluctuations of the feminine ovarian cycle can influence the food intake, exerting a central paper in the maintenance of energy balance and in the maintenance of body weight.

A manipulação neonatal (MN) é um modelo experimental que examina como alterações ambientais no início da vida afetam estruturas neurais levando a modificações neuroendócrinas e comportamentais estáveis. Estas modificações estão relacionadas às alterações no cuidado materno que podem provocar alterações no desenvolvimento dos filhotes. Ratos manipulados, tanto machos quanto fêmeas, apresentam redução do comportamento sexual. Em fêmeas, a manipulação neonatal provoca diversas alterações morfológicas em regiões do sistema nervoso central relacionadas com o controle da reprodução, como a área pré-óptica medial, amígdala medial e o bulbo olfatório. Além disso, ratas manipuladas apresentam ciclos anovulatórios e alterações em concentrações hormonais, como ausência do pico de hormônio luteinizante (LH), diminuição da concentração plasmática de estradiol, prolactina, hormônio folículo estimulante e LH na tarde do proestro. Trabalhos demonstram que feromônios presentes na urina de ratos modulam a fisiologia reprodutiva de ratas, agindo através do órgão vomeronasal e do bulbo olfatório acessório, induzindo alterações na secreção de esteróides gonadais. A estimulação feromonal através da aplicação de urina de machos provoca a ativação de estruturas neurais relacionadas à facilitação do comportamento de lordose. O objetivo deste trabalho foi avaliar, em ratas adultas (90 dias) não-manipuladas e manipuladas durante o período neonatal, os efeitos do estímulo olfatório por feromônios da urina de machos sobre o comportamento sexual e concentração de esteróides gonadais. Para isso, foi realizada a borrifação de solução salina ou urina de ratos próxima às narinas de ratas manipuladas e não-manipuladas na noite do proestro. Este procedimento foi realizado com um spray manual a cada 10 minutos durante uma hora. Setenta e cinco minutos após o término da aplicação com o spray foi registrado o comportamento sexual e imediatamente após foi coletado o sangue para dosagem de estradiol e progesterona. Os resultados do trabalho confirmam dados anteriores em que a manipulação neonatal altera o comportamento sexual diminuindo o quociente de lordose e a frequência de intromissões penianas. Além disso, ratas manipuladas expostas à solução salina apresentaram uma tendência à diminuição da concentração de progesterona após o comportamento sexual quando comparadas às ratas não-manipuladas. Assim, podemos inferir que ratas manipuladas respondem menos às estimulações olfatórias e táteis realizadas pelo macho durante o acasalamento. O estímulo prévio com a urina de ratos machos reverteu o efeito da manipulação neonatal sobre o quociente de lordose, enquanto os níveis de progesterona não diferem dos observados nas ratas não-manipuladas. Assim, o aumento do quociente de lordose em ratas manipuladas que foram estimuladas com urina de ratos machos antes do comportamento sexual pode estar relacionado à elevação na concentração de progesterona.

Os fibroadenomas são os tumores benignos mais comuns da mama feminina, afetando principalmente mulheres jovens. Os mecanismos de crescimento e desenvolvimento destas lesões proliferativas não estão bem esclarecidos. Por terem uma influência hormonal muito semelhante à mama normal, sugere-se que os receptores de hormônios esteróides possam desempenhar um papel importante na formação destes tumores. O objetivo deste estudo foi avaliar a expressão gênica e protéica dos receptores de progesterona A e B (PRA e PRB) e a expressão protéica do receptor de estrogênio-α (ER-α) em amostras de fibroadenoma, comparativamente ao tecido mamário normal adjacente. Foram obtidas amostras de fibroadenomas e de tecido normal adjacente de 18 pacientes em idade reprodutiva submetidas à cirurgia para retirada de fibroadenoma. Os tecidos foram submetidos à extração de RNA total, pelo método de Chomzynski e Sacchi (1987), para análise da expressão gênica pela técnica de RT-PCR em tempo real.Também foi realizada a extração de proteínas para análise da expressão protéica pela técnica de Western blot. Foi ainda realizada a dosagem de progesterona e estradiol no soro das pacientes, para determinação da fase do ciclo menstrual. Não foram observadas alterações nos níveis gênicos e protéicos dos PRs e da proteína ER-α entre as fases do ciclo menstrual, tanto nos tecidos normais quanto nos fibroadenomas. Foi observada uma maior expressão protéica de ambos receptores de progesterona (A e B) nos fibroadenomas (teste t pareado de Student, P=0,038 e P=0,031, respectivamente), enquanto não houve variação dos níveis de mRNA dos PRs entre os dois tecidos (teste T de Wilcoxon, P=0,721 e P=0,139). Também não foi observada diferença significativa na expressão protéica de ER-α entre tecido normal e tumor (teste T de Wilcoxon, P=0,508). A relação entre as isoformas (PRA:PRB) não foi diferente entre os tecidos e mostrou uma forte correlação entre ambos(correlação de Spearman, r=0,964, P=0,0001). Alterações da relação PRA:PRB são observadas na carcinogênese da glândula mamária, assim como o aumento da expressão de ER-α. Assim, nossos dados sugerem uma participação dos receptores de progesterona no crescimento e formação dos fibroadenomas, mesmo sem alteração da proporção PRA:PRB nestes tumores. A expressão protéica inalterada do receptor de estrogênio-α pode ser uma resposta característica do fibroadenoma, ao contrário do que ocorre nos cânceres de mama. / Fibroadenomas are the most common benign breast tumors, occurring mainly in young women. The mechanisms of growth and development of these proliferative lesions are not elucidate. These lumps seem to have same hormonal environment that normal breast tissue, which suggest that steroid receptors can play a role on tumor development. The objective of this study was to evaluate gene and protein expression of progesterone receptors A and B (PRA and PRB) and protein expression of estrogen receptor α (ER-α) in fibroadenomas samples, comparing to adjacent normal breast. The samples provided from 18 premenopausal women undergoing surgical removal of breast fibroadenomas. Half of each sample fragment was submitted to RNA extraction by the guanidinium thiocyanate method (Chomzynski e Sacchi, 1987) to gene expression analysis by real time RT-PCR. The remaining fragment of each sample was submitted to protein extraction to analyze protein expression by Western Blot.Progesterone and estradiol determination were carried out from serum obtained from venous blood samples collected on the same day of surgical removal of tumor. No alterations on PRs gene and protein expression and ER-α protein expression were observed between follicular and luteal phase of menstrual cycle, neither in normal breast nor in fibroadenomas. Protein levels of progesterone receptors A and B were higher in fibroadenomas as compared with normal breast (Student’s paired t test, P=0.038 and P=0.031, respectively), while the PRs mRNA levels were similar in both tissues (Wilcoxon’s T test, P=0.721 and P=0.139). There were no differences of ER-α protein expression between normal breast and fibroadenomas (Wilcoxon’s T test, P=0.508). The ratio PRA:PRB was similar in the tissues, and also showed a strong correlation in both (Spearman’s correlation, r=0.964, P=0.0001). Alterations in the ratio PRA:PRB are seen in mammary gland carcinogenesis, like higher levels of ER-α. Thus, our data suggest arole of progesterone receptors in the growth and development of fibroadenomas, although without alterations of PRA:PRB ratio in these tumors. The absence of alterations in ER-α protein levels could be a characteristic behavior of fibroadenomas, unlike breast cancer.

Titulo retirado da capa / Dissertação (mestrado) - Pontifícia Universidade Católica do Paraná, São José dos Pinhais, 2012 / Bibliografia: f. 62-64 / O presente estudo objetivou verificar a influência do protocolo hormonal com três manejos, utilizando a progesterona intravaginal de uso único, em novilhas pré-púberes e púberes, visando a inseminação artificial em tempo fixo (IATF). Foram utilizadas 447 / The present study aim to verify the influence of using hormone in tree handle protocol which use progesterone intra vaginal inserts in pre pubertal and pubertal beef heifers, in purpose to achieve a pre timed A.I. 447 cross breed heifers ( Nelore X Red An

Titulo retirado da capa / Dissertação (mestrado) - Pontifícia Universidade Católica do Paraná, São José dos Pinhais, 2012 / Bibliografia: f. 62-64 / O presente estudo objetivou verificar a influência do protocolo hormonal com três manejos, utilizando a progesterona intravaginal de uso único, em novilhas pré-púberes e púberes, visando a inseminação artificial em tempo fixo (IATF). Foram utilizadas 447 / The present study aim to verify the influence of using hormone in tree handle protocol which use progesterone intra vaginal inserts in pre pubertal and pubertal beef heifers, in purpose to achieve a pre timed A.I. 447 cross breed heifers ( Nelore X Red An

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2017-03-14T18:04:26Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2651263 bytes, checksum: 6590fc6244ef08d7d1a96918b5571ce8 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-14T18:04:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2651263 bytes, checksum: 6590fc6244ef08d7d1a96918b5571ce8 (MD5) Previous issue date: 2016-10-21 / Sarcomas de tecidos moles (STM) caninos compreendem um grupo heterogêneo de neoplasias malignas, classificadas coletivamente por apresentarem alterações histopatológicas similares, baixa a moderada taxa de recorrência e baixo potencial metastático. Apesar disto, foram descritos padrões histopatológicos vasculares e neurais, específicos para tumor de parede perivascular e tumor de bainha de nervo periférico, respectivamente. Ademais, recentemente foram apontadas diferenças no comportamento biológico dos tumores de parede perivascular, em relação a outros STM. Em medicina humana, a expressão de receptor para estrógeno (RE) e receptor para progesterona (RP) nos sarcomas tem sido estudada, visando a busca de fatores prognósticos e novos alvos para tratamentos. Na medicina veterinária, ainda não foram realizados estudos similares. Os objetivos deste trabalho foram investigar por imuno-histoquímica a histogênese e a expressão de RE e RP em uma série de 80 sarcomas cutâneos e subcutâneos de cães, com características histopatológicas de tumor de bainha de nervo periférico e tumor de parede perivascular. Vinte e um casos (26.25%) apresentaram características morfológicas compatíveis com tumor de parede perivascular, 23 casos (28,75%) com tumor de bainha de nervo periférico, 27 casos (33,75%) compartilharam padrões neurais e vasculares e 9 casos (11,25%) foram indiferenciados. Por imuno-histoquímica, 65 casos (81,25%) apresentaram positividade apenas para marcadores neurais e os outros 15 casos (18,75%) positividade simultânea para marcadores neurais e musculares. A maioria mostrou ser tumor de bainha de nervo periférico. Os padrões histopatológicos tipo perivascular não refletiram a histogênese, que na maior parte das vezes foi negativa para os marcadores musculares e positiva para os marcadores neurais. Todos os casos foram positivos para RP e negativos para RE. Tumores de alto grau de malignidade (grau III) exibiram maior expressão deste receptor que os tumores de baixo grau (grau I). Esta diferença também foi observada para tumores com atividade mitótica maior que 9 figuras mitóticas/10 campos de grande aumento. Houve correlação positiva entre o índice de proliferação celular (Ki67) e a expressão de RP. Assim, a progesterona parece desempenhar um papel na patogênese desses tumores. Futuros trabalhos poderão explorar a ação dos moduladores seletivos de receptor de progesterona como agentes terapêuticos nos sarcomas caninos, além de avaliar a expressão do RP como preditiva de prognóstico. / Soft tissue sarcomas (STS) canines comprise a heterogeneous group of malignancies, collectively classified due to similar histopathological features, low to moderate recurrence rate and low metastatic potential. Nevertheless, vascular and neural histopathological pattern have been described as specific for perivascular wall tumor and nerve sheath tumor, respectively. Moreover, differences were recently identified in the biological behavior of perivascular wall tumor in comparison to other STM. In human medicine, the expression of estrogen receptor (ER) and progesterone receptor (PR) in sarcomas has been studied to search for prognostic factors and new targets for treatment. In veterinary medicine, similar studies have not yet been carried out. The objectives of this study were to investigate by immunohistochemistry the histogenesis and ER and PR expression in a series of 80 cutaneous and subcutaneous sarcomas in dogs with histopathological features of peripheral nerve sheath tumor and perivascular wall tumor. Twenty-one cases (26.25%) showed morphological characteristics compatible with perivascular wall tumor, 23 cases (28.75%) with peripheral nerve sheath tumor, 27 cases (33.75%) shared both neural and vascular patterns and 9 cases (11.25%) were undifferentiated. By immunohistochemistry, 65 cases (81.25%) were positive only for neural markers and the other 15 cases (18.75%) demonstrated simultaneous positivity for neural and muscle markers. Most tumors proved to be peripheral nerve sheath tumor. The perivascular histopathologic type did not reflect histogenesis, which in most cases was negative for muscle markers and positive for the neural markers. All cases were positive for PR and negative for ER. Tumors of high malignancy grade (grade III) exhibited higher PR expression than low-grade tumors (grade I). This difference was also observed for tumors with mitotic activity greater than 9 mitotic figures / 10 high power fields. There was a positive correlation between cell proliferation (Ki67) and PR expression. Thus, it is possible that progesterone play a greater role in the pathogenesis of these tumors. Future researches may explore the potential for selective progesterone receptor modulators as therapeutic agents in canine STS, as well as evaluating the PR expression as a predictor of prognosis.

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2016-06-20T14:39:17Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 967613 bytes, checksum: 406de5c8fde5ef9910c417499ef37ffc (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-20T14:39:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 967613 bytes, checksum: 406de5c8fde5ef9910c417499ef37ffc (MD5) Previous issue date: 2016-02-22 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / O entendimento dos mecanismos que controlam a permeabilidade, a angiogênese e a apoptose do corpo lúteo das fêmeas suínas gestantes é essencial para a compreensão do papel fisiológico destes processos na produção de progesterona e consequentemente no desenvolvimento do concepto, nas taxas de mortalidade pré-natal e na prolificidade dos animais. Assim, objetivou-se com este estudo avaliar a expressão de genes relacionados à angiogênese e a apoptose do corpo lúteo de fêmeas suínas gestantes da raça local Piau e linhagem Comercial, em diferentes idades gestacionais, além de relacionar os dados moleculares aos dados fenotípicos de morfologia do corpo lúteo gestacional. Para a análise histológica, as amostras foram incluídas em resina plástica e coradas em Azul de Toluidina. Já para a análise molecular do corpo lúteo, a extração do RNA total foi realizada com Trizol® e a expressão gênica avaliada mediante a técnica de PCR quantitativa em tempo real (RT-qPCR). Foram observadas diferenças entre as idades gestacionais (P=0,0043) na avaliação morfológica do corpo lúteo, onde aos 90 dias o número médio de vasos/capilares sanguíneos foi maior do que aos sete dias de gestação pelo teste de Tukey (P<0,05). A interação entre grupo genético e idade gestacional foi significativa ao se analisar a expressão dos genes angiogênicos MMP9 (P=0,0463), VEGFA (P=0,0078) e ANGPT1 (P<0,0001). A interação entre grupo genético e idade gestacional também foi significativa ao se analisar a expressão de todos os genes apóptoticos trabalhados: BAX (P<0,0001), BCL-2 (P<0,0001) e CASP3(P=0,0330). Os genes angiogênicos HIF1α, MMP2, VEGFR-2 apresentaram maior expressão em fêmeas de linhagem Comercial em relação à Piau (P=0,0495, P=0,0210 e P=0,0304, respectivamente). Já os genes ANGPT2 (P=0,3260 e P=0,0511) e o receptor TEK (P=0,5273 e P=0,8827) não apresentaram diferenças de expressão entre grupos genéticos e idades gestacionais. A razão entre ANGPT2 e ANGPT1, que competem pelo mesmo receptor (TEK), apresentou variação entre as idades gestacionais tanto em fêmeas da raça Piau (P=0,0001) quanto em fêmeas de linhagem Comercial (P=0,0106). O padrão de expressão tanto de alguns genes angiogênicos quanto apoptóticos, foi influenciado pelas diferentes concentrações de progesterona sintetizada pelo corpo lúteo nos diferentes momentos gestacionais, e também pelos diferentes processos decorrentes do reconhecimento gestacional e desenvolvimento pré-natal dos conceptos. Diferenças entre grupos genéticos possivelmente foram verificadas como resultado da seleção de características voltadas a prolificidade das matrizes suínas de linhagens comerciais, que levaram às alterações na expressão gênica e consequentemente na morfologia do corpo lúteo. / Understanding the mechanisms which control the permeability, angiogenesis and corpus luteum apoptosis of pregnant sows are essential to comprehend the physiological role of these processes in progesterone production and consequently in conceptus development, embryonic and fetal mortality rates and prolificacy of the animals. The aim of this study was to evaluate the expression of genes related to angiogenesis and corpus luteum apoptosis of pregnant local breed Piau and Commercial line sows at different gestational ages, and associate the molecular data to phenotypic data of gestational corpus luteum morphology. For histological analysis, samples were embedded in plastic resin and stained with Toluidine Blue. As for the molecular analysis of the corpus luteum, total RNA extraction was performed using Trizol and gene expression measured by quantitative real time PCR (RT-qPCR). Diferences were observed in corpus luteum morphology between gestational ages (P=0.0043), which at 90-day average of vessels/blood capillaries was greater than the seventh day of pregnancy by Tukey test (P<0.05). The interaction between genetic group and gestational age was significant when analyzing the expression of MMP9 (P=0.0463), VEGFA (P=0.0078) and ANGPT1 (P<0.0001) genes. The interaction between these factors was also significant while analyzing the expression of all used apoptotic genes: BAX (P<0.0001), BCL-2 (P <0.0001) and CASP3 (P=0.0330). The angiogenic genes HIF1α, MMP2, VEGFR-2 showed higher expression in Commercial line than in local breeed Piau (P=0.0495, P=0.0210 and P=0.0304, respectively). On the other hand, ANGPT2 gene (P=0.3260 and P=0.0511) and the TEK receptor (P=0.5273 and P=0.8827) did not show differences in expression between the different genetic groups and gestational age. The ratio of ANGPT2 and ANGPT1, which compete for the same receptor TEK, showed significant variation between gestational ages for both genetic group Piau (P=0.0001) and Commercial (P=0.0106). The expression pattern of both angiogenic and apoptotic genes was affected by different concentrations of progesterone synthesized by the corpus luteum in different gestational periods, and also by different events in the gestational recognition and prenatal development of fetuses. Differences between genetic groups were found, possibly as a result of traits selection aimed to prolificacy of Commercial lines sows, which led to changes in the pattern of gene expression, hence in corpus luteum morphology.

Introdução: leiomiomas uterinos são os tumores benignos mais prevalentes nas mulheres em idade fértil, ocorrem em cerca de 50% da população feminina e são a indicação mais frequente de histerectomia. A importância dos esteroides ovarianos na etiologia dos leiomiomas está bem estabelecida; contudo, as contribuições relativas dos estrógenos e da progesterona no crescimento dos leiomiomas ainda são controversas. Muitos estudos têm apresentado evidências de que a progesterona seria mais importante do que os estrógenos para o desenvolvimento destes tumores, e antiprogestágenos como a mifepristona podem tornar-se uma nova possibilidade de tratamento conservador. Ensaios clínicos têm sugerido que a mifepristona é efetiva no tratamento de leiomiomas, causando redução no tamanho dos tumores. Todavia, a recorrência da proliferação dos tumores após o fim do tratamento e os mecanismos de ação da mifepristona na regulação dos receptores de progesterona ainda não estão esclarecidos. O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito da mifepristona sobre a proliferação celular e a expressão gênica de receptores de progesterona A e B, em um modelo de cultura de células de miométrio e leiomioma, sob diferentes condições hormonais. Métodos: fragmentos de leiomioma e de miométrio adjacente foram obtidos de cinco pacientes submetidas à histerectomia. Foram padronizadas as culturas primárias de leiomioma e miométrio, e as células de cada tipo de tecido em cultura foram divididas em cinco grupos de tratamento: estradiol, estradiol e mifepristona, estradiol e progesterona, estradiol, progesterona e mifepristona e controle (etanol utilizado como veículo dos hormônios). Foi realizada análise imunocitoquímica para α-actina. A proliferação celular foi avaliada através de contagem em hemocitômetro e ensaio de MTT no tempo 7 (após o tratamento com mifepristona) e no tempo 9 (após a recuperação do tratamento). No dia 7, foi feita extração de RNA para avaliar a expressão de receptores de progesterona (PRs) A e B através de PCR em tempo real. Resultados: o estabelecimento do modelo de cultura de células foi confirmado através da coloração positiva para α-actina e pela observação de características morfológicas típicas de células musculares lisas. As técnicas de avaliação da proliferação celular, contagem e MTT, mostraram correlação positiva. O tratamento com estradiol aumentou a proliferação celular de ambos os tipos de tecido, em relação ao grupo controle. O tratamento com progesterona associada ao estradiol aumentou a proliferação das células de ambos tecidos, em relação ao tratamento com estradiol isoladamente e ao controle. Para os dois tratamentos, as células de leiomioma proliferaram mais do que as células de miométrio. No tempo 7, o tratamento com mifepristona associada ao estradiol inibiu a proliferação celular em leiomioma (42%) e no miométrio (23%), em comparação ao mesmo tecido tratado somente com estradiol. O tratamento com mifepristona em associação com estradiol e progesterona inibiu a proliferação celular em leiomioma (105%) e miométrio (56%), em comparação ao mesmo tecido tratado com estradiol e progesterona. No tempo 9, após a recuperação do tratamento com mifepristona, células de miométrio mostraram maior resposta proliferativa do que células de leiomioma. Todavia, o tratamento com mifepristona não foi capaz de inibir completamente a proliferação celular, visto que todos os grupos tratados mostraram aumento de proliferação do tempo 7 até o tempo 9. Foi demonstrada a expressão das duas isoformas de PRs, A e B, em miométrio e leiomioma in vitro; contudo, as comparações entre os grupos de tratamento não foram possíveis devido ao reduzido tamanho amostral. Conclusões: culturas primárias de células de miométrio e leiomioma são um modelo viável para avaliação da proliferação celular em diferentes condições hormonais, e o ensaio de MTT pode ser um bom método de avaliação. A mifepristona inibiu a proliferação celular em ambos os tipos de tecido, com o maior efeito quando associada ao estradiol e à progesterona e em células de leiomioma. Células de miométrio e leiomioma expressam as duas isoformas de PRs in vitro. Mais estudos são necessários para esclarecer o papel da mifepristona na regulação da expressão gênica e proteica dos PRs. / Introduction: uterine leiomyomata are the most common benign tumors in women of reproductive age, with an estimated incidence greater than 50% and being the most common indication for hysterectomy. Importance of ovarian steroids in the etiology of leiomyomas is well established; however, relative contributions of estrogens and progesterone in leiomyomas growth are still controversial. Many studies have presented evidences that progesterone is more important than estrogens for the development of these tumors, and antiprogestins like mifepristone have become a new possibility for conservative treatment. Clinical trials suggest that mifepristone is effective in treating leiomyomata, producing reduction of their size. However, recurrence of tumor proliferation after treatment and molecular mechanisms of mifepristone action in regulating progesterone receptors remains unknown. Therefore, the aim of this study was to evaluate the effect of mifepristone on cell proliferation and progesterone receptors A and B gene expression, in a model of leiomyoma and matched myometrium cell cultures under different hormonal conditions. Methods: human leiomyoma and matched myometrial tissues were obtained from five patients undergoing hysterectomy. Cells maintened in culture from each tissue were divided into 5 treatment groups: estradiol, estradiol and mifepristone, estradiol and progesterone, estradiol, progesterone and mifepristone, and control group (ethanol as a vehicle from hormones). Immunocytochemistry analysis for α-actin was performed. Cell proliferation was evaluated by hemocytometer counting and MTT assay at day 7 (after mifepristone treatment) and day 9 (after recovery from treatment). RNA extraction was performed at day 7 to evaluate progesterone receptors (PRs) A and B expression by real time PCR. Results: culture cell establishment was confirmed by positive staining for α-actin and by observed morphological characteristics from smooth muscle cells. Cell proliferation evaluating techniques, hemocytometer counting and MTT, showed positive correlations. Estradiol treatment increased cell proliferation for leiomyoma and myometrium cells compared to control group. Progesterone combined to estradiol increased cell proliferation in both cell types, compared to estradiol alone and control group. For both hormonal treatments, leiomyoma showed significantly higher proliferation than myometrial cells. At day 7, mifepristone treatment in association with estradiol inhibited cell proliferation in leiomyoma (42%) and myometrial cells (23%), compared to the same tissue treated with estradiol alone. Mifepristone treatment in association with estradiol and progesterone also inhibited cell proliferation in leiomyoma (105%) and myometrial cells (56%), compared to the same tissue treated with estradiol and progesterone. At day 9, after recovery from mifepristone treatment, myometrial cells showed greater proliferative response than leiomyoma cells. However, mifepristone treatment was not able to completely inhibit cell proliferation, whereas treated groups showed increased proliferation from day 7 to 9. We have found that two isoforms of PRs, A and B, were expressed in both myometrial and leiomyoma in vitro; however, comparisons between groups were not possible due to the small sample size. Conclusions: primary myometrial and leiomyomata cell cultures are a viable model for cell proliferation analysis under different hormonal conditions, and MTT assay could also be a good evaluation method. Mifepristone inhibited cell proliferation of both types of tissue, with maximum effect in association with estradiol and progesterone in leiomyoma cells. PRs A and B were expressed in myometrial and leiomyoma cells in vitro. Further investigation is needed to clarify whether mifepristone regulates gene and protein expression of PRs.