Orientador : Radovan Borojevic / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-01T08:59:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Arcanjo_KatiaDenisedeSouza_D.pdf: 8227428 bytes, checksum: ce60d7dcab3f2fe523a6be9c914002b6 (MD5) Previous issue date: 2002 / Resumo: O microambiente da medula óssea desempenha importância fundamental na proliferação e diferenciação das células progenitoras hematopoéticas bem como no controle do egresso dessas células para o sangue periférico. Embora moléculas da matriz extracelular, juntamente com citocinas, sejam cruciais na compartimentalização dos microambientes da medula óssea, ainda não se conhecem os pré-requesitos para que um determinado estroma possa sustentar a hematopoese. Usando uma linhagem celular (FDC-Pl) dependente de fator de crescimento, comparamos modelos experimentais de estromas periféricos e de medula óssea, que sustentam ou não a proliferação mielóide "in vitro". Observamos que todos os estromas produzem um grupo similar de hemopoetinas, incluindo o fator estimulador de colônias de macrófagos e granulócitos (GM-CSF), o qual pode ser liberado das monocamadas estromais, através de altas concentrações de sais, numa forma biologicamente ativa. Por outro lado, glicosaminoglicanos (GAGs) obtidos a partir desses estromas, exibiram uma capacidade de modulação da atividade biológica do GM-CSF variável, dependendo da concentração utilizada. Fibroblastos de pele, que não são capazes de sustentar a mielopoese "in vitro", sintetizam GAGs que podem inibir a atividade mielopoética de GM-CSF. Concluímos que, a qualidade dos glicoconjugados pericelulares dos estromas, presentes no microambiente local, é determinante para que um dado estroma seja capaz de sustentar a mielopoese, mesmo quando hemopoetinas biologicamente ativas são localmente produzidas. Os aspectos espaciais desse microambiente e as interações moleculares entre as células do estroma e progenitores mielóides foram investigados. Demonstramos que esse contato fisico pode disparar um "capping" de moléculas de superfície celular incluindo glicoconjugados de ácido siálico e proteoglicanos. Juntas, essas moléculas, potencialmente interativas com o GMCSF, geram um ambiente intercelular esfecífico, promovendo condições fisico-químicas requeri das para essa interação. A identificação da expressão dos HSPGs associados as superfícies celulares foi monitorada através de RT -PCR. Os estromas analisados mostraram expressão de mRNA para glipicam, betaglicam e sindecam-4. O tratamento das monocamadas estromais com PI-PLC (fosfolipase C) e tripsina branda, confinnou a presença de HSPGs de superfície celular (glipicam) e sindecam, respectivamente. Aproximadamente, 20% dos HSPGs obtidos, estão associados à membrana através de âncoras de GPI enquanto o restante, 80%, permanece integrado à membrana plasmática. Demonstramos que as moléculas marcadas com sulfato radioativo, deslocadas da superfície celular das células estromais após tratamento com tripsina branda, são capazes de aumentar a atividade biológica do GM-CSF, quando comparadas com aquelas deslocadas por PIPLC as quais não apresentaram diferenças significativas se comparadas com o controle. Esses resultados sugerem a existência de HSPGs transmembranares e associados via âncora de GPI nas superfícies das células estromais, e que, a atividade biológica de GM-CSF na proliferação de FDC-Pl "in vitro", é aumentada através de uma possível interação física entre o fator de crescimento e um HSPG transmembranar / Abstract: The bone marrow microenvironrnent plays an important role in promoting hematopoietic progenitor cell proliferation and differentiation, as well as their controlled release into the circulation. It has been shown that the extracellular matrix elements in combination with cytokines are crucial for compartmentalization of the bone marrow environrnent, but it is not clear which are the molecular and structural requirements for a given stroma to sustain hematopoiesis. Using the growth factor-dependent cell line FDC-Pl, we have compared in vitro experimental models of bone marrow and peripheral stromas, two of which sustain myeloid proliferation and one which does not. We have found that all the stromas produced a similar set of hemopoietins, including the GM-CSF, which could be released from the stromal cell layer in an active form by high-salt buffers. On the other hand, glycosaminoglycans (GAGs) obtained from stromas had variable concentration-dependent capacity to modulate the GM-CSF activity. The skin fibroblasts, which can not sustain myelopoieis in vitro, synthesized GAGs that could inhibit the myelopoiesis-promoting activity of GM-CSF produced by the same cells. We conclude that the quality of the stroma pericellular glycoconjugates, present in microenvironrnent, is determinant for the ability of a given stroma to sustain myelopoiesis, even when biologically active hemopoietins are locally produced. The spatial organization of this microenvironrnent and molecular interactions among stroma cells and myeloid progenitors was investigated, and we have shown that the physical intercellular contact triggers the capping of cell surface molecules, including sialylated glycoconjugates and proteoglycans. Together, they generated the specific intercellular environrnent, rich in molecules potentially interactive with GM-CSF, and providing the physicochemical conditions required for this interaction. We have partially assessed the identification of the core proteins of cell-associated HSPGs of the stromal cell lines monitoring their expression by RT-PCR. The assayed stromas expressed mRNA for glypican, syndecan-4 and betaglycan. The stromal layers treatment with PI-PLC and mild trypsin confirmed the presence of hydrophobic cell surface HSPG glypican and syndecan, respectively. About 20% of the HSPG are linked to membrane by glycosilphosphatidylinositol (GPI) anchor while the remainder, 80%, are integrated in the plasma membrane. We have shown that the 35 -s labeled molecules dislodged from stroma cell membranes by mild treatment with trypsin increased the biological activity of the GM-CSF, whilst those dislodged by phospholipase-C did noto These results suggested the existence of both transmembrane HSPG and GPI-HSPG and that the biological activity of GM-CSF in FDC-Pl proliferation, in vitro, is increased by a physical interaction between growth factor and transmembranar HSPG / Doutorado / Biologia Celular / Doutor em Biologia Celular e Estrutural

Orientador: Gilberto de Nucci / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-07-23T23:07:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Pereira_Renata_M.pdf: 1789158 bytes, checksum: b41a6e1998e007ca39fd7a2e06a16877 (MD5) Previous issue date: 1998 / Resumo: O objetivo deste trabalho foi obter o isolamento de grânulos de plaquetas, identificar e quantificar a presença do glicosaminoglicano 4-sulfato de condroitina. O fracionamento das plaquetas foi realizado segundo o método de RENDU et al. (1982, 1989). A identificação do 4-sulfato de condroitina foi feita segundo metodologia descrita por NADER et aI. (1987). Após o fracionamento de plaquetas lisadas por gradiente descontínuo de metrizamida, obteve-se uma fração de membranas, o solúvel, uma fração contendo estruturas da plaqueta (grânulos alfa, mitocôndrias e lisossomas, o gradiente e um precipitado contendo os grânulos densos. Através da dosagem de [14C] 5-HT, foi verificada uma maior concentração deste marcador no precipitado, demonstrando que os grânulos densos, que são estruturas captadoras de 5-HT, estavam concentrados nesta fração. Pela dosagem da atividade específica da enzima b3-N-acetilglucosarninidase, poôde-se verificar a concentração desta na fração obtida logo acima do gradiente, indicando, assim, a concentração de lisossomas e de organelas de plaquetas, como mitocôndrias e grânulos a, que possuem densidades próximas nesta fração. Pela identificação de glicosaminogliéanos por eletroforese em gel de agarose, verificou-se a presença significativa do 4-sulfato de condroitina na fração contendo grânulos a, havendo grande quantidade na fração de membranas. Porém, o 4-sulfato de condroitina não foi encontrado nos grânulos densos. Com os resultados obtidos, conclui-se que, conforme sugerido por DONA TO et a!. (1994), o 4-sulfato de condroitina não é estocado nos grânulos densos e, de acordo com o perfil de isolamento, este glicosaminoglicano está presente nos grânulos <x / Abstract: The object of this thesis was to isolate platelet granules and to identify and quantify the glycosaminoglycan chondroitin 4-sulphate contained therein. Platelets were fractioned using short metrizamide discontinuous gradients (Rendu et ai, 1982,1989) and identification of chondroitin 4- sulphate was performed using agarose electrophoresis gels (Nader et ai, 1987). After fractioning of lysed platelets a membrane fraction, a supernatant, an organelles fraction (containing a-granules, mitochondria and lysosomes) were obtained as well as the gradient fraction and a pellet containing the dense granules. A [14C]-5HT labelling assay confirmed that the dense granules were located in the pellet fraction. Since the 'beta'-N acetylglycosaminidase specific activity was found in the organelle fraction we concluded that this fraction contained the a-granules, and other organelles, as their densities are similar. Agarose electrophoresis demonstrated the presence of chondroitin 4-sulphate in the a-granule fraction, but not in the dense granule fraction. These results support evidence published by Donato et ai (1994) suggesting that chondroitin 4-sulphate is not stored in the dense granules but in the a-granule / Mestrado / Mestre em Farmacologia

Orientador : Laurecir Gomes / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-02T04:16:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Benevides_GustavoPereira_M.pdf: 3664952 bytes, checksum: ef5b67c22777a7a7f3100fd8c2d45f24 (MD5) Previous issue date: 2002 / Resumo: Os tendões transferem forças entre os músculos e ossos. O tecido conjuntivo tendíneo muda suas propriedades mecânicas e estruturais respondendo às alterações de estresse como um fenômeno de adaptação funcional e otimização operacional. A característica peculiar do tecido conjuntivo é a presença de colágeno na matriz extracelular. A rede fibrosa colagênica é o principal elemento que provê a integridade mecânica tecidual em combinação com os proteoglicanos. Nesse estudo frangos da linhagem Hy-line foram divididos em dois grupos. Um grupo de animais foi mantido em gaiolas as quais restringia a deambulação e o outro grupo foi criado em um ambiente que possibilitava ampla locomoção. Os tendões flexores digitais profundos e superficiais foram retirados, de ambos os grupos de animais com 60 dias, para análises bioquímicas e do comportamento mecânico. Para as análises bioquímicas o tendão flexor superficial foi dissecado em três regiões de acordo com a situação anatômica, assim foram obtidas duas regiões de compressão, proximal e intermédia, e uma região de tração, distal. Do tendão profundo foi analisada a região intermediária a qual recebe eminentemente força de tração. As concentrações de proteínas, colágeno e glicosaminoglicanos foram diferentes entre os grupos de animais e as diversas regiões dos tendões. O condroitim sulfato foi o glicosaminoglicano predominante nas regiões de compressão e o dermatam sulfato na de tração. Dessas regiões, foram isolados dois pequenos proteoglicanos e identificados pelo seqüenciamento das suas porções N-terminal como sendo decorim e fibromodulim. Os tendões superficiais de ambos os grupos foram submetidos a testes de deformação sob tração onde foi verificado que os tendões provenientes dos animais de ambiente amplo apresentaram maior resistência a tração, menor deformação no pico de força e maior deslocamento total. Esses resultados demonstram que há diferenças bioquímicas entre as regiões de compressão e tração dos tendões dos animais e também foram notados os efeitos positivos do exercício ativo não forçado nas propriedades mecânicas dos tendões dos animais de ambiente amplo / Abstract: Tendons have function of transmitting tension forces from musc1e to bones. The tendinous connective tissue changes their mechanical and structure properties in response to stress alteration as a phenomenon of functional adaptation and optimal operation. The peculiar characteristic of connective tissue is the presence of collagen in the extracellular matrix, providing the mechanical tissue integrity. The tendons are composed by a combination of collagen fibres and proteoglycans. In this study Hy-line chickens were randomly divided in two groups. One group was maintained in cages and the other group was raised in a wide environment. The animals were killed with 60 days old and the deep and superficial digital flexor tendons were analysed to identify the biochemical aspects and the mechanical behaviour. For the biochemical study the superficial digital flexor tendon was divided in proximal, intermediate and distal region. The proximal and intermediate regions bear compressive forces while the distal region withstands tensional forces. About the deep tendon was studied the intermediate region that receive on1y tensional forces. Comparing the two groups of animals and the several tendons regions, it was found a larger amount of proteins, collagen and glycosaminoglycans, in animals raised free than animals raised in cages. The chodroitin sulfate was prominent in compressive regions while dermatan sulfate was detected in tensional regions. The small proteoglycans, decorin and fibromodulin, were isolated and identified by analysis of N-terminal segments. A more expressive presence of decorin and fibromodulin were observed in chickens raised free, in relation to the caged chikens. The superficial tendons of both animals groups were submitted for tensile test and it was observed that the tendons of free animals showed more resistance to the tension, less deformation as the load increases and more displacement. Our biochemical and biomechanical studies showed that the physical exercise have positive effect on the strengthening of the tendons / Mestrado / Biologia Celular / Mestre em Biologia Celular e Estrutural

Orientadores : Olga Maria de Toledo Correa, Paulo Pinto Joazeiro / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-02T04:42:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Pinheiro_MonicadeCampos_D.pdf: 13257834 bytes, checksum: 646512b7dd6dc4d93d59b0c98063ce48 (MD5) Previous issue date: 2002 / Resumo: A sínfise púbica é uma articulação não sinovial, do tipo anfiartrose, que conecta os dois ossos púbicos através de um disco fibrocartilaginoso. Durante a prenhez, a sínfise púbica de camundongos passa por numerosas modificações estruturais, facilitadas por hormônios, a fim de permitir a passagem dos fetos pelo canal de parto. Essas modificações incluem um aumento da flexibilidade dessa articulação e a transformação do disco fibrocartilaginoso em um ligamento interpúbico flexível e elástico. O desenvolvimento do ligamento interpúbico envolve o aumento da biossíntese dos componentes da matriz extracelular, principalmente colágeno, proteoglicanos e glicosaminoglicanos e a mudança na relação entre síntese e degradação dos mesmos. Levando-se em consideração que o tumover destes componentes na sínfise de camundongos foi caracterizado por estudos bioquímicos e de microscopia de luz, pouco se sabe a respeito dos aspectos ultra-estruturais e histoquímicos de componentes da matriz extracelular, tais como os proteoglicanos e o colágeno tipo VI, bem como das interações entre as diferentes macromoléculas extracelulares. Esses aspectos são importantes porque podem ajudar a entender as relações entre os diferentes componentes da matriz extracelular nesse modelo. Nesse sentido, o objetivo desse trabalho foi caracterizar os glicosaminoglicanos, proteoglicanos e colágeno tipo VI na articulação interpúbica de camundongos nos diferentes estágios da prenhez. Atenção especial foi dada para as interações entre proteoglicanos e colágeno VI com outras macromoléculas da matriz. Para isso, foram empregadas análises citoquímica, imunohistoquímica, uso de sonda para detecção de ácido hialurônico, além de análises bioquímica e ultra-estrutural. Os resultados obtidos demonstraram que: 1) os proteoglicanos presentes na sínfise púbica de animais virgens são tecido-específicos e refletem as funções mecânicas de cada um dos tecidos no papel biológico global da sínfise púbica. 2) existe uma variação na quantidade e distribuição dos glicosaminoglicanos e proteoglicanos, como, por exemplo, o aumento de condroitim sulfato e o ácido hialurônico, durante a prenhez. Essas observações indicam que os proteoglicanos e glicosaminoglicanos devem ter um papel importante na formação do ligamento interpúbico e no aumento da extensibilidade desse ligamento no final da prenhez de camundongos. Estas macromoléculas podem ter um efeito importante nas propriedades de tensão do tecido. 3) A distribuição do colágeno tipo VI na sínfise púbica de camundongos virgens e prenhes é diferente nos vários tecidos que compõem essa articulação. Essa diferença pode refletir exigências funcionais diferentes para esse tipo de colágeno. A localização pericelular sugere um papel na regulação da interação célula-matriz, protegendo a célula contra estresse mecânico. Entretanto, a interação do colágeno tipo VI com outros componentes da matriz extracelular tais como colágenos fibrilares pode ter um importante papel na organização do espaço interfibrilar, provavelmente associado às propriedades elásticas do tecido / Abstract: Pubic symphysis is a nonsynovial amphiarthrodial joint that connects the two pubic bones by a fibrocartilaginous disk. During pregnancy, the mouse pubic symphysis undergoes a number of hormonally facilitated structural modifications to enable the passage of the fetuses through the birth canal. These modifications include an enhanced flexibility of the joint and the transformation of the fibrocartilaginous disk into a flexible and elastic interpubic ligament. The development of the interpubic ligament involves an increase of biosynthesis of the extracellular matrix components, mainly collagen, proteoglycans and glycosaminoglycans, in addition to a change in the relation between the synthesis and degradation of such components. The tu mover of these components in mouse symphysis has been well characterized by biochemical studies and light microscopy. H oweve r, relatively little is known about the ultrastructural and histochemical aspects of the extracellular matrix components, such as proteoglycans and type VI collagen, as well as the interactions between different extracellular macromolecules. These aspects are important since they can help in the understanding of the relationship between the different extracellular matrix components in this model. Hence the aim of this study was to characterize the glycosaminoglycans, proteoglycans and type VI collagen in the mouse interpubic joint through the different stages of pregnancy. Special attention was given to the interactions between proteoglycan and type VI collagen with other matrix macromolecules. The methodology used involved cytochemical analysis, immunohystochemistry, hyaluronic acid probes, biochemical and ultrastructural analysis. The results showed the following: 1) Proteoglycans present in virgin pubic symphysis were tissue specific and reflected the mechanical functions of each tissue in the overall biological role of the pubic symphysis. 2) There is a variation in the amount and distribution of the glycosaminoglycans and proteoglycans during pregnancy as, for example, a greater presence of GAGs, such as chondroitin sulphate and hyaluronic acid. These observations indicate that proteoglycans and glycosaminoglycans must play an important role in the formation of the interpubic ligament along with its increased extensibility during Iate pregnancy in the mouse. These macromolecules may have important effect on tensile properties of this tissue. 3) The distribution of type VI collagen in virgin and pregnant mice pubic symphysis is different in various tissues that compose this joint. This may reflect the different functional demands for this collagen. The pericellular localization suggests a role in the regulation of cell-matrix interaction, protecting the cell against mechanical stress. However, the interaction of type VI collagen with other ECM components, such as fibrillar collagens, may also play an important role in the organization of the interfibrillar space, probably associated with elastic properties of the tissue / Doutorado / Biologia Celular / Doutor em Biologia Celular e Estrutural

Orientador: Edson Rosa Pimentel / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-04T00:13:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tomiosso_TatianaCarla_M.pdf: 4297076 bytes, checksum: 448864ccd931233cf60f718db755d078 (MD5) Previous issue date: 2004 / Resumo: A cartilagem articular é um tecido conjuntivo hialino que apresenta células e abundante matriz extracelular, sendo essa composta de colágenos, glicoproteínas não colagênicas e proteoglicanos. Este trabalho teve como objetivo descrever a composição e organização da matriz extracelular de cartilagem articular de avestruz. Esta ave de grande porte e de interesse comercial, quando mantida em cativeiro, tem sido acometida por artrose nas articulações do tarsometatarso com sério comprometimento para a saúde do animal e consequências econômicas. Para tanto consideramos as cartilagens articulares das superfícies proximal e distal do tarsometatarso. A cartilagem proximal foi dividida em porção lateral e intermediária-medial, enquanto que da cartilagem da superfície distal foi analisada só a porção central. As análises estruturais das regiões da cartilagem, coradas com azul de toluidina, mostraram porções meta cromáticas e fibrilares. As fibrilas, intensamente birrefringentes ao exame pela microscopia de polarização, mostraram-se dispostas em várias direções, especialmente na região dista / Abstract: The articular cartilage is a hyaline connective tissue that contains cells and a great amount of extracellular matrix, which is composed of collagen, non-collagenous glycoproteins, and proteoglycans. This work aimed to describe the composition and organization of the extracellular matrix from articular cartilage of ostrich, which is a big bird with commercial importance and that commonly suffers of arthritis at the tarsometatarsical articulations when living in captivity conditions, teading to serious commitments to the animal's health, beyond the economical consequences. For this purpose. we have considered the articular cartilages of the proximal and distal surfaces of the tarsometatarsus. The proximal cartilage was divided into lateral, and intermediary-medial portions. From the distal surface only the central portion was analyzed. Structural analyses after toluidine blue staining showed presence of metachromatic and fibrilar components. The fibrils, intensely birefringent at polarization microscopy. were arranged in many directions, especially in distal cartilage. To extract the extracellular matrix components 4 M guanidinium chloride was utilized. The components were fractionated in DEAE-Sephacel and analyzed by SDS-PAGE. Quantitation of proteins and glycosaminoglycans was done utilizing colorimetric methods. The quantitative analysis revealed that the distal region, which is subjected to higher compressive forces, contaíns more proteins and glycosaminoglycans than the proximal region. The SDS-PAGE analysis of the fractions eluted from the DEAE-Sepachel showed the presence of proteíns with Mr from 17 to 121 kDa. In ali regions, polydisperse components wíth Mr around 67, 80-100, and 250-300 kDa, were found. These components probably correspond to the small proteoglycans fíbromodulin, decorín and biglycan. Glycosaminoglycans analysis in agarose-propylene diamine gel showed only the presence of chondroitin-suftate. The possible decorin found is a proteoglycan of chondroitin-sufate, and not dermatan-sulfate, as observed in other cartilages. Structurally the distal region exhibited ffbí11s arranged in several directions, probably because of a highest compressive strenght / Mestrado / Biologia Celular / Mestre em Biologia Celular e Estrutural

Orientador: Laurecir Gomes / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-25T15:50:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Esquisatto_MarceloAugustoMarretto_D.pdf: 7708123 bytes, checksum: 0787246c940f80a3c6f05b0cf0d848bd (MD5) Previous issue date: 1999 / Resumo: o tendão calcanear e o tendão flexor digital profundo de ratos são estruturas adaptadas para resistir às forças de tensão. Em algumas regiões, estes tendões também suportam forças de compressão. Nestes locais o tecido fibroso desenvolve uma metaplasia fibrocartilaginosa. O objetivo desse trabalho foi analisar o comportamento mecânico dos tendões, bem como a organização estrutural e a composição da matriz extracelular das regiões submetidas à tensão e tensão/ compressão em três idades diferentes (30dl180d/730d). O tendão calcanear foi dividido em região proximal (tensão) e distal ( compressão) e o tendão flexor digital profundo em duas regiões de tensão (proximal e distal) e uma de compressão (intermediária). A área ocupada pela fibrocartilagem no tendão calcanear apresentou crescimento longitudinal com a idade, enquanto que no tendão flexor digital profundo o desenvolvimento ocorreu transversalmente. Os proteoglicanos estão concentrados na matriz pericelular das células diferenciadas nos dois tendões. A presença de proteoglicanos entre as fibras colágenas parece diminuir nos indivíduos mais velhos no tendão calcanear e aumentar no tendão flexor digital profundo. As regiões de tensão não apresentaram variações entre as idades quanto à organização das fibras colágenas e basofilia na matriz extracelular. A ultraestrutura das células da região de compressão apresentou um citoplasma rico em filamentos do citoesqueleto. A matriz pericelular dos fibrocondrócitos no tendão flexor digital profundo, rica em proteoglicanos e fibrilas de colágeno, apresentou aumento na espessura nos animais mais velhos. No tendão calcanear, nas mesmas idades, a matriz pericelular passa por alterações progressivas, resultando numa malha de fibrilas de colágeno nos indivíduos idosos. Nas regiões de tensão as células apresentaram citoplasma rico em retículo endoplasmático rugoso. No tendão calcanear a capacidade de síntese das células parece diminuir antes que no tendão flexor digital profundo. Em ambos os tendões as fibrilas de colágeno apresentaram diâmetros menores na região de compressão em relação a de tensão. As médias dos diâmetros das fibrilas de colágeno de todas as regiões apresentaram aumento entre as idades de 30 e 180d com diminuição nos indivíduos de 730d. As regiões de tensão do tendão calcanear e flexor digital profundo apresentaram intumescimento mais acentuado em ácido acético que as de compressão. O conteúdo de água apresentou valores semelhantes entre as todas regiões e idades. A presença de glicosaminoglicanos foi maior nos indivíduos mais jovens. Contudo, nos animais mais velhos foram detectados conteúdos maiores nas regiões de compressão. O conteúdo de proteínas solúveis foi maior nas regiões de tensão enquanto que os conteúdos de ácido urânico e glicosaminoglicanos sulfatados foram mais proeminentes nas regiões de compressão. O glicosaminoglicano predominante em todas as regiões do tendão calcanear e flexor digital profundo foi o dermatam sulfato. O condroitim sulfato também foi detectado, mas somente na região de compressão de indivíduos com 30d. Fibromodulim e o decorim foram detectados em todas as regiões e idades. O teste imunoquímico para fibromodulim demonstrou diferentes graus de associação com o colágeno entre as idades. O decorim parece mais evidente nas regiões de compressão de animais com 180d. O tendão calcanear apresentou aumento progressivo da tensão de ruptura e módulo elástico durante o envelhecimento enquanto que no tendão flexor digital profundo foram observados aumento nos valores entre 30d e 180d e diminuição aos 730d. Os tendões analisados parecem apresentar respostas biológicas semelhantes aos diferentes tipos de forças a que são submetidos, no entanto, as variações qualitativas e quantitativas observadas devem estar relacionadas às diferenças na exigência funcional durante o envelhecimento / Abstract: The rat calcanear and digital flexor tendons are structures which are adaptated to resist tension forces. In some regions, these tendons also support compression forces. In these areas the fibrous tissue develops a fibrocartilage metaplasia. The aim of this work was to analyse the mechanic behaviour of these tendons, structural organization and extracelIular matrix composition of the different regions subjected to tension and tension/compression of the tendons during aging (30/180/730 days old). The calcanear tendon was divided into the proximal region (tension) and distal region (compression) and digital flexor tendon into two tension areas (proximal and distal) and one compression area (intermediate). The fibrocartilage of calcanear tendon increased 10ngitudinalIy with age, while in the digital flexor tendon, it developed transversalIy. Proteoglycans are concentrated in the pericellular matrix ofboth tendons' differentiated celIs. The presence of the proteoglycans in the colIagen fibres seem to decrease during aging in the calcanear tendon and increase in the digital flexor tendon. The colIagen fibres organization and basophilia in the extracelIular matrix of tension regions did not change during aging. The ultrastructure of the celIs in the compression region revealed a cytoplasm rich in cytoskeleton filaments. The pericelIular matrix, rich in proteoglycans and fibrils, progressively increases with aging in the flexor digital tendon. During this period, it undergoes progressive alterations in calcanear tendon which result in a network of fine fibrils in older individuaIs. In the tension region, celIs present a cytoplasm rich in rough endoplasmic reticulum. Cells ITom calcanear tendon seem decrease their synthetic metabolism before those in the digital flexor tendon. Collagen fibrils in compression regions ITom both tendons present smaller diameters. The mean diameter ITom fibrils in all regions show an increase among 30d and 180d and a decrease within 730 days old animais. In relation to compression regions, the tension regions from both tendons show a swelIing increment in acetic acid. Water content was similar in all regions and ages. Glycosaminoglycan content was higher in young animais. During aging, however, the compression regions showed higher glycosaminoglycan contento The content of soluble protein was higher in tension regions, whereas in compression regions was observed a prominent content of uronic acid and glycosaminoglycan in the extracts. Dermatan sulfate was the most abundant glycosaminoglycan found in all regions ITom calcanear and digital flexor tendon. Chondroitin sulfate was only detected in compressive regions of 30 days old rats. Fibromodulin and decorin were present in all regions and ages. Fibromodulin's immunoblotting demonstrated different degrees of association with collagen during aging. Decorin seems to be more prominent in compression regions ITom 180 days old animals. The calcanear tendon presents a progressive rise in tension of rupture and elastic modulus during aging whereas in the digital flexor tendon it was observed a progressive rise in the values among 30 and 180 days and a decrease in 730 days old rats. The tendons se em to present similar biological responces to different types of forces which they were submitted. The observation of quantitative and qualitative variations, however, must be related to differences in functional stress during aging / Doutorado / Biologia Celular / Doutor em Ciências

Orientador: Edson Rosa Pimentel / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-20T12:49:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Covizi_DanielaZanin_M.pdf: 5501060 bytes, checksum: d867f84ccf659267d9d346abfc1db3d9 (MD5) Previous issue date: 1995 / Resumo: o tendão é um tipo de tecido conjuntivo denso onde há um predomínio de matriz extracelular (MEC) em relação a quantidade de células. Sua principal função é transmitir as forças de tensão geradas pela contração do músculo onde ele se origina ao osso no qual ele se insere. Os principais componentes da MEC de tendões são o colágeno do tipo I, os pequenos proteoglicanos (PGs) e as proteínas não colagênicas (PNC). Existem tendões que passam próximo a um osso em uma articulação antes da inserção, que ocorre numa direção diferente do músculo, e neste caso são denominados "wrap around", e no local em que estão sob a articulação recebem forças de compressão e fricção adicionais às forças de tensão. Neste local geralmente ocorre o desenvolvimento de uma estrutura fibrocartilaginosa com feixes de colágeno espessos, quantidade elevada de PG e células semelhantes a condrócitos. O objetivo deste trabalho foi analisar a composição de PNC e pequenos PGs da MEC de diferentes regiões do tendão do músculo flexor digital profundo (TFDP), do tendão do músculo flexor digital superficial (TFDS) e do tendão calcanear (TC), que por apresentarem trajeto não linear provavelmente estão sob a ação de forças de compressão e fricção além das forças de tensão. O TFDP e o TFDS foram divididos em regiões denominadas proximal, intennediária e distal, enquanto o TC foi dividido nas regiões proximal e distal. Todas as regiões dos três tendões foram extraídas com 25 volumes de c1oridrato de guanidina (GuRCI) 4M com inibi dores de proteases. As dosagens de proteínas realizadas em cada extrato mostraram que no TFDP havia uma maior presença de proteínas não colagênicas/mg de tecido, sendo que nas regiões intennediária e distal esta proporção foi maior. Com relação às dosagens de glicosaminoglicanos (GAGs) sulfatados, após digestão com papaína, foi verificado que a região distal do TC apresentou uma maior quantidade de GAG/mg de tecido, comparando com as regiões dos TFDP e TFDS. De um modo geral, a quantidade de GAG/mg de tecido, nos três tendões, foi sempre maior nas regiões em que os tendões contornam a articulação. O GAG dermatam sulfato foi encontrado em todas as regiões nos três tendões na eletroforese em gel de agarose, enquanto condroitim sulfato foi encontrado apenas nas regiões que estão sob forças de compressão do TFDP e do TC. Amostras de todos os extratos foram fracionadas em coluna de DEAE-celulose. O material ligado à resina foi eluído da coluna em gradiente linear de NaO de O a 1 M, e as frações analisadas em SDS-PAGE 4 a 16 % com e sem 2-mercaptoetanol (2-Me). Em todas as regiões dos três tendões observou-se a presença de componentes com Mr entre 94 kDa e 232 kDa. O pequeno PG fibromodulim foi encontrado em todas as regiões dos TFDP, TFDS e TC, e pelo resultado do teste imunoquímico podemos deduzir que possui duas isoformas do PG. Uma característica interessante deste fibromodulim foi seu comportamento em SDS-PAGE migrando mais lentamente quando não era previamente incubado com 2-Me. O componente poli disperso com Mr na faixa de 67 a 115 kda, provavelmente decorim, também foi encontrado em todas as regiões dos tendões TFDP, TFDS e Te. A presença desses pequenos PGs em tecidos tipicamente fibrosos deve-se à sua provável função de regular a fibrilogênese das moléculas de colágeno. As propriedades de intumescimento apresentadas pelos três tendões foram típicas de uma matriz colagênica fibrosa / Abstract: Tendon is a typical example of done connective tissue, with a predominance of extracellular matrix (ECM). Its main function is transmitting tension from the musc1e to the bone. The main ECM component of tendons are type I collagen, small proteoglycans and non collagenous proteins. Tendons which pass under bones are called a wrap around tendon, and way receive compression and frictional forces in adhesion to tensile forces. Normally, this region has a structure similar to a fibrocartilage with collagen fibers and elevated levels of g1ycosaminoglycans, with cells resembling chondrocytes. The purpose of this work was to analyse the composition of non collagenous proteins and small proteoglycans present in the ECM of different regions of the deep digital flexor tendon (DDFT), superficial digital flexor tendon (SDFr) and calcanear tendon (CT). These tendons probably experience compressive and frictional forces in addition to tensile forces. The DDFr and SDFr were divided in proximal, intermediate and distal regions, while the CT was divided in proximal and distal regions. Every region was treated with 25 volumes of 4M guanidine hydrochIoride (GuHCI) with proteases inhibitors. Quantitation of proteins in each extract showed that in DDFr there was a larger presence of non collagenous protein/ .g of tissue than in the other two tendons. In the intermediate and distal region of the DDFr, the proposition of this protein was higher. In relation to the presence of sulfated glycosaminog1ycans (GAGs), after papain digestion, more GAG/mg of tissue was found in the distal region of CT, compared to the regions of the DDFr and SDFr. In general, the amount of GAG/mg of tissue, was always higher in regions where the tendon passed under the joint. Eletrophoresis in agarose gel showed the presence of sulfate dermatan, in alI regions of the three tendons, whi1e chondroitin sulfate was found only in regions passing under bone, in DDFf and CT. Samples of every extract were fractioned on a DEAE-celulose column. The bound material was eluted with a linear gradient of O-1M NaCI, and fractions analysed in SDS-PAGE in presence and absence of 2-mercaptoethanol. In alI regions of the three tendons components with Mr between 94 and 232 kDa were delected. The small proteoglycan fibromodulin was present in every region of the DDFf, SDFf and CT. The immunochemical test inc1inated tqat fibromodulin may be present in two isoforms of the proteog1ycan. A interesting characteristic of this fibromodulin was its behaviour in SDS- P AGE, migrant more slowly when electrophoresis was in non reducing conditions. The polydisperse component with Mr in the range of 67 to 115 kDa, probably corresponding to decorin, was found in every region of the three tendons. The presence of these two small proteoglycans in fibrous tissues it is probable due to the function of regulating collagen fibrilogenesis. The swelling properties demonstrated for the three tendons were tipical of a collagenous fibrous matrix / Mestrado / Biologia Celular / Mestre em Ciências Biológicas

Memoria para optar el título de Bioquímico

Made available in DSpace on 2015-07-22T20:50:40Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-03-26. Added 1 bitstream(s) on 2015-08-11T03:25:53Z : No. of bitstreams: 1 Publico-10963a.pdf: 1694082 bytes, checksum: bc39c8876de95303fec83c7369f620b2 (MD5). Added 1 bitstream(s) on 2015-08-11T03:25:53Z : No. of bitstreams: 2 Publico-10963a.pdf: 1694082 bytes, checksum: bc39c8876de95303fec83c7369f620b2 (MD5) Publico-10963b.pdf: 1367346 bytes, checksum: ace350411d2b289220d691cfa562d980 (MD5) / Na ginástica rítmica preconiza-se que ginastas sejam mais leves e mais magras do que outras meninas da mesma idade, sendo que esta busca pelo perfil atlético adequado pode resultar em danos sérios para a saúde. A estreita relação entre imagem corporal e desempenho físico faz com que essas adolescentes sejam um grupo particularmente vulnerável a instalação de desordens alimentares, tendo em vista a ênfase dada ao controle de peso. Objetivo: Analisar a satisfação com o peso corporal em atletas da ginástica rítmica e a real necessidade dessa preocupação. Metodologia: Foram avaliadas 12 atletas de elite e 12 escolares com idade entre 13 e 15 ano s, todas com menarca. Foram realizadas medidas antropométricas (massa corporal, estatura e índice de massa corporal) e do consumo energético através do recordatório alimentar de 3 dias. Adicionalmente foi aplicado um questionário fechado sobre a satisfação com o peso atual. Resultados: Mostraram valores de massa corporal, bem como o IMC das ginastas abaixo dos referidos na literatura, a ingestão calórica valores abaixo dos preconizados pela RDA e o nível de satisfação corporal de 41,6%. Conclusão: Foram apresentados valores reduzidos, abaixo dos recomendados e a busca para a redução de peso alertaram que a problemática com relação à imagem corporal e seus possíveis distúrbios poderiam ser evitados, através de uma boa orientação profissional, prevenindo patologias, seqüelas emocionais e até mesmo um baixo rendimento esportivo. / TEDE

Orientador: Laurecir Gomes / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-06T22:35:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Benevides_GustavoPereira_D.pdf: 14498441 bytes, checksum: 14dabe493438b35e04541f31da165221 (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: Os tendões transmitem as forças geradas pelos músculos aos ossos, resultando no movimento articular. A tendinopatia crônica caracterizada por evidentes alterações bioquímicas e biomecânicas, produz severos sintomas clínicos que pode evoluir até a impossibilidade de qualquer atividade ocupacional sendo resistente às condutas clínicas. O desenvolvimento de um modelo experimental é necessário não só para estudar a evolução dessa patologia, mas também para identificar as alterações da composição da matriz extracelular em tendões injuriados. A partir da estimulação elétrica muscular aplicada nos membros inferiores de frangos, foram desenvolvidos quatro diferentes protocolos de exercício. Após oito semanas de exercício os tendões do músculo gastrocnêmio e dos flexores digitais superficiais foram analisados quanto à concentração de hidroxiprolina e em testes biomecânicos. Os tendões responderam de maneira significativamente diferente aos protocolos aplicados e um mesmo protocolo modulou de forma distinta os dois tendões analisados. Os tendões do protocolo com maior déficit biomecânico apresentaram um aumento das proteínas totais, diminuição na concentração dos pequenos proteoglicanos e um aumento significativo na concentração dos glicosaminoglicanos em relação ao grupo controle. Essas dosagens indicam importantes alterações nos constituintes da matriz extracelular sugerindo degeneração tendínea, quadro patobiológico muito semelhante ao da tendinopatia crônica. A partir desse modelo experimental será possível identificar não só outros efeitos deletérios dessa patologia no sistema músculotendíneo, como também estudar a eficácia de novos tratamentos / Abstract: The tendon transmits the strength generated by the muscles to the bone, resulting in joint movement. The chronic tendinopathy, characterized by evident morphological and biomechanical alterations produce severe clinical symptoms that conduct to an incapacity of limb movement, which can develop until the impossibility of any occupational activity and is resistant to the majority of clinical conducts. The development of an experimental model is necessary, not only to study the evolution of this pathology, as well as to identify the alterations of the extracellular matrix components in injured tendons. With electrical muscle stimulation, applied in the inferior limb of chickens, four protocols of exercise were developed. After eight weeks the gastrocnemius and superficial digital flexor tendons were analyzed with respect to hydroxyproline concentration and biomechanical tests. The tendons showed significant differences with respect of protocols applied and the same protocol modulated with distinct form the two tendons analyzed. The tendon with higher biomechanical deficit showed a significant increased of total proteins, a decrease of small proteoglycans concentration and an increase of glycosaminoglycans in relation to the same region of control group. Those dosages pointed to important alterations of extracellular matrix constituents suggesting tendon degeneration, pathobiology stage very similar to chronic tendinopathy. With this experimental model will be possible to identify others deleterious effects of this pathology in the muscle-tendon system, but also to study the efficacy of new treatments / Doutorado / Biologia Celular / Doutor em Biologia Celular e Estrutural