Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Tecnologia, Departamento de Engenharia Civil e Ambiental, 2008. / Submitted by Jaqueline Ferreira de Souza (jaquefs.braz@gmail.com) on 2011-02-28T14:28:10Z No. of bitstreams: 1 2008_RaquelTaira.pdf: 12311836 bytes, checksum: 1e1367401a3970ec2388cab4acf229b7 (MD5) / Approved for entry into archive by Marília Freitas(marilia@bce.unb.br) on 2011-03-28T18:33:22Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2008_RaquelTaira.pdf: 12311836 bytes, checksum: 1e1367401a3970ec2388cab4acf229b7 (MD5) / Made available in DSpace on 2011-03-28T18:33:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2008_RaquelTaira.pdf: 12311836 bytes, checksum: 1e1367401a3970ec2388cab4acf229b7 (MD5) / Devido a sua ocorrência em águas superficiais e sua significativa resistência aos estresses ambientais, Cryptosporidium parvum é considerado um dos mais importantes parasitas de veiculação hídrica. Por causa do tamanho reduzido dos oocistos, 4 a 6 µm, e a resistência à desinfecção com cloro, a filtração é considerada o processo fundamental para a remoção desses microrganismos. A filtração lenta é apontada como um processo capaz de remover patógenos eficientemente, porém a remoção de oocistos é ainda pouco estudada. Este trabalho teve como objetivo avaliar, em escala piloto, a remoção de oocistos de Cryptosporidium pela filtração lenta, precedida ou não da pré-filtração em pedregulho com escoamento ascendente. As taxas de filtração avaliadas nos filtros lentos foram de 3 e 6 m/d enquanto a taxa de filtração no pré-filtro foi mantida constante em 10 m/d. A concentração de oocistos na água bruta durante os experimentos variou de 102 e 103 ooc/L. Quando os filtros lentos foram submetidos a algum período de amadurecimento, as eficiências de remoção de oocistos nas seqüências estudadas foram próximas, variando entre 2,76 a 4,28 log. As menores remoções foram obtidas quando a turbidez da água bruta era mais elevada, a taxa de filtração do filtro lento era igual a 6 m/d e a concentração inicial de oocistos era mais baixa. Quando os filtros lentos não foram submetidos a período de amadurecimento a remoção de oocistos no filtro lento atuando como única unidade de tratamento foi de no máximo 3,68 log, enquanto o conjunto pré-filtro+filtro lento atingiu até 4,27 log, indicando a importância da adoção do pré-filtro em situações críticas de operação. O pré-filtro de pedregulho foi responsável pela remoção de 0,29 a 2,37 log de oocistos. O aumento da taxa de filtração dos filtros lentos (3 para 6 m/d) parece afetar a remoção de oocistos e coliformes totais, mas não a remoção de turbidez. Em qualquer das unidades de filtração, as remoções de coliformes totais e Clostridium perfringens foram sempre inferiores à de oocistos, sugerindo que esses indicadores são conservadores em relação aos oocistos. Ao obter turbidez efluente menor ou igual a 1 UT no filtro lento sozinho, foi verificada ocorrência de correlação a 90% de confiança entre turbidez residual e ocorrência de oocistos. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / Owing to its widespread occurrence in water and its significant resistance to environmental stresses, Cryptosporidium parvum is regarded as one of the most important waterborne microbial parasites. Due to the small size of Cryptosporidium, 4 to 6 μm, and its resistance to disinfection with chlorine, filtration is regarded a key process to remove this microrganism. Slow Sand Filtration has been shown to be effective in achieving removal of pathogens, but there is a lack of studies about oocyst removal. This study aimed to evaluate, at pilot scale, Cryptosporidium oocysts removal by slow sand filtration preceded or not by the upflow roughing filtration. The filtration rates evaluated at the slow sand filters were 3 and 6 m.d-1 while for roughing filter it was constant at 10 m.d-1. Oocysts concentration in raw water during the experiments ranged between 102 and 103 ooc.L-1. When slow sand filters were subjected to a period of ripening, the efficiencies of oocysts removal in the sequences studied were similar, varying in the range of 2.76 to 4.28 log. Lower removals were obtained when raw water turbidity was higher, filtration rate of slow sand filter was 6 m.d-1 and oocysts initial concentration was lower. When the slow sand filters were not subjected to a period of ripening, oocysts removal by slow sand filter acting as single unit of treatment was no more than 3.68 log, while the roughing filter + slow sand filter reached up to 4.27 log, indicating the importance of the adoption of roughing filter in critical situations of operation. Upflow roughing filter was responsible for 0.29 to 2.37 log of oocysts removal. The increase in the filtration rate of slow sand filters from 3 to 6 m.d-1 seems to affect negatively oocysts and total coliform removals, but not turbidity removal. In every unit of filtration, total coliform and Clostridium perfringens removal efficiencies were always lower than oocysts removal, suggesting that these indicator organisms are conservative for Cryptosporidium oocysts. When turbidity of slow sand filter alone was equal or lower than 1 NTU, it was observed a correlation at 90% of confiability between turbidity and oocysts occurrence.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Química, 2008. / Submitted by Allan Magalhães (allanout@gmail.com) on 2011-07-01T02:43:10Z No. of bitstreams: 1 2008_ClaudioGastaodaCosta.pdf: 1531661 bytes, checksum: c398665bf2f36bd9c1c5bb2ca3ba8dbf (MD5) / Approved for entry into archive by Guilherme Lourenço Machado(gui.admin@gmail.com) on 2011-07-14T13:38:57Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2008_ClaudioGastaodaCosta.pdf: 1531661 bytes, checksum: c398665bf2f36bd9c1c5bb2ca3ba8dbf (MD5) / Made available in DSpace on 2011-07-14T13:38:57Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2008_ClaudioGastaodaCosta.pdf: 1531661 bytes, checksum: c398665bf2f36bd9c1c5bb2ca3ba8dbf (MD5) / Este trabalho apresenta estudo inovador sobre o uso de destilação solar convencional, para tratamento de resíduos líquidos. São tratados três tipos de resíduos líquidos diferentes provenientes de laboratórios da Universidade de Brasília e coletados pela Comissão para Gestão de Resíduos Químicos da Universidade de Brasília (CGRQ - UnB). Os três resíduos líquidos tratados são: resíduo líquido contendo álcool, resíduo líquido contendo metais e resíduo líquido contendo formol. Em seguida a realização do tratamento de destilação solar, foram realizadas determinações de parâmetros nas amostras dos resíduos líquidos antes e depois de executado o tratamento. Para o resíduo contendo álcool, o tratamento realizado mostrou uma redução na quantidade de sólidos acima de 98%, de TKN superior a 96% e de óleos e graxas acima de 90%. Para o resíduo contendo metais, as reduções das quantidades de cromo, ferro, cobre e zinco foram superior a 99%. Para o resíduo contendo formol, as reduções em termos de condutividade superaram os 97%. Assim, conclui-se que esse é um tratamento eficiente para os resíduos líquidos tratados, principalmente para o resíduo contendo metais. Também fica demonstrado ser um processo viável economicamente e tecnicamente. Quando comparado os custos financeiros com o processo de tratamento de resíduos líquidos por destilação solar e os atuais custos de tratamento e/ou descarte utilizados para os mesmos analisados neste trabalho, é verificado uma redução financeira acima de 97%, mostrando a viabilidade econômica do processo de destilação solar convencional para tratamento de resíduos líquidos. _________________________________________________________________________________ ABSTRACT / This work shows an innovative wastewater treatment with the use of solar still (conventional still or simple still). Three different types of liquid residues were proceeded from laboratories of the University of Brasilia and collected by Commission for Management Chemical Residues (CGRQ - UnB). The three residues are: liquid residue contend alcohol, liquid residue contend metals and liquid residue contend formaldehyde. After treatment of solar distillation there are showed reduction amount: for residue contend alcohol of solids above 98%, TKN over 96%, oils and greases beyond of 90%; for the residue contend metals of chromium, iron and zinc above 99% and for residue contend formaldehyde of conductivity surpassed 97%. This treatment for liquid residues is efficient for solutions with metals. And the process is economically and technical viable. The process of treatment - solar distillation presents a financial reduction above of 97%.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Tecnologia, Departamento de Engenharia Civil e Ambiental, 2010. / Submitted by Washington da Silva Chagas (washington@bce.unb.br) on 2012-02-17T23:34:08Z No. of bitstreams: 1 2010_JaquelineFrancischettiZago.pdf: 3923464 bytes, checksum: 0783049ffcc1ddb8870c3c8e8119cd08 (MD5) / Approved for entry into archive by Marília Freitas(marilia@bce.unb.br) on 2012-02-23T11:23:08Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2010_JaquelineFrancischettiZago.pdf: 3923464 bytes, checksum: 0783049ffcc1ddb8870c3c8e8119cd08 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-02-23T11:23:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2010_JaquelineFrancischettiZago.pdf: 3923464 bytes, checksum: 0783049ffcc1ddb8870c3c8e8119cd08 (MD5) / Este estudo contemplou a execução de técnicas analíticas qualitativas e quantitativas específicas para a caracterização de carvões ativados. Com a identificação das características físico-químicas de nove amostras produzidas no Brasil e uma importada, buscou-se avaliar o comportamento de adsorção para três variantes de saxitoxinas produzidas pela cianobactéria Cylindrospermopsis raciborskii: neo-STX, dc-STX e STX. A identificação das características físicas e químicas dos carvões ativados é de suma importância, uma vez que sua eficiência tende a ser influenciada por essas características, onde a superfície química dos carvões ativados e as condições de operação dos experimentos desempenham papel fundamental na adsorção de microcontaminantes, como por exemplo, as saxitoxinas. As saxitoxinas são substâncias solúveis em água e muitas vezes sua remoção é resistente ao tratamento convencional de abastecimento de água. Por serem substâncias tóxicas que afetam a saúde humana e de animais são alvo de preocupação emergente, uma vez que a incidência de florações de cianobactérias que produzem essa toxina aumentou consideravelmente no Brasil. Ao mesmo tempo em que as variantes das saxitoxinas são pouco estudadas, existe uma carência muito grande de trabalhos científicos que aprofundem os conhecimentos nos diferentes tipos de caracterização dos carvões ativados. A existência da competição pelos sítios ativos dos carvões ativados entre a matéria orgânica naturalmente presente no cultivo da água de estudo e entre as variantes desconhecidas das saxitoxinas foi constatada. A técnica de cromatografia líquida de alta eficiência foi utilizada para a quantificação da concentração das saxitoxinas durante todo o desenvolvimento do trabalho. Por meio do presente estudo, foi possível inferir sobre a aplicação de cada análise, buscando integrar as diferentes técnicas, comparando-as por meio dos resultados obtidos. As técnicas analíticas estudadas compreenderam: teor de cinzas, número de iodo, índice de azul de metileno, análise de Boehm, caracterização textural BET, espectroscopia fotoelétrica de raios-x, difratometria de raios-x, valores de pH e ponto de carga zero, infravermelho com transformada de Fourier, espectroscopia Raman do carbono 13, microscopia eletrônica de varredura e análise química qualitativa. Este trabalho aborda, ainda, discussões sobre o caráter ácido, básico e neutro dos grupos superficiais presentes nos carvões ativados que, de acordo com a literatura, são bastante contraditórios. Para tal, empregou-se a correlação de Pearson (r) e a análise de regressão linear simples (RLS), que são métodos estatísticos de simples interpretações e que surtiram resultados concordantes, embora a quantidade de dados fosse pequena. As isotermas de adsorção para as amostras estudadas não se ajustaram ao modelo de Freundlich. Esse comportamento, nas condições experimentais avaliadas, corroborou com a ocorrência de interações físicas muito fracas entre o adsorvente e o adsorvato, o que poderia ser explicado por um comportamento repulsivo de interações eletrostáticas. Contudo, uma investigação mais detalhada do procedimento analítico utilizado para a obtenção das isotermas se faz necessária. _________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Specific qualitative and quantitative analytical techniques were applied in this study to characterize activated charcoal. The physicochemical characteristics of nine Brazilian samples and one imported sample were identified in order to evaluate the adsorption behavior of three saxitoxins (neo-STX, dc-STX and STX) produced by the cyanobacteria Cylindrospermopsis raciborskii. The identification of the physicochemical characteristics of activated carbon is of paramount importance because its efficiency is influenced by these characteristics. Therefore, the chemical surface of activated carbon and the operating conditions of experiments play a fundamental role in the adsorption of microcontaminants such as saxitoxins. Saxitoxins are water-soluble compounds that are often resistant to removal by conventional water treatment methods. These toxic substances affect human and animal health and have therefore become an object of increasing concern, especially in Brazil, where there has been a significant increase in the growth of cyanobacterial blooms that produce these toxins. Saxitoxin variants have been studied very little so far, and there is also a paucity of scientific studies that add to the body of knowledge about different methods of characterization of activated charcoal. The present study revealed that the organic matter naturally present in the culture of the study water and the unknown saxitoxin variants compete for the active sites of activated charcoal. High-performance liquid chromatography was used throughout the present study to quantify the concentration of saxitoxins. This study allowed for inferences to be made about the application of each analytical method, seeking to integrate the different techniques and comparing them based on their results. The analytical techniques employed here were: total ash content, iodine index, methylene blue index, Boehm’s analysis, textural characterization (BET), X-ray photoelectron spectroscopy, X-ray diffractometry, pH values and point of zero charge, Fourier transform infrared spectroscopy, Raman spectroscopy of Carbon-13, scanning electron microscopy, and qualitative chemical analysis. This paper also discusses the acid, basic and neutral nature of the surface groups of activated charcoal, which, according to the literature, are highly contradictory. To this end, we used the statistical methods of Pearson’s correlation (r) and simple linear regression (SLR), which are simple to interpret and produced compatible results despite the small number of data. The adsorption isotherms for the samples under study did not fit the Freundlich model. Under the experimental conditions employed here, this behavior was corroborated by the occurrence of very weak physical interactions between the adsorbent and adsorbate, possibly due to repulsive electrostatic interactions. However, a more in-depth investigation of the analytical procedure to obtain the isotherms is necessary.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Molecular, 2014. / Submitted by Albânia Cézar de Melo (albania@bce.unb.br) on 2014-05-22T15:13:00Z No. of bitstreams: 1 2014_CaioOliveiraGorgulhoSilva.pdf: 1383360 bytes, checksum: 7977b73e3f596df26a948699c8a4308c (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2014-05-23T13:52:08Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_CaioOliveiraGorgulhoSilva.pdf: 1383360 bytes, checksum: 7977b73e3f596df26a948699c8a4308c (MD5) / Made available in DSpace on 2014-05-23T13:52:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_CaioOliveiraGorgulhoSilva.pdf: 1383360 bytes, checksum: 7977b73e3f596df26a948699c8a4308c (MD5) / O bagaço de cana-de-açúcar é um importante resíduo agroindustrial brasileiro que apresenta grande potencial para ser utilizado como fonte de carbono para produção de holocelulases de interesse industrial por microrganismos. As xilanases, objeto de estudo deste trabalho, são enzimas que apresentam uma série de aplicações biotecnológicas que incluem a produção de etanol de segunda geração, o branqueamento de papel, a produção de sucos e pães e o uso como aditivo em rações animais. O objetivo desta pesquisa foi purificar e caracterizar uma xilanase produzida pelo fungo Emericella nidulans quando cultivado em bagaço de cana, visando o aproveitamento deste resíduo e a avaliação do potencial biotecnológico da enzima. O fungo foi capaz de secretar xilanases a partir do primeiro dia de cultivo sob fermentação submersa utilizando o bagaço. Uma xilanase de 22 kDa foi purificada a partir do extrato bruto obtido no cultivo através de ultrafiltração, precipitação com sulfato de amônio e cromatografias de filtração em gel e troca aniônica. A enzima apresentou alta homologia com endo-β-1,4-xilanase A (XynA) de E. nidulans e desta forma foi chamada. A enzima XynA apresentou maior atividade a 55°C e na faixa de pH 3,0 – 6,5. A enzima se mostrou pouco termoestável, com meiasvidas de 40, 10 e 7 minutos a 28, 50 e 55°C, respectivamente. XynA foi mais ativa sobre a porção solúvel da xilana, com valores de KM e Vmáx 3,39 mg/mL e 0,502 UI/mL, respectivamente. A hidrólise da xilana por XynA gerou xilooligossacarídeos, indicando ação tipo endo. Diferentes compostos fenólicos comumente liberados durante o pré-tratamento de biomassa lignocelulósica causaram efeitos variados sobre XynA. Os ácidos tânico e cinâmico inibiram a enzima, enquanto o ácido 4-hidroxi-benzóico aumentou sua atividade e os ácidos ferúlico, p-cumárico e vanilina não mostraram efeito. O etanol aumentou a atividade, estabilidade e Vmáx da enzima, indicando potencial para aplicação em processos de sacarificação e fermentação simultâneas de biomassa. O ultrafiltrado (uma fração semipurificada de xilanases) foi capaz de hidrolisar polpas de celulose em diferentes etapas do processo Kraft, resultando na liberação de açúcares redutores, cromóforos, pentoses e produtos de hidrólise de xilana sem concomitante liberação de glicose. O extrato bruto se mostrou capaz de degradar bagaço de cana-de-açúcar não-tratado ou sumetido a explosão a vapor, liberando açúcares redutores e produtos de hidrólise de xilana. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / Sugarcane bagasse is a major lignocellulosic agroindustrial residue in Brazil with great potencial for utilization as carbon source for production of industrial holocellulases by microrganisms. Xylanases present several biotechnological applications such as in ethanol production, paper bleaching, juice and bread production and utilization as feed additive. The goal of this reseach was to purify and characterize one xylanase produced by the fungus Emericella nidulans when grown on sugarcane bagasse, aiming the use of this residue and the investigation of biotechnological potencials of the enzyme. E. nidulans secreted xylanases from the first day of growth on liquid media containing bagasse as sole carbon source. One 22 kDa xylanase was purified from crude extract through ultrafiltration, ammonium sulphate precipitation, gelfiltration and anion-exchange chromatographies. The enzyme showed significant homology with endo-β-1,4-xylanase A (XynA) from E. nidulans, and was named that way. XynA was most active at 55°C and pH 3,0 – 6,5. Considering its thermostability, XynA presented half-lives of 40, 10 and 7 minutes at 28, 50 and 55°C, respectively. The enzyme was more active on the soluble portion of xylan, with Km and Vmax values 3,39 mg.mL¯ ¹ and 0,502 UI.mL¯ ¹, respectively. Xylan hydrolysis by XynA produced xylooligossacharides, indicating endo-type action. Phenolic compounds released during pre-treatment of lignocellulosic biomass caused different effects on XynA. Tannic and cinnamic acids inhibited XynA, while 4-hidroxibenzoic acid enhanced its activity and ferulic and p-coumaric acids and vanillin caused no effect. Ethanol increased XynA activity, thermostability and Vmax, suggesting potencial for aplication in simultaneous sacharification and fermentation processes. Ultrafiltrate sample (partialy purified xylanases) was able to hydrolyse celullose pulps obtained from different stages of Kraft process, resulting in release of reducing sugars, chromophores, pentoses and xylans degradation products with apparent no release of glucose. E. nidulans crude extract was able to hydrolyse untreated or steam-explosion pretreated sugarcane bagasses, releasing reducing sugars and xylans degradation products.

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:07:08Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo3008_1.pdf: 2118312 bytes, checksum: b78da92894d4b94e6a02c39c3fdb694b (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2011 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Palythoa caribaeorum é um cnidário colonial, abundante no litoral pernambucano. Durante a maré baixa produz um muco que protege contra a dessecação. Embora seja conhecida a composição básica deste muco, nenhuma proteína até hoje foi isolada e caracterizada. Desta forma, este trabalho se propôs a desenvolver uma metodologia de processamento e purificação que permitisse a obtenção de uma amostra com relevante conteúdo protéico, baixa viscosidade e alta solubilidade, a qual fosse possível a sua aplicação em colunas cromatográficas comerciais, além de testar atividade farmacológica. Para isto, amostras foram coletadas nos meses de Março/09, Janeiro e Maio/10 na praia de Porto de Galinhas-PE. Mar/09 e Jan/10 foram submetidas à homogeneização mecânica enquanto Mai/10 passou por uma liquidificação. Após centrifugação, o sobrenadante de Jan/10 (Jan/10B) passou por uma diluição nas proporções 1/6 e 1/12. Mai/10 foi submetido à diluição 1/3 logo após liquidificação. Jan/10B e Jan/101/12 passaram ainda por tratamento químico com uréia 6M e ácido acético 1%, e éter/etanol e clorofórmio/metanol, respectivamente. Por último, alíquotas de Mar/09B, Jan/10B e Mai/101/3, foram submetidas à precipitação protéica com sulfato de amônio. As frações obtidas em todos os procedimentos foram dialisadas. Em seguida, foram realizadas dosagem protéica, atividade hemaglutinante, eletroforeses, cromatografias, além de inibição das atividades hemaglutinante e hemorrágica. Os resultados mostraram que a metodologia mais eficaz na preparação da amostra foi a liquidificação seguida de diluição 1/3 e precipitação protéica em faixas curtas de concentração de sal. A partir da fração F3-Mai/101/3, obtida por esta metodologia, uma lectina de 34 KDa (PcmL- 1) foi parcialmente purificada, através de uma cromatografia de afinidade em coluna Con A Sepharose 4B, seguida de cromatografia de troca aniônica em coluna Resource Q. Além disso, o muco de P. caribaeorum mostrou ser uma fonte importante de lectinas xilose e lactose-específicas, e possíveis inibidores de proteases

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:49:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2008 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Bromelina é o nome genérico dado ao grupo de enzimas proteolíticas encontrada nos vegetais da família Bromeliaceae, da qual o abacaxi é o mais conhecido e rico nesta protease, que tem grande importância na área de saúde e de alimentos. O objetivo deste trabalho foi determinar as propriedades físico-químicas e purificar a bromelina presente no Ananas comosus L. Merril (abacaxi). A Diálise seguida da precipitação com 80% de (NH 4 ) 2 SO 4 realizado no extrato do abacaxi proporciou uma maior recuperação de atividade e proteína produzindo um fator de purificação cerca de 3 vezes. O CE e o CED80% apresentaram valores de pH ótimos de 8,5 e 7,2, respectivamente. Entretanto a bromelina foi estável em todos os valores de pH testados (5,0-9,0) mostrando assim ser formada por diferentes frações proteolíticas. Em relação à temperatura ótima, o CE e o CED80% apresentaram valor de 50ºC e foram foram estáveis até temperaturas de 60 ºC, sendo totalmente desnaturada a 80ºC após 30 minutos. Os valores de K M e V max aparentes, calculados segundo modelo de Lineweaver-Burk, foram: para azocaseína - K M = 2,48 mg/ml e V max = 35,29 U/mL e para azoalbumina - K M = 2,94 mg/ml e V max = 11,11 U/mL, mostrando assim praticamente a mesma afinidade por ambos os substratos. Entretanto a eficiência catalítica foi maior para azocaseína que para azoalbumina (31,62 e 8,39 min -1 , respectivamente). Através da eletroforese em gel SDS-PAGE, o extrato bruto apresentou 4 bandas de proteínas com massas moleculares de 40, 29 e 27 kDa e uma inferior a 14 kDa. Através de zimograma as bandas de 29 e a abaixo de 14kDa apresentaram atividade caseinolítica. A Cromatografia de gel-filtração apresentou 2 picos, entretanto apenas o pico 2 com atividade proteolítica especifica de 116 U/mg de proteína e purificação de 25,1 vezes, o qual apresentou 2 bandas de 29 e 26 kDa em gel SDS-PAGE. Pico 2 este quando aplicado na cromatografia de troca aniônica, rendendo um maior pico (P1) com atividade proteolítica o qual apresentou banda única em SDS- PAGE de 29 kDa com atividade caseinolítica comprovada em zimograma

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:53:49Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo4869_1.pdf: 2399928 bytes, checksum: 366f462c64988d30658b5961f9457797 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2006 / Lectinas são proteínas ou glicoproteínas de origem não-imune que se ligam bioespecificamente a carboidratos, com capacidade de aglutinar células de forma reversível. Folhas de plantas do gênero Bauhinia têm ampla utilização na medicina popular com propriedades ditas hipoglicemiantes e diuréticas. Diversos extratos de folhas de Bauhinia membranacea Benth demonstraram a presença de lectina, indicada pela atividade hemaglutinante (AH). O objetivo deste trabalho foi a purificação da lectina de folhas de B. membranacea (BmeLL) e sua imobilização em Sepharose CL-4B para isolar glicoproteínas. Um extrato escolhido (10 %, p/v) foi preparado em tampão citrato fosfato 10 mM, pH 6,5, contendo cloreto de sódio 0,15 M (tampão selecionado), por 16 h, a 4 oC. O extrato foi tratado com sulfato de amônio e a fração 0-80 % (F0-80%) foi selecionada para realização dos experimentos de purificação devido à maior AH específica (AHE). Cromatografia em coluna de gel de guar foi feita para purificar a lectina; a matriz foi equilibrada com cloreto de sódio 0,15 M. Eluição da proteína foi feita com hidróxido de sódio 0,02 M, pH 11. SDS-PAGE (8,5 %, p/v) revelou a pureza de BmeLL. A lectina aglutinou a títulos altos eritrócitos de coelho e humanos e não foi estimulada em presença de íons (Ca++, Mg++). BmeLL apresentou melhor AHE com tampão citrato fosfato 10 mM, pH 6.0, contendo cloreto de sódio 0,15 M. Teste de temperatura revelou que BmeLL é uma lectina termoestável. O perfil cromatográfico em gel filtração numa coluna de Sephacryl S- 300 mostrou um pico protéico principal. Caseína, fetuína, asocaseína, asialofetuína e tiroglobulina aboliram a atividade da lectina. BmeLL imobilizada em Sepharose CL-4B foi eficiente para ligar avidina e tiroglobulina como também, glicoproteínas da clara do ovo e tireóide de porco. Preparações contendo BmeLL serão utilizadas em ensaios biológicos que permitam avaliar seu papel como agente hipoglicemiante; BmeLL purificada será utilizada para caracterizar superfícies celulares

Submitted by Fernanda Rodrigues de Lima (fernanda.rlima@ufpe.br) on 2018-07-04T22:28:06Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE Carlos Eduardo Sales da Silva.pdf: 1542819 bytes, checksum: 42bf6ad5f4c11b60a81acf59340103b4 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-07-04T22:28:06Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE Carlos Eduardo Sales da Silva.pdf: 1542819 bytes, checksum: 42bf6ad5f4c11b60a81acf59340103b4 (MD5) Previous issue date: 2015-02-26 / CNPQ / Lectinas são proteínas ou glicoproteínas de origem não imunológica, que aglutinam células e precipitam carboidratos e seus derivados sem alterar suas estruturas covalentes. Neste trabalho foram extraídas 2 lectinas de Libidibia ferrea, planta com ampla distribuição no Brasil e conhecida vulgarmente como pau-ferro, uma lectina foi extraída da vargem de Libidibia ferrea var. ferrea (LifeFPL) e outra da entrecasca da Libidibia ferrea var. leiostachya Benth (LifeLBL), O processo de obtenção das lectinas puras incluem: a extração das farinhas (vagens ou entrecascas) em NaCl 0,15 M, fracionamento salino com sulfato de amônio, e cromatografia de afinidade em quitina. Para a LifeFPL, que já foi previamente purificada e caracterizada, foi determinada a presença de uma atividade coagulante de partículas em água. Quando incubada com o Caolin, LifeFPL apresentou atividade semelhante ao controle positivo, sulfato de alumínio, apresentando uma melhora significativa desta atividade quando o pH do meio encontra-se básico e diminuindo sua atividade coagulante na presença de íons. LifeLBL (lectina da entrecasca de Libidibia ferrea var. leiostachya) foi caracterizada parcialmente através de ensaios da inibição da atividade hemaglutinante, eletroforese (PAGE-SDS e 2D) e estudos de fluorescência, além disso, realizou-se o perfil fitoquímico de preparações da planta e determinou-se a atividade antioxidante dessas preparações e a afinidade a ácidos húmicos (AHu). Houve uma diminuição significativa da AH de LifeLBL na presença de ácido húmico. A LifeLBL continuou ativa após aquecimento à 100 ºC e apresentou duas bandas por SDS-PAGE e cromatografia em gel filtração em Superdex 75-30 revelou dois picos proteicos com 19 e 15 kDa. Na eletroforese 2D a massa molecular estimada foi de 20 e 15 kDa e o pI de 4,53 e 5,14. A AH de LifeLBL foi inibida parcialmente por N-acetil-Dglicosamina e totalmente por albumina bovina serica. Em relação aos AHu, a LifeLBL teve sua afinidade por ácido húmico aumentada quando alcalinizado o meio e reduzida na presença de íons metálicos, provavelmente por modificação estrutural do AHu. Os testes fitoquímicos revelaram que as amostras lectínicas da entrecasca de L. ferrea var. leiostachya Benth apresentaram: proantocianidinas condensadas, taninos hidrossolúveis e flavanóide, sendo que a amostra purificada por cromatografia de afinidade em quitina foi isenta de componentes do metabolismo secundário. Em conclusão, uma lectina, termoestável (LifeLBL) foi parcialmente inibida por N-acetil-D-glicosamina e ácido húmico, sendo obtida da entrecasca de L. ferrea por cromatografia de afinidade em quitina. LifeLPL foi capaz de coagular partículas de caolin em suspensão em água. Os resultados obtidos neste trabalho reforçam a importância de se caracterizar proteínas e ensaiar suas propriedades biológicas. / Lectins are proteins or glycoproteins of non-immunological origin, which bind cells and precipitate carbohydrates and their derivatives without changing their covalent structures. In this work two lectins were extracted from Libidibia ferrea, a plant widely distributed in Brazil and commonly known as ironwood, a lectin was extracted from the Libidibia ferrea var. Ferrea (LifeFPL) and another of the bark of Libidibia ferrea var. Leiostachya Benth (LifeLBL), The process of obtaining pure lectins includes: extraction of flours (pods or skim) in 0.15 M NaCl, saline fractionation with ammonium sulfate, and chitin affinity chromatography. For LifeFPL, which was previously purified and characterized, the presence of a coagulant activity of particles in water was determined. When incubated with Caolin, LifeFPL presented similar activity to the positive control, aluminum sulfate, showing a significant improvement of this activity when the pH of the medium is basic and decreasing its coagulant activity in the presence of ions. LifeLBL (Libidibia ferrea var. Leiostachya) lectern was partially characterized by inhibition of hemagglutinating activity, electrophoresis (PAGE-SDS and 2D) and fluorescence studies, and the phytochemical profile of plant preparations And the antioxidant activity of these preparations and the affinity to humic acids (HuA) were determined. There was a significant decrease in LifeLBL AH in the presence of humic acid. LifeLBL continued active after heating to 100 ° C and presented two bands by SDS-PAGE and gel filtration chromatography on Superdex 75-30 revealed two 19 and 15 kDa protein peaks. In 2D electrophoresis the estimated molecular weight was 20 and 15 kDa and the pI was 4.53 and 5.14. LifeLBL AH was partially inhibited by N-acetyl-D-glucosamine and entirely by serine bovine albumin. In relation to HuA, LifeLBL had its affinity for increased humic acid when alkalized the medium and reduced in the presence of metallic ions, probably due to structural modification of HuA. The phytochemical tests revealed that the lectin samples from L. caste var. Leiostachya Benth presented: condensed proanthocyanidins, water soluble tannins and flavonoids, and the sample purified by chitin affinity chromatography was free of components of secondary metabolism. In conclusion, a thermostable lectin (LifeLBL) was partially inhibited by N-acetyl-Dglucosamine and humic acid, and was obtained from L. ferrea binders by chitin affinity chromatography. LifeLPL was able to coagulate kaolin particles in suspension in water. The results obtained in this work reinforce the importance of characterizing proteins and assaying their biological properties.

Orientadores: Francisco Maugeri Filho, Renato de Azevedo Moreira / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-07-21T19:53:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Oliveira_Gilcenara_M.pdf: 1974223 bytes, checksum: 647b7e3918cb207ca7de16931074a977 (MD5) Previous issue date: 1996 / Resumo: A celulose é um material amplamente encontrado na natureza. A hidrólise deste material é resultado de um complexo enzimático que age em sinergismo, denominado celulase. Neste complexo a enzima ß-glicosidase (EC 3.2.1.21) é responsável pelo passo final da hidrólise para formação do produto glicose. Esta enzima tem várias aplicações nos diversos setores industriais, atuando principalmente de forma suplementar, ou seja, é acrescida ao sistema enzimático assim aumentando a cinética da hidrólise. Na indústria alimentícia pode-se destacar a extração e clarificação de sucos, a hidrólise de vegetais para preparação de pures, para alimentação infantil ou geriátrica. Este trabalho se propõe a determinar os parâmetros envolvidos no processo de separação e purificação da ß-glicosidase, a partir de um complexo enzimático, Celulase Tr (Cellumax), para então aplicá-los ao sistema CARE (Continuous Affinity Recycle Extraction). No processo de purificação foram utilizadas técnicas cromatográficas. Iniciou-se com cromatografia de filtração em gel, seguida de cromatografia de troca iônica. Obtiveram-se melhores resultados com o uso de CM-Sephadex C-50. As frações correspondentes aos picos obtidos nesta cromatografia foram concentradas e aplicadas em coluna de Superose 12 R acoplada ao sistema de FPLC (Faster Performance Liquid Chromatography) a fim de confirmar a pureza da enzima ß-glicosidase. O material obtido foi submetido a análise de eletroforese em gel de poliacrilamida/dodecil sulfeto de Sódio (PAGE/SDS), garantindo desta forma que a enzima estava realmente pura. Os resultados obtidos mostram que é possível a aplicação do processo CARE para separar e purificar a ß-glicosidase. Como continuidade a este trabalho, sugere-se a determinação das constantes cinéticas envolvidas na adsorção-dessorção da resina usada no sistema CARE / Abstract: Cellulose is a very common natural substance. The hydrolysis of this material is caused by an enzyme complex, acting synergistically, known as cellulase. In such a complex, the enzyme ß-glucosidase (EC 3.2.1.21) is responsible for the final step of hydrolysis to form glucose. This enzyme has numerous industrial applications. Particularly important among applications in the food industry we may include the lightening of juices and the hydrolysis of vegetables for production of purees, for infants and elderly. This work was carried out to try to find the parameters involved in the separation and purification of , ß-glucosidase, from an enzymatic complex called Cellulase Tr (Cellumax), and then, to apply them in the CARE (Continuous Affinity Recycle Extraction) system. The purification process began with gel filtration chromatography and followed by ion-exchange chromatography. The best results were obtained using CM-Sephadex C-50. The peak fractions obtained with ion-exchange cromatography were concentrated and applied to a Superose 12 R column in a FPLC system to confirm the purity of the , Abstract: Cellulose is a very common natural substance. The hydrolysis of this material is caused by an enzyme complex, acting synergistically, known as cellulase. In such a complex, the enzyme Abstract: Cellulose is a very common natural substance. The hydrolysis of this material is caused by an enzyme complex, acting synergistically, known as cellulase. In such a complex, the enzyme ß-glucosidase (EC 3.2.1.21) is responsible for the final step of hydrolysis to form glucose. This enzyme has numerous industrial applications. Particularly important among applications in the food industry we may include the lightening of juices and the hydrolysis of vegetables for production of purees, for infants and elderly. This work was carried out to try to find the parameters involved in the separation and purification of , ß-glucosidase, from an enzymatic complex called Cellulase Tr (Cellumax), and then, to apply them in the CARE (Continuous Affinity Recycle Extraction) system. The purification process began with gel filtration chromatography and followed by ion-exchange chromatography. The best results were obtained using CM-Sephadex C-50. The peak fractions obtained with ion-exchange cromatography were concentrated and applied to a Superose 12 R column in a FPLC system to confirm the purity of the , ß-glucosidase. For the material obtained with Superose, a PAGE/SDS analysis was undertaken to garantee the purity of the enzime. The results obtained make possible the application of CARE process to the separation and purification of ß-glucosidase. In addition, from the results it is possible to calculate the kinetic constants involved in the resin adsorption-desorption used in the CARE system. ß-glucosidase (EC 3.2.1.21) is responsible for the final step of hydrolysis to form glucose. This enzyme has numerous industrial applications. Particularly important among applications in the food industry we may include the lightening of juices and the hydrolysis of vegetables for production of purees, for infants and elderly. This work was carried out to try to find the parameters involved in the separation and purification of , ß-glucosidase, from an enzymatic complex called Cellulase Tr (Cellumax), and then, to apply them in the CARE (Continuous Affinity Recycle Extraction) system. The purification process began with gel filtration chromatography and followed by ion-exchange chromatography. The best results were obtained using CM-Sephadex C-50. The peak fractions obtained with ion-exchange cromatography were concentrated and applied to a Superose 12 R column in a FPLC system to confirm the purity of the , ß-glucosidase. For the material obtained with Superose, a PAGE/SDS analysis was undertaken to garantee the purity of the enzime. The results obtained make possible the application of CARE process to the separation and purification of ?-glucosidase. In addition, from the results it is possible to calculate the kinetic constants involved in the resin adsorption-desorption used in the CARE system.-glucosidase. For the material obtained with Superose, a PAGE/SDS analysis was undertaken to garantee the purity of the enzime. The results obtained make possible the application of CARE process to the separation and purification of ß-glucosidase. In addition, from the results it is possible to calculate the kinetic constants involved in the resin adsorption-desorption used in the CARE system. / Mestrado / Mestre em Engenharia de Alimentos

Orientador: Francisco Maugeri Filho / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-07-23T11:18:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Burkert_CarlosAndreVeiga_M.pdf: 3149742 bytes, checksum: 25383c6fba6e203a2114052975f0f713 (MD5) Previous issue date: 1998 / Resumo: A cefalosporina C é um importante antibiótico ß - lactâmico, obtida por cultivo de fungos do gênero Cephalosporium, constituindo a matéria-prima para a síntese de inúmeros antibióticos de largo espectro de ação microbiana, sendo que sua recuperação e purificação constitui a etapa mais onerosa do processo. Neste trabalho realizou-se um estudo experimental a respeito da separação de cefalosporina C em coluna de leito fixo contendo Amberlite XAD-2 como adsorvente, verificando o comportamento das curvas de ruptura em diferentes condições geométricas e operacionais (relação comprimento do leito - diâmetro da coluna L/?, relação diâmetro da partícula - diâmetro da coluna dp/?, velocidade superficial v), bem como o efeito destas variáveis sobre a eficiência de utilização do leito da coluna, quantidade de cefalosporina C adsorvida e produtividade, através da determinação do fator de sensibilidade. Foi proposto um modelo matemático para a adsorção de cefalosporina C em coluna de leito fixo que considerou a resistência externa e. interna à transferência de massa, assim como a dispersão axial. Este modelo foi obtido a partir de balanços de massa e equações cinéticas de adsorção (isoterma de Langmuir), com resolução numérica através do método de Crank¬Nicolson para as equações diferenciais parciais, utilizando matrizes tridiagonais, e do método de Runge-Kutta de 4ª ordem para as equações diferenciais ordinárias. Para o ajuste dos parâmetros do modelo matemático aplicou-se o método simplex geométrico flexível de NELDER & MEAD (I965), conhecido como método dos poliedros flexíveis ou simplex modificado. Os resultados experimentais mostraram que o aumento de L/O e a redução de dp/? e v melhoraram a eficiência de utilização do ,leito da coluna e a quantidade de cefalosporina C adsorvida no tempo de ruptura. A produtividade foi incrementada com o aumento de L/O e v, e com a redução de dp/?. Além disso, foi observado que o processo de adsorção é limitado pela transferência de massa interna, sendo que a difusão intraparticular é a etapa limitante do processo. Finalmente, o ajuste dos parâmetros do modelo matemático mostrou que as estimativas iniciais adotadas para as constantes cinéticas e de equilíbrio da isoterma de Langmuir foram satisfatórias e, que a curva de ruptura foi muito afetada pela difusividade efetiva e porosidade do leito. / Abstract: Cephalosporin C is a ß - lactam antibiotic, produced by Cephalosporium in submerged culture, constituting the raw material of several synthetic antibiotics. Its purification is the most expensive step of the process. In this work, an experimental investigation on cephalosporin C separation in fixed bed column with Amberlite XAD-2, describing the behavior of breakthrough curves at different conditions (bed depth - column diameter ratio L/e, particle size - column diameter ratio dp/? , superficial velocity v), was carryed out. The effect of these variables in the bed utilisation efficiency, adsorbed cephalosporin C and productivity was analyzed using the sensitivity factor. A mathematical model for the cephalosporin C adsorption in fixed bed column was suggested, considering internal and external mass transfer resistances and axial dispersion. This model was obtained from a mass balance and kinetic equations of adsorption (Langmuir isotherm). The numerical resolution was obtained using Crank-Nicolson method for the partial differential equations and 4th order Runge-Kutta method for the ordinary differential equations. The model parameters fitting was performed using simplex method (NELDER & MEAD, 1969). The experimental results showed that an increase in L/ ? and a decrease in d/e and v lead to an improve in the bed utilisation efficiency and in adsorbed cephalosporin C at the time to breakthrough. Productivity was increased with an increase in L/ ? and v, and with a decrease dp/?. Moreover, it was observed that adsorption process is limited by internal mass transfer. Intraparticle diffusion is the process critical step. The fitted parameters showed that the initial estimates for the kinetics and equilibrium constants according to a Langmuir isotherm were satisfactory. Finally, the effective diffusivity and bed porosity affected considerably the breakthrough curves. / Mestrado / Mestre em Engenharia de Alimentos