Submitted by Fabio Sobreira Campos da Costa (fabio.sobreira@ufpe.br) on 2016-10-21T12:20:22Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Tese_Adriene Siqueira de Melo_Medicina Tropical_2016_Publicação Digital.pdf: 2979717 bytes, checksum: 57f59f57f32268ca22f79a21050c7978 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-10-21T12:20:22Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Tese_Adriene Siqueira de Melo_Medicina Tropical_2016_Publicação Digital.pdf: 2979717 bytes, checksum: 57f59f57f32268ca22f79a21050c7978 (MD5) Previous issue date: 2016-02 / CAPES / Por contribuírem nos processos de migração diferencial de células imunes aos tecidos, quimiocinas e seus receptores estão potencialmente implicados na manutenção do infiltrado inflamatório observado na miocardiopatia chagásica crônica. Assim, avaliamos em pacientes com doença de Chagas crônica a associação da produção de quimiocinas e da expressão fenotípica para receptores de quimiocinas por células T CD4+, CD8+ e CD4+CD8+, com a presença e gravidade da manifestação cardíaca. Cinquenta e seis pacientes (Forma indeterminada, IND=20; Forma cardíaca leve, CARD1=20 e Forma cardíaca severa, CARD2=16), foram selecionados no Ambulatório de Doença de Chagas do Pronto-Socorro Cardiológico de Pernambuco/Universidade de Pernambuco. O sangue foi cultivado (1dia/37ºC/5%CO2) na presença de Antígeno Solúvel de Epimastigota (25μg/mL), de Fitohemaglutinina (5μg/mL) e mantendo-se um tubo sem estímulo. O sobrenadante e as células sanguíneas foram analisados por citometria de fluxo e as diferenças consideradas quando p<0,05. O grupo CARD2 apresentou maiores níveis de células T CD8+CCR1+, CD8+CCR3+, CD4+CD8+CCR1+, CD4+CD8+CCR3+, de Intensidade média de fluorescência (MIF) para CCR1 e CCR3, e de produção de CCL5 e CXCL8 que o grupo IND, além de maior produção para CXCL10 que o CARD1. O grupo CARD1 apresentou maiores níveis para células T CD4+CXCR5+, CD4+CCR4+, de MIF para CXCR5 e de produção de CXCL8 que os pacientes IND. É possível que as células e quimiocinas diferencialmente observadas nos indivíduos com a manifestação cardíaca estejam atuando por mecanismos de citotoxidade, oriundos tanto da resposta imune específica ao parasita quanto de possíveis processos autoimunes, para o estabelecimento dos danos tissulares e sintomatologia clínica nestes pacientes. / Contributing to differential migration of immune cells to tissues, chemokines and their receptors are potentially involved in the maintenance of inflammatory infiltrate observed in chronic Chagas' cardiomyopathy. We evaluated in chronic Chagas' disease patients the association of chemokine production and phenotypic expression of chemokine receptors by CD4+, CD8+ and CD4+ CD8+ T cells with the presence and severity of heart involvement. Fifty-six patients (indeterminate form, IND = 20; mild heart shape, CARD1 = 20; and severe heart shape, CARD2 = 16) were selected at Ambulatório de Doença de Chagas, Pronto-Socorro Cardiológico de Pernambuco/Universidade de Pernambuco.The blood was cultured (1day / 37°C/5% CO2) in the presence of epimastigote antigen (25 μg / ml), Phytohaemagglutinin (5μg / ml) and an unstimulated culture was also performed. The supernatant and the blood cells were analyzed by flow cytometry and the differences were considered when p <0.05. The CARD2 group had higher levels of CD8+CCR1, CD8+CCR3+, CD4+CD8+CCR1+ and CD4+CD8+CCR3+ T cells; higher mean intensity of fluorescence (MIF) to CCR1 and CCR3, and higher production of CCL5 and CXCL8 than IND. Furthermore, CARD2 had increased production of CXCL10 than CARD1. The CARD1 group showed higher levels of CD4+CXCR5+ and CD4+CCR4+ T cells, higher MIF for CXCR5 and higher production to CXCL8 than IND. It is possible that cells and chemokines found in such individuals presenting cardiac involvement, are contributing to cytotoxicity mechanisms raised by the specific immune response to the parasite or the possible autoimmunity, in establishing of cardiac tissue injuries with clinical manifestation.

Resumo não disponível.

O desenvolvimento da doença periodontal (DP) é influenciado pela resposta imunológica do hospedeiro frente ao desafio bacteriano. Apesar da função protetora de tal resposta frente à infecção, a mesma leva à destruição dos tecidos periodontais. Neste estudo, analisamos o papel de MIP-1 na imunomodulação da DP experimental em camundongos. Camundongos C57Bl/6 (WT) infectados com A. actinomycetemcomitans desenvolveram uma intensa reação inflamatória e severa reabsorção óssea alveolar, associada a uma alta expressão de MIP-1 e uma intensa migração de células CCR5+ e CCR1+ para os tecidos periodontais. Além disso, verificamos que uma intensa expressão de citocinas inflamatórias (TNF-) e do tipo Th1 (IFN-), RANKL e MMPs estava associada à progressão da doença. Entretanto, camundongos geneticamente modificados para não expressar MIP-1 (MIP-1KO), quando infectados com A. actinomycetemcomitans, apresentaram um padrão de resposta muito semelhante aos animais WT. De fato, a ausência de MIP-1 não interferiu na migração de células inflamatórias para os tecidos periodontais e na reabsorção óssea alveolar nos camundongos infectados. Semelhantemente, a expressão de citocinas (TNF-, IFN- e IL-10), dos fatores osteoclastogênicos (RANKL e OPG) e das MMPs e seus inibidores (MMP-1, MMP-2, MMP-3, TIMP-1 e TIMP-3) foram similares entre os camundogos das linhagens WT e MIP-1KO. Além disso, a ausência de MIP-1 não interferiu no controle da infecção por A. actinomycetemcomitans como demonstrado pela similaridade na quantidade de carga bacteriana presente nos tecidos e nos níveis de MPO e iNOS. Os resultados obtidos podem ser explicados pela relativa redundância no sistema quimiocinas/receptores de quimiocinas, onde mais de uma quimiocina pode ligar-se ao mesmo receptor. De fato quimiocinas como MIP-1 e RANTES, que utilizam os mesmos receptores de MIP-1 (CCR5 e CCR1), apresentaram-se intensamente expressas nos tecidos periodontais dos camundongos infectados com A. actinomycetemcomitans, independentemente da ausência de MIP-1. De fato, camundongos tratados com Met-RANTES, um antagonista específico dos CCR5 e CCR1, resultou em uma redução significativa no influxo de células inflamatórias e perda óssea alveolar quando comparados com os camundongos não tratados. Nossos resultados demonstraram que a ausência de MIP-1 não afeta o desenvolvimento da doença periodontal experimental em camundongos, provavelmente pela presença de quimiocinas homólogas que suprem sua ausência. / Periodontal disease (PD) development is highly influenced by the host immune response to the bacterial challenge. Despite the protective role of this response against infectious agents it leads to periodontal tissues destruction. In this study, we analyzed the role of chemokine MIP-1 on the immunomodulation of experimental PD in mice. C57Bl/6 (WT) mice infected with A. actinomycetemcomitans developed an intense inflammatory reaction and severe alveolar bone resorption, associated with a high expression of MIP-1 and the migration of CCR5+ and CCR1+ cells to the periodontal tissues. In addition, an intense expression of Th1 (IFN-) and inflammatory (TNF-) cytokines, RANKL and MMPs are associated with the disease progression. However, mice genetically deficient of MIP-1 (MIP-1KO), when infected with A. actinomycetemcomitans, developed a very similar response pattern to that observed for WT strain. Indeed, the absence of MIP-1 does not interfere in inflammatory cells migration to periodontal tissues and alveolar bone resorption in response to A. actinomycetemcomitans infection. Similarly, the expression of cytokines (TNF-, IFN- and IL-10), osteoclastogenic factors (RANKL and OPG) and MMPs and its inhibitors (MMP-1, MMP-2, MMP-3, TIMP-1 and TIMP-3) was similar between WT and MIP-1KO strains. Furthermore, the lack of MIP-1 does not interfere in the control of A. actinomycetemcomitans infection as demonstrated by the similar bacterial load, and similar levels of the antimicrobial MPO and iNOS. Such results can be explained by the relative redundancy of chemokine system, where more than one chemokine can bind to the same receptor. Indeed, chemokines, such as MIP-1 and RANTES, which use the same receptors used by MIP-1 (CCR1 and CCR5), are intensely expressed in periodontal tissues of mice infected with A. actinomycetemcomitans, regardless of the absence of MIP-1. In accordance, the treatment of mice with Met-RANTES, a specific antagonist of the receptors CCR5 and CCR1, resulted in a significant reduction in the influx of inflammatory cells and alveolar bone loss when compared with untreated mice. Our results demonstrate that the absence of MIP-1 does not affect the development of experimental periodontitis in mice, probably due to the presence of homologous chemokines that overcome the absence of this chemokine.

Fibroblastos são as células mais numerosas encontradas nos tecidos orais como gengiva, ligamento periodontal e polpa dental. Além de exercerem função estrutural, estas células também desempenham papel importante na resposta imune destes tecidos através do reconhecimento de antígenos e produção de mediadores inflamatórios e citocinas. Evidências apontam ainda para o fato de que fibroblastos não constituem um grupo único de células. Sendo assim, os objetivos deste estudo foram: (I) avaliar a produção diferencial de fibroblastos de gengiva, ligamento periodontal e polpa dental de dentes permanentes e decíduos quanto à produção das quimiocinas CCL3 e CXCL12; (II) avaliar a produção de pró-colágeno I pelas células de polpa e (III) avaliar a expressão diferencial dos fibroblastos quanto a microRNAs. Dentes recentemente extraídos (terceiros molares hígidos) e fragmentos de gengivas saudáveis de três pacientes adultos foram obtidos no Laboratório de Farmacologia e Fisiologia Clínica da Faculdade de Odontologia de Bauru. Caninos decíduos de dois pacientes com indicação para extração por motivos ortodônticos foram obtidos na Clínica de Odontopediatria da mesma unidade. Culturas primárias de fibroblastos de gengiva (n=3), ligamento periodontal (n=3) e polpa de dente permanente (n=3) e polpa dental de dente decíduo (n=2) foram estabelecidas a partir de tecidos humanos por meio de técnica de explant. Após a quarta passagem, a produção de CCL3 e de CXCL12 foi avaliada após estímulo com concentrações crescentes (0 10 µg/mL) de ácido lipoteicóico de Enterococcus faecalis (EfLTA), lipopolissacarídeo de Porphyromonas gingivalis (PgLPS) ou LPS de Escherichia coli (EcLPS) por ELISA após 1, 6 e 24 h. O RNAm para as quimiocinas no grupo estimulado com EcLPS por 24 h foi avaliado por transcrição reversa seguida de reação em cadeia da polimerase quantitativa. A produção de pró-colágeno I por células de polpa estimuladas com EfLTA e PgLPS foi avaliada por imunofluorescência. O perfil de expressão de microRNAs foi investigado por ensaio de microarranjo. A produção de CCL3 foi aumentada (p< 0,05) pelos antígenos empregados, porém de maneira mais evidente para EcLPS em células de gengiva. A quimiocina CXCL12 foi detectada em níveis basais em todos os grupos de células, porém em maiores quantidades em fibroblastos de gengiva seguidos pelos de ligamento periodontal. A adição dos antígenos diminuiu a produção de CXCL12 de maneira distinta entre células e entre antígenos (p< 0,05). Fibroblastos de polpa decídua não apresentaram qualquer alteração na produção desta quimiocina pelos antígenos (p> 0,05). No período experimental de 24 h, a expressão do RNAm para CXCL12 não foi alterada enquanto a de CCL3 não foi detectada. A produção de pró-colágeno I se mostrou aumentada (p< 0,05) na presença do desafio antigênico em células de polpa com exceção para fibroblastos de polpa permanente que apresentaram diminuição na produção desta proteína quando estimulados com EfLTA. Em condições basais, fibroblastos do mesmo doador apresentaram perfil distinto de expressão de microRNAs envolvidos com a produção das proteínas-alvo deste estudo. A expressão de imunomiRs por EcLPS também se mostrou modificada de maneira distinta entre os fibroblastos, em especial os de ligamento periodontal. Com base nestes resultados, pode-se concluir que fibroblastos de diferentes tecidos orais apresentam comportamento diferencial frente a antígenos bacterianos comumente relacionados a patologias que afetam a cavidade oral. / Fibroblasts are the dominant cells within oral tissues such as gingiva, periodontal ligament and dental pulp. Besides the architectural maintenance of the connective tissues, fibroblasts are also involved in connective tissue immune response through antigen recognition and production of inflammatory mediators and cytokines. Recent studies also demonstrated that fibroblasts do not constitute a unique group of cells. Taken this togeter, the objectives of the present study were: (I) to evaluate the production of the chemokines CCL3 and CXCL12 by human gingival, periodontal ligament as well as permanent and deciduous dental pulp fibroblasts; (II) to evaluate the production of procollagen I by dental pulp fibroblasts and (III) to evaluate the differential pattern of expression of microRNAs by the oral fibroblasts. Recently extracted teeth (non-carious third molars) and fragments of healthy gingiva from three adults were obtained at the Laboratory for Clinical Pharmacology and Physiology at Dental School of Bauru. Deciduous canines from two patients with orthodontic indication for extraction were obtained at Pediatrics Clinics of Dental School of Bauru. Primary cultures of fibroblasts from gingiva (n=3), periodontal ligament (n=3) as well as permanent pulp (n=3) and deciduous pulp (n=2) were established through an explant technique. After the fourth passage, fibroblasts were challenged with increasing concentrations (0 10 µg/mL) of Enterococcus faecalis lipoteichoic acid (EfLTA), Porphyromonas gingivalis lipopolysaccharide (PgLPS) or Escherichia coli LPS (EcLPS) for 1, 6 and 24 h. The chemokines were assessed through ELISA while the mRNA for CCL3 and CXCL12 (EcLPS at 24 h) were assessed through reverse transcription followed by quantitative polymerase chain reaction. The expression of microRNAs was screened through a microarray assay. The production of CCL3 on cell supernatants was detected in all cellular groups, with higher amounts at gingival fibroblasts. EcLPS induced more important chemokine differences compared to the other antigens. CXCL12 basal levels were higher for gingival fibroblasts followed by periodontal ligament ones, but also detected in dental pulp fibroblasts. The production of this chemokine was decreased by stimulation in a different fashion for each antigen and cell type. Deciduous pulp fibroblasts did not display any differences in CXCL12 synthesis even in the presence of the microbial challenge. No differences were detected at mRNA level for CXCL12, while no expression for CCL3 could be detected at 24 h. Increased production of procollagen type I was observed for dental pulp cells in general, with the only exception for permanent pulp cells which displayed decreased production of the protein with EfLTA. Microarray analysis showed differential expression pattern of microRNAs comparing unstimulated cells from the same donnor. EcLPS was able to alter immunomiRs expression in some of the cellular groups, in particular periodontal ligament fibroblasts. In conclusion, our results showed that fibroblasts from distinct oral tissues display differential behavior against bacterial antigens commonly related to the diseases that affect the oral cavity.

A nefropatia diabética é uma doença crônica caracterizada por falência renal, que torna necessária a hemodiálise. A diálise peritoneal é uma alternativa para a hemodiálise, porém causa peritonite e morte, principalmente devido à infecção com Staphylococcus aureus, especialmente em pacientes imunodeprimidos, como pacientes diabéticos. Nossa hipótese é que a insulina possa modular a peritonite causada por S. aureus. Para tanto, investigamos sua intervenção, após a indução de diabetes mellitus, na infecção peritoneal por cepas diferentes de S. aureus, analisando os mecanismos moleculares (produção/liberação de citocinas, expressão de moléculas de adesão) e a atividade microbicida dos macrófagos peritoneais envolvidos. Ratos Wistar, machos, diabéticos (aloxana, 42 mg/kg, i.v., 10 dias) e respectivos controles (salina, i.v.) foram submetidos à injeção intraperitoneal de uma suspensão de S. aureus (5x109 CFU/mL) ou volume equivalente de PBS estéril. Os animais foram submetidos a dois tratamentos com insulina NPH: 1) dose única (1UI e 4UI respectivamente, controle e diabético), administrada por via subcutânea; ou, 2) com 4 doses sendo a primeira administrada 2 horas antes da infecção, seguida de metade desta dose às 17 horas e no mesmo horário pelos próximos 2 dias (dose inicial 4UI e 1UI, grupo diabético e grupo controle, respectivamente), passadas 16 horas da última dose de insulina, a glicemia foi determinada e, em seguida, foi realizada eutanásia e coleta de amostras. Avaliamos: a) número de células no lavado peritoneal (LPe), leucograma e glicemia (monitor de glicose); b) níveis séricos de corticosterona e insulina (ELISA); c) concentrações de citocinas (IL-1&#946;, TNF-&#945;, IL-6, IFN-&#947;, IL-4, IL-10, IL-12) e quimiocinas (CINC-1, CINC-2, CINC-3) no sobrenadante do LPe (ELISA); d) expressão de moléculas de adesão (P-selectina, PECAM-1, ICAM-1) no endotélio vascular (imunoistoquímica); e) atividade microbicida. Após a infecção com a cepa ATCC 25923, comparados aos não infectados, ratos diabéticos apresentaram aumento no número de leucócitos (350%) e nas concentrações de CINC-1 (1900%), IL-1&#946; (1300%), IFN-&#947; (280%), IL-4 (800%). O tratamento destes animais com dose única de insulina diminuiu as concentrações de CINC-1 (17%) e IFN-&#947; (30%) e o leucócitos (55%); e aumentou a concentração de IL-4 (260%); enquanto o tratamento com 4 doses diminuiu o número de leucócitos (82%) e as concentrações de CINC-1 (96%) e CINC-2 (45%); e, aumentou as concentrações de TNF-&#945; (270%), IFN-&#947; (220%), IL-1&#946; (42%), IL-6 (760%) e a expressão de ICAM-1 (1360%); enquanto as concentrações de CINC-3, IL-10 e IL-12 não foram alteradas pelos tratamentos com insulina. Após a infecção com a cepa N315 HLA+, comparados aos não infectados, ratos diabéticos apresentaram aumento do número de leucócitos (200%), nas concentrações de CINC-1 (1000%), IL-4 (860%), IFN-&#947; (200%) e na expressão de PECAM-1 (800%) e diminuição de CINC-2 (92%). O tratamento destes animais com dose única de insulina diminuiu a concentração de CINC-1 (85%); e aumentou a concentração de CINC-2 (2030%), IL-1&#946; (370%) e IL-4 (250%); enquanto o tratamento com 4 doses diminuiu a concentração de CINC-1 (92%); e, aumentou número de leucócitos (66%), as concentrações de CINC-2 (100%), IL-1&#946; (490%), IL-6 (1870%) e IFN-&#947; (330%), e os outros parâmetros não foram modificados pelos diferentes tratamentos com insulina. Estes dados sugerem que a insulina possa modular a peritonite induzida por cepas diferentes de S. aureus, controlando pelo menos em parte, o infiltrado inflamatório, a produção das citocinas CINC-1, CINC-2, IL-4, IL-6, IFN-&#947;, TNF-&#945; e IL-1&#946;; e, consequentemente a expressão P-selectina e PECAM-1 no endotélio vascular do mesentério. / Diabetic nephropathy is a chronic disease characterized by kidney failure, so hemodialysis is necessary. Peritoneal dialysis is an alternative to hemodialysis, but causes peritonitis and death primarily due to infection by Staphylococcus aureus, especially in immunocompromised patients, such as diabetics. Our hypothesis is that insulin can modulate peritonitis caused by S. aureus, therefore, we investigated its action, after diabetes induction, in peritoneal infection with different S. aureus strains, analyzing the molecular mechanisms (cytokines production/release, adhesion molecules expression) and the microbicidal activity of peritoneal macrophages involved. Wistar male diabetic (alloxan, 42 mg/kg, iv, 10 days) and their respective controls (saline,iv) were subjected to intraperitoneal injection of S. aureus suspension (5x109CFU/mL) or an equivalent volume of PBS sterile. Animals were submitted to two treatments with NPH insulin administered subcutaneously : single dose (1IU and 4IU respectively , control and diabetic) 8 hours prior to euthanasia ; or 4 doses : first dose 2 hours before infection (4IU and 1IU , diabetic and control group, respectively), then half this dose of 17 pm and in the same time for the next 2 days, after 16 hours of the last dose, blood glucose was determined, and then it was carried out euthanasia and sampling. We evaluated: a) number of cells in peritoneal wash (PW), white blood cell count and blood sugar (glucose monitor) ; b) serum insulin and corticosterone (ELISA); c) concentrations of cytokines (IL-1&#946;, TNF-&#945;, IL-6, IFN-&#947;, IL-4, IL-10, IL-12) and chemokines (CINC -1, CINC-2, CINC-3 ) in supernatant of the SBA assay (ELISA); d) expression of adhesion molecules (P- selectin, ICAM-1, PECAM-1) in vascular endothelium ( immunohistochemistry); e) microbicidal activity. After infection with ATCC 25923 strain, compared to uninfected, diabetic rats showed an increase in leukocytes number (350%) and in concentrations of CINC-1 (1900%), IL-1&#946; (1300%), IFN-&#947; (280%), IL-4 (800%). Treatment of these animals with a single dose of insulin decreased concentrations of CINC-1 (17%) and IFN-&#947; (30%) and leukocytes number (55%); and increased IL-4 concentrations (260%); while treatment with 4 doses decreased leukocytes number (82%) and concentrations of CINC-1 (96%) and CINC-2 (45%); and increased concentrations of TNF-&#945; (270%), IFN-&#947; (220%), IL-1&#946; (42%), IL-6 (760%) and expression of ICAM-1 (1360%); while the concentrations of CINC-3, IL-10 and IL-12 were not affected by treatments with insulin. After infection with N315 HLA+ strain, compared to uninfected, diabetic rats showed an increase in leukocytes (200%), concentrations of CINC-1 (1000%), IL-4 (860%), IFN-&#947; (200%) and in the expression of PECAM-1 (800%); and CINC-2 decrease (92%). Treatment of these animals with a single dose of insulin decreased the concentration of CINC-1 (85%); and increased concentrations of CINC-2 (2030%), IL-1&#946; (370%) and IL-4 (250%); while treatment with 4 doses decreased the concentration of CINC-1 (92%); and increased leukocytes number (66%), concentrations of CINC-2 (100%), IL-1&#946; (490%), IL-6 (1870%) and IFN-&#947; (330%), and other parameters were not modified by treatments with insulin. These results suggest that both S. aureus strains activate differently the innate response during peritonitis, and insulin was not always able to modulate this response.

A periodontite produz uma descarga de quimiocinas inflamatórias que pode ser refletida na saliva. Com base nisso, o objetivo desse estudo foi mensurar as concentrações salivares de interleucina-8 (IL-8), RANTES (Regulated upon Activation, Normal T Cell Expressed and Secreted), MIG (monokine induced by gamma interferon), IP-10 (interferon &gamma;-inducible protein of 10 kD), e MCP-1 (macrophage chemotactic protein-1) em pacientes com periodontite crônica e saudáveis. 32 indivíduos foram divididos em dois grupos: saudáveis (Controle, n=11) e pacientes com periodontite crônica (DP, n=21). Dados clínicos foram registrados. Amostras de saliva não-estimulada foram analisadas e biomarcadores inflamatórios na saliva foram identificados utilizando a citometria de fluxo em ensaios multiplex. Dos biomarcadores analisados, IL-8, MCP-1, PI e MIG-10 foram encontrados em maior abundância nas amostras da saliva. Verificou-se diferenças estatisticamente significativas entre as proteínas salivares: IL-8 (p=0,0008), MCP-1 (p=0003), e RANTES (p=0,03). Nenhuma diferença estatística entre grupos foi observada para IP-10 (Controle 193,85 ± 64,21; PD 423,78 ± 85,67, p=0,08), e MIG (Controle 173,33 ± 79,28; DP 341,26 ± 77,23. p=0,05). Todos os biomarcadores avaliados estavam mais elevados nos pacientes com DP em comparação com o grupo controle. Os dados sugerem que o aumento dos níveis de quimiocinas MCP-1, IL-8 e RANTES na PD podem ser responsáveis pela manutenção de leucócitos específicos no local. Esse mecanismo pode servir para promover a migração de leucócitos para os sítios de inflamação e a manutenção da cronicidade da periodontite / Objective: Periodontitis produces an inflammatory proteins discharge that can be reflected in saliva. The aim of this study was to measure salivary concentrations of interleukin-8 (IL-8), RANTES (Regulated upon Activation, Normal T Cell Expressed and Secreted), MIG (monokine induced by gamma interferon), IP-10 (interferon &gamma;-inducible protein of 10 kD), e MCP-1 (macrophage chemotactic protein-1) in patients with chronic periodontitis and healthy. Material and Methods: A total of 32 subjects was divided in 2 groups: healthy (Control, n=11) and patients with periodontitis (PD, n=21. Clinical data were recorded. Non-stimulated saliva samples were analyzed and identified simultaneously using the human flow cytometry multiplex assays. Results: Of the target biomarkers examined, IL-8, MCP-1, MIG and IP-10 were found in greatest abundance in the saliva samples. It was found statistically significant differences among screened salivary proteins: IL-8 (p = 0.0008), MCP-1 (p = 0.003), and RANTES (p= 0.03). No statistical differences between the groups were observed for IP-10 (Ctrl 193.85 ± 64.21. PD 423.78 ± 85.67, p = 0.08), and MIG (Ctrl 173.33 ± 79.28; PD 341.26 ± 77.23. p = 0.05). All cytokines levels were higher on PD patients in comparison with controls samples. Only samples that stayed within the detection limit for the assay were considered for statistical analysis. For Control group, no correlation was found between clinical parameters and the chemokines levels. In PD group, positive Spearman correlation was observed between total amount of MCP-1 and Age (r 0.648; p<0.001) and negative correlation was observed between MCP-1 with PPD (r -0.462, p = 0.03) and CAL (r -0,461, p = 0.003). Significant negative correlation was found between total amount of RANTES and the percentage of SUP (r -0.457, p = 0.03). Conclusion: The above results suggest that the increased levels of chemokines MCP-1, RANTES and IL-8 in PD individuals may be responsible for maintaining the infiltration of specific leukocytes. This mechanism would serve to promote the migration of leukocytes into the sites of inflammation and the chronicity of inflammation in human periodontitis.

Objetivos: Comparar os níveis séricos de citocinas entre voluntários saudáveis e em pacientes bipolares tipo 1 em mania, depressão e eutimia. Comparar os níveis séricos de quimiocinas entre voluntários saudáveis e pacientes bipolares tipo 1 em eutimia. Metodologia: Sessenta e um pacientes bipolares foram recrutados para a avaliação dos níveis séricos de citocinas. Desses, 24 estavam eutímicos, e 23 e 24 estavam em mania e depressão, respectivamente. Este grupo foi comparado a outro, composto por 25 voluntários saudáveis. As seguintes citocinas foram exainadas através de citometria de fluxo: TNF-alfa, IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, IFN-gama e comparadas entre os grupos. Além dessa análise, 30 pacientes bipolares tipo 1 foram comparados a igual número de voluntários saudáveis para estudar os níveis séricos das seguintes quimiocinas: CCL2, CCL3, CCL8, CCL 9, CCL10, CCL11 e CCL24, dosadas através de ELISA sandwich. Resultados: Duarnte a mania, as citocinas pró-inflamatórias IL-2, IL-4 e IL-6 estavam elevadas nos pacientes com TB em comparação com o grupo de voluntários saudáveis. Já os pacientes em episódio depressivo, apresentavam somente elevação da IL-6. Não houve modificação dos níveis de citocinas nos pacientes eutímicos, exceto pelo aumento da IL-4. Quanto as quimiocinas, enquanto os níveis séricos de CXCL10 estavam elevados nos pacientes bipolares, os níveis de CCL24 estavam diminuídos. / Objectives: Compare serum levels of cytokines between healthy volunteers and patients with bipolar disorder type 1 in mania, depression and euthymia. Compare serum levels of chemokines between healthy volunteers and bipolar patients in euthymia. Methods: Sixty-one bipolar patients were recruited for assessment of serum cytokine levels. Of these, 14 were in euthymic state, 23 and 24 were in manic and depressive episodes, respectively. A healthy comparison group included 25 healthy volunteers. Cytokines involved in Th1/Th2 balance, such as TNF- , IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, IFN- , were examined by flow cytometry. In addition, serum chemokine levels of 30 euthymic patients with BD type I and 30 healthy volunteers were investigated and compared. The chemokines assessed were CCL2, CCL3, CCL8, CCL 9, CCL10, CCL11, and CCL24. Results: During mania, proinflammatory cytokines, IL-2, IL-4 and IL-6, were increased in comparison with healthy subjects. Patients in depressive episode showed only increased IL-6 levels. There were no significant differences in cytokine levels between patients in remission and healthy subjects, except for IL-4. Regarding chemokines, patients with BD showed significant differences in chemokine levels when compared with healthy subjects. While serum levels of CXCL10 were increased, CCL24 levels were lower in bipolar patients when compared with controls. There was no statistical difference in the serum levels of CCL2, CCL3, CCL24, CXCL9, and CXCL11 between patients and controls.

A periodontite produz uma descarga de quimiocinas inflamatórias que pode ser refletida na saliva. Com base nisso, o objetivo desse estudo foi mensurar as concentrações salivares de interleucina-8 (IL-8), RANTES (Regulated upon Activation, Normal T Cell Expressed and Secreted), MIG (monokine induced by gamma interferon), IP-10 (interferon &gamma;-inducible protein of 10 kD), e MCP-1 (macrophage chemotactic protein-1) em pacientes com periodontite crônica e saudáveis. 32 indivíduos foram divididos em dois grupos: saudáveis (Controle, n=11) e pacientes com periodontite crônica (DP, n=21). Dados clínicos foram registrados. Amostras de saliva não-estimulada foram analisadas e biomarcadores inflamatórios na saliva foram identificados utilizando a citometria de fluxo em ensaios multiplex. Dos biomarcadores analisados, IL-8, MCP-1, PI e MIG-10 foram encontrados em maior abundância nas amostras da saliva. Verificou-se diferenças estatisticamente significativas entre as proteínas salivares: IL-8 (p=0,0008), MCP-1 (p=0003), e RANTES (p=0,03). Nenhuma diferença estatística entre grupos foi observada para IP-10 (Controle 193,85 ± 64,21; PD 423,78 ± 85,67, p=0,08), e MIG (Controle 173,33 ± 79,28; DP 341,26 ± 77,23. p=0,05). Todos os biomarcadores avaliados estavam mais elevados nos pacientes com DP em comparação com o grupo controle. Os dados sugerem que o aumento dos níveis de quimiocinas MCP-1, IL-8 e RANTES na PD podem ser responsáveis pela manutenção de leucócitos específicos no local. Esse mecanismo pode servir para promover a migração de leucócitos para os sítios de inflamação e a manutenção da cronicidade da periodontite / Objective: Periodontitis produces an inflammatory proteins discharge that can be reflected in saliva. The aim of this study was to measure salivary concentrations of interleukin-8 (IL-8), RANTES (Regulated upon Activation, Normal T Cell Expressed and Secreted), MIG (monokine induced by gamma interferon), IP-10 (interferon &gamma;-inducible protein of 10 kD), e MCP-1 (macrophage chemotactic protein-1) in patients with chronic periodontitis and healthy. Material and Methods: A total of 32 subjects was divided in 2 groups: healthy (Control, n=11) and patients with periodontitis (PD, n=21. Clinical data were recorded. Non-stimulated saliva samples were analyzed and identified simultaneously using the human flow cytometry multiplex assays. Results: Of the target biomarkers examined, IL-8, MCP-1, MIG and IP-10 were found in greatest abundance in the saliva samples. It was found statistically significant differences among screened salivary proteins: IL-8 (p = 0.0008), MCP-1 (p = 0.003), and RANTES (p= 0.03). No statistical differences between the groups were observed for IP-10 (Ctrl 193.85 ± 64.21. PD 423.78 ± 85.67, p = 0.08), and MIG (Ctrl 173.33 ± 79.28; PD 341.26 ± 77.23. p = 0.05). All cytokines levels were higher on PD patients in comparison with controls samples. Only samples that stayed within the detection limit for the assay were considered for statistical analysis. For Control group, no correlation was found between clinical parameters and the chemokines levels. In PD group, positive Spearman correlation was observed between total amount of MCP-1 and Age (r 0.648; p<0.001) and negative correlation was observed between MCP-1 with PPD (r -0.462, p = 0.03) and CAL (r -0,461, p = 0.003). Significant negative correlation was found between total amount of RANTES and the percentage of SUP (r -0.457, p = 0.03). Conclusion: The above results suggest that the increased levels of chemokines MCP-1, RANTES and IL-8 in PD individuals may be responsible for maintaining the infiltration of specific leukocytes. This mechanism would serve to promote the migration of leukocytes into the sites of inflammation and the chronicity of inflammation in human periodontitis.

Objetivos: Comparar os níveis séricos de citocinas entre voluntários saudáveis e em pacientes bipolares tipo 1 em mania, depressão e eutimia. Comparar os níveis séricos de quimiocinas entre voluntários saudáveis e pacientes bipolares tipo 1 em eutimia. Metodologia: Sessenta e um pacientes bipolares foram recrutados para a avaliação dos níveis séricos de citocinas. Desses, 24 estavam eutímicos, e 23 e 24 estavam em mania e depressão, respectivamente. Este grupo foi comparado a outro, composto por 25 voluntários saudáveis. As seguintes citocinas foram exainadas através de citometria de fluxo: TNF-alfa, IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, IFN-gama e comparadas entre os grupos. Além dessa análise, 30 pacientes bipolares tipo 1 foram comparados a igual número de voluntários saudáveis para estudar os níveis séricos das seguintes quimiocinas: CCL2, CCL3, CCL8, CCL 9, CCL10, CCL11 e CCL24, dosadas através de ELISA sandwich. Resultados: Duarnte a mania, as citocinas pró-inflamatórias IL-2, IL-4 e IL-6 estavam elevadas nos pacientes com TB em comparação com o grupo de voluntários saudáveis. Já os pacientes em episódio depressivo, apresentavam somente elevação da IL-6. Não houve modificação dos níveis de citocinas nos pacientes eutímicos, exceto pelo aumento da IL-4. Quanto as quimiocinas, enquanto os níveis séricos de CXCL10 estavam elevados nos pacientes bipolares, os níveis de CCL24 estavam diminuídos. / Objectives: Compare serum levels of cytokines between healthy volunteers and patients with bipolar disorder type 1 in mania, depression and euthymia. Compare serum levels of chemokines between healthy volunteers and bipolar patients in euthymia. Methods: Sixty-one bipolar patients were recruited for assessment of serum cytokine levels. Of these, 14 were in euthymic state, 23 and 24 were in manic and depressive episodes, respectively. A healthy comparison group included 25 healthy volunteers. Cytokines involved in Th1/Th2 balance, such as TNF- , IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, IFN- , were examined by flow cytometry. In addition, serum chemokine levels of 30 euthymic patients with BD type I and 30 healthy volunteers were investigated and compared. The chemokines assessed were CCL2, CCL3, CCL8, CCL 9, CCL10, CCL11, and CCL24. Results: During mania, proinflammatory cytokines, IL-2, IL-4 and IL-6, were increased in comparison with healthy subjects. Patients in depressive episode showed only increased IL-6 levels. There were no significant differences in cytokine levels between patients in remission and healthy subjects, except for IL-4. Regarding chemokines, patients with BD showed significant differences in chemokine levels when compared with healthy subjects. While serum levels of CXCL10 were increased, CCL24 levels were lower in bipolar patients when compared with controls. There was no statistical difference in the serum levels of CCL2, CCL3, CCL24, CXCL9, and CXCL11 between patients and controls.

Introdução: São vistos muitos efeitos benéficos do aleitamento materno. Estudos demonstram que crianças amamentadas com leite materno quando comparadas às alimentadas com fórmulas lácteas artificiais, apresentam melhor desenvolvimento cognitivo. Em pacientes com esquizofrenia, o aleitamento materno vem sendo avaliado como fator de proteção. Os níveis de quimiocinas CCL11, marcador biológico relacionado principalmente com o envelhecimento precoce, também tem sido associado ao desempenho cognitivo nesses pacientes. Estudos mostram uma correlação negativa deste marcador com o desempenho em testes de memória de trabalho e com a tarefa de flexibilidade cognitiva. Sendo assim, surge o interesse em estudar as diferenças entre níveis plasmáticos da quimiocina CCL11, quociente de inteligência e história do aleitamento materno (no peito) em pacientes com esquizofrenia e controles. Métodos: Estudo caso-controle com 56 indivíduos, sendo 30 pacientes com esquizofrenia e 26 controles saudáveis, divididos em grupos que foram aleitados e grupos que não foram. Foi aplicado questionário com dados sócio-econômicos, história ao nascer, dados clínicos e alimentação ao nascer. Foi dosado a quimiocina CCL11 e aplicado testes psicológicos para avaliarem quociente de inteligência, funcionalidade, sintomas psiquiátricos, curso da doença e diagnóstico. Para os controles foi utilizada uma escala para descartar doença psiquiátrica. Resultados: A quimiocina CCL11 apresentou valores significativamente mais altos (>0,5) em pacientes com esquizofrenia quando comparados aos controles e no grupo de amamentados, os esquizofrênicos também apresentaram valores significativamente mais altos, mas em nível intermediário (entre 0.106 e 0.5). Não houve correlação da CCL11 com o número de hospitalizações, idade, tempo de diagnóstico e escolaridade. Também não foi evidenciada correlação entre tempo de aleitamento materno em relação aos fatores do Brief Psychiatric Rating Scale. Houve uma tendência de correlação entre a idade de início da doença e o aleitamento materno. Foi encontrada correlação positiva do CCL11 com o tempo de aleitamento materno. Ao comparar os pacientes esquizofrênicos que foram aleitados com os que não foram, foi encontrada diferença estatisticamente significativa apenas para o quociente de inteligência. Conclusão: O aleitamento materno está associado a níveis mais baixos de CCL11, escores mais altos de quociente de inteligência e com a esquizofrenia. A quimiocina CCL11 é mais alta em quem não amamentou, especialmente nos esquizofrênicos. / Introduction: Are seen many beneficial effects of breastfeeding. Studies show that children breastfed, compared to fed artificial milk formulas, have better cognitive development. In patients with schizophrenia, breastfeeding has been evaluated as a protective factor. The levels of CCL11 chemokine, biomarker related mainly to premature aging, have also been associated with cognitive performance in these patients. Studies show a negative correlation of this marker with the performance of working memory tests and with cognitive flexibility task. Thus, there is the interest in studying the differences between plasma levels of CCL11 chemokine, intelligence quotient and history of breastfeeding in patients with schizophrenia and controls. Methods: Case-control study with 56 subjects, 30 patients with schizophrenia and 26 healthy individuals divided into groups that were breastfed group and those who were not. A socio-economic survey, birth history, clinical data and power at birth was applied. It was dosed to CCL11 chemokine and applied psychological tests to assess intelligence quotient, functionality, psychiatric symptoms, course of the disease and diagnosis. For the controls we used a scale to rule out psychiatric illness. Results: The chemokine CCL11 had significantly higher values (> 0.5) in patients with schizophrenia compared with controls and the breastfed group, schizophrenics also had significantly higher values, but on intermediate level (between 0.106 and 0.5). There was no correlation of CCL11 to the number of hospitalizations, age, time of diagnosis and education. It was also not evident correlation between duration of breastfeeding in relation to factors of Brief Psychiatric Rating Scale. There was a trend of correlation between the age of onset of the disease and breastfeeding. There was a positive correlation between CCL11 with the duration of breastfeeding. By comparing the schizophrenic patients who were breastfed with those who were not, there was a statistically significant difference only for the intelligence quotient. Conclusion: Breastfeeding is associated with lower levels of CCL11, higher intelligence quotient scores and schizophrenia. The CCL11 chemokine is higher in those who did not breastfeed, especially in schizophrenic.