Uma vacina liofilizada, em comparação a uma líquida, possui inúmeras vantagens, tais como: a melhora na estabilidade do produto às variações de temperatura aumentando sua vida de prateleira, possibilitando uma melhor logística do produto aos locais onde o acesso à rede refrigerada é difícil. O presente trabalho visou investigar as estratégias do processo para a conservação da potência da vacina rábica de uso veterinário por liofilização. O material testado foi a vacina rábica inativada (VRI). Ao total foram testados 13 excipientes com três concentrações diferentes. O processo de triagem utilizado para a escolha das melhores formulações (VRI + excipiente) foi liofilização em microplacas próprias para cultivo celular adaptadas ao liofilizador, sendo posteriormente verificada a preservação da antigenicidade da vacina por meio do teste de ELISA. A análise estatística foi realizada no programa SPSS® v.17, aplicando análise de regressão para dados categóricos. A arginina 0,5%, o PEG 3350 0,5%, a sacarose 2%, a maltose 1% e a trealose 1% foram os que deram melhores resultados, um alto \"score\" de antigenicidade em comparação à vacina liofilizada sem adição de excipientes. A temperatura de colapso da VRI e de suas diversas formulações foi determinada por meio de um microscópio acoplado a um módulo de liofilização. A análise térmica foi realizada em Calorimetria Exploratória Diferencial (Differential Scanning Calorimetry - DSC). Realizou-se os seguintes testes para avaliação da VRI liofilizada em frasco ampola: microscopia eletrônica de varredura (MEV) para análise da estrutura da pastilha e o antibody-binding test (ABT) - Teste de ligação do anticorpo modificado para determinação da potência da VRI e suas formulações. A umidade residual da VRI com PEG3350 0,5% liofilizada foi determinada em temperatura constante de 100ºC resultou em 1,60%. A pastilha da vacina rábica + PEG 3350 0,5% liofilizada em frasco ampola apresentou a elegância farmacêutica esperada de um produto liofilizado. / A lyophilized vaccine, compared to a liquid form, has many advantages, such as the improvement in product stability to changes in temperature by increasing its shelf life, allowing better logistics for product to locations where access to chill is difficult to achieve. This work has investigated the strategies of the process for the conservation of the potency of rabies vaccine for veterinary use by lyophilization. The material tested is an inactivated rabies vaccine (VRI). Altogether 13 excipients were tested with three different concentrations. The screening process used to choose best formulation (s) (VRI + excipient) was lyophilization in microplates suitable for cell culture adapted to the lyophilizer, and subsequently verified the preservation of the antigenicity of the vaccine through the ELISA test. Statistical analysis was performed using SPSS® v.17, applying regression analysis for categorical data. Arginine 0.5%, PEG 3350 0.5%, Sucrose 2%, Maltose 1% and Trehalose 1% were those that gave better results, a high score of antigenicity compared to the lyophilized vaccine with no added excipients. The temperature of collapse of VRI and its various formulations was determined using a microscope coupled to a module of lyophilization. Thermal analysis was performed in Differential Scanning Calorimetry (DSC). The following tests were used for evaluation of freeze-dried VRI: Scanning electron microscopy (SEM), Antibody-binding test (ABT). The residual moisture of lyophilized samples were determined in the moisture analyzer at constant temperature of 100 °C and resulted in 1.60%. The cake of lyophilized rabies vaccine + 0.5% PEG 3350 in vial showed the pharmaceutical elegance expected of a lyophilized product.

Uma vacina liofilizada, em comparação a uma líquida, possui inúmeras vantagens, tais como: a melhora na estabilidade do produto às variações de temperatura aumentando sua vida de prateleira, possibilitando uma melhor logística do produto aos locais onde o acesso à rede refrigerada é difícil. O presente trabalho visou investigar as estratégias do processo para a conservação da potência da vacina rábica de uso veterinário por liofilização. O material testado foi a vacina rábica inativada (VRI). Ao total foram testados 13 excipientes com três concentrações diferentes. O processo de triagem utilizado para a escolha das melhores formulações (VRI + excipiente) foi liofilização em microplacas próprias para cultivo celular adaptadas ao liofilizador, sendo posteriormente verificada a preservação da antigenicidade da vacina por meio do teste de ELISA. A análise estatística foi realizada no programa SPSS® v.17, aplicando análise de regressão para dados categóricos. A arginina 0,5%, o PEG 3350 0,5%, a sacarose 2%, a maltose 1% e a trealose 1% foram os que deram melhores resultados, um alto \"score\" de antigenicidade em comparação à vacina liofilizada sem adição de excipientes. A temperatura de colapso da VRI e de suas diversas formulações foi determinada por meio de um microscópio acoplado a um módulo de liofilização. A análise térmica foi realizada em Calorimetria Exploratória Diferencial (Differential Scanning Calorimetry - DSC). Realizou-se os seguintes testes para avaliação da VRI liofilizada em frasco ampola: microscopia eletrônica de varredura (MEV) para análise da estrutura da pastilha e o antibody-binding test (ABT) - Teste de ligação do anticorpo modificado para determinação da potência da VRI e suas formulações. A umidade residual da VRI com PEG3350 0,5% liofilizada foi determinada em temperatura constante de 100ºC resultou em 1,60%. A pastilha da vacina rábica + PEG 3350 0,5% liofilizada em frasco ampola apresentou a elegância farmacêutica esperada de um produto liofilizado. / A lyophilized vaccine, compared to a liquid form, has many advantages, such as the improvement in product stability to changes in temperature by increasing its shelf life, allowing better logistics for product to locations where access to chill is difficult to achieve. This work has investigated the strategies of the process for the conservation of the potency of rabies vaccine for veterinary use by lyophilization. The material tested is an inactivated rabies vaccine (VRI). Altogether 13 excipients were tested with three different concentrations. The screening process used to choose best formulation (s) (VRI + excipient) was lyophilization in microplates suitable for cell culture adapted to the lyophilizer, and subsequently verified the preservation of the antigenicity of the vaccine through the ELISA test. Statistical analysis was performed using SPSS® v.17, applying regression analysis for categorical data. Arginine 0.5%, PEG 3350 0.5%, Sucrose 2%, Maltose 1% and Trehalose 1% were those that gave better results, a high score of antigenicity compared to the lyophilized vaccine with no added excipients. The temperature of collapse of VRI and its various formulations was determined using a microscope coupled to a module of lyophilization. Thermal analysis was performed in Differential Scanning Calorimetry (DSC). The following tests were used for evaluation of freeze-dried VRI: Scanning electron microscopy (SEM), Antibody-binding test (ABT). The residual moisture of lyophilized samples were determined in the moisture analyzer at constant temperature of 100 °C and resulted in 1.60%. The cake of lyophilized rabies vaccine + 0.5% PEG 3350 in vial showed the pharmaceutical elegance expected of a lyophilized product.

O presente trabalho visou estudar o comportamento biológico em camundongos de 10 amostras de vírus da raiva isoladas de morcegos hematófagos e não-hematófagos, no Estado do Rio de Janeiro, sua caracterização genética quanto aos genes N e G, além da resposta de camundongos vacinados com a vacina anti-rábica produzida pela replicação da amostra Pitman-Moore em cultivo celular, frente ao desafio com estas amostras virais. As passagens sucessivas em camundongos determinaram uma redução do período de incubação e a obtenção de amostras virais com altos títulos. A vacina anti-rábica utilizada na imunização dos camundongos ofereceu proteção em mais de 80% dos camundongos vacinados com a diluição 1:5 da vacina, frente à maioria das amostras. A análise filogenética do gene da proteína N apresentou um padrão de agregação dividido em variante de morcego hematófago e variante de morcego insetívoro, com diferenças filogenéticas entre as variantes de morcego hematófago isoladas na Região Noroeste do Estado do Rio de Janeiro e aquelas isoladas nas Regiões Metropolitana e Sul do Estado. A substituição do resíduo ácido aspártico por ácido glutâmico na posição 118, encontradas na caracterização genética da proteína G das amostras 704/97 e 151/98, permite inferir que esta posição esteja relacionada à antigenicidade viral. Não foram observadas diferenças genéticas temporais entre as amostras estudadas. / In the present study we analyzed the biological behavior in mice of 10 rabies virus samples isolated from haematophagous and non-haematophagous bats in Rio de Janeiro State, its genetic characterization from genes N and G, and we also studied the response of mice vaccinated with cell culture rabies vaccine, produced with the Pitman-Moore strain, after viral challenge with bat rabies virus samples. Viral passages in mice resulted in reduced incubation period and high virus titrers. The vaccine used conferred protection in more than 80% of the mice vaccinated with 1:15 vaccine dilution, after viral challenge. N gene genetic analysis divided the samples in haematophagous bat strains and insectivorous bat strains, with phylogenetic differences between samples isolated in Northeast Region and those isolated in the Metropolitan and South Regions of Rio de Janeiro State. The substitution of an aspartic acid to a glutamic acid found in the position 118 of G gene genetic characterization from samples 704/97 and 151/98 seems to be related to viral antigenicity. There were no time-related genetic differences between the studied samples.

Dissertação (mestrado) - Pontifícia Universidade Católica do Paraná, São José dos Pinhais, 2011 / Inclui bibliografias / A raiva permanece como uma doenca preocupante para medicos e veterinários devido aos expressivos prejuizos e perdas que ela acarreta. O estudo continuado da raiva, focando em seus metodos profilaticos e em especial no desenvolvimento de novos metodos vaci / Rabies remains a preoccupying disease in human and animal medicine due to the expressive losses that it causes. The continued study of rabies, concentrating on its prophylactic methods, specifically in the development of new vaccine methods becomes essent

O presente trabalho visou estudar o comportamento biológico em camundongos de 10 amostras de vírus da raiva isoladas de morcegos hematófagos e não-hematófagos, no Estado do Rio de Janeiro, sua caracterização genética quanto aos genes N e G, além da resposta de camundongos vacinados com a vacina anti-rábica produzida pela replicação da amostra Pitman-Moore em cultivo celular, frente ao desafio com estas amostras virais. As passagens sucessivas em camundongos determinaram uma redução do período de incubação e a obtenção de amostras virais com altos títulos. A vacina anti-rábica utilizada na imunização dos camundongos ofereceu proteção em mais de 80% dos camundongos vacinados com a diluição 1:5 da vacina, frente à maioria das amostras. A análise filogenética do gene da proteína N apresentou um padrão de agregação dividido em variante de morcego hematófago e variante de morcego insetívoro, com diferenças filogenéticas entre as variantes de morcego hematófago isoladas na Região Noroeste do Estado do Rio de Janeiro e aquelas isoladas nas Regiões Metropolitana e Sul do Estado. A substituição do resíduo ácido aspártico por ácido glutâmico na posição 118, encontradas na caracterização genética da proteína G das amostras 704/97 e 151/98, permite inferir que esta posição esteja relacionada à antigenicidade viral. Não foram observadas diferenças genéticas temporais entre as amostras estudadas. / In the present study we analyzed the biological behavior in mice of 10 rabies virus samples isolated from haematophagous and non-haematophagous bats in Rio de Janeiro State, its genetic characterization from genes N and G, and we also studied the response of mice vaccinated with cell culture rabies vaccine, produced with the Pitman-Moore strain, after viral challenge with bat rabies virus samples. Viral passages in mice resulted in reduced incubation period and high virus titrers. The vaccine used conferred protection in more than 80% of the mice vaccinated with 1:15 vaccine dilution, after viral challenge. N gene genetic analysis divided the samples in haematophagous bat strains and insectivorous bat strains, with phylogenetic differences between samples isolated in Northeast Region and those isolated in the Metropolitan and South Regions of Rio de Janeiro State. The substitution of an aspartic acid to a glutamic acid found in the position 118 of G gene genetic characterization from samples 704/97 and 151/98 seems to be related to viral antigenicity. There were no time-related genetic differences between the studied samples.

Estimou-se o tamanho e a distribuição espacial da população canina domiciliada no Município de Guarulhos, Estado de São Paulo, correlacionando-os com a população humana e composição sócio-econômica. Um Sistema de Informação Geográfica (SIG) foi elaborado para avaliar a localização espacial dos postos da Campanha de Vacinação Anti-rábica Canina em Guarulhos, no ano 2000. A população total de cães, no ano 2000, foi estimada com base em uma razão entre a população humana e a população canina, de acordo com uma amostra que considerou critérios sócio-econômicos. Observou-se que esta razão não está correlacionada com nível sócio-econômico, podendo-se considerar um valor único, ou seja, 5,30 (erro padrão de 0,27), para a Zona Urbana do município. Na Zona Rural, estimou-se a razão em 8,16 (erro padrão de 1,13). Foi determinada a densidade populacional canina para os setores censitários, com base na razão entre a população humana e a população canina. Baseado em uma lista de endereços, a localização geográfica dos 160 postos fixos de vacinação foi levantada, pelo uso de um aparelho de localização global por satélite (SPG). Estes pontos foram então plotados em um mapa georreferenciado do município de Guarulhos e suas 'áreas de influência' foram estabelecidas com base em uma distância média de deslocamento dos proprietários até os postos de vacinação. A população canina foi estimada em 193886 no ano 2000. A população felina foi estimada em 44070 no mesmo ano. Confrontando-se estes números com o total de animais vacinados na Campanha de Vacinação Anti-rábica do ano 2000, estimou-se que 61,77% dos cães domiciliados e 38,31% dos gatos domiciliados foram atendidos. Observou-se, através de mapas temáticos, que a cobertura espacial dos postos de vacinação é adequada, pois atende as áreas de maior densidade populacional animal. A proporção entre os gêneros da população canina foi estimada em 1,70, ou seja, 1,70 machos para cada fêmea. A mesma proporção, para a população felina, foi estimada em 1,44. / The size of supervised dog population and its distribution was estimated in Guarulhos, State of Sao Paulo, and correlated with human population and its socio-economic composition. A Geographic Information System (GIS) was built to evaluate spatial location of posts of anti-rabic vaccination campaign in Guarulhos, in the year 2,000. The total canine population in the year 2,000 was estimated by a human population:dog population ratio, obtained by a socio-economic criteria sampling. This ratio is not correlated with socio-economic levels, so that it may be considered a single value, or 5.30 (standard error in 0.27), to Guarulhos Urban Area. In Rural Area, this ratio is 8.16 (standard error in 1.13). Canine population density in censitary sectors was determinated based on human population:dog population ratio. Geographic location of 160 vaccination posts was found, based on an address list, by using a global positioning system (GPS) device. Those points were plotted in a map of Guarulhos, and its 'influence areas' were established by a mean walking distance, or the distance that a dog owner was prone to reach a vaccination post. Canine population was estimated in 193,886 for the year of 2,000. Feline population was estimated in 44,070 in the same year. Comparing these numbers with total vaccinated animals (dogs and cats) in Anti-rabic Vaccination Campaign of 2000, 61.77% of supervised dogs and 38.31% of cats were estimated to be attended. Through thematic maps, spatial coverage of vaccination posts was found to be adequate for Guarulhos, because it covers areas of high animal density. The proportion between genders of canine supervised population was estimated in 1.70, or 1.70 male for each female. The same proportion for feline supervised population, was estimated in 1.44.

Procedeu-se ao estudo comparativo entre as provas de soroneutralização (SN) e imunofluorescência indireta (IFI) para a avaliação de anticorpos anti-rábicos em soros de cães. A prova de IFI apresentou associação significante de alta ntensidade e elevada concordância com a prova de SN, não se verificando, porém, correlação significante entre os resultados obtidos por ambas as provas. A avaliação do comportamento da vacina anti-rábica, preparada em cérebros de camundongos lactentes e aplicada em cães nunca antes vacinados, revelou pela prova de SN uma ascensão lenta e de pequena magnitude e um declínio rápido, da curva das medianas dos títulos de anticorpos anti-rábicos, já aos 45 dias da vacinação. Relativamente à prova de IFI, a resposta imunitária revelou-se mais intensa, e o declínio da curva das medianas dos títulos de anticorpos ocorreu aos 60 dias da vacinação. / A comparative study was made between the serum-neutralization (SN) and indirect immunofluorescence CIIF) techniques for the evaluation of rabies antibodies in sera from dogs. The IIF technic showed significant association of high intensity and concordance with the SN technic. No significant correlation, however, was observed between the results obtained from both techniques. The evaluation of the suckling-mouse-brain rabies vaccine, applied in dogs never vaccinated before, showed by the SN technic a slow rise of small magnitude and a fast decline of the curve of the median rabies antibodies titers, as early as 4S days after vaccination. With regard to the IIF technic, the immunitary reaction showed itself more sensitive, and the decline of the curve of the median antibodies titers occurred 60 days after vaccination.

Estimou-se o tamanho e a distribuição espacial da população canina domiciliada no Município de Guarulhos, Estado de São Paulo, correlacionando-os com a população humana e composição sócio-econômica. Um Sistema de Informação Geográfica (SIG) foi elaborado para avaliar a localização espacial dos postos da Campanha de Vacinação Anti-rábica Canina em Guarulhos, no ano 2000. A população total de cães, no ano 2000, foi estimada com base em uma razão entre a população humana e a população canina, de acordo com uma amostra que considerou critérios sócio-econômicos. Observou-se que esta razão não está correlacionada com nível sócio-econômico, podendo-se considerar um valor único, ou seja, 5,30 (erro padrão de 0,27), para a Zona Urbana do município. Na Zona Rural, estimou-se a razão em 8,16 (erro padrão de 1,13). Foi determinada a densidade populacional canina para os setores censitários, com base na razão entre a população humana e a população canina. Baseado em uma lista de endereços, a localização geográfica dos 160 postos fixos de vacinação foi levantada, pelo uso de um aparelho de localização global por satélite (SPG). Estes pontos foram então plotados em um mapa georreferenciado do município de Guarulhos e suas 'áreas de influência' foram estabelecidas com base em uma distância média de deslocamento dos proprietários até os postos de vacinação. A população canina foi estimada em 193886 no ano 2000. A população felina foi estimada em 44070 no mesmo ano. Confrontando-se estes números com o total de animais vacinados na Campanha de Vacinação Anti-rábica do ano 2000, estimou-se que 61,77% dos cães domiciliados e 38,31% dos gatos domiciliados foram atendidos. Observou-se, através de mapas temáticos, que a cobertura espacial dos postos de vacinação é adequada, pois atende as áreas de maior densidade populacional animal. A proporção entre os gêneros da população canina foi estimada em 1,70, ou seja, 1,70 machos para cada fêmea. A mesma proporção, para a população felina, foi estimada em 1,44. / The size of supervised dog population and its distribution was estimated in Guarulhos, State of Sao Paulo, and correlated with human population and its socio-economic composition. A Geographic Information System (GIS) was built to evaluate spatial location of posts of anti-rabic vaccination campaign in Guarulhos, in the year 2,000. The total canine population in the year 2,000 was estimated by a human population:dog population ratio, obtained by a socio-economic criteria sampling. This ratio is not correlated with socio-economic levels, so that it may be considered a single value, or 5.30 (standard error in 0.27), to Guarulhos Urban Area. In Rural Area, this ratio is 8.16 (standard error in 1.13). Canine population density in censitary sectors was determinated based on human population:dog population ratio. Geographic location of 160 vaccination posts was found, based on an address list, by using a global positioning system (GPS) device. Those points were plotted in a map of Guarulhos, and its 'influence areas' were established by a mean walking distance, or the distance that a dog owner was prone to reach a vaccination post. Canine population was estimated in 193,886 for the year of 2,000. Feline population was estimated in 44,070 in the same year. Comparing these numbers with total vaccinated animals (dogs and cats) in Anti-rabic Vaccination Campaign of 2000, 61.77% of supervised dogs and 38.31% of cats were estimated to be attended. Through thematic maps, spatial coverage of vaccination posts was found to be adequate for Guarulhos, because it covers areas of high animal density. The proportion between genders of canine supervised population was estimated in 1.70, or 1.70 male for each female. The same proportion for feline supervised population, was estimated in 1.44.

Procedeu-se ao estudo comparativo entre as provas de soroneutralização (SN) e imunofluorescência indireta (IFI) para a avaliação de anticorpos anti-rábicos em soros de cães. A prova de IFI apresentou associação significante de alta ntensidade e elevada concordância com a prova de SN, não se verificando, porém, correlação significante entre os resultados obtidos por ambas as provas. A avaliação do comportamento da vacina anti-rábica, preparada em cérebros de camundongos lactentes e aplicada em cães nunca antes vacinados, revelou pela prova de SN uma ascensão lenta e de pequena magnitude e um declínio rápido, da curva das medianas dos títulos de anticorpos anti-rábicos, já aos 45 dias da vacinação. Relativamente à prova de IFI, a resposta imunitária revelou-se mais intensa, e o declínio da curva das medianas dos títulos de anticorpos ocorreu aos 60 dias da vacinação. / A comparative study was made between the serum-neutralization (SN) and indirect immunofluorescence CIIF) techniques for the evaluation of rabies antibodies in sera from dogs. The IIF technic showed significant association of high intensity and concordance with the SN technic. No significant correlation, however, was observed between the results obtained from both techniques. The evaluation of the suckling-mouse-brain rabies vaccine, applied in dogs never vaccinated before, showed by the SN technic a slow rise of small magnitude and a fast decline of the curve of the median rabies antibodies titers, as early as 4S days after vaccination. With regard to the IIF technic, the immunitary reaction showed itself more sensitive, and the decline of the curve of the median antibodies titers occurred 60 days after vaccination.

Made available in DSpace on 2016-01-26T18:55:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao Sandro.pdf: 259492 bytes, checksum: 9e24465090764a22ac75d827ad8af255 (MD5) Previous issue date: 2008-08-27 / The effect of a probiotic on the immune response of cattle immunized with one dose of rabies vaccine was evaluated in this study. The Nelore bovines (N=75) were divided randomly into 5 groups: four groups fed with a diet supplemented with the 2, 3, 4 and 8 g the probiotic (Proenzime®)/bovine/day, groups G2, G3, G4 and G8, respectively, for 60 days. The 5th group was used as control. All the animals were immunized with a single dose of rabies vaccine on the first day of the experiment (day 0). The antibody titers were measured on days 0, 30 and 60 by RFFIT test. The results show the significant interaction was found between the probiotic level and vaccination time. There was also a significant difference among rabies titers in groups Gc, G2, G3, G4 and G8 on both days 30 and 60. In group G4, titers of rabies antibody in cattle decreased significantly on day 60. A significant difference (p<0.05) between the frequency of immunized animals in the control group and the other treatments was found on both days 30 and 60. On day 60, the control group did not differ from G2. However, no significant difference (p<0.05) was found among the treatments which were supplemented with probiotic. In addition, no significant difference (p<0.05) between the frequency of immunized animals on days 30 and 60 was found in control (Gc) or any other treatment (G2, G3, G4 or G8). In conclusion, the probiotic (Proenzime®) increase the humoral immune response of bovine immunized with rabies vaccine. / Foi avaliado o efeito do probiótico sobre a resposta imune de bovinos imunizados com uma dose de vacina anti-rábica. Utilizaram-se bovinos Nelore (N=75) divididos randomicamente em 5 grupos: quatro grupos foram suplementados com 2, 3, 4 e 8 g probiótico (Proenzime®)/bovino/dia, grupos G2, G3, G4 e G8, respectivamente, por 60 dias. O 5º grupo foi controle. Todos os animais foram imunizados com uma dose de vacina anti-rábica no dia zero do experimento. Os títulos de anticorpos anti-rábicos foram mensurados nos dias 0, 30, 60 por meio do teste de RFFIT. Os resultados mostraram interação significativa entre concentração de probiótico e tempo de vacinação. Também teve aumento significativo nos títulos de anticorpos anti-rábicos nos grupos Gc, G2, G3, G4 e G8 nos dias 30 e 60. No grupo G4 os títulos de anticorpos anti-rábicos reduziram significativamente no dia 60. Houve diferença significativa (p<0,05) entre a freqüência de animais imunizados entre os grupos controle e tratados nos dias 30 e 60. No dia 60, o grupo controle não diferiu do G2. Além disso, não houve diferença significativa (p<0,05) na freqüência de animais nos dias 30 e 60, no grupo controle ou nos grupos tratados (G2, G3, G4 e G8). Conclui-se que o probiótico (Proenzime®) aumentou a resposta imune humoral em bovinos imunizados com vacina anti-rábica.