Orientador: Paulo Cezar Ceresini / Resumo: Na primeira etapa da nossa pesquisa propusemos e testamos a utilização de um método baseado em leitor automatizado de microplacas para detectar resistência a fungicidas em populações do fungo hemibiotrófico fitopatogênico Pyricularia graminis-tritici (Pygt) associado à brusone do trigo no Brasil. A disponibilidade de um método mais rápido, acurado e eficiente para detecção de resistência a fungicidas facilitaria a tomada de decisão sobre o manejo químico da brusone do trigo no país. Como há indícios da ineficácia de fungicidas triazóis (DMI) no controle da brusone do trigo e evidências da ocorrência generalizada de resistência a estrobilurinas (QoI) em populações de Pygt no Brasil, inicialmente, testou-se a aplicação do método de microplacas para detecção de resistência a estes dois grupos de fungicidas. O método de microplaca foi acurado em discriminar a variação fenotípica na sensibilidade entre isolados do patógeno aos fungicidas DMI tebuconazol e epoxiconazol e ao fungicida QoI azoxistrobina. Economicamente, ambos os métodos representam um alto investimento inicial. Portanto, é necessário analisar, de forma integral, as necessidades de cada laboratório ou grupo de pesquisa quanto à aquisição dos equipamentos necessários para a fenotipagem visando detecção de resistência a fungicidas em atividades de rotina. Na segunda etapa do nosso estudo buscou-se evidências de resistência ao fungicida SDHI fluxapiroxade em populações de Pygt. Para se estabelecer o baseline de populaçõe... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Mestre

Made available in DSpace on 2014-08-26T17:15:06Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) 91.pdf: 7442873 bytes, checksum: 27b69519fc283b4bdd1b15559627fb79 (MD5) Previous issue date: 2009 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Nacional de Controle de Qualidade em Saúde / O presente estudo é uma aplicação prática do conceito dos Três Rs (3Rs) de Russell e Burch (1959) nos ensaios de controle da qualidade de imunobiológicos para Raiva preconizados pela Farmacopéia Brasileira através de: uma análise retrospectiva de dados para a Redução do nº de animais no Ensaio de Potencia NIH para vacina contra raiva de uso humano (vaccinum rabiei ad usum humanum); mudanças no método de avaliação da inativação viral destas vacinas utilizando animais e células e validação de um ensaio in vitro para substituir o ensaio in vivo no teste de potência de imunoglobulinas anti-rábicas (Immunosera rabicum ex animali ad usum humanum e immunoglobulinum humanum rabicum). Todos os três protocolos de ensaio testados no estudo demonstraram viabilidade de utilização. / The present study is a practical application of the Russell and Burch 3Rs concept (1959) in the in vivo tests described in the Farmacopéia Brasileira for quality control of rabies biologicals by testing: A reduction in the number of mice in the NIH potency test for rabies vaccine for human use (vaccinum rabiei ad usum humanum); changes in the evaluation of virus inactivation method using suckling mice and cells as an alternative to the current Brazilian Pharmacopoeia official test (Reduction, Refinement and Replacement) and the validation of an in vitro assay to replace the in vivo assay for the potency test of Rabies Immunoglobulins (Immunosera rabicum ex animali ad usum humanum e immunoglobulinum humanum rabicum) (Replacement). All the three assay protocols have shown viability of use.

A doença de Chagas é uma zoonose causada pelo protozoário flagelado Trypanosoma cruzi. Estima-se que 8 milhões de pessoas estão infectadas com o T. cruzi em todo o mundo, principalmente na América Latina. Testes tradicionais de diagnóstico estão sendo gradualmente substituídos por métodos inovadores. A utilização de antígenos recombinantes foi proposta nos anos 90, e várias combinações foram testadas com soros de pacientes com diferentes formas clínicas de diferentes regiões da América Latina. Apesar do ganho em especificidade, estes testes apresentaram menor sensibilidade, frustrando expectativas. Este estudo objetivou analisar a variabilidade genética dos genes KMP11 e 1F8 que codificam antígenos comumente utilizados em diagnóstico experimental. Cepas de T. cruzi pertencentes a diferentes sub-grupos taxonômicos e de diferentes regiões foram analisadas para avaliar o impacto da variação antigênica em testes de diagnóstico. Maximizando a sensibilidade, evitar reatividade cruzada com epítopos de outros agentes patogênicos deve permitir a concepção de melhores testes rápidos. Num primeiro passo, DNA genômico foi extraído das seguintes cepas: Dm28c, Colombiana, Y, 3663, 4167, LL014 e CL Brener e foi realizada a amplificação dos genes 1F8 e KMP11 que codificam antígenos a partir destas cepas. Em seguida foram realizadas a clonagem, sequenciamento, expressão e detecção dos antígenos recombinantes. Na etapa final, análises de estruturas secundárias e terciárias, a última apenas para o antígeno 1F8, visualizaram as diferenças nas sequências de aminoácidos obtidas a partir de sequenciamento de DNA. Os resultados apresentados neste estudo mostram que o antígeno KMP11 de T. cruzi possui uma similaridade na sequência de aminoácidos muito elevada com o T. rangeli, mostrando a necessidade de um mapeamento antigênico desta proteína em todos os tripanosomatídeos que apresentaram alta similaridade com o antígeno de T. cruzi, como o T. rangeli, para verificar a presença de epítopos específicos de T. cruzi. O antígeno 1F8 pode ser uma ferramenta útil no diagnóstico da doença de Chagas e que será necessário aprofundar os conhecimentos sobre os determinantes antigênicos para futuramente elaborar poli-epítopos sintéticos adaptados de um maior número possível de antígenos, obtendo a maior especificidade e sensibilidade nos testes de diagnóstico sorológico e de teste rápido da doença de Chagas. Este estudo representa um passo crucial para a otimização de antígenos recombinantes para o diagnóstico da doença de Chagas. / Chagas disease is a zoonosis caused by the flagellate protozoan Trypanosoma cruzi. An estimated 8 million people are infected with T. cruzi worldwide, mostly in Latin America. Traditional diagnostic tests are gradually being replaced by more innovative methods, such as rapid tests and Real Time PCR. The use of recombinant antigens in serology or rapid tests has been proposed in the 90s, and several combinations were tested with sera from patients with different clinical forms in different regions in Latin America. Despite the gain in specificity, these tests showed lower sensitivity, frustrating expectations. This study aims to analyze the genetic variability of KMP11 and 1F8 genes coding for antigens commonly used in such experimental diagnostic. T. cruzi strains belonging to different taxonomic sub-groups and different regions were analyzed in order to assess the impact of antigenic variation in diagnostic tests. Maximizing sensitivity and avoiding cross-reactive epitopes for other pathogens should allow for the design of better rapid tests. In a first step, genomic DNA was extracted from the following strains: DM28c, Colombiana, Y, 3663, 4167, LL014 and CL Brener and we performed amplification of the 1F8 and KMP11 antigen encoding genes from these strains. Gene fragments were cloned, sequenced, and subcloned in expression vectors, followed by detection of the recombinant antigens. Using structural prediction and modeling, secondary and tertiary structures were analyzed the latter only for the 1F8 antigen, to visualize the differences in the amino acid sequences revealed from DNA sequencing. The results presented in this study show that the KMP11 T. cruzi antigen, has a very high similarity in amino acid sequence with T. rangeli, showing the need for antigenic mapping of this protein in all trypanosomatids that showed high similarity with the T. cruzi and T. rangeli, for the presence of specific epitopes of T. cruzi. The 1F8 antigen may be a useful tool in the diagnosis of Chagas disease and will need to know more about the antigenic determinants to further develop poly-epitope synthetic adapted from a larger number of possible antigens, obtaining the highest specificity and sensitivity in tests serological diagnosis and rapid test for Chagas disease.This study represents a crucial step for the optimization of recombinant antigens for the diagnosis of Chagas disease.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:40:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 403397 bytes, checksum: 53ddbec677ab7218f189b9934a4c184b (MD5) Previous issue date: 2007-07-23 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / The objective of this work was to evaluate the application of the LERCAFÉ test to estimate germination and characterize different types of injuries/deterioration in coffee seeds and to determine new combinations of concentration of sodium hypochlorite, imbibition time and temperature-time exposure to make the LERCAFÉ test even more economical and faster. The experiments were conducted at the Seed Research Laboratory of the Federal University of Viçosa. Three experiments were carried out using seeds of coffee variety Catuaí IAC 44. The experiment I included seeds with 33, 28, 23, 18 and 13% of tenors of water (wet basis) stored in impermeable packages at 20±3ºC. Seeds were evaluated through the tests of germination and LERCAFÉ, in which the percentages of germinated and non-germinated seeds were calculated and deterioration during storage characterized. The LERCAFÉ test consisted of imbibition of seeds without parchment in solution of 2.5% active chlorine for 3 hours at 25ºC in BOD, using 100 mL of sodium hypochlorite solution per 50 seeds or corresponding volume. Seeds were then washed in running tap water and soaked in distilled water for 40 minutes. The tests were carried out at 4 storage times: zero, two, four and six months. In the experiment II, the seeds were subjected to different types of damages, and the treatments consisted of non-damaged seeds, seeds with mechanical damage, heat damage (at 40 and 60ºC) and bug damage. Seeds were then evaluated by tests of germination and LERCAFÉ (same as experiment I), calculating the percentages of germinated and non-germinated seeds and characterizing the deterioration during storage. In the experiment III, the seeds were evaluated by the tests of germination and LERCAFÉ by calculating the percentages of germinated and non-germinated seeds. The following treatments were applied: imbibition in solution of sodium hypochlorite in water at the concentrations of 2.5; 3.5 and 4.5% of active chlorine, imbibition times of 1, 2 and 3 hours, at 25, 30 and 35ºC. In all the treatments, the seeds had the parchment manually removed and were stored in gerboxes with screen, soaked in sodium hypochlorite in the proportion of 100 mL of solution per 50 seeds or corresponding volume at temperatures, imbibition times and concentrations according to the treatments. Following the imbibition times, seeds were washed in running tap water and soaked in distilled water for 40 minutes. In the experiment I, germination decreased with storage for all the tested moisture contents. The LERCAFÉ test showed larger percentages of seeds with clear endosperm when evaluated before storage (high germinative power) and larger percentages of seeds with dark endosperm (brown or black) at the six months of storage (low germinative power). The germination estimated by the LERCAFE test had high correlation (r>0.99) with the values from the germination test. The results obtained from the experiment II showed that the LERCAFÉ test is efficient to estimate germination and characterize the different types of injuries in coffee seeds. The germination results estimated by the LERCAFÉ test had high correlation with the results from the germination test for the three types of injuries. The mechanical damage was characterized by a fissure in the embryo region and/or in the region opposed to the embryo, with a green stain surrounding the fissure borders. The heat damage, by drying seeds at 40 and 60ºC, was characterized by scattered green stains, partially or totally covering the seed endosperm. A sunken lesion surrounded by a green ring characterized the damage by coffee berry borer. In the experiment III the combinations 2.5% of active chlorine, at 35ºC, for 3 hours and 3.5% of active chlorine, at 30ºC, for 2 hours, were efficient to estimate seed germination, indicating the possibility of reducing the time for carrying the test out. / O objetivo do presente trabalho foi estudar a utilização do teste LERCAFÉ para estimar a germinação e caracterizar diferentes tipos de injúrias/deteriorações em sementes de cafeeiro, bem como definir novas combinações de concentração do hipoclorito de sódio, tempo de embebição e temperatura de exposição, para tornar o teste LERCAFÉ ainda mais econômico e rápido. Os experimentos foram conduzidos no Laboratório de Pesquisa de Sementes da Universidade Federal de Viçosa. Foram realizados três experimentos, utilizando-se sementes de cafeeiro da variedade Catuaí IAC 44. No experimento I, foram utilizadas sementes com 33, 28, 23, 18 e 13% de umidade (base úmida), armazenadas em embalagem impermeável, à temperatura de 20±3ºC. As sementes foram avaliadas pelos testes de germinação e LERCAFÉ, no qual foi computada a percentagem de sementes germináveis e não germináveis, caracterizando-se a deterioração durante o armazenamento. O teste LERCAFÉ consistiu na embebição das sementes sem pergaminho em solução a 2,5% de cloro ativo, por 3 horas, a 25ºC, em BOD, adotando-se uma proporção de 100 mL de solução de hipoclorito de sódio para 50 sementes ou volume correspondente. Em seguida, as sementes foram lavadas em água corrente e embebidas em água destilada por 40 minutos. Os testes foram realizados aos zero, dois, quatro e seis meses de armazenamento. No experimento II, as sementes foram submetidas a diferentes tipos de injúrias, sendo os tratamentos constituídos de sementes sem injúria, sementes com injúria mecânica, sementes com injúria por secagem à temperatura de 40 e 60ºC e sementes brocadas. As sementes foram avaliadas pelos testes de germinação e LERCAFÉ (idem experimento I), no qual foi computada a percentagem de sementes germináveis e não germináveis, caracterizando-se os diferentes tipos de injúrias. No experimento III, as sementes foram avaliadas pelos testes de germinação e LERCAFÉ, no qual foi computada a percentagem de sementes germináveis e não germináveis. Os tratamentos foram: embebição em solução aquosa contendo hipoclorito de sódio nas concentrações de 2,5; 3,5 e 4,5% de cloro ativo, durante período de embebição de 1, 2 e 3 horas, à temperatura de 25, 30 e 35ºC. Para todos os tratamentos, as sementes, após terem seu pergaminho removido manualmente, foram acondicionadas em caixas gerbox com tela, onde ficaram embebidas em solução de hipoclorito de sódio, adotando-se a proporção de 100 mL de solução de hipoclorito de sódio para 50 sementes ou volume correspondente, numa concentração, tempo de embebição e temperatura de acordo com os tratamentos estabelecidos. Transcorrido o período de embebição, as sementes foram lavadas em água corrente e embebidas em água destilada por 40 minutos. No experimento I, observou-se, para todas as umidades estudadas, decréscimo na germinação durante o armazenamento. Pelo teste LERCAFÉ, observaram-se maiores percentagens de sementes com endosperma de coloração clara quando avaliadas antes do armazenamento (alto poder germinativo) e maiores percentagens de sementes com endosperma de coloração escuro (marrom ou preto) aos seis meses de armazenamento (baixo poder germinativo). Os valores de germinação estimados pelo teste LERCAFÉ apresentaram alta correlação (r>0,99) com os valores do teste de germinação. Os resultados obtidos no experimento II mostraram que o teste LERCAFÉ é eficiente para estimar a germinação e caracterizar os diferentes tipos de injúrias em sementes de cafeeiro. Para os três tipos de injúrias, o resultado de germinação, estimada pelo teste LERCAFÉ, apresentou alta correlação com os resultados obtidos pelo teste de germinação. A injúria mecânica caracterizou-se por uma fenda na região do embrião e/ou na região oposta ao embrião, aparecendo nas bordas destas aberturas uma mancha de coloração verde. A injúria térmica, por secagem à temperatura de 40 e 60ºC, caracterizou-se pelo aparecimento de manchas esverdeadas espalhadas, atingindo parcialmente ou totalmente o endosperma da semente. A injúria por broca-do-cafeeiro caracterizou-se por uma depressão circundada por um anel de coloração verde. No experimento III as combinações 2,5% de cloro ativo, a 35ºC, por 3 horas e 3,5% de cloro ativo, a 30ºC, por 2 horas foram eficientes para estimar a germinação de sementes de cafeeiro, indicando ser possível reduzir o tempo para realização do referido teste.

Submitted by PRISCILA SANTOS CASADO null (pri.casado@hotmail.com) on 2017-10-22T18:46:39Z No. of bitstreams: 1 Dissertação Final - Priscila Casado.pdf: 1866790 bytes, checksum: 8d4b39875813bd43bc592acd4b71faef (MD5) / Approved for entry into archive by Luiz Galeffi (luizgaleffi@gmail.com) on 2017-10-26T15:50:29Z (GMT) No. of bitstreams: 1 casado_ps_me_ilha.pdf: 1866790 bytes, checksum: 8d4b39875813bd43bc592acd4b71faef (MD5) / Made available in DSpace on 2017-10-26T15:50:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 casado_ps_me_ilha.pdf: 1866790 bytes, checksum: 8d4b39875813bd43bc592acd4b71faef (MD5) Previous issue date: 2017-08-31 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Na primeira etapa da nossa pesquisa propusemos e testamos a utilização de um método baseado em leitor automatizado de microplacas para detectar resistência a fungicidas em populações do fungo hemibiotrófico fitopatogênico Pyricularia graminis-tritici (Pygt) associado à brusone do trigo no Brasil. A disponibilidade de um método mais rápido, acurado e eficiente para detecção de resistência a fungicidas facilitaria a tomada de decisão sobre o manejo químico da brusone do trigo no país. Como há indícios da ineficácia de fungicidas triazóis (DMI) no controle da brusone do trigo e evidências da ocorrência generalizada de resistência a estrobilurinas (QoI) em populações de Pygt no Brasil, inicialmente, testou-se a aplicação do método de microplacas para detecção de resistência a estes dois grupos de fungicidas. O método de microplaca foi acurado em discriminar a variação fenotípica na sensibilidade entre isolados do patógeno aos fungicidas DMI tebuconazol e epoxiconazol e ao fungicida QoI azoxistrobina. Economicamente, ambos os métodos representam um alto investimento inicial. Portanto, é necessário analisar, de forma integral, as necessidades de cada laboratório ou grupo de pesquisa quanto à aquisição dos equipamentos necessários para a fenotipagem visando detecção de resistência a fungicidas em atividades de rotina. Na segunda etapa do nosso estudo buscou-se evidências de resistência ao fungicida SDHI fluxapiroxade em populações de Pygt. Para se estabelecer o baseline de populações do patógeno da brusone do trigo ao fungicida fluxapiroxade, determinou-se a distribuição de frequência de padrões de sensibilidade, com base na EC50 (concentração suficiente para inibir 50% do crescimento micelial fúngico) de cada isolado. Fenótipos extremos de sensibilidade e resistência a fluxapiroxade foram detectados nas diferentes populações do patógeno. Considerando que os fungicidas da segunda geração de SDHI são de alto risco para desenvolvimento de resistência em populações de fipatógenos, é necessária a avaliação do registro e recomendação de uso contínuo do fluxapiroxade, como único princípio ativo numa formulação para o manejo da brusone e de outras doenças do trigo no Brasil. Como estratégia anti-emergência para evitar resistência a SDHI, esse fungicida só poderia ser registrado em co-formulações com outro princípio ativo de baixo risco para resistência. / In the first part of our study, we proposed and tested the use of an automated microplate reader to detect resistance to fungicides in populations of the plant pathogenic hemibiotrophic fungus Pyricularia graminis-tritici (Pygt) associated with the wheat blast disease in Brazil. The availability of a faster, more accurate and efficient method for detecting resistance to fungicies would facilitate the decision making on the chemical management of wheat blast in the country. Because there is indication of inefficacy of triazole fungicides (DMI) for wheat blast control and evidence of the widespread occurrence of strobilurin (QoI) resistance in pathogen populations in Brazil, initially, we tested the application of the microplate method for detecting resistance to these two fungicide groups. The microplate method was accurate in discriminating the phenotypic variation in sensitivity between isolates of the pathogen to the fungicides DMI tebuconazole and epoxiconazole and the fungicide QoI azoxystrobin. Economically, both methods require a high initial investment. Therefore, it is necessary to fully analyze the needs of each laboratory or research group regarding the acquisition of the equipments necessary for phenotyping to detect resistance to fungicides in routine activities. In the second part of our study, using the microplate method, we searched for evidence of resistance to the SDHI fungicide fluxapiroxade in populations of Pygt. To establish the baseline of populations of the wheat blast pathogen to fluxapiroxade, the frequency distribution of sensitivity patterns was determined based on the EC50 (concentration sufficient to inhibit 50% mycelial fungal growth) of each isolate. Extreme phenotypes of sensitivity and resistance to fluxapiroxade were detected in the different pathogen populations. Whereas the second generation of SDHI fungicides are at high risk for development of resistance in populations of plant pathogens, it is necessary to review the labeling and recommendation of continuous application of fluxapyroxad, as the sole active ingredient in any formulation for chemical management of wheat blast and other wheat diseases in Brazil. As an antiemergence strategy to avoid the resistance to SDHI, this fungicide could only be labeled in co-formulations with another active ingredient of low risk for resistance.

A doença de Chagas é uma zoonose causada pelo protozoário flagelado Trypanosoma cruzi. Estima-se que 8 milhões de pessoas estão infectadas com o T. cruzi em todo o mundo, principalmente na América Latina. Testes tradicionais de diagnóstico estão sendo gradualmente substituídos por métodos inovadores. A utilização de antígenos recombinantes foi proposta nos anos 90, e várias combinações foram testadas com soros de pacientes com diferentes formas clínicas de diferentes regiões da América Latina. Apesar do ganho em especificidade, estes testes apresentaram menor sensibilidade, frustrando expectativas. Este estudo objetivou analisar a variabilidade genética dos genes KMP11 e 1F8 que codificam antígenos comumente utilizados em diagnóstico experimental. Cepas de T. cruzi pertencentes a diferentes sub-grupos taxonômicos e de diferentes regiões foram analisadas para avaliar o impacto da variação antigênica em testes de diagnóstico. Maximizando a sensibilidade, evitar reatividade cruzada com epítopos de outros agentes patogênicos deve permitir a concepção de melhores testes rápidos. Num primeiro passo, DNA genômico foi extraído das seguintes cepas: Dm28c, Colombiana, Y, 3663, 4167, LL014 e CL Brener e foi realizada a amplificação dos genes 1F8 e KMP11 que codificam antígenos a partir destas cepas. Em seguida foram realizadas a clonagem, sequenciamento, expressão e detecção dos antígenos recombinantes. Na etapa final, análises de estruturas secundárias e terciárias, a última apenas para o antígeno 1F8, visualizaram as diferenças nas sequências de aminoácidos obtidas a partir de sequenciamento de DNA. Os resultados apresentados neste estudo mostram que o antígeno KMP11 de T. cruzi possui uma similaridade na sequência de aminoácidos muito elevada com o T. rangeli, mostrando a necessidade de um mapeamento antigênico desta proteína em todos os tripanosomatídeos que apresentaram alta similaridade com o antígeno de T. cruzi, como o T. rangeli, para verificar a presença de epítopos específicos de T. cruzi. O antígeno 1F8 pode ser uma ferramenta útil no diagnóstico da doença de Chagas e que será necessário aprofundar os conhecimentos sobre os determinantes antigênicos para futuramente elaborar poli-epítopos sintéticos adaptados de um maior número possível de antígenos, obtendo a maior especificidade e sensibilidade nos testes de diagnóstico sorológico e de teste rápido da doença de Chagas. Este estudo representa um passo crucial para a otimização de antígenos recombinantes para o diagnóstico da doença de Chagas. / Chagas disease is a zoonosis caused by the flagellate protozoan Trypanosoma cruzi. An estimated 8 million people are infected with T. cruzi worldwide, mostly in Latin America. Traditional diagnostic tests are gradually being replaced by more innovative methods, such as rapid tests and Real Time PCR. The use of recombinant antigens in serology or rapid tests has been proposed in the 90s, and several combinations were tested with sera from patients with different clinical forms in different regions in Latin America. Despite the gain in specificity, these tests showed lower sensitivity, frustrating expectations. This study aims to analyze the genetic variability of KMP11 and 1F8 genes coding for antigens commonly used in such experimental diagnostic. T. cruzi strains belonging to different taxonomic sub-groups and different regions were analyzed in order to assess the impact of antigenic variation in diagnostic tests. Maximizing sensitivity and avoiding cross-reactive epitopes for other pathogens should allow for the design of better rapid tests. In a first step, genomic DNA was extracted from the following strains: DM28c, Colombiana, Y, 3663, 4167, LL014 and CL Brener and we performed amplification of the 1F8 and KMP11 antigen encoding genes from these strains. Gene fragments were cloned, sequenced, and subcloned in expression vectors, followed by detection of the recombinant antigens. Using structural prediction and modeling, secondary and tertiary structures were analyzed the latter only for the 1F8 antigen, to visualize the differences in the amino acid sequences revealed from DNA sequencing. The results presented in this study show that the KMP11 T. cruzi antigen, has a very high similarity in amino acid sequence with T. rangeli, showing the need for antigenic mapping of this protein in all trypanosomatids that showed high similarity with the T. cruzi and T. rangeli, for the presence of specific epitopes of T. cruzi. The 1F8 antigen may be a useful tool in the diagnosis of Chagas disease and will need to know more about the antigenic determinants to further develop poly-epitope synthetic adapted from a larger number of possible antigens, obtaining the highest specificity and sensitivity in tests serological diagnosis and rapid test for Chagas disease.This study represents a crucial step for the optimization of recombinant antigens for the diagnosis of Chagas disease.

Introduction: Human Visceral Leishmaniasis (HVL) is a major public health problem in Brazil with more than 3,500 new cases per year and can lead to death if not treated. The gold standard for diagnosis is the parasitological test, but it is an invasive, expensive technique, and does not present ideal sensitivity. The serologic Indirect Immunofluorescence test is available in the public health system, however, this low sensitive that technique that requires time, equipment. Currently, there has been an investment in the development of rapid immunochromatographic tests that show good sensitivity and specificity, in addition to being faster, practical and economical. The rK39 is the immunoassay currently used for the diagnosis of HVL and has international production. Methodology: This study evaluated three new rapid immunochromatic tests (TRs) for screening of HVL, these tests were produced by Gonçalo Moniz Research Center (Fiocruz). The three tests were identified as: Test 1, comprising the recombinant antigen Lci1A; Test 2, formed by the recombinant antigen Lci2B; and Test 3, comprising the conjugate of the two antigens. A total of 159 sera from different individuals were used. The group "cases" consisted of 79 sera from patients diagnosed with VL, it considered compatible clinical symptoms (fever associated with splenomegaly and hepatomegaly), bone marrow culture and / or rK39 positive test, pancytopenia and therapeutic success. The group of "non-cases" consisted of 90 sera from patients with other diseases and healthy people. Results: The sensitivity values were good for the three tests (over 90%), but the specificity of test 1 was very low (10,0%). As for tests 2 and 3, the specificities were 90.0% and 83.3%, respectively. Conclusion: The results indicate that both test 2 has potential for use as diagnostic screening for VL in humans. / Introdução: A leishmaniose visceral humana (LVH) é um importante problema de saúde pública no Brasil com mais de 3.500 novos casos anuais e pode ser fatal quando não tratada. O padrão-ouro para diagnóstico é o teste parasitológico, porém é uma técnica invasiva, dispendiosa, além de não apresentar sensibilidade ideal. No Sistema público de Saúde é disponibilizado o teste sorológico Imunofluorescência Indireta, entretanto, é uma técnica que demanda tempo, equipamentos, pessoal treinado e também apresenta sensibilidade limitada. Os testes imunocromatográficos rápidos, apresentam boa sensibilidade, especificidade, além de práticos, rápidos e econômicos. O mais utilizado é o rK39 (produto importado). Portanto, é de grande valia ter outro teste equivalente com produção nacional, a fim de ter outra alternativa com igual eficiência e com menor custo. Metodologia: no estudo atual foram avaliadostrês testes imunocromatográficos rápidos (TRs) para o diagnóstico da LVH. Os testes foram produzidos pelo Centro de Pesquisa Gonçalo Moniz (Fiocruz) e identificados como teste 1, constituído pelo antígeno recombinante Lci1A; teste 2, formado pelo antígeno recombinante Lci2B e teste 3 composto pelo conjugado dos antígenos citados. O grupo de casos foi composto por 79 soros de pacientes com diagnóstico de LV, a partir de clínica compatível (febre associada a esplenomegalia e hepatomegalia), mielocultura e/ou rK39 positivos, pancitopenia e sucesso terapêutico. O grupo de não casos foi formado por 90 soros de pacientes com outra patologia e pessoas sadias. Resultados: os valores de sensibilidade foram bons para os três testes (acima de 90%), porém a especificidade do teste 1 foi muito baixa (10,0%), já para os testes 2 e 3, as especificidades foram 90,0% e 83,3%, respectivamente. Conclusão: Os resultados mostram que o teste 2 apresenta potencial para utilização como triagem diagnóstica da LVH.

Submitted by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2016-10-05T14:30:57Z No. of bitstreams: 2 Dissertaçao - Adriano Badotti Grassi - 2007.pdf: 1439206 bytes, checksum: 031af098879a0122f9c34462d0323a5f (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2016-10-05T14:31:18Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertaçao - Adriano Badotti Grassi - 2007.pdf: 1439206 bytes, checksum: 031af098879a0122f9c34462d0323a5f (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2016-10-05T14:31:18Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertaçao - Adriano Badotti Grassi - 2007.pdf: 1439206 bytes, checksum: 031af098879a0122f9c34462d0323a5f (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2008-02-25 / Objectives: This study compared two leprosy rapid tests detecting (1) IgM against PGL-I (ML-Flow test, KIT, Amsterdam, Netherlands) or (2) IgM, IgG and IgA against PGL-I (ML-ICA, Yonsei University, South Korea). Methods: Whole blood and serum from untreated multibacillary (MB; n=50) and paucibacillary (PB; n=48) leprosy patients (Reference Center for Diagnosis and Treatment, Goiania, central Brazil), MB household contacts (HHC; n=35) and healthy endemic controls (EC; n=50) were tested. Leprosy patients were classified by dermato-neurological evaluation, bacillary index (BI) and histopathology. Median age was 29 years, 39.9% males. MB patients had BB-BL-LL leprosy (median BI=2.0), PB patients had TT-BT leprosy. Results: (1) Using sera, ML Flow positivity of MB patients was comparable to ML-ICA positivity. (2) For ML-Flow tests, the positivity was comparable with whole blood and serum. (3) Among PB leprosy ML- flow positiviy was comparable for whole blood and serum but it was higher than the ML-ICA seropositivity in whole blood and serum. (4) Among MB leprosy patients positivity of ML Flow test in serum and whole blood was comparable to the positivity of ML-ICA in serum. Conclusion: ML-Flow test is more field applicable than ML-ICA since high positivity was observed among MB patients using whole-bood. / Objetivos: Este estudo comparou dois testes rápidos para hanseníase que detectam (1) IgM anti-PGL-I (ML-Flow test, KIT, Amsterdam, Holoanda) ou (2) IgM, IgG e IgA anti-PGL-I (ML-ICA, Yonsei University, Coréia do Sul). Materiais e Métodos: Foram testados sangue-total e soro de pacientes com hanseníase multibacilar (MB; n=50) e paucibacilar (PB; n=48), virgens de tratamento (Centro de Referência em Diagnóstica e Terapêutica, Goiânia, GO), contactantes intradomiciliares de MB (CD; n=35) e indivíduos saudáveis de área endêmica (CS; n=50). Pacientes com hanseníase foram classificados segundo avaliação dermato-neurológica, índice baciloscópico (IB) e exame histopatológico. A mediana da idade foi de 29 anos, 39.9% do sexo masculino. Pacientes MB apresentavam as formas BB-BL-LL (mediana do IB=2.0), Pacientes PB apresentavam as formas TT-BT. Resultados: (1) Para o grupo MB não observamos diferença significante entre os resultados dos testes ML-Flow em amostras de sangue-total e soro e os resultados do ML-ICA em amostras de soro; (2) Em todos os grupos (MB, PB, CD e CS) que não observamos diferença estatisticamente significativa entres os resultados do ML-Flow em sangue-total ou soro; (3) Entre os pacientes PB o ML-Flow apresentou sensibilidade significativamente maior que o teste ML-ICA, em amostras de sangue-total e em soro; (4) O teste ML-ICA em soro discriminou melhor os pacientes MB e PB. Conclusão: O teste ML-Flow mostrou-se melhor para utilização em situações de campo que o ML-ICA, pois apresentou alta reatividade em sangue-total em pacientes MB.

Made available in DSpace on 2016-03-15T19:36:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Jefferson Vieitas Fragoso.pdf: 11096922 bytes, checksum: 614fce3b64151fd99da32b8caf716e7f (MD5) Previous issue date: 2015-02-05 / This study aims to evaluate through destructive testing of steel specimens quick tempered subjected to a variation in the number of tempering treatments ranging from 1 to 4 cycles. Every condition of heat treatment at least three specimens were subjected to Charpy impact test on specimens without notch determining the modulus of rupture by three points flexion test. The samples were subjected to chemical and metallographic analyzes. The fracture surfaces were observed visually, by using microscope with increases ranging from 8 to 20 times, and also by scanning electron microscopy to determine the active fracture mechanisms. This experimental technique allowed the characterization in terms of semi quantitative chemical composition of the phases present in the specimens heat treated, namely primary and secondary carbides. The results were discussed in the light of information gathered in the literature review, and one of the main conclusions is that the sequence of tempering in the league studied did not alter significantly the energy absorbed results in impact tests and flexion resistance of bodies evidence submitted to bending test at three points. / O presente trabalho tem como objetivo avaliar, através de ensaios destrutivos, corpos de prova de aço rápido temperados, submetidos a uma variação no número de tratamentos de revenimento variando de 1 a 4 ciclos. A cada condição de tratamento térmico, pelo menos três corpos de prova foram submetidos ao Ensaio de Impacto Charpy em corpos de prova sem entalhe, determinando o módulo de ruptura de ensaio de flexão por três pontos. As amostras foram submetidas a análise química e metalográfica e, testes de dureza. As superfícies de fratura foram observadas a olho nu, através da utilização de estéreo microscópio com aumentos variando de 8 a 20 vezes, e também, por microscopia eletrônica de varredura para determinação dos mecanismos de fratura atuantes. Esta técnica experimental permitiu a caracterização, em termos, de composição química semi-quantitativa, das fases presentes nos corpos de prova tratados termicamente, a saber, os carbonetos primários e secundários. Os resultados foram discutidos à luz das informações colhidas na revisão bibliográfica, onde uma das observações principais é a de que a seqüência de revenimentos na liga estudada não altera de forma significativa os resultados de energia absorvida em ensaios de impacto e resistência à flexão, de corpos de prova submetidos ao ensaio de flexão a três pontos.

Cryopreservation is currently the universal method for embryo storage, transport, sanitary control and trading. The conventional bovine embryo freezing method still has some drawbacks such as the freezing period and costs of the freezing equipment. In order to decrease costs and time, the effect of thealose on ultra-rapid freezing with ethylene glycol was evaluated. Ninety seven in vivo produced bovine embryos were randomly distributed in two treatments for ultra-rápid deep freezing with 3.M ethylene glycol (T1; n= 46) and 3.M ethylene glycol + 0.3M trehalose (T2; n= 51). In T1, embryos were exposed to a 3.0M ethylene glycol in Emcare® (ICP) holding media and in T2 to a 3.0M ethylene glycol plus 0.3M trehalose in Emcare® holding media. Embryos of both treatments were kept for 2 minutes in the freezing solutions; loaded in 0,25cc straws and there after they were exposed to N2 vapor during 20 seconds to be plunged immediately into liquid nitrogen. After thawing, embryos were transferred to previously synchronized recipients resulting at 28 days in 7 (15.21%) pregnancies in T1 and also 7 (13.72%) in T2. No significant difference was detected between treatments (P>0.05). The trehalose and ethylene glycol solution is suitable for direct transfer of bovine embryos. However, the conception rate obtained in this study do not allow its indication for commercial embryo freezing. / A criopreservação tem fundamental importância na armazenagem, transporte, controle sanitário e comércio de embriões. O método de congelamento rápido convencional de embriões bovinos ainda apresenta entraves como o tempo de execução e o alto valor comercial do equipamento. Com a finalidade de minimizar tempo de congelamento e os custos, avaliou-se o efeito da trealose no congelamento ultra-rápido de embriões bovinos com etilenoglicol. Noventa e sete (n=97) embriões bovinos produzidos in vivo foram congelados pelo método ultra-rápido com 3,0M de etilenoglicol e 3,0M de etilenoglicol + 0,3M de trealose. Os embriões foram distribuídos aleatóriamente em dois tratamentos. No tratamento 1 (T1) quarenta e seis (n= 46) embriões foram expostos à solução de 3,0M de etilenoglicol em solução de manutenção Emcare®(ICP) e cinqüenta e um (n= 51) embriões foram congelados com 3,0M de etilenoglicol associado a 0,3M de trealose em solução de manutenção Emcare®. Os embriões foram mantidos na solução de congelamento por 2 minutos, envasados em palhetas de 025cc, expostos ao vapor de nitrogênio por 20 segundos e submersos no nitrogênio líquido. Após o descongelamento, os embriões foram transferidos para receptoras previamente sincronizadas, resultando aos 28 dias, em 7 (15,21%) gestações no T1 e 7 (13,72%) no T2. Não houve diferença (P>0,05) entre os tratamentos. O acréscimo de trealose ao etilenoglicol mostrou-se viável para a transferência direta dos embriões, porém o índice de concepção obtido ainda não permite sua indicação no congelamento comercial de embriões bovinos.