A depressão se constitui um transtorno de alta frequência mundial, apresentando como um dos fatores etiológicos, a exposição a eventos estressores. Em termos neurobiológicos, vários trabalhos da literatura sugerem a importância das projeções serotoninérgicas que partem do Núcleo Mediano da Rafe (NMnR) para o Hipocampo Dorsal (HD) na adaptação ao estresse, a partir da desconexão das associações aversivas previamente aprendidas de suas consequências comportamentais. Assim, o presente trabalho apresenta como objetivo investigar o envolvimento dos receptores tipo 5-HT1a localizados no Núcleo Mediano da Rafe no processo de evocação de memórias aversivas. Para isso, ratos Wistar foram submetidos a cirurgia estereotáxica para a implantação de uma cânula-guia direcionada ao Núcleo Mediano da Rafe (NMnR). Passado o período de recuperação, os animais foram expostos a 40 choques inescapáveis (0,6mA; 10) (condição experimental) em uma caixa de vai-e-vem. Após 24 h, os animais receberam duas injeções intracerebrais de Salina (Sal), 8OHDPAT (DPAT; 3nmoles/0,2µl; agonista de 5-HT1aR) e/ou WAY100635 (WAY; 0,3nmoles/0,2µl; antagonista de 5-HT1aR) combinadas de forma a compor os seguintes grupos experimentais: Sal+Sal, WAY+Sal, Sal+DPAT e WAY+DPAT. Cinco minutos após as injeções, todos animais foram submetidos a uma sessão de teste, na qual foram apresentados 30 choques elétricos escapáveis (0,4mA; 10) nas patas, sinalizados por uma luz (15W; 20) que permanecia acesa durante a apresentação dos choques. Durante a sessão teste foram registrados a latência, o número de esquivas, fugas, falhas e o total de cruzamentos. Um grupo controle também foi realizado, sendo que os animais foram apenas colocados na caixa, sem exposição a choques inescapáveis, sendo testados 24 h após. Os resultados foram analisados pela ANOVA de medidas repetidas. Também foi calculada porcentagem de animais desamparados (%DA) em cada condição, analisada pelo teste do Qui-quadrado. A pré-exposição a choques inescapáveis levou ao desenvolvimento de desamparo aprendido, efeito esse não atenuado pelo tratamento com DPAT, o que pode ser observado na elevada %DA em todos os grupos. Por outro lado, na condição controle, observou-se uma reduzida %DA para todos os tratamentos. Nossos resultados sugerem que a ativação de receptores de tipo 5-HT1a do NMnR não está envolvida na evocação de memórias aversivas. / The depression is a high-frequency disorder in the world, having as one of the etiological causes the exposure to stressful events. In neurobiological terms, several studies of literature suggest the importance of serononinergic projections from the Median Raphe Nucleus for dorsal hipocampus in adaptation to stress, from the disconnection of aversive associations previously learnead of its behavioral consequences. Thus, the aim of this work is to investigate the involvement of 5-HT1a receptors located in the Median Raphe Nucleus in the aversive memory recall process. For this, Wistar rats were submitted to sterioc surgery for the implantation of a guided cannula aimed to MnRN. After the recovery period, the animals were exposed to 40 inescapable shocks (0,6mA; 10 \") (experimental condition) in a shuttled box. After 24 h, the animals received two intracerebral injections of saline (Sal), 8OHDPAT (DPAT; 3nmoles / 0,2l; 5-HT1aR agonist) and / or WAY100635 (WAY; 0,3nmoles / 0,2l; antagonist 5 -HT1aR) combined to compose the following groups: Salt + Salt + WAY Sal, Sal + DPAT and WAY + DPAT. Five minutes after the injections, all animals were submitted to a test session in which were presented 30 escapable eletric footshocks (0,4mA; 10 \") sinilized by a light (15W, 20\") which remained on during the presentation of shock. During the test session were recorded latency for these responses, the number of avoidance, escape, failure and the total crossings. A control group was performed, and the animals just placed in the shuttle box, without exposing inescapable shocks. The results were analyzed by repeated measures ANOVA. It was also calculated percentage of helpless animals (%HA) in each condition analyzed by chi-square test. The pre-exposure to inescapable shocks led to the development of learned helplessness, this effect does not attenuated by treatment with DPAT, which can be observed in high % of all groups. On the other hand, in the control condition, there is a reduced % of all treatments. Our results suggest that activation of 5-HT 1a of NMnR is not involved in the evocation of aversive memories.

La corteza prefrontal (CPF) juega un papel crucial en funciones cerebrales superiores como la cognición, siendo la corteza cerebral más evolucionada en humanos. La corteza cerebral está densamente inervada por aferencias aminérgicas que se originan en el cerebro medio: los núcleos del rafe (NR), el locus coeruleus y el área tegmental ventral, que ejercen un papel neuromodulador de la actividad cortical. Estudios en humanos han implicado a la CPF en patologías psiquiátricas severas como la depresión o la esquizofrenia. A su vez, la mayor parte de los fármacos antidepresivos utilizados actualmente (inhibidores selectivos de la recaptación de serotonina) tienen al sistema serotoninérgico como diana terapéutica. En la presente Tesis se ha estudiado el circuito que se establece entre la CPF medial (CPFm) y los núcleos dorsal y medial del rafe (NDR y NMR) con el objetivo principal de conocer cómo se controlan recíprocamente estas dos áreas cerebrales. Para ello hemos utilizado microdiálisis intracerebral en rata despierta y electrofisiología unitaria extracelular en animal anestesiado.Específicamente, hemos descrito el mecanismo utilizado por la CPFm para controlar la actividad de las neuronas serotoninérgicas del NDR. Este mecanismo implica una excitación inicial glutamatérgica a través de receptores iGluR (NMDA y AMPA/KA), tras lo cual aumenta la liberación de serotonina en el NDR, que inhibe a otras neuronas serotoninérgicas a través de receptores 5-HT1A. Adicionalmente, la excitación de interneuronas GABAérgicas de los NR inhibe a las neuronas serotoninérgicas a través de receptores GABAA. La CPFm expresa receptores para la serotonina 5-HT1A (inhibitorios) y 5-HT2A (excitatorios) abundantemente, pero se desconoce su localización exacta y su papel funcional. Nuestros trabajos muestran cómo la activación de estos receptores corticales disminuye y aumenta, respectivamente, la actividad de las neuronas serotoninérgicas del NDR y la liberación de serotonina en la CPFm. Además, la activación cortical de receptores 5-HT2A por el alucinógeno DOI aumenta de forma global la actividad de las neuronas piramidales de la CPFm y con ello la actividad del circuito, traduciéndose en un aumento en la liberación cortical de serotonina. Así, el aumento de la actividad de las neuronas piramidales por receptores AMPA, ya sea administrando AMPA o aumentando las concentraciones extracelulares de glutamato endógeno mediante la desinhibición del tálamo, incrementan la liberación cortical de serotonina en respuesta al aumento en la actividad del circuito CPFm-NR. Estos resultados sugieren un efecto sinérgico parecido a la LTP entre la activación de receptores 5-HT2A corticales y receptores AMPA. Paralelamente, experimentos farmacológicos y lesiones del tálamo muestran que los receptores 5-HT2A responsables de la excitación piramidal inducida por DOI no se encuentran en terminales talamocorticales.Además, describimos un efecto global inhibitorio de la serotonina en la CPF. Hemos caracterizado la presencia de receptores 5-HT1A y 5-HT2A en neuronas piramidales de CPFm, que están ampliamente coexpresados y cuya actividad induce respuestas opuestas en la actividad piramidal. Se ha propuesto una localización de los receptores 5-HT1A y 5-HT2A en distintos compartimentos de las neuronas piramidales: los primeros se localizarían en el cono axonal (un lugar muy importante para la generación del potencial de acción) mientras que los segundos se encontrarían en la dendrita apical. El importante papel inhibidor de los receptores 5-HT1A en la generación del potencial de acción y la posible existencia de proyecciones GABAérgicas desde los NR explicarían el predominante papel inhibitorio que los NR ejercen en la CPFm.Finalmente describimos la presencia de receptores 5-HT3 en un conjunto de neuronas corticales localizadas cerca de la línea media, posiblemente GABAérgicas, que controlarían la actividad piramidal a nivel de su dendrita apical.Estos resultados ayudan a comprender el funcionamiento de la CPF y el papel de la serotonina en la función cerebral. / The prefrontal cortex (PFC) plays a crucial role in higher brain functions like cognition. It receives a dense innervation from the brainstem aminergic nuclei, including the serotonergic dorsal and median raphe nuclei (DR, MnR). Although the exact role of serotonergic neurotransmission in PFC remains largely unknown, the PFC contains a very large density or serotonin 5-HT1A (inhibitory) and 5-HT2A (excitatory) receptors. In addition, hallucinogens like LSD or DOI are agonists and atypical antipsychotics are antagonists at 5-HT2A receptors. Furthermore, most of the antidrepressants (selective serotonin reuptake inhibitors) target the serotonergic system.As the PFC and the raphe nuclei are implicated in major depression and schizophrenia, the main goal of this Doctoral Thesis has been to analize the circuit PFC-raphe nuclei. For this purpose we have used the microdialysis technique and single-unit extracellular recordings. Firstly, our results indicate a complex regulation of DR serotonergic neurons by medial PFC (mPFC) afferents. An initial excitation of some serotonergic neurons by descending excitatory fibers releases serotonin, which inhibits other DR neurons by acting on 5-HT1A autoreceptors. Afferents from the mPFC also inhibit serotonergic neurons through the activation of GABAergic interneurons.Secondly, the activation of 5-HT1A and 5-HT2A receptors in the mPFC decreases and increases, respectively, DR serotonergic neuron activity and serotonin release in the mPFC. Additionally, DOI-induced activation of cortical 5-HT2A receptor increases pyramidal activity. Likewise, the increase in piramidal activity through AMPA receptors, induced by locally AMPA administration or thalamic disinhibition increases cortical serotonin release. However, 5-HT2A receptors responsible for DOI cortical excitation are unrelated to thalamocortical afferents.Moreover, we report an overall inhibitory effect of raphe nuclei stimulation on PFC activity. Our results show a large coexpression of 5-HT1A and 5-HT2A receptors in pyramidal neurons of the PFC that exert opposite effects on pyramidal activity. 5-HT2A receptors are enriched in apical dendrites of pyramidal neurons. 5-HT1A receptors are mainly localized in the axon hillock, that would assign a prominent inhibitory role in the control of pyramidal activity. Our in vivo data also suggest the existence of a GABAergic projection from the raphe nuclei to the mPFC.Finally, we describe a subpopulation of cortical 5-HT3-expressing neurons, possibly GABAergic, localized near the midline that control pyramidal activity at the apical dendrite level.

Submitted by Automa??o e Estat?stica (sst@bczm.ufrn.br) on 2016-02-22T23:19:52Z No. of bitstreams: 1 RalinyOliveiraSantos_DISSERT.pdf: 9138081 bytes, checksum: 38a641e3ede8b16533d07f1b59d2e852 (MD5) / Approved for entry into archive by Arlan Eloi Leite Silva (eloihistoriador@yahoo.com.br) on 2016-02-26T19:19:40Z (GMT) No. of bitstreams: 1 RalinyOliveiraSantos_DISSERT.pdf: 9138081 bytes, checksum: 38a641e3ede8b16533d07f1b59d2e852 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-02-26T19:19:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 RalinyOliveiraSantos_DISSERT.pdf: 9138081 bytes, checksum: 38a641e3ede8b16533d07f1b59d2e852 (MD5) Previous issue date: 2014-08-11 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior - CAPES / Indiv?duos dependentes de etanol, ao reduzirem ou cessarem seu consumo, apresentam um conjunto de sinais e sintomas, dentre eles, alguns relacionados ? ansiedade. Para um melhor entendimento das bases neurais envolvidas com a ansiedade na abstin?ncia, ensaios pr?-cl?nicos v?m utilizando modelos de consumo de etanol seguido de retirada em ratos submetidos a distintos testes de ansiedade, dentre eles, o labirinto em cruz elevado. O presente estudo teve por objetivo investigar se a retirada do etanol em curto e longo prazo promoveria altera??es comportamentais sugestivas de ansiedade no teste do labirinto em cruz elevado (LCE) e no teste do campo aberto (CA) e, ainda, se influenciaria o n?mero de c?lulas imunorreativas para a serotonina (5-HT-IR) no n?cleo dorsal da rafe (NDR), fonte de inerva??o seroton?rgica ascendente relacionada ? ansiedade. Ratas Wistar com aproximadamente 90 dias de vida foram submetidas a concentra??es crescentes de etanol como ?nica fonte de dieta l?quida (2% durante os tr?s primeiros dias, seguido de 4% durante tr?s dias e 6% durante 15 dias) ou ?gua (grupo controle), ambos com livre acesso ? ra??o. Na etapa comportamental, no 21? dia de consumo, o etanol foi substitu?do por ?gua (retirada) e, ap?s 72 horas ou 21 dias de retirada, os animais controle e submetidos ? retirada foram expostos ao teste do LCE, onde foram avaliadas as porcentagens de tempo gasto e de entradas nos bra?os abertos e o n?mero de entradas nos bra?os fechados durante 5 minutos. Vinte e quatro horas ap?s o teste no LCE, os animais foram submetidos ao teste do CA por 15 minutos. Durante este per?odo avaliou-se a dist?ncia total percorrida pelos animais e durante os 5 minutos iniciais foram avaliados o tempo, a dist?ncia e o n?mero de entradas no centro do aparato. Na etapa imunoistoqu?mica, os enc?falos de animais submetidos ao consumo de etanol por 21 dias, seguidos ou n?o de retirada de 72 horas e 21 dias, e seus controles foram submetidos ? t?cnica da imunoistoqu?mica para detectar c?lulas 5-HT-IR nas por??es dorsal e caudal do NDR. Os dados comportamentais mostraram que tanto a retirada do etanol em curto prazo, quanto em longo prazo diminuiu a explora??o dos bra?os abertos do LCE. No teste do CA n?o foram observadas altera??es na locomo??o no per?odo de 15 minutos; por?m, no mesmo teste, durante os 5 primeiros minutos observou-se efeito do tipo ansiog?nico nos animais submetidos ? 22 dias de retirada do etanol. Na etapa imunoistoqu?mica, n?o foram observadas diferen?as na contagem de c?lulas 5-HTIR nas por??es dorsal e caudal do NDR dos animais submetidos ? retirada em curto e longo prazo do etanol, em rela??o ao controle. No entanto, o consumo do etanol por 21 dias reduziu a contagem de c?lulas 5-HT-IR na regi?o dorsal deste n?cleo. Em conjunto, os dados aqui obtidos demonstram um efeito do tipo ansiog?nico promovido pela retirada em curto e longo prazo do etanol n?o relacionado a altera??es na marca??o de serotonina nas por??es dorsal e caudal do NDR. / Ethanol withdrawn individuals present a wealth of signs and symptoms, some of them related with anxiety. To better understand brain areas involved in anxiety caused by ethanol abstinence, preclinical studies have been employing models of ethanol consumption followed by withdrawal in rodents submitted to behavioral tests of anxiety, such as the elevated plus-maze. The aim of this study was to investigate if short- or long-term ethanol withdrawal could alter both anxiety-related behaviors in the elevated plus-maze (EPM) and open field tests and the number of serotonin immunorreactive cels in the dorsal raphe nucleus, a midbrain area associated with anxiety. Female Wistar rats (90 days old) were submitted to increasing concentrations of ethanol (2% for 3 days, 4% for 3 days and 6% for 15 days) as the only source of liquid diet and the control group received water ad libitum. Both groups received food ad libitum. In the behavioral experiments, on 21st day of consumption, ethanol was substituted by water (withdrawal) and 72 h or 21 days after withdrawal animals were submitted to the EPM, where it was evaluated the percentage of time and entries in the open arms and the entries in the enclosed arms during 5 minutes. Twenty and four hours after testing in the EPM, animals were submitted to the open field test for 15 minutes, where the distance traveled by the animals was observed along this period. During the first 5 minutes, the distance traveled, entries and time spent in the center of the test were analyzed. In the immunohistochemistry study, animals were submitted to 21 days of consumption of ethanol followed or not by 72 hours and 21 days of withdrawal previously perfusion, brain tissue preparation and quantification of serotonin dyed cells in the dorsal and caudal portions in the dorsal raphe nucleus. Behavioral data showed that both short- and long-term ethanol withdrawals reduced the open arms exploration in the EPM. In the open field test there were no locomotor activity changes during the total 15 minutes; however, longterm ethanol withdrawal reduced the exploration in the center of the open field during the first 5 minutes. In the immunohistochemistry step, there were no differences, when short- and long-term withdrawn groups were compared with control group; nevertheless, the chronic consumption of ethanol decreased the number of serotonergic immunorreactive cells in the dorsal part of dorsal raphe nucleus. Taken together, results here obtained suggest that both short- and long-term ethanol withdrawals promoted an anxiogenic-like effect that was not related with changes in the serotonin immunorreactivity in the dorsal and caudal parts of the dorsal raphe nucleus.

Submitted by Automa??o e Estat?stica (sst@bczm.ufrn.br) on 2016-04-25T23:08:59Z No. of bitstreams: 1 MarianaDiasLeite_DISSERT.pdf: 3236887 bytes, checksum: de54a5e9a05ca367ece5cdde2f640a5c (MD5) / Approved for entry into archive by Arlan Eloi Leite Silva (eloihistoriador@yahoo.com.br) on 2016-04-28T00:04:20Z (GMT) No. of bitstreams: 1 MarianaDiasLeite_DISSERT.pdf: 3236887 bytes, checksum: de54a5e9a05ca367ece5cdde2f640a5c (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-28T00:04:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 MarianaDiasLeite_DISSERT.pdf: 3236887 bytes, checksum: de54a5e9a05ca367ece5cdde2f640a5c (MD5) Previous issue date: 2015-07-09 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior (CAPES) / A serotonina ou 5-hidroxitriptamina (5-HT) ? uma subst?ncia encontrada em muitos tecidos do organismo, inclusive no sistema nervoso atuando como neurotransmissor. Dentro do neuro-eixo, a localiza??o da maioria dos neur?nios 5-HT se sobrep?e com os n?cleos da rafe do tronco encef?lico, na linha m?dia ou em suas proximidades, de tal maneira que a 5-HT neuronal pode ser considerada um marcador dos n?cleos da rafe. Os neur?nios seroton?rgicos projetam-se para praticamente todas as ?reas do enc?falo. Estudos mostram a participa??o da serotonina na regula??o da temperatura, comportamento alimentar, comportamento sexual, ritmos biol?gicos, sono, fun??o locomotora, aprendizagem, entre outras. A anatomia destes grupos foi revisada em muitas esp?cies, inclusive em rato, coelho, gato e primatas, mas nunca antes em uma esp?cie de morcego da Am?rica do Sul. Este trabalho teve como objetivo caracterizar os grupamentos seroton?rgicos no enc?falo do morcego Artibeus planirostris, atrav?s de imunoistoqu?mica para serotonina. Sete morcegos machos adultos da esp?cie Artibeus planirostris (Microchiroptera, Mammalia) foram utilizados nesse estudo. Os animais foram anestesiados, perfundidos por via transcard?aca e tiveram seus enc?falos removidos. Sec??es coronais do enc?falo congelado dos morcegos foram obtidos em micr?tomo de deslizamento e submetidos a rea??o imunoistoqu?mica para 5-HT. Delimitamos os n?cleos linear caudal (CLi), dorsal (DR), mediano (MnR), paramediano (PMnR), pontino (PnR), magno (MgR), p?lido (RPa) e obscuro (Rob) da rafe, al?m dos grupamentos B9 e ventrolaterais rostral e caudal (RVL/CVL). Os grupamentos seroton?rgicos nesta esp?cie de quir?ptero apresentam morfologia e citoarquitetura relativamente semelhante ao descrito em roedores e primatas, confirmando a estabilidade filogen?tica desses grupamentos celulares. / Serotonin or 5-hydroxytryptamine (5-HT) is a substance found in many tissues of the body, including the nervous system acting as a neurotransmitter. Within the neuro-axis, the location of the majority of the 5-HT neurons is superimposed with raphe nuclei of the brain stem, in the median line or its vicinity, so that neuronal 5-HT can be considered a marker of the raphe nuclei. Serotonergic neurons are projected to almost all areas of the brain. Studies show the participation of serotonin in regulating the temperature, feeding behavior, sexual behavior, biological rhythms, sleep, locomotor function, learning, among others. The anatomy of these groups has been revised in many species, including mouse, rabbit, cat and primates, but never before in a bat species from South America. This study aimed to characterize the serotonergic clusters in the brain of the bat Artibeus planirostris through immunohistochemistry for serotonin. Seven adult bat males of Artibeus planirostris species (Microchiroptera, Mammalia) were used in this study. The animals were anesthetized, transcardially perfused and their brains were removed. Coronal sections of the frozen brain of bats were obtained in sliding microtome and subjected to immunohistochemistry for 5-HT. Delimit the caudal linear (CLi), dorsal (DR), median (MnR), paramedian (PMnR), pontine (PNR), magnus (MgR), pallidus (RPA) and obscurus (ROb) raphe nucleus, in addition to the groups B9 and rostral and caudal ventrolateral (RVL/CVL). The serotonergic groups of this kind of cheiroptera present morphology and cytoarchitecture relatively similar to that described in rodents and primates, confirming the phylogenetic stability of these cell clusters.

A depressão se constitui um transtorno de alta frequência mundial, apresentando como um dos fatores etiológicos, a exposição a eventos estressores. Em termos neurobiológicos, vários trabalhos da literatura sugerem a importância das projeções serotoninérgicas que partem do Núcleo Mediano da Rafe (NMnR) para o Hipocampo Dorsal (HD) na adaptação ao estresse, a partir da desconexão das associações aversivas previamente aprendidas de suas consequências comportamentais. Assim, o presente trabalho apresenta como objetivo investigar o envolvimento dos receptores tipo 5-HT1a localizados no Núcleo Mediano da Rafe no processo de evocação de memórias aversivas. Para isso, ratos Wistar foram submetidos a cirurgia estereotáxica para a implantação de uma cânula-guia direcionada ao Núcleo Mediano da Rafe (NMnR). Passado o período de recuperação, os animais foram expostos a 40 choques inescapáveis (0,6mA; 10) (condição experimental) em uma caixa de vai-e-vem. Após 24 h, os animais receberam duas injeções intracerebrais de Salina (Sal), 8OHDPAT (DPAT; 3nmoles/0,2µl; agonista de 5-HT1aR) e/ou WAY100635 (WAY; 0,3nmoles/0,2µl; antagonista de 5-HT1aR) combinadas de forma a compor os seguintes grupos experimentais: Sal+Sal, WAY+Sal, Sal+DPAT e WAY+DPAT. Cinco minutos após as injeções, todos animais foram submetidos a uma sessão de teste, na qual foram apresentados 30 choques elétricos escapáveis (0,4mA; 10) nas patas, sinalizados por uma luz (15W; 20) que permanecia acesa durante a apresentação dos choques. Durante a sessão teste foram registrados a latência, o número de esquivas, fugas, falhas e o total de cruzamentos. Um grupo controle também foi realizado, sendo que os animais foram apenas colocados na caixa, sem exposição a choques inescapáveis, sendo testados 24 h após. Os resultados foram analisados pela ANOVA de medidas repetidas. Também foi calculada porcentagem de animais desamparados (%DA) em cada condição, analisada pelo teste do Qui-quadrado. A pré-exposição a choques inescapáveis levou ao desenvolvimento de desamparo aprendido, efeito esse não atenuado pelo tratamento com DPAT, o que pode ser observado na elevada %DA em todos os grupos. Por outro lado, na condição controle, observou-se uma reduzida %DA para todos os tratamentos. Nossos resultados sugerem que a ativação de receptores de tipo 5-HT1a do NMnR não está envolvida na evocação de memórias aversivas. / The depression is a high-frequency disorder in the world, having as one of the etiological causes the exposure to stressful events. In neurobiological terms, several studies of literature suggest the importance of serononinergic projections from the Median Raphe Nucleus for dorsal hipocampus in adaptation to stress, from the disconnection of aversive associations previously learnead of its behavioral consequences. Thus, the aim of this work is to investigate the involvement of 5-HT1a receptors located in the Median Raphe Nucleus in the aversive memory recall process. For this, Wistar rats were submitted to sterioc surgery for the implantation of a guided cannula aimed to MnRN. After the recovery period, the animals were exposed to 40 inescapable shocks (0,6mA; 10 \") (experimental condition) in a shuttled box. After 24 h, the animals received two intracerebral injections of saline (Sal), 8OHDPAT (DPAT; 3nmoles / 0,2l; 5-HT1aR agonist) and / or WAY100635 (WAY; 0,3nmoles / 0,2l; antagonist 5 -HT1aR) combined to compose the following groups: Salt + Salt + WAY Sal, Sal + DPAT and WAY + DPAT. Five minutes after the injections, all animals were submitted to a test session in which were presented 30 escapable eletric footshocks (0,4mA; 10 \") sinilized by a light (15W, 20\") which remained on during the presentation of shock. During the test session were recorded latency for these responses, the number of avoidance, escape, failure and the total crossings. A control group was performed, and the animals just placed in the shuttle box, without exposing inescapable shocks. The results were analyzed by repeated measures ANOVA. It was also calculated percentage of helpless animals (%HA) in each condition analyzed by chi-square test. The pre-exposure to inescapable shocks led to the development of learned helplessness, this effect does not attenuated by treatment with DPAT, which can be observed in high % of all groups. On the other hand, in the control condition, there is a reduced % of all treatments. Our results suggest that activation of 5-HT 1a of NMnR is not involved in the evocation of aversive memories.

A abstinência ao etanol está associada ao transtorno de ansiedade. Várias estruturas e sistemas de neurotransmissores estão envolvidos na mediação deste efeito, entretanto, tais substratos ainda não foram completamente elucidados. Em modelos animais, estudos mostram aumento significativo da neurotransmissão nitrérgica em resposta à abstinência do consumo crônico de etanol. O Núcleo Dorsal da Rafe (NDR) é uma importante região envolvida na gênese da ansiedade e possui grande quantidade da isoforma neuronial da enzima Sintase do Óxido Nítrico (nNOS). Assim, o objetivo deste estudo foi verificar se a inibição da transmissão nitrérgica no NDR atenua os efeitos ansiogênicos induzidos pela abstinência do etanol. Com essa finalidade, ratos Wistar machos foram submetidos a tratamento crônico (21 dias) ou agudo (1 dia) com etanol 6%(v/v) seguido da suspensão abrupta do tratamento por 48hs. Após as 48hrs os animais receberam uma injeção intra-NDR de L-NAME (100nmoles/0,2µL; inibidor não seletivo da NOS) ou 7-NI (7-Nitro-Indazol; 5 nmoles/0,2µL; inibidor seletivo para nNOS) e 5 min. depois foram testados no Labirinto em Cruz Elevado (LCE). Em resumo, os dados mostraram que a abstinência de 48hs. do tratamento crônico com etanol promoveu efeitos ansiogênicos significativos, evidenciados pela redução do número de entradas e tempo gasto nos braços abertos do LCE, o qual foi atenuado pelo tratamento intra-NDR com L-NAME mas não com 7-NI, sugerindo o envolvimento do NO no NDR na ansiedade induzida pela abstinência do etanol / The ethanol withdrawal is linked to the disorder of anxiety. Several structures and neurotransmitter systems are involved in mediating this effect, however, such substrates have not yet been elucidated. In animal models, studies show significant increase in neurotransmission nitrérgica in response to abstinence from chronic consumption of ethanol. The Dorsal Raphe Nucleus (DNR) is an important region involved in the genesis of anxiety and has large amounts of the enzyme Sintase neuronial isoform of nitric oxide (nNOS). The aim of this study was to verify that the inhibition of transmission in the DNR nitrérgica attenuates the anxiogenic effects induced by ethanol withdrawal. For this purpose, male Wistar rats were subjected to chronic treatment (21 days) or acute (1 day) with 6% ethanol (v / v) followed by the abrupt suspension of treatment for 48 hours. 48hrs after the animals received an intra-DNR L-NAME (100nmoles / 0.2 L, non-selective inhibitor of NOS) or 7-NI (7-Nitro-indazol, 5 nmol / 0,2 L; selective inhibitor for nNOS ) and 5 min. then were tested in the elevated plus-maze (EPM). Data obtained showed that ethanol withdrawal elicited significant \"anxiety-like\" behaviors, as revealed by the decrease in the number of entries into and time spent onto the open arms of the EPM., which was attenuated by treatment with intra-DNR L-NAME but not with 7-NI. These findings are indicative of the involvement of the DNR \"anxiety-like\" behaviors induced by withdrawal of ethanol.

Estudos prévios demonstram projeções dos núcleos da rafe para áreas clássicas relacionadas ao controle do sistema cardiovascular, como locus coeruleus, núcleo do trato solitário, coluna intermédio lateral da medula espinal, núcleos motor dorsal do vago e ambíguo. Baseado nesta informação este estudo investigou a participação dos núcleos da rafe nas respostas adaptativas a estímulos de hipervolemia e hipovolemia. Foram utilizados ratos machos (Wistar), adultos, mantidos em biotério sob condições controladas, divididos em cinco grupos: hipovolemia (Hipo, submetidos à punção cardíaca com remoção sangüínea), controle da hipovolemia (C hipo, submetidos à punção cardíaca sem remoção sangüínea), hipervolemia (Hiper, submetidos à cirurgia para canulação da veia jugular externa e adição de solução salina no sexto dia pós-cirúrgico), controle da hipervolemia (C hiper, submetidos à cirurgia para canulação da veia jugular externa sem adição de solução salina) e basal (BS). Após 90 minutos do estímulo, os animais foram profundamente anestesiados e perfundidos transcardiacamente com salina seguida de fixador Paraformaldeído + Bórax 4%, 4ºC, pH 9,5. Os encéfalos foram removidos pós-fixados, crioprotegidos e seccionados em cortes coronais de 40 µm e processados com técnicas de imunohistoquímica contra Fos e 5-HT. Os estímulos de hipo e hipervolemia não causaram aumento significativo dos neurônios Fos-imunoreativos ou 5HT/Fos-imunoreativos. Nos núcleos Li, DR, MnR, RMg e ROb o grupo C hipo apresentou maior número de neurônios Fos-IR e 5HT/Fos-IR em relação ao grupo C hiper. Os resultados sugerem que os núcleos da rafe não participam nas repostas adaptativas aos estímulos aplicados. Entretanto, os mesmos parecem estar envolvidos em processos de nocicepção, seja através da 5-HT ou de outras substâncias neuroativas, presentes nestes núcleos. / Previous studies presented projections from the raphe nuclei to areas related to the cardiovascular control, like the locus coeruleus, nucleus of the solitary tract, spinal cord intermedium lateral column, dorsal motor vagus and ambiguus nuclei. Based in this information, the present work analyzed the participation of the raphe nuclei in the adaptative responses to hypovolaemia and hypervolaemia. Were used wistar rats, kept in controlled conditions, divided in 5 groups: hypovolaemia (Hypo, cardiac puncture and blood extraction), hypovolaemia control (C Hypo, cardiac puncture without blood extraction), hypervolaemia (Hyper, external jugular vein canulation surgery and saline addition), hypervolaemia control (C Hyper, external jugular vein canulation surgery and no saline addition) and basal condition (BS). Ninety minutes after the stimulus, the animals were anesthetized and perfused with saline followed by 4% paraformaldehyde plus borax, pH 9.5 at 4ºC. The brains were removed, pos-fixated, cryoprotected, sectioned in 40µm thickness coronal slices and proceeded with double-labeling immunohistochemistry techniques against Fos protein and serotonin. The Hypo and Hyper stimuli presented no significant increase of Fos-IR and double-labeled neurons. The C Hypo group presented higher number of labeled neurons in the Li, DR, MnR, RMg and ROb nuclei in comparison to the group C Hyper. These results suggest that the raphe nuclei have no participation in the adaptative responses to the volemy stimuli. However, this nuclei seems to be related to the nociception no modulated just by the serotonin but by others neurotransmitters too.

Introdução: A depressão é um transtorno psiquiátrico cujas causas parecem envolver a exposição crônica a estressores. Sabe-se que o hipocampo dorsal (HD) tem participação no mecanismo de adaptação a estímulos aversivos contínuos, pois a facilitação da neurotransmissão serotonérgica nessa estrutura diminui o efeito de um estressor prévio. A principal fonte de inervação serotonérgica para o HD é o núcleo mediano da rafe (NMnR). Objetivo: O objetivo geral deste trabalho foi verificar se a integridade da via NMnR-HD é essencial para os efeitos antidepressivos do tratamento crônico com Imipramina em animas com lesão dos neurônios serotonérgicos do NMnR e submetidos ao estresse crônico repetido. Materias e Métodos: Foram utilizados ratos Wistar, machos, com sete semanas de vida. Estes animais foram submetidos à cirurgia estereotáxica para lesão (ou não - grupo controle) dos neurônios seronotérgicos do NMnR. Novamente foram subdivididos em grupos de acordo com o tratamento farmacológico que iriam receber cronicamente (Imipramina ou Salina). Todos os animais foram submetidos ao estresse de restrição crônico (7dias/duas horas por dia) ou agudo (episódio único de restrição. No oitavo dia os animais foram testados no Labirinto em cruz Elevado (LCE). Resultados: Quando submetidos ao estresse agudo, animais com o NMnR íntegro e tratados com Imipramina apresentaram uma maior porcentagem de tempo despendido nos braços abertos (%TA) e no número de entradas nos braços abertos (%FA), quando comparados com o controle. Ainda, quando submetidos ao estresse agudo e com NMnR lesionados quimicamente, observou-se uma maior exploração dos braços abertos (%TA e %FA) quando comparados com o grupo sem lesão. Em relação aos animais submetidos ao estresse crônico, tanto os animais com NMnR íntegro, quanto os com este núcleo lesionados, a Imipramina foi capaz de atenuar os efeitos do estresse, pois foi observado uma maior %TA e %FA quando comparados com os animais que receberam salina. A lesão do NMnR em animais submetidos ao estresse crônico e tratados com salina apresentaram uma diminuição tanto da %TA quanto da %FA, quando comparados com as animais tratados com salina e com NMnR íntegro. Discussão: Nossos resultados mostraram que a lesão dos neurônios serotonérgicos do NMnR não interferiu no comportamento dos animais no LCE quando submetidos a um episódio único de estresse, mas diminui a exploração dos braços abertos em animais submetidos ao estresse crônico. Este efeito, contudo, foi atenuado pela administração crônica de Imipramina. Conclusão: Estes resultados sugerem que a integridade da via NMnR-HD não é essencial para os efeitos antidepressivos da Imipramina no desenvolvimento da tolerância ao estresse repetido. / Introduction: Depression is a psychiatric disorder whose causes seem to involve chronic exposure to stressors. It is known that the dorsal hippocampus (DH) participates in the adaptation mechanism to aversive stimuli, once the facilitation of serotonergic neurotransmission in this structure reduces the effect of a stressor. The main source of serotonergic innervation to the HD is the median raphe nucleus (MRN). Aim: The aim of this study was to verify if the integrity of the MRN-HD pathway is essential for the antidepressant effects of chronic treatment with imipramine in animals with lesion on serotonergic neurons of MRN submitted to chronic and repeated stress. Materials and Methods: We used male Wistar rats, seven weeks old. The animals were submitted to stereotactic surgery for lesion (or not - control group) on MRN serotonergic neurons. Later, they were divided in groups according to the chronic drug treatment they would receive (Imipramine or Saline). All animals were subjected to chronic (7days/Two hours a day) or acute restraint stress (a single episode of restraint). On the eighth day the animals were tested in the Elevated Plus Maze (EPM). Results: When subjected to acute stress, animals with intact MRN and treated with imipramine showed a higher percentage of time spent in open arms (% TO) and the number of entries in open arms (% FO) when compared to control. Moreover, rats subjected to acute stress and chemically injured showed a greater exploration of open arms (% TO and % FO) when compared with the group without lesion. Imipramine was able to attenuate the effects of stress on animals subjected to chronic stress from both groups, with intact MRN and those with lesion. That was observed on a increase of % TO and % FO when compared with rats treated with saline. The injury on MNR in animals submitted to chronic stress decreased both %TO and % FO. Discussion: Our results showed that the lesion on serotonergic neurons of MNR dont interfere in the behavior of animals in the EPM when subjected to a single stress episode, but decreases the open arm exploration in rats exposed to chronic stress. This effect, however, was attenuated by chronic administration of imipramine. Conclusion: These results suggest that the integrity of the NMnR-HD pathway is not essential for the antidepressant effects Imipramine in the development of tolerance to repeated stress.

A abstinência ao etanol está associada ao transtorno de ansiedade. Várias estruturas e sistemas de neurotransmissores estão envolvidos na mediação deste efeito, entretanto, tais substratos ainda não foram completamente elucidados. Em modelos animais, estudos mostram aumento significativo da neurotransmissão nitrérgica em resposta à abstinência do consumo crônico de etanol. O Núcleo Dorsal da Rafe (NDR) é uma importante região envolvida na gênese da ansiedade e possui grande quantidade da isoforma neuronial da enzima Sintase do Óxido Nítrico (nNOS). Assim, o objetivo deste estudo foi verificar se a inibição da transmissão nitrérgica no NDR atenua os efeitos ansiogênicos induzidos pela abstinência do etanol. Com essa finalidade, ratos Wistar machos foram submetidos a tratamento crônico (21 dias) ou agudo (1 dia) com etanol 6%(v/v) seguido da suspensão abrupta do tratamento por 48hs. Após as 48hrs os animais receberam uma injeção intra-NDR de L-NAME (100nmoles/0,2µL; inibidor não seletivo da NOS) ou 7-NI (7-Nitro-Indazol; 5 nmoles/0,2µL; inibidor seletivo para nNOS) e 5 min. depois foram testados no Labirinto em Cruz Elevado (LCE). Em resumo, os dados mostraram que a abstinência de 48hs. do tratamento crônico com etanol promoveu efeitos ansiogênicos significativos, evidenciados pela redução do número de entradas e tempo gasto nos braços abertos do LCE, o qual foi atenuado pelo tratamento intra-NDR com L-NAME mas não com 7-NI, sugerindo o envolvimento do NO no NDR na ansiedade induzida pela abstinência do etanol / The ethanol withdrawal is linked to the disorder of anxiety. Several structures and neurotransmitter systems are involved in mediating this effect, however, such substrates have not yet been elucidated. In animal models, studies show significant increase in neurotransmission nitrérgica in response to abstinence from chronic consumption of ethanol. The Dorsal Raphe Nucleus (DNR) is an important region involved in the genesis of anxiety and has large amounts of the enzyme Sintase neuronial isoform of nitric oxide (nNOS). The aim of this study was to verify that the inhibition of transmission in the DNR nitrérgica attenuates the anxiogenic effects induced by ethanol withdrawal. For this purpose, male Wistar rats were subjected to chronic treatment (21 days) or acute (1 day) with 6% ethanol (v / v) followed by the abrupt suspension of treatment for 48 hours. 48hrs after the animals received an intra-DNR L-NAME (100nmoles / 0.2 L, non-selective inhibitor of NOS) or 7-NI (7-Nitro-indazol, 5 nmol / 0,2 L; selective inhibitor for nNOS ) and 5 min. then were tested in the elevated plus-maze (EPM). Data obtained showed that ethanol withdrawal elicited significant \"anxiety-like\" behaviors, as revealed by the decrease in the number of entries into and time spent onto the open arms of the EPM., which was attenuated by treatment with intra-DNR L-NAME but not with 7-NI. These findings are indicative of the involvement of the DNR \"anxiety-like\" behaviors induced by withdrawal of ethanol.

Uma série de evidências indica que o núcleo dorsal da rafe (NDR) é uma estrutura heterogênea, composta por populações de neurônios serotoninérgicos, anatômica e funcionalmente distintas, que foram implicadas de maneira diferente na fisiopatologia da ansiedade. Evidências do nosso grupo mostraram que a facilitação da neurotransmissão serotoninérgica do subnúcleo dorsomedial (DRD) do NDR favorece a aquisição da esquiva inibitória, sugerindo um efeito ansiogênico, e inibe a expressão da resposta de fuga, efeito do tipo panicolítico, no labirinto em T elevado (LTE). Por outro lado, a ativação das asas laterais do NDR apenas altera o desempenho na tarefa de fuga, efeito do tipo panicolítico, no LTE. Essas descobertas sustentam que diferentes vias serotoninérgicas provenientes do NDR modulam comportamentos associados à ansiedade e ao pânico. O presente estudo teve como objetivo investigar se as asas laterais enviam projeções serotoninérgicas para a substância cinzenta periaquedutal dorsal (SCPd), estruturas chave na modulação de comportamentos relacionados ao pânico, através da técnica de neurotraçamento anterógrado. Em seguida, avaliamos, através de manipulações farmacológicas, o papel desta via na modulação de respostas defensivas avaliadas no LTE. Estendemos esta investigação farmacológicas para o hipotálamo dorsomedial (dmHIP), outra estrutura chave na evocação de comportamentos relacionados ao pânico. Além disso, investigamos o papel da via serotoninérgica que parte do DRD para o núcleo basolateral de amígdala (BLA) na evocação de comportamentos defensivos no ETM e no teste de transição claro-escuro. Com base em estudos prévios do nosso grupo que mostram que a tarefa de esquiva inibitória no LTE ativa o subnúcleo caudal (DRC), realizamos as primeiras observações das consequências comportamentais no LTE após manipulações farmacológicas deste subnúcleo. Primeiramente, verificamos se as asas laterais enviam projeções serotoninérgicas para a SCPd através do neurotraçador anterógrado amina dextrano biotinilado não fluorescente e da imunomarcação para a enzima triptofano hidroxilase. Em seguida, investigamos o efeito da microinjeção do antagonista seletivo de receptores 5-HT1A WAY-100635 nas asas laterais de ratos que receberam administração prévia da mesma droga na SCPd. Dados anteriores do nosso grupo mostraram que a administração de WAY-100635 no NDR, sem diferenciar os subnúcleos, promove efeito do tipo panicolítico no LTE, e este efeito era bloqueado pelo antagonismo dos receptores 5-HT1A na SCPd. Nossa hipótese é que o antagonismo dos receptores 5-HT1A nas asas laterais resulte em um aumento na liberação de serotonina (5-HT) na SCPd, promovendo o efeito do tipo panicolítico. Portanto, o WAY-100635 administrado anteriormente na SCPd bloquearia o efeito panicolítico observado na tarefa de fuga no LTE. Estendemos essa investigação farmacológica, também utilizando o WAY-100635, para o dmHIP. Em passo seguinte, com base em resultados prévios de imuno-histoquímica do nosso grupo que mostraram que a tarefa de esquiva inibitória, mas não a resposta de fuga, ativa o DRC, avaliamos o comportamentos de ratos submetidos ao LTE após a manipulação farmacológica dos receptores do tipo 5-HT1A neste subnúcleo. Esperávamos que a microinjeção de WAY-100635 no DRC facilitasse a aquisição da esquiva inibitória, enquanto que a administração do agonista seletivo de receptores 5-HT1A, 8-OH-DPAT, prejudicasse esta tarefa no LTE. Em uma etapa posterior, investigamos se o efeito ansiogênico observado após a administração de WAY- 100635 no DRD era dependente da ativação de receptores 5-HT2C no BLA. Nosso grupo mostrou que a administração de 5-HT no BLA promove efeito ansiogênico no LTE, e este efeito é bloqueado pelo antagonista de receptores 5-HT2C, SB-242084. Para responder esta pergunta, injetamos WAY-100635 no DRD de ratos que receberam a administração prévia de SB-242084 no BLA. Assim, se o antagonismo de receptores 5-HT1A no DRD resulta em um aumento da liberação de 5-HT no BLA, esperávamos que o SB-242084 administrado no BLA bloquearia o efeito ansiogênico observado no LTE. Nossos resultados mostraram que as asas laterais envia projeções serotoninérgicas para a SCPd. Os resultados farmacológicos mostraram que o tratamento prévio com WAY-100635 na SCPd bloqueia o efeito de tipo panicolítico observado após a administração de WAY-100635 nas asas laterais, sem interferir na tarefa de esquiva inibitória no LTE. Por outro lado, o tratamento prévio com SB-242084 no BLA bloqueou o efeito ansiogênico observado após a administração de WAY-100635 no DRD, sem interferir na resposta de fuga no LTE. Este resultado também foi confirmado em outro teste relacionado à ansiedade, o teste de transição claro-escuro. As manipulações farmacológicas no DRC apontaram para o não envolvimento deste subnúcleo na modulação de respostas associadas à ansiedade e ao pânico. Nossos resultados sugerem ainda que as vias asas laterais- SCPd e asas laterais-dmHIP modulam comportamentos de defesa associados ao pânico, enquanto a via DRD-BLA está relacionada à modulação das respostas relacionadas à ansiedade. / A wealth of evidence indicates that the dorsal raphe nucleus (DR) is a heterogeneous structure, composed of anatomically and functionally distinct populations of serotonergic neurons, which have been differently implicated in the pathophysiology of anxiety. Evidences from our group showed that serotonergic neurotransmission activation via dorsomedial subnucleus (DRD) of the DR facilitated inhibitory avoidance acquisition, suggesting an anxiogenic effect, and inhibited escape expression, a panicolytic-like effect in the elevated T maze (ETM). On the other hand, in the ETM, activation of the lateral wings (lwDR) of the DR only altered escape response, a panicolytic-like effect. These findings support that different DR serotonergic pathways regulate anxiety and panic-like behaviors. The present study aimed to investigate whether the lwDR send serotonergic projections to the dorsal periaqueductal gray (dPAG), a key structure in the modulation of panic-related behaviors, through the anterograde neurotrace technique. Next, we evaluated, through pharmacological manipulations, the role of this pathway in the modulation of defensive responses evaluated in the ETM. We extend this pharmacological investigation to the dorsomedial hypothalamus (dmHIP), another key structure in the evocation of panic-related behaviors. In addition, we investigated the role of the serotonergic pathway from the DRD to the basolateral nucleus of amygdala (BLA) in the elicitation of defensive behaviors in the ETM and in the light-dark transition test. Based on previous studies from our group that show that inhibitory avoidance task in the ETM activates the caudal subnucleus (DRC) of the DR, we performed the first behavioral observations in the ETM after the pharmacological manipulations of this DR subnucleus. First, we labeled the lwDR to dPAG pathway using the anterograde tracer non-fluorescent biotinylated dextran amine and performed an immunostaining for the enzyme tryptophan hydroxylase. Next, we investigated the effect of the microinjection of the selective 5-HT1A antagonist WAY-100635 in the lwDR of rats that have received previous administration of the same drug in the dPAG. Previous data from our group showed that the administration of WAY-100635 in the DR, without differentiating subnuclei, promotes panicolytic effect in the ETM, and this effect was blocked by the 5-HT1A receptors antagonism in the dPAG. Our hypothesis is that the antagonism of 5-HT1A receptors in the lwDR results in an increase in the release of serotonin (5-HT) in the dPAG, promoting the panicolytic effect. Therefore, WAY- 100635 previously administered in dPAG would block the panicolytic effect observed in the escape task in the ETM. We extended this pharmacological investigation, also using WAY-100635, to dmHIP. In the next step, based on previous immunohistochemistry results from our group that show that the inhibitory avoidance task, but not the escape response, activates the DRC, we investigated the behavior of rats submitted to the ETM after the pharmacological manipulation of the 5-HT1A receptors in this subnucleus. We expected that the microinjection of WAY-100635 in the DRC would facilitate the inhibitory avoidance acquisition, whereas the administration of the selective 5-HT1A agonist 8-OH-DPAT would hinder this task in the ETM. At a later stage, we investigated whether the anxiogenic effect observed after administration of WAY-100635 in the DRD is dependent on activation of 5-HT2C receptors in the BLA. Our group has shown that the administration of 5-HT in the BLA promotes an anxiogenic effect in the ETM, and this effect was blocked by the 5- HT2C receptor antagonist, SB-242084. To answer these questions, we microinjected WAY-100635 in the DRD of rats that received prior administration of SB-242084 in the BLA. Thus, if 5-HT1A receptor antagonism in the DRD results in an increase of 5- HT released in the BLA, we expected that SB-242084 administered in the BLA blocks the anxiogenic effect in the LTE. Our results showed that the lwDR send serotonergic projections to the dPAG. The pharmacological results showed that previous treatment with WAY-100635 in the dPAG or dmHIP blocked the panicolytic-like effect observed after WAY-100635 administration in the lwDR, without interfering in the inhibitory avoidance response in the ETM. On the other hand, previous treatment with SB-242084 in the BLA blocked the anxiogenic effect observed after WAY- 100635 administration in the DRD, without interfering in the escape response in the ETM. The later result was also confirmed in another anxiety-related test, the light/dark transition test. The results of the pharmacological manipulations of the DRC do not support an involvement of this subnucleus in the modulation of defensive responses associated with anxiety and panic. Our results suggest that lwDR-PAG and lwDR-dmHIP pathways modulate panic-like defense behaviors while DRD-BLA pathway is implicated in the modulation of anxiety responses.