CAVALCANTE, Galyléia Menezes. Estudo da imunoexpressão dos sistemas CXCR4-CXC112/SDF-1, CCR7-CCl21 e KI-67 no carcinoma de células escamosas oral e sua associação com indicadores clínicopatológicos, metástase linfonodal e sobrevida. 2013. 57 f. Dissertação (Mestrado em Odontologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Farmácia, Odontologia e Enfermagem, Fortaleza, 2013. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2014-07-14T13:15:32Z No. of bitstreams: 1 2013_dis_gmcavalcante.pdf: 1293725 bytes, checksum: fa485fabd530db7d0d4df8d64c549656 (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2014-07-14T13:16:38Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_dis_gmcavalcante.pdf: 1293725 bytes, checksum: fa485fabd530db7d0d4df8d64c549656 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-07-14T13:16:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_dis_gmcavalcante.pdf: 1293725 bytes, checksum: fa485fabd530db7d0d4df8d64c549656 (MD5) Previous issue date: 2013 / Chemokines are responsible for the directed migration of leukocyte chemotactic cytokines, coordinating cell movement during inflammation and the transport of hematopoietic cells. In addition to leukocytes, chemokine receptors are also found in neoplastic cells and tumors associated with stromal cells. Among chemokines, and the CXCR4/CXCL12 CCR7/CCL21 systems have been shown the involvement of lymph node metastases or distant metastases in different cancers. Thus, aim of this study was to evaluate the expression of CXCR4, CXCL12, CCR7, CCL21 and Ki-67 in oral squamous cell carcinoma (SCC) and to correlate these markers with clinicopathological indicators, lymph node metastasis and survival. We conducted a survey of reports and paraffin blocks of excisional biopsies of patients with SCC treated at the Hospital Haroldo Juaçaba (2001-2009). Data on anatomic location of the lesion, sex, age, patient survival, degree of histological differentiation of the tumor, tumor stage and presence or absence of lymph node metastasis, lymphovascular and perineural invasion, nuclear grade and depth of invasion were collected. For immunohistochemical analysis, followed by the technique of streptavidin-biotin-peroxidase using the anti-CXCR4, anti-CXCL12, anti-CCR7, anti-CCL21 and Ki-67 antibody. Histological sections were photomicrographed in 10 fields chosen randomly and measured for the number of labeled tumor cells and determined the percentage of each labeling antibody. The marking of CXCR4 was detected in the cytoplasm and nucleus, CXCL12, CCR7 and CCL21 were only cytoplasmic, their expression was observed in 18 (60%) 8 (22.66%) 16 (53.3%) and 3 (12%) cases, respectively. We found a significant positive association between lymphovascular invasion and immunostaining of CXCR4 (p = 0.007) and CCR7 (P = 0.01) and among these cases metastasis was present in 62.5% and 37.5%, respectively. When in combination with Ki67, we found a significant positive correlation between CXCR4 (p = 0.0086), CXCL12 (p = 0.036) and CCR7 (p = 0:04). Among patients CXCR4 + over 111 months, only 38.4% were alive (p = 0.845), whereas both patients CCR7 + (p = 0.398) as well as CXCR4 +, and CCR7 + (p = 0.441) after 62 months, everyone had already died. We conclude that these chemokines are associated with lymphovascular invasion and cell proliferation, perhaps favoring the development of metastasis and poor prognosis. / As quimiocinas são citocinas quimiotáticas responsáveis pela migração direcionada de leucócitos, coordenando o movimento celular durante a inflamação e o transporte de células hematopoiéticas. Além dos leucócitos, os receptores de quimiocinas também são encontrados em células neoplásicas e em tumores associados com células estromais. Dentre as quimiocinas, os sistemas CXCR4/CXCL12 e CCR7/CCL21 têm sido demonstrado no envolvimento de metástases linfonodais ou à distância em diferentes tipos de câncer. Dessa forma, foi objetivo desse trabalho avaliar a expressão de CXCR4, CXCL12, CCR7, CCL21 e Ki-67 em carcinoma de células escamosas orais (CEC) e correlacionar estes marcadores com indicadores clínicopatológicos, metástase linfonodal e sobrevida. Realizou-se um levantamento de laudos e blocos parafinados de biopsias excisionais de pacientes portadores de CEC tratados no Hospital Haroldo Juaçaba (2001 a 2009). Foram coletados dados sobre localização anatômica da lesão, sexo, idade, sobrevida do paciente, grau de diferenciação histopatológica do tumor, estadiamento tumoral e presença ou ausência de metástase linfonodal, invasão linfovascular e perineural, grau nuclear e profundidade de invasão. Para reação de imunohistoquímica, seguiu-se a técnica da estreptavidina-biotina-peroxidase, utilizando os anticorpos anti-CXCR4, anti-CXCL12, anti-CCR7, anti-CCL21 e Ki-67. As secções histológicas foram fotomicrografadas em 10 campos escolhidos aleatoriamente e quantificadas quanto ao número de células tumorais marcadas e determinado o percentual de marcação de cada anticorpo. A marcação de CXCR4 foi detectada em citoplasma e núcleo, CXCL12, CCR7 e CCL21 tiveram marcação apenas citoplasmática, sendo observada suas expressões em 18 (60%), 8 (22,66%), 16 (53,3%) e 3 (12%) casos, respectivamente. Encontrou-se uma associação significativa positiva entre a invasão linfovascular e a imunomarcação do CXCR4 (p=0.007) e CCR7 (p=0.01) e dentre esses casos a metástase esteve presente em 62,5% e 37,5%, respectivamente. Quando em associação com o Ki67, encontrou-se uma correlação positiva significante entre o CXCR4 (p=0.0086), CXCL12 (p=0.036) e CCR7 (p=0.04). Dentre os pacientes CXCR4+, ao longo de 111 meses, apenas 38,4% estavam vivos (p=0.845), ao passo que tanto para pacientes CCR7+ (p = 0.398), quanto CXCR4+ e CCR7+ (p = 0.441), após 62 meses, todos haviam ido a óbito. Conclui-se que essas quimiocinas estão associadas com a invasão linfovascular e proliferação celular, talvez favorecendo o desenvolvimento de metástases e um pior prognóstico.

Memoria para optar al título de Químico Farmacéutico / Estudios de funcionalización del 1H-indol, condujeron a la familia de N-{4-[4-(1H-Indol-3-carbonil)-1-piperazinil]-fenil}-arilamidas 6(a-h) (Familia I) como potenciales ligandos provistos de acción serotoninérgica en el sistema nervioso central. La obtención de esta familia tomó lugar en una secuencia de 5 pasos, obteniéndose con rendimiento de un 66- 77% en la última etapa. La secuencia sintética utilizada se basó en la reacción inicial de Vilsmeier-Haack para obtener el 3-formil-1H-indol (2), en un 97%, posterior oxidación a su derivado carboxílico (3) (70%) y tratamiento con N,N´-Diciclohexilcarbodimida y 4-nitro-fenilpiperazina, generó la 4-nitrofenilpiperazinilamida (4) con un 63%. La reducción de (4) generó la amina correspondiente (5) en un 50%, que fue reaccionada con una serie de haluros de aroílo para dar la familia 6(a-h). Como un aporte exploratorio se sintetizaron 3 nuevos hetero-bis-índoles reducidos 11(a-c) vía aminación reductiva del derivado amina (5) y formil indol (2). Se realizaron estudios de modelación molecular del receptor (5HT1A), acompañados de estudios de docking en los compuestos 6(a-d) obteniéndose los puntajes de docking favorables de interacción ligando-receptor. Asimismo, se complementó este estudio con el análisis de docking de 8 nuevas agrupaciones indólicas estructuralmente relacionadas a las anteriores, (derivados reducidos) exhibiendo una afinidad teórica mejorada / Functionalyzation studies on 1H-indol, led us to obtain a family of N-{4-[4-(1H-Indole-3-carbonyl)-1-piperazinyl]-phenyl}-arylamides 6(a-h) with potential serotonergic ligands in the central nervous system. The synthetic route was achieved in a five step sequence with a last-step yield between (66-77%). The synthetic sequence was initially based on Vilsmeier-Haack reaction to afford the 3-formyl-1H-indole (2), in a 97% (yield), subsequent oxidation provided the carboxylic acid derivative (3) in 70% yield, which was reacted with N,N´-Diciclohexylcarbodiimide and 4-nitrophenylpiperazine giving the amide (4) (63% yield). Further reduction of (4) provided the corresponding amine (5) (50% yield) which was reacted with a series of aroylhalydes to give compounds 6(a-h). As an exploratory study 3 new reduced hetero-bis-indoles 11(a-c) were synthesized, through reductive amination between amine (5) and aldehyde(2). A molecular modeling study was also carried out on the 5-HT1A receptor along with docking studies for compounds 6(a-d), displaying a more favorable docking score. Likewise new docking analysis were carried out by using 8 new theoretical compounds bearing an indolic frameworks structurally related to family (I); these compounds showed improved affinities compared to family (I). / Fondecyt

Made available in DSpace on 2016-08-29T15:09:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_3158_dissertacao_Trindade.pdf: 2290351 bytes, checksum: 2f2a270bc7c48cd617d366f09a3f244f (MD5) Previous issue date: 2009-03-13 / A identificação de fontes para material particulado tem sido um tema de crescente interesse em todo o mundo para auxiliar a gestão da qualidade do ar. Esta classe de estudos é convencionalmente baseada no uso de modelos receptores, que identificam e quantificam as fontes responsáveis a partir da concentração do contaminante no receptor. Existe uma variedade de modelos receptores disponíveis na literatura, este trabalho compara os resultados dos modelos receptores balanço químico de massa (BQM) e fatoração de matriz positiva (FMP) para o banco de dados de PM2,5, da região de Brighton, Colorado, com o intuito de investigar as dificuldades na utilização de cada modelo, bem como suas vantagens e desvantagens. Inicialmente, já é conhecido que o modelo BQM tem a desvantagem de necessitar dos perfis das fontes, determinados experimentalmente, para ser aplicado e também tem limitações quando as fontes envolvidas são similares. Já o modelo FMP não requer os perfis de fontes, mas tem a desvantagem de precisar de elevada quantidade amostral da concentração do contaminante no receptor. Os resultados mostraram, baseados nas medidas de performance que os dois modelos foram aptos para reproduzir os dados do receptor com ajustes aceitáveis. Todavia, resultados diferentes se ajustaram a medidas de performance. O modelo BQM, utilizou 9 tipos de fontes e o modelo FMP encontrou apenas 6 tipos de fontes. Constatou-se com isso que o modelo FMP tem dificuldades em modelar fontes que aparecem ocasionalmente. As fontes sulfato de amônio, solos, veículos a diesel e nitrato de amônio tiverem boas correlações nos resultados dos dois modelos de contribuições de fontes. Os perfis de fontes utilizados no modelo BQM e resultados do modelo FMP que mais se assimilaram foram das fontes nitrato de amônio, solos, sulfato de amônio e combustão de madeira e ou/ veículos desregulados. Verificou-se no modelo FMP que as espécies não características de determinadas fontes aparecem nos resultados dos perfis das fontes, o que torna-se ainda mais complexo a identificação das fontes, requerendo elevado conhecimento sobre a composição de inúmeras fontes.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Neurociências. / Made available in DSpace on 2012-10-21T03:51:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 194756.pdf: 512946 bytes, checksum: 70bc24df372a2e7a107eb6b9ae3cdf97 (MD5) / Investigação da presença e a possível participação de receptores serotonérgicos da área pré-óptica no controle da ingestão de alimento e de água em pombos e caracterização dos subtipos de receptores envolvidos. Foram utilizados pombos adultos (Columba livia), com cânulas-guia cronicamente implantadas em regiões próximas à área pré-óptica permitindo injeções de antagonistas de receptores serotonérgicos 5-HT1/2, 5-HT2A e 5-HT2C, e agonistas de receptores 5-HT1A e 5-HT1B/1D. De maneira geral, este estudo apontou a participação de receptores 5-HT1B/1D presentes na área pré-óptica ventral de pombos na inibição tônica exercida pela serotonina sobre a ingestão de alimento, especialmente sobre os sinais que induzem à saciação; e não naqueles que levam à saciedade. Por outro lado, parece não haver envolvimento dos receptores serotonérgicos 5-HT1A e 5-HT2A/2C presentes na APV com a regulação neuronal da ingestão de alimento em pombos.

O peptídeo liberador da gastrina (GRP) está estabelecido como um fator de crescimento celular no câncer. Os fatores de crescimento desempenham um papel importante na proliferação das células neoplásicas e progressão do câncer, estando envolvidos na invasão local, angiogênese, metástases à distância e apoptose. A super-expressão de receptores para fatores de crescimento em células malignas é geralmente um marcador de agressividade e está associada a um prognóstico reservado. Na busca por novas estratégias no tratamento do câncer, muitos esforços têm sido feitos para se identificar quais são esses receptores e desenvolver terapias dirigidas contra eles, explorando a especificidade molecular. O GRPR já foi identificado em diversas neoplasias humanas, mas até o presente momento não há nenhum dado na literatura quanto a sua expressão no carcinoma hepatocelular (HCC). Considerando que esta neoplasia é uma importante causa de morbidade e mortalidade em todo o mundo, objetivamos avaliar, nesse estudo, o perfil de expressão de GRPR em lesões neoplásicas malignas do fígado. Através da técnica de imunoistoquímica, lesões hepatocelulares malignas de 61 pacientes foram selecionadas do arquivo de patologia do HCPA, entre o período de janeiro de 2004 a março de 2009 e avaliados quanto à expressão de GRPR. O receptor foi detectado em 77% das amostras tumorais, na maioria das vezes exibindo padrão de coloração difuso; moderado ou forte (57.4%). Os GRPRs foram, também, intensamente expressos em lesões hepatocelulares cirróticas adjacentes às malignas (48.4%), entretanto, no tecido hepático normal (não-neoplásico e não-cirrótico) os GRPRs foram fracos e moderadamente expressos (36 a 59% respectivamente). A expressão do GRPR mostrou-se significativamente associada com o estagio do tumor (p= 0.047), mas não houve relação com os parâmetros clínico-patológicos (idade, gênero, presença de infecção viral, de cirrose, tamanho do tumor e nível de AFP). Entretanto, a estratificação dos pacientes, baseada na expressão do GRPR, revelou que os pacientes, que tiveram uma alta expressão do GRPR, tenderam a apresentar a sobrevida global e a sobrevida livre de doença menor (p= 0.174). Esse estudo demonstrou, pela primeira vez, a expressão aberrante de GRPRs no HCC em seres humanos. / Gastrin-releasing peptide (GRP) is already established as a growth factor in cancer. Growth factors are involved in cell proliferation and cancer progression, enhancing local invasion, angiogenesis, distant metastasis and apoptosis. Furthermore, the overexpression of growth factor receptors on the cell surface of malignant cells might be associated with a more aggressive behavior and a poor prognosis. Searching for new strategies for cancer treatment, much effort has been done to identify these receptors and to develop targeted therapies exploring their molecular specificity. The GRPR has been identified in many human malignancies, but to date, no information regarding its expression in hepatocellular cancer (HCC) was found in the literature. Considering that HCC is a very important cause of morbidity and mortality worldwide, we aimed to evaluate the GRPR expression profile in neoplasic hepatocelular lesions. Sections of paraffin-embedded hepatocelluar carcinomas and cirrhotic surrounding tissues from 61 patients with primary HCC were studied, as well as 22 samples from non-cirrhotic and non-neoplastic hepatic tissue. GRPR immune-expression was demonstrated in the parenchymal tumor cells in 77% of tumor tissue samples (47/61) and was moderately to strongly expressed in 57.4% of these cases. In the surrounding cirrhotic liver, GRP immunostaining was also observed, showing a high expression in 15/31 of cases (48.4%). In the normal hepatic tissue, GRPR was also expressed, mostly with a weak to moderate expression (36.4 and 59.1, respectively). GRPR expression was significantly associated with tumor stage (P=0.047), but no correlation was observed with other clinicopathologic parameters (age, gender, virus, liver cirrhosis, tumor size, and AFP level). Moreover, stratification of patients based on tumor GRPR expression revealed that the patients who had a high expression of GRPR tended to have a shorter overall survival (OS) time and a significantly shorter disease-free survival (DFS) time.

Memoria para optar el título de Bioquímico / No autorizada por el autor para ser publicada a texto completo en el Portal de Tesis Electrónicas / En el sistema nervioso, la transmisión del impulso nervioso entre neuronas se efectúa a través de la sinapsis. Éstas pueden ser de dos tipo, eléctricas y químicas. En estas últimas existen diversas proteínas que se asocian a los receptores de neurotransmisores, las que intervienen en su biosíntesis, transporte, anclaje y modulación de su actividad. Este trabajo se centró en el estudio de una nueva proteína llama Marlin-2, identificada a través de análisis comparativos entre la estructura primaria de la proteína Marlin-1 y las secuencias depositadas en las bases de datos. Marlin-1 (multiplt alpahelices and RNA linker protein), es una proteína que se asocia directamente a la subunidad R1 del receptor de neurotransmisores GABAB e intervendría en su expresión y función. La hipótesis planteada en este trabajo es la siguiente: la homología entre Marli-1 y Marlin-2 define la relación de esta última con compartimientos subcelulares, dominios neuronales y su interacción con el receptor de GABAB. Para verificar esta hipótesis elegimos una combinación de técnicas bioquímicas y microscópicas en modelos de líneas celulares mamíferas y neuronas de cultivo primario de ratas. Nuestros resultados indican que Marlin-2 y Marlin-1 poseen un alto porcentaje de identidad en sus estructuras primarias y que sus dominios estructurales se encuentran altamente conservados, especialmente los involucrados en interacciones proteicas. Además demostramos que en líneas celulares Marlin-2 se distribuye en núcleo y citoplasma y que presentan un patrón granular, predominantemente citoplasmático. Por otra parte, en neuronas transfectadas con Marlin-2, esta proteína se distribuye en el soma y dendritas proximales, presentado un patrón granular, similar al de Marlin-1 endógena. También hemos demostrado la interacción entre Marlin-1 y Marlin-2 mediante análisis de bioimagen y co-inmunoprecipitación en líneas celulares. En base a estos resultados y a las herramientas desarrolladas en este trabajo, en el futuro se logrará conocer en mayor profundidad el rol de esta proteína en el sistema nervioso

O peptídeo liberador da gastrina (GRP) está estabelecido como um fator de crescimento celular no câncer. Os fatores de crescimento desempenham um papel importante na proliferação das células neoplásicas e progressão do câncer, estando envolvidos na invasão local, angiogênese, metástases à distância e apoptose. A super-expressão de receptores para fatores de crescimento em células malignas é geralmente um marcador de agressividade e está associada a um prognóstico reservado. Na busca por novas estratégias no tratamento do câncer, muitos esforços têm sido feitos para se identificar quais são esses receptores e desenvolver terapias dirigidas contra eles, explorando a especificidade molecular. O GRPR já foi identificado em diversas neoplasias humanas, mas até o presente momento não há nenhum dado na literatura quanto a sua expressão no carcinoma hepatocelular (HCC). Considerando que esta neoplasia é uma importante causa de morbidade e mortalidade em todo o mundo, objetivamos avaliar, nesse estudo, o perfil de expressão de GRPR em lesões neoplásicas malignas do fígado. Através da técnica de imunoistoquímica, lesões hepatocelulares malignas de 61 pacientes foram selecionadas do arquivo de patologia do HCPA, entre o período de janeiro de 2004 a março de 2009 e avaliados quanto à expressão de GRPR. O receptor foi detectado em 77% das amostras tumorais, na maioria das vezes exibindo padrão de coloração difuso; moderado ou forte (57.4%). Os GRPRs foram, também, intensamente expressos em lesões hepatocelulares cirróticas adjacentes às malignas (48.4%), entretanto, no tecido hepático normal (não-neoplásico e não-cirrótico) os GRPRs foram fracos e moderadamente expressos (36 a 59% respectivamente). A expressão do GRPR mostrou-se significativamente associada com o estagio do tumor (p= 0.047), mas não houve relação com os parâmetros clínico-patológicos (idade, gênero, presença de infecção viral, de cirrose, tamanho do tumor e nível de AFP). Entretanto, a estratificação dos pacientes, baseada na expressão do GRPR, revelou que os pacientes, que tiveram uma alta expressão do GRPR, tenderam a apresentar a sobrevida global e a sobrevida livre de doença menor (p= 0.174). Esse estudo demonstrou, pela primeira vez, a expressão aberrante de GRPRs no HCC em seres humanos. / Gastrin-releasing peptide (GRP) is already established as a growth factor in cancer. Growth factors are involved in cell proliferation and cancer progression, enhancing local invasion, angiogenesis, distant metastasis and apoptosis. Furthermore, the overexpression of growth factor receptors on the cell surface of malignant cells might be associated with a more aggressive behavior and a poor prognosis. Searching for new strategies for cancer treatment, much effort has been done to identify these receptors and to develop targeted therapies exploring their molecular specificity. The GRPR has been identified in many human malignancies, but to date, no information regarding its expression in hepatocellular cancer (HCC) was found in the literature. Considering that HCC is a very important cause of morbidity and mortality worldwide, we aimed to evaluate the GRPR expression profile in neoplasic hepatocelular lesions. Sections of paraffin-embedded hepatocelluar carcinomas and cirrhotic surrounding tissues from 61 patients with primary HCC were studied, as well as 22 samples from non-cirrhotic and non-neoplastic hepatic tissue. GRPR immune-expression was demonstrated in the parenchymal tumor cells in 77% of tumor tissue samples (47/61) and was moderately to strongly expressed in 57.4% of these cases. In the surrounding cirrhotic liver, GRP immunostaining was also observed, showing a high expression in 15/31 of cases (48.4%). In the normal hepatic tissue, GRPR was also expressed, mostly with a weak to moderate expression (36.4 and 59.1, respectively). GRPR expression was significantly associated with tumor stage (P=0.047), but no correlation was observed with other clinicopathologic parameters (age, gender, virus, liver cirrhosis, tumor size, and AFP level). Moreover, stratification of patients based on tumor GRPR expression revealed that the patients who had a high expression of GRPR tended to have a shorter overall survival (OS) time and a significantly shorter disease-free survival (DFS) time.

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A elucidação da base molecular da variação fenotípica adaptativa compreende um dos principais objetivos da biologia evolutiva. Na última década, o gene do receptor de melanocortina-1 (MC1R) regulador da síntese de melanina tem sido foco de diversos estudos sobre a coloração do corpo nos vertebrados. Analisou-se a variação deste gene em duas espécies do gênero Liolaemus que apresentam colorações distintas e crípticas. Os polimorfismos genéticos encontrados nas espécies não foram associados com o padrão de coloração corporal. Em L. arambarensis foram observadas cinco substituições sinônimas, nenhuma delas era estritamente associada com a variação de coloração. Da mesma forma, a análise comparativa mostrou que as sequências de Liolaemus foram monomórficas em posições de aminoácidos funcionalmente importantes na coloração do corpo de outras espécies de répteis. Contrariamente a outros grupos taxonômicos, tais resultados demonstram que não há um padrão único de sítios responsáveis por mudanças na coloração do corpo nesse grupo. Estes resultados permitem inferir que outros genes e/ou processos de regulação devem agir sobre a coloração, bem como ação de fatores não-genéticos. / The molecular basis of adaptive phenotypic variation comprises a major goal of evolutionary biology. In the last decade the melanocortin-1 receptor gene (MC1R), which regulates the synthesis of melanin, has been the focus of various studies on the body coloration in vertebrates. We analyzed the variation of this gene in two species of sand lizards of the genus Liolaemus, both with distinct and cryptic color. The polymorphisms found were not associated with the variation of body color. In L. arambarensis were observed five synonymous substitutions, none of which were strictly associated with colour type. Similarly, comparative analysis showed that the Liolaemus sequences were monomorphic in amino acid sites functionally important in the body coloration of other reptiles. Contrary to others taxa, these results suggest that there is not a unique pattern of sites accounting for changes in body coloration. It is possible that other genes and/or regulation process besides MC1R maybe influencing on the coloration, as well as action the of non-genetic factors.

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