O aumento do consumo e a geração de resíduos e as novas propostas de desenvolvimento de conceitos e práticas de sustentabilidade fizeram com que a sociedade passasse a refletir sobre tais eventos, colocando em discussão o ciclo de vida dos produtos. Neste contexto, o conceito de logística reversa (LR) se desenvolveu, principalmente quanto ao aspecto econômico. Mas, sendo este conceito fundamentado ao da sustentabilidade, torna-se importante acompanhar as práticas, inclusive quanto aos efeitos sociais e ambientais. Atrelado a isso e a dois outros fatores: i) o fato de que alguns trabalhos identificaram que processos de LR nem sempre garantem melhorias econômicas para a empresa, sendo que o efeito econômico estava relacionado aos fatores intrínsecos do processo, e que ii) o Pet é um dos materiais de fácil acesso pela população, ocasionando um grande volume de resíduos de longa decomposição; o objetivo desta pesquisa foi identificar quais decisões sobre os fatores inerentes a um processo produtivo envolvendo LR de Ref Pet são capazes de impactar na sustentabilidade do mesmo. Neste sentido, a proposta volta-se para o desenvolvimento de um modelo que permita analisar os benefícios econômicos, sociais e ambientais, com base em informações do processo, de modo que a empresa possa acompanhar e melhorar o equilíbrio deste tripé em seu processo produtivo, buscando garantir ou identificar necessidades de mudanças para alcançar a sustentabilidade. O desenvolvimento do modelo deu-se por meio da revisão bibliográfica e do estudo exploratório realizado em uma indústria de refrigerantes, permitindo conhecer em detalhes o processo de logística reversa de Ref Pet. Esta etapa foi fundamental para a definição dos inputs, subindicadores e indicadores que formaram os três índices: econômico, social e ambiental. A transformação dos indicadores em índices ocorreu por meio da técnica de análise fatorial, sendo que, depois de finalizado o modelo procedeu-se com análise de sensibilidade, a qual permitiu identificar o fator intrínseco ao processo mais representativo para cada índice. Demonstrou-se que, com este modelo a empresa pode simular cenários de decisão, identificando o impacto que eles trarão para a sustentabilidade do processo produtivo, uma vez que é permitido identificar qual a sensibilidade de cada índice frente aos fatores inerentes ao processo. Assim, a empresa pode tomar decisões visando o equilíbrio econômico, social e ambiental em seu negócio buscando ações para mantê-lo, exercendo papel importante na sociedade. Portanto, o modelo proposto pode auxiliar uma empresa na identificação do impacto de seu processo de logística reversa nos três índices, acompanhando a evolução e tomando medidas para melhorá-los. Ademais, permite analisar a sensibilidade da sustentabilidade do processo quando das variações dos inputs. Finalmente, o estudo traz detalhamentos sobre as especificidades de um processo de logística reversa de Ref PET, capaz de contribuir para a literatura e para os próximos estudos nesta linha. / The increased consumption, and waste generation, and the new proposals of development concepts, and sustainability practices have caused society to reflect about these events, inciting discussions regarding the life cycle of these products. In this context, the reverse logistics concept (RL) was developed referring mainly to the economic aspect. But, considering that the RL concept is based on sustainability, it is important to monitor the practices including those that concern social and environmental effects. Connecting to this and to two other factors: i) the fact that some studies have identified that RL processes does not always guarantee economic improvements for the company, whereas economic effect was related to intrinsic factors in the process, and ii) Pet is easily accessible by the population, resulting in large amounts of long decomposition waste; the objective of this research was to identify which decisions regarding inherent factors in the production process involving RL Returnable PET Bottles can impact sustainability. In this sense, the proposal is aimed to the development of a model to analyze the economic, social and environmental benefits, based on information from the process, so that the company can monitor and improve the balance of this tripod in its production process, seeking to guarantee or identify changing needs to achieve sustainability. The development of the model occurred by means of literature review and exploratory study in a soft drink industry, which allowed knowing in detail the process of Returnable PET Bottles involving RL. This step was fundamental in order to define the inputs, indicators and sub-indicators that formed the three indices: economic, social and environmental. The transformation of the indicators into indices was obtained by applying technique of factor analysis, and, after the finalization of the model, sensitivity analysis was conducted, which allowed identifying the most representative intrinsic factor in the process for each index. Therefore, demonstrating with this model that the company can simulate scenarios for decision, identifying the impact they will bring upon the sustainability of the production process. Since it is possible to identify the sensitivity of each index compared to the inherent factors in the process. Thereby, the company can take decisions seeking economic, social and environmental balance in their business, seeking actions to maintain, performing an important role in society. Thus, the proposed model can assist a company in identifying the impact of their reverse logistics process in the three indices, monitoring the evolution and taking steps to improve them. Furthermore, the model allows analyzing the sensitivity of the sustainability of the process in the case of input variations. Finally, the study brings more details on the specific characteristics of a Reverse Logistics process of Returnable PET Bottles, contributing to the literature and future studies in this research line.

Orientadores: Denise Engelbrecht Zantut Wittmann, Marcos Antonio Tambascia / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-21T07:42:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 MouraNeto_Arnaldo_M.pdf: 2094698 bytes, checksum: 3daf90f26d6bd9090cf145bcbd4b709e (MD5) Previous issue date: 2012 / Resumo: Introdução: A síndrome do eutireoidiano doente (SED) é uma entidade caracterizada pela queda das concentrações sanguíneas de triiodotironina nas formas total e livre e aumento da forma reversa. Ocorre principalmente em pacientes portadores de doenças graves e agudas, particularmente dentre aqueles internados em unidade de terapia intensiva. Há descrição desta síndrome em portadores de Diabetes Mellitus, particularmente sob controle glicêmico inadequado. Objetivos: Avaliar as alterações dos hormônios tireoidianos em portadores de DM sob cuidado ambulatorial e a correlação entre concentrações de hormônios tireoidianos e controle glicêmico, presença de complicações crônicas (neuropatia, nefropatia, retinopatia) e marcadores de inflamação sistêmica subclínica, bem como sua relação com presença de eventos cardiovasculares. Metodologia: Estudo transversal avaliando 52 pacientes com diabetes tipo 2 e 52 indivíduos sem diabetes, entre 40 e 75 anos de idade, pareados por sexo, idade e índice de massa corporal. Avaliaram-se dados clínicos e antropométricos, concentrações séricas de hormônios tireoidianos e proteína C reativa, bem como exames laboratoriais que refletem o perfil lipídico e controle glicêmico. Resultados: Cerca de 73% dos pacientes com diabetes e 40% dos indivíduos sem DM apresentaram concentrações séricas diminuídas de T3 total; 25% dos pacientes e apenas 2% dos indivíduos sem DM apresentaram concentrações diminuídas de T3 livre. As concentrações séricas de T3 total (p<0,001), T3 livre (p<0,001) e T4 total (p=0,006) estavam diminuídas em comparação aos de indivíduos sem diabetes. As concentrações de T3 reverso não apresentaram diferença entre os dois grupos. Pacientes com diabetes apresentaram T4 livre mais elevado (p=0,033). As concentrações de T3 reverso foram significativamente diferentes apenas quando comparados os indivíduos com eventos cardiovasculares prévios com aqueles sem tal histórico (p=0,002 dentre os pacientes com diabetes e p=0,037 em relação aos indivíduos sem diabetes). A prevalência de eventos cardiovasculares foi de 25%. Houve correlação entre as concentrações de proteína C reativa e a relação cintura/quadril (p = 0,035) e as concentrações de T3 reverso (p = 0,001). Não houve correlação entre os hormônios tireoidianos e a concentração de hemoglobina glicada. No grupo de pacientes com diabetes, os fatores associados à presença de eventos cardiovasculares na análise multivariada foram sexo masculino (p=0,028) e T3 reverso elevado (p=0,01). A análise da curva ROC do T3 reverso em relação à detecção de eventos cardiovasculares mostrou uma sensibilidade de 84,6% e especificidade de 71,8% (p=0,002), similar à performance da proteína C reativa (sensibilidade = 76,9%; especificidade = 64,1%; p=0,022). Conclusões: O T3 total apresentou-se diminuído em 40% dos indivíduos sem DM e poderia superestimar o diagnóstico de SED se analisado como único parâmetro. Adicionalmente, as concentrações séricas de T3 total e livre e T4 total foram mais baixas no grupo de pacientes com diabetes em relação ao grupo controle. O aumento das concentrações de T3 reverso associou-se à presença de doença cardiovascular e à proteína C reativa elevada. O T3 reverso apresentou correlação com as concentrações de proteína C reativa e foi um preditor independente para eventos cardiovasculares / Abstract: Introduction: The non-thyroidal illness is an entity characterized by reduced serum levels of total and free triiodothyronine and a rise in its reverse form. It occurs mainly in critically ill patients. There are descriptions of this syndrome in patients with Diabetes Mellitus, especially those under inadequate glycemic control. Objectives: Evaluate the abnormalities in thyroid hormone levels in individuals with diabetes under standard outpatient care and the correlation of thyroid hormone levels with glycemic control, presence of chronic complications (neuropathy, nephropathy and retinopathy) and subclinical systemic inflammation, as well as its relation with the presence of previous cardiovascular events. Methodology: Cross sectional study involving 52 patients with type 2 diabetes and 52 individuals without the diabetes, between 40 and 75 years of age paired by age, gender and body mass index. We evaluated clinical and anthropometric data, serum levels of thyroid hormones and Creactive protein, as well as laboratory parameters that reflect the lipid profile and glycemic control. Results: Approximately 73% of the patients with diabetes and 40% of individuals without diabetes presented reduced serum levels of total T3. Nearly 25% of the patients and only 2% of the individuals without diabetes presented reduced levels of free T3. The levels of total T3 (p<0.001), free T3 (p<0.001) and total T4 (p=0.006) were lower in patients with diabetes compared with those without diabetes. The levels of reverse T3 did not present any difference between both groups. Patients with diabetes presented higher levels of free T4 (p=0.033). The levels of reverse T3 were significantly different only when comparing individuals with previous cardiovascular events with those without this characteristic (p=0.002 for patients with diabetes and p=0.037 for individuals without diabetes). The prevalence of cardiovascular disease was 25%. There was a correlation between serum levels of C-reactive protein and waist/hip ratio (p=0.035) and levels of reverse T3 (p=0.001). There was no correlation between thyroid hormone levels and glycated hemoglobin. In the group of patients with diabetes, the factors associated with the presence of cardiovascular events on multivariate analysis were male gender (p=0.028) and elevated reverse T3 levels (p=0.01). The ROC curve analysis of reverse T3 for detection of cardiovascular events yielded a sensitivity of 84.6% and a specificity of 71,8% (p=0.002), which was similar to the performance of C-reactive protein (sensitivity = 76.9%; specificity = 64.1%; p=0.022). Conclusions: Total T3 was reduced in 40% of the individuals without diabetes and could overestimate the diagnosis of de non-thyroidal illness syndrome if analyzed as the sole parameter. Additionally, the levels of total and free T3 and total T4 were lower in the group of patients with diabetes than in the control group. Higher reverse T3 levels were associated to the presence of cardiovascular disease and increased C-reactive protein levels. Reverse T3 was an independent predictor of cardiovascular events / Mestrado / Clinica Medica / Mestre em Clinica Medica

Orientador: Inacio Maria Dal Fabbro / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia Agricola / Made available in DSpace on 2018-08-03T16:34:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Lino_AntonioCarlosLoureiro_M.pdf: 6146192 bytes, checksum: 34f4cf4a7a53c2b91adc0c5de78ca694 (MD5) Previous issue date: 2002 / Mestrado

Made available in DSpace on 2014-06-12T18:07:46Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo788_1.pdf: 6555783 bytes, checksum: 65caeaca8f8ce8753df4239098b98438 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2010 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Os vírus dengue (DENV) são responsáveis por um amplo espectro de manifestações clínicas em diversas partes do mundo. Muitos mecanismos moleculares da biologia do DENV, incluindo replicação do genoma e patogênese viral, ainda não foram totalmente compreendidos. Novos avanços na elucidação destes mecanismos vêm sendo facilitados pelo desenvolvimento dos sistemas de genética reversa nas últimas décadas. No presente trabalho, nós descrevemos o desenvolvimento de um sistema de genética reversa para o vírus dengue tipo 3 (DENV3). Usando um sistema de dois plasmídeos, o genoma do DENV3 foi dividido em duas partes por PCR e os fragmentos gerados foram clonados em separado num vetor plasmidial. Um sítio de restrição foi inserido em ambas as construções, permitindo a posterior recuperação do genoma completo por ligação in vitro. Todos os plasmídeos foram construídos pela técnica de recombinação homóloga em levedura e propagados nela para prevenir qualquer instabilidade dos insertos em E. coli. A identidade das construções foi confirmada por sequenciamento, no qual foram identificadas mutações no genoma clonado. Para a recuperação do clone infeccioso in vitro, as duas partes dos genomas foram amplificadas por PCR, digeridas e unidas por ligação in vitro. Dois clones infecciosos foram recuperados e a transcrição in vitro, do produto das ligações, produziram RNAs virais genômicos. Células BHK-21, transfectadas por eletroporação com os RNAs sintetizados, foram avaliadas por ensaio de imunofluorescência, mostrando que estes RNAs são infecciosos. Após sucessivas passagens em cultivo celular, os DENV3 recuperados foram caracterizados in vitro. RT-PCR, a partir de RNA viral, e a análise de fragmentos de restrição confirmaram que ambos os vírus recuperados foram derivados do nosso sistema de dois plasmídeos. No ensaio de placa, os clones apresentaram fenótipos distintos. Após coloração convencional, enquanto o clone ICDENV3 #L43 apresentou placas com morfologia similar ao DENV3 selvagem, o clone ICDENV3 #L42 foi incapaz de formar placas. A análise de sequenciamento, a partir dos produtos de RT-PCR, identificou mutações específicas em cada um dos clones, as quais podem facilitar o crescimento dos vírus recuperados em cultivo celular. Este sistema é uma poderosa ferramenta que nos ajudará a elucidar aspectos moleculares da biologia do DENV, bem como a entender a relação entre mutações específicas e a patogênese do DENV

Submitted by Eduarda Figueiredo (eduarda.ffigueiredo@ufpe.br) on 2015-03-05T13:16:19Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Tese Kelma.pdf: 5071446 bytes, checksum: 4f138d32b76f64e086af5150081182f7 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-05T13:16:19Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Tese Kelma.pdf: 5071446 bytes, checksum: 4f138d32b76f64e086af5150081182f7 (MD5) Previous issue date: 2012-12-20 / CAPES / A consciência ambiental sobre fontes alternativas de energia tem atraído o interesse mundial para pesquisas sobre biodiesel. No Brasil, o Programa Nacional para o Uso e Produção de Biodiesel (PNPB) foi criado em 2005. O aumento da produção de biodiesel, por sua vez, resulta numa maior geração de coprodutos e resíduos, como a torta proveniente da etapa de extração de óleo, e a glicerina do processo de produção de biodiesel, não existindo dados consolidados a respeito da gestão dos resíduos e coprodutos gerados. A logística reversa surge como uma alternativa promissora para a mitigação de potenciais impactos a partir da reinserção de resíduos e coprodutos no ciclo produtivo, agregando valor aos mesmos e propiciando benefícios ambientais, sociais e econômicos. A presente pesquisa teve como objetivo propor sistemas de logística reversa para a torta e a glicerina, geradas na cadeia produtiva de biodiesel, com base na análise da gestão destes resíduos, por meio da coleta de dados na literatura e visitas técnicas a usinas situadas no Nordeste brasileiro, entre os anos de 2011 e 2012. No desenvolvimento da pesquisa foram analisados os processos produtivos do biodiesel e as alternativas para a gestão dos resíduos e coprodutos, com foco em aspectos técnicos, ambientais, sociais e econômicos. Ao final, foram propostos modelos de sistemas de logística reversa, em conformidade com a Politica Nacional de Resíduos Sólidos (Lei Nº 12.305 de 2010). Além disso, como procedimento de validação, os sistemas de logística reversa foram analisados pela metodologia de avaliação de desempenho ambiental que demonstrou para as tortas resultantes da extração de óleo, um excelente potencial para a produção de biogás, ainda em fase de pesquisa. Com relação à glicerina destacou-se a sua purificação como a alternativa mais promissora, principalmente em virtude da transformação pela indústria química em produtos de maior valor agregado contribuindo para o fortalecimento da cadeia.

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / El Distemper Canino (DC) es una de las patologías que provoca mayor tasa de morbilidad y mortalidad en los caninos domésticos a nivel mundial y representa también una importante enfermedad en varias familias de mamíferos terrestres: Canidae, Procyonidae, Mustelidae, Mephitidae, Hyaenidae, Ursidae, Ailuridae, Viverridae, Felidae y algunos mamíferos marinos, como la foca cáspica (pusa caspica). Esta enfermedad es causada por el Virus Distemper Canino (VDC), un virus ARN de hebra simple y polaridad negativa, cuyo genoma constituido por seis genes, codifica para seis proteínas estructurales. Entre ellas, la Hemaglutinina codificada por el gen H, presenta la mayor variabilidad aminoacídica, induce la producción de anticuerpos neutralizantes sintetizados por el sistema inmune del hospedero. Basado en la variabilidad del gen H, se ha descrito que a nivel mundial existirían al menos catorce linajes distintos del VDC y en nuestro país se ha descrito la presencia de al menos dos linajes circulando entre nuestros perros enfermos con la patología: América-1 y Europa-1/Sudamérica-1. Así, el objetivo de esta memoria de título fue implementar la detección del linaje América-1 del Virus Distemper Canino mediante la Reacción en Cadena de la Polimerasa asociada a transcripción reversa (RT-PCR) mediante partidores diseñados in silico. Para esto, los partidores se diseñaron a partir de las secuencias nucleotídicas usadas en el árbol filogenético del gen H de VDC realizado por (Ke et al., 2015, las que se encuentran en la base de datos Genbank®, Los partidores diseñados resultaron ser eficaces para la detección del VDC y la RT-PCR fue capaz de detectar un fragmento específico del gen H de las muestras positivas, por lo tanto se podría sugerir que estos partidores diseñados in silico efectivamente se pueden ocupar para detectar el linaje América-1 del VDC. / The Canine Distemper is one of the pathologies that causes the highest rate of morbidity and mortality in domestic dogs worldwide and represents an important disease in several families of terrestrial mammals: Canidae, Procyonidae, Mustelidae, Mephitidae, Hyaenidae, Ursidae, Ailuridae, Viverridae, Felidae and some marine mammals, like the cape seal (pusa caspica). This disease is caused by Canine Distemper Virus (CDV), a single-stranded RNA virus with negative polarity, whose genome consists of six genes codifying for six structural proteins. Among them, the Hemagglutinin encoded by the H gene, has the highest amino acid variability, inducing the production of neutralizing antibodies synthesized by the host's immune system. Based on the variability of the H gene, it has been described that worldwide there would be at least fourteen different VDC lineages and in our country the presence of at least two lineages circulating among our sick dogs has been described with the pathology: America-1 and Europe-1/South America-1. The objective of this title report was to implement the detection of the America-1 lineage of the Canine Distemper Virus through the Polymerase Chain Reaction associated with reverse transcription (RT-PCR) by means of in silico designed primers. For this, the primers were designed using the nucleotide sequences used in the phylogenetic tree constructed using the VDC H gene performed by Ke et al., 2015, and stored in the Genbank® database. The designed primers were found to be effective for the detection of VDC and the RT-PCR was able to detect a specific fragment of the H gene from the positive samples, therefore it could be suggested that these in silico designed primers can effectively be used to detect the VDC lineage America-1.

Submitted by Priscila Nascimento (pnascimento@icict.fiocruz.br) on 2012-11-29T13:14:34Z No. of bitstreams: 1 ana-paula-araujo.pdf: 1867740 bytes, checksum: ab9d7b2866753474ebe7ecb95d8e32d9 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-11-29T13:14:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 ana-paula-araujo.pdf: 1867740 bytes, checksum: ab9d7b2866753474ebe7ecb95d8e32d9 (MD5) Previous issue date: 2011 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto de Tecnologia em Imunobiológicos. Rio de Janeiro, RJ, Brasil. / A eritropoetina (EPO) é um hormônio produzido, principalmente, pelos rins, que regula a produção de células vermelhas do sangue. Trata-se de uma glicoproteína com 166 aminoácidos, três sítios de N-glicosilação e um de O-glicosilação. Apresenta massa molecular na faixa de 30-34 kDa, sendo aproximadamente 40% correspondente aos glicídeos. A EPO está disponível como agente terapêutico produzido através da tecnologia do DNA recombinante em cultura de células de mamíferos. A EPO humana recombinante (rHuEPO) é usada para o tratamento de anemia associada à insuficiência renal crônica. Devido a relevância médica da rHuEPO, sua produção está sendo nacionalizada através do processo de transferência de tecnologia do Centro de Inmunología Molecular (CIM), de Cuba, para o Instituto de Tecnologia de Imunobiológicos (Bio-Manguinhos)/FIOCRUZ. O controle de qualidade sobre o processo produtivo da rHuEPO e seu produto final é bastante rigoroso. Neste contexto, o mapeamento peptídico é um dos mais importantes ensaios usados no controle em processo da produção de proteínas recombinantes. Este ensaio assegura a integridade da estrutura primária das proteínas ao final das etapas de suas purificações. Sendo assim, o objetivo desta dissertação de mestrado foi definir uma metodologia de mapeamento peptídico da rHuEPO, visando o controle de processo da produção deste biofármaco em Bio-Manguinhos. Previamente, a preparação da rHuEPO fornecida pelo CIM foi avaliada quanto a sua homogeneidade e caracterizadapor eletroforeses em gel de poliacrilamida, cromatografia de fase reversa, cromatofocalização eespectrometria de massa. Para obter os peptídeos da rHuEPO, a hidrólise enzimática desta glicoproteína com a enzima tripsina foi avaliada em diferentes tempos de incubação e com relações enzima/substrato distintas. O fracionamento dos peptídeos foi feito por cromatografia líquida de fase reversa em coluna C18, empregando-se diferentes colunas cromatográficas e gradientes de eluição. As principais frações peptídicas isoladas da cromatografia de fase reversa foram analisadas por espectrometria de massa a fim de comprovar a identidade dos peptídeostrípticos da rHuEPO. A especificidade da metodologia desenvolvida foi avaliada através da comparação dos perfis peptídicos do hidrolisado tríptico da rHuEPO e do quimotripsinogênio A. A hidrólise tríptica usando-se relação enzima/substrato de 1/50 (p/p), concentração de rHuEPO de 1 mg/mL e incubação de 1 hora a 37o C hidrolisou mais de 99% da glicoproteína. As colunas cromatográficas de fase reversa Hi-Pore RP 318, Vydac 218TP C18 e Delta Pak C18 se mostraram aptas para o fracionamento dos peptídeos trípticos da rHuEPO. Em comparação à metodologia usada no CIM, o tempo de incubação de hidrólise foi reduzido em, pelo menos,2 horas e a duração da corrida cromatográfica para obtenção do mapa peptídico diminuiu em, pelo menos, 1 hora e 42 minutos. Na análise por espectrometria de massa das frações isoladas da cromatografia de fase reversa, seis peptídeos trípticos da rHuEPO foram observados. Tais frações peptídicas foram identificadas como pertencentes à EPO humana pelo programa Mascot Search Results. Dessa forma, ficou estabelecida uma metodologia de mapeamento peptídico especifica, simples e rápida para ser utilizada no controle em processo da produção da rHuEPO em Bio-Manguinhos. / Erythropoietin (EPO) is a hormone produced mainly by the kidney that regulates the production of red blood cells. It is a glycoprotein with 166 amino acids, three N-glycosylation and one O-glycosylation sites. It has a molecular weight in the range of 30-34 kDa, being approximately 40% of its content corresponding to carbohydrates. EPO is available as a therapeutic agent produced by recombinant DNA technology in mammaliancell culture. The recombinant human EPO (rHuEPO) is used to treat anemia associated with chronic renal disease. Due to rHuEPO medical relevance, its production technology is a subject of transference from the Centro de Inmunología Molecular(CIM), Cuba, to the Instituto de Tecnologia em Imunonobiologicos(Bio-Manguinhos)/FIOCRUZ. The quality control over production process of rHuEPO and its final product is quite rigorous. In this context, peptidemapping is one of the most important tests used in process control of recombinant proteins production. This test ensures the primary structure integrity of a protein after its purification processes. Thus, the objective of this dissertation was to define a methodology for peptide mapping of rHuEPO aiming to be used in the process control of this biopharmaceutical production in Bio-Manguinhos. Previously, the preparation of rHuEPO provided by CIM was characterized by polyacrylamidegel electrophoresis, reversed phase chromatography, chromatofocusing and mass spectrometry. In order to obtain rHuEPO peptides, the enzymatic hydrolysis of this glycoprotein with the enzyme trypsin was assessed at differents incubation times and enzyme/substrate ratio. Peptides fractionation was performed by reverse phase liquid chromatography, using distincts C18 columns and elution gradients. The main peptide fractions from reversed phase chromatography were analyzed by mass spectrometry to confirm the identity of rHuEPO tryptic peptides. The specificity of the developed methodology was evaluated by comparing peptides profiles from rHuEPO and Chymotrypsinogen A tryptic hydrolysates. The tryptic digestion using enzyme/substrate ratio of 1/50 (w/w), substrate concentration of 1 mg/mL and incubation for 1 hour at 37°C hidrolysated more than 99% of the glicoprotein. The reversed phase columns Hi-Pore RP318, Vydac 218TP C18 e Delta Pak C18 were able to fractionate the rHuEPO tryptic peptides. Compared to the methodology used in CIM, the hydrolysis incubation time was reduced by at least 2 hours and the chromatographic running time to obtain the peptide map was decreased by at least 1 hour and 42 minutes. The mass spectrometry analysis of the fractions isolated from reversed-phase chromatography showed six tryptic peptides of rHuEPO. These peptide fractions were identified as belonging to human EPO by the program Mascot Search Results. Thus it was established an specific, simple and fast peptide mapping methodology to use in process control of rHuEPO in Bio-Manguinhos.

Faculdade Christus / Introduction: Genotypic testing for HIV-1 drug resistance is useful for selecting antiretroviral drugs for patients developing treatment failure. O melhor entendimento da sua interpretaÃÃo facilitarà sua utilizaÃÃo como ferramenta mÃdica na terapÃutica do HIV. The optimal understanding of its interpretation will give an important tool for HIV treatment. Objective: To identify common combinations of resistance mutations and antiretroviral resistance profile. Methods: Between April 2002 and March 2004, 101 protease and reverse transcriptase (RT) sequences were determined for HIV-1 isolates from patients who were failing antiretroviral therapy. Resistance profile was obtained by Stanford program. Results: male were 76.2%, median age 38 years, CD4 media was 279.21 cells/mm3 and Viral load 4.49 log. Total of 31 mutational patterns were detected to protease inhibitor (IP), 49 to nucleoside RT inhibitor (NRTI), and 17 to nonnucleoside RT inhibitor (NNRTI). K65R was detected in 5.9% isolates. The most frequent mutations were L90M, M184V and K103N to IP, NRTI and NNRTI respectively. The main mutational patterns accounted for 49% of mutant sequences to IP, 38.5% to ITRN accounted and 40,9% to NNRTI. Patients with three or more therapeutic failure had worst resistance profile to all IP except for Lopinavir, and NRTI except for Tenofovir. High resistance to Lamivudine and NNRTI were independent of failure quantity. Conclusion: The best susceptibility was found to Lopinavir at IPâs class and to Tenofovir at ITRNâs. The main mutational patterns to IP, ITRN and NNRTI represented almost half of all patterns found. / A Genotipagem està sendo usada como mÃtodo para guiar a seleÃÃo de antiretrovirais em pacientes com falha terapÃutica. O melhor entendimento da sua interpretaÃÃo facilitarà sua utilizaÃÃo como ferramenta mÃdica na terapÃutica do HIV. Objetivo: Avaliar o perfil de resistÃncia aos antiretrovirais e identificar padrÃes mutacionais das seqÃÃncias de protease e TR do HIV-1. MÃtodos: Foram estudadas as sequÃncias de genes da protease e TR isoladas de 101 amostras de pacientes com HIV-1 em falha terapÃutica, entre abril/2002 a marÃo/2004, atravÃs de Genotipagem realizadas no CearÃ. O Banco de dados de Stanford foi utilizado para avaliaÃÃo de resistÃncia e SPSS versÃo 11 e Epi Info versÃo 6 para anÃlise estatÃstica. Resultados: Sexo masculino 76,2%, mediana de idade 38 anos, CD4 mÃdio de 279,21 cells/mm3 e Carga Viral 4.49 log. Na classe de Inibidores de Protease (IP) 31 padrÃes mutacionais foram encontrados, nos inibidores da transcriptase reversa anÃlogos de nucleosÃdeos (ITRN) 49 e para inibidores da transcriptase reversa nÃo anÃlogos de nucleosÃdeos (ITRNN) 17. As mutaÃÃes mais frequentes foram L90M, M184V e K103N para IP, ITRN e ITRNN espectivamente. A K65R foi detectada em 5,9% dos isolados. TrÃs ou mais falhas terapÃuticas apresentaram maior perfil de resistÃncia para todos os IPs exceto para Lopinavir, e para todos os ITRNs exceto para Tenofovir. Os seis principais padrÃes mutacionais para IPs equivaleram a 49% das sequÃncias, para ITRNs a 38,5%, e para ITRNNs os dois principais padrÃes corresponderam a 40,9%. Foram encontrados altos Ãndices de resistÃncia para ITRNNs independente da quantidade de falhas terapÃuticas. ConclusÃo: Nos IPs a menor resistÃncia encontrada foi ao Lopinavir e nos ITRNs ao Tenofovir. Os principais padrÃes mutacionais para IPs, ITRNs e ITRNNs representaram quase metade de todos os padrÃes de resistÃncia encontrados.

Con el propósito de genotipificar las mutaciones de resistencia a antiretrovirales existentes en una porción de la Trancriptasa Reversa (TR) del Virus de la Inmunodeficiencia Humana 1 Subtipo B (codones 151 a 261), se colectaron once muestras (n=11) provenientes del Comité de Prevención y Control de SIDA (COPRECOS) del Hospital Militar Central como parte del proyecto: “Detección de Mutaciones Puntuales en VIH-1 relacionadas a Resistencia a Antiretrovirales”. Todas las muestras se sometieron a amplificación por PCR y secuenciamiento mediante el método de Sanger para proceder al análisis de las mutaciones con el Software HIV db versión 4.1.2 de la Universidad de Stanford (disponible online). De acuerdo a los resultados de genotipificiación de la secuencia parcial de la TR, sólo dos de las 11 muestras presentaron mutaciones primarias relacionadas a resistencia a antiretrovirales, el resto de muestras mostraron mutaciones de tipo compensatorias para posiblemente alguna otra mutación fuera de esta región genética de la TR, encontrandose además algunos otros polimorfismos. Este es el primer estudio en el Perú que demuestra la presencia de mutaciones de resistencia en sujetos con tratamiento a antirretrovirales usando un sistema de genotipificación de VIH desarrollado en laboratorio. / In order to genotype the resistance mutations to antiretrovirals drugs from a portion of the Reverse Transcriptase (RT) from the Human Immunodeficiency Virus 1 Subtype B (codons 151 to 261), eleven samples coming from the “Committee of Prevention and Control of AIDS” (COPRECOS) were collected from the “Hospital Central Militar” as part of the Project: “Detection of Punctual Mutations in HIV-1 related to resistance to antiretrovirals drugs “. All samples were subjected to amplification by PCR and sequencing trough the Sanger method. Then RT sequences were analyzed using the HIV db Software version 4.1.2. from Stanford University (available online). According to genotyping results of the partial sequence of RT only two samples were found to have punctual primary related to resistance mutations for antiretroviral drugs, the remainder samples showed some mutations that might be compensatory to other mutations abroad of this RT genetic region and also finding some other polimorfisms. This is the first study made in Peru that detects punctual resistance mutations from patients receiving antirretroviral treatment by using genotyping system entirely developed in laboratory.

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / El Distemper Canino (DC) es una de las principales enfermedades infecciosas en canes domésticos. La introducción de vacunas de virus vivos modificados ha ayudado a mantener controlada la enfermedad. No obstante, en las últimas décadas se ha observado un aumento de la incidencia de esta patología en poblaciones de canes de todo el mundo, desarrollándose inclusive en animales vacunados. Los linajes de virus distemper canino (VDC) circulantes en el mundo se han descrito en base al análisis de la hemaglutinina (H) debido a que posee un alto grado de variabilidad genética. Sin embargo, nuevos estudios han detectado mayores variaciones en la secuencia aminoacídica de una región de la proteína de fusión (F). Para determinar la variabilidad de las cepas de campo en comparación con las vacunas y las cepas de otros linajes, en esta memoria de título se analizó la variabilidad genómica de la región Fsp del gen de la proteína de fusión de VDC. Para esto se implementó una técnica de reacción en cadena de la polimerasa con transcripción reversa (RT-PCR) capaz de amplificar esta región variable, la cual fue identificada mediante su secuencia nucleotídica. Estas secuencias se compararon con cepas vacunales y con cepas de campo de los linajes conocidos. Además, se construyó un árbol filogenético para esta región variable. Los resultados de la comparación de nucleótidos arrojaron que las secuencias de las cepas de campo tienen mayor homología a la cepa vacunal Onderstepoort y según la filogenia pertenecerían al linaje América 1. PALABRAS / FIV 121014019102010