Concentrações séricas basais da proteína amiloide sérica A (SAA) estão significativamente aumentadas em pacientes com câncer e alguns autores sugerem uma relação causal. Trabalho anterior do grupo mostrou que a SAA induz a proliferação de duas linhagens de glioblastoma humano e afeta os processos de invasividade in vitro, sustentando um papel pró-tumoral para esta proteína. Com base nesse trabalho, investigamos a abrangência dos efeitos de SAA para outro tipo de célula tumoral e para isso escolhemos um painel de linhagens de melanoma humano e uma linhagem primária obtida a partir de aspirado de linfonodo de paciente com melanoma, por nós isolada. Observamos que apesar da célula precursora de melanomas, isto é, melanócito, não produzir SAA, todas as linhagens de melanoma produziram a proteína e expressaram alguns dos seus receptores. Além disso, quando estas células foram estimuladas com SAA houve uma inibição da proliferação em tempos curtos de exposição (48 horas) e efeitos citotóxicos após um tempo maior (7 dias). A SAA também afetou processos de invasividade e a produção das citocinas IL-6, IL-8 e TNF-α. Aos avaliarmos o efeito da SAA na interação das células de melanoma com células do sistema imune, vimos que a SAA ativou uma resposta imune anti-tumoral aumentando a expressão de moléculas co-estumolatórias, como CD69 e HLA-DR, e sua função citotóxica. Ainda, vimos que a produção de TNF-α, IFN-&#947, IL-10, IL-1β e IL-8 estimuladas por SAA podem contribuir com os efeitos desta. De forma geral estes resultados nos levam a crer que a SAA tem atividade anti-tumoral em melanomas. Finalizando, com base na importância do desenvolvimento da resistência às terapias atuais para o melanoma, observamos que em células resistentes ao PLX4032, um inibidor de BRAF, os efeitos imunomodulatórios induzidos pela SAA estão abolidos, possivelmente identificando um novo componente da resistência. / Basal serum concentrations of the protein serum amyloid A are significantly increased in cancer patients and some authors suggest a causal relationship. Previous work of our research group showed that SAA induces proliferation of two cell lines of human glioblastoma and affects invasiveness processes in vitro, supporting a pro-tumor role for this protein. Based on this work, we investigated the extent of SAA effects to another type of tumor cell and we chose a panel of human melanoma cell lines and primary line obtained from a patient with melanoma by lymph node aspirate. Melanoma cells were isolated by us. We observed that while the precursor cells of melanoma, melanocytes, do not produce SAA, all melanoma cell lines expressed the protein and produced some of their receptors. Moreover, when these cells were stimulated with SAA there was an inhibition of proliferation in short exposure times (48 hours) and cytotoxic effects after a longer period (7 days). SAA also affected invasive procedures and the production of the cytokines IL-6, IL-8 and TNF-α. To evaluate the SAA effect in the interaction of melanoma cells with immune system cells, we found that SAA activated an anti-tumor immune response by increasing the expression of co-estimulatory molecules such as CD69 and HLA-DR, and their cytotoxic function. Furthermore, we found that the production of TNF-α, IFN-γ, IL-10, IL-1β and IL-8 stimulated by SAA can contribute to this effect. In general these results lead us to believe that the SAA has anti-tumor activity in melanomas. Finally, based on the importance of the resistance development to current therapies for melanoma we observed that in cells resistant to PLX4032, a BRAF inhibitor, the immunomodulatory effects induced by SAA are abolished, possibly identifying a new resistance component.

Son bien conocidas las interacciones que generan la conformación de complejos Enzima-Sustrato como el que se estudia en el presente trabajo, sin embargo, a pesar de los diversos avances que se han hecho al respecto, todavía no se encuentra una técnica efectiva (pero sobre todo eficiente) para una caracterización global de esta interacción. Esto permitiría, por ejemplo, un entendimiento más profundo de la acción catalizadora de la Enzima y de los mecanismos que regula, así como también el desarrollo de inhibidores de su actividad específica. Hoy en día, las técnicas utilizadas para el estudio de conformación tridimensional de macromoléculas biológicas, tales como Difracción de Rayos X (XRD), Difracción de Neutrones (ND), y Resonancia Magnética Nuclear (NMR), han evolucionado notablemente, y esto ha permitido contar con copiosa información accesible a toda la comunidad científica mundial a través de las bases de datos de proteínas (PDB), con acceso libre a través de internet. Asimismo, las técnicas de simulación computacional permiten el modelado y análisis detallado de la estructura microscópica y las propiedades dinámicas de estas macromoléculas, como también de su interacción con otras sustancias. Con este trasfondo es que se inicia un estudio de la interacción de una enzima (la Albúmina Sérica Humana en este caso) con su sustrato. El sustrato utilizado, elegido de entre la gran variedad de pequeñas moléculas hidrofóbicas que interactúan con la Albúmina, fue el Ácido Acetil Salicílico. Con el propósito de desarrollar un método de estudio de la interacción enzima-sustrato, se describen en la presente Tesis los pasos dados en pos de este objetivo.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:52Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-02-28Bitstream added on 2014-06-13T20:04:29Z : No. of bitstreams: 1 andrade_tm_dr_jabo.pdf: 386363 bytes, checksum: dbf87cb7276793300a20851eef33be22 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A leptospirose é uma zoonose de distribuição mundial, assumindo um forte significado social, econômico e cultural. A enfermidade acomete, praticamente, todos os animais domésticos, selvagens e o ser humano, bem como a maioria das espécies silvestres, entre os quais destacam-se os carnívoros, roedores, primatas e marsupiais, que podem tornar-se portadores e contribuírem para a disseminação do microrganismo na natureza. O presente estudo foi realizado na Mata de Santa Teresa, Ribeirão Preto, SP, onde foi realizada a captura de Cebus apella nigritus de vida livre. Foram colhidos amostras de sangue para a realização da soroaglutinação microscópica (SAM), estudo da bioquímica sérica e teste da reação em cadeia da polimerase na urina dos animais. Foram capturados 55 animais e foi observado a soro-reação em 33 animais (60%). Os sorovares encontrados foram Shermani (11/55, 33,33%), Andamana (8/33. 24,24%), Pyrogenes (4/33, 12,12%), Grippotyphosa (2/33; 6,06%), Australis, Canicola, Castelonis, Copenhageni, Hardjo, Hebdomadis, Pomona e Wolffi (1/33, 3,03%), respectivamente. Foi colhido oito amostras de urina dos animais (14,54%) e a análise das amostras de urina pela PCR foi negativa, não demonstrando excreção renal da Leptospira spp. A análise do soro nas provas de bioquímica sérica não foi elucidativa, pois alguns animais apresentaram alto título de anticorpos e níveis normais da bioquímica sérica. / Leptospirosis is a worldwide zoonosis, being social, economic and culture significance. The disease occurs in all domestic animals, wild animals and man, as well as, in majority wildlife species, mainly carnivores, rodents, not human primates and marsupials and they are able to become reservoirs, disseminating the bacteria in the nature. This study were in Mata de Santa Teresa, Ribeirão Preto, SP, where were collected serum of wildlife Cebus paella nigritus and processed by Microscopic Agglutination test (MAT), analysis of serum biochemistry and polymerase chain reaction (PCR) in urine of these animals. Were captured 55 primates (C. apella) and the results showed 33 animals (60%) reactive serum. The serovars: Shermani (11/55, 33,33%), Andamana (8/33. 24,24%), Pyrogenes (4/33, 12,12%), Grippotyphosa (2/33; 6,06%), Australis, Canicola, Castelonis, Copenhageni, Hardjo, Hebdomadis, Pomona and Wolffi (1/33, 3,03%) respectively. Were collected 8 urine samples from primates (14,54%) and analysis from PCR were negative, not showed kidney excretion of Leptospira spp. The serum analyses were not elucidative, because some animals showed high titres antibody levels and normal levels of serum biochemistry.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:31:11Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-01-30Bitstream added on 2014-06-13T19:41:09Z : No. of bitstreams: 1 capua_mlb_dr_jabo.pdf: 641370 bytes, checksum: 71b19a28f172b3515a32ed7c27977d96 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Dezoito cães com diagnóstico citopatológico e/ou histopatológico de linfoma foram avaliados quanto às alterações clínicas e clinico-patológicas. Os animais foram submetidos ao protocolo quimioterápico de Madison-Wisconsin e avaliados clinicamente a cada sessão de quimioterapia quanto à sua resposta ao tratamento. Cinqüenta por cento dos cães apresentaram a forma multicêntrica da doença e 33% a forma cutânea. A manifestação clínica mais comum foi a linfadenomegalia superficial, acompanhada dos sinais sistêmicos de hiporexia, apatia e perda de peso. As principais alterações hematólogicas foram anemia normocítica normocrômica, trombocitopenia e leucocitose, associadas às síndromes paraneoplásicas. Elevações nas atividades séricas de lactato desidrogenase foram observadas em 58% dos cães e a hiperproteinemia ocorreu em 38% dos animais, sendo atribuída principalmente ao aumento de globulinas séricas. Vinte e sete por cento dos animais atingiram remissão completa da doença e 33% atingiram sobrevida de seis meses. Houve correlação positiva entre o valor do hematócrito e o tempo de sobrevida para os cães que morreram, entretanto, o mesmo não foi observado para o valor de lactato desidrogenase. Sugere-se a ocorrência da síndrome da lise tumoral aguda para sete animais dado o intervalo de tempo observado entre a quimioterapia e o óbito e o avançado estágio da doença. A ausência de resposta às tentativas de reindução da remissão, observada em quatro cães, pode estar relacionada com o fenômeno de resistência tumoral aos agentes quimioterápicos. / Clinical and laboratorial evaluation were performed in eighteen dogs with cytopathological and/or histopathological lymphoma diagnosis. Animals underwent the Madison-Wisconsin chemotherapy protocol and were evaluated clinically at each session performed weekly. The multicentric and cutaneous forms of the disease were observed in 50% and 33% of the dogs, respectively. The most common clinical sign was superficial lymphadenomegaly, combined to systemic signs of hyporexia, apathy and weight loss. The main hematological changes were anemia, thrombocytopenia and leukocytosis, associated with paraneoplastic syndromes. Elevated serum activity of lactate dehydrogenase was observed in 58% of the dogs and hyperproteinemia in 38%, attributed to serum globulin increase. Complete remission was achieved in 27% of the animals and the six-month survival rate was 33%. There was a positive correlation between the hematocrit and survival time in dogs that died, however, there was no correlation between lactate dehydrogenase and survival time. The time interval between chemotherapy and death and the advanced stage of the disease in seven animals suggest the occurrence of acute tumor lysis syndrome. The absence of response to attempts of remission reinduction in four animals may be related to the drug tumoral resistance effect.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:10Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-03-11Bitstream added on 2014-06-13T19:45:10Z : No. of bitstreams: 1 barbosa_cp_dr_jabo.pdf: 277709 bytes, checksum: bb4ed336bed6a785faaefe8d1318a305 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A produção in vitro (PIV) de embriões em bovinos tem se estabelecido a cada dia como uma biotecnologia de uso frequente, devido à rapidez na multiplicação de produtos oriundos de fêmeas de alto valor genético. Este trabalho comparou a produção de ovários com e sem corpo lúteo (CL) de vacas Nelore, em relação à quantidade e qualidade de ovócitos recuperados, embriões produzidos, taxas de prenhez e proporção dos sexos após a PIV. Foram realizadas aspirações foliculares dos dois ovários em 250 seções, igualmente distribuídas em cinco grupos, sendo G1=fêmeas gestantes; G2=não gestantes, com CL e submetidas à tratamento hormonal com progestágeno+BE+PGF2µ; G3=não gestantes, sem CL e com o mesmo tratamento de G2; G4=não gestantes, com presença de CL e sem tratamento; G5=não gestantes, sem presença de CL e sem tratamento. Os resultados foram avaliados pela Análise de Variância (ANOVA) e aplicado o Teste de Tukey para comparação entre médias, a 5% de significância, pelo programa SISVAR. Já para comparação de proporção de sexos dentro e entre os grupos, foi utilizado o teste de comparação múltipla de proporções. O G4 produziu maior média de ovócitos totais aspirados que G2 e G3. Comparando os três grupos que apresentavam CL (G1, G2, G4), o G4 foi superior a G1 e G2 em ovócitos totais, no ovário com e sem CL. Em ovócitos viáveis, G2 foi superior a G1 no ovário com CL. Os ovários com CL produziram mais embriões do que os sem CL. As vacas gestantes produziram melhor nos ovários sem CL, com mais ovócitos viáveis (p<0,05) e iguais em embriões (p>0,05), em relação ao ovário com CL. As taxas de prenhez e proporção dos sexos foram semelhantes entre os grupos (p>0,05). A concentração de P4 foi diferente entre os grupos, mas não influenciou as variáveis analisadas. A utilização do tratamento hormonal não melhorou os resultados de nenhuma... / The in vitro production (IVP) bovine embryos has been established each day as a frequent use of biotechnology because of the speed of the multiplication products from females of high genetic value. This study compared the production of ovaries with and without corpus luteum (CL) of cows in relation to quantity and quality of oocytes aspirated, embryos obtained, pregnancy rates and sex ratio after the IVP. Follicular aspirations were performed on both ovaries in 250 sections, equally divided into five groups: G1 = pregnant, G2 = not pregnant, with CL and submitted to hormonal therapy with progestin+BE+PGF2µ; G3 = not pregnant, without CL and with the same treatment of G2; G4 = not pregnant, with the presence of CL and no treatment; G5 = not pregnant, without the presence of CL and no treatment. The statistical analysis was performed with analysis of variance (ANOVA) and the Tukey Test was applied to compare means at 5% significance level, by SISVAR program. To the comparison of sex ratio within and between groups was used the multiple comparison test of proportions. The G4 has produced higher mean total aspirated oocytes that G2 and G3. Comparing the three groups that had CL (G1, G2, G4), G4 was higher than G1 and G2 in total oocytes in ovaries with and without CL. G2 was superior to G1, on viable oocytes from ovary with CL. Ovaries with CL produced more embryos than those without CL. The ovaries without CL produced better in pregnant cows in despite of viable oocytes (p<0.05) and similar embryo production (p>0.05), when compared with ovaries presenting CL. Pregnancy rates and sex ratio were similar between groups (p>0.05). The P4 concentration was different between groups, but did not influence any variable. The use of hormonal treatment did not improve the results of any variable. The choice of donor for PIV is independent of hormone treatment or presence of CL

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:57Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2006-06-23Bitstream added on 2014-06-13T18:32:17Z : No. of bitstreams: 1 guimaraes_fb_me_jabo.pdf: 146789 bytes, checksum: b9e394381e077f8d2aa85026ed83d9d0 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / As aves, especialmente as sedentárias, têm sido utilizadas para a avaliação da qualidade do meio ambiente onde estão fixadas, mostrando-se valiosos bioindicadores. A pomba amargosa, Zenaida auriculata, pode ter uma promissora utilidade por espoliar lavouras onde sabidamente são utilizados diversos defensivos agrícolas, dentre eles os organofosforados. No entanto, dados a respeito do dano ocasionado na referida espécie de ave com organofosforados não se encontram disponíveis na literatura. Este estudo objetivou verificar a viabilidade do uso da pomba amargosa, Zenaida auriculata, como bioindicador de qualidade ambiental pela análise dos dados de eritroleucometria, bioquímica sérica e histopatologia. Para tanto, comparou-se dois grupos, um com 16 animais, intoxicado com metamidofós na dose de 8 mg/kg por via oral, e outro controle, com 8 animais, que recebeu apenas o veículo (salina). Todos os animais eram de vida livre e foram capturados no perímetro urbano da cidade de Jaboticabal, São Paulo. Os animais controle foram sacrificados todos no mesmo dia, e seus dados foram utilizados como padrão de normalidade. Os intoxicados foram acompanhados durante 21 dias, e divididos em 8 grupos com duas aves cada, o primeiro sendo sacrificado 12 horas após a intoxicação e os demais a cada 3 dias. Os dados constatados ou a relação entre estes mostraram que a Zenaida auriculata não é um modelo biológico válido para indicar a presença de organofosforados no ambiente. / Birds, especially the sedentary ones, have been used to evaluate the quality of the environment where they belong, proving to be valuable bioindicators. The Eared Dove, Zenaida auriculata, can have a promising utility since it spoils farmings where several agriculture defensives are used, such as the organophosphate compounds. However, there are no data available in the literature about the damage caused by this sort of chemical product. The goal of this study was to examine the feasibility of using the Eared Dove, Zenaida auriculata, as a bioindicator of environmental quality by the analysis of the data on erythroleucometry, seric biochemistry and histopathology. Therefore, two groups were compared, one having 16 animals, and orally intoxicated with methamidophos in 8mg/kg. Another group, with 8 animals, received only the vehicle (saline). All the animals were free and were captured in the city of Jaboticabal, in Sao Paulo State. All the control animals were sacrificed in the same date and their data were used as a normality pattern. The intoxicated ones were observed for 21 days and spread in 8 groups of two birds each. The first one was sacrificed 12 hours after the intoxication and the rest of them every 3 days. The data obtained and the relations between them showed that Zenaida auriculata is not a valid biological model for indicating the presence of organophosphate compounds in the environment.

Made available in DSpace on 2014-06-12T16:26:33Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo1157_1.pdf: 2359120 bytes, checksum: a6facec530ee646a6ee4bd681eece0ea (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2010 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Nanopartículas fluorescentes de materiais semicondutores, também conhecidas como pontos quânticos (PQs), apresentam-se como uma alternativa promissora em biomarcação frente aos fluoróforos convencionais. Contudo, para tal, faz-se necessário que pesquisas sejam direcionadas para suprir os problemas relacionados à bioconjugação, tais como: (1) obtenção de PQs funcionalizados robustos e reprodutíveis, (2) desenvolvimento de técnicas de conjugação flexíveis e, (3) aplicação de novos métodos para a caracterização do bioconjugado. Nesse sentido, a albumina sérica bovina (ASB), uma proteína plasmática, foi escolhida como sistema modelo para o desenvolvimento de um protocolo de bioconjugação, visando a preparação de imunocomplexos baseados em ligantes bioespecíficos, a serem empregados em fluoroimunoensaios heterogêneos (FIH) para o diagnóstico de doenças através de testes sorológicos. No presente trabalho foram sintetizadas dispersões coloidais core-shell (núcleo-casca) do tipo II-VI de Telureto de Cádmio/Sulfeto de Cádmio (CdTe/CdS) em meio aquoso com as quais realizou-se o processo de conjugação com ASB via agentes de comprimento zero. No estudo do CdTe/CdS, as propriedades estruturais foram estimadas utilizando-se microscopia eletrônica de transmissão convencional e de alta resolução e difração de Raios-X (dmédio = 3 nm, estrutura cúbica tipo blenda de Zinco). As propriedades ópticas (absorção, emissão e excitação) evidenciaram intensidade de emissão máxima na região entre 520 a 550 nm. Os PQs de CdTe/CdS foram empregados em marcações de formas promastigotas de Leishmania chagasi e linfócitos para investigar sua viabilidade, e analisados por microscopia confocal e citometria de fluxo, respectivamente. A obtenção do conjugado CdTe/CdS-ASB foi evidenciada por detecção quantitativa de fluorescência em placas de poliestireno como substrato, comumente usadas em FIH. Estes bioconjugados foram caracterizados por dicroismo circular e técnicas espectroscópicas. Os resultados revelaram um protocolo de bioconjugação eficiente para o CdTe/CdS-ASB e sua confirmação por uma análise rápida, simples e de baixo custo, bem como êxito no emprego de PQs de CdTe/CdS como biomarcador

Submitted by Mario BC (mario@bc.ufrpe.br) on 2018-06-20T13:17:01Z No. of bitstreams: 1 Augusto Carlos da Boaviagem Freire.pdf: 1884232 bytes, checksum: 5603603b465b7617ed01f7dd25021e81 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-06-20T13:18:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Augusto Carlos da Boaviagem Freire.pdf: 1884232 bytes, checksum: 5603603b465b7617ed01f7dd25021e81 (MD5) Previous issue date: 2016-08-31 / This study analyzed for the serum concentration of heavy metal cadmium (Cd), lead (Pb), copper (Cu) and chromium (Cr) in blood samples from 66 manatees (Trichechus manatus manatus) sound, both sexes (25 males and 41 females) kept under captive conditions in Brazil. The animals were classified according to age: neonate (≤ 30 days); puppy (31-730 days); youth (731-2190 days) and adult (> 2191 days). Blood was collected and then centrifuged to obtain serum, and subsequently digested in nitric acid and then subjected to a thermostated bath at 90°C for a period of one hour. For the quantification of the metals employed to Spectrometry Optical Emission Inductively Coupled Plasma (ICP OES). Among the 66 serum samples tested, 100% had levels of at least one of the metals, and only 7.57% submitted to simultaneous concentration (Cu), (Cd) and (Cr). There was no correlation between the serum concentration of metals and the variables: sex, age and environment. For the analysis of lead (Pb), the samples had concentrations outside the detection limit, thus were not evaluated statistically. The concentrations of heavy metals found in this study were higher than those reported in other studies. Among the possible sources of contamination various human activities are among the priorities. These results raise concerns regarding the health of animals and the means which are inserted. However the study of target specimen, according to their characteristics, proved efficient as a sentinel species. Additional researches regarding metal bioaccumulation in sirenians and in the environmentare required. / Objetivou-se com este estudo pesquisara concentração sérica dos metais pesados cádmio (Cd), chumbo (Pb), cobre (Cu) e cromo (Cr), em amostras de sangue de 66 peixes-bois marinhos (Trichechus manatus manatus) hígidos, de ambos os sexos (25 machos e 41 fêmeas) mantidos sob condição de cativeiro no Brasil. Os animais foram classificados de acordo com a idade em neonato (≤ 30 dias); filhote (31 a 730 dias); juvenil (731 a 2190 dias) e adulto (> 2191 dias). O sangue obtido foi centrifugado para obtenção do soro sanguíneo, sendo posteriormente digerido em ácido nítrico e em seguida submetido ao banho termostatizado a 90°C por um período de uma hora. Para a quantificação de dos metais empregou-se a técnica de Espectrometria de Emissão Óptica com Plasma Indutivamente Acoplado (ICP OES). Dentre as 66 amostras séricas analisadas, 100% apresentaram concentrações de pelo menos um dos metais, e apenas 7,57% apresentaram concentração simultânea para (Cu), (Cd) e (Cr). Não houve correlação entre a concentração sérica dos metais e as variáveis sexo, idade e ambiente. Para a análise de chumbo (Pb), as amostras apresentaram concentrações fora do limite de detecção, deste modo não foram avaliadas estatisticamente. Os valores das concentrações dos metais pesados encontrados neste estudo foram superiores aos relatados em outras pesquisas. Dentre as possíveis fontes de contaminação, as diversas ações antrópicas estão entre as prioritárias. Tais resultados geram preocupações no que concerne a saúde dos animais bem como ao meio o qual estão inseridos. O espécime alvo de estudo, de acordo com suas características, pode revelar-se eficiente como espécie sentinela, entretantopara tal são necessárias pesquisas complementares no que se refere à bioacumulação de metais em sirênios bem como no meio ambiente.

Concentrações séricas basais da proteína amiloide sérica A (SAA) estão significativamente aumentadas em pacientes com câncer e alguns autores sugerem uma relação causal. Trabalho anterior do grupo mostrou que a SAA induz a proliferação de duas linhagens de glioblastoma humano e afeta os processos de invasividade in vitro, sustentando um papel pró-tumoral para esta proteína. Com base nesse trabalho, investigamos a abrangência dos efeitos de SAA para outro tipo de célula tumoral e para isso escolhemos um painel de linhagens de melanoma humano e uma linhagem primária obtida a partir de aspirado de linfonodo de paciente com melanoma, por nós isolada. Observamos que apesar da célula precursora de melanomas, isto é, melanócito, não produzir SAA, todas as linhagens de melanoma produziram a proteína e expressaram alguns dos seus receptores. Além disso, quando estas células foram estimuladas com SAA houve uma inibição da proliferação em tempos curtos de exposição (48 horas) e efeitos citotóxicos após um tempo maior (7 dias). A SAA também afetou processos de invasividade e a produção das citocinas IL-6, IL-8 e TNF-&#945;. Aos avaliarmos o efeito da SAA na interação das células de melanoma com células do sistema imune, vimos que a SAA ativou uma resposta imune anti-tumoral aumentando a expressão de moléculas co-estumolatórias, como CD69 e HLA-DR, e sua função citotóxica. Ainda, vimos que a produção de TNF-&#945;, IFN-&#947, IL-10, IL-1&#946; e IL-8 estimuladas por SAA podem contribuir com os efeitos desta. De forma geral estes resultados nos levam a crer que a SAA tem atividade anti-tumoral em melanomas. Finalizando, com base na importância do desenvolvimento da resistência às terapias atuais para o melanoma, observamos que em células resistentes ao PLX4032, um inibidor de BRAF, os efeitos imunomodulatórios induzidos pela SAA estão abolidos, possivelmente identificando um novo componente da resistência. / Basal serum concentrations of the protein serum amyloid A are significantly increased in cancer patients and some authors suggest a causal relationship. Previous work of our research group showed that SAA induces proliferation of two cell lines of human glioblastoma and affects invasiveness processes in vitro, supporting a pro-tumor role for this protein. Based on this work, we investigated the extent of SAA effects to another type of tumor cell and we chose a panel of human melanoma cell lines and primary line obtained from a patient with melanoma by lymph node aspirate. Melanoma cells were isolated by us. We observed that while the precursor cells of melanoma, melanocytes, do not produce SAA, all melanoma cell lines expressed the protein and produced some of their receptors. Moreover, when these cells were stimulated with SAA there was an inhibition of proliferation in short exposure times (48 hours) and cytotoxic effects after a longer period (7 days). SAA also affected invasive procedures and the production of the cytokines IL-6, IL-8 and TNF-&#945;. To evaluate the SAA effect in the interaction of melanoma cells with immune system cells, we found that SAA activated an anti-tumor immune response by increasing the expression of co-estimulatory molecules such as CD69 and HLA-DR, and their cytotoxic function. Furthermore, we found that the production of TNF-&#945;, IFN-&#947;, IL-10, IL-1&#946; and IL-8 stimulated by SAA can contribute to this effect. In general these results lead us to believe that the SAA has anti-tumor activity in melanomas. Finally, based on the importance of the resistance development to current therapies for melanoma we observed that in cells resistant to PLX4032, a BRAF inhibitor, the immunomodulatory effects induced by SAA are abolished, possibly identifying a new resistance component.

Este trabalho tem como objetivo sintetizar e caracterizar um novo complexo mononuclear de rutênio (III) e enrofloxacina (enro, fármaco antibacteriano da família das fluoroquinolonas), [Ru(enro)3].nH2O. Foram testadas várias rotas sintéticas e apenas a partir de uma delas obteve-se o composto desejado. O produto foi caracterizado pelas técnicas espectroscópicas de absorção na região do UV-visível e do infra-vermelho. Através desta última técnica foi possível determinar o modo pelo qual a enrofloxacina se coordena ao íon rutênio: a coordenação ocorre de modo bidentado através do oxigênio da piridona e do oxigênio do grupamento carboxilato. Outro objetivo deste trabalho foi investigar a interação do complexo mononuclear de rutênio (III) e norfloxacina, [Ru(nor)3].nH2O, com a albumina de soro humano (HSA), através da técnica de luminescência. Mais especificamente pelo estudo da supressão da luminescência dos resíduos de triptofano, aplicando-se o modelo de tratamento da supressão bimolecular de Stern-Volmer. O estudo de supressão de fluorescência mostrou, por meio de espectros de emissão da HSA, que com o aumento da concentração do complexo [Ru(nor)3].nH2O na solução de HSA, ocorre uma redução gradual da luminescência da HSA, devido a alterações da conformação da proteína, que sugerem alteração do microambiente próximos aos resíduos de triptofano. A partir do tratamento dos dados pode-se determinar tanto K_sv quanto a constante cinética do processo de supressão, que mostraram uma dependência com a temperatura sugerindo como mecanismo predominante de supressão o mecanismo dinâmico. Porém essa conclusão foi revista a partir da determinação dos tempos de vida do estado excitado da HSA, e pode-se concluir que o mecanismo predominante à temperatura ambiente é o mecanismo estático, porém com o aumento da temperatura ocorre a predominância do mecanismo do tipo dinâmico. Através da determinação dos parâmetros termodinâmicos, concluiu-se que as interações entre a HSA e o complexo são espontâneas, e forças de van der Waals e ligações de hidrogênio estão envolvidas na ligação entre a HSA e o supressor. / This work aims to synthesize and characterize a new mononuclear ruthenium (III) complex and enrofloxacin (enro, antibacterial drug of the fluoroquinolone family), [Ru(enro)3].nH2O. Several synthetic routes were tested, but only from one of them it was obtained the desired compound. The product was characterized by spectroscopic techniques of absorption in UV-visible and infra-red regions. Through this last technique, it was possible to determine the coordination mode of enrofloxacin to the ruthenium ion: the coordination occurs in a bidentate way through the pyridone oxygen and the oxygen of the carboxylate group. Another aim of this study was to investigate the interaction of mononuclear ruthenium (III) complex and the norfloxacin, [Ru(nor)3].nH2O, with the human serum albumin (HSA), through the technique of luminescence. More specifically, by the study of the quenching of luminescence of tryptophan residues, by applying the Stern-Volmers model of treatment of bimolecular suppression. The fluorescence quenching study showed, through the emission spectra of HSA, that increasing the complex concentration in HSA solution, there is a gradual reduction of the luminescence of HSA, due to the conformational changes of the protein that suggests the change of microenvironment near tryptophan residues. From the data processing it is possible to determine both K_sv and the kinetic constant of the suppression process, which showed temperature dependence, suggesting as the predominant mechanism of quenching the dynamic mechanism. However, this conclusion has been revised from the determination of the lifetimes of the excited state of HSA, and it can be concluded that the predominant mechanism at room temperature is the static mechanism, but with the temperatures increase, it occurs the predominance of the dynamic type mechanism. By determining the thermodynamic parameters, it was concluded that the interactions between HSA and the complex are spontaneous, and Van der Waals forces and hydrogen bonds are involved in the binding between HSA and suppressor.