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ÍNDICE DE PRENHEZ COM SÊMEN CONGELADO DE GARANHÕES CRIOULOS USANDO GLICEROL OU DIMETILFORMAMIDA COMO CRIOPROTETORES / PREGNANCY RATES USING FROZEN SEMEN OF CRIOLLO STALLION S WITH GLYCEROL OR DIMETHYLFORMAMID AS CRYOPROTECTANTSOliveira, Rodrigo Arruda de 27 February 2007 (has links)
Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / During the 2005 and 2006 southern hemisphere natural breeding season, 104 Criollo mares were used to evaluate deep frozen semen fertility from 5 Criollo stallions. FR4
was used as extender (Nutricell, Brazil) with 5% glycerol (GLY) or 5% dimethylformamid (DMF) as cryoprotectants. Semen was loaded in 0.5mL straws (100x106 spermatozoa/straw). Mares were examined every other day by
ultrasonography until detection of ≥30mm diameter follicles, when hCG was injected
(2500UI i.v.). After 24 hours, mares were examined daily in Experiment I, and every 6
hours, in experiment II. Insemination with frozen semen was performed deep in the
uterine horn ipsilateralis to the dominant follicle. Controls were inseminated with fresh
semen in the body of the uterus. Only one estrus period per mare was used.
Pregnancy diagnosis through ultrasonography was performed on the 15th day postovulation.
In experiment I, pregnancy rates were 11.9% (5/42) and 62.5% (20/32),
respectively for DMF and fresh semen (P<0.0001). In experiment II, pregnancy rates
were 40% (4/10), 10% (1/10) and 70% (7/10), respectively for DMF, GLY (P>0.05)
and fresh semen (P<0.0001). It was showed that GLY and DMF can be used for
frozen of Criollo Stallion s semen. In this context DMF brought better results. / Durante a estação reprodutiva natural de 2005 e 2006 do hemisfério sul, 104 éguas Crioulas foram utilizadas para avaliar a fertilidade do sêmen congelado de cinco garanhões Crioulos. Como diluente usou-se FR4 (Nutricell, Brasil) com 5% de
glicerol (GLI) ou 5% de dimetilformamida (DMF) como crioprotetores. O sêmen foi envasado em palhetas de 0,5mL (100x106 espermatozóides/palheta). Examinou-se
as éguas em dias alternados por ultra-sonografia transretal para detecção de folículos ≥30mm de diâmetro, quando recebiam hCG (2500UI i.v.). Apos 24h eram examinadas diariamente no Experimento I e a cada 6h no Experimento II. As inseminações com sêmen congelado eram realizadas no fundo do corno ipsislateralis ao folículo dominante. Nas controle, com sêmen fresco no corpo uterino. Utilizou-se um ciclo estral/animal. O diagnóstico de gestação foi conduzido
por ultra-sonografia no 15o dia pós-ovulação. No experimento I, a taxa de prenhez foi 11,9% (5/42) e 62,5% (20/32), respectivamente para DMF e sêmen fresco (P<0,0001). No experimento II, a taxa de prenhez foi 40% (4/10), 10% (1/10) e 70% (7/10), respectivamente para DMF, GLI (P>0,05) e sêmen fresco (P<0,0001). Demonstrou-se que o GLI e a DMF podem ser utilizados como crioprotetores para o
congelamento do sêmen de garanhões Crioulos. Neste contexto, a DMF apresentou melhores resultados.
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Avaliação da dimetilacetamida e do glicerol na criopreservação do sêmen de suínos através de testes de fertilização in vitro / Evaluation of dimethylacetamide and glycerol on cryopreservation of boar semen through in vitro fertilization testsRambo, Gissele 24 November 2008 (has links)
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Previous issue date: 2008-11-24 / The evaluation of the efficiency of semen cryopreservation is critical to make
the use of frozen semen feasible in artificial insemination programs in swine.
This study compared the efficiency of two non-penetrating cryoprotectants
(dimetilacetamide-DMA or glycerol) on parameters of post-thawing semen
quality and in vitro fertility with frozen swine semen. The sperm-rich fractions of
28 ejaculates from four boars were frozen with either DMA or glycerol. The
efficiency of semen freezing was evaluated through parameters of post-thawing
semen quality and in vitro penetration (IVP) of swine oocytes and embryo
production. For samples frozen with DMA, sperm motility (38.1%) and
membrane integrity (39.9%) were greater (P < 0.05) than those for glycerol
(21.9% and 13.0%, respectively). Both the IVP rate and the number of
spermatozoa per oocyte were greater (P < 0.05) for DMA (27.9% and 29.2,
respectively) than for glycerol (13.6% and 20.7, respectively). The cleavage rate
with DMA and glycerol samples (13.0% and 15.6%, respectively) were similar
(P > 0.05). The embryo development rate did not differ (P < 0.05) for DMA
(15.8%) and glycerol (22.0%). Therefore, when compared to glycerol, DMA was
associated with improved post-thawing semen quality and in vitro fertility. / A avaliação da eficiência da criopreservação do sêmen é uma importante
ferramenta para viabilizar o uso de sêmen congelado na inseminação artificial
em suínos. Um experimento foi realizado a fim de identificar qual crioprotetor
interno (dimetilacetamida-DMA ou glicerol) seria associado com melhores
indicadores de qualidade seminal pós-descongelamento e fertilidade in vitro
com sêmen suíno congelado. A fração espermática rica em espermatozóides
de 28 ejaculados provenientes de quatro machos foi congelada com DMA ou
glicerol. Para estimar o sucesso da criopreservação do sêmen foram utilizados
parâmetros de qualidade seminal pós-descongelamento, teste de penetração in
vitro (TPIV) de ovócitos suínos e produção in vitro de embriões. Para amostras
congeladas com DMA, a motilidade (38,1%) e a integridade da membrana
espermática (39,9%) foram superiores (P < 0,05) às observadas com glicerol
(21,9% e 13,0%, respectivamente). A taxa de TPIV e o número de
espermatozóides por ovócito também foram superiores (P < 0,05) para a DMA
(27,9% e 29,2, respectivamente) do que para o glicerol (13,6% e 20,7,
respectivamente). A taxa de clivagem alcançada com a DMA (13,0%) foi similar
(P > 0,05) à obtida com glicerol (15,6%). A taxa de desenvolvimento
embrionário não diferiu (P > 0,05) entre DMA e glicerol (15,8% e 22,0%,
respectivamente). Portanto, considerando o conjunto de todos os testes, em
comparação com o glicerol, a DMA foi associada com melhores indicadores de
qualidade seminal e fertilidade in vitro.
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Congelamento de sêmen suíno: estudo de crioprotetores intra e extracelulares, metodologias de congelamento e marcador molecular de congelabilidade / Freezing of boar semen: study of penetrating and nonpenetrating cryoprotectants, freezing methods and freezability molecular markerBianchi, Ivan 27 February 2007 (has links)
Made available in DSpace on 2014-08-20T13:32:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1
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Previous issue date: 2007-02-27 / Although boar semen is available in the frozen format since 1975, its use has been
restricted to very specific situations for many reasons: it requires spermatozoa
concentration per dose twice to three times higher than that for cooled semen; semen
processing is labor intensive; and farrowing rate and litter size are reduced. Thus,
most of the artificial inseminations in swine are performed at the day of semen
collection or at most at the following day, using liquid semen conditioned between 15
and 18 ºC. The aims of this thesis were: to evaluate distinct extenders for cooling
semen, methods for freezing, centrifugation temperatures, the use of amides as
penetrating cryoprotectants and of low density lipoprotein as nonpenetrating
cryoprotectants, and the presence of specific protein factors in seminal plasma in the
results that could be associated with boar semen freezability. Five experiments have
been executed: four with evaluations in vitro (motility and cell membrane integrity);
and one with fertilization in vivo. The control treatment was the freezing with glycerol
at 3% concentration. The semen processing method that provide more efficient
results consisted of semen cooling during 120 min up to a centrifugation temperature
of 15 °C. We also identified a 26 kDa factor in the seminal plasma that is associated
with maintenance of the integrity of the sperm cell membrane post-thawing.
Additionally, parameters of semen quality in vitro with the use of dimetilacetamide at
5% were better than those observed with the most used penetrating cryoprotectant
(glycerol 3%) as control, although no difference between those cryoprotectants was
observed in vivo. This study demonstrated the association of components in the
seminal plasma with the sperm quality, and presenting an alternative protocol of
semen freezing-thawed boar semen based in the use of dimetilacetamide at 5%. / Apesar do sêmen suíno congelado estar disponível comercialmente deste 1975, o
seu uso tem ocorrido somente em ocasiões específicas, pois, em relação ao uso de
sêmen refrigerado, requer duas a três vezes maior número de espermatozóides por
dose, o processamento do sêmen é trabalhoso, o tamanho da leitegada é diminuído
em um a três leitões por parto e a taxa de parição é menor. Dessa forma, a grande
maioria das inseminações artificiais nessa espécie utiliza sêmen diluído e
acondicionado no estado líquido entre 15 e 18 ºC. Os objetivos desta tese foram:
avaliar diferentes diluidores de resfriamento, metodologias de congelamento,
temperaturas de centrifugação, uso de crioprotetores intracelulares a base de
amidas e extracelulares baseados em lipoproteína de baixa densidade, além do
estudo de fatores protéicos presentes no plasma seminal nos resultados de
avaliações in vitro e in vivo de sêmen suíno congelado-descongelado. Foram
executados cinco experimentos com avaliações da qualidade do sêmen congeladodescongelado,
quatro experimentos com avaliações in vitro (motilidade e integridade
de membrana) e um experimento com fertilização in vivo. O tratamento utilizado
como controle foi o congelamento com glicerol na concentração de 3%. A melhor
curva de resfriamento após a coleta até 15 °C, foi atingida com o tempo de 120 min.
Foi identificado um fator de 26 kDa no plasma seminal, cuja ausência proporcionou
melhores resultados de integridade de membrana plasmática após o
descongelamento. O uso do crioprotetor intracelular dimetilacetamida na
concentração de 5%, proporcionou nas avaliações in vitro, resultados superiores ao
tratamento controle (glicerol 3%), não diferindo na avaliação in vivo. O presente
estudo demonstrou a relação de componentes do plasma seminal com a qualidade
espermática, além de apresentar um novo protocolo de congelamentodescongelamento
de sêmen suíno baseado no uso de dimetilacetamida 5%.
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