Made available in DSpace on 2016-09-27T13:40:09Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2004-07-15. Added 1 bitstream(s) on 2016-09-27T13:45:22Z : No. of bitstreams: 1 000226861.pdf: 928621 bytes, checksum: 36b3397f0893bf6232865ca39606779e (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Amostras de sêmen e testículo foram coletadas de exemplares machos e adultos de Piracanjuba (Brycon orbignyanus). Jundiá (Rhamdia quelen) e Piraputanga (Brycon hilarii) no Centro de Aqüicultura da UNESP (CAUNESP) - Jaboticabal - SP (Brasil) e no Centro Nacional de Pesquisa em Peixes Tropicais (CEPTA) - Pirassununga SP (Brasil). Análises macroscópicas evidenciaram características relacionadas à cor, aspecto e volume. Microscopicamente foram avaliadas: Motilidade, viabilidade e concentração dos espermatozóides. Bioquimicamente foram analisados os principais componentes do plasma seminal, íons (sódio, potássio, magnésio e cálcio), osmolaridade e concentração de glicose. Para a realização dos estudos ultraestruturais, fragmentos dos testículos foram fixados em glutaraldeído 2,5% e processados segundo rotina de microscopia eletrônica de transmissão. O objetivo deste trabalho foi analisar, comparativamente, os parâmetros seminais e a estrutura dos espermatozóides de 3 espécies de peixes neotropicais (Piracanjuba, Brycon orbignyanus, Piraputanga, Brycon hilarii e Jundiá, Rhamdia quelen). Na piracanjuba, o sêmen apresentou coloração amarelada e aspecto aquoso. Em jundiá a cor do sêmen é branca e o aspecto cremoso. Na piraputanga a coloração do sêmen é esbranquiçada e o aspecto leitoso. Se comparamos estas características com a concentração espermática encontrada em piracanjuba (2,72 x 109 ± 1,92 x 109 sp/mL), jundiá (4,57 x 1010 ± 1,50 x 1010 sp/mL) e piraputanga (6,46 x 109 ± 2,72 x 109 sp/mL) e com os valores do espermatócrito (5,5%, 93,5% e 16,6% respectivamente), podemos concluir que quanto mais cremoso for o sêmen, maior será sua concentração espermática. A piracanjuba apresentou o menor valor de porcentagem de motilidade espermática (77±6,74%). Por outro lado, observou-se que a composição iônica varia entre as espécies e dentro das... / Semen and testes samples were collected of male adults of Piracanjuba (Brycon orbignyanus). Jundiá (Rhamdia quelen) and Piraputanga (Brycon hilarii) in the Aquaculture Center of UNESP (CAUNESP) - Jaboticabal - SP (Brazil) and in the National Center of Research in Tropical Fish (CEPTA) - Pirassununga - SP (Brazil). Macroscopic analyses evidenced characteristics related to the color, aspect and volume. It was microscopically appraised: The motility, viability and cell concentration of the sperm. The main biochemistry components of the seminal plasm, ionic (sodium, potassium, magnesium and calcium), osmolality and glucose concentration were analyzed. For the accomplishment of the ultrastructural studies, fragments of testicular tissue were fixed in glutaraldehyde 2,5% and processed according to transmission electron microscope routine. The aim of this study was analyze comparatively, the seminal parameters and the structure of the spermatozoon of 3 neotropical fish species (Piracanjuba, Brycon orbignyanus, Piraputanga, Brycon hilarii and Jundiá, Rhamdia quelen). In the piracanjuba, the semen is yellowish and with aqueous aspect. In jundiá the color of the semen is white and with creamy aspect. In the piraputanga the coloration of the semen is whitish and milky aspect. Comparing these characteristics with the sperm concentration found in piracanjuba (2,72 x 109 ± 1,92 x 109 sp/mL), jundiá (4,57 x 1010 ± 1,50 x 1010 sp/mL) and piraputanga (6,46 x 109 ± 2,72 x 109 sp/mL) and with the values of the spermatocrit (5,5%, 93,5% and 16,6% respectively), we can observed that the more creamy semen, the bigger the sperm concentration. The piracanjuba presented the smallest value of percentage of sperm motility (77±6,74%). On the other hand, it was observed that the ionic composition varies among the species and inside of the same ones, due to factors as the environment or to the reproduction ...

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:15Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-08-25Bitstream added on 2014-06-13T18:58:51Z : No. of bitstreams: 1 sakashita_sm_me_botfmvz.pdf: 493745 bytes, checksum: b66b1a455367ff9bb2f050d0a9445f86 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Objetivou-se determinar in vitro o efeito da adição de antioxidantes Trolox® e Catalase ao diluidor Glicina-Gema-Leite com 5% de gema de ovo, utilizado na refrigeração do sêmen caprino em sistema de Equitainer® por 24 ou 48 horas, avaliando-se a motilidade espermática determinada no sistema computadorizado (CASA), a integridade de membrana plasmática pela combinação dos corantes fluorescente iodeto de propídio e diacetato de carboxifluoresceína (IP+DIC), patologia espermática em câmara úmida em solução de gluteraldeído e após a refrigeração ao teste de exaustão em banho-maria (37ºC até 240 minutos). Para isso foi utilizado o sêmen em duplicata (12 amostras) de 6 caprinos Boer, coletados com vagina artificial e diluído na concentração final de 400x106 espermatozóides/mL em meio Glicose-Leite (GL) e nos diluidores Glicina-Gema-Leite com (GGLtc) e sem (GGL) antioxidantes Trolox® e Catalase. As análises foram realizadas no sêmen fresco, após diluição (pré-refrigeração), 24 e 48 horas pós-refrigeração no sistema Equitainer®, e durante o teste de exaustão nos tempos 30, 60, 120 e 240 minutos de incubação em banho-maria. Foi demonstrado que o diluidor GGLtc demonstrou melhor eficiência na proteção de acrossomo entre os diluidores. A adição de antioxidante ao diluidor GGL com 5% de gema de ovo foi capaz de manter baixo percentual de acrossomo lesado durante a refrigeração de até 48 horas e o sistema Equitainer® eficiente durante a refrigeração até 48 horas / The objetive was to determine in vitro the effect of adding antioxidant Trolox® and Catalase in the extender Glycine-Yolk-Milk with 5% of egg yolk, used in the goat semen cooling in Equitainer® system for 24 or 48 hours, evaluating sperm motility determined by the computerized semen analysis (CASA), the integrity of the plasma membrane by a combination of fluorescent carboxyfluorescein diacetato(DIC) and propidium iodide(IP), sperm pathology in the humid chamber in gluteraldehyde solution and after cooling to the exhaustion test in a water bath (37°C up to 240 minutes). For the semen that was used in duplicate (12 samples) for six Boer goats, collected with artificial vagina and diluted at a final concentration of 400x106 sperm/mL using extenders Glucose-Milk (GL) and Glycine-Yolk-Milk (GGLtc) and without (GGL) antioxidant Trolox® and Catalase. Analyses were performed in fresh semen, after diluition (pre-cooling) and 24 or 48 hours post cooling in Equitainer® system, and during the exhaustion test incubation in a water bath for 30, 60, 120 and 240 minutes. It has been shown that the extender GGLtc showed better efficiency in protection acrossome between the extenders. The addition of antioxidant in the GGL with 5% egg yolk (GGLtc) was able to maintain a low percentage of damaged acrossome during cooling up to 48 hours and the Equitainer® system during the cooling efficiency up to 48 hours

Orientador: Frederico Ozanam Papa / Banca: Rubens Paes de Arruda / Banca: Fernanda da Cruz Landim / Banca: Maria Denise Lopes / Banca: Andre Maciel Crespilho / Resumo: As biotécnicas de refrigeração e congelação podem causar danos irreversíveis à célula espermática devido ao estresse gerado pela queda de temperatura ou, no caso da criopreservação, pela formação de cristais de gelo intracelulares. Estas alterações resultam na diminuição da longevidade do espermatozóide no trato reprodutor da fêmea e, conseqüentemente, na queda dos índices de fertilidade. Sabendo-se que as alterações das características espermática afetam a viabilidade do sêmen sobre as diferentes formas de preservação seminal e que garanhões de diferentes taxas de fertilidade nem sempre apresentam diferenças significativas nas análises seminais padrões, faz-se necessário uma análise mais específica da células espermática, como a avaliação de vários parametros funcionais em células individuais, o que possivelmente reduziria as incertezas inerentes a previsão da fertilidade na avaliação in vitro do sêmen. Para comprovação desta hipótese três experimentos foram realizados. No experimento 1 o objetivo foi identificar e avaliar as principais modificações ocorridas nas características morfofuncionais do sêmen equino estocado a temperatura ambiente (18-22ºC) por um período de 12 horas. No experimento 2 o objetivo foi verificar a possibilidade de modular estas alterações através de duas temperaturas de refrigeração (5ºC e 15ºC), e, no experimento 3, o objetivo foi avaliar e verificar a relação destas alterações com os índices de fertilidade em sêmen congelado. Para os experimentos 1 e 2, três ejaculados de seis diferentes garanhões foram avaliados quanto a cinética espermática através da análise computadorizada do movimento espermático; para a avaliação morfofuncional foram avaliadas a integridade das membranas plasmática... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Cooling and freezing can cause irreversible damage to sperm cells due to the stress generated by the decrease in temperature or, in the case of cryopreservation, the formation of intracellular ice crystals. These changes result in decreased longevity of sperm in the female reproductive tract and, consequently, a decrease in fertility rates. The changes in sperm characteristics affect the viability of the semen, and these changes vary based on the different preservation techniques used to preserve the semen from different stallions. In addition, fertility rates do not always show significant differences in semen analysis patterns. Therefore, a more specific analysis of sperm cells is necessary. This analysis should include a functional assessment of multiple parameters in individual cells, which might reduce uncertainties in the prediction of fertility based on the in vitro evaluation of semen. To test this hypothesis, three experiments were performed. In experiment 1, the objective was to identify and assess the main characteristic morph functional changes in equine semen that is stored at room temperature (18-22°C) for a period of 12 hours. In experiment 2, the objective was to determine the possibility of modulating these changes using two refrigeration temperatures (5°C and 15°C). In experiment 3, the objective was to evaluate and compare the influence of these changes on fertility rates between semen at various temperatures and in frozen semen. For experiments 1 and 2, the sperm kinetics of three different ejaculates from six stallions were evaluated using a computerized analysis of sperm motility. For morphological and functional assessments, the following parameters were evaluated: plasma and acrosomal membrane integrity, mitochondrial membrane potential, rate of DNA fragmentation, caspase activation and... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Sony Dimas Bicudo / Banca: Daniel Bartoli de Sousa / Banca: Cezinande Meira / Resumo: Objetivou-se determinar in vitro o efeito da adição de antioxidantes Trolox® e Catalase ao diluidor Glicina-Gema-Leite com 5% de gema de ovo, utilizado na refrigeração do sêmen caprino em sistema de Equitainer® por 24 ou 48 horas, avaliando-se a motilidade espermática determinada no sistema computadorizado (CASA), a integridade de membrana plasmática pela combinação dos corantes fluorescente iodeto de propídio e diacetato de carboxifluoresceína (IP+DIC), patologia espermática em câmara úmida em solução de gluteraldeído e após a refrigeração ao teste de exaustão em banho-maria (37ºC até 240 minutos). Para isso foi utilizado o sêmen em duplicata (12 amostras) de 6 caprinos Boer, coletados com vagina artificial e diluído na concentração final de 400x106 espermatozóides/mL em meio Glicose-Leite (GL) e nos diluidores Glicina-Gema-Leite com (GGLtc) e sem (GGL) antioxidantes Trolox® e Catalase. As análises foram realizadas no sêmen fresco, após diluição (pré-refrigeração), 24 e 48 horas pós-refrigeração no sistema Equitainer®, e durante o teste de exaustão nos tempos 30, 60, 120 e 240 minutos de incubação em banho-maria. Foi demonstrado que o diluidor GGLtc demonstrou melhor eficiência na proteção de acrossomo entre os diluidores. A adição de antioxidante ao diluidor GGL com 5% de gema de ovo foi capaz de manter baixo percentual de acrossomo lesado durante a refrigeração de até 48 horas e o sistema Equitainer® eficiente durante a refrigeração até 48 horas / Abstract: The objetive was to determine in vitro the effect of adding antioxidant Trolox® and Catalase in the extender Glycine-Yolk-Milk with 5% of egg yolk, used in the goat semen cooling in Equitainer® system for 24 or 48 hours, evaluating sperm motility determined by the computerized semen analysis (CASA), the integrity of the plasma membrane by a combination of fluorescent carboxyfluorescein diacetato(DIC) and propidium iodide(IP), sperm pathology in the humid chamber in gluteraldehyde solution and after cooling to the exhaustion test in a water bath (37°C up to 240 minutes). For the semen that was used in duplicate (12 samples) for six Boer goats, collected with artificial vagina and diluted at a final concentration of 400x106 sperm/mL using extenders Glucose-Milk (GL) and Glycine-Yolk-Milk (GGLtc) and without (GGL) antioxidant Trolox® and Catalase. Analyses were performed in fresh semen, after diluition (pre-cooling) and 24 or 48 hours post cooling in Equitainer® system, and during the exhaustion test incubation in a water bath for 30, 60, 120 and 240 minutes. It has been shown that the extender GGLtc showed better efficiency in protection acrossome between the extenders. The addition of antioxidant in the GGL with 5% egg yolk (GGLtc) was able to maintain a low percentage of damaged acrossome during cooling up to 48 hours and the Equitainer® system during the cooling efficiency up to 48 hours / Mestre

Orientador: Carlos Alberto Vicentini / Banca: Maíra Aparecida / Banca: Silvana Martinez Baraldi Artoni / Resumo: Amostras de sêmen e testículo foram coletadas de exemplares machos e adultos de Piracanjuba (Brycon orbignyanus). Jundiá (Rhamdia quelen) e Piraputanga (Brycon hilarii) no Centro de Aqüicultura da UNESP (CAUNESP) - Jaboticabal - SP (Brasil) e no Centro Nacional de Pesquisa em Peixes Tropicais (CEPTA) - Pirassununga SP (Brasil). Análises macroscópicas evidenciaram características relacionadas à cor, aspecto e volume. Microscopicamente foram avaliadas: Motilidade, viabilidade e concentração dos espermatozóides. Bioquimicamente foram analisados os principais componentes do plasma seminal, íons (sódio, potássio, magnésio e cálcio), osmolaridade e concentração de glicose. Para a realização dos estudos ultraestruturais, fragmentos dos testículos foram fixados em glutaraldeído 2,5% e processados segundo rotina de microscopia eletrônica de transmissão. O objetivo deste trabalho foi analisar, comparativamente, os parâmetros seminais e a estrutura dos espermatozóides de 3 espécies de peixes neotropicais (Piracanjuba, Brycon orbignyanus, Piraputanga, Brycon hilarii e Jundiá, Rhamdia quelen). Na piracanjuba, o sêmen apresentou coloração amarelada e aspecto aquoso. Em jundiá a cor do sêmen é branca e o aspecto cremoso. Na piraputanga a coloração do sêmen é esbranquiçada e o aspecto leitoso. Se comparamos estas características com a concentração espermática encontrada em piracanjuba (2,72 x 109 ± 1,92 x 109 sp/mL), jundiá (4,57 x 1010 ± 1,50 x 1010 sp/mL) e piraputanga (6,46 x 109 ± 2,72 x 109 sp/mL) e com os valores do espermatócrito (5,5%, 93,5% e 16,6% respectivamente), podemos concluir que quanto mais cremoso for o sêmen, maior será sua concentração espermática. A piracanjuba apresentou o menor valor de porcentagem de motilidade espermática (77±6,74%). Por outro lado, observou-se que a composição iônica varia entre as espécies e dentro das... / Abstract: Semen and testes samples were collected of male adults of Piracanjuba (Brycon orbignyanus). Jundiá (Rhamdia quelen) and Piraputanga (Brycon hilarii) in the Aquaculture Center of UNESP (CAUNESP) - Jaboticabal - SP (Brazil) and in the National Center of Research in Tropical Fish (CEPTA) - Pirassununga - SP (Brazil). Macroscopic analyses evidenced characteristics related to the color, aspect and volume. It was microscopically appraised: The motility, viability and cell concentration of the sperm. The main biochemistry components of the seminal plasm, ionic (sodium, potassium, magnesium and calcium), osmolality and glucose concentration were analyzed. For the accomplishment of the ultrastructural studies, fragments of testicular tissue were fixed in glutaraldehyde 2,5% and processed according to transmission electron microscope routine. The aim of this study was analyze comparatively, the seminal parameters and the structure of the spermatozoon of 3 neotropical fish species (Piracanjuba, Brycon orbignyanus, Piraputanga, Brycon hilarii and Jundiá, Rhamdia quelen). In the piracanjuba, the semen is yellowish and with aqueous aspect. In jundiá the color of the semen is white and with creamy aspect. In the piraputanga the coloration of the semen is whitish and milky aspect. Comparing these characteristics with the sperm concentration found in piracanjuba (2,72 x 109 ± 1,92 x 109 sp/mL), jundiá (4,57 x 1010 ± 1,50 x 1010 sp/mL) and piraputanga (6,46 x 109 ± 2,72 x 109 sp/mL) and with the values of the spermatocrit (5,5%, 93,5% and 16,6% respectively), we can observed that the more creamy semen, the bigger the sperm concentration. The piracanjuba presented the smallest value of percentage of sperm motility (77±6,74%). On the other hand, it was observed that the ionic composition varies among the species and inside of the same ones, due to factors as the environment or to the reproduction ... / Mestre

Orientador: Elizabeth Romagosa / Banca: Sérgio Ricardo Batlouni / Banca: Alexandre Ninhaus Silveira / Resumo: O objetivo deste trabalho foi caracterizar o sêmen de Pimelodus britskii através de diferentes métodos de coleta e doses hormonais. O experimento foi executado em dois períodos reprodutivos, novembro/2011 a março/2012 e outubro/2012 a março/2013. No primeiro período reprodutivo (Experimento 1) em todos os meses 12 peixes foram divididos em dois grupos, um grupo induzido com Extrato Hipofisádo de Carpa-EHC (3,0 mg.kg-1) e um grupo sem indução hormonal, após 240 unidades térmicas acumuladas-UTAs os peixes dos dois grupos foram eutanasiados e tiveram seus testículos macerados. No segundo período reprodutivo (Experimento 2) 30 peixes foram divididos em cinco grupos para comparação de diferentes doses de EHC e Gonadotrofina Coriônica humana-hCG na espermiação (T1: controle; T2: 3,0 mg.kg-1EHC; T3: 0,5 mg.kg-1+3,0 mg.kg-1EHC; T4: 0,5mg.kg-1+7,0 mg.kg-1EHC; T5: 200UI.kg-1hCG), sendo que neste período os mesmos peixes foram utilizados todos os meses, e após 240 UTAs o sêmen foi coletado através de massagem abdominal. Foram avaliadas a motilidade e velocidade espermática por meio do software CASA (Computer Assisted Sperm Analysis). As variáveis seminais por meio do Statistica 7.0. Por meio da maceração, verificou-se alterações na cor (branco a amarelado), pH (6 a 7) e concentração espermática (11,9x109±4,16x109 a 9,15x109±3,55x109 espermatozoides/mL-1). O volume mostrou relação entre meses e tratamentos (p<0,05). Para todos os exemplares a motilidade foi superior em nov/2011, diminuindo gradativamente até fev/2012. O mesmo ocorreu em relação aos valores dos IGS (p<0,05), mostrando a ação da indução hormonal no volume seminal. Os peixes do Experimento1 liberaram volume reduzido de sêmen ... / Abstract: The aim of this study was to characterize the semen Pimelodus britskii through different collection methods and hormonal doses. The experiment was run in two reproductive periods, November/2011 to March/2012 and October/2012 to March/2013. In the first breeding season (Experiment 1 ) in all months 12 fish were divided into two groups, one experimental group with Carp Pituitary Extract - EHC (3.0 mg.kg- 1) and a group without hormonal induction, after 240 units accumulated thermal-UTA fish from both groups were euthanized and had their macerated testes. In the second reproductive period (Experiment 2 ) 30 fish were divided into five groups for comparison of different doses of human Chorionic Gonadotropin-hCG and EHC in spermiation (T1: Control, T2: 3,0mg.kg-1 EHC, T3: 0,5 mg.kg-1 +3,0 mg.kg-1 EHC , T4: 0,5 mg.kg-1 +7,0 mg.kg-1 EHC , T5: 200UI.kg-1 hCG ) , and in this period the same fish were used every month, and after 240 UTA semen was collected by abdominal massage. Motility and sperm velocity were evaluated through the CASA software (Computer Assisted Sperm Analysis). The seminal variables using Statistica 7.0. Through the soaking, there was color change (white to yellow), pH (6 to 7) and sperm concentration (11,9x109±4,16x109 to 9,15x109±3,55x109 spermatozoa/mL-1). The volum months showed relationship between treatments (p<0,05). For all copies motility was higher in November/2011, decreasing gradually until February/2012. The same occurred with the values of the IGS (p<0,05), showing the action of hormonal induction in seminal volume ... / Mestre

Orientador: César Roberto Esper / Banca: Paulo Henrique Franceschini / Banca: Vera Fernanda Martins Hossepian de Lima / Banca: Rogerio Taveira Barbosa / Banca: Rubens Paes de Arruda / Resumo: Três grupos de 8 touros, sendo cada grupo formado por 4 animais da raça Simental (Bos taurus taurus) e 4 da raça Nelore (Bos taurus indicus), perfazendo um total de 24 touros com idade aproximada de 30 meses foram submetidos a dietas isoenergéticas com diferentes níveis de proteína degradável no rúmen e água ad libitum. As rações foram constituídas basicamente de feno de Tifton 85, farelo de soja, milho e uréia (Nitrogênio Não Protéico) e formuladas individualmente para cada touro de acordo com a análise bromatológica dos ingredientes, peso e ingestão dos animais. Na dieta do grupo controle (C) foram seguidas as normas do NRC (1996) para nutrição de touros em reprodução. Na dieta do grupo "gradual" (G) foram acrescidas 30% e, após quatro semanas, 75% de proteína degradável em relação à dieta controle, através do aumento na quantidade fornecida de uréia (NNP). Na dieta do grupo "Choque" o nível de proteína degradável foi 110% superior à ração do grupo controle durante todo o período experimental. Os touros permaneceram em baias individuais e após o período de adaptação de 21 dias foram submetidos semanalmente a colheitas de sêmen. O sêmen dos animais foram obtidos por eletroejaculação e avaliados quanto aos exames físicos do sêmen (turbilhonamento, motilidade, vigor e concentração) e morfologia espermática durante o período experimental de 15 semanas. Foram realizadas colheitas semanais de sangue 2 horas após a alimentação dos animais com a finalidade de mensurar os níveis plasmáticos de amônia e uréia durante seu pico de produção. Os ejaculados dos touros dos grupos tratados (Cq e G) apresentaram menor turbilhonamento, motilidade, vigor e concentração em relação ao grupo controle (C) a partir da décima terceira semana de experimento (P<0,01). / Abstract: Three experimental groups, each containing eight bulls, were given isoenergetic diets with different levels of ruminal-degradable protein and ad libitum water. Each group was constituted by four Fleckvieh (Bos taurus taurus) and four Nellore (Bos taurus indicus) bulls, in a total of 24 animals with mean age of 30 months. Diets were composed basically of Tifton 85 hay, soy bran, corn and urea (non-proteic nitrogen; NPN) and formulated for each animal individually, according to ingredients' bromatologic analysis, animal's weight and uptake capacity. For the Control-group (C-group) diet, NRC (1996) nutrition recommendations for bulls on reproduction were followed. In the Gradual-group (G-group) diet, 30% more ruminal-degradable protein (compared to the C-group) was added, and after four weeks, the level increased to 75% through the addition of urea (NPN). For the Choque-group (Cq-group), degradable protein level was 110% higher than in Cgroup during all experimental period. Bulls were maintained in individual boxes and after an adaptation period of 21 days, semen samples were collected. Semen was obtained through electroejaculation and analysed for physical (whirl movement, motility, vigour and concentration) and morphological characteristics during the period of 15 weeks. Blood sampling was performed weekly two hours after feeding in order to measure ammonia and ureal levels during its peak production. Treatment groups (Cq-group and G-group) presented lower whirl movement, motility, vigor and concentration than the C-group after the 13th week (P<0,01). Spermatic morphology showed increased levels of greater spermatic defects for taurines (P<0,05) during all experimental period, but no significant differences were observed among treatments for these characteristics. Significant differences in plasmatic urea (P<0,01) occurred. / Doutor

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, 2013. / Submitted by Ana Cristina Barbosa da Silva (annabds@hotmail.com) on 2014-11-03T17:45:20Z No. of bitstreams: 1 2013_GilbertoSantosJunior.pdf: 443022 bytes, checksum: f2a030805f67eb3070ecb0072c6b1f94 (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2014-11-12T12:51:06Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_GilbertoSantosJunior.pdf: 443022 bytes, checksum: f2a030805f67eb3070ecb0072c6b1f94 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-11-12T12:51:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_GilbertoSantosJunior.pdf: 443022 bytes, checksum: f2a030805f67eb3070ecb0072c6b1f94 (MD5) / Estudos relacionados à criopreservação de germoplasma de raças localmente adaptadas, visam disponibilizar esse material com custo reduzido e maior variabilidade genética. O objetivo desse estudo foi testar protocolos de criopreservação do sêmen que resultassem em um produto de melhor qualidade. Para cada experimento, foram coletados quatro ejaculados de quatro suínos localmente adaptados, com intervalos de 5 a 7 dias. No primeiro experimento foram testados três curvas de congelação: 0h, 2h e 4h de estabilização em BTS após coleta à temperatura de 22-24°C. Foi observado que a estabilização por duas horas resultou em melhor qualidade de sêmen pós congelação (P>0,05) para os parâmetros motilidade total (14,3±6,3%C vs 29,7±6,1A vs 22,9±8,2B, respectivamente) e percentual de células com membrana celular e acrossoma íntegros (9,6±4,2%B vs 17,5±4,7A vs 12,9±6,8A). No segundo experimento, foram testados protocolos utilizando diluentes de 2% e 3% de glicerol no volume final, sem e com (quinze minutos) estabilização pré congelação. Os resultados obtidos com diluente de congelação contendo 3% do volume final de glicerol, estabilizados por quinze minutos foram superiores (P>0,05) para os parâmetros motilidade total (28,1±5,5B vs 31,8±5,0AB vs 29,1±4,9B vs 37,9±5,4A) e percentual de células com membrana celular e acrossomal íntegras (15,1±5,0C vs 18,4±5,7BC vs 19,8±6,4B vs 25,1±5,3A). Os protocolos cujo sêmen foi submetido à estabilização em BTS por duas horas e com concentração final de glicerol a 3% resultaram em sêmen de melhor qualidade ao final do processo de criopreservação. ________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Studies related to germplasm cryopreservation of locally adapted breeds, aim to eventually reduce cost and gain genetic variability. The aim of this study was to test sperm cryopreservation protocols that could lead to greater quality results after the cryopreservation process. Four ejaculates were collected by intervals of 5-7 days, from four national swine. The first experiment tested three freezing curves: after collected, semen were equilibrated for 0h, 2h and 4h in BTS at a temperature of 22-24 ° C. It was noted that the two hour equilibration resulted in greater semen quality after freezing (P> 0.05) for total motility (14.3±6.3%C vs 29.7±6.1A vs 22.9±8.18B, respectively) and percentage of cells with membrane and acrosome integrity (9.6±4.2%B vs 17.5±4.7A vs 12.9±6.8A). The second experiment tested protocols using liquid storages with 2% and 3% of glycerol in the final volume, with and without fifteen minutes of pre freezing equilibration. The results obtained with the liquid storage that contained 3% of glycerol in the final volume, equilibrated for fifteen minutes, were superior (P> 0.05) for total motility (28.1±5.5B vs 31.8±5.0AB vs 29.1±4.9B vs 37.9±5.4A) and percentage of cells with membrane and acrosome integrity (15.1±5.0C vs 18.4±5.7BC vs 19.8±6.4B vs 25.1±5.3A). Protocols in which semen were submitted to a two hour equilibration in BTS and a final glycerol concentration of 3%, resulted in greater semen quality by the end of the cryopreservation process.

O presente estudo visou verificar o efeito sobre alguns parâmetros da seleção por gradiente de Percoll® e da adição de plasma seminal do sêmen eqüino preservado a +4oC. O primeiro experimento avaliou a taxa de recuperação de espermatozóides após seleção por Percoll® em diferentes protocolos de centrifugação. Foram realizadas 5 coletas de sêmen de um garanhão. Imediatamente após a coleta, o sêmen foi avaliado quanto à motilidade, vigor e concentração. Foram retiradas duas amostras de 4 mL, diluídas em leite desnatado UHT com concentrações de 50 e 100 x 106 espermatozóides por mL cada. Cada uma destas amostras foi dividida em 4 alíquotas de 1 mL, que foram então colocadas sobre Percoll® e submetidas a diferentes tempos e velocidades de centrifugação. V1 - 200 g (5 min) + 800 g (10 min); V2 - 800 g (10 min); V3 - 800 g (15 min); V4 - 800 g (20 min). Após esse processo, o sobrenadante foi desprezado e o pellet de cada alíquota ressuspendido com 0,5 mL de leite UHT. As 8 amostras foram novamente avaliadas para concentração, motilidade e vigor. O segundo experimento estudou o efeito da adição de plasma seminal de diferentes qualidades ao sêmen eqüino selecionado por gradiente de Percoll® e resfriado a +4°C por até 72 horas. Foram utilizados 40 ejaculados de 4 garanhões, sendo dois com boa qualidade de sêmen e dois com baixa qualidade de sêmen. Imediatamente após a coleta, o sêmen foi avaliado quanto à motilidade, vigor e concentração e preparadas cinco frações de 100x106 espermatozóides, diluídas 1:1 (v/v) em EDTA-Glicose. Quatro delas, constituídas por 1mL a 2mL, foram depositadas sobre Percoll®. A fração restante foi centrifugada em tubo de vidro de 10 mL, sob as mesmas condições de tempo e velocidade das demais amostras. Foi realizada centrifugação por 5 minutos em 200 g, seguida de 10 minutos em 800 g. O sobrenadante foi descartado e o pellet ressuspendido com leite UHT desnatado compondo os seguintes tratamentos: Sp: 1,5 mL de leite UHT desnatado sem adição de plasma seminal; Hp: 1,425 mL de leite UHT desnatado acrescido de 75 L de plasma seminal homólogo; Ap: 1,425 mL de leite UHT desnatado acrescido de 75 L de plasma seminal do pool de alta qualidade; Bp: 1,425mL de leite UHT desnatado acrescido de 75 L plasma seminal do pool de baixa qualidade; Cc: foi centrifugada sem seleção por Percoll®, teve seu sobrenadante descartado e ressuspendida com 2 mL de leite UHT; C : uma amostra de sêmen diluído em leite UHT foi mantida como controle no processo de armazenamento. As amostras foram resfriadas a +4°C e examinadas a cada 24h até as 72 horas em relação à motilidade, funcionalidade de membrana (teste hiposmótico) e integridade de membrana (CFDA/PI). A seleção por gradiente descontínuo de Percoll® 90/45% mostrou-se efetiva na recuperação de espermatozóides com motilidades progressiva e total. A adição de 5% de plasma seminal ou a ausência de plasma não influenciaram os valores da motilidade das amostras selecionadas por gradiente de Percoll®. A seleção por Percoll não influenciou na percentagem de células com membrana plasmática funcional. Concentrações superiores a 2% de plasma seminal resultaram em decréscimo do número de células com membrana funcional, enquanto que as amostras sem plasma seminal apresentaram os melhores resultados e o grupo controle, que apresentava a maior percentagem de plasma, os piores. A utilização de Percoll® não separou células com alteração de membrana. A percentagem de células com membrana completamente íntegra foi significativamente maior nas amostras que sofreram processo de centrifugação, independentemente da seleção. O processo de seleção por Percoll® foi efetivo na recuperação de espermatozóides de eqüino com motilidade progressiva, mas não selecionou espermatozóides quanto à funcionalidade nem à integridade de membrana. Concentrações inferiores a 2% de plasma seminal melhoraram a funcionalidade de membrana. A ausência de plasma seminal melhorou os resultados de integridade das membranas plasmática e acrossomal; e a adição de plasma de alta qualidade não melhorou a motilidade de espermatozóides selecionados por Percoll®.

Submitted by Rafael Santana (rafael.silvasantana@ufpe.br) on 2018-02-23T18:18:15Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) Clovis Bezerra Filho - DISSERTAÇÃO - MESTRADO.pdf: 1974187 bytes, checksum: 058cbffdf9f0fc9faf172ee4c479a214 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-02-23T18:18:15Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) Clovis Bezerra Filho - DISSERTAÇÃO - MESTRADO.pdf: 1974187 bytes, checksum: 058cbffdf9f0fc9faf172ee4c479a214 (MD5) Previous issue date: 2014-02-10 / FACEPE, CAPES, CNPQ / A Caatinga é um bioma extremamente rico cujas espécies vegetais apresentam promissor potencial farmacológico. Baseados no conhecimento popular, o uso de extratos e óleos essenciais obtidos pelos mais variados métodos extrativos tem motivado a pesquisa científica em busca de moléculas ou o conjunto delas com notável aplicação medicinal. A literatura demonstra que desde a antiguidade os óleos essenciais são empregados em diversas áreas da medicina e da cosmética; na área de medicamentos à base de vegetais são descritos também como fatores regulatórios da fertilidade. O presente estudo visou obter e caracterizar os óleos essenciais de três espécies da caatinga: Eugenia brejoensis, Cronton sp. e Myroxylon peruiferum, bem como avaliar suas ações frente a morte celular de células Vero e a motilidade de espermatozoides humanos. Adicionalmente, objetivou-se efetuar uma ampla revisão sobre o efeito citoprotetor contra H2O2 como um método de análise de atividade antioxidante de plantas. Os óleos foram extraídos por hidrodestilação porém apenas as espécies Eugenia brejoensis e Myroxylon peruiferum apresentaram rendimento suficiente a serem analisados em GC/MS, para tal utilizou-se colunas DB-5 de sílica, cujos resultados foram expressos em porcentagem. Amostras de sêmen foram coletadas de 12 indivíduos voluntários férteis do sexo masculino, com idades entre 18 e 45 anos, após um período de abstinência sexual de 48 a 120 h. A ação espermostática dos óleos foi testada em microplacas, utilizando diferentes concentrações dos mesmos (25, 50, 100, 200, 400 μg/mL). Os experimentos foram efetuados, em triplicata, com seis ensaios independentes e, para cada concentração foram avaliados os intervalos de 5, 15 e 30 min. O óleo essencial de Eugenia brejoensis apresentou em sua constituição δ-cadinene (15,33%), β-cariofileno (11,30%), biciclogermacreno(10,38%), α-muurolol (8,43%) e α-cadinol (8,12%), enquanto o óleo de Myroxylon peruiferum apresentou espatulenol (16,44%), α-pineno (9,82%), γ-muuroleno (7,13%) e óxido de cariofileno(6,59%), como compostos majoritários, respectivamente. Ambas as plantas exibiram ação espermostática de maneira dose-dependente. Os melhores resultados foram obtidos para o óleo de Eugenia Brejoensis em todos os tempos de tratamento apresentando IC50 de 28,99 μg/mL (5 min), 35,19 μg/mL (15 min) e 14,79 μg/mL (30 min), entretanto o óleo de Myroxylon peruiferum também mostrou um potencial imobilizante significativo com IC50 42,92 μg/mL (5 min), 46,32 μg/mL (15 min) e 41,69 μg/mL (30 min). Este estudo demonstrou pela primeira vez que os óleos essenciais de Eugenia brejoensis e Myroxylon peruiferum apresentam propriedade espermostática potencial sobre os espermatozoides humanos. Em seguida, efetuou-se ampla revisão de literatura na qual também observou-se que os óleos essenciais e extratos de plantas apresentam-se como excelentes fontes de moléculas antioxidantes, com extensa aplicação em modelos biológicos in vitro para o combate ao estresse oxidativo causado por H2O2..Outros trabalhos visando caracterizar os mecanismos de ação dos óleos de E. brejoensis e M. peruyferum, bem como sinergismo de seus compostos majoritários serão alvos de futuras pesquisas do nosso grupo. / Caatinga is an extremely rich biome whose species exhibit promising pharmacological potential . Based on the popular knowledge , the use of essential oils and extracts obtained by various methods extractives has motivated scientific research to molecules or set them with remarkable medicinal application. The literature shows that since antiquity essential oils are used in various areas of medicine and cosmetics ; in the area of herbal medicinal plants are also described as regulatory factors of fertility . The present study aimed at obtaining and characterizing the essential oils of three species of the caatinga: Eugenia brejoensis , Cronton sp . and Myroxylon peruiferum and evaluate their actions against cell death of Vero cells and human sperm motility . Additionally , the objective was to perform a comprehensive review on the cytoprotective effect against H2O2 as a method of analysis of antioxidant activity of plants . The oils were extracted by hydrodistillation but only species Eugenia brejoensis Myroxylon peruiferum and showed enough to be analyzed by GC / MS was used for this column DB-5 silica , and the results were expressed as percentage yield. Semen samples were collected from 12 fertile male volunteers , aged between 18 and 45 years , after a period of abstinence 48-120 h . The action of espermostática oils was tested in microplates using different concentrations of the same (25, 50 , 100, 200, 400 mg / mL). The experiments were performed in triplicate and six independent experiments for each concentration intervals of 5 , 15 and 30 minutes were evaluated. The essential oil of Eugenia brejoensis presented in its constitution δ - cadinene ( 15.33% ) , β - caryophyllene ( 11.30% ) , bicyclogermacrene ( 10.38 % ) , α - muurolol ( 8.43 % ) and α - cadinol ( 8.12% ), while the oil had Myroxylon peruiferum spathulenol ( 16.44% ) , α -pinene ( 9.82% ) , γ - muuroleno ( 7.13 %) and caryophyllene oxide (6.59 % ) as major compounds , respectively. Both plants exhibited espermostática action in a dose- dependent manner . The best results were obtained for oil Eugenia Brejoensis in all treatment times having IC50 of 28.99 mg / mL ( 5 min) 35.19 mg / mL (15 min) and 14.79 mg / mL (30 min ) , however oil Myroxylon peruiferum also showed significant potential immobilizing with IC50 42.92 mg / mL ( 5 min ) , 46.32 mg / mL ( 15 min ) and 41.69 mg / mL ( 30 min ) . This study first demonstrated that essential oils of Eugenia brejoensis and Myroxylon peruiferum have owned espermostática potential on human spermatozoa . Then it made extensive literature review in which it was also observed that essential oils and plant extracts are presented as excellent sources of antioxidant molecules , with extensive application in biological in vitro models to combat oxidative stress caused by H2O2. Other studies aiming to characterize the mechanisms of action of oils and M. E. brejoensis per uyferum and synergism of their major compounds are targets of future research in our group.