Um método cromatográfico foi desenvolvido para determinação dos antidepressivos mais prescritos no Brasil e seus produtos de biotransfomação (amitriptilina, imipramina, clomipramina, desmetilclomipramina, desipramina, nortriptilina, fluoxetina, norfluoxetina e sertralina) em sangue total por cromatografia em fase gasosa com detector de nitrogênio e fósforo. A extração em fase sólida (EFS) com o cartucho abselutTM NEXUS foi empregada de forma inovadora. O procedimento de extração consistiu na diluição de 0,5mL de sangue total em tampão (pH 9,5), aplicação da amostra no cartucho, remoção de interferentes usando tampão (pH 9,5) e eluição dos analitos com diclorometano/ isopropanol (17/3 v/v); a etidocaína foi adotada como padrão interno. Os limites de detecção (LD) e quantificação (LIQ) encontrados foram de 0,1mg/L a 0,4mg/L e de 0,4mg/L a 1,6mg/L, respectivamente. O método foi preciso, específico e linear na faixa de concentração estudada (do LIQ até 12mg/L). A recuperação média de todos os analitos foi 65,5%. O método foi aplicado em amostras de âmbito forense e de emergência clínica. / A gas chromatographic method was developed to determine antidepressants most prescribed in Brazil and their metabolites (amitriptyline, imipramine, clomipramine, desmethylclomipramine, desipramine, nortriptyline, fluoxetine, norfluoxetine, and sertralina) in whole blood, using solid phase extraction and gas chromatography with nitrogen-phosphorus detection. The solid-phase extraction (SPE) with abselutTM NEXUS was applied in an innovative manner. The extraction procedure consists of the dilution of 0.5mL of whole blood in buffer (pH 9.5), application of the sample in the cartridge, washing with buffer (pH 9.5) and elution of the analytes with dichloromethane/isopropanol (17/3, v/v). The limit of detection (LOD) and quantification (LLOQ) were from 0.1mg/L to 0.4mg/L and from 0.4mg/L to 1.6mg/L, respectively. Etidocaine was used as internal standard. The method was precise, specific and linear in the studied concentration (range from LLOQ to 12mg/L). The average recovery of all analytes was 65,5%. Forensic and clinical emergency samples were submitted to the validated method.

O uso abusivo de substâncias psicoativas cresce a cada dia em diferentes segmentos da sociedade mundialmente. Aumentos significativos no número de ocorrências de óbito com envolvimento de tais substâncias têm sido reportados nas últimas décadas. A classe dos opiáceos está figurada entre as substâncias de maior prevalência nesse contexto. Em toxicologia forense, análises toxicológicas conduzidas em amostras postmortem podem auxiliar se substâncias químicas tiveram influência no óbito. A realização dessas análises e interpretação dos resultados obtidos nesses casos é bastante complexa devido à deterioração sofrida pelos cadáveres, e também pela ocorrência de um fenômeno denominado redistribuição postmortem, responsável pela transferência de substâncias após a morte a favor de gradiente de concentração. Em geral, as substâncias são transferidas de órgãos como fígado, coração, pulmões, e trato gastrointestinal, para locais de menor concentração, afetando principalmente o sangue da região central e órgãos adjacentes. O humor vítreo, apesar de considerado um espécime não-convencional, pode ser bastante útil, principalmente em casos onde não há amostras sanguíneas disponíveis para coleta. Esse espécime se apresenta como uma matriz menos propensa à decomposição bacteriana, além de ser menos afetado pela redistribuição postmortem por sua localização mais afastada dos sítios centrais. Desta forma, um método para quantificação de opiáceos (morfina livre e total, codeína e 6-acetilmorfina) em sangue (cardíaco e periférico) e em humor vítreo humanos coletados postmortem foi desenvolvido e validado. O método mostrou ser preciso, eficiente e sensível, com limite de quantificação de 10 ng/ml. Amostras de 7 casos postmortem com envolvimento de opiáceos foram analisadas com o intuito de verificar correlação nas concentrações entre os sítios, e possível ocorrência do fenômeno de redistribuição. / The abuse of psychoactive substances grows every day worldwide in different segments of the society. Significant increases in the number of drug-related deaths have been reported in recent decades. The class of opiates is one of the most prevalent substances in this context. In forensic toxicology, toxicological analyses are performed in postmortem samples to evaluate whether chemical substances were involved in the death. The completion of this analysis and interpretation of results are very complex due to the deterioration suffered by the corpses, and also by the occurrence of the phenomenon called postmortem redistribution, responsible for the transfer of substances along a concentration gradient after death. In general, the transference of the substances occurred from organs such as liver, heart, lungs and gastrointestinal tract to sites of low concentrations, mainly affecting the blood from central sites and adjacent organs. By this reason, the collection of blood from two different sites of the body for comparison is highly recommendable. Despite being considered a non-conventional specimen, vitreous humor can be quite useful, especially in cases where no blood samples are available for collection. This specimen is usually less prone to bacterial decomposition, and it\'s also less affected by postmortem redistribution due to its location further away from central sites. Thus, a method to quantify opiates (free and total morphine, codeine and 6- monoacetylmorphine) in postmortem blood (cardiac and peripheral) and in vitreous humor samples was developed and validated. The method showed good accuracy, efficiency and sensibility, with limit of quantification of the 10 ng/ml. Seven samples of postmortem cases with opiates involvement were analyzed to verify the correlation in the concentrations of the sites, and possible occurrence of the redistribution phenomenon.

O veneno de serpentes do gênero Bothrops (responsáveis por 80% dos envenenamentos no Brasil) é composto por metalo e serinoproteases, disintegrinas, fosfolipases, entre outros, e pode causar edema, hemorragia, necrose, e manifestações sistêmicas, como coagulação intravascular, choque, falência renal e hemorragia. O veneno da B. pirajai ativa o sistema complemento (C), sugerindo uma contribuição para o agravamento dos sintomas. Considerando a importância do C no processo inflamatório e o papel das metaloproteinases nos envenenamentos, verificou-se que o tratamento do sangue total humano (onde células e mediadores plasmáticos interagem entre si) com ou sem a compstatina (inibidor de C3 do C), e com a metaloproteinase de classe PI do veneno de B. pirajai, levou a diferenças bastante significativas na expressão dos marcadores analisados nos leucócitos, na geração de anafilatoxinas e TCC, e na quantificação de citocinas e quimiocinas no plasma, sugerindo que a inibição do C reduz o processo inflamatório, podendo ser uma terapia efetiva para envenenamentos botrópicos. / The snake venom of Bothrops genus (responsible for 80% of envenomation in Brazil) is composed by metallo and serine proteases, disintegrins, phospholipase, among others, and can cause edema, hemorrhage, necrosis, and systemic manifestations, such as intravascular coagulation, shock, renal failure and systemic hemorrhage. The venom of B. pirajai is able to activate the complement system (C), suggesting a contribution to the worsening of symptoms. Considering the importance of C in the inflammatory process and the role of metalloproteinases in envenomation, it was found that treatment of human whole blood (where cells and plasma mediators interact) with or without compstatin (C3 inhibitor), and with a class PI metalloproteinase from B. pirajai\'s venom led to highly significant differences in the expression of the markers analyzed in leukocytes, in generation of anaphylatoxins and TCC, and quantification of cytokines and chemokines in plasma, suggesting that inhibition of C reduces the inflammatory process and may be an effective therapy for bothropic envenomations.

A centrifugação é o principal método utilizado para fracionar o Sangue Total (ST) nos componentes sanguíneos: Concentrados de Hemácias (CH), Concentrados Plaquetas (CP), Plasma e Crioprecipitado, (também chamados de Hemocomponentes). Com intuito de prevenir ou controlar hemorragias, os CP obtidos por centrifugação tornaram-se o padrão no atendimento inicial aos pacientes com baixas contagens de plaquetas. Porém, para obter uma unidade terapêutica (UT), no Hemocentro RP, é necessário agregar seis CP, formando o Pool de CPST (PCP), o que leva a exposição do receptor a vários doadores diferentes. O CP obtido por aférese (CPAF), advindo de equipamento que permite a seleção já na coleta, fornece a dose necessária em apenas uma doação. Baseado no levantamento de dados internos do Hemocentro de RP o presente estudo analisou, através da metodologia de Custeio Baseado em Atividade (ABC), os custos atribuídos às distintas metodologias para a produção dos CP, sabendo que no Hemocentro RP, os CP são dispensados como UT independente da forma de obtenção. Os resultados obtidos foram utilizados na Análise de Custo-Efetividade, evidenciando que a coleta por Centrifugação de ST com a produção de PCP foi mais custo efetiva em 2015 do que a coleta de aférese, porém, por uma diferença relativamente pequena, devido ao grande percentual de obtenção de dupla Unidade Terapêutica (CPAF2). / Centrifugation is the main method used for fractionating Total Blood (TB) to blood components: Red Cells Concentrate (CR), Platelet Concentrates (PC), Plasma and Cryoprecipitate (also called Hemocomponents). In order to prevent or control bleeding, CPs obtained by centrifugation became the standard treatment of patients with low platelet counts. However, to obtain a therapeutic unit (TU), at Hemocentro RP, it is necessary to get together six PCs, forming a Pool of TBPC (PCP), exposing the receptor to several different donors. PC obtained by apheresis (CPAF), which is provided by a equipment that allows selective collection, achieve the dose necessary for the selection in just one donation. Based on the collection of internal data from the Hemocentro RP, the present study analyzed, through the methodology of ActivityBased Costing (ABC), the costs attributed to the different methodologies for the production of PCs knowing that in the Hemocenter RP PCs are dispensed as TU independent of the way of obtaining. The results obtained were used in the CostEffectiveness Analysis, showing collecting by TB Centrifugation producing PC is more cost-effective, however CPAF was almost as effective as in 2015, a great achievement of Dual Therapeutic Unit in a single donation (CPAF2).

O Hemocentro São Paulo é responsável por manter um banco de dados com informações sobre cada doação ou tentativa de doação de sangue. No entanto, os dados desse banco de dados não possuem a qualidade requerida pelas ferramentas/técnicas de análise. Por essa razão, fica difícil utilizar tais dados para estabelecer relações sistemáticas entre as variáveis armazenadas. A principal contribuição desta tese é a descrição da proveniência para atributos selecionados usando critérios de classificação definidos por especialistas. Este trabalho mostra que é possível fazer investigações detalhadas usando a descrição dos dados sem a necessidade de alterar a estrutura do banco de dados. Durante o período de 1996 a 2006, 1.469.505 doadores foram responsáveis por mais de 2.8 milhões de doações. Após a descrição da proveniência, foram obtidos 252.301 doadores do sexo masculino e 133.056 doadores do sexo feminino e que atenderam aos critérios de inclusão usados nesta tese. Dos 385.357 doadores incluídos na análise, 21.954 (5,7%) tiveram suas doações adiadas devido a seus baixos níveis de hematócrito, 3.850 (1,5%) eram do sexo masculino e 18.104 (13,6%) do sexo feminino. Os resultados obtidos demonstram que, embora os intervalos de espera entre as doações de sangue sejam grandes entre os doadores do sexo feminino e masculino, as mulheres são recusadas mais cedo, por risco de desenvolver anemia, do que os homens. Aproximadamente 12,84% das mulheres e 1,21% dos homens desenvolveriam hematócrito baixo antes da sétima doação. Os dados sugerem que indivíduos com baixo nível de hematócrito devem esperar mais tempo antes de executarem a próxima doação. Portanto, é importante compreender se existe uma ligação entre a doação de sangue e a diminuição no nível de hematócrito, a fim de evitar resultados indesejáveis para os doadores de sangue. O modelo de proveniência apresentado nesta tese não foi definido de acordo com os modelos de proveniência genéricos já implementados. Esta tese apresenta um modelo de proveniência que foi capaz de acrescentar informações semânticas para adquirir conhecimento de um experimento in silico. Um dos principais objetivos foi desenvolver uma abordagem baseada em declarações, tentando responder a importantes questionamentos biológicos. O modelo descrito combina ricas informações em cada processo usando declarações, e se baseia no conhecimento de especialistas. Esta tese também utilizou estatística descritiva e Análise de Sobrevivência. Finalmente, com a validação do modelo em um domínio conhecido, é pretendido expandir esse método para outros sistemas de informação voltados para hemoterapia. / The São Paulo Blood Center is responsible to maintain a database with information on each donation. However, this database does not have the quality required by techniques of analysis. For this reason, it is difficult to use it directly to establish systematic relationships between the variables. The main contribution of this paper is a provenance description of attributes selected using classification criteria defined by specialists. We show that it is possible to make detailed investigations using the data description without the need to change the structure of the database. During 1996 2006, 1,469,505 donors were responsible for more than 2.8 million of donation. After the provenance description, we obtained 252,301 male and 133,056 female that met our inclusion criteria. Of the 385,357 donors included in the analysis, 21,954(5.7%) were deferred due to low hematocrit, 3,850(1.5%) were males and 18,104(13.6%) were females. Our results show that, although the intervals between donations for female and male donors are wider, women presented anemia earlier than men. Approximately 12,84% of the females and 1,21% of the males would develop low hematocrit before the 7th donation. Our data suggest that individuals with low hematocrit level should wait longer before the next donation. Therefore, it is important to understand if there is a connection between blood donation and decrease in hematocrit level in order to prevent undesirable outcomes to blood donors. The provenance model presented here was not defined according to the generic provenance models already implemented. This thesis presents a provenance model that is able to add semantic information to acquire knowledge of an in silico experiment. One of the main purposes is to develop an approach based on declarations in order to answer biological questions. The provenance model described in this paper combines rich information for each process using the declarations, each having expert knowledge as a basis. To evaluate this provenance model we use descriptive statistics and Survival Analysis. Finally, with the validation of the model in a known domain, we intent to apply and validate this provenance model to other hemotherapy information systems.

O agregado proteico P-MAPA apresentou potencial imunomodulatório em diversos estudos, mas a sua ação sobre o sistema complemento e receptores do tipo Toll (TLRs) não é, ainda, conhecida. Neste estudo o P-MAPA promoveu ativação das vias clássica e alternativa do sistema complemento e produção de C3a e C5a. Utilizando um modelo ex vivo de sangue total humano, o composto promoveu aumento da expressão de CD11b e CD14, diminuição da expressão de C5aR, TLR2 e TLR4, em leucócitos de sangue periférico e também quando combinado com LPS, porém não promoveu alterações na expressão de C3aR. O P-MAPA induziu redução de IFN-g no plasma, aumento da produção de TNF-α, IL-8, IL-12 e peróxinitrito, mas não induziu produção de superóxido, IL-6, IL-1β, TGF-β ou IL-10. Por meio de testes in vivo, foi possível determinar a dose letal do P-MAPA. Em conjunto, os dados obtidos mostram que o P-MAPA apresenta ação pró-inflamatória em modelo ex vivo de sangue total humano e que o tratamento combinado com LPS leva a uma amplificação dos seus efeitos. / P-MAPA, a protein aggregate has been described as a promising immunomodulator, however, its role on the complement system and Toll-like receptors (TLRs) is unknown. In the study, P-MAPA has promoted activation of the complement\'s classical and alternative pathways and the production of C3a and C5a. Using an ex vivo model of human whole blood, the compound promoted increase of CD11b and CD14 expression, decrease of C5aR, TLR2 and TLR4, in peripheral blood leucocytes and when combined with LPS, but did not change C3aR expression. P-MAPA promoted reduction of IFN-g in plasma, increased production of TNF-α, IL-8, IL-12 and peroxynitrite, but did not induce the production of superoxide, IL-6, IL-1β, TGF-β or IL-10. Through in vivo tests, we were able to determine a lethal dose for P-MAPA. Altogether, our data indicate that P-MAPA has proinflammatory action in ex vivo model of human whole blood and that the treatment combined with LPS leads to amplification of its effects.

As chamadas club drugs compreendem um vasto grupo de substâncias frequentemente utilizadas em bares, festas e raves, com a finalidade de intensificar o contato social e a estimulação sensorial. Englobam desde substâncias sintéticas comumente conhecidas, como a anfetamina, a metanfetamina, o MDMA, até moléculas de surgimento mais recente, denominadas novas substâncias psicoativas. Isoladas ou associadas a outras drogas, é possível que sejam causa de morte per se, ou que predisponham o usuário a envolver-se em situações potencialmente fatais, sendo necessário que os órgãos de Perícia Criminal (Institutos Médico Legais e Institutos de Criminalística) estejam aptos a detectar e quantificar essas substâncias em amostras biológicas. O presente trabalho teve como objetivo desenvolver um método analítico para identificação e quantificação de club drugs em sangue total, utilizando cromatografia líquida acoplada a espectrometria de massas com analisador híbrido quadrupolotempo de voo (LC-QTOF). Após o desenvolvimento do método, este foi validado utilizando as diretrizes do guia de validação do Scientific Working Group for Forensic Toxicology (SWGTOX), sendo analisados de linearidade, limite de detecção, limite de quantificação, efeito matriz, precisão intradia, precisão interdia, exatidão e integridade de diluição, além de recuperação e eficiência do processo. O método desenvolvido compreendeu a determinação de MDA, MDMA, 2C-B, DOB, cetamina, mCPP, cocaína e cocaetileno. Amostras provenientes de casos reais de morte não natural, oriundas do Instituto Médico Legal Aristoclides Teixeira de Goiânia - GO foram analisadas pelo método desenvolvido. 56 casos foram selecionados, em sua maioria com histórico de morte por projétil de arma de fogo e acidente de transito. Das 56 amostras analisadas, 28,5% (n=16) foram positivas para cocaína e/ou cocaetileno. As demais substâncias pesquisadas não foram encontradas nas amostras. / Club drugs are a large group of substances consumed in pubs, parties and raves, aiming to intensify social contact and sensorial stimulation. The term comprises largely known substances such as amphetamine, methamphetamine, 3,4-methylenodioxymethamphetamine (MDMA), as well as so-called new psychoactive substances, which are synthetic drugs recently developed or recently introduced in drug market. Club drugs can be taken alone, combined with each other or, most frequently, with alcohol or other commonly abused drugs such as cocaine. In any of these situations, club drugs can possibly be the cause of death or potentialize the involvement of the user with crime and potentially fatal behavior. Thus, official organisms in charge of criminal investigation must be capable of identifying and quantifying these substances in biological samples. The present work aimed the development of an analytical method to identify and quantify club drugs in whole blood, using liquid chromatography - mass spectrometry with hybrid analyzer quadrupole - time of flight (LC-QTOF). After analytical development, the method was validated according to do Scientific Working Group for Forensic Toxicology (SWGTOX) guidelines, evaluating linearity, limit of detection, limit of quantification, matrix effect, precision, intermediate precision, bias and dilution integrity, besides recovery and process efficiency. The developed method comprised MDA, MDMA, 2C-B, DOB, ketamine, mCPP, cocaine and cocaethylene determination. Real samples related to non-natural deaths were collected at Institute of the Legal Medicine Aristoclides Teixeira, Goiânia, Goiás, Brazil, and analyzed by the developed method. 56 cases were selected, most of them related to fire gun injury and traffic events, 28,5% (n=16) of them being positive for cocaine and/or cocaethylene. None of the other drugs comprised in the analysis were detected in these samples.

As chamadas club drugs compreendem um vasto grupo de substâncias frequentemente utilizadas em bares, festas e raves, com a finalidade de intensificar o contato social e a estimulação sensorial. Englobam desde substâncias sintéticas comumente conhecidas, como a anfetamina, a metanfetamina, o MDMA, até moléculas de surgimento mais recente, denominadas novas substâncias psicoativas. Isoladas ou associadas a outras drogas, é possível que sejam causa de morte per se, ou que predisponham o usuário a envolver-se em situações potencialmente fatais, sendo necessário que os órgãos de Perícia Criminal (Institutos Médico Legais e Institutos de Criminalística) estejam aptos a detectar e quantificar essas substâncias em amostras biológicas. O presente trabalho teve como objetivo desenvolver um método analítico para identificação e quantificação de club drugs em sangue total, utilizando cromatografia líquida acoplada a espectrometria de massas com analisador híbrido quadrupolotempo de voo (LC-QTOF). Após o desenvolvimento do método, este foi validado utilizando as diretrizes do guia de validação do Scientific Working Group for Forensic Toxicology (SWGTOX), sendo analisados de linearidade, limite de detecção, limite de quantificação, efeito matriz, precisão intradia, precisão interdia, exatidão e integridade de diluição, além de recuperação e eficiência do processo. O método desenvolvido compreendeu a determinação de MDA, MDMA, 2C-B, DOB, cetamina, mCPP, cocaína e cocaetileno. Amostras provenientes de casos reais de morte não natural, oriundas do Instituto Médico Legal Aristoclides Teixeira de Goiânia - GO foram analisadas pelo método desenvolvido. 56 casos foram selecionados, em sua maioria com histórico de morte por projétil de arma de fogo e acidente de transito. Das 56 amostras analisadas, 28,5% (n=16) foram positivas para cocaína e/ou cocaetileno. As demais substâncias pesquisadas não foram encontradas nas amostras. / Club drugs are a large group of substances consumed in pubs, parties and raves, aiming to intensify social contact and sensorial stimulation. The term comprises largely known substances such as amphetamine, methamphetamine, 3,4-methylenodioxymethamphetamine (MDMA), as well as so-called new psychoactive substances, which are synthetic drugs recently developed or recently introduced in drug market. Club drugs can be taken alone, combined with each other or, most frequently, with alcohol or other commonly abused drugs such as cocaine. In any of these situations, club drugs can possibly be the cause of death or potentialize the involvement of the user with crime and potentially fatal behavior. Thus, official organisms in charge of criminal investigation must be capable of identifying and quantifying these substances in biological samples. The present work aimed the development of an analytical method to identify and quantify club drugs in whole blood, using liquid chromatography - mass spectrometry with hybrid analyzer quadrupole - time of flight (LC-QTOF). After analytical development, the method was validated according to do Scientific Working Group for Forensic Toxicology (SWGTOX) guidelines, evaluating linearity, limit of detection, limit of quantification, matrix effect, precision, intermediate precision, bias and dilution integrity, besides recovery and process efficiency. The developed method comprised MDA, MDMA, 2C-B, DOB, ketamine, mCPP, cocaine and cocaethylene determination. Real samples related to non-natural deaths were collected at Institute of the Legal Medicine Aristoclides Teixeira, Goiânia, Goiás, Brazil, and analyzed by the developed method. 56 cases were selected, most of them related to fire gun injury and traffic events, 28,5% (n=16) of them being positive for cocaine and/or cocaethylene. None of the other drugs comprised in the analysis were detected in these samples.

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The ADAM10 gene expression in whole blood was studied in 47 AD, 32 healthy controls and 21 mild cognitive impairment (MCI) subjects by RT-qPCR techniques and analyzed by relative expression by 2- Ct. For miRNAs analyses, using MegaplexTM and MirWalk 2.0 database, were analyzed by RT-qPCR ~700 miRNAs in total blood and 21 miRNAs of them were validated in a sample of 21 AD subjects and 17 healthy controls. Statistical association tests, regression and diagnostic accuracy were performed. No significant differences in ADAM10 gene expression were observed between AD and control groups. Therefore, the decrease of ADAM10 protein in platelets of AD patients was not caused by a reduction in mRNA encoding for ADAM10. Mir-144-5p, miR-374 and miR-221 were downregulated in AD subjects, with moderate accuracy diagnosis. However, the association of selected miRNAs expression and Mini Mental State Examination (MMSE) was significantly better as a diagnostic tool compared to their expression separately. The validated miRNAs are involved in the regulation of pathways related to neurodegenerative diseases (beta-amyloid cascade, ubiquitination, transcriptional regulator, synaptic transmission, vesicle trafficking). Specifically, miR-144-5p, miR-374 and miR-221 are relevant for AD, as regulators of APP, BACE1 and ADAM10 translation. To the best of our knowledge, this is the first study to demonstrate a downregulation of these specific miRNAs in total blood of Alzheimer’s disease patients, compared to healthy cognitive controls. These findings are in agreement with AD protein outcomes and place the miRNAs evaluated as potential biomarkers that can be used to improve AD diagnosis. / ADAM10 é uma -secretase que cliva a APP através do caminho não amiloidogênico, inibindo desta forma a produção do peptídeo -amiloide (A ) na doença de Alzheimer (DA). Estudos apresentam a diminuição plaquetária da proteína ADAM10 em idosos com DA, assim como a desregulação de microRNAs (miRNAs) relacionados com moléculas envolvidas com a fisiopatologia desta doença. O objetivo geral foi verificar e comparar a expressão gênica da ADAM10 e de miRNAs entre idosos com DA e controles sem alterações cognitivas. Trata-se de um estudo de comparação, baseado nos pressupostos da pesquisa quantitativa. Amostras biológicas foram coletadas, analisadas e armazenadas em um biorrepositório. A expressão gênica da ADAM10 em sangue total foi estudada em 47 sujeitos com DA, 32 controles saudáveis e 21 sujeitos com transtorno neurocognitivo leve (TNCL), através de técnicas de RT-qPCR e analisada pela expressão relativa por 2- Ct. Para análises dos miRNAs, utilizando Megaplex e a base de dados MiRWalk 2.0, foram analisados por RTqPCR ~700 miRNAs no sangue total e 21 deles foram validados em uma amostra de 21 sujeitos com DA e 17 controles. Testes estatísticos de associação, regressão e acurácia diagnóstica foram realizados. Não foi observada diferença significante na expressão gênica da ADAM10 entre sujeitos com DA e controles. Assim, a diminuição dos níveis proteicos da ADAM10 plaquetária em pacientes com DA não foi devido a redução do mRNA codificante para ADAM10. Mir-144-5p, miR-374 e miR-221 estavam menos expressos em indivíduos com DA, com moderada acurácia diagnóstica. Entretanto, a associação da expressão dos miRNAs selecionados com o Mini Exame do Estado Mental (MEEM) foi significativamente melhor como uma ferramenta de diagnóstico em comparação com as análises individuais. Os miRNAs validados estão envolvidos na regulação de vias relacionadas a doenças neurodegenerativas (cascata beta-amiloide, ubiquitinação, reguladores de transcrição, transmissão sináptica, tráfego de vesículas). Especificamente, o miR-144-5p, miR-374 e miR- 221 são relevantes para a DA, como reguladores da tradução da APP, BACE1 e da ADAM10. Segundo nosso conhecimento, este é o primeiro estudo a demonstrar a expressão reduzida desses miRNAs no sangue total de pacientes com DA, em comparação com controles cognitivamente saudáveis. Estes resultados estão de acordo com os resultados proteicos da DA e destacam os miRNAs avaliados como potenciais biomarcadores que podem ser utilizados para o aperfeiçoamento do diagnóstico da DA.

O agregado proteico P-MAPA apresentou potencial imunomodulatório em diversos estudos, mas a sua ação sobre o sistema complemento e receptores do tipo Toll (TLRs) não é, ainda, conhecida. Neste estudo o P-MAPA promoveu ativação das vias clássica e alternativa do sistema complemento e produção de C3a e C5a. Utilizando um modelo ex vivo de sangue total humano, o composto promoveu aumento da expressão de CD11b e CD14, diminuição da expressão de C5aR, TLR2 e TLR4, em leucócitos de sangue periférico e também quando combinado com LPS, porém não promoveu alterações na expressão de C3aR. O P-MAPA induziu redução de IFN-g no plasma, aumento da produção de TNF-α, IL-8, IL-12 e peróxinitrito, mas não induziu produção de superóxido, IL-6, IL-1β, TGF-β ou IL-10. Por meio de testes in vivo, foi possível determinar a dose letal do P-MAPA. Em conjunto, os dados obtidos mostram que o P-MAPA apresenta ação pró-inflamatória em modelo ex vivo de sangue total humano e que o tratamento combinado com LPS leva a uma amplificação dos seus efeitos. / P-MAPA, a protein aggregate has been described as a promising immunomodulator, however, its role on the complement system and Toll-like receptors (TLRs) is unknown. In the study, P-MAPA has promoted activation of the complement\'s classical and alternative pathways and the production of C3a and C5a. Using an ex vivo model of human whole blood, the compound promoted increase of CD11b and CD14 expression, decrease of C5aR, TLR2 and TLR4, in peripheral blood leucocytes and when combined with LPS, but did not change C3aR expression. P-MAPA promoted reduction of IFN-g in plasma, increased production of TNF-α, IL-8, IL-12 and peroxynitrite, but did not induce the production of superoxide, IL-6, IL-1β, TGF-β or IL-10. Through in vivo tests, we were able to determine a lethal dose for P-MAPA. Altogether, our data indicate that P-MAPA has proinflammatory action in ex vivo model of human whole blood and that the treatment combined with LPS leads to amplification of its effects.