Determination of an extender protocol which will enhance the viability of frozenthawed bovine spermatozoa will allow producers to obtain higher conception rates due to the increased survival rate of the spermatozoa. Ejaculates of six Brangus bulls (age=18 months) were evaluated for spermatozoal motility, acrosomal integrity, and morphological characteristics (collectively called spermatozoal viability) in two experiments to test our hypotheses that (1) the treatment combination of a 4 hr cooling duration and a 2 hr equilibration with glycerol will result in optimum spermatozoal characteristics after freezing and thawing and (2) rank of three selected extenders relative to their effects on spermatozoal viability after freezing and thawing will be egg yolk-citrate (EC), egg yolk-tris (IMV), and skim milk (milk). In experiment 1, an ejaculate from each bull was partially extended and cooled to 4 ºC for either 2 or 4 hr and then allowed to equilibrate with the glycerolated extender for 2, 4, or 6 hr. Spermatozoal viability was assessed at 0, 3, 6, and 9 hr after thawing. In experiment 1, 4 hr of cooling resulted in a higher percentage of motile spermatozoa than did 2 hr of cooling. The 2 hr equilibration with glycerol yielded lower percentages of motile spermatozoa, acrosomal integrity, and morphologically normal spermatozoa than 4 and 6 hr equilibration durations with glycerol. In experiment 2, we observed a decrease in spermatozoal viability for all three extenders upon freezing and thawing. Viability of frozen-thawed spermatozoa extended in the milk was reduced for all incubation durations, and the IMV extender had a higher percentage of motile spermatozoa than the EC extender at 6 hr of incubation. A higher percentage of intact acrosomes was observed with the IMV extender; however, the EC extender had a higher percentage of morphologically normal spermatozoa than the IMV extender. Our results indicate that at cooling duration of 4 hr and a 4 hr equilibration with glycerol provide the highest level of spermatozoal viability post-thaw of the treatments evaluated and that the IMV extender enhances the percentage of spermatozoa with an intact acrosome for frozenthawed spermatozoa over the EC and skim milk extenders.

Thesis (Ph. D.)--University of Hong Kong, 1989.

published_or_final_version / abstract / toc / Anatomy / Doctoral / Doctor of Philosophy

Thesis (Ph. D.)--West Virginia University, 1999. / Title from document title page. Document formatted into pages; contains vi, 125 p. : ill. Vita. Includes abstract. Includes bibliographical references (p. 107-122).

Thesis (Ph. D.)--University of Washington, 2006. / Vita. Includes bibliographical references (leaves 85-97).

Normalmente, após a cobertura ou a inseminação artificial de éguas, ocorre uma endometrite aguda transitória em resposta ao sêmen e bactérias no útero. O objetivo deste estudo foi verificar se o transporte espermático e a intensidade da reação inflamatória uterina, 2h, 4h ou 24h após a inseminação com sêmen resfriado, são influenciados pela concentração espermática na dose inseminante. Para tal, foram utilizadas 192 éguas em cio, com folículo dominante ≥35 mm, sem crescimento bacteriano e livres de PMNs aos exames uterinos complementares. As éguas foram distribuídas aleatoriamente em grupos e inseminadas com 20 ml contendo 100x106 (n=30), 500x106 (n=27) ou 1000x106 (n=31) espermatozóides diluídos em solução de 3 ml de plasma seminal e 17 ml de leite desnatado, refrigerado e armazenado por 18 a 22 horas, ou infundidas com 20 ml de plasma seminal (n=33), ou com 20 ml de leite desnatado (n=38). As éguas foram abatidas duas, quatro ou 24h após as inseminações ou infusões. O grupo controle (n=33) não recebeu nenhum tratamento. Os ovidutos foram separados do útero, sendo útero e ovidutos lavados separadamente com PBS. Uma amostra do lavado de cada oviduto foi examinada para contagem de espermatozóides e uma amostra de cada lavado uterino foi utilizada para contagem de leucócitos. Após as lavagens, foi retirada uma amostra de endométrio para exame histopatológico. As éguas inseminadas e infundidas apresentaram reação inflamatória significativamente maior que as éguas do grupo controle, no decorrer das 24 horas. A reação inflamatória foi significativamente maior nas éguas inseminadas que nas infundidas. A reação inflamatória apresentou correlação com a concentração espermática (r=0,389). O número de éguas apresentando espermatozóides nos ovidutos não foi diferente nos grupos inseminados. Concluiu-se que componentes da dose inseminante provocam uma resposta inflamatória, sendo esta tanto mais severa e de resolução mais rápida, quanto maior for a concentração espermática. Por outro lado, até as quatro horas pós-inseminação, o transporte espermático independe da concentração espermática utilizada.

CADAVID, Verônica Gonzalez. Parâmetros espermáticos e proteínas do plasma seminal de cachaços e parâmetros reprodutivos de marrãs e porcas suplementados com minerais e vitaminas. 2014. 241 f. Tese (doutorado em zootecnia)- Universidade Federal do Ceará, Fortaleza-CE, 2014. / Submitted by Elineudson Ribeiro (elineudsonr@gmail.com) on 2016-04-26T17:20:42Z No. of bitstreams: 1 2014_tese_vgcadavid.pdf: 3289695 bytes, checksum: 3d4ccd01b841180e33fa7aa94e66bbd2 (MD5) / Approved for entry into archive by José Jairo Viana de Sousa (jairo@ufc.br) on 2016-05-27T19:14:11Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_tese_vgcadavid.pdf: 3289695 bytes, checksum: 3d4ccd01b841180e33fa7aa94e66bbd2 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-05-27T19:14:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_tese_vgcadavid.pdf: 3289695 bytes, checksum: 3d4ccd01b841180e33fa7aa94e66bbd2 (MD5) Previous issue date: 2014 / The present study was conducted to identify the major seminal plasma protein profile of boars and its associations with semen criteria. Semen samples were collected from 12 adult boars and subjected to evaluation of sperm parameters (motility, morphology, vitality and percent of cells with intact acrosome). Seminal plasma was obtained by centrifugation, analyzed by 2-D SDS-PAGE and proteins identified by mass spectrometry (electrospray ionization quadrupole-time-of-flight). We tested regression models using spot intensities related to the same proteins as independent variables and semen parameters as dependent variables (p < 0,05). One hundred and twelve spots were indentified in the boar seminal plasma gels, equivalent to 39 different proteins. Spermadhesins PSP-I, PSP-II, AQN1, AQN3 and AWN1 represented 45,2 ± 8 % of the total intensity of all spots. Other proteins expressed in the boar seminal plasma include albumin, complement proteins (complement factor H precursor, complement C3 precursor and adipsin/complement factor D), immunoglobulins (IgG heavy chain precursor, immunoglobulin delta heavy chain membrane bound form, immunoglobulin gamma-chain, Ig lambda chain V-C region PLC3 and CH4 and secreted domain of swine IgM), IgG-binding proteins, epididymal specific lipocalin-5, epididymal secretory protein E1 precursor, epididymal secretory glutathione peroxidase precursor, transferrin, lactotransferrin and fibronectin type 1 (FN1). Based on regression analysis, the percentage of sperm with midpiece defects was related to the amount of CH4 and secreted domains of swine IgM and FN1 (R² = 0,58), IgG-binding protein (R² = 0,61), complement factor H precursor (R² = 0,61) and lactadherin (R² = 0.45). The percentage of sperm with tail defects was also related to CH4 and secreted domains of swine IgM and FN1 (R² = 0,40), IgG-binding protein (R² = 0,34) and lactadherin (R² = 0,74). Sperm motility, in turn, had association with the intensities of spots identified as lactadherin (R² = 0,48). In conclusion, we presently describe the major proteome of boar seminal plasma and significant associations between specific seminal plasma proteins and semen parameters. Such relationships will serve as the basis for determination of molecular markers of sperm function in the swine species. / O presente estudo foi realizado com o objetivo de identificar o perfil das principais proteínas do plasma seminal suíno e suas associações com parâmetros seminais. Amostras de sêmen foram coletadas de 12 cachaços adultos e submetidas à avaliação dos parâmetros seminais (motilidade total, morfologia, vitalidade e porcentagem de células com acrossoma intacto). O plasma seminal foi obtido por centrifugação e as proteínas seminais foram analisadas por eletroforese 2-D e espectrometria de massa. Foram testados modelos de regressão usando a soma das intensidades dos spots referentes às mesmas proteínas como variáveis independentes e parâmetros seminais como variáveis dependentes (p < 0,05). Cento e doze spots foram identificados nos géis do plasma seminal, equivalentes a 39 proteínas diferentes. As espermadesinas PSP-I, PSP-II, AQN1, AQN3 e AWN1 representaram 45,2 ± 8 % do total da intensidade de todos os spots detectados nos geis. Outras proteínas expressas no plasma seminal suíno incluem a albumina, proteínas do complemento (complement factor H precursor, complement C3 precursor e adipsin/complement factor D), imunoglobulinas (IgG heavy chain precursor, imunoglobulina delta heavy chain membrane bound form, imunoglobulina gamma-chain, Ig lambda chain V-C region PLC3 e CH4 and secreted domain of swine IgM), IgG-binding proteins, epididymal specific lipocalin-5, epididymal secretory protein E1 precursor, epididymal glutathione peroxidase precursor, transferrin, lactotransferrin e fibronectin tipo 1 (FN1). Em função das análises de regressão, o percentual de espermatozoides com defeito na peça intermediária foi relacionado com a quantidade de “CH4 and secreted domain of swine IgM” e FN1 (R2 = 0,58), a proteína IgG-binding (R2 = 0,61), o fator H do complemento (R2 = 0,61) e lactaderina (R2 = 0,45). Porcentagem percentual de defeitos de cauda também foi relacionado com “CH4 and secreted domain of swine IgM” e FN1 (R2 =0,40), a proteína IgG-binding (R2 = 0,34), e lactaderina (R2 = 0,74). A motilidade espermática, por sua vez, teve associação com a intensidade dos spots identificados como lactaderina (R2 = 0,48). Em conclusão, descreve-se, neste trabalho, o proteoma do plasma seminal suíno e associações significativas entre proteínas específicas do plasma seminal e parâmetros seminais. Tais relações servirão como base para a determinação de marcadores moleculares da função espermática na espécie suína.

O objetivo deste estudo foi avaliar a qualidade do sêmen fresco e congelado de tambaqui (Colossoma macropomum), submetido à contaminação com diferentes fontes. O estudo foi conduzido na região da amazônia brasileira, estado de Rondônia, durante fevereiro e março de 2012. Foram utilizadas amostras de sêmen de 13 machos, divididas em quatro tratamentos: controle (sem contaminante) e contaminado com 10% de urina, sangue ou fezes. Foram avaliadas a motilidade e tempo de duração da motilidade espermática das amostras frescas, e motilidade, integridade de membrana, integridade de DNA, e funcionalidade de mitocôndria das amostras congeladas. A motilidade do sêmen fresco não diferiu (P<0,05) entre as amostras contaminadas por sangue, urina ou fezes (79,6; 76,1 e 78,8%, respectivamente) mas foi inferior em relação ao grupo controle (96,1%). Já nas amostras congeladas, não houve diferença (P>0,05) na motilidade entre as amostras contaminadas com sangue, urina ou fezes (11,1; 22,3 e 34,6%, respectivamente) e as amostras sem contaminantes (40,8%). O tempo de duração da motilidade das amostras, fresco, sem contaminantes (125,5 s) foi superior (P<0,05) ao das amostras contaminadas com sangue ou fezes (85,7 e 77,0 s, respectivamente), e as contaminadas com urina (98,7 s) não diferiram dos outros tratamentos. Os tratamentos contaminados com urina ou fezes (94,0 e 102,5 s, respectivamente) não diferiram (P>0,05) entre si ou em relação aos demais tratamentos. Para a análise de integridade de membrana, os valores 72,4; 77,0 e 68,0% obtidos no sêmen contaminado com sangue, urina e fezes, respectivamente, foram menores (P<0,05) que o controle cuja média foi 91,5%. O tratamento contaminado com urina foi inferior (P<0,05) ao tratamento controle para a integridade de DNA (82,8 e 93,4%, respectivamente) e para a funcionalidade de mitocôndrias (87,1% e 94,9%, respectivamente). Assim, a qualidade seminal é prejudicada com a inclusão dos contaminantes testados (fezes, urina ou sangue), em concentração de 10%, para a maioria dos parâmetros avaliados. / The objective was to evaluate the quality of fresh and thawed semen of C. macropomum, subject to contamination from various sources. The study was conducted in the Brazilian Amazon region, state of Rondônia, during February and March of 2012. Semen samples of 13 males were divided into four treatments: control (no contaminants) and 10% contaminated with urine, blood or feces. Motility was evaluated in fresh and thawed samples whereas membrane integrity, DNA integrity, and functionality of mitochondria were evaluated in thawed samples. The motility of fresh semen was lower (P <0.05) in samples contaminated by blood, urine or feces (79.6, 76.1 and 78.8%, respectively) when compared with control group (96.1%), but did not differ among them. However in post thawed samples, motility was similar (P> 0.05) in samples contaminated with blood, urine or feces (11.1, 22.3 and 34.6%, respectively) compared to samples without contaminants (40.8%). In post thawed semen, only blood contaminated semen (71.2 s) was lower than the control treatment (140.8 s). Treatments contaminated with urine or feces (94.0 and 102.5 s, respectively) did not differ (P> 0.05) among themselves or with respect to other treatments. For the membrane integrity analysis, values of 72.4, 77.0 and 68.0% obtained in semen contaminated with blood, urine and feces, respectively, were lower (P <0.05) than the control whose average was 91.5%. Treatment contaminated with urine was lower (P <0.05) than the control treatment for DNA integrity (82.8 and 93.4%, respectively) and mitochondria functionality (87.1% and 94.9%, respectively). Therefore, most parameters of semen quality were impaired by the inclusion of contaminants tested (feces, urine or blood) at a concentration of 10%.

Normalmente, após a cobertura ou a inseminação artificial de éguas, ocorre uma endometrite aguda transitória em resposta ao sêmen e bactérias no útero. O objetivo deste estudo foi verificar se o transporte espermático e a intensidade da reação inflamatória uterina, 2h, 4h ou 24h após a inseminação com sêmen resfriado, são influenciados pela concentração espermática na dose inseminante. Para tal, foram utilizadas 192 éguas em cio, com folículo dominante ≥35 mm, sem crescimento bacteriano e livres de PMNs aos exames uterinos complementares. As éguas foram distribuídas aleatoriamente em grupos e inseminadas com 20 ml contendo 100x106 (n=30), 500x106 (n=27) ou 1000x106 (n=31) espermatozóides diluídos em solução de 3 ml de plasma seminal e 17 ml de leite desnatado, refrigerado e armazenado por 18 a 22 horas, ou infundidas com 20 ml de plasma seminal (n=33), ou com 20 ml de leite desnatado (n=38). As éguas foram abatidas duas, quatro ou 24h após as inseminações ou infusões. O grupo controle (n=33) não recebeu nenhum tratamento. Os ovidutos foram separados do útero, sendo útero e ovidutos lavados separadamente com PBS. Uma amostra do lavado de cada oviduto foi examinada para contagem de espermatozóides e uma amostra de cada lavado uterino foi utilizada para contagem de leucócitos. Após as lavagens, foi retirada uma amostra de endométrio para exame histopatológico. As éguas inseminadas e infundidas apresentaram reação inflamatória significativamente maior que as éguas do grupo controle, no decorrer das 24 horas. A reação inflamatória foi significativamente maior nas éguas inseminadas que nas infundidas. A reação inflamatória apresentou correlação com a concentração espermática (r=0,389). O número de éguas apresentando espermatozóides nos ovidutos não foi diferente nos grupos inseminados. Concluiu-se que componentes da dose inseminante provocam uma resposta inflamatória, sendo esta tanto mais severa e de resolução mais rápida, quanto maior for a concentração espermática. Por outro lado, até as quatro horas pós-inseminação, o transporte espermático independe da concentração espermática utilizada.

O objetivo deste estudo foi avaliar a qualidade do sêmen fresco e congelado de tambaqui (Colossoma macropomum), submetido à contaminação com diferentes fontes. O estudo foi conduzido na região da amazônia brasileira, estado de Rondônia, durante fevereiro e março de 2012. Foram utilizadas amostras de sêmen de 13 machos, divididas em quatro tratamentos: controle (sem contaminante) e contaminado com 10% de urina, sangue ou fezes. Foram avaliadas a motilidade e tempo de duração da motilidade espermática das amostras frescas, e motilidade, integridade de membrana, integridade de DNA, e funcionalidade de mitocôndria das amostras congeladas. A motilidade do sêmen fresco não diferiu (P<0,05) entre as amostras contaminadas por sangue, urina ou fezes (79,6; 76,1 e 78,8%, respectivamente) mas foi inferior em relação ao grupo controle (96,1%). Já nas amostras congeladas, não houve diferença (P>0,05) na motilidade entre as amostras contaminadas com sangue, urina ou fezes (11,1; 22,3 e 34,6%, respectivamente) e as amostras sem contaminantes (40,8%). O tempo de duração da motilidade das amostras, fresco, sem contaminantes (125,5 s) foi superior (P<0,05) ao das amostras contaminadas com sangue ou fezes (85,7 e 77,0 s, respectivamente), e as contaminadas com urina (98,7 s) não diferiram dos outros tratamentos. Os tratamentos contaminados com urina ou fezes (94,0 e 102,5 s, respectivamente) não diferiram (P>0,05) entre si ou em relação aos demais tratamentos. Para a análise de integridade de membrana, os valores 72,4; 77,0 e 68,0% obtidos no sêmen contaminado com sangue, urina e fezes, respectivamente, foram menores (P<0,05) que o controle cuja média foi 91,5%. O tratamento contaminado com urina foi inferior (P<0,05) ao tratamento controle para a integridade de DNA (82,8 e 93,4%, respectivamente) e para a funcionalidade de mitocôndrias (87,1% e 94,9%, respectivamente). Assim, a qualidade seminal é prejudicada com a inclusão dos contaminantes testados (fezes, urina ou sangue), em concentração de 10%, para a maioria dos parâmetros avaliados. / The objective was to evaluate the quality of fresh and thawed semen of C. macropomum, subject to contamination from various sources. The study was conducted in the Brazilian Amazon region, state of Rondônia, during February and March of 2012. Semen samples of 13 males were divided into four treatments: control (no contaminants) and 10% contaminated with urine, blood or feces. Motility was evaluated in fresh and thawed samples whereas membrane integrity, DNA integrity, and functionality of mitochondria were evaluated in thawed samples. The motility of fresh semen was lower (P <0.05) in samples contaminated by blood, urine or feces (79.6, 76.1 and 78.8%, respectively) when compared with control group (96.1%), but did not differ among them. However in post thawed samples, motility was similar (P> 0.05) in samples contaminated with blood, urine or feces (11.1, 22.3 and 34.6%, respectively) compared to samples without contaminants (40.8%). In post thawed semen, only blood contaminated semen (71.2 s) was lower than the control treatment (140.8 s). Treatments contaminated with urine or feces (94.0 and 102.5 s, respectively) did not differ (P> 0.05) among themselves or with respect to other treatments. For the membrane integrity analysis, values of 72.4, 77.0 and 68.0% obtained in semen contaminated with blood, urine and feces, respectively, were lower (P <0.05) than the control whose average was 91.5%. Treatment contaminated with urine was lower (P <0.05) than the control treatment for DNA integrity (82.8 and 93.4%, respectively) and mitochondria functionality (87.1% and 94.9%, respectively). Therefore, most parameters of semen quality were impaired by the inclusion of contaminants tested (feces, urine or blood) at a concentration of 10%.