Submitted by (lucia.rodrigues@ufrpe.br) on 2017-02-10T13:08:46Z No. of bitstreams: 1 Robespierre Augusto Joaquim Araujo Silva.pdf: 876319 bytes, checksum: 0f2c3e9ca22ca2262229c589230deed3 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-02-10T13:08:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Robespierre Augusto Joaquim Araujo Silva.pdf: 876319 bytes, checksum: 0f2c3e9ca22ca2262229c589230deed3 (MD5) Previous issue date: 2015-03-26 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The objective of this study was to evaluate the influence of different extenders [Tris buffer (Tris), Tris-egg yolk (EY) and Tris-soybean lecithin 1% (SL1) and 2% (SL2)] and the removal of seminal plasma process in goat sperm stored at 5 ºC for 48 hours. Semen was collected four goats (two Toggenburg and two American Alpine), using an artificial vagina twice a week for four weeks. Ejaculates with greater than 60% motility were pooled and each pool seminal (n = 8) was used in a repeat. The pool was divided equally, half diluted without removal of seminal plasma (non washed semen – NW), and packaged in straws of 0.25 mL (200x106 sperm/mL). The second half of the pool was subjected to removal of the seminal plasma (washed semen - W) by double centrifugation (2200 g/10 min) then diluted and packaged as mentioned above. Then, the samples were chilled to 5 °C (90 min) and kept under refrigeration for 48 hours. Computer analysis of sperm kinetics (CASA) and the evaluation of the plasma membrane (PMi) and acrosomal (ACi) integrity and mitochondrial membrane potential (MMP) were determined within five minutes after reaching 5 °C (T0), and after 24 (T24) and 48 (T48) hours of storage. No influence extender (p>0.05) was observed for sperm kinetic variables of NW semen, however, independent extender, progressive motility (PM), linearity (LIN), straightness (STR), straightline velocity (VSL) and average path velocity (VAP) were lower (p<0.05) in T48 compared to T0, a fact confirmed for total motility (TM) of SL2 group. In washed semen, TM and MP of EY group was higher (p <0.05) than the other groups throughout chilling period. After removal of the seminal plasma did not influence the cooling time (p>0.05) in any of the kinetic variables SL2 group. However, LIN, STR, VSL values for Tris-EY and SL1 groups, and PM and VAP values for Tris-EY group, were lower in T48 compared to T0. It was observed also that in the T48 TM, PM, VSL and VAP variables of LS2 group, and PM variable of Tris-EY group were higher in semen washed when compared to semen non whased. The PMi was not influenced by the type of extender, but in NW semen PMi of Tris-EY and SL2 groups was lower (p <0.05) in T48 compared to T0. Greater (p <0.05) PMi was observed for the washed compared to non washed semen. The ACi and kinetics (curvilinear velocity – VCL) were not affected (p>0.05) by extender, or by storage time or the removal of seminal plasma. Thus, it is concluded that the soybean lecithin can be used as a substitute for egg yolk for cooling of goat semen and which removal of the seminal plasma enhances the preservation of the caprine semen. / O objetivo deste estudo foi avaliar a influência de diferentes diluidores [Tris tampão (Tris), Tris-Gema (TG) e Tris-lecitina de soja 1% (LS1) e 2% (LS2)] e do processo de remoção do plasma seminal no sêmen caprino armazenado a 5 ºC por 48 horas. O sêmen foi colhido de quatro caprinos (dois Toggenburg e dois Alpino Americano), com vagina artificial, duas vezes por semana, durante quatro semanas. Ejaculados com motilidade superior a 60% foram agrupados e cada pool seminal (n=8) foi utilizado em uma repetição. O pool foi igualmente dividido, sendo metade diluído, sem remoção do plasma seminal (sêmen não lavado – NL), e envasado em palhetas de 0,25 mL (200x106 espermatozoides/mL). A segunda metade do pool foi submetida a remoção do plasma seminal (sêmen lavado – L) por dupla centrifugação (2200 g/10min) e depois diluída e envasada como citado anteriormente. Em seguida, as amostras foram refrigeradas até 5 ºC (90 min) e mantidas sob refrigeração por 48 horas. Análise computadorizada da cinética espermática (CASA) e a avaliação da integridade de membrana plasmática (iMP) e acrossomal (iAC) e do potencial de membrana mitocondrial (PMM) foram determinadas cinco minutos após atingir 5 ºC (T0), após 24 (T24) e 48 (T48) horas de armazenamento. Nenhuma influência do diluidor (p>0,05) foi observada para as variáveis de cinética espermática do sêmen NL, porém, independente do diluidor, motilidade progressiva (MP), linearidade (LIN), retilinearidade (STR), velocidade em linha reta (VSL) e velocidade média do percurso (VAP) foram menores (p<0,05) no T48 em relação ao T0, fato também observado para motilidade total (MT) do grupo LS2. No sêmen lavado, MT e MP do grupo Gema foi superior (p<0,05) aos demais grupos durante todo período de refrigeração. Após a remoção do plasma seminal não houve influência do tempo de refrigeração (p>0,05) sobre quaisquer das variáveis cinéticas do grupo LS2. Entretanto, os valores de LIN, STR, VSL para os grupos Tris-Gema e LS1, e MP e VAP para o grupo Tris-Gema, foram inferiores no T48 em relação ao T0. Observou-se, ainda, que no T48 as variáveis de MT, MP, VSL e VAP do grupo LS2, e MP do grupo Tris-Gema foram superior no sêmen lavado quando comparado ao sêmen não lavado. A iMP não foi influenciada pelo tipo de diluidor, porém no sêmen NL a iMP dos grupos Tris-Gema e LS2 foi inferior (p<0,05) no T48 em relação ao T0. Maior (p<0,05) iMP foi observada para o sêmen lavado em relação ao não lavado. A iAC e a cinética (velocidade curvilinear-VCL), não foram influenciadas (p>0,05) pelo diluidor, nem pelo tempo de armazenamento ou pela remoção do plasma seminal. Assim, conclui-se que a lecitina de soja pode ser utilizada como substituto à gema de ovo para refrigeração do sêmen caprino e que a remoção do plasma seminal melhora a conservação do sêmen dessa espécie.

FundaÃÃo Cearense de Apoio ao Desenvolvimento Cientifico e TecnolÃgico / Objetivou-se por meio deste estudo caracterizar a composiÃÃo bioquÃmica do plasma seminal e dos parÃmetros seminais de coelhos criados no NE do Brasil, identificando ainda as variaÃÃes que possam ocorrer ao longo do ano. O experimento foi conduzido nas instalaÃÃes do Setor de Cunicultura do Departamento de Zootecnia/UFC. O Ãndice de conforto tÃrmico dentro da instalaÃÃo foi calculado de acordo com a fÃrmula do ITU, modificada para coelhos. Foram utilizados 20 coelhos da raÃa Nova ZelÃndia Branca, criados em sistema flat-deck, alimentados com raÃÃo comercial. Os ejaculados foram coletados duas vezes por semana (outubro/2009 a setembro/2010), utilizando-se uma vagina artificial. Em seguida, os ejaculados foram avaliados quanto ao volume, cor, aspecto, vigor, motilidade e concentraÃÃo espermÃtica, apÃs foram centrifugados e o PS (plasma seminal) foi removido e acondicionado em tubos eppendorfs a -18 oC. Para realizaÃÃo das anÃlises bioquÃmicas foi feito um pool mensal de PS de cada animal, onde foram avaliadas as concentraÃÃes de glicose, frutose, colesterol total e proteÃnas totais. Neste estudo, os parÃmetros seminais foram influenciados significativamente (p<0,05) pelo mÃs de coleta, independente da existÃncia de estresse pelo calor. Na avaliaÃÃo dos parÃmetros seminais pela cor foi verificado que os ejaculados de cor branca perolada foram representativos da boa qualidade do sÃmen. Quanto ao aspecto, os melhores resultados foram encontrados nos ejaculados com aspecto cremo-leitoso. No que se refere Ãs caracterÃsticas bioquÃmicas, o aspecto do ejaculado influenciou significativamente (p<0,05) somente as concentraÃÃes de frutose e glicose. Foram constatadas diferenÃas significativas das concentraÃÃes de frutose entre os diferentes meses do ano. A glicose foi identificada como um constituinte, comumente encontrada no PS. A concentraÃÃo de colesterol total no PS de coelhos no presente experimento foi mais baixa que o encontrado por outros autores. O estudo das correlaÃÃes de Pearson demonstrou associaÃÃes significativas (baixas e moderadas), positivas e negativas entre os parÃmetros seminais e os bioquÃmicos. Os parÃmetros bioquÃmicos apresentaram correlaÃÃes entre si. Nesse estudo foi encontrada correlaÃÃo negativa da concentraÃÃo espermÃtica com a frutose. Os resultados permitiram concluir demonstram que os coelhos criados no nordeste do Brasil sÃo perfeitamente adaptados, pois apresentam caracterÃsticas seminais e bioquÃmicas normais, apesar da existÃncia de estresse tÃrmico. / This study was carried out to characterize the biochemical composition of seminal plasma and semen parameters of rabbits reared in Northeast Brazil, also identifying the changes that occur throughout the year. The experiment was conducted at the Sector of the Rabbit Department of Animal Science / UFC. The index of thermal comfort inside the facility was constructed according to the formula of the THI, modified for rabbits. The ejaculates were obtained twice a week from 20 New Zealand White rabbits, reared in flat-deck system (October/2009 to September/2010). After collection, the semen was measured and evaluated for volume, color, appearance, vigor, sperm concentration and motility. To obtain the SP, the semen was centrifuged and then stored at - 18ÂC. To perform the biochemical analysis was made a monthly pool of PS of each animal. The samples were tested according to the concentrations of fructose, glucose, total cholesterol and total protein. In this study, semen parameters were affected significantly (p <0.05) by sampling month, despite the presence of heat stress. In the evaluation of semen parameters was found that the color of the ejaculates was pearly white representative of good semen quality. Regarding the aspect, the best results were found in ejaculates with cream-milky appearance. With regard to biochemical characteristics, the aspect of the ejaculate significantly (p <0.05) only the concentrations of fructose and glucose. Significant differences in concentrations of fructose among the different months of the year. Glucose was identified as a constituent, usually found in the PS. Significant differences in concentrations of fructose among the different months of the year. Glucose was identified as a constituent, usually found in the PS. The study of the Pearson correlations showed significant associations (low and moderate) positive and negative differences between the semen parameters and biochemical. In this study we found a negative correlation with sperm concentration of fructose. The results showed that rabbits show created in Northeastern Brazil are perfectly adapted, as seminal and biochemical characteristics have normal, despite the existence of heat stress.

A criopreservação do sêmen suíno ainda é um desafio devido a extensão dos danos causados pelo choque-frio. Os espermatozoides oriundos da fração rica do ejaculado suíno possuem a membrana plasmática mais estável, são mais resistentes ao choque-frio e a reação acrossomal precoce do que aqueles oriundo da fração total do ejaculado. Com isso, o uso do plasma seminal oriundo dessa fração do ejaculado suíno também poderia aumentar a criotolerância dos espermatozoides suínos e/ou reverter os danos oriundo da criopreservação. Entretanto, a grande maioria das técnicas de avaliação espermática inclui apenas um parâmetro de funcionalidade espermática. Por outro lado, quanto mais características espermáticas analisadas, mais fiel se torna a avaliação quanto ao potencial fertilizante da amostra. Nesse contexto, esse trabalho objetivou a validação de uma técnica de análise espermática por citometria de fluxo para a avaliação simultânea da integridade das membranas plasmática e acrossomal e potencial de membrana mitocondrial. Além de avaliar os efeitos da adição/manutenção do plasma seminal oriundo da fração rica do ejaculado suíno sobre a cinética espermática, integridade das membranas plasmática e acrossomal e potencial de membrana mitocondrial, fluidez e peroxidação das membranas espermáticas, fosforilação do aminoácido tirosina, taxa de fertilidade e de prenhez precoce. A técnica sugerida em nosso trabalho é capaz de detectar (R2 &#61; 0,9356; p &lt; 0,01) simultaneamente os espermatozoides com a membrana plasmática e acrossomal integras e alto potencial de membrana mitocondrial (PIAIA). O plasma seminal da fração rica do ejaculado suíno gera benefícios para a cinética espermática melhorando a motilidade total e progressiva dos espermatozoides descongelados (p &lt; 0,05). Por outro lado, a manutenção/adição de plasma seminal oriundo da fração rica do ejaculado suíno, não é capaz de alterar (p &gt; 0,05) os espermatozoides PIAIA, a fosforilação do aminoácido tirosina, a fluidez e a peroxidação das membranas espermáticas. Entretanto, essas características devem ser cuidadosamente interpretadas, uma vez que, a fluidez e a peroxidação das membranas espermáticas são alteradas (p &lt; 0,05) pelo processo de centrifugação. As taxas de fertilidade e de prenhez precoce também não foram influenciadas (p &gt; 0,05) pela adição de plasma seminal oriundo da fração rica do ejaculado suíno. Portanto, podemos concluir que o plasma seminal da fração rica possui efeito benéfico sobre a fisiologia dos espermatozoides pós-descongelação, melhorando a criopreservação do sêmen suíno. / Boar semen cryopreservation is still a challenge due to the extension of cold shock damage. Boar spermatozoa arising from sperm-rich ejaculate fraction are reported to have a more stable plasma membrane, more resistant to cold shock and premature acrosome reaction than spermatozoa from the whole ejaculate. Thus, seminal plasma arising from whole sperm-rich fraction can increase cryotolerance of boar spermatozoa, and in other domestic species it has the ability to reverse cryopreservation damage. However, the majority of actual sperm evaluation techniques include a single sperm parameter, which makes the sperm characterization of a single population difficult. In this context, this work was performed to validate a sperm flow cytometry fourfold coloration technique for the simultaneous evaluation of plasma and acrosomal membrane integrity and mitochondrial membrane potential. Furthermore, we evaluate the seminal plasma arising from whole sperm-rich fraction effects on sperm kinetics, plasma and acrosomal membrane integrity and mitochondrial membrane potential, tyrosine phosphorylation, membrane fluidity and peroxidation, fertility and early pregnancy rate. The proposed technique is able (R2 &#61; 0.9356; p &lt; 0.01) to simultaneous detection of plasma and acrosomal membrane integrity and high mitochondrial membrane potential (IPIAH). Seminal plasma arising from whole sperm-rich fraction is able to improve (p &lt; 0.05) total and progressive motility. Furthermore, seminal plasma arising from whole sperm-rich fraction maintenance/addition was not able to improve (p &gt; 0.05) the IPIAH sperm population, tyrosine phosphorylation, membrane fluidity and peroxidation. However, these sperm characteristics need to be carefully interpreted, once, membrane fluidity and peroxidation could be influenced (p &lt; 0.05) by centrifugation. Fertility and early pregnancy rate we not improved (p &gt; 0.05) by seminal plasma addition. Therefore, we concluded that sperm fourfold coloration can be used to evaluate simultaneously plasma and acrosomal membranes integrity and mitochondrial membrane potential and that whole sperm-rich fraction seminal plasma can be beneficial to post-thawed sperm physiology, thereby improving boar semen cryopreservation.

A criação de equinos tem se desenvolvido ativamente no Brasil. Assim, o interesse dos proprietários em biotecnologias reprodutivas equinos vem aumentando. Entretanto, o sêmen equino tem baixa tolerância à criopreservação comparada com outras espécies, sendo o estresse oxidativo um entrave por seus efeitos deletérios sobre a célula espermática. Neste contexto, o plasma seminal possui antioxidantes que promovem um papel importante na proteção do espermatozoide. Porém o, durante o processo de criopreservação, o plasma seminal é retirado. Em estudo anterior verificamos que, na ausência do plasma seminal os espermatozoides equinos tornam-se mais susceptíveis ao estresse oxidativo, principalmente causado pelo malondialdeído (MDA), subproduto da oxidação de lipídeos. Um dos motivos para este resultado seria a retirada da carnosina, um dos principais antioxidantes responsáveis pela proteção contra o acúmulo de MDA e seus efeitos deletérios, presente no plasma seminal. O objetivo do presente estudo é identificar e quantificar carnosina no plasma seminal de garanhões e comparar as características seminais em diferentes grupos de bons e maus refrigeradores e congeladores, baseando-se na análise da motilidade posterior ao processo de refrigeração e congelação. Foram colhidos dois ejaculados de quarenta garanhões (idades entre 4 e 16 anos de idade). As variáveis analisadas foram cinética espermática pelo sistema CASA, avaliação funcional (coloração de eosina-nigrosina para membranas, fast-green/rosa bengala para acrossomos, coloração 3-3diaminobenzidina para atividade mitocondrial e SCSA&trade; para susceptibilidade a denaturação de cromatina) e avaliação do índice de peroxidação lipídica (TBARS) do espermatozoide e do plasma seminal. Também foram realizadas análises da integridade de membranas plasmática e acrossomal, e potencial de atividade mitocondrial pelas sondas fluorescentes PI, Hoescht 33342, FITC-PSA e JC-1 além da produção de (ROS) pelo espermatozoide com a sonda fluorescente CellRox. A carnosina do plasma seminal foi mensurada utilizando kit de ELISA Biomatik&reg; comercial. Foram comparados os grupos bons e maus refrigeradores, e bons e maus congeladores (p&le;0,05). Verificamos uma maior concentração de carnosina nos bons refrigeradores em relação aos que refrigeraram mau. Isso pode ter ocorrido pela maior concentração de TBARS no plasma seminal destes animais, possivelmente por um efeito fisiológico de reações de oxidação. Além disto, os bons refrigeradores apresentaram porcentagens significativamente maiores de células com alta atividade mitocondrial, acrossomo intacto e membrana intacta sugerindo um efeito benéfico da carnosina. Em relação ao efeito da congelação do sêmen, não foi observada diferença na concentração de carnosina entre os que congelaram bem ou não. Este resultado era esperado uma vez que, durante o processo de criopreservação do sêmen equino o plasma seminal é retirado. De fato, a maior porcentagem de células com lesão mitocondrial, de membrana e DNA lesado nos maus congeladores e as correlações entre as lesões e o estresse oxidativo pode indicar um mecanismo mitocondrial de geração de estresse oxidativo e consequente lesão das estruturas celulares. Conclui-se que a carnosina apresentou efeito protetor durante a refrigeração espermática protegendo contra injúrias causadas pela mesma e consequentemente é um dos fatores que melhora a qualidade espermática após 24 horas de refrigeração. / Equine breeding has been actively developing in Brazil, leading to increased interest in reproductive biotechnology. However, there is a limitation due to a tolerance of some stallions to cryopreservation, especially when compared to other species. In this context, oxidative stress represents an obstacle due to its deleterious effects on equine sperm. To counterattack such effect, seminal plasma has antioxidants that play an important role in protecting the sperm. However, during the cryopreservation process, the seminal plasma is withdrawn. In a previous study we verified that, in the absence of seminal plasma, equine spermatozoa are more susceptible to oxidative stress, mainly caused by malondialdehyde (MDA), a product of lipid oxidation. One of the reasons for this result would be the removal of carnosine present in the seminal plasma, one of the main antioxidants responsible for protection against the MDA accumulation and its deleterious effects. The objective of the present study was to identify and quantify carnosine in the seminal plasma of stallions and to compare the seminal characteristics in different groups of sperm samples with high and low tolerance to the cryopreservation or cooling, based on analysis of total motility after these processes. Two ejaculates of forty stallions (N= 80; ages between 4 and 16 years old) were collected. Each ejaculate was divided into two aliquots, one submitted to a 24h cooling and the other submitted to cryopreservation. The variables analyzed were: Computer Assisted Sperm Analysis (CASA system), functional evaluation (eosin-nigrosin stain for membranes, fast-green/rose bengal for acrosomes, 3-3\'diaminobenzidine staining for mitochondrial activity and SCSA&trade; for susceptibility to chromatin denaturation) and lipid peroxidation index (TBARS assay) of sperm and seminal plasma. Furthermore, plasma and acrossomal membranes integrities and mitochondrial membrane potential were also analyzed using the fluorescence probes PI, Hoescht 33342, FITC-PSA, JC-1 and ROS detection by CellRox fluorescent probes. Carnosine from the seminal plasma was measured using commercial Biomatik&reg; ELISA kit. Thus, samples with high and low tolerance were compared (p&le;0.05). We found a higher concentration of carnosine in good cooler compared to those showing low motility. This may have occurred in response to the higher concentration of TBARS in the seminal plasma of these animals, possibly due to a physiological effect of oxidation reactions. In addition, good coolers presented significantly higher percentages of cells with high mitochondrial activity, intact acrosome and intact membrane suggesting a beneficial effect of carnosine. Regarding the effect cryopreservation, no difference was observed between those with high and low post-thaw motility. This result was expected since, during the cryopreservation process of equine semen, the seminal plasma is removed. In fact, the higher percentage of cells with mitochondrial lesions, damaged membrane and fragmented DNA in bad freezers and the correlations between lesions and oxidative stress may indicate a mitochondrial mechanism of oxidative stress generation and consequent lesion of cellular structures. In conclusion, carnosine had a protective effect during sperm cooling, protecting against damages being probably one of the factors that improves sperm quality after 24 hours of refrigeration.

Chez les mammifères, les spermatozoïdes, au cours du transit à travers le tractus génital femelle, rencontrent des environnements qui influencent leur mobilité et leur pouvoir fécondant. L’analyse par spectrométrie de masse de ces milieux (plasma séminal, mucus cervical, fluides de l’utérus et de l’oviducte) a permis une caractérisation approfondie de leur protéome et l’identification de protéines modifiant l’activité des gamètes comme la Zinc Alpha Glycoprotein. L’étude du protéome du tractus génital femelle au cours du cycle oestral a montré une régulation différentielle de la sécrétion des protéines selon l’organe et le stade du cycle. La comparaison du protéome et des propriétés mécaniques du mucus cervical a montré l’impact de la mucine 5AC sur la viscosité du mucus et la mobilité des spermatozoïdes dans ce mucus. Cette interaction entre le mucus cervical et les spermatozoïdes se traduit par la fixation à leur surface de nouvelles protéines, comme la myosine 9, ayant un impact potentiel sur leur pouvoir fécondant. / During their transit through the female genital tract, mammalian spermatozoa encounter several environments that influence their mobility and fertilizing ability. Analysis by mass spectrometry of these environments (seminal plasma, cervical mucus, fluids from the uterus and the oviduct) enabled characterization of their proteomes and the identification of proteins able to modify gamete function such as Zinc Alpha Glycoprotein. The study of the female genital tract proteome during the oestrous cycle showed differential regulation of the protein secretion according to the organ and the stage of the cycle. Comparison of the proteome and the mechanical properties of cervical mucus showed the impact of mucin 5AC on the viscosity of mucus and the motility of spermatozoa in its presence. 52 cervical mucus proteins, such as myosin 9, bind to the surface of spermatozoa which may impact sperm function and fertilizing ability.

ALENCAR, Jôsy Maria Arruda de. Parâmetros seminais e composição bioquímicas do plasma seminal de coelhos criados no nordeste do Brasil. 2011. 54 f. : Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Ceará, Centro de Ciências Agrárias, Departamento de Zootecnia, Fortaleza-CE, 2011 / Submitted by Nádja Goes (nmoraissoares@gmail.com) on 2016-08-01T15:29:48Z No. of bitstreams: 1 2011_dis_jmaalencar.pdf: 450822 bytes, checksum: 81c939f6286bffdd6e44ed9ba0e39500 (MD5) / Approved for entry into archive by Nádja Goes (nmoraissoares@gmail.com) on 2016-08-01T15:30:03Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2011_dis_jmaalencar.pdf: 450822 bytes, checksum: 81c939f6286bffdd6e44ed9ba0e39500 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-01T15:30:03Z (GMT). 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The samples were tested according to the concentrations of fructose, glucose, total cholesterol and total protein. In this study, semen parameters were affected significantly (p <0.05) by sampling month, despite the presence of heat stress. In the evaluation of semen parameters was found that the color of the ejaculates was pearly white representative of good semen quality. Regarding the aspect, the best results were found in ejaculates with cream-milky appearance. With regard to biochemical characteristics, the aspect of the ejaculate significantly (p <0.05) only the concentrations of fructose and glucose. Significant differences in concentrations of fructose among the different months of the year. Glucose was identified as a constituent, usually found in the PS. Significant differences in concentrations of fructose among the different months of the year. Glucose was identified as a constituent, usually found in the PS. The study of the Pearson correlations showed significant associations (low and moderate) positive and negative differences between the semen parameters and biochemical. In this study we found a negative correlation with sperm concentration of fructose. The results showed that rabbits show created in Northeastern Brazil are perfectly adapted, as seminal and biochemical characteristics have normal, despite the existence of heat stress. / Objetivou-se por meio deste estudo caracterizar a composição bioquímica do plasma seminal e dos parâmetros seminais de coelhos criados no NE do Brasil, identificando ainda as variações que possam ocorrer ao longo do ano. O experimento foi conduzido nas instalações do Setor de Cunicultura do Departamento de Zootecnia/UFC. O índice de conforto térmico dentro da instalação foi calculado de acordo com a fórmula do ITU, modificada para coelhos. Foram utilizados 20 coelhos da raça Nova Zelândia Branca, criados em sistema flat-deck, alimentados com ração comercial. Os ejaculados foram coletados duas vezes por semana (outubro/2009 a setembro/2010), utilizando-se uma vagina artificial. Em seguida, os ejaculados foram avaliados quanto ao volume, cor, aspecto, vigor, motilidade e concentração espermática, após foram centrifugados e o PS (plasma seminal) foi removido e acondicionado em tubos eppendorfs a -18 oC. Para realização das análises bioquímicas foi feito um pool mensal de PS de cada animal, onde foram avaliadas as concentrações de glicose, frutose, colesterol total e proteínas totais. Neste estudo, os parâmetros seminais foram influenciados significativamente (p<0,05) pelo mês de coleta, independente da existência de estresse pelo calor. Na avaliação dos parâmetros seminais pela cor foi verificado que os ejaculados de cor branca perolada foram representativos da boa qualidade do sêmen. Quanto ao aspecto, os melhores resultados foram encontrados nos ejaculados com aspecto cremo-leitoso. No que se refere às características bioquímicas, o aspecto do ejaculado influenciou significativamente (p<0,05) somente as concentrações de frutose e glicose. Foram constatadas diferenças significativas das concentrações de frutose entre os diferentes meses do ano. A glicose foi identificada como um constituinte, comumente encontrada no PS. A concentração de colesterol total no PS de coelhos no presente experimento foi mais baixa que o encontrado por outros autores. O estudo das correlações de Pearson demonstrou associações significativas (baixas e moderadas), positivas e negativas entre os parâmetros seminais e os bioquímicos. Os parâmetros bioquímicos apresentaram correlações entre si. Nesse estudo foi encontrada correlação negativa da concentração espermática com a frutose. Os resultados permitiram concluir demonstram que os coelhos criados no nordeste do Brasil são perfeitamente adaptados, pois apresentam características seminais e bioquímicas normais, apesar da existência de estresse térmico.

LIMA, Ítalo Cordeiro Silva. Variações no perfil protéico e atividade antioxidante do plasma seminal e funções espermáticas associadas a potenciais condições de estresse térmico em bodes Saanen criados no nordeste do Brasil. 2011. 83 f. Dissertação (Mestrado em zootecnia)- Universidade Federal do Ceará, Fortaleza-CE, 2011. / Submitted by Elineudson Ribeiro (elineudsonr@gmail.com) on 2016-05-17T18:41:08Z No. of bitstreams: 1 2011_dis_icslima.pdf: 2495125 bytes, checksum: 82112abd4ca9920d12fcde85953e03f6 (MD5) / Approved for entry into archive by José Jairo Viana de Sousa (jairo@ufc.br) on 2016-05-27T20:01:46Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2011_dis_icslima.pdf: 2495125 bytes, checksum: 82112abd4ca9920d12fcde85953e03f6 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-05-27T20:01:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2011_dis_icslima.pdf: 2495125 bytes, checksum: 82112abd4ca9920d12fcde85953e03f6 (MD5) Previous issue date: 2011 / Seminal plasma proteins are involved in the regulation of different mechanisms associated with reproductive physiology. Thus, the present study was designed to investigate the protein profile and determine variations on catalase (CAT) and superoxide dismutase (SOD) antioxidant activity on seminal plasma from Saanen goats raised under tropical conditions, in different periods of the year. Semen from eight goats was collected along 12 months (during dry and wet seasons and transition periods), seminal plasma was obtained through by centrifugation and submitted to 2-D electrophoresis, as well as analyses of catalase (CAT) and superoxide dismutase (SOD) antioxidant activity. Gels were stained with colloidal Coomassie blue, scanned and analyzed using tools of the PDQuest software. Data were analyzed using randomized block designs to evaluate possible variations in the protein profile and antioxidant activity. Intensity of 34 spots of protein maps was significantly different among periods of the year. From these 34 spots, 19 spots were different between the dry and rainy periods. The expression of protein spots with values of kDa and pI similar to heat-shock protein (70 kDa), glutamate carboxypeptidase and arylsulfatase A proteins was higher during the dry period in comparison to rainy season, while the clusterin showed more intensity in the rainy period. The SOD antioxidant activity was higher in the seminal plasma (p<0.05) during the rainy/dry transition in comparison to rainy period. Also, CAT activity was lower in the rainy when compared to dry period. Considering the results obtained in the present study, we conclude that protein profile and antioxidant activity in the seminal plasma from Saanen goat breed raised under tropical conditions varies throughout the year, given that we observed more intensity of seminal plasma proteins and CAT activity in the period with higher environmental temperatures (dry/rainy transition and dry), coincident with decrease in the semen quality. / As proteínas do plasma seminal participam da regulação de diversos processos associados à fisiologia reprodutiva. Neste sentido, o presente estudo tem por objetivo avaliar as variações do perfil protéico e determinar se ocorrem mudanças na atividade das enzimas antioxidantes catalase (CAT) e superóxido dismutase (SOD) no plasma seminal de caprinos Saanen criados em clima tropical, em diferentes períodos do ano. Amostras de sêmen de oito caprinos Saanen foram coletadas ao longo de 12 meses e o plasma seminal foi obtido através de centrifugação e submetido à eletroforese bidimensional. Os géis foram corados com Coomassie coloidal, digitalizados e analisados por meio do aplicativo PDQuest. A atividade antioxidante da CAT e da SOD também foi determinada no plasma seminal. Avaliou-se as variações ao longo do ano no perfil protéico e atividade enzimática antioxidante através de delineamento em blocos casualizados. Diferenças significativas foram observadas com relação às intensidades de 34 “spots” dos mapas protéicos entre os períodos do ano. Dentre desses “spots”, verificou-se maior número de “spots” que diferiram entre os períodos seco e chuvoso, num total de 19 “spots”. A expressão de “spots” protéicos com valores de kDa e pI equivalente ao das proteínas “heat-shock protein” 70 kDa, glutamato carboxipeptidase e arilsulfatase A foi maior no período seco em comparação ao chuvoso, enquanto que a clusterina apresentou maior intensidade no período chuvoso. A atividade enzimática da SOD foi maior no plasma seminal (p < 0,05) no período de transição chuvoso-seco em comparação com o período chuvoso. Verificou-se também menor atividade da CAT no período chuvoso quando comparado ao período seco. Considerando o conjunto de resultados obtidos no presente estudo, conclui-se que as características seminais, perfil protéico e atividade de enzimas antioxidantes do plasma seminal de caprinos Saanen criados em clima tropical variam ao longo do ano, sendo registrada a maior intensidade das proteínas do plasma seminal e atividade da catalase no período de maior temperatura ambiente (transição seco-chuvoso e seco), coincidente com reduções na qualidade seminal.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:11Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2005Bitstream added on 2014-06-13T20:06:43Z : No. of bitstreams: 1 martins_mim_dr_botfmvz.pdf: 654492 bytes, checksum: 1d5819008ce5f3cbd81c7a81087be0c9 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Em climas temperados, variações sazonais na reprodução em cães têm sido reportadas, entretanto, em condições tropicais essa influência não tem sido estudada. O objetivo desse trabalho foi avaliar se as modificações ambientais, da Região Sudeste do Brasil, exercem efeitos sobre a função testicular. Neste estudo foram utilizados 8 cães adultos, com idade entre 1,2 a 6 anos, de três raças (1 Blood Hound, 2 Golden Retrivier, 4 Springer Spaniel), em atividade reprodutiva, de um mesmo canil, num período de 14 meses. Colheitas de sêmen foram realizadas quinzenalmente. O ejaculado foi imediatamente avaliado quanto à motilidade e vigor espermático, pH, concentração e morfologia dos espermatozóides. Após a centrifugação, o pellet foi ressuspendido e submetido a congelação. No plasma seminal foram determinadas as concentrações de proteínas totais, sódio, potássio, cálcio, magnésio e cloretos totais. A eletroforese SDS-PAGE foi realizada utilizando-se géis de poliacrilamida nas concentrações de 12 e 18%. Os géis foram corados com Coomasie azul brilhante R-250, as imagens digitalizadas e os pesos moleculares e a densidade óptica integrada estimada. Amostras de sangue foram obtidas a cada 15 dias, sempre no período da manhã, entre 8:30 e 11:30 h. As dosagens séricas de testosterona total foram determinadas por radioimunoensaio (RIA) em fase sólida. Foram realizadas mensurações de próstata e testículos. Os dados referentes às variações de temperatura ambiente (°C) e índice pluviométrico (mm3) foram obtidos no CIIAGRO. A variação de temperatura, nesse período, foi de 9ºC a 32,8ºC, e o índice pluviométrico de 26 mm3 a 476 mm3. A concentração média de testosterona nos animais foi de 131,65 ng/dL a 213,17 ng/dL, com uma grande variação individual. Houve uma queda acentuada no verão de 2003, onde a temperatura e a umidade foram altas... / In temperate zones, seasonal influence on reproductive performance of male dogs has been described, but in tropical conditions it hasn't been studied. The objective of this work was to evaluate the influence of seasonality on testis function. In the study 8 adult dogs were used, with age varying between 1.2 and 6 years old, from 3 breeds (1 Blood Hound, 2 Golden Retrivier, 4 Springer Spaniel). These dogs were active studs, and they were housed in the same cannel, during 14 months. Ejaculates were collected each 15 days. Immediately after the collection, spermatic progressive motility, progressive velocity, pH and sperm morphology, were evaluated. The samples were centrifuged, the pellet re-suspended and frozen, and supernatant was evaluated for total protein, cloride, potassium, sodium, calcium and magnesium. Ultrasonic measurements of canine testis and prostate were performed. Electrophoresis was performed using 12% and 18% SDS-PAGE. The electrophoresis gel was stained with Coomasie blue brilliant R-250, scanned and analysed by a software. Molecular weight was estimated based in a standard weight. Blood collections were performed every 15 days at morning (between 8:30 and 11:30 a.m). Testosterone serum concentrations were determined by solid phase RIA (radioimmunoassay). The data from environmental temperature and pluvial index were obtained from CIIAGRO. Testosterone mean concentrations varied from 1.31 ng/mL to 2.02 ng/mL. The temperature varied from 10.2º C to 32.8º C and the pluvial index was 33 mm3 to 476 mm3. Notable individual variation was observed on testosterone serum concentrations among dogs in all seasons. There was a remarkable decrease on testosterone levels in all animals during Summer, when temperature and humidity were high. Seminal parameters before and after thawing were normal during the study...(Complete abstract click eletronic access below)

A quantificação dos componentes bioquímicos como frutose, ácido cítrico e proteína total existentes no plasma seminal de caprinos e ovinos localizados na região Centro-Oeste do Brasil é uma forma de avaliar a atividade fisiológica e bioquímica espermáticas. Estes dados servem como indicadores de prováveis problemas com os testículos e glândulas acessórias desses animais e de sua respectiva fertilidade. A frutose e o ácido cítrico são importantes para o sêmen como fonte de energia metabólica e como componente de sistema tampão, respectivamente. A frutose é um marcador da função secretora das vesículas seminais, e é um componente importante para a sobrevivência dos espermatozóides em condições anaeróbicas e está estreitamente relacionada com a motilidade inicial das células espermáticas. Sendo assim, os objetivos do presente projeto foram analisar quantitativamente esses componentes do plasma seminal de bodes e carneiros sob latitude 20&deg;31\'S em quatro épocas do ano e purificar, através de técnicas cromatográficas, a enzima fosfolipase A2, importante proteína presente no plasma seminal. As análises bioquímicas foram feitas usando-se um espectrofotômetro UV/Vis para obtenção da curva padrão e para a determinação das concentraçõoes mensais e da concentração anual média dos constituintes analisados. A purificação da PLA2 foi feita por cromatografia líquida preparativa usando-se como fase estacionária a coluna Superdex 75-16/60 (GE HealthCare) de exclusão por tamanho e membranas semipermeáveis de 10 e 30 kDa. Como resultado das análises bioquímicas, obteve-se a concentração anual média de proteínas totais de 3,27 &plusmn; 0,60 g/dL para ovinos e de 5,02 &plusmn; 0,43 para caprinos, ácido cítrico de 1015,33 &plusmn; 66,50 µg/mL para ovinos e de 1584,35 &plusmn; 143,90 µg/mL para caprinos e frutose de 23,40 &plusmn; 4,80 mg/dL para ovinos e 72,73 &plusmn; 18,50 mg/dL para caprinos. Os resultados mostraram que a PLA2 extraída do plasma seminal de ovinos tem massa molecular próxima de 13,8 kDa e a PLA2 do plasma seminal de caprinos tem massa molecular próxima a 12,8 kDa. / Quantification of biochemical components in seminal plasma including fructose, citric acid and total protein of goat and sheep of the Midwest region of Brazil is one way of evaluating the biochemical and physiological activity of the sperm. These data serve as indicators of potential problems with the testicles and accessory glands of these animals and their relative fertility. The fructose and citric acid are important for the semen as a source of metabolic energy and as a component of a buffer, respectively. Fructose is a marker of secretory function of seminal vesicles, important for the survival of spermatozoa under anaerobic conditions, and is closely related to the initial motility of sperm cells. Therefore, the objectives of this project were to quantitatively analyze these components in the seminal plasma of goats and sheep in latitude 20&deg;31\'S 3 1\'S in four seasons and purify by chromatographic techniques the enzyme phospholipase A2, an important protein in the seminal plasma. Biochemical analysis were done using a spectrophotometer UV / Vis to obtaining the standard curve and to determine the monthly and annual average concentration of the constituents analyzed. The purification of PLA2 was performed by preparative liquid chromatography using the column as stationary phase Superdex 75-16/60 (GE HealthCare) by size exclusion and semipermeable membranes 10 and 30 kDa. As a result of biochemical analysis, we obtained the annual average concentration of total protein of 3,27 &plusmn; 0,60 g / dL for sheep and 5,02 &plusmn; 0,43 g/dL for goats, citric acid of 1015,33 &plusmn; 66, 50 g / mL for sheep and 1584,35 &plusmn; 143,90 g / mL for goats and fructose 23,40 &plusmn; 4,80 mg / dL for sheep and 72,73 &plusmn; 18,50 mg / dL for goats. The results showed that the PLA2 extracted from seminal plasma of sheep has a molecular mass of 13,8 kDa and the next PLA2 from goat seminal plasma has a molecular mass close to 12,8 kDa.

Submitted by Suzane Peres Campanholi null (supc@hotmail.com) on 2016-06-02T21:33:16Z No. of bitstreams: 1 Dissertação Mestrado Suzane - Versão final pro repositório UNESP.pdf: 1223510 bytes, checksum: 26ebdc009120ee189335639e58233246 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Paula Grisoto (grisotoana@reitoria.unesp.br) on 2016-06-06T16:46:24Z (GMT) No. of bitstreams: 1 campanholi_sp_me_jabo.pdf: 1223510 bytes, checksum: 26ebdc009120ee189335639e58233246 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-06T16:46:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 campanholi_sp_me_jabo.pdf: 1223510 bytes, checksum: 26ebdc009120ee189335639e58233246 (MD5) Previous issue date: 2016-02-26 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O plasma seminal já foi descrito como benéfico e ao mesmo tempo prejudicial aos espermatozoides e isto está relacionado com o tempo de contato entre eles. A criopreservação do sêmen em touros pode ser prejudicada por exposição contínua dos espermatozoides ao plasma seminal (PS) e a aplicação de métodos para sua remoção pode aumentar a qualidade dos espermatozoides recuperados pós-descongelação, melhorando os resultados de biotécnicas que utilizam sêmen criopreservado. Pelo fato da centrifugação causar muitos danos aos espermatozoides, a filtragem com Sperm Filter® apresenta-se como um novo método de remoção do PS que almeja melhores resultados, porém não foi encontrado relato da sua aplicação em bovinos até o momento. O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito dos métodos de centrifugação e filtragem com Sperm Filter® sobre a criopreservação do sêmen bovino. Para isso, o sêmen de 38 touros Nelore foi colhido por eletroejaculação. Após a colheita, o sêmen foi fracionado em três alíquotas iguais para divisão em três grupos: controle (N), em que o sêmen foi diluído com PS; centrifugação (C), em que o PS foi removido por centrifugação a 600 X g por 10 minutos; e filtragem (F), em que o PS foi removido por filtragem com Sperm Filter®. As amostras foram criopreservadas, e pós-descongelação foram avaliados a cinética espermática, a integridade das membranas plasmática e acrossomal, o potencial mitocondrial, o estresse oxidativo e a capacidade fecundante através da produção in vitro de embriões (PIVE). Com relação à cinética, maiores valores da velocidade do trajeto (P = 0,0005) e velocidade progressiva (P = <0,0001) foram observados nos grupos C e F e os parâmetros frequência de batimento, retilinearidade e linearidade foram superiores no grupo F (P = 0,0008; P = 0,0133 e P = 0,0005, respectivamente). A integridade de membrana foi prejudicada pela centrifugação e filtragem do sêmen (P < 0,0001), porém o estresse oxidativo foi reduzido com esses métodos de remoção do PS (P < 0,0001). Na PIVE, as maiores taxas de desenvolvimento embrionário (blastocistos e blastocistos eclodidos) foram observadas no grupo N e F (P = 0,008 e P = 0,0042, respectivamente). Portanto, a remoção do plasma seminal pelo método da centrifugação reduz a qualidade do sêmen criopreservado bovino, interferindo negativamente na fertilidade dos espermatozoides e o método da filtragem com Sperm Filter® apresentou melhor resultado evidenciado por altas taxas de desenvolvimento embrionário. / Seminal plasma has been described as beneficial and harmful to the spermatozoa and this is related to the contact time between them. Cryopreservation of semen from bulls can be undermined by continuous exposure of sperm to the seminal plasma (SP) and the application of methods for removal can increase the quality of post-thaw sperm recovered, improving fertilization. Centrifugation cause a lot of damage to sperm and filtering with Sperm Filter® is a new SP removal method that aims to better results, but has not yet been applied in bull. The aim of this study was to evaluate the effect of the methods of centrifugation and filtering with Sperm Filter® on cryopreservation of bovine semen. For this, semen of 38 Nelore bulls was collected by electroejaculation. Semen was fractioned into three equal aliquots for division into three groups: control (N), wherein the semen was diluted with SP; centrifugation (C), in which the SP was removed by centrifugation at 600 X g for 10 minutes; and filtration (F), in which the SP was removed by filtration with Sperm Filter®. Samples were cryopreserved and was evaluated after thawing sperm kinetics, the integrity of plasma and acrosomal membranes, mitochondrial potential, oxidative stress and the fertilizing capacity by in vitro embryo production (IVP). The kinetics, higher values of the path velocity (P = 0.0005) and progressive speed (P = <0.0001) were observed in the groups C and F and the beat frequency parameters, straightness and linearity were higher in group F (P = 0.0008, P = 0.0133 and P = 0.0005, respectively). Membrane integrity was impaired by centrifugation and filtration of semen (P <0.0001), though oxidative stress was reduced with these SP removal methods (P <0.0001). In IVP, the highest rate of embryonic development (blastocyst and hatched blastocyst) were observed in the C and F group (P = 0.008 and P = 0.0042, respectively). Therefore, removal of seminal plasma by the method of centrifugation reduces the quality of semen cryopreserved cattle, a negative effect on fertility of sperm, and the method of filtering with Sperm Filter® showed better results evidenced by high rates of embryonic development.