Doctor en Farmacología / Autorizada por el autor, pero con restricción para ser publicada a texto completo en el Portal de tesis, hasta enero de 2017 / La Serotonina (5-HT) es un neurotransmisor detectado tempranamente durante el desarrollo del sistema nervioso central y recientemente se ha descrito su papel sobre los procesos de migración y morfología neuronal. Mediante la inhibición farmacológica de la síntesis de 5-HT durante el desarrollo embrionario, se ha determinado que la reducción en este neurotransmisor produce efectos a largo plazo reflejado en una disminución del peso del cerebro, alteración en la maduración neuronal y una disminución de la complejidad dendrítica. La 5-HT ejerce sus acciones a través de sus receptores ionotrópicos (5HT3) y metabotrópicos (5HT1, 5HT2, 5HT4-5HT7). Algunos de ellos se expresan tempranamente durante el desarrollo embrionario y más aún puede variar su distribución y/o niveles en forma dinámica durante el desarrollo pre y posnatal. Para efectos de esta Tesis se destacan los receptores 5HT1A y 5HT7 los cuales están presentes en estructuras cerebrales como el hipocampo. Interesantemente, el 5HT1A-R se expresa tempranamente durante el desarrollo embrionario; por lo cual se postula que la 5-HT tendría un efecto modulador sobre la migración, diferenciación y viabilidad celular. En cambio, solo se ha descrito una expresión dinámica del 5HT7-R durante el desarrollo posnatal; lo que sugiere una acción de este receptor en estadíos bien definidos. La sobre-expresión de los receptores serotoninérgicos 5HT1A y 5HT7 en líneas celulares, ha permitido estudiar su acoplamiento a distintas cascadas transduccionales. Se ha descrito el acoplamiento a diversas proteínas G que permiten la activación o inhibición de proteínas efectoras como AC, fosfolipasas, regulación de canales iónicos y activación de las vías MAPK y PI3K-Akt, entre otras. Estas vías participan promoviendo la formación de neuritas y dendritas y han sido involucradas con la regulación de la plasticidad sináptica. En contraste, los efectores de estos receptores descritos en líneas celulares no han sido bien definidos en neuronas. Si bien existen algunos antecedentes que apoyan la idea de que la 5-HT regula la morfología neuronal, no se ha establecido la participación de un subtipo de receptor en particular. La activación del 5HT1A-R induce un aumento en el número y largo de neuritas en neuroblastoma de ratón. En relación a estos cambios morfológicos, se ha descrito que la vía de las Rho GTPasas regula el citoesqueleto a través de la modulación de la cofilina, importante regulador del citoesqueleto de actina. Se ha demostrado un acoplamiento entre el 5HT7-R y Gα12 y el aumento del crecimiento de neuritas en neuronas hipocampales, aunque no se ha dilucidado cuáles son sus efectores río abajo. De acuerdo a estos antecedentes se postuló la siguiente hipótesis: “Agonistas de los receptores 5HT1A y 5HT7 activan vías transduccionales que modulan el citoesqueleto, efectos que se asocian a cambios morfológicos de neuronas hipocampales en cultivos”. Los objetivos fueron: 1) Determinar en neuronas hipocampales con distinta madurez, el efecto de agonistas de los receptores serotoninérgicos 5HT1A y 5HT7 sobre proteínas que participan en vías transduccionales, que tienen como blanco el citoesqueleto de microtúbulos y de actina, como Akt-GSK-3β, ERK y cofilina, respectivamente. 2) Determinar el efecto de agonistas de los receptores serotoninérgicos 5HT1A y 5HT7 sobre la morfología de neuronas hipocampales con distinta madurez. Estos objetivos se desarrollaron utilizando antagonistas específicos para los receptores 5HT1A (WAY-100635) y 5HT7 (SB269970). En esta tesis se demostró que la distribución del receptor 5HT1A experimenta una polarización a mayor madurez del cultivo, encontrándose tempranamente en el soma y más tardíamente con una localización somato-dendrítica, sin variar el nivel del receptor. En contraste, la distribución somato-dendrítica del 5HT7-R fue independiente de la madurez del cultivo. A su vez, se detectaron las isoformas 5HT7a-R y 5HT7b-R y cuya relación no varió durante los días del cultivo in vitro (DIV). No obstante, ambas isoformas aumentan significativamente entre los 2 y 14 DIV. El 8OH-DPAT, agonista de los receptores 5HT1A (Ki 10 nM) y 5HT7 (Ki 52 nM), promueve la activación de la vía Akt-GSK-3β a los 2 DIV, efecto que involucraría la participación del 5HT7-R y, probablemente al 5HT1A-R. Adicionalmente, el 8OH-DPAT en neuronas más maduras (7 DIV), aumentó la activación de la Akt, efecto independiente de los receptores 5HT1A y 5HT7. Estos resultados sugieren que este agonista puede activar a otros receptores, lo que plantea una reevaluación de su acción como agonista selectivo del 5HT1A. Por otra parte, a pesar de la activación de la Akt, no se observaron cambios en la fosforilación de la GSK-3β, sugiriendo una disociación de ambas quinasas a este estadío. Adicionalmente, el 8OH-DPAT ó la 5-HT no modificaron significativamente el estado de fosforilación de las ERK1/2. La estimulación durante 24 horas con 8OH-DPAT en neuronas con 2 DIV aumentó significativamente el número de las neuritas primarias, acompañado de un aumento en el largo neurítico total; efectos no asociados a los receptores 5HT1A y 5HT7. Estos resultados sugieren que el 8OH-DPAT activa un receptor que incrementa el número de neuritas sin afectar su largo. Interesantemente, se observó que la estimulación con 8OH-DPAT disminuyó significativamente la fosforilación inactivante de la cofilina en Ser3; efecto insensible a la acción de los antagonistas de los receptores 5HT1A y 5HT7. Similarmente, a los 7 DIV se observó una disminución significativa de los niveles fosforilados de cofilina luego de la estimulación con 5-HT, efecto no asociado a los receptores 5HT1A y 5HT7, sugiriendo la participación de un receptor serotoninérgico desconocido sobre la dinámica de actina. Adicionalmente, la activación del 5HT7-R con 8OH-DPAT y 5HT a los 2 DIV durante 24 h disminuye el número de las dendritas primarias pero promueve el crecimiento. A este mismo estadío neuronal, la 5-HT a través de 5HT1A-R y 5HT7-R aumentó el crecimiento de dendritas secundarias. Por otro lado, se demostró a los 8 DIV que la 5-HT aumenta el número de dendritas primarias más cortas a través de un receptor serotoninérgico desconocido. Adicionalmente, los cambios inducidos por la 5-HT a los 8 DIV, indican que el 5HT1A-R promueve una reducción en el largo de las dendritas primarias, fenómeno observado por la reducción en el número de las dendritas primarias más largas (> 40 μm); efecto también observado en las secundarias más largas (> 20 μm). En apoyo, el análisis de Sholl muestra una disminución de la complejidad neuronal asociada a este receptor. Es decir, el 5HT1A-R inhibe el crecimiento y la complejidad dendrítica, probablemente al frenar el crecimiento o elongación de éstas, quedando por establecer los mecanismos moleculares asociados. En apoyo a este hallazgo, se ha descrito recientemente en hipocampo de ratón adulto que el 5HT1A-R produce una disminución de las dendritas terciarias. En contraste, a los 8 DIV el 5HT7-R promueve un aumento del crecimiento de dendritas primarias y secundarias, siendo este último efecto también observado por la estimulación del 5HT1A-R. En resumen, el 5HT1A-R promueve una disminución de la complejidad dendrítica, en contraste al efecto positivo de la activación del 5HT7-R observado a nivel de las neuritas y dendritas; sugiriendo que estos receptores pueden modular la morfología neuronal de forma diferencial dependiendo de la madurez del cultivo. Además, por primera vez se involucra la participación de los receptores 5HT1A y 5HT7 sobre la morfología neuronal en cultivo primario de hipocampo de rata. Además, este estudio muestra los efectos de agonistas serotoninérgicos sobre vías transduccionales relacionadas a la modulación del citoesqueleto y cambios en la morfología que depende de la madurez de neuronas hipocampales. / Serotonin (5-HT) is a neurotransmitter found early during development of the central nervous system and recently it has been involved in cell migration and neuronal morphology. The pharmacological inhibition of 5-HT synthesis during embryonic development suggests that its reduction produces long-term effects reflected as decreased brain weight, altered neuronal maturation and reduction of dendritic complexity. The 5-HT exerts its actions through ionotropic (5HT3) and metabotropic (5HT1, 5HT2, 5HT4-5HT7) receptors. Some of these receptors are expressed early during embryonic development and their distribution or levels can change dynamically during pre-and postnatal development. This thesis focuses on 5HT1A and 5HT7 receptors, which are present in brain structures such as the hippocampus. Interestingly, the 5HT1A-R is expressed early during embryonic development, suggesting that 5-HT could have a modulating effect on cell migration, differentiation and viability. In contrast, a dynamics expression of 5HT7-R has been described during postnatal development, suggesting a role in well-defined neuronal stages. Overexpression of 5HT1A and 5HT7 serotonin receptors in cell lines has allowed studying their coupling to several transduction pathways. These receptors are coupled to several G protein allowing the activation or inhibition of effector proteins such as AC, phospholipases, regulation of ion channels and activation of MAPK and PI3K-Akt, among others. These pathways promote neurites and dendrites formation, and have been implicated in the regulation of synaptic plasticity. In contrast, the effectors of these receptors described in cell lines have not been well defined in neurons. Although some evidences support the idea that 5-HT regulates neuronal morphology, it has not been established which serotonergic receptors are involved. The 5HT1A-R activation induces an increase in both the number and length of neurites in mouse neuroblastoma. In relation to these morphological changes, it has been described that Rho GTPases pathway regulates the cytoskeleton through the modulation of cofilin, an important regulator of actin dynamics. Additionally, a link between 5HT7-R, activation of Gα12 and the increase of neurite outgrowth in hippocampal neurons has been described, but it has not been elucidated the transduction pathway involved. According to these evidences, the following hypothesis was proposed: “Agonists of 5HT1A and 5HT7 receptors activate pathways that modulate the cytoskeleton, effects that are associated with morphological changes in cultured hippocampal neurons." The aims were to: 1) Determine, the effect of 5HT1A-R and 5HT7-R agonist on proteins involved in transduction pathways, targeting microtubule and actin cytoskeleton like Akt-GSK- 3β, ERK and cofilin, respectively, on hippocampal neurons with different maturity. 2) Determine the effect of 5HT1A-R and 5HT7-R agonist on morphology of hippocampal neurons with different maturity. These objectives were developed using specific antagonists of 5HT1A (WAY-100635) and 5HT7 (SB269970) receptors. In this thesis it was shown that the distribution of 5HT1A receptor undergoes a polarization during the maturity of neurons, being early found in the soma and late with a somato-dendritic distribution but without changes on receptor levels. In contrast, the somato-dendritic distribution of 5HT7-R was independent of neuronal maturity. Besides, the isoforms “a” and “b” of 5HT7-R were detected without changes in their ratio during days in vitro (DIV). Nonetheless, both isoforms increased significantly from 2 to 14 DIV. The 8OH-DPAT, a 5HT1A (Ki 10 nM) and 5HT7 (Ki 52 nM) receptor agonist, promotes the activation of the Akt-GSK-3β pathway at 2 DIV, effect which involves the participation of 5HT7-R and probably the 5HT1A-R. Additionally, in more mature neurons (7 DIV) stimulation with 8OH-DPAT increased activation of Akt, an effect independent of 5HT1A and 5HT7 receptors. These results suggest that this agonist may activate other receptors, and hence demands a reconsideration of its action as selective 5HT1A agonist. Moreover, in spite of Akt activation, no changes were observed in the phosphorylation levels of GSK-3β, suggesting dissociation of both kinases at this stage. Additionally, neither 8OH-DPAT nor 5-HT altered the phosphorylation levels of ERK1/2. Stimulation for 24 hours with 8OH-DPAT at 2 DIV significantly increased the number of primary neurites, accompanied by an increase in the overall length of neurites; effects which are not related to 5HT1A and 5HT7 receptors. These evidences suggest that 8OH-DPAT targets an unknown receptor whose activation increases the number of neurites without affecting their length. Interestingly, it was observed that stimulation with 8OH-DPAT significantly decreased the inactivating phosphorylation of cofilin in Ser3; an effect insensitive to the antagonists of the 5HT1A and 5HT7 receptors. Similarly, a significant decrease of phosphorylated cofilin levels after stimulation with 5-HT was observed at 7 DIV; effect not associated to 5HT1A and 5HT7 receptors, suggesting the participation of an unknown serotonin receptor modulating actin dynamics. Additionally, the 5HT7-R activation with 8OH-DPAT and 5-HT at 2 DIV during 24 h decreases the number of primary dendrites but promotes its growth. At this neuronal stage, 5-HT stimulates secondary dendrite growth through both 5HT1A-R and 5HT7-R. Furthermore, this thesis demonstrated at 8 DIV that 5-HT increases the number of short primary dendrites via an unknown serotonergic receptor. Additionally, the changes induced by 5-HT at 8 DIV, indicate that 5HT1A-R promotes a reduction in the length of the primary dendrites, a phenomenon observed as reduction in the number of longer primary dendrites (> 40 um); effect also observed in longer secondary dendrites (> 20 um). In accordance, Sholl analysis shows a decrease in neuronal complexity associated with this receptor. Thus, 5HT1A-R inhibits primary dendritic growth and complexity, probably by slowing the growth or elongation, and the molecular mechanisms associated remains to be explained. In support of this finding, it has been recently described in adult mouse hippocampus, that 5HT1A-R promotes a decrease of tertiary dendrites. In contrast, this Thesis described that 5HT7-R induces an increased growth of primary and secondary dendrites at 8 DIV; being the latter effect also observed by 5HT1A-R stimulation. To summarize, the 5HT1A promotes a reduction of dendritic complexity in contrast to the positive effect of 5HT7 receptors observed in both neurites and dendrites; suggesting that these receptors differentially modulate the neuronal morphology depending on neuron maturity. Furthermore, we described for first time the participation of 5HT1A and 5HT7 on neuronal morphology in primary culture of rat hippocampal neurons. Additionally this study shows the effects of serotonergic agonists on transduction pathways related to cytoskeleton modulation and morphological changes depending on maturity of hippocampal neurons. / Conicyt

Submitted by Felipe Lapenda (felipe.lapenda@ufpe.br) on 2015-03-16T13:44:17Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) DIssertação Isabeli corrigida pretext.pdf: 929080 bytes, checksum: 12855f890850670d671974b1c5f7a8f5 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-16T13:44:17Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) DIssertação Isabeli corrigida pretext.pdf: 929080 bytes, checksum: 12855f890850670d671974b1c5f7a8f5 (MD5) Previous issue date: 2013 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico ; Fundação de Amparo à Ciência e Tecnologia de Pernambuco / A serotonina atua na regulação de eventos biológicos envolvidos no desenvolvimento precoce do sistema nervoso. Neste período crítico o aumento dos níveis encefálicos deste neurotransmissor pode alterar componentes do sistema serotoninérgico, como o transportador de serotonina. Os inibidores seletivos da recaptação de serotonina bloqueiam o transportador e aumentam a quantidade de serotonina extracelular. O aumento farmacologicamente induzido neste período é capaz de gerar alterações funcionais e estruturais permanentes ao sistema nervoso. Este estudo teve como objetivo avaliar a expressão gênica do SERT e o conteúdo de 5-HT no hipotálamo de ratos manipulados com fluoxetina durante a lactação. Ratos Wistar foram divididos em dois grupos, de acordo com a manipulação farmacológica realizada do 1º ao 21º dia de vida, Salina (n=9) e Fluoxetina (n=10), compostos por filhotes que receberam, respectivamente, solução de salina (NaCl 0.9%, 10μl/g, s.c.) e fluoxetina (10mg/kg, 10μl/g, s.c.). Foram analisados: a expressão gênica do SERT realizada no hipotálamo aos 21 e 40 dias e o peso corporal foi mensurado nos dias 1, 7, 14, 21 e 40. O presente trabalho demonstrou que a manipulação neonatal com fluoxetina promoveu menor ganho de peso corporal a partir do 14º dia até o final do experimento e aumento na expressão gênica do SERT aos 40 dias. Estes resultados indicam que a manipulação neonatal crônica do sistema serotoninérgico desencadeia alterações no principal componente de controle da neurotransmissão serotoninérgica, o SERT e consequentemente no neurotransmissor serotonina.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Neurociências / Made available in DSpace on 2012-10-22T16:34:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 228770.pdf: 3534697 bytes, checksum: 22f1124a34c851a051e2b4c33968cda9 (MD5) / O presente trabalho investigou os efeitos de injeções sistêmicas de 8-OH-DPAT (agonista 5-HT1A; 0.06, 0.2, 0.6 e 2 mg/kg) e mCPP (agonista 5-HT2C/1B; 0.3, 1 e 3 mg/kg) sobre os comportamentos de ingestão hídrica e alimentar em pombos domésticos (Columba livia). As injeções foram administradas em dois períodos do ciclo claro-escuro, um período matutino (E1, 10 - 13h) caracterizado por ingestão de alimentos pequena e estável e um período vespertino (E2, 14-17 h) caracterizado por alta atividade ingestiva. Os episódios ingestivos e de comportamento de sono, alerta, locomoção, auto-limpeza e exploração foram analisados na primeira hora após a administração da droga em cada período. As injeções de 8-OH-DPAT, tanto em E1 quanto em E2, aumentaram a latência para o consumo de alimento e água e diminuíram o total ingerido após 3 e 24 horas da administração da droga, de forma dose-dependente. A análise comportamental revelou que o 8-OH-DPAT diminuiu a duração de exploração, auto-limpeza e alerta e aumentou a duração do sono na primeira hora investigada de cada período. A administração de mCPP em E1 reduziu a quantidade de alimento ingerido em 3 e 24 horas de registro, porém não se observou efeitos sobre os parâmetros ingestivos de duração, freqüência e latência dos episódios ingestivos. Em E2, as injeções de mCPP causaram diminuição na quantidade de alimento ingerido, este efeito foi acompanhado da diminuição do tempo despendido para comer na primeira hora de registro. As injeções de mCPP não alteraram a ingestão hídrica. Em todos animais tratados com mCPP ocorreu diminuição do comportamento de sono e em E1, um aumento na latência para o comportamento de alerta. O mCPP provocou movimentos orofágicos e tremores cervicais anormais mais intensos em E1 (50% dos animais tratados). Estes dados sugerem que: 1) a administração sistêmica de agonistas receptores 5-HT1A e 5-HT2C provoca hipofagia em pombos, porém, estes agonistas provocam feitos comportamentais distintos; 2) receptores 5-HT1A em pombos, estão envolvidos no controle do comportamento de sono, aumentando a duração e diminuindo a latência para o primeiro episódio deste comportamento; 3) receptores 5-HT2C participam do controle serotonérgico inibitório da ingestão de alimento; 4) a função destes receptores, assim como o observado em mamíferos, apresenta variações ao longo do dia.

A S100B é uma proteína ligante de cálcio expressa e secretada por astrócitos, e possui efeito parácrino sobre os neurônios, atuando como fator neurotrófico. Estudos clínicos sugerem que níveis plasmáticos elevados de S100B estão correlacionados positivamente com a resposta à terapia antidepressiva, particularmente quando se utilizam inibidores seletivos da recaptação de serotonina, mas este mecanismo ainda é desconhecido. Neste trabalho foi avaliada a secreção de S100B em culturas primárias de astrócitos e fatias hipocampais de ratos expostos à fluoxetina e serotonina. Foi observado um significativo aumento da secreção de S100B frente à fluoxetina, e este efeito foi aparentemente dependente de PKA. Estes dados reforçam a importância da fluoxetina, independentemente da serotonina e receptores serotoninérgicos, no tratamento antidepressivo, bem como o papel da S100B nos distúrbio depressivos. / S100B is a calcium-binding protein, produced and secreted by astrocytes, which has a putative paracrine neurotrophic activity. Clinical studies have suggested that peripheral elevation of this protein is positively correlated with therapeutic antidepressant response, particularly selective serotonin reuptake inhibitors (SSRIs); however, the mechanism remains unclear. Here, we measured S100B secretion directly in hippocampal astrocyte cultures and hippocampal slices exposed to fluoxetine and observed a significant increment of S100B release in the presence of this SSRI, apparently dependent on PKA. Moreover, we found that serotonin (possibly 5HT1A receptor) reduces S100B secretion and antagonizes the effect of fluoxetine on S100B secretion. These data reinforce the effect of fluoxetine, independently of serotonin and serotonin receptors, suggesting a putative role for S100B in depressive disorders and that other molecular targets may be relevant for antidepressant activity.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Farmacologia, Florianópolis, 2015. / Made available in DSpace on 2015-10-27T03:10:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 335658.pdf: 981343 bytes, checksum: 1c90a6747c10189aa0a563b8e6bc2dd7 (MD5) Previous issue date: 2015 / Este trabalho teve como objetivo avaliar se a 5-HT liberada durante a agregação plaquetária participa da hipotensão observada na sepse e se isto estaria relacionado a uma hiporreatividade a agentes vasoconstritores nas veias. Para isso, foram utilizados ratos Wistar machos (250 - 300 g) provenientes do Biotério Central da Universidade Federal de Santa Catarina, que foram tratados com lipopolissacarídeo (LPS) ou salina após 5 minutos dos pré-tratamentos com 5-HT, ketanserina ou veículo, administrados via intraperitoneal. Foram realizadas medidas de tensão isométrica das veias jugulares e hemograma dos ratos após 6 e 24 horas dos tratamentos. A pressão arterial e a frequência cardíaca foram avaliadas por pletismografia de cauda 3, 6, 12, 24, 36, 48 e 72 horas após os tratamentos. Nos animais pré-tratados com veículo, após 6 horas do tratamento com LPS, observamos hiporreatividade na veia jugular ao agente contrátil 5-HT e hiper-reatividade aos agentes vasodilatadores acetilcolina, nitroprussito de sódio e noradrenalina em relação ao grupo tratado com salina. Após 24 horas do tratamento com LPS nos animais pré-tratados com veículo, as respostas contráteis e relaxantes na veia jugular não foram diferentes daquelas dos animais que receberam salina, exceto para o nitroprussiato de sódio, que manteve uma resposta vasodilatadora aumentada. O pré-tratamento com 5-HT antes de LPS manteve a hiporreatividade ao agente contrátil em veia jugular após 24 horas e atenuou a hiper-reatividade à acetilcolina e à noradrenalina em 6 horas e ao nitroprussiato de sódio em 24 horas. O pré-tratamento com o antagonista de receptores da 5-HT2A, a ketanserina, preveniu a hiporreatividade à 5-HT em veia jugular após 6 horas de tratamento quando comparados aos animais que receberam veículo como pré-tratamento e também preveniu a hiper-reatividade aos agentes relaxantes observada em animais pré-tratados com veículo. O LPS causou queda na pressão arterial até 24 horas após o tratamento, acompanhada de um aumento na frequência cardíaca que ficou elevada durante toda análise (até 72 horas do tratamento). O pré-tratamento com 5-HT dificultou o reestabelecimento da pressão arterial dos animais tratados com LPS, que se manteve diminuída até 48 horas após o tratamento, também acompanhada por aumento da frequência cardíaca. A ketanserina facilitou o12reestabelecimento da pressão arterial e da frequência cardíaca dos animais tratados com LPS, que voltaram aos níveis basais 12 horas após o tratamento. O tratamento com LPS ocasionou um aumento na dosagem indireta de óxido nítrico (NO), que não foi alterada com o pré-tratamento com 5-HT, mas que foi inibido com o pré-tratamento com a ketanserina. Além disso, os animais que receberam LPS apresentaram diminuição de plaquetas, linfócitos, monócitos e aumento de granulócitos, assim como dos animais pré-tratados com 5-HT. Ketanserina foi capaz de atenuar a queda na contagem de plaquetas em 24 horas após o tratamento. Podemos concluir que a 5-HT está envolvida na hipotensão observada no choque endotoxêmico associada à hiporreatividade venosa a agentes vasopressores. Além disso, antagonistas da 5-HT como o utilizado em nosso estudo, podem amenizar esses efeitos e melhorar os parâmetros hemodinâmicos e cardiovasculares do choque endotoxêmico.<br> / Abstract : This study aimed to evaluate whether 5-HT released by platelet aggregation during sepsis contributes to hypotension observed in sepsis and if this is related to venous hyporeactivity to vasoconstrictor agents. For this, Wistar rats (250-300 g) from the Central Animal Facility of the Federal University of Santa Catarina treated with lipopolysaccharide (LPS) or saline after 5 minutes of pre-treatment with 5-HT, ketanserin or vehicle were used. Isometric tension measurements of the rat jugular veins and blood cell count were performed 6 and 24 hours after treatment. Blood pressure and heart rate measurements by tail cuff were obtained 3, 6, 12, 24, 36, 48 and 72 hours after treatment. When compared to saline treatment, 6 hours after treatment with LPS in the jugular veins from animals pretreated with vehicle, we observed decreased contractile response to 5-HT and increased relaxing responses to acetylcholine, norepinephrine and sodium nitroprusside. After 24 hours of LPS treatment in animals pretreated with vehicle, contractile and relaxant responses in the jugular vein were not different from those of animals receiving saline except for sodium nitroprusside, which maintained an increased relaxing response. Pretreatment with 5-HT maintained the hyporeactivity to the contractile agent in the jugular vein up to 24 hours after LPS treatment and decreased the hyperreactivity to acetylcholine and norepinephrine at 6 hours and to sodium nitroprusside at 24 hours after LPS treatment. Pretreatment with the 5-HT receptor antagonist, ketanserin, prevented either the decreased contraction to 5-HT and the increased relaxing responses to acetylcholine, norepinephrine and sodium nitroprusside in the jugular vein after 6 hours of LPS treatment compared with animals receiving vehicle as pretreatment. LPS caused a drop in blood pressure up to 24 hours after treatment, accompanied by an increase in heart rate that was maintained high throughout analysis (72 hours). Pretreatment with 5-HT impaired blood pressure recovery in animals treated with LPS, which remained decreased up to 48 hours after treatment, accompanied by increasead heart rate. Ketanserin improved the reestablishment of blood pressure and heart rate of the animals treated with LPS, which returned to baseline levels 12 hours after treatment. Treatment with LPS caused an14increase in plasma nitric oxide (NO) content, which was not modified by pre-treatment with 5-HT but was inhibited by pre-treatment with ketanserin. In addition, animals receiving LPS after vehicle and 5-HT as preatreatments exhibited reduced platelets, lymphocytes, monocytes and increased granulocytes. Ketanserin was able to mitigate the decline in platelet count at 24 hours after treatment. We can conclude that 5-HT from platelet aggregation in sepsis is involved in the hypotension observed in endotoxic shock associated with venous hyporeactivity to vasopressor agents. In addition, antagonists of 5-HT, as the one used in our study, may mitigate these effects and improve the hemodynamic and cardiovascular events observed in endotoxic shock.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Neurociências, Florianópolis, 2014. / Made available in DSpace on 2014-08-06T17:56:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 326166.pdf: 1571650 bytes, checksum: 6b82323678356d78eb7bb737a5107964 (MD5) Previous issue date: 2014 / O presente estudo avaliou a participação de a-adrenoceptores do núcleo mediano da rafe (NMR) de ratos saciados, nas variáveis de ingestão de alimentos e água e comportamentos não ingestivos. Os animais controle foram tratados com salina (SAL) ou adrenalina (ADR), injetados no NMR sete minutos após a injeção do veículo utilizado para solubilizar os antagonistas, propilenoglicol (PLG) ou SAL. Os animais dos grupos experimentais foram tratados com um antagonista de a-adrenoceptores, prazosina (a1, 20 ou 40nmol) ou ioimbina (a2, 20 ou 40nmol) ou fentolamina (a não seletivo, 20 ou 40nmol), seguido, sete minutos após, pela injeção de ADR ou SAL. Os comportamentos foram registrados durante 30 minutos. Os resultados indicam que a injeção de ADR, assim como o bloqueio de receptores a1 resulta em hiperfagia, por outro lado, o bloqueio de a2 ou de a1 e a2 simultaneamente não altera o comportamento ingestivo. O pré-tratamento do núcleo mediano da rafe com a prazosina, seguida da injeção de ADR, não foi capaz de causar um incremento na quantidade de alimento ingerido após cada um separadamente, embora a maior dose (40nmol) tenha reduzido a latência para iniciar o comportamento ingestivo. O pré-tratamento com a ioimbina ou com a fentolamina, seguido de ADR, bloqueou o comportamento ingestivo induzido pela ADR sozinha. O presente estudo reforça a ideia de que existe uma ativação tônica de a1-adrenoceptores no NMR, que ativa uma influência inibitória (provavelmente neurônios serotonérgicos) em áreas que controlam a ingestão de alimentos. A ADR, ao ativar receptores a2, leva a uma queda na disponibilidade de catecolamina endógena na sinapse, o que reduz a liberação de 5-HT e leva à hiperfagia.<br> / Abstract : The present study evaluated the involvement of a-adrenoceptors of the median raphe nucleus (MRN) in satiated rats, in the variables of food and water intake and non ingestive behaviours. Control animals were treated with saline (SAL) or adrenaline (ADR), injected into the MRN seven minutes after the injection of the vehicle used to solubilize the antagonists, propylene glycol (PLG) or SAL. The animals of the experimental groups were treated with an a-adrenoceptor antagonist, prazosin (a1, 20 or 40nmol) or yohimbine (a2, 20 or 40nmol) or phentolamine (non-selective a, 20 or 40nmol), followed (seven minutes after) by the injection of ADR or SAL. The behaviours were recorded for 30 minutes. The results indicate that the injection of ADR and the blockade of a1 receptors result in hyperphagia, on the other hand, blocking a2 or a1 and a2 simultaneously does not change feeding behaviour. Pretreatment of the MRN with prazosin, followed by the injection of ADR was not able to cause an increase in the amount of food ingested by each one, while the highest dose (40nmol) reduced the latency to start feeding. Pretreatment with phentolamine or yohimbine, followed by ADR blocks feeding induced by ADR itself. The present study reinforces the idea that there is a tonic activation of a1-adrenoceptors in the MRN, which activates an inhibitory influence (probably serotonergic neurons) in areas that control food intake. ADR activates a2 receptors, resulting in a decrease in the availability of endogenous catecholamines at the synapse, which reduces the release of 5-HT and leads to hyperphagia.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Neurociências, Florianópolis, 2014. / Made available in DSpace on 2015-02-05T20:13:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 327710.pdf: 2234267 bytes, checksum: 907af40758fb55dabc5fe66403e0787c (MD5) Previous issue date: 2014 / Introdução: diversos estudos demonstram que os circuitos serotonérgicos inibem a ingestão de alimentos e o sono em aves e mamíferos. A injeção intracerebroventricular (ICV) de 5-HT em pombos, entretanto, provoca efeitos diferentes: aumento na ingestão de água e na duração do sono. Nós associamos estas respostas à atuação de receptores 5-HT1A, pois a ativação destes receptores produz respostas similares. No entanto, os receptores 5-HT1A podem estar localizados no neurônio serotonérgico (autorreceptores) ou em outros neurônios (heterorreceptores). Dependendo da sua localização, a ativação destes receptores produz efeitos diferentes. Portanto, o nosso objetivo foi avaliar a participação dos receptores 5-HT1A nas respostas dipsogênica e hipnogênica provocadas pela 5-HT, na tentativa de especificar as respostas desencadeadas pela 5-HT à atuação de auto ou heterorreceptores. Métodos: os animais (pombos adultos, Columba lívia, de ambos os sexos, pesando entre 400-550 g) foram divididos em 5 grupos/experimentos diferentes. Experimento 1: 16 pombos foram divididos em dois grupos de acordo com o pré-tratamento e receberam: MM77 (antagonista de heterorreceptores 5-HT1A; 0, 23 ou 69 nmol), ou WAY100635 (WAY, antagonista de auto e heterorreceptores 5-HT1A; 0, 0,1, 0,3 ou 1 nmol) e 20 min. após foram tratados com 5-HT (50 e 150 nmol) ou 8-OH-DPAT (30 nmol; agonista de receptores 5-HT1A/7). Logo após o tratamento, o registro comportamental começou e a ingestão de alimentos foi verificada 60 min. após a última injeção. Experimento 2: 12 pombos foram divididos em 2 grupos e submetidos à cirurgia para injeção ICV (bilateral) da neurotoxina de neurônios serotonérgicos 5,7-dihidroxitriptamina (5,7-DHT, 200µg/injeção) ou de seu veículo. Após 12 dias, os animais começaram a ser testados com 5-HT (150 nmol), 8-OH-DPAT (30 nmol) ou veículo (ácido ascórbico 1% em NaCl 0,9%) com intervalo de 7 dias entre as injeções. Estes animais foram mortos 28 dias após a cirurgia e o conteúdo encefálico de 5-HT foi analisado para verificar os efeitos da lesão. Adicionalmente, nós utilizamos outros 18 animais divididos em três grupos, a) 6 animais naïve que foram mortos para servir como controle para os níveis basais de 5-HT e outros dois grupos (N: 6/grupo) que foram submetidos à cirurgia (injeção de 5,7-DHT ou do veículo) e perfundidos 12 dias após a cirurgia para verificar os efeitos da toxina sobre a densidade de neurônios serotonérgicos. Experimento 3: Secções do tronco e do hipotálamo de 6 animais não submetidos a qualquer manipulação experimental foram processados pela técnica de autorradiografia para detectar a distribuição dos sítios de ligação ao agonista tritiado [3H] 8-OH-DPAT. Experimento 4: 15 pombos com cânulas guia direcionadas ao ventrículo lateral direito foram divididos em 3 grupos e tratados com: 8-OH-DPAT (30 nmol) e tiveram livre acesso (N:5) ou foram privados de água após a injeção (N:5) e veículo (N:5). 90 min. após a injeção os animais foram perfundidos e as secções do tronco encefálico processadas para detecção da proteína Fos em neurônios serotonérgicos e não serotonérgicos, e secções do hipotálamo processadas para detectar somente a expressão da proteína Fos. Experimento 5: 10 pombos com cânulas guia direcionadas ao ventrículo lateral direito foram divididos em 3 grupos e tratados com: 5-HT (150 nmol) e tiveram livre acesso (N:5) ou foram privados de água após a injeção (N:5). 90 min. após, os animais foram perfundidos e secções contendo o hipotálamo foram processadas para a detecção da proteína Fos. Resultados: tanto a 5-HT como o 8-OH-DPAT provocaram intensa ingestão de água e aumento na duração do sono. O 8-OH-DPAT ainda aumentou a ingestão de alimento. Os efeitos ingestivos e hipnogênico dos tratamentos foram parcial ou totalmente afetados pelos antagonistas evidenciando a participação dos receptores 5-HT1A nas alterações comportamentais provocadas pela 5-HT. Entretanto, os dados farmacológicos não nos permitiram especificar entre a ação de auto ou heterorreceptores, mas indicam que a interação entre os dois receptores parece ser um importante aspecto do controle exercido pelos circuitos serotonérgicos sobre os comportamentos ingestivos. Apesar de diminuir drasticamente a densidade de neurônios serotonérgicos, a lesão não afetou as alterações provocadas pelos tratamentos o que sugere que em animais com a função serotonérgica prejudicada, receptores 5-HT1A localizados em neurônios não serotonérgicos parecem ser os responsáveis pelos efeitos dos tratamentos. Além disso, os antagonistas e a lesão dos neurônios serotonérgicos também aumentaram o sono dos animais indicando um efeito inibitório tônico dos neurônios serotonérgicos sobre o sono. Os tratamentos também aumentaram a atividade Fos em regiões hipotalâmicas ricas em receptores 5-HT1A e que parecem estar envolvidas com o controle da ingestão de alimento, dos fluídos corporais e do sono. Conclusão: As respostas dipsogênica e hipnogênica desencadeadas pela injeção de 5-HT parecem ser mediadas parcialmente tanto por auto como por heterorreceptores 5-HT1A. Aparentemente, estas respostas são mediadas por receptores 5-HT1A localizados em estruturas encefálicas (no tronco e no hipotálamo) envolvidas com o controle dos comportamentos ingestivos e de sono em aves. Nossos resultados revelaram sutis diferenças na atividade celular produzidas pela 5-HT e pelo 8-OH-DPAT que sugerem que outros receptores serotonérgicos também participam das respostas comportamentais organizadas pela 5-HT. Além disso, os resultados obtidos com a lesão sugerem que os receptores 5-HT1A parecem apresentar diferenças funcionais espécie-específicas, o que pode ser reflexo de diferentes pressões seletivas experimentadas por aves e mamíferos ao longo da evolução dos vertebrados.<br> / Abstract : Introduction: several studies have demonstrated the inhibitory role of serotonergic circuits on ingestive and sleep behaviors both in mammals and birds. Intracerebroventricular (ICV) injections of serotonin (5-HT), however, evoked oposite effects: increased water intake and sleep. We associated these responses to 5-HT1A receptors, because the activation of these receptors caused similar responses. However, the 5-HT1A receptor is located on serotonergic neurons (as autoreceptor) as well as on different neurons (as heteroreceptor), and produces different effects based on its location. Therefore, we decided to investigate the participation of 5-HT1A receptor on dipsogenic and hypnogenic 5-HT-mediated responses to try discriminate the role of auto and heteroreceptors. Methods: the animals (adult pigeons, Columba lívia, both sex, 400-550g of body weight) were divided in 5 groups. Each group represented one different experiment. Experiment 1: 16 pigeons were divided in two groups according on the antagonist used as pretreatment and were injected with: MM77 (0, 23 or 69 nmol, heteroreceptor antagonist), or WAY100635 (WAY, 0, 0.1, 0.3 or 1 nmol, 5-HT1A auto and heterorreceptor antagonist) and 20 min. afterwards injected with 5-HT (0, 50 or 150 nmol) or 8-OH-DPAT (30 nmol). The animals behaviors were registered during the first hour after the last injection and the food and water intake was evaluated at the end of this period. Experiment 2: 12 pigeons were divided in 2 groups and were stereotaxically implanted with an ICV cannula guide (bilateral) to receive the serotonergic neurotoxin 5,7-Dihydroxytryptamine (5,7-DHT, 200µg/injection) or its vehicle. Past 12 days the tests with 5-HT (150 nmol), 8-OH-DPAT (30 nmol) or vehicle (1% ascorbic acid in 0.9 NaCl) started, with seven days apart each other. These animals were killed 28 days after the surgery and the encephalic levels of 5-HT were analised to verify possible degenerative effects of 5,7-DHT. Moreover, we used other 18 animals divided in three groups, a) six naïve pigeons that were killed to be used as reference of the basal levels of 5-HT and another 2 groups that were inject with 5.7-DHT (N: 6) or its vehicle (N:6) and were perfused 12 days later to verify the 5,7-DHT effects on serotonergic neurons. Experiment 3: six naïve pigeons were killed and had their brains dissecated and brainstem and hypothalamic sections reacted by autoradiographic approach to demonstrate the distribution of 5-HT1A binding sites with the selective radioligand [3H] 8-OH-DPAT. Experiment 4: 15 pigeons with ICV cannula guide implanted were divided in three groups and treated with: 8-OH-DPAT (30 nmol) withfree (N:5) or without acess to water after the injection (N:5), and vehicle (N:5). 90 min. later the animals were perfused and brainstem sections reacted to detect Fos protein expression in serotonergic and in non-serotonergic neurons, and hypothalamic sections processed to detect Fos activation. Experiment 5: 10 pigeons with ICV cannula guide implanted were divided in three groups and treated with: 5-HT (150 nmol) with free (N:5) or without acess to water after the injection (N:5). 90 min. later the animals were perfused and hypothalamic sections processed to detect the Fos activation. Results: both 5-HT and 8-OH-DPAT evoked huge increase in water intake and sleep duration. The 8-OH-DPAT injection also produce hyperphagic responses. The ingestive and hypnogenic effects of the treatments were partially or totally inhibited by the antagonists, sugesting the participation of 5-HT1A receptors on behavioral changes produced by 5-HT. However, the pharmacologic data did not permit specify between the action of 5-HT1A auto or heteroreceptors, but indicate the interaction between these two receptors as an important aspect of serotonergic control upon ingestive behavior. Besides its impressive effects on serotonergic neurons density, the 5,7-DHT lesion did not affect the behavioral changes caused by the treatments, suggesting that in animals with anormal serotonergic function, 5-HT1A receptors located in non-serotonergic neurons seem to be related to the treatments effects. Additionally, the antagonists and the 5,7-DHT lesion increased the sleep, indicating one tonic inhibitory effect of serotonergic circuits on sleep. The treatments also increased the Fos protein activation in hypothalamic regions with high 5-HT1A binding sites density that seem to be involved with food, body fluid and sleep regulation. Conclusion: the dipsogenic and hypnogenic responses evoked by 5-HT seem to be mediated partially by both 5-HT1A auto and heteroreceptors. Apparently, these responses are regulated by 5-HT1A receptors located on encephalic (hypothalamic and brainstem) regions directly or indirectly involved with ingestive and sleep/wake cycle regulation in birds. Our results also indicate small differences in the neuronal activity evoked by 5-HT and by 8-OH-DPAT suggesting that other serotonergic receptor also participate in behavioral responses organized by 5-HT. Moreover, the results produced by 5,7-DHT lesion indicate that 5-HT1A receptors seem present specie-specific functional differences that could represent different seletive pressions experimented by birds and mammal during vertebrate evolution.

ROCHA, Nayrton Flávio Moura. Efeito sinérgico da associação entre L-triptofano e analgésicos não-opióides em modelos de nocicepção experimental em camundongos. 2013. 134 f. Tese (Doutorado em Farmacologia) – Faculdade de Medicina, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2013. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2016-03-28T11:59:01Z No. of bitstreams: 1 2013_tese_nfmrocha.pdf: 1457916 bytes, checksum: 3847f7c42bdc5f8b92cef0290a9abd1d (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2016-03-28T12:02:41Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_tese_nfmrocha.pdf: 1457916 bytes, checksum: 3847f7c42bdc5f8b92cef0290a9abd1d (MD5) / Made available in DSpace on 2016-03-28T12:02:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_tese_nfmrocha.pdf: 1457916 bytes, checksum: 3847f7c42bdc5f8b92cef0290a9abd1d (MD5) Previous issue date: 2013 / The drug combination to reach greater clinical outcomes or reduce side effects is usual practice in the managing of several morbid conditions. The current painkillers have side effects potentially dangerous that should be monitoring during its utilization. Objective: to study the interaction between L-tryptophan and non-opioids analgesics dipyrone, ketoprofen or paracetamol, by oral or intraperitoneal route, in models of nociception in mice, including the investigation about the importance of blockage of serotonergic neurotransmission as well as alfa-2, melatonin and ATP-dependent potassium channel. The interaction with kynurenic acid was analyzed too. Results: The L-tryptophan (p.o. or i.p) does not possess antinociceptive activity as solely agent but it is capable to increase central 5-HT amount. The ED50 for antinociceptive effect of dipyrone or paracetamol were ED50=128,7 mg/kg (92,78-178,6 mg/kg) e ED50=281 mg/kg (204,1 – 387,0 mg/kg), respectively. The oral co-treatment (on the same administration) with L-triptophan in the proportion (weight/weight) 1:1,4 with dipyrone and 1:1,5 with paracetamol decrease with significance the ED50 to 33,30 mg/kg (28,05 – 39,54 mg/kg)* and 50,99 mg/kg (41,96 – 61,96 mg/kg)*, respectively. The previous intraperitoneal treatment with L-tryptophan (defined here as combined treatment) reduces the ED50 for analgesic effect of dipyrone (in the proportions of 1:1 and 1:2), paracetamol (1:4,12) or ketoprofen (5,7:1), to 30,90 mg/kg (23.10-43,56 mg/kg)* e 18,07 mg/kg (13,25- 24,67 mg/kg )*, 47,30 mg/kg (34.00 - 65.82 mg/kg)* e 2,09 mg/kg (1,355-3,224 mg/kg)*, respectively compared to solely treatment with dipyrone ED50=91,20 mg/kg (77.39 - 95.78 mg/kg ), Paracetamol ED50=96,18 mg/kg (76.23 - 121.3 mg/kg) or Cetoprofeno= 10,25 mg/kg (6,729 to 15,61mg/kg) on the abdominal writhing test induced by acetic acid. The treatment with L-tryptophan increases the central concentration of serotonin, but not influence the concentrations of noradrenaline or dopamine. L-tryptophan 25 or 50 mg/kg does not influence the concentration of cortical amount of glutamate. However, the combined treatment i.p. with non-effective doses of dipyrone and paracetamol reduces the concentration of this neurotransmitter. The combined treatment of L-tryptophan with non antinociceptive doses (i.g.) dipyrone and paracetamol exhibited antinociceptive effect in the formalin-induced licking test in both phases. The combination of L-tryptophan and dipyrone (i.p.) was effective when tested against the test nociception induced by capsaicin, but the association with paracetamol failed this test. Blockage of 5-HT synthesis by treatment with the inhibitor PCPA (p-chlorophenylalanine) antagonizes the synergistic effect of the L-tryptophan association with dipyrone in the writhing test. Kynurenic acid exerts a synergistic effect with dipyrone and paracetamol in the writhing test. The blockage of 5-HT2 and 5-HT3 receptor have no influence on the synergism of L-tryptophan and dipyrone, ketoprofen, paracetamol or writhing model. The 5-HT1 receptor blockage seems to be important for the synergistic effect of L-tryptophan ketoprofen with paracetamol and not having an effect on the synergism and dipyrone. The blockage of the α2 adrenergic receptor channels influences the synergism of L-tryptophan with paracetamol. The synergistic interaction with dipyrone is attenuated by blocking melatonin receptors. Conclusion: Our results showed that there is a synergistic relationship between L-tryptophan and antinociceptive activity of ketoprofen, paracetamol and dipyrone. The mechanism underlying this interaction appears to be different for dipyrone in relation to this mechanistic effect on ketoprofen and paracetamol, although in both cases it seems important the metabolism of L-tryptophan to serotonin and, possibly, kynurenic acid. / A combinação de drogas para atingir um efeito clínico maior, ou reduzir efeitos adversos, é prática corrente no tratamento de várias condições mórbidas. Os analgésicos de uso corrente possuem efeitos adversos potencialmente perigosos que merecem ressalvas quanto ao seu uso, pois se apresentam prevalentes nas doses terapêuticas usuais. Objetivos: estudar a interação entre L-triptofano e os analgésicos não opióides dipirona, cetoprofeno e paracetamol via intragátrica e intraperitoneal em modelos de nocicepção em camundongos, verificando a importância do bloqueio da neurotransmissão serotonérgica (Síntese e receptores 5-HT1, 5-HT2 e 5-HT3) bem como o bloqueio de receptores alfa-2 adrenérgicos, melatonina (MT-1 e MT-2) e canais de potássio dependentes de ATP (K+ATP). A interação com ácido quinurênico, um metabólito das vias das quinureninas também foi analisada. Resultados: O L-triptofano (i.g ou i.p.) não possui atividade antinociceptiva isoladamente, mesmo sendo capaz de aumentar a concentração central de 5-HT. Quando administrada via intragástrica, dipirona ou paracetamol apresentaram ED50=128,7 mg/kg (92,78-178,6 mg/kg) e ED50=281 mg/kg (204,1 – 387,0 mg/kg) para o efeito antinociceptivo, respectivamente. O tratamento conjunto (realizado na mesma administração via intragástrica, i.g.) com L-triptofano nas proporções (peso/peso) de 1:1,4 com dipirona e 1:1,5 com paracetamol reduz significativamente os valores de ED50 para 33,30 mg/kg (28,05 – 39,54 mg/kg)* e 50,99 mg/kg (41,96,– 61,96mg/kg)*, respectivamente. O tratamento prévio i.p com L-triptofano (definido como tratamento combinado) reduz as ED50 para o efeito analgésico da dipirona (nas proporções de 1:1 e 1:2), paracetamol (proporções de 1:4,12) ou cetoprofeno (proporções de 5,7:1), para 30,90 mg/kg (23.10-43,56 mg/kg)* e 18,07 mg/kg (13,25- 24,67 mg/kg )*, 47,30 mg/kg (34.00 - 65.82 mg/kg)* e 2,09 mg/kg (1,355-3,224 mg/kg)*, respectivamente, quando comparado aos tratamentos isolados de dipirona ED50=91,20 mg/kg (77.39 - 95.78 mg/kg ), Paracetamol ED50=96,18 mg/kg (76.23 - 121.3 mg/kg) e Cetoprofeno= 10,25 mg/kg (6,729 to 15,61mg/kg) no teste de contorções induzidas pelo ácido acético. O tratamento com L-triptofano aumenta as concentrações centrais de serotonina, mas não influência na concentrações de Dopamina ou Noradrenalina. O L-triptofano 25 ou 50 mg/kg não influencia na concentração cortical de glutamato, no entanto o tratamento combinado via i.p. com doses não-efetivas de dipirona e paracetamol reduz a concentração desse neurotransmissor. O tratamento conjunto de L-triptofano com doses não antinociceptivas (i.g) de dipirona e paracetamol exibiu efeito antinociceptivo no teste de lambedura induzido pela formalina em ambas as fases do teste. A associação de L-triptofano e dipirona (i.p.) mostrou-se efetiva quando testada frente ao teste de nocicepção induzida pela capsaicina, mas a associação com paracetamol falhou neste teste. O bloqueio da síntese de 5-HT, através do tratamento com o inibidor PCPA(p-clorofenilalanina) antagoniza o efeito sinérgico da associação entre L-triptofano e dipirona no teste de contorções abdominais. O ácido quinurênico exerce efeito sinérgico com a dipirona e paracetamol nos testes de contorções. O bloqueio dos receptores 5-HT2 e 5-HT3 não exercem influência sobre o sinergismo do L-triptofano com a dipirona, cetoprofeno ou paracetamol no modelo de contorções. O bloqueio de receptores de 5-HT1 parece ser importante para o efeito sinérgico do L-triptofano com paracetamol e cetoprofeno, não exercendo efeito sobre o sinergismo com a dipirona. O bloqueio de receptores α2 adrenérgicos influencia no sinergismo do L-triptofano com o paracetamol. A interação sinérgica com a dipirona é atenuada com o bloqueio de receptores de melatonina. Conclusão: Os nossos resultados mostraram que existe uma relação sinérgica entre o L-triptofano e a atividade antinociceptiva do cetoprofeno, paracetamol e dipirona. O mecanismo subjacente a esta interação parece ser diferente para a dipirona em relação a mecanística desse efeito para o paracetamol e cetoprofeno, embora para ambos os casos pareça ser necessária a metabolização do L-triptofano à serotonina e, possivelmente, a ácido quinurênico.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Neurociências. / Made available in DSpace on 2012-10-21T03:00:40Z (GMT). No. of bitstreams: 0

Dissertação (Mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. / Made available in DSpace on 2012-10-18T18:52:48Z (GMT). No. of bitstreams: 0Bitstream added on 2016-01-09T02:28:21Z : No. of bitstreams: 1 137811.pdf: 2083150 bytes, checksum: dd37316e42cf0456c27d391d2e8d20cd (MD5)