Dada sua natureza cursorial, a espécie equina depende da livre movimentação para o desempenho de atividades diárias e para sobrevivência. Esta habilidade natural para o movimento é explorada em alto grau durante a prática esportiva, razão da existência de grande parte dos criatórios e centros de treinamento. Enfermidades articulares, como a osteoartrite e a osteocondrose, que reduzam ou causem prejuízo permanente à mobilidade e ao desempenho atlético são um desafio terapêutico. Os hemoderivados autólogos surgiram como opções acessíveis e seguras para o tratamento destas afecções articulares e apesar de amplamente difundido, seu emprego acontece a despeito de lacunas no conhecimento dos métodos ideais de preparação e administração, bem como dos mecanismos de ação destes produtos derivados do sangue. As propriedades antioxidantes do plasma processado autólogo demonstradas in vitro, em estudo utilizando células de líquido sinovial equino previamente estimuladas, motivaram a realização deste estudo com o objetivo de verificar os efeitos deste hemoderivado, in vivo, em articulações de equinos com osteoartrite ou osteocondrose. Tais propriedades despertaram também o interesse em verificar a ocorrência de eventos relacionados ao estresse oxidativo nestas enfermidades, o que justificaria seu emprego na clínica ortopédica. Para tal fim, líquido sinovial foi obtido antes da abordagem cirúrgica de articulações acometidas pela osteoartrite ou osteocondrose, para análise do perfil oxidante/antioxidante, físico, celular, molecular e inflamatório. Após o término da artroscopia, um grupo de animais recebeu injeção intra-articular do plasma processado autólogo e outro grupo não recebeu nenhuma medicação intra-articular, servindo como controle. Quarenta e oito horas após a cirurgia, nova amostra de líquido sinovial foi coletada, e as mesmas análises foram realizadas. As análises físicas e a contagem de células totais foram realizadas imediatamente após as coletas. O sobrenadante resultante da centrifugação do líquido sinovial foi congelado a -80º C para análises posteriores. Elas consistiram nas dosagens da catalase, superóxido dismutase, glutationa peroxidase, capacidade antioxidante total, vitamina E, proteína carbonil, condroitim sulfato, ácido hialurônico, prostaglandina E2, proteína total e ureia. Em relação à caracterização das enfermidades, as articulações acometidas por osteoartrite apresentaram maiores concentrações de catalase e de vitamina E, refletindo maior ativação dos sistemas de defesa antioxidante enzimáticos e não enzimáticos nesta enfermidade. A osteoartrite apresentou, ainda, natureza mais inflamatória, quando comparada à osteocondrose, com concentrações mais elevadas de prostaglandina E2 e proteína total, além de maiores contagens de células totais no líquido sinovial das articulações afetadas. No entanto, a osteocondrose apresentou caráter mais destrutivo em relação aos componentes da matriz extracelular e do líquido sinovial, com concentrações superiores de condroitim sulfato e ácido hialurônico, respectivamente, no líquido sinovial destas articulações. Os resultados demonstraram a ocorrência de estresse oxidativo no período pós-operatório através da ativação das defesas antioxidantes enzimáticas, com aumento da concentração de catalase. O tratamento com o plasma processado autólogo levou a aumento das concentrações de vitamina E no líquido sinovial, incrementando o sistema de defesa antioxidante não enzimático. Não foram observados efeitos do tratamento sobre o metabolismo da cartilagem articular ou biomarcadores inflamatórios. Pode-se inferir que o plasma processado autólogo apresenta potencial terapêutico no combate ao estresse oxidativo. / As a cursorial animal, the horse relies on soundness to fully accomplish daily life activities and survival. Horses natural ability for movement justifies breeding and training investments, and is explored to its maximum during athletic activities. Articular disorders, such as osteoarthritis and osteochondrosis, with their potential to reduce physical performance, are a therapeutic challenge. Autologous haemoderivates have appeared as safe and accessible options for the management of these conditions, but their widespread use has outpaced scientific evidence regarding mechanisms of action and ideal methods for preparation and administration. The antioxidant properties of autologous processed plasma, previously demonstrated in vitro on stimulated equine synovial fluid cells, posed a question on whether these effects would occur in vivo. Therefore, the present study aimed to verify autologous processed plasma´s effects in osteoarthritic and osteochondritic joints, when administered at the end of the arthroscopic procedure, with particular emphasis on possible antioxidant attributes. The study also aimed to detect evidences of oxidative stress in these disorders, what could further justify its use. For this purpose, synovial fluid was obtained immediately before the beginning of the surgery, and analyzed to yield an oxidant/ antioxidant, physical, cellular, molecular and inflammatory profile of osteoarthritis and osteochondrosis. After the end of the procedure, one group of horses received the intraarticular medication and another group of untreated horses served as controls. Forty-eight hours after surgery synovial fluid was retrieved from operated joints, and a second analysis was performed. Physical and cellular analyses were conducted immediately after sample collection and the supernatant was stored at -80º C for further evaluations. These consisted in catalase, superoxide dismutase, glutathione peroxidase, total antioxidant capacity, vitamin E, protein carbonyl groups, chondroitin sulphate, hyaluronic acid, prostaglandin E2, total protein and urea determinations. Osteoarthritic joints revealed greater activation of antioxidant defense systems, enzymatic and non-enzymatic, with greater activity of catalase, and greater concentrations of vitamin E, respectively, when compared to osteochondritic joints. Additionally, these joints had higher total nucleated cell counts and prostaglandin E2 and total protein concentrations, revealing a more inflammatory profile when compared to that of osteochondritic joints. Nonetheless, in osteochondritic joints synovial fluid and matrix components degradation was more pronounced, as there were higher concentrations of chondroitin sulphate and hyaluronic acid in synovial fluid obtained from these joints. Results also showed the occurrence of oxidative stress, 48 hours after the arthroscopic procedure, through higher catalase activity in synovial fluid, reflecting activation of antioxidant defenses. Treatment with autologous processed plasma increased vitamin E concentrations, incrementing non-enzymatic antioxidant defenses. No effects were observed on metabolic or inflammatory biomarkers. It was possible to infer that autologous processed plasma has the therapeutic potential to lessen oxidative stress effects on articular components in the postoperative period.

A ocorrência de lesões intra-articulares é uma das principais causas de incapacidade em atletas, sejam eles humanos ou da espécie eqüina. Um dos grandes avanços observados na medicina esportiva foi o advento das cirurgias intra-articulares minimamente invasivas, realizadas com auxílio de um artroscópio. A artroscopia é técnica diagnóstica ou cirúrgica que se caracteriza principalmente por causar mínimo dano tecidual, permitir ampla inspeção das estruturas intra-articulares, com baixo índice de morbidade e complicações. Apesar da realização da artroscopia ser tradicionalmente realizada por distensão líquida, a utilização do gás dióxido de carbono (CO2) como meio para distensão capsular e suas inúmeras vantagens já foram relatadas em diversos estudos. Embora os efeitos inflamatórios causados pela distensão capsular durante a artroscopia sejam discretos e sobrepujados pelos benefícios decorrentes de sua indicação, já foi descrito, em eqüinos, a ocorrência de sinovite de grau leve e caráter transitório. Entretanto, observa-se ausência de estudos referentes aos efeitos inflamatórios causados pela distensão capsular gasosa com dióxido de carbono. Desta forma, este estudo visou avaliar o grau de injúria sinovial decorrente do uso de CO2 intra-articular comparativamente à distensão líquida. Foram utilizados nove eqüinos adultos hígidos, seis machos e três fêmeas, de idade e raças variadas. Cada animal foi submetido a artroscopia bilateral da articulação tarsocrural e realização de biopsia da membrana sinovial no início, ao término do procedimento (30 minutos) e após 48 horas. Em uma articulação, a distensão para realização da artroscopia foi realizada com solução de Ringer com lactato (Grupo DL) e na articulação contra-lateral foi utilizada distensão gasosa com CO2 (Grupo DG). Para avaliação da resposta inflamatória, foram realizadas artrocenteses seriadas 0, 6, 12, 24 e 48 horas após o procedimento para mensuração de leucócitos totais, PT, Hb, PGE2, TNF-α e avaliação do burst oxidativo das células no líquido sinovial, assim como exame histopatológico e imunoistoquímico para COX-2 e E-selectina da membrana sinovial. Ambos os meios utilizados para distensão capsular causaram aumento nas concentrações de leucócitos, PT, Hb, TNF-α e PGE2. Também foi observado aumento do burst oxidativo de neutrófilos e macrófagos presentes no líquido sinovial. Em geral, as variáveis analisadas no líquido sinovial apresentaram discretas diferenças entre os grupos, sendo significativas em momentos isolados. A análise histológica da membrana sinovial demonstrou alterações inflamatórias agudas e de pouca intensidade em ambos os grupos. Apesar de semelhante entre os grupos, a imunoistoquímica para COX-2 na membrana sinovial apresentou discreta correlação com o grau de sinovite demonstrada nos outros parâmetros analisados, enquanto a E-selectina se mostrou um bom marcador em alterações inflamatórias precoces da membrana sinovial. A utilização do CO2 como meio para distensão capsular durante o exame artroscópico em eqüinos causou uma sinovite de grau leve e caráter transitório, promovendo alterações inflamatórias no líquido e membrana sinovial de forma semelhante às observadas com a utilização da solução de Ringer com lactato como meio para distensão capsular. Além disso, ambos os meios para distensão capsular causaram mínimas manifestações clínicas e ausência de complicações pós-operatórias aos animais. / Intra-articular disorders are the leading cause of human and equine athlete´s functional incapacity. The development of arthroscopy as a minimal invasive intra-articular surgery was one of the greatest medical advances in sports medicine. The defining characteristic of diagnostic or surgical arthroscopy is featured by minimal tissue damage and broad inspection of internal structures inside the joint associated with low morbidity and complications. Although liquid distension is widely used for arthroscopy, gas distension using carbon dioxide (CO2) has already been described and has pointed out a larger number of advantages of this technique in several studies. The inflammatory response to liquid capsular distension was studied in horses and described as minimal, transient and frequently overwhelmed by its benefits to treatment. However none of these effects had been investigated employing CO2 during arthroscopic examination. Therefore, the aim of this study was to asses comparatively the inflammatory damage followed by CO2 joint capsular distension to that of Ringer´s lactate solution distension. Nine healthy adult horses of various breeds, genders and ages were used. Each animal was submitted to a bilateral tarsocrural arthroscopy employing gas distention (group GD) in one joint and fluid distention (group LD) in the contralateral joint, both for 30 minutes. Synovial membrane specimens were collected before, at the end of the procedure and after 48 hours. Arthrocentesis were aseptically performed at 0, 6, 12, 24 and 48 hours after arthroscopy in order to assess the degree of inflammation within the joint. Synovial fluid was collected for cytological examination and determination of total protein, hemoglobin, TNF-α and PGE2 contents and evaluation of synovial fluid cell oxidative burst. The synovial membrane was examined histologically and also imunostained for COX-2 and E-selectin. Either distension protocol caused an increase in total white blood cells, total protein, hemoglobin, TNF-α, PGE2 and also in neutrophil and macrophage oxidative burst. In general terms, those parameters analyzed in the synovial fluid demonstrated minimal differences between groups with only a few isolate significant differences. Histological evaluation of synovial membrane shows a rapid, but mild inflammatory response in both groups. Imunostaining for COX-2 was similar between DG and DL, but showed a weak correlation to the degree of synovitis demonstrated by other parameters. Contrarily, the imunostaining for E-selectin revealed that this molecule is a good biomarker for early inflammatory changes in the synovial membrane. The use of carbon dioxide for capsular joint distension during arthroscopic examination causes an acute and mild synovitis that promotes inflammatory changes in the synovial fluid and membrane that are similar to the effects caused by the liquid capsular distension using Ringer´s lactate solution. Moreover, both distension protocols induced minimal manifestations of clinical signs and no post-surgery complications.

O cavalo tem sido há milhares de anos um dos animais de maior utilidade para o homem, tanto no trabalho quanto no esporte. A integridade de sua estrutura física é determinante para a qualidade de seu desempenho, sendo alvo importante das estratégias terapêuticas e preventivas da atualidade. Diversos estudos têm esclarecido parte da cascata de eventos que ocorre em ambiente intra-articular, revelando os principais mediadores nocivos e ampliando as opções para tratamentos mais eficientes. Experimentos utilizando a citometria de fluxo foram capazes de demonstrar que a adição de plasma às células de líquido sinovial (LS) previamente inflamadas diminui a produção de espécies reativas de oxigênio durante o burst oxidativo, conferindo capacidade antioxidante a este hemoderivado. Pouco se sabe, no entanto, sobre seu potencial pró ou anti-inflamatório, pois não existem relatos na literatura investigando tal atividade. Assim, desenvolvemos este estudo com o objetivo de acompanhar os efeitos exercidos pelo plasma autólogo condicionado (ACP) sobre os tecidos articulares, reportando as alterações clínicas e no LS das articulações metacarpofalangeanas hígidas que receberam este tratamento. Foram administrados 4 ml de ACP em 10 articulações metacarpofalangeanas de equinos saudáveis, enquanto as articulações contralaterais receberam 4 ml de solução fisiológica, como controle. LS foi coletado antes de cada aplicação e nos momentos 3, 6, 24, 48 e 168 horas após. Foi realizada avaliação física diária, e as amostras coletadas foram submetidas imediatamente a análise física (volume, cor, aspecto e viscosidade), teste da qualidade do precipitado de mucina, contagem total e diferencial das células nucleadas. O sobrenadante foi congelado para dosagem posterior de ureia, proteína total, ácido hialurônico (AH), condroitim sulfato (CS), prostaglandina E2 (PGE2) e das citocinas fator de necrose tumoral alfa (TNF-α), interleucina 1 beta (IL-1β) e antagonista do receptor de IL-1 (IL-1ra). A avaliação física dos animais detectou presença de claudicação nas articulações metacarpofalangeanas tratadas com ACP nos momentos 24 e 48 horas após sua administração. A análise física do LS das mesmas articulações revelou maior contaminação das amostras com sangue às 6 horas e maior contagem de células nucleadas às 3, 6, 24 e 48 horas, com predomínio de leucócitos polimorfonucleares. Ainda, o ACP induziu maiores concentrações de proteína total e PGE2 às 3 e 6 horas, e maior concentração de CS às 24 horas. Houve também tendência ao aumento de TNF-α às 24 horas. Às 168 horas, todavia, nenhuma alteração foi observada em quaisquer dos itens avaliados. Não ocorreram alterações nos demais aspectos físicos do LS nem na qualidade do precipitado de mucina, tampouco nas concentrações de ureia e AH. Estes resultados indicam que em articulações hígidas o ACP possui ação pró-inflamatória transitória, com maiores concentrações de PGE2 induzindo o catabolismo dos PGs da matriz, aumentando particularmente o CS. / History has connected human and equine species, for work and pleasure purposes and in both scenarios, horses\' physical integrity is of paramount importance for adequate performance. Soundness has been the target of many studies in orthopedic therapeutics and preventive equine medicine. Several of these studies have thrown light on the sequence of deleterious intra-articular events that take place after an insult, revealing key mediators of joint destruction and widening treatment options. Experiments evaluating the effects of plasma on reactive oxygen species production by chemically stimulated synovial fluid (SF) cells revealed a potent antioxidant effect. Little is known, however about plasma´s anti or pro inflammatory activities, still an unexplored property of plasma. This study was to designed to observe the effects of autologous conditioned plasma (ACP) on articular components, reporting findings of serial SF analysis and clinical evaluations, before and after its administration in healthy metacarpophalangeal joints. Four mililiters of ACP were injected in 10 healthy metacarpophalangeal joints, and the contralateral joints were injected with 4 ml of saline, serving as controls. SF was obtained for analysis before, and then 3, 6, 24, 48 and 168 hours after treatment injection. Horses were subjected to daily clinical evaluations and synovial fluid samples were immediately analyzed for color, viscosity, volume, aspect, quality of mucin clot and total and differential nucleated cell counts. The supernatant was frozen and stored for posterior dosages of urea, total protein, hyaluronic acid (HA), chondroitin sulphate (CS), prostaglandin E2 (PGE2), tumor necrosis factor alpha (TNF-α), interleukin 1 beta (IL- 1β), and interleukin 1 receptor antagonist (IL-1ra). Physical evaluation of ACP treated subjects detected mild lameness at 24 and 48 hours observation points. SF analysis of ACP treated joints revealed blood contamination and higher total nucleated cell counts at 3, 6, 24 and 48 hours, with predominance of polymorphonuclear cells. ACP treatment has also induced higher protein concentrations and PGE2 levels at 3 and 6 hours and higher CS levels at 24 hours in synovial fluid analysis. At 24 hours, TNFα concentrations were higher, although not significantly. At 168 hours post ACP treatment, however, no change was observed in any parameter of synovial fluid analysis. No alterations were detected in the remaining items evaluated, nor in the quality of the mucin clot, urea concentration or HA. These results indicate that, when injected into healthy joints, ACP elicits a transient inflammatory response, characterized by higher PGE2 concentrations, matrix catabolism, with particular increase in CS.

Artrite reumatoide (AR) é uma doença autoimune, que causa inflamação crônica nas membranas sinoviais de diversas articulações. O modelo experimenal de artrite induzida pelo colágeno (AIC) é empregado para investigar os mecanismos da AR e para identificar potenciais agentes terapêuticos. Embora a etiologia da AR ainda seja desconhecida, há evidências que a AR se desenvolve em indivíduos predispostos geneticamente, após exposição a fatores ambientais, como o tabagismo, que se destaca como maior fator de risco para indução da AR e para o agravamento em pacientes com AR já estabelecida. Porém, o mecanismo efetivo da ação dos diversos componentes do cigarros ainda precisa ser elucidado. A Hidroquinona (HQ) é um composto fenólico, encontrada em concentração elevada no cigarro, com maior ativade pró-oxidativa, além de ser produto da biotransformação do benzeno, também encontrado no cigarro. Neste caso, a HQ é responsável pela imunotoxicidade e mielotoxicidade do benzeno. Devido a alta exposição de fumantes à HQ e a associação do tabagismo com a AR, investigamos se a exposição à HQ teria participação no desenvolvimento da AIC em ratos Wistar. Para tanto, animais foram expostos à HQ em diferentes protocolos experimentais, a saber: A - por 35 dias consecutivos, durante fase de indução e desenvolvimento da artrite; B - por 14 dias consecutivos, até a segunda injeção de colágeno, na fase de sensibilização e indução da AIC; C - por 7 dias consecutivos, do 29º ao 35º dia, na fase posterior ao desenvolvimento da AIC. Os resultados obtidos mostraram que a HQ agravou a AR nos 3 grupos experimentais, aumentando os parâmetros clínicos, o número de células no líquido sinovial, a inflamação nas sinóvias, caracterizada por maior influxo de neutrófilos, proliferação de sinoviócitos (histologia por HE e imunohistoquímica), aumento nos níveis de IL-6 e IL-1β (ELISA) no líquido sinovial e rearranjo do colágeno na sinóvia (microscopia por segundo harmônico). No entanto, os efeitos mais acentuados foram observados em animais dos grupos A e C, que também tiveram perda de peso significativa. Ademais, exposição à HQ, nos 3 grupos experimentais, causou expressão aumentada do receptor aril hidrocarboneto (AhR), um receptor ativado por xenobióticos durante a AR, e aumento nos níveis do fator de transcrição ROR e de IL-17 na sinóvia. Como AhR/ROR/IL-17 em linfócitos e neutrófilos é uma via importante na gênese da AR, ensaios in vitro foram realizados para elucidar o papel da HQ nesta via. A incubação com HQ in vitro de esplenócitos de animais naive elevou a expressão de AhR e de secreção de IL-17 (por citometria de fluxo), as quais foram bloqueadas pelo antagonista de AhR (α-naftoflavona). Em conjunto, os resultados obtidos nos permitem concluir que a HQ, como um importante componente do cigarro agrava a CIA em ratos, e a ativação via AhR/IL-17 é um possível mecanismo da patogênese da artrite. / Rheumatoid arthritis (RA) is an autoimmune disease that causes chronic inflammation in the joint synovial membranes. The experimental model of collagen-induced arthritis (CIA) is used to investigate the involved mechanisms in RA and to identify novel therapeutic agents. The genesis of RA is multifactorial, involving interplay of genetic and environmental factors and smoking is the trigger factor in the development or RA and worsens the pre-existing RA but the mechanisms undlerlying are yet to be elucidated. Hydroquinone (HQ) is a phenolic compound, found in high concentrations in cigarette, where HQ is the major oxidative component. Moreover, HQ is benzene metabolite, which is also found in cigarette smoke, being responsible for the myelotoxicity and immunotoxicity detected during benzene exposure. Due to this association, we aimed to investigate the role of HQ exposure on CIA development in Wistar rats and the involved mechanisms. Animals were exposed to HQ according to different protocols: A - during 35 consecutive days, during the sensitization and devolpment phases of the disease; B - during 14 consecutive days, until the second injection of collagen, during the sensitization phase; C - during 7 consecutive days, from day 29 to 35, after the development phase of CIA. The results showed that HQ worsened the RA in the 3 experimental protocols, HQ elevated the clinical parameters of CIA development, increased inflammation in the synovial membrane, characterized by increased influx of neutrophis, synoviocytes proliferation (visualized by Immunohistochemistry and Histology analysis), augmented the levels of IL-6 and IL-1β in the synovial fluid (ELISA assay) and led to intense collagen deposition on the synovia. The most pronounced effects where observed in animals from groups A and C, which also had weight body loss. In addition, in the 3 protocols, HQ exposure also increased the expression of AhR receptor, a receptor activated by xenobiotics during RA, and increased the expression of ROR and levels of IL-17 secretion in the synovial membranes. As AhR/ROR/IL-17 in lymphocytes and neutrophils is an important pathway involved in the genesis of RA, in vitro studies have been performed to elucidate the role of HQ exposure in this pathway. The HQ in vitro treatment augmented the expression of AhR and secretion of IL-17 by splenocytes (FACS assay) and the administration of an AhR antagonist (α-naphtoflavone) blocked these effects. Taken together, the results obtained here allow us to conclude that HQ, as an important cigarette component, aggravates CIA in rats, and the activation of AhR/IL-17 pathway is a possible mechanism involved in the RA pathogenesis.

O cavalo tem sido há milhares de anos um dos animais de maior utilidade para o homem, tanto no trabalho quanto no esporte. A integridade de sua estrutura física é determinante para a qualidade de seu desempenho, sendo alvo importante das estratégias terapêuticas e preventivas da atualidade. Diversos estudos têm esclarecido parte da cascata de eventos que ocorre em ambiente intra-articular, revelando os principais mediadores nocivos e ampliando as opções para tratamentos mais eficientes. Experimentos utilizando a citometria de fluxo foram capazes de demonstrar que a adição de plasma às células de líquido sinovial (LS) previamente inflamadas diminui a produção de espécies reativas de oxigênio durante o burst oxidativo, conferindo capacidade antioxidante a este hemoderivado. Pouco se sabe, no entanto, sobre seu potencial pró ou anti-inflamatório, pois não existem relatos na literatura investigando tal atividade. Assim, desenvolvemos este estudo com o objetivo de acompanhar os efeitos exercidos pelo plasma autólogo condicionado (ACP) sobre os tecidos articulares, reportando as alterações clínicas e no LS das articulações metacarpofalangeanas hígidas que receberam este tratamento. Foram administrados 4 ml de ACP em 10 articulações metacarpofalangeanas de equinos saudáveis, enquanto as articulações contralaterais receberam 4 ml de solução fisiológica, como controle. LS foi coletado antes de cada aplicação e nos momentos 3, 6, 24, 48 e 168 horas após. Foi realizada avaliação física diária, e as amostras coletadas foram submetidas imediatamente a análise física (volume, cor, aspecto e viscosidade), teste da qualidade do precipitado de mucina, contagem total e diferencial das células nucleadas. O sobrenadante foi congelado para dosagem posterior de ureia, proteína total, ácido hialurônico (AH), condroitim sulfato (CS), prostaglandina E2 (PGE2) e das citocinas fator de necrose tumoral alfa (TNF-α), interleucina 1 beta (IL-1β) e antagonista do receptor de IL-1 (IL-1ra). A avaliação física dos animais detectou presença de claudicação nas articulações metacarpofalangeanas tratadas com ACP nos momentos 24 e 48 horas após sua administração. A análise física do LS das mesmas articulações revelou maior contaminação das amostras com sangue às 6 horas e maior contagem de células nucleadas às 3, 6, 24 e 48 horas, com predomínio de leucócitos polimorfonucleares. Ainda, o ACP induziu maiores concentrações de proteína total e PGE2 às 3 e 6 horas, e maior concentração de CS às 24 horas. Houve também tendência ao aumento de TNF-α às 24 horas. Às 168 horas, todavia, nenhuma alteração foi observada em quaisquer dos itens avaliados. Não ocorreram alterações nos demais aspectos físicos do LS nem na qualidade do precipitado de mucina, tampouco nas concentrações de ureia e AH. Estes resultados indicam que em articulações hígidas o ACP possui ação pró-inflamatória transitória, com maiores concentrações de PGE2 induzindo o catabolismo dos PGs da matriz, aumentando particularmente o CS. / History has connected human and equine species, for work and pleasure purposes and in both scenarios, horses\' physical integrity is of paramount importance for adequate performance. Soundness has been the target of many studies in orthopedic therapeutics and preventive equine medicine. Several of these studies have thrown light on the sequence of deleterious intra-articular events that take place after an insult, revealing key mediators of joint destruction and widening treatment options. Experiments evaluating the effects of plasma on reactive oxygen species production by chemically stimulated synovial fluid (SF) cells revealed a potent antioxidant effect. Little is known, however about plasma´s anti or pro inflammatory activities, still an unexplored property of plasma. This study was to designed to observe the effects of autologous conditioned plasma (ACP) on articular components, reporting findings of serial SF analysis and clinical evaluations, before and after its administration in healthy metacarpophalangeal joints. Four mililiters of ACP were injected in 10 healthy metacarpophalangeal joints, and the contralateral joints were injected with 4 ml of saline, serving as controls. SF was obtained for analysis before, and then 3, 6, 24, 48 and 168 hours after treatment injection. Horses were subjected to daily clinical evaluations and synovial fluid samples were immediately analyzed for color, viscosity, volume, aspect, quality of mucin clot and total and differential nucleated cell counts. The supernatant was frozen and stored for posterior dosages of urea, total protein, hyaluronic acid (HA), chondroitin sulphate (CS), prostaglandin E2 (PGE2), tumor necrosis factor alpha (TNF-α), interleukin 1 beta (IL- 1β), and interleukin 1 receptor antagonist (IL-1ra). Physical evaluation of ACP treated subjects detected mild lameness at 24 and 48 hours observation points. SF analysis of ACP treated joints revealed blood contamination and higher total nucleated cell counts at 3, 6, 24 and 48 hours, with predominance of polymorphonuclear cells. ACP treatment has also induced higher protein concentrations and PGE2 levels at 3 and 6 hours and higher CS levels at 24 hours in synovial fluid analysis. At 24 hours, TNFα concentrations were higher, although not significantly. At 168 hours post ACP treatment, however, no change was observed in any parameter of synovial fluid analysis. No alterations were detected in the remaining items evaluated, nor in the quality of the mucin clot, urea concentration or HA. These results indicate that, when injected into healthy joints, ACP elicits a transient inflammatory response, characterized by higher PGE2 concentrations, matrix catabolism, with particular increase in CS.

Dada sua natureza cursorial, a espécie equina depende da livre movimentação para o desempenho de atividades diárias e para sobrevivência. Esta habilidade natural para o movimento é explorada em alto grau durante a prática esportiva, razão da existência de grande parte dos criatórios e centros de treinamento. Enfermidades articulares, como a osteoartrite e a osteocondrose, que reduzam ou causem prejuízo permanente à mobilidade e ao desempenho atlético são um desafio terapêutico. Os hemoderivados autólogos surgiram como opções acessíveis e seguras para o tratamento destas afecções articulares e apesar de amplamente difundido, seu emprego acontece a despeito de lacunas no conhecimento dos métodos ideais de preparação e administração, bem como dos mecanismos de ação destes produtos derivados do sangue. As propriedades antioxidantes do plasma processado autólogo demonstradas in vitro, em estudo utilizando células de líquido sinovial equino previamente estimuladas, motivaram a realização deste estudo com o objetivo de verificar os efeitos deste hemoderivado, in vivo, em articulações de equinos com osteoartrite ou osteocondrose. Tais propriedades despertaram também o interesse em verificar a ocorrência de eventos relacionados ao estresse oxidativo nestas enfermidades, o que justificaria seu emprego na clínica ortopédica. Para tal fim, líquido sinovial foi obtido antes da abordagem cirúrgica de articulações acometidas pela osteoartrite ou osteocondrose, para análise do perfil oxidante/antioxidante, físico, celular, molecular e inflamatório. Após o término da artroscopia, um grupo de animais recebeu injeção intra-articular do plasma processado autólogo e outro grupo não recebeu nenhuma medicação intra-articular, servindo como controle. Quarenta e oito horas após a cirurgia, nova amostra de líquido sinovial foi coletada, e as mesmas análises foram realizadas. As análises físicas e a contagem de células totais foram realizadas imediatamente após as coletas. O sobrenadante resultante da centrifugação do líquido sinovial foi congelado a -80º C para análises posteriores. Elas consistiram nas dosagens da catalase, superóxido dismutase, glutationa peroxidase, capacidade antioxidante total, vitamina E, proteína carbonil, condroitim sulfato, ácido hialurônico, prostaglandina E2, proteína total e ureia. Em relação à caracterização das enfermidades, as articulações acometidas por osteoartrite apresentaram maiores concentrações de catalase e de vitamina E, refletindo maior ativação dos sistemas de defesa antioxidante enzimáticos e não enzimáticos nesta enfermidade. A osteoartrite apresentou, ainda, natureza mais inflamatória, quando comparada à osteocondrose, com concentrações mais elevadas de prostaglandina E2 e proteína total, além de maiores contagens de células totais no líquido sinovial das articulações afetadas. No entanto, a osteocondrose apresentou caráter mais destrutivo em relação aos componentes da matriz extracelular e do líquido sinovial, com concentrações superiores de condroitim sulfato e ácido hialurônico, respectivamente, no líquido sinovial destas articulações. Os resultados demonstraram a ocorrência de estresse oxidativo no período pós-operatório através da ativação das defesas antioxidantes enzimáticas, com aumento da concentração de catalase. O tratamento com o plasma processado autólogo levou a aumento das concentrações de vitamina E no líquido sinovial, incrementando o sistema de defesa antioxidante não enzimático. Não foram observados efeitos do tratamento sobre o metabolismo da cartilagem articular ou biomarcadores inflamatórios. Pode-se inferir que o plasma processado autólogo apresenta potencial terapêutico no combate ao estresse oxidativo. / As a cursorial animal, the horse relies on soundness to fully accomplish daily life activities and survival. Horses natural ability for movement justifies breeding and training investments, and is explored to its maximum during athletic activities. Articular disorders, such as osteoarthritis and osteochondrosis, with their potential to reduce physical performance, are a therapeutic challenge. Autologous haemoderivates have appeared as safe and accessible options for the management of these conditions, but their widespread use has outpaced scientific evidence regarding mechanisms of action and ideal methods for preparation and administration. The antioxidant properties of autologous processed plasma, previously demonstrated in vitro on stimulated equine synovial fluid cells, posed a question on whether these effects would occur in vivo. Therefore, the present study aimed to verify autologous processed plasma´s effects in osteoarthritic and osteochondritic joints, when administered at the end of the arthroscopic procedure, with particular emphasis on possible antioxidant attributes. The study also aimed to detect evidences of oxidative stress in these disorders, what could further justify its use. For this purpose, synovial fluid was obtained immediately before the beginning of the surgery, and analyzed to yield an oxidant/ antioxidant, physical, cellular, molecular and inflammatory profile of osteoarthritis and osteochondrosis. After the end of the procedure, one group of horses received the intraarticular medication and another group of untreated horses served as controls. Forty-eight hours after surgery synovial fluid was retrieved from operated joints, and a second analysis was performed. Physical and cellular analyses were conducted immediately after sample collection and the supernatant was stored at -80º C for further evaluations. These consisted in catalase, superoxide dismutase, glutathione peroxidase, total antioxidant capacity, vitamin E, protein carbonyl groups, chondroitin sulphate, hyaluronic acid, prostaglandin E2, total protein and urea determinations. Osteoarthritic joints revealed greater activation of antioxidant defense systems, enzymatic and non-enzymatic, with greater activity of catalase, and greater concentrations of vitamin E, respectively, when compared to osteochondritic joints. Additionally, these joints had higher total nucleated cell counts and prostaglandin E2 and total protein concentrations, revealing a more inflammatory profile when compared to that of osteochondritic joints. Nonetheless, in osteochondritic joints synovial fluid and matrix components degradation was more pronounced, as there were higher concentrations of chondroitin sulphate and hyaluronic acid in synovial fluid obtained from these joints. Results also showed the occurrence of oxidative stress, 48 hours after the arthroscopic procedure, through higher catalase activity in synovial fluid, reflecting activation of antioxidant defenses. Treatment with autologous processed plasma increased vitamin E concentrations, incrementing non-enzymatic antioxidant defenses. No effects were observed on metabolic or inflammatory biomarkers. It was possible to infer that autologous processed plasma has the therapeutic potential to lessen oxidative stress effects on articular components in the postoperative period.

A ocorrência de lesões intra-articulares é uma das principais causas de incapacidade em atletas, sejam eles humanos ou da espécie eqüina. Um dos grandes avanços observados na medicina esportiva foi o advento das cirurgias intra-articulares minimamente invasivas, realizadas com auxílio de um artroscópio. A artroscopia é técnica diagnóstica ou cirúrgica que se caracteriza principalmente por causar mínimo dano tecidual, permitir ampla inspeção das estruturas intra-articulares, com baixo índice de morbidade e complicações. Apesar da realização da artroscopia ser tradicionalmente realizada por distensão líquida, a utilização do gás dióxido de carbono (CO2) como meio para distensão capsular e suas inúmeras vantagens já foram relatadas em diversos estudos. Embora os efeitos inflamatórios causados pela distensão capsular durante a artroscopia sejam discretos e sobrepujados pelos benefícios decorrentes de sua indicação, já foi descrito, em eqüinos, a ocorrência de sinovite de grau leve e caráter transitório. Entretanto, observa-se ausência de estudos referentes aos efeitos inflamatórios causados pela distensão capsular gasosa com dióxido de carbono. Desta forma, este estudo visou avaliar o grau de injúria sinovial decorrente do uso de CO2 intra-articular comparativamente à distensão líquida. Foram utilizados nove eqüinos adultos hígidos, seis machos e três fêmeas, de idade e raças variadas. Cada animal foi submetido a artroscopia bilateral da articulação tarsocrural e realização de biopsia da membrana sinovial no início, ao término do procedimento (30 minutos) e após 48 horas. Em uma articulação, a distensão para realização da artroscopia foi realizada com solução de Ringer com lactato (Grupo DL) e na articulação contra-lateral foi utilizada distensão gasosa com CO2 (Grupo DG). Para avaliação da resposta inflamatória, foram realizadas artrocenteses seriadas 0, 6, 12, 24 e 48 horas após o procedimento para mensuração de leucócitos totais, PT, Hb, PGE2, TNF-α e avaliação do burst oxidativo das células no líquido sinovial, assim como exame histopatológico e imunoistoquímico para COX-2 e E-selectina da membrana sinovial. Ambos os meios utilizados para distensão capsular causaram aumento nas concentrações de leucócitos, PT, Hb, TNF-α e PGE2. Também foi observado aumento do burst oxidativo de neutrófilos e macrófagos presentes no líquido sinovial. Em geral, as variáveis analisadas no líquido sinovial apresentaram discretas diferenças entre os grupos, sendo significativas em momentos isolados. A análise histológica da membrana sinovial demonstrou alterações inflamatórias agudas e de pouca intensidade em ambos os grupos. Apesar de semelhante entre os grupos, a imunoistoquímica para COX-2 na membrana sinovial apresentou discreta correlação com o grau de sinovite demonstrada nos outros parâmetros analisados, enquanto a E-selectina se mostrou um bom marcador em alterações inflamatórias precoces da membrana sinovial. A utilização do CO2 como meio para distensão capsular durante o exame artroscópico em eqüinos causou uma sinovite de grau leve e caráter transitório, promovendo alterações inflamatórias no líquido e membrana sinovial de forma semelhante às observadas com a utilização da solução de Ringer com lactato como meio para distensão capsular. Além disso, ambos os meios para distensão capsular causaram mínimas manifestações clínicas e ausência de complicações pós-operatórias aos animais. / Intra-articular disorders are the leading cause of human and equine athlete´s functional incapacity. The development of arthroscopy as a minimal invasive intra-articular surgery was one of the greatest medical advances in sports medicine. The defining characteristic of diagnostic or surgical arthroscopy is featured by minimal tissue damage and broad inspection of internal structures inside the joint associated with low morbidity and complications. Although liquid distension is widely used for arthroscopy, gas distension using carbon dioxide (CO2) has already been described and has pointed out a larger number of advantages of this technique in several studies. The inflammatory response to liquid capsular distension was studied in horses and described as minimal, transient and frequently overwhelmed by its benefits to treatment. However none of these effects had been investigated employing CO2 during arthroscopic examination. Therefore, the aim of this study was to asses comparatively the inflammatory damage followed by CO2 joint capsular distension to that of Ringer´s lactate solution distension. Nine healthy adult horses of various breeds, genders and ages were used. Each animal was submitted to a bilateral tarsocrural arthroscopy employing gas distention (group GD) in one joint and fluid distention (group LD) in the contralateral joint, both for 30 minutes. Synovial membrane specimens were collected before, at the end of the procedure and after 48 hours. Arthrocentesis were aseptically performed at 0, 6, 12, 24 and 48 hours after arthroscopy in order to assess the degree of inflammation within the joint. Synovial fluid was collected for cytological examination and determination of total protein, hemoglobin, TNF-α and PGE2 contents and evaluation of synovial fluid cell oxidative burst. The synovial membrane was examined histologically and also imunostained for COX-2 and E-selectin. Either distension protocol caused an increase in total white blood cells, total protein, hemoglobin, TNF-α, PGE2 and also in neutrophil and macrophage oxidative burst. In general terms, those parameters analyzed in the synovial fluid demonstrated minimal differences between groups with only a few isolate significant differences. Histological evaluation of synovial membrane shows a rapid, but mild inflammatory response in both groups. Imunostaining for COX-2 was similar between DG and DL, but showed a weak correlation to the degree of synovitis demonstrated by other parameters. Contrarily, the imunostaining for E-selectin revealed that this molecule is a good biomarker for early inflammatory changes in the synovial membrane. The use of carbon dioxide for capsular joint distension during arthroscopic examination causes an acute and mild synovitis that promotes inflammatory changes in the synovial fluid and membrane that are similar to the effects caused by the liquid capsular distension using Ringer´s lactate solution. Moreover, both distension protocols induced minimal manifestations of clinical signs and no post-surgery complications.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / An experimental synovitis model of the radio-carpal joint was induced in 8 male intact ponies with an intra-articular injection of 0.25ml of Freund s complete adjuvant. Four ponies had the affected joint irradiated with a 4J/cm2 of laser in a cranio-caudal direction. The control group received the same technique with the device turned off. The heart rate was lower (p<0.05) in the treated group (37±6.9) than in the control group (41.2±5.7). The carpal angle of maximum flexion was significantly (p <0.05) lower in the treated group (94.4±27.2) than in the control group (125.6±5.3). The results of this study show that treatment with laser of gallium arsenide, in the dose of 4J/cm2, presented analgesic effect and improved joint movement in this model of Freund s adjuvant induced acute synovitis. / Um modelo experimental de sinovite aguda rádio-carpiana foi induzido em oito pôneis machos adultos com uma injeção intra-articular de 0,25 ml de adjuvante completo de Freund para avaliar o efeito da terapia laser nesta lesão. Um grupo (n= 4) teve a articulação afetada tratada com laser de arseneto de gálio na dose diária de 4J/cm2 na incidência crânio-caudal por 15 sessões. O grupo controle (n= 4) não foi tratado. A freqüência cardíaca foi estatisticamente (p<0,05) menor no grupo tratado (37±6,9) do que no grupo controle (41,2±5,7). O ângulo de flexão carpal máximo foi significativamente (p<0,05) menor no grupo tratado (94,4±27,2) do que no grupo controle (125,6±5,3). Os resultados deste estudo mostram que a terapia com laser de arseneto de gálio na dose de 4J/cm2 apresentou efeito analgésico e melhorou a mobilidade do membro afetado pela sinovite aguda induzida por Adjuvante Completo de Freund.

Made available in DSpace on 2017-07-10T14:17:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Regina Kunz.pdf: 2633664 bytes, checksum: ba62a763b7744580d9ca3b1f84d6f021 (MD5) Previous issue date: 2014-02-26 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Immobilization is a therapeutic modality that is used in the treatment of musculoskeletal disorders, which often cause tissue morphological changes, and which can be reversed by remobilization. This study examined the effects of immobilization and remobilization on morphological parameters of the ankle joint and the soleus and tibialis anterior muscles of Wistar rats. Eighteen male rats had their right hind limb immobilized for 15 days. They were divided into the following 3 groups: G1, simply immobilized; G2, remobilized freely for 14 days; and G3, remobilized by exercises in water, performed on alternate days with progression in terms of the time and number of exercises. The contralateral limb was used as control. After the experimental period, the ankle, right (immobilized/remobilized) and left (control) joints, and the soleus and tibialis anterior muscles were processed for analysis using light microscopy. For the analysis of the ankle, three fields of distinct interest were identified in the sagittal section as follows: P1, anterior articular extremity (near the phalanges); P2, middle region of the joint; P3, posterior articular extremity. Histomorphometry revealed no significant differences between the groups and members, control and imobilized/remobilized, in terms of the number of chondrocytes and the thickness of the articular cartilage of the tibia and the talus. The morphological analysis of G1 showed the most significant degenerative lesions in the talus, such as exposure of the subchondral bone, flocculation and cracks between the middle and anterior regions of the articular cartilage, as well as the synovial membrane. Remobilization by exercises in water showed positive effects on the recovery of the ankle joint, compared with free remobilization. In the muscles, immobilization produced significant changes in the morphometric parameters of the soleus; in the tibialis anterior it only caused a change in muscle mass. However, there were changes in the morphology of the tibialis anterior, which showed polymorphic fibers and necrosis, as well as changes in the connective tissue. Swimming, combined with jumping in water, increased the smallest diameter of the fiber of the soleus muscle. Both free remobilization, and remobilization using exercises, increased the mass and the length of the tibialis anterior muscle, as well as its morphology / A imobilização é uma modalidade terapêutica utilizada no tratamento de distúrbios musculoesqueléticos que com frequencia causa alterações morfológicas teciduais, as quais podem ser revertidas pela remobilização. Este estudo analisou o efeito da imobilização e da remobilização sobre parâmetros morfológicos da articulação talocrural e dos músculos sóleo e tibial anterior de ratos Wistar. Foram utilizados 18 ratos machos, que tiveram seu membro posterior direito imobilizado por 15 dias, e divididos em 3 grupos: G1, somente imobilizados; G2, remobilizados livremente por 14 dias; e G3, remobilizados em meio aquático por 14 dias, realizados em dias alternados com progressão de tempo e série dos exercícios. O membro contralateral foi utilizado como controle. Após o período experimental, as articulações talocrurais, direitas (imobilizadas/remobilizadas) e esquerdas (controle), e os músculos sóleo e tibial anterior foram processados para análises em microscopia de luz. Para a análise da articulação talocrural, nos cortes sagitais foram identificados três campos de interesse distintos, sendo: P1, extremidade articular anterior (próxima as falanges); P2, região média da articulação; P3, extremidade articular posterior. A histomorfometria não revelou diferenças significativas entre os grupos e os membros, controle e imobilizado/remobilizado, no número de condrócitos e na espessura da cartilagem articular da tíbia e do tálus. A análise morfológica de G1 evidenciou lesões degenerativas mais significativas no tálus, como exposição do osso subcondral, floculações e fissuras, entre as regiões anterior e média da cartilagem articular; bem como na membrana sinovial. A remobilização por exercícios em meio aquático, apresentou efeitos positivos na recuperação da articulação do tornozelo, quando comparada com a remobilização livre. Nos músculos, a imobilização produziu alterações significativas sobre os parâmetros histomorfométricos do sóleo e, no tibial anterior, causou alteração somente na massa muscular. No entanto, verificou-se alterações na sua morfologia, que apresentou fibras polimórficas e em necrose, assim como alterações no tecido conjuntivo. A natação combinada com o salto em meio aquático aumentaram o menor diâmetro da fibra do músculo sóleo. Tanto a remobilização livre quanto por associação dos exercícios aumentaram a massa e o comprimento muscular do tibial anterior, bem como melhoraram seus aspectos morfológicos

INTRODUÇÃO e OBJETIVO: A osteoartrite (OA) embora frequente tem patogênese incerta em humanos. Descrevemos modelo experimental original de OA em cães, analisando em dois tempos diferentes as consequências da Ruptura Espontânea do Ligamento Cruzado Cranial (RLCCr). MÉTODOS: Vinte animais machos com menos de 5 anos ( 20 a 45 Kg) com RLCCr submetidos à artrotomia para estabilização articular tiveram fragmentos articulares removidos para análise. O grupo RLCCr < 20 (10 animais) foi operado antes dos vinte dias e o grupo > 20 (10 animais) após 20 dias do início da lesão. Sete animais com OA pré-existente (OA) que morreram por quaisquer motivos e 7 animais normais (NC) provenientes do C.C.Z., serviram de grupos controles. Os animais foram avaliados clinica e radiologicamente. Foi colhido líquido sinovial dos animais operados e de outros 20 cães controles submetidos às cirurgias por diferentes causas. Para estudo morfológico, os fragmentos de cartilagens foram corados com H&E e Picrossirius. A gravidade do escore histológico da OA foi quantificada através da coloração com Safranina O. Analisou-se citocinas próinflamatórias (IL-6, TNF-alfa) e a quimiocina CCL2/MCP-1 nos líquidos sinoviais. RESULTADOS: Todos os cães tinham o teste de movimento da gaveta e exame de compressão da mesa tibial positivos. Achados radiográficos correlacionaram-se com maior tempo de RLCCr. Cartilagem articular de animais normais (NC) exibiram superfície preservada, disposição ordenada dos condrócitos e integridade da rede de colágeno. Exames histológicos em animais do grupo RLCCr < 20 mostraram irregularidades na superfície articular, diminuição no número de condrócitos e remodelamento de fibras de colágeno. No grupo > 20, observou-se osteófitos e irregularidades evidentes nas superfícies articulares. A gravidade do escore de acometimento histológico traduziu-se por intensa diminuição celular na superfície articular, com presença de clusters de condrócitos na região intermediária da cartilagem e total desorganização da rede de fibras de colágeno. A quimiocina CCL2/MCP-1 esteve aumentada no grupo com menos de 20 dias de lesão, enquanto a IL-6 foi mais expressiva nos animais operados tardiamente. CONCLUSÃO: O modelo experimental espontâneo de OA canino, estudado em dois tempos, é um instrumento original e útil para estudo da patogênese da osteoartrite, além de ter o mérito de preservar a integridade física dos animais de laboratório / INTRODUCTION and OBJECTIVE: Osteoarthritis (OA) is a frequent and severe rheumatic disease of unknown pathogenesis. We described an original experimental model of OA, analyzing the consequences of spontaneous cranial cruciate ligament rupture (RLCCr), occurred at two different times. METHOD: Twenty male animals, younger than 5 years old (20 to 45kg) with RLCCr were submitted to arthrotomy for articular stability and had cartilage fragments removed for analysis. The Group RLCCR < 20 (10 animals) was operated before 20 days and Group RLCCR > 20 (10 animals) after 20 days of beginning of lesion. Seven animals with pre-existent OA which died without any reason, and 7 normal animals (NC) from Service of Zoonosis Control were the control groups. The animals were submitted to clinical and radiological evaluations. Synovial fluid were collected from operated dogs and from another 20 control animals, submitted for surgical procedures for any reason. For the morphological study, the cartilage fragments were stained with H&E and Picrossirus. The score for OA severity was quantified using Safranin-O staining. Inflammatory cytokines (IL-6 and TNF alfa) and chemiokine CCL2/MCP-1 were measured in sinovial fluid. RESULTS: At physical examination, all the dogs had positive drawer and the tibial plateau compression tests. Knee Radiographic data showed that narrowing of joint space, osteophytes and erosions were more prominent in Group RLCCr> 20 animals. Articular cartilage of normal animals (NC) revealed preserved cartilage surface, organized disposition of chondrocytes and integrity of collagen net. Histological exams done in animals from Group RLLCr > 20 showed irregularities on articular surface, reduction of the number of chondrocytes and collagen fibers remodeling. Animals from Group RLCCR > 20 exhibited deep fibrillations, presence of chondrocytes clusters at intermediate area of cartilage, osteophytes and and total disorganization of the collagen fibers net. Chemiokine CCL2/MCP-1 was found overexpressed in dogs operated less than 20 days, while IL-6 was increased in late surgical group. CONCLUSION: The spontaneous model of canine RLCCr, studied at two distinct times, is an original and useful tool to understand pathogenesis of OA. Furthermore, the procedure preserves the animal integrity, becoming an Ethical laboratorial procedure